CN101784523A - 影响细胞囊泡系统的邻苯二甲酰亚胺衍生物、药物组合物及其用途 - Google Patents

影响细胞囊泡系统的邻苯二甲酰亚胺衍生物、药物组合物及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及适于治疗疾病状态和影响细胞囊泡系统，特别是影响脂滴的形成和/或功能的化合物，所述化合物具有式I结构，其中每个X独立地是氢、卤素、-C1-20烷基、-C2-20烯基、-C2-20-炔基，-C5-6环烷基、芳基、芳烷基、金刚烷基、杂环基、羟基、羟烷基、或-N-(R1，R2)基团；n是0、1、2、3或4；每个R1和R2可以独立地是氢、直链或支链烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基，其中每个都是未取代的或卤素取代的；或R1和R2与其间的氮一起形成五元或六元环；A是单键、-O-、-S-、-CH2-、或NH-；Y是O或S；Z是O或S；每个R’和R”独立地是甲基、乙基、异丙基、异丁基、仲丁基或叔丁基；但是具有如下限制：X(n)不能全是氟，及A是单键，及Y以及Z是O，及R’以及R”是异丙基，及R1和R2同时为氢。本发明还涉及包括所述化合物的药物组合物以及所述化合物在治疗疾病中的用途。

Description

影响细胞囊泡系统的邻苯二甲酰亚胺衍生物、药物组合物及其用途
技术领域
本发明涉及适于治疗疾病状态和影响细胞囊泡系统(cellular vesicularsystem)，特别是影响脂滴(lipid droplets)的形成和/或功能的化合物，另外本发明还涉及含有所述化合物的药物组合物，以及其用于治疗与脂滴形成和/或功能有关的疾病(例如癌症、炎症)状态和治疗不同细菌和病毒感染的用途。
发明背景
用作细胞器(cellular organelles)的脂滴或脂体(两表述均可在文献中找到)是近年来一个逐渐浮现研究领域。细胞中的脂滴主要用于脂质的沉积和转运。其形态和蛋白含量可有很大的不同((Denis J.Murphy et al.：Mechanism of lipid-body formation，TIBS 24，1999March，p.109-115)，但是其在植物、动物和微生物中的形成在某些方面是相似的。在人细胞中的脂滴功能的缺失与一些疾病有关，例如脂肪肝、肥胖、动脉粥样硬化、二型糖尿病、炎症疾病和癌症。脂滴的大小通常在0.1～50微米之间。
对脂滴的形成和/或功能的影响可正向影响那些其中脂质具有任何功能的疾病。
抑制脂滴形成和/或活动的小分子具有潜在的抗癌作用，如下所述这是因为细胞内脂肪酸的浓度升高(与脂滴的功能有关)可导致细胞凋亡。脂肪酸的从头合成是癌细胞的特征。非脂肪细胞的细胞存储由饱和脂肪酸制备的甘油三酯的能力有限。除存储外，细胞可通过氧化清除蓄积的脂肪酸(β-氧化)。然而，在含氧量低的情况下，β-氧化(其是癌细胞的特征)受到了限制，因此部分蓄积的脂肪酸以脂滴的形式出现。释放的脂肪酸以及未包封入脂囊泡的脂肪酸将掺入内质网膜，导致内质网膜逐渐饱和，最终破坏内质网膜的结构和完整性。因此，钙离子从内质网中释放，通过线粒体诱导凋亡(Borradaile NM，Han X，Harp JD，Gale SE，Ory DS，Schaffer JE：Disruptionof endoplasmic reticulum structure and integrity in lipotoxic cell death.J.LipidRes.2006 Dec：47(12)：2726-2737)。因此，抑制在肿瘤细胞中的脂滴的形成可导致所述细胞的破坏。
在炎症期间，脂滴的数量明显增加(Weller PF és Dvorak AM：Arachidonicincorporation by cytoplasmic lipid bodies of human eosinophils.Blood 65，1985，1269-1274；Weller PF és Dvorak AM：Lipid bodies：intracellular sites foreicosanoid formation.Int.Arch.Alllergy Immunol.105，1994，245-250)。已表明脂滴在类花生酸类的代谢中具有关键的作用，并且脂滴是含有花生四烯酸的磷脂的备用，其也是例如环加氧酶(前列腺素合酶和内过氧化物合酶(endoperoxydase synthase))和5-脂氧合酶(Weller P.F.et al.：Cytoplasmic lipidbodies of human neutrophilic leukocytes.Am.J.Pathol.1989，113，p.947-959)的酶的备用，其在前列腺素、血栓素(tromboxanes)和白三烯的合成中是必不可少的。
类前列腺素包括前列腺素(PG)D2、PGE2、PGF2a、PGI2和血栓烷A2，其调节一些生理功能和调控例如风湿性关节炎、哮喘、克罗恩氏病及动脉粥样硬化的炎症疾病。
前列腺素由环加氧酶-2生成，其通过刺激增殖和血管生成而有助于肿瘤生长，并抑制程序性细胞死亡和免疫应答(Marks F，Furstenberger G，Muller-Decker K.：Tumor promotion as a target of cancer prevention.RecentResults Cancer Res.2007；174：37-47)。
通过免疫金染色法显示，在结肠克罗恩氏病中，位于细胞内的促炎细胞因子TNF-α主要与结肠的成纤维细胞、嗜曙红细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、吞噬细胞、上皮吸收细胞(epithelial absorption cell)中的脂滴结合(Waltraud J.Beil et al.：Ultrastructural immunogold localization of subcellular sites of TNF-ain colonic Crohn’s disease.J.Leukocyte Biology 58，1995，284-298.)，这就是认为脂滴在克罗恩氏疾病的发展中可具有重要作用的原因。
动脉粥样硬化也可能与脂滴的形成有关(Toda T，Leszczynski DE，Kummerow FA：Morphological evidence of endogenous lipid production inswine ductus vasculature.，Atherosclerosis.1980 Oct；37(2)：325-330)。
脂滴也在一些细菌的生命周期中具有重要作用(Gorton JN et al.：Intracellular lipophilic inclusions of mycobacteria in vitro and in sputum，Microbiology(2002)，148，2951-2958)，这些细菌流入引起结核病的分歧杆菌。
现已研究了单纯疱疹和流感病毒对脂质代谢的作用(Ambroseva TV，Votiakov VI，Andreeva OT，Serebriakova EV，Vladyko GV，Samarina MP：BiullEksp Biol Med.1992 Sep；114(9)：302-304)。在兔的急性疱疹感染中发现，有典型的血脂异常发生，并且总胆固醇、β-胆固醇和甘油三酯的水平升高。对人主动脉细胞培养物的疱疹感染的研究也披露了其中检测到了细胞内游离脂的蓄积。
从上述实例可以看出，脂滴在一些疾病状态(disease states)的发展中具有一定作用，因此影响脂滴的形成和/或功能可对所述疾病具有有利的作用。
发明概述
本发明目的在于提供影响脂滴形成和/或功能的化合物，依此方式有利地影响某些疾病状态。
发明人识别出了相对于现有技术被认为是新化合物。因此本发明涉及具有式I结构的化合物：
Figure GPA00001029719900031
其中
每个X独立地是氢、卤素、-C1-20烷基、-C2-20烯基、-C2-20-炔基，-C5-6环烷基、芳基、芳烷基、金刚烷基、杂环基、羟基、羟烷基、或-N-(R1，R2)基团；
n是0、1、2、3或4；
每个R1和R2可以独立地是氢、直链或支链烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基，其中每个都是未取代的或卤素取代的；或
R1和R2与其间的氮一起形成五元或六元环；
A是单键、-O-、-S-、-CH2-或NH-；
Y是O或S；
Z是O或S；
R’和R”每个独立地是甲基、乙基、异丙基、异丁基、仲丁基或叔丁基；但是具有如下限制：
X(n)不能全是氟，及
A是单键，及
Y以及Z是O，及
R’以及R”是异丙基，及
R1和R2同时为氢。
申请人以具有式I结构的化合物实现了其目的。因此，本发明涉及适于治疗疾病状态和影响细胞囊泡系统，特别是影响脂滴形成和/或功能的化合物，所述化合物具有式I结构：
Figure GPA00001029719900041
其中
每个X独立地是氢、卤素、-C1-20烷基、-C2-20烯基、-C2-20-炔基，-C5-6环烷基、芳基、芳烷基、金刚烷基、杂环基、羟基、羟烷基或-N-(R1，R2)基团；
n是0、1、2、3或4；
每个R1和R2可以独立地是氢、直链或支链烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基，其中每个都是未取代的或卤素取代的；或
R1和R2与其间的氮一起形成五元或六元环；
A是单键、-O-、-S-、-CH2-或NH-；
Y是O或S；
Z是O或S；
每个R’和R”独立地是甲基、乙基、异丙基、异丁基、仲丁基或叔丁基；但是若疾病状态是癌症或炎症，则具有如下限制：
X(n)不能全是氟，及
A是单键，及
Y以及Z是O，及
R’以及R”是异丙基，且
R1和R2同时为氢。
在本发明优选的实施方案中，A是单键。
在本发明另一优选的实施方案中，Y和Z中至少一个是O，更优选地两者都是O。
在本发明另一优选的实施方案中，R1是氢。
在本发明优选的实施方案中，X(n)的任意三个是卤素。
在优选的实施方案中，卤素是氟。
在另一优选的实施方案中，R1和/或R2是未取代的或卤素取代的乙基，优选是乙基或三氟乙基，特别是乙基。
在另一优选的实施方案中，R1和/或R2是乙二胺基团。
在另一优选的实施方案中，R’和R”中至少一个是异丙基，更优选两者都是异丙基。
在另一优选的实施方案中，与脂滴结合的化合物选自：
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(乙基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(乙基氨基)-4，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(2-氨基-乙基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(2-氨基-乙基氨基)-4，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，6-三氟-7-(2，2，2-三氟乙基氨基)异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，7-三氟-6-(2，2，2-三氟乙基氨基)异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(吡啶-3-基甲基)-氨基)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(吡啶-3-基甲基)-氨基)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(3-吗啉-4-基-丙基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(3-吗啉-4-基-丙基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(吗啉)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(1-环戊基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(1-环戊基氨基)-4，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
在本发明另一优选的实施方案中，所述疾病状态选自：癌症、炎症、克罗恩氏病、动脉粥样硬化、细菌或病毒感染。
在本发明更优选的实施方案中，所述疾病状态是癌症。
在本发明更优选的实施方案中，所述疾病状态是炎症。
在本发明更优选的实施方案中，所述疾病状态是细菌或病毒感染。
本发明涉及适于通过影响脂滴形成和/或功能而治疗疾病状态的药物组合物，这些药物组合物具有一种或多种载体，并且含有具有式I结构的化合物。
该药物组合物可通过口服、肠胃外给药或任何其他已知的给药方法，例如植入输送装置(implanted delivery device)。可根据疾病状态、性别、年龄和其他影响疾病进程和康复的因素确定给药途径。对本领域技术人员显而易见的是，医师可根据所有的详细情况以及可得的信息确定其他的给药方法。
本发明药物组合物可用于治疗人、动物，特别是哺乳动物，在某些情况下可用于治疗鸟类(例如病毒或细菌感染)。
本发明药物组合物可以与其他药物、化合物或适于治疗所述疾病状态的的治疗方法组合而用于治疗。例如，本发明药物组合物可与放疗和/或化疗一起使用。
本发明药物组合物也可用于易感所述疾病(例如由于易感体质或由于感染)的人或动物以预防疾病。
在引起本发明的疾病的细胞、细胞系、病毒出现的地方，例如医疗保健研究所、研究实验室、诊断实验室等，本发明化合物可用于预防感染/疾病。
本发明还涉及具有式I结构的化合物和药物组合物在治疗上述疾病状态中的用途。
附图简述：
图1(a)显示了由X-射线衍射确定的本发明化合物(3a)的晶体结构，其中也显示了氢原子和重原子的编号。
图1(a)显示了由X-射线衍射确定的本发明另一化合物(3b)的晶体结构，其中未显示了氢原子和重原子的编号。
图2a显示了以化合物3b处理后的巨噬细胞的基本TNFα释放的改变。
图2b显示了以化合物3b处理后LPS诱导的巨噬细胞的基本TNFα释放的改变。
图3显示了本发明化合物(3a)和(3b)对按照对数比例呈现的TNFα分泌的作用。
图4显示了相同的本发明化合物治疗48小时后，对RVH人黑色素瘤细胞系的细胞毒性作用。
图5显示了相同的本发明化合物治疗24小时后，对MCF7人乳腺癌细胞系的细胞毒性作用。
图6显示了相同的本发明化合物治疗24小时后，对HepG2肝细胞癌细胞系的细胞毒性作用。
图7显示了在脾/肝动物模型中抗癌作用检测的结果。
图8显示了本发明化合物(化合物3b)和对照化合物(化合物2)在活体动物上的基于肿瘤质量检测的抗癌作用。
图9显示了本发明化合物(化合物3b)对假性狂犬病病毒的抗病毒作用。
图10通过显示了生存率图表表明了在接种癌细胞后本发明化合物(化合物9a)的抗癌作用。
图11显示了本发明化合物(化合物3a)对鸟分歧杆菌(Mycobacteriumavis)的作用。
在本文中，术语“卤素”表示选自氟、氯、溴或碘的基团。
在本文中，术语“芳基”在单独使用或与任何其他基团组合使用时，表示碳环芳香性基团或含有多个碳环芳香性系统的芳香性系统。例如术语芳基包括苯基或萘基环系统。
在本文中，术语“C1-20-烷基”在单独使用或与任何其他基团组合使用时，表示具有1～20个碳原子的直链或支链非环烃。“C1-20-烷基”包括甲基、乙基、丙基、丁基、己基、1-甲基-乙基、1-甲基-丙基、2-甲基-丙基或1，1-二甲基-乙基基团。
在本文中，术语“C2-20-烯基”在单独使用或与任何其他基团组合使用时，表示直链或支链非环烯基，其具有2～20个碳原子并且含有至少一个双键，例如乙烯基或烯丙基。
在本文中，术语“C2-20-炔基”在单独使用或与任何其他基团组合使用时，表示直链或支链非环炔基，其具有2～20个碳原子并且含有至少一个叁键。
在本文中，术语“C5-6-环烷基”在单独使用或与任何其他基团组合使用时，表示含有5～6个碳原子的环烷基基团，其包括例如环戊基或环己基。
“芳烷基”表示芳基取代的烷基或环烷基。
在本文中，杂环基表示未取代或取代的非环或芳环，其含有包含一个或多个选自氮、氧、硫或磷的杂原子的基团。
羟烷基表示被羟基取代的烷基基团。
相应地，本发明公开了对疾病状态具有有益作用的化合物，它们通过结合脂滴或影响脂滴的形成和/或功能而发挥作用。
应该注意到的是，在日本专利申请JP 10072346中所示的化合物2-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，6，7-四氟异吲哚啉-1，3-二酮(化合物2)也具有式I结构。已显示此化合物可抑制肿瘤坏死因子的产生。根据日本专利JP 10072346，相同的化合物(化合物2)也具有抗炎作用。
Figure GPA00001029719900081
实施例
下列实施例用于说明本发明，并且不意图限制本发明的保护范围。
实施例1：2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(乙基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮 (3a)和2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(乙基氨基)-4，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮(3b)
Figure GPA00001029719900082
将19克(50毫升)2-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，6，7-四氟异吲哚-1，3-二酮(2)溶于30毫升氯仿(30毫升，分析纯，Molar)中，然后将乙胺(2毫升，70％v/v水溶液，Aldrich)加入其中。将混合物在室温下搅拌4小时，加入环己烷(20毫升，Molar)，然后将溶液应用至硅胶柱色谱，此色谱柱以氯仿-环己烷(1∶3v/v)平衡。将此色谱柱先以氯仿-环己烷(1∶3v/v)洗脱，然后再以氯仿-环己烷(1∶1v/v)洗脱。将第一级分产物3a蒸发(收率：6.9克，30.1％)并以薄层色谱检测产品纯度(RFF：0.39(氯仿∶环己烷＝1∶1v/v))，以质谱仪确定产品的质谱(MW+1：404.3)。将第二级分产物3b蒸发(收率：5.8克，28.7％)并以薄层色谱检测产品纯度(Rf：0.19(氯仿∶环己烷＝1∶1v/v))，以质谱仪确定产品的质谱(MW+1：404.3)。以单晶X射线衍射确定化合物3a和3b的晶体结构，在附图1a(3a)和1b(3b)中可见所得的分子结构。在此附图中，单个原子以椭圆形环表示，其大小与三维空间中的原子位移参数(atomic displacement parameters)成比例(即椭圆环越大，晶体中的原子则是更加动态的)。
1H NMR 3a(CDCl3)δ1.17(d，12H，J＝6.8Hz，CH3(iPr))，1.31(t，3H，J＝7.3Hz，CH3(N-Et))，2.62-2.75(m，2H，CH(iPr))，3.54-3.63(m，2H，CH2(N-Et))，6.36(t，1H，J＝6.3Hz，NH)，7.26(d，2H，J＝7.7Hz，m-Ph)，7.44(t，1H，J＝7.7Hz，p-Ph)。
13C NMR 3a(CDCl3)δ16.57(CH3(N-Et))24.40(CH3(iPr))，29.76(CH(iPr))，40.39(CH2(N-Et))，124.39(m-Ph)，126.64(N-Ph)，130.74(p-Ph)，135.36(Et-N-异吲哚)，147.78(o-Ph)。
1H NMR 3b(CDCl3)δ1.17(d，12H，J＝6.8HZ，CH3(iPr))，1.34(t，3H，J＝7.3Hz，CH3(N-Et))，2.64-2.74(m，2H，CH(iPr))，3.58-3.67(m，2H，CH2(N-Et))，4.38(bs，1H，NH)，7.26(d，2H，J＝7.8HZ，m-Ph)，7.44(t，1H，J＝7.7Hz，p-Ph)。
13C NMR 3b(CDCl3)δ16.66(CH3(N-Et))24.41(CH3(iPr))，29.76(CH(iPr))，40.80(CH2(N-Et))，124.37(m-Ph)，125.83(N-Ph)，130.70(p-Ph)，147.81(o-Ph)。
实施例2：2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(吡啶-3-基甲基)-氨基)-5，6，7-三氟异 吲哚-1，3-二酮(4a)和2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(吡啶-3-基甲基)-氨基)-5，6，7-三 氟异吲哚-1，3-二酮(4b)
Figure GPA00001029719900101
9.5g将2-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，6，7-四氟异吲哚-1，3-二酮(2)(25毫摩尔)溶于15毫升氯仿(分析纯，Molar)中，然后将1，2-乙二胺(ethylenediamine)(2.75克，25.5毫摩尔，Aldrich)加入其中。将溶液搅拌4小时，然后应用至硅胶柱色谱，此色谱柱以氯仿-环己烷(1∶3v/v)平衡。将此色谱柱先以氯仿-环己烷(1∶1v/v)洗脱，然后再以氯仿洗脱。将第一级分产物4a蒸发(收率：3.2克，26.9％)，并以薄层色谱检测产品纯度(Rf：0.35(氯仿))，以质谱仪确定产品的质谱(MW+1：477.5)。将第二级分产物4b蒸发(收率：3.1克，26.0％)，并以薄层色谱检测产品纯度(Rf：0.30(氯仿))，以质谱仪确定产品的质谱(MW+1：477.4)。
实施例3：2-(2，6-异丙基苯基)-4-(2-氨基-乙基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3- 二酮(5a)和2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(2-氨基-乙基氨基)-4，6，7-三氟异吲哚-1，3- 二酮(5b)
Figure GPA00001029719900111
9.5g将2-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，6，7-四氟异吲哚-1，3-二酮(2)(25毫摩尔)溶于15毫升氯仿(分析纯，Molar)中，然后将1，2-乙二胺(1.53克，25.5毫摩尔，Aldrich)加入其中。将溶液搅拌4小时，然后应用至硅胶柱色谱，此色谱柱以氯仿-环己烷(1∶1v/v)平衡。将此色谱柱先以氯仿-环己烷(1∶1v/v)洗脱，然后再以氯仿洗脱。将第一级分产物5a蒸发(收率：3.9克，37.2％)，并以薄层色谱检测产品纯度(Rf：0.29(氯仿))，以质谱仪确定产品的质谱(MW+1：419.6)。将第二级分产物5b蒸发(收率：3.9克，37.2％)，并以薄层色谱检测产品纯度(Rf：0.24(氯仿))，以质谱仪确定产品的质谱(MW+1：419.4)。
实施例4：2-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，6-三氟-7-(2，2，2-三氟乙基氨基)异吲 哚-1，3-二酮(6a)和2-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，7-三氟-6-(2，2，2-三氟乙基氨基)异 吲哚-1，3-二酮(6b)
0.95g将2-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，6，7-四氟异吲哚-1，3-二酮(2)(2.5毫摩尔)溶于15毫升氯仿(分析纯，Molar)中，然后将2，2，2-三氟-乙胺(0.23克，25.3毫摩尔，Aldrich)加入其中。将溶液搅拌4小时，然后加入环己烷(20毫升，Molar)并应用至硅胶柱色谱，此色谱柱以氯仿-环己烷(1∶3v/v)平衡。将此色谱柱先以氯仿-环己烷(1∶3v/v)洗脱，然后再以氯仿-环己烷(1∶1v/v)洗脱。将第一级分产物6a蒸发(收率：510毫克，43.3％)，并以薄层色谱检测产品纯度(Rf：0.45(氯仿-环己烷＝1∶1v/v))，以质谱仪确定产品的质谱(MW+1：458.2)。将第二级分产物6b蒸发(收率：204毫克，17.3％)，并以薄层色谱检测产品纯度(Rf：0.25(氯仿∶环己烷＝1∶1v/v))，以质谱仪确定产品的质谱(MW+1：458.2)。
实施例5：2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(3-吗啉基-4-基-丙基氨基)-5，6，7-三氟 异吲哚-1，3-二酮(7a)和2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(3-吗啉基-4-基-丙基氨 基)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮(7b)
Figure GPA00001029719900122
9.5g将2-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，6，7-四氟异吲哚-1，3-二酮(2)(25毫摩尔)溶于15毫升氯仿(分析纯，Molar)中，然后将4-(3-氨基丙基)吗啉(3.67克，25.5毫摩尔，Aldrich)加入其中。将溶液搅拌12小时，然后应用至硅胶柱色谱，此色谱柱以氯仿-环己烷(1∶1v/v)平衡。将此色谱柱先以氯仿-环己烷(1∶1v/v)洗脱，然后再以氯仿洗脱。将第一级分产物7a(收率：3.7克，29.5％)，并以薄层色谱检测产品纯度(Rf：0.26(氯仿))，以质谱仪确定产品的质谱(MW+1：503.2)。将第二级分产物7b蒸发(收率：3.2克，25.5％)，并以薄层色谱检测产品纯度(Rf：0.23(氯仿))，以质谱仪确定产品的质谱(MW+1：503.4)。
实施例6：检测由于抑制预形成(preformed)的TNFα分泌而产生的抗炎 作用
应答于细菌脂多糖(E.coli LPS，Sigma)的刺激，成熟的巨噬细胞产生肿瘤坏死因子(TNF-alpha或TNFα)。TNFα的产生通过TNFα结合至Toll样受体-4(TLR-4)、脂多糖结合蛋白(LBP)和CD14受体诱导。TNFα的分泌是双向性的。在刺激巨噬细胞后1小时，应答以预形成的TNFα的释放。同时，NF-kappaB信号通路打开，在约8小时后TNFα基因转录达到最大。
在实验中，发明人研究了RAW.264.7成熟小鼠巨噬细胞的早期的TNFα分泌。此细胞存储了大量的预形成的TNFα。在刺激之前，将细胞置于24孔板中24小时，浓度为600.000细胞/毫升，随后以100纳克/毫升的LPS刺激；将实施例1的化合物3a和3b加入部分样品，将载体(1％的乙醇，其不会影响巨噬细胞TNFα的释放)加入对照孔。收集培养物上清液，并以R&DDuoset ELISA盒测定TNFα含量。在刺激后3小时以MTS测试(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑，Promega，Madison，Wi，USA)监测细胞活力。所以TNFα水平降低是由于对预成形TNFα的释放的抑制，不是由于细胞的死亡。
在LPS刺激后，在RAW.264.7巨噬细胞中测量由NF-kappaB活化驱动的TNFα基因的转录，并通过NF-kappaB-萤光素酶指示剂构建体转化。此构建体含有由最小启动子驱动的荧光素酶基因。在LPS刺激(100纳克/毫升)后6小时测量荧光素酶活性，所得结果在图2b中显示。
图2a显示了在以化合物3b处理之后的巨噬细胞基本TNFα释放的改变，图2b显示了化合物3b对以LPS刺激的巨噬细胞的TNFα释放的作用。在此实施例中，分析了两个对照样品(仅稀释液温育-乙醇温育)以及四个处理的样品。在图2a中可见即使没有LPS的诱导，化合物3b也能降低巨噬细胞基本TNFα的释放。在图2b中可见，化合物3b在LPS刺激后减少诱导的TNFα的释放。
实施例7：检测由于抑制TNFα诱导而产生的抗炎作用
在此实施例中，发明人显示了以实施例1的化合物3a和3b进行的实验的结果。
为检测晚期TNFα分泌，在4小时后洗去在巨噬细胞的LPS诱导后释放的预成形的TNFα，并以ELISA测试测定在4个小时期间产生的TNFα的量。依此方式，发明人清除了在巨噬细胞中预形成TNFα，并只测量了转录诱导的在后期合成和分泌的TNFα的量。图3说明了所得结果。从中可以看出化合物3a和3b都能以浓度依赖的方式抑制巨噬细胞的晚期TNFα分泌。
化合物3a和3b对TNFα的分泌和NF-kappaB的活化的影响也可基于细胞毒性。为排除这一点，发明人在处理后8个小时以MTS测试确定了细胞的代谢活性，该活性与细胞数量成比例。在这些测试中，没有发现化合物3a和3b的毒性，即它们没有降低细胞的代谢活性。
实施例8：通过亲和色谱法鉴别相互作用的蛋白
通过使用亲和色谱法，发明人研究了与本发明化合物5b结合的蛋白。在室温下DMF∶水(6∶4)的混合物中，将化合物连接至氰溴(cyanobromide)活化的Sepharose(Amersham-Pharmacia，Sepharose 4B)小珠16个小时。以50毫升DMF∶水(6∶4)的混合物洗涤1毫升小珠，然后以50毫升70％的乙醇洗涤，再以PBS(0.01M磷酸盐缓冲液、0.0027M氯化钾、0.137M氯化钠，pH：7.4)洗涤。在洗涤色谱柱之后，将5毫升人MCF-7乳腺癌细胞的蛋白级分应用于色谱柱上。以20毫升0.2M的NaCl-PBS溶液洗脱色谱柱，再以15毫升0.8M的NaCl-PBS溶液洗脱，然后以2毫升2M的NaCl-PBS溶液洗脱。以质谱(LC-MS/MS)分析洗脱液以测定与化合物5b结合的蛋白。
质谱分析根据在专利撰写期间在http://donatello.ucsf.edu/ingel.html公布的方案进行。
对于LC-MS/MS分析，注入5微升样品。对于LC预柱阱(precolumn trap)应用了5分钟的20微升0.1％的三氟乙酸/水，然后以MS/MS分析梯度洗脱液。色谱柱：Zorbax 300SB-C18，5微米，5×0.3mm；Zorbax 300SB-C18，3.5微米，150×0.075毫米。溶剂：A1溶剂：95.0％(0.1％的三氟乙酸/水)；B1溶剂：5.0％(0.1％的三氟乙酸/水)。质谱方法：扫描：m/z 300-1600，MS2扫描：m/z 100-1800。
通过这些测试，在这些蛋白中国鉴别了与Rab鸟苷三磷酸酶蛋白的相互作用的蛋白。Rab鸟苷三磷酸酶蛋白在囊泡(包括脂滴)在细胞内的活动发挥了一定的作用。已显示其涉及一些疾病(包括癌症)的发展(Kwai W.Cheng et al.：Emerging Role of RAB GTPases in Cancer and Human Disease.Cancer Res 2005；65：(7).April 1，2005，2516-2519)。
发明人的研究发现化合物3b也可结合至与囊泡活动有关的SEC22b蛋白。此蛋白是用于治疗所谓的军团病的候选的靶标，该疾病由嗜肺军团菌引起(Derre I and Isberg RR：Legionella pneumophila Replication VacuoleFormation Involves Rapid Recruitment of Proteins of the Early Secretory System，INFECTION AND IMMUNITY，May 2004，p.3048-3053)。
实施例9：对黑色素瘤细胞系(melanoma cell line)的抗肿瘤活性
在37℃下，在5％的CO2中，在Minimum Essential Medium Eagle(Sigma，St.Louis，MO，USA)、丙酮酸钠(Na-piruvate)、谷氨酸盐、非必需氨基酸、青霉素(50单位/毫升)-链霉素(50毫克/毫升)、10％胎牛血清中培养RVH人黑色素瘤细胞系。在每个第二天以胰蛋白酶/EDTA(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)胰酶化细胞，并将其通入60或100毫米的板。当培养基达到实施实验所需要的细胞数量(约106)时，将50.00个细胞/孔分配入24孔板(Costar24Well TC-Treated Microplates)中，并放置过夜以粘附至孔的底部。通过以下方式加入物质：次日从粘壁细胞中抽出培养基，培养基包含合适浓度的本发明化合物，并移液细胞于孔中混合(2毫升/孔)。将这些待检查的物质以100％的DMSO稀释，以此方式测定在对照孔中相应于在给定的测试中的物质的最高浓度的DMSO的量。在处理后的48小时，以CellTiter
Figure GPA00001029719900152
96AqueousNon-radioactive Cell Proliferation Assay(Promega，Madison，Wi，USA)检测活细胞，以检测在处理的活细胞和对照样品中的活细胞的数量。
该测试基于：
其包括：
1)MTS：3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑)(Promega，Madison，Wi，USA)
2)PMS：吩嗪甲硫酸盐(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)
MTS在活细胞中转变成甲躜(formazane)，其溶于培养基中，并且其质量/吸光度可在490纳米处测量。CellTiter 96
Figure GPA00001029719900153
AQueous Assay的指导用的是96孔板，并且提示将10.000细胞/孔与不同的物质在检测下温育。然后，为测定活细胞的比例，将20微升MTS和1微升PMS加入100微升培养基。在37℃下5％的CO2中温育1～4小时，便出现了酶反应。在ELISA读板仪上读取由细胞产生的甲臜，由此可直接获得或细胞的数量。因为发明人在24孔板上以50.000细胞/孔进行实验，所以必须修改方案。在处理细胞合适的时间(化合物的类型、不同的浓度)后，除去含有被检测物质的温育培养基(2毫升)，然后移取400微升含有与上述浓度(333.3微升培养基，66.6微升MTS，和3.3微升PMS每孔)相同的试剂的培养基至细胞。为能使用ELISA读板仪(Multiskan RC，Thermo Labsystems，Franklin，MA，USA)，从24孔板的每个单孔中移取400微升样品至96孔板(Micromethod plates，96孔平板)中的4孔中，每孔100微升。这也有助于消除由于不连续的移液造成的可能的错误。在每个24孔板上，有4孔是对照样品。如此3次后，移取了100微升至96孔板上，故，在每个96孔板上共提供了12个对照。剩下的4孔以100微升含有上述MTS和PMS的培养基作为背景测量。
图4显示了所得结果。可见化合物3b、7b、5a、4a、4b和6a显示了最强的抑制作用。化合物5b和3a对此类型的肿瘤即使在100μM的浓度下也表现出较弱的作用。
实施例10：对肝癌细胞和乳腺癌细胞系的抗肿瘤活性
在这些实验中使用了HepG2(高加索人肝癌细胞)细胞和MCF7(高加索人乳腺癌细胞)细胞。在下列培养基中培养这些细胞：对于HepG2，HepG2Dulbecco’s Modified Eagle Medium(D-MEM)(高葡萄糖)(Gibco BRL，Carlsbad，CA，USA)，青霉素(50单位/毫升)-链霉素(50毫克/毫升)，10％胎牛血清；对于MCF7(Human Caucasian breast adenocarcinoma)，Dulbecco’sModified Eagle Medium(D-MEM)(高葡萄糖)(Gibco BRL，Carlsbad，CA，USA)和Nutrient Mixture F-12Ham(Sigma，St.Louis，MO，USA)的1∶1的混合物，青霉素(50单位/毫升)-链霉素(50毫克/毫升)，10％胎牛血清。
实施例9中所述的操作实施本实验，差别在于在此试验中温育时间为24小时。在温育之后，进行如上所述的MTS测试3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑)(Promega，Madison，Wi，USA)。
对HepG2的实验结果列于图5中。可见检测到了化合物7a、7b、4a和6a的最强的抑制作用。化合物7b、4b和3b在20μM和50μM的浓度下表现出强的作用。化合物5a和3a在对这些类型肿瘤的测试浓度下表现出弱的作用。
对MCF7的实验结果列于图6中。可见检测到了化合物7a、4a和6a的最强的抑制作用。化合物5a、7b、和4b在20μM和50μM的浓度下已经表现出强的作用。化合物3a和3b在对这些类型肿瘤的测试浓度下表现出弱的作用。
实施例11：体内抗肿瘤作用I
在脾/肝动物模型中进行研究。从40只成年雄性CB17/scid小鼠(出生时就有免疫缺陷)中随机挑选20只，并进一步分成两组。在动物耳朵上依次标注动物。将选中的小鼠中的10只以化合物3b处理(40毫克/千克)5天(预处理的/3天)，将另外的10只以用作载体的DMSO的合适的稀溶液灌胃处理(预处理/对照)。在处理后的第5天，以戊巴比妥麻醉(75毫克/千克)所有的40只动物，再将4×104个来自人黑色素瘤(HT168M1)的细胞注射入(肋间隙)其脾中。在植入期间的局部出血以Gelaspon可吸收明胶海绵处理。在植入后的第7天，将20只未处理的小鼠随机分成两组，并在其耳朵上标记。从此刻起，以化合物3b(40毫克/千克)处理10只小鼠(后处理/3b)，另外的10只以合适的载体(DMSO)稀溶液处理(后处理/对照)，两者处理频率相似，皆为一天灌胃一次，每周5次，连续三周。在植入后，不处理预处理组。每周检测每只动物体重的变化。在植入后的31天，以戊巴比妥(75毫克/千克)麻醉，并放血(bleeding)处死动物。基于原发性脾肿瘤(primer spleen tumor)的质量以及肝中病灶的数量和大小进行评价。图7显示了所得结果。
当在测试化合物3b时，预处理5次明显减少了转移的数量(p＝0.05)。这意味着化合物3b抑制了肿瘤细胞的粘附，因此次化合物可能用于原发性肿瘤继发转移的情况。在可能形成潜在的转移的环境下，此化合物抑制肿瘤细胞的粘附，因此起能提高患者的生存机会。该作用时很强烈的，5次灌胃每次40毫克/千克的剂量足以发挥该作用。
尽管为达到统计显著性，连续给予这样剂量的化合物3b也可轻微地抑制粘附细胞的进一步的转移，这可能是由于对照样品的大量变化。
实施例12：体内抗肿瘤作用II
将轻微麻醉的成年雄性CB17/scid小鼠(出生时就有免疫缺陷)皮下(s.c.)植入8×105个来自体外人黑色素瘤(HT168M1)培养物的细胞。在接种肿瘤细胞后，将动物随机分成3组，并在其耳朵上标记。自接种肿瘤细胞后从第7天起，一天以化合物2(40毫克/千克)或化合物3b(40毫克/千克)灌胃处理小鼠一次，每周5天，共3周。以相似的方式和相似的频率用载体(DMSO)合适的稀溶液处理对照动物。每周检测每只动物体重的变化。当皮下肿瘤达到可触及的大小，也以卡尺检测其大小。以计算式π/6×a×b2估计肿瘤的体积，其中”a”是长直径，”b”是较短直径。在植入后的30天，以戊巴比妥(75毫克/千克)麻醉，并放血处死动物。评价基于原发性肿瘤的质量。图8显示了所得结果。在此实验中，测试了以口服给药相同的剂量(40毫克/千克)的化合物2和化合物3b的作用。
可以清楚的看出，化合物2对皮下原发性肿瘤的生长没有明显的作用。相比之下，在相同的模型中化合物3b显著(p＝0.05)降低了肿瘤大小。因此可以断定，本发明化合物3b与现有技术中的化合物2相比，其口服给药能更有效地抑制原发性肿瘤的生长。
实施例13：在细胞系统中证明抗病毒作用
以约0.001个噬斑形成单位/细胞的假性狂犬病Bartha型病毒感染PK-15猪肾细胞，所述病毒表达绿色荧光蛋白(GFP)，此蛋白掺入Plat2病毒基因组。在80％汇合时研究PK-15细胞。在37℃、5％CO2中温育24小时后，以荧光显微镜研究发出绿色荧光的细胞。在感染的时候，细胞以100μM的化合物3b(1/100DMSO，10mM基液(base solution))处理，加入1/100DMSO至培养基中作为对照。DMSO对病毒噬斑形成没有影响。
图9显示了100μM的化合物3b的抗病毒作用。图9a表示处理的细胞，图9b表示未处理的对照细胞。明显的是，对于未处理的对照细胞，绿色荧光病毒形成了大的噬斑(噬斑大小为数百个细胞)，对于处理的细胞，仅有小部分细胞(2～6个细胞/噬斑)显示出了病毒阳性信号。
由此体外实验可以断定，尽管化合物3b不会抑制病毒进入细胞，但是其确实抑制了病的的释放，从而抑制了病毒的传播。
实施例14：体内抗癌作用III
将来自体外培养物的2×106人白血病细胞(K562)注射入(i.v.)部分麻醉(乙醚麻醉)的成年雄性CB17/scid小鼠(出生时就是免疫缺陷的)。在接种肿瘤细胞后，将动物随机分成2组，并在其耳朵上标记。自接种肿瘤细胞后从第4天起，一天以化合物9a(100毫克/千克)灌胃(p.o.)处理小鼠一次，每周5天，共3周。以与处理组相似的方式和相似的频率用载体(DMSO)合适的稀溶液处理对照动物。根据其耳朵上的标记每周监测每只动物的体重变化。基于动物的存活率来评估化合物的作用。图10显示了所得结果。
在此实验中，当使用相同的浓度(100毫克/千克)经口给药时，测试化合物9a的作用。可以清楚的看出，化合物9a导致了动物存活率的明显的提高。此结果显示本发明化合物9a可有效地治疗白血病。
实施例15：在巨噬细胞培养物中的抗分歧杆菌的作用
在此试验中，分析了化合物3a的作用：研究了在巨噬细胞培养物中对鸟分歧杆菌的抑制。在体外环境下以鸟分歧杆菌感染人巨噬细胞(THP-I)，随后获得不同时间后的处理的(化合物3a：36毫克/升)和未处理的细胞，并测定存活的鸟分歧杆菌细菌的数量。图11显示了所得结果。可以看出由于化合物3a，分开的细菌的数量明显较未处理的组少。
由此实验，明显的是化合物3a可有效地治疗分歧杆菌感染。
实施例16：2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(3-吗啉代)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3-二 酮(8a)的合成及其对不同肿瘤细胞系的作用
将9.5克2-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，6，7-四氟异吲哚-1，3-二酮(2)(25毫摩尔)溶于15毫升氯仿(分析纯，Molar)中，然后加入吗啉(2.4克，27.5毫摩尔，Alfa Aesar)。将溶液搅拌12小时，然后应用至硅胶柱色谱，此色谱柱以氯仿-环己烷(1∶1v/v)平衡。将此色谱柱先以氯仿-环己烷(1∶1v/v)洗脱，然后再以氯仿洗脱。将第一级分产物8a蒸发(收率：3.4克，29.2％)，并以薄层色谱检测产品纯度(Rf：0.24(氯仿))，以质谱仪确定产品的质谱(MW+1：446.1)。
测试化合物8a对不同的人肿瘤细胞系和小鼠肿瘤细胞系的作用。所得结果列于下表1中。可见化合物8a在不同的白血病、肝癌和黑色素瘤中均有作用。
表1
  细胞系   20μM   10μM   5μM   2.5μM
  HepG2(肝癌)   0.17   0.35   0.95   0.93
  HL60(白血病)   -0.03   0.02   0.69   0.88
  HT168(黑色素瘤)   0.06   0.06   0.44   1.07
  HT199(黑色素瘤)   0.16   0.96   1.29   1.42
  K562(白血病)   0.24   0.26   0.40   0.95
  MCF7(乳腺癌)   0.21   0.73   0.80   0.96
  P388(小鼠白血病)   0.06   0.08   0.09   0.73
  WM983(黑色素瘤)   0.02   0.09   0.88   0.97
实施例17：2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(环戊基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3- 二酮(9a)和2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(环戊基氨基)-4，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮 (9b)
将19克化合物22-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，6，7-四氟异吲哚-1，3-二酮(50毫摩尔)溶于氯仿(30毫升，分析纯，Molar)中，然后加入环戊基胺(8.36克，55毫摩尔，Alfa Aesar)。将溶液搅拌4小时，然后加入环己烷(20毫升，Molar)，并将溶液应用至硅胶柱色谱，此色谱柱以氯仿-环己烷(1∶3v/v)平衡。将此色谱柱先以氯仿-环己烷(1∶3v/v)洗脱，然后再以氯仿-环己烷(1∶1v/v)洗脱。将第一级分产物9a蒸发(收率：6.5克，27％)，并以薄层色谱仪检测产品纯度(Rf：0.44(氯仿-环己烷＝1∶1v/v))，以质谱仪确定产品的质谱(MW+1：445.6)。将第二级分产物9b蒸发(收率：5.8克，25％)，并以薄层色谱仪检测产品纯度(Rf：0.37(氯仿∶环己烷＝1∶1v/v))，以质谱仪确定产品的质谱(MW+1：445.5)。

Claims (26)

1.具有式I结构的化合物：
Figure FPA00001029719800011
其中
每个X独立地是氢、卤素、-C1-20烷基、-C2-20烯基、-C2-20-炔基，-C5-6环烷基、芳基、芳烷基、金刚烷基、杂环基、羟基、羟烷基、或-N-(R1，R2)基团；
n是0、1、2、3或4；
每个R1和R2可以独立地是氢、直链或支链烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基，其中每个都是未取代的或卤素取代的；或
R1和R2与其间的氮一起形成五元或六元环；
A是单键、-O-、-S-、-CH2-、或NH-；
Y是O或S；
Z是O或S；
每个R’和R”独立地是甲基、乙基、异丙基、异丁基、仲丁基或叔丁基；但是具有如下限制：
X(n)不能全是氟，及
A是单键，及
Y以及Z是O，及
R’以及R”是异丙基，及
R1和R2同时为氢。
2.权利要求1所述的化合物，其特征在于A是单键。
3.权利要求1或2所述的化合物，其特征在于Y和Z中至少一个是O，更优选地两者都是O。
4.权利要求1～3任一项所述的化合物，其特征在于R1是氢。
5.权利要求1～4任一项所述的化合物，其特征在于X(n)的任意三个是卤素。
6.权利要求5所述的化合物，其特征在于所述卤素是氟。
7.权利要求1～6任一项所述的化合物，其特征在于R1和/或R2是未取代的或卤素取代的乙基，优选是乙基或三氟乙基，特别是乙基。
8.权利要求1～7任一项所述的化合物，其特征在于R1和/或R2是乙二胺。
9.权利要求1～8任一项所述的化合物，其特征在于R’和R”中至少一个是异丙基，更优选的是两者都是异丙基。
10.权利要求1～9任一项所述的化合物，其选自：
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(乙基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(乙基氨基)-4，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(2-氨基-乙基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(2-氨基-乙基氨基)-4，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，6-三氟-7-(2，2，2-三氟乙基氨基)异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，7-三氟-6-(2，2，2-三氟乙基氨基)异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(吡啶-3-基甲基)-氨基)-5，6，7-三氟异吲哚啉-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(吡啶-3-基甲基)-氨基)-5，6，7-三氟异吲哚啉-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(3-吗啉-4-基-丙基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚啉-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(3-吗啉-4-基-丙基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚啉-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(3-吗啉)-5，6，7-三氟异吲哚啉-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(环戊基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚啉-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(环戊基氨基)-4，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
11.适于治疗疾病状态和影响细胞囊泡系统，特别是影响脂滴形成和/或功能的化合物，所述化合物具有式I结构：
Figure FPA00001029719800031
其中
每个X独立地是氢、卤素、-C1-20烷基、-C2-20烯基、-C2-20-炔基，-C5-6环烷基、芳基、芳烷基、金刚烷基、杂环基、羟基、羟烷基、或-N-(R1，R2)基团；n是0、1、2、3或4；
每个R1和R2可以独立地是氢、直链或支链烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基，其中每个都是未取代的或卤素取代的；或
R1和R2与其间的氮一起形成五元或六元环；
A是单键、-O-、-S-、-CH2-、或NH-；
Y是O或S；
Z是O或S；
每个R’和R”独立地是甲基、乙基、异丙基、异丁基、仲丁基或叔丁基；
但是若疾病状态是癌症或炎症，则具有如下限制：
X(n)不能全是氟，及
A是单键，及
Y以及Z是O，及
R’以及R”是异丙基，及
R1和R2同时为氢。
12.权利要求11所述的化合物，其特征在于A是单键。
13.权利要求11或12所述的化合物，其特征在于Y和Z中至少一个是O，更优选地两者都是O。
14.权利要求11～13任一项所述的化合物，其特征在于R1是氢。
15.权利要求11～14任一项所述的化合物，其特征在于X(n)的任意三个是卤素。
16.权利要求15所述的化合物，其特征在于所述卤素是氟。
17.权利要求11～16任一项所述的化合物，其特征在于R1和/或R2是未取代的或卤素取代的乙基，优选是乙基或三氟乙基，特别是乙基。
18.权利要求11～17任一项所述的化合物，其特征在于R1和/或R2是乙二胺。
19.权利要求11～18任一项所述的化合物，其特征在于R’和R”中至少一个是异丙基，更优选的是两者都是异丙基。
20.权利要求11～19任一项所述的化合物，其选自：
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(乙基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(乙基氨基)-4，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(2-氨基-乙基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(2-氨基-乙基氨基)-4，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，6-三氟-7-(2，2，2-三氟乙基氨基)异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4，5，7-三氟-6-(2，2，2-三氟乙基氨基)异吲哚-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(吡啶-3-基甲基)-氨基)-5，6，7-三氟异吲哚啉-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(吡啶-3-基甲基)-氨基)-5，6，7-三氟异吲哚啉-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(3-吗啉-4-基-丙基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚啉-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(3-吗啉-4-基-丙基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚啉-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(3-吗啉)-5，6，7-三氟异吲哚啉-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-4-(环戊基氨基)-5，6，7-三氟异吲哚啉-1，3-二酮；
2-(2，6-二异丙基苯基)-5-(环戊基氨基)-4，6，7-三氟异吲哚-1，3-二酮。
21.权利要求11～20任一项所述的化合物，其特征在于所述疾病状态选自：癌症、炎症、克罗恩氏病、动脉粥样硬化、细菌或病毒感染。
22.权利要求21所述的化合物，其特征在于所述疾病状态是癌症。
23.权利要求21所述的化合物，其特征在于所述疾病状态是炎症。
24.权利要求21所述的化合物，其特征在于所述疾病状态是细菌或病毒感染。
25.通过影响细胞囊泡系统，特别是脂滴的形成和/或功能而适于治疗疾病状态的药物组合物，所述组合物含有一种或多种添加剂，其特征在于包含具有式I结构的化合物：
Figure FPA00001029719800051
其中
每个X独立地是氢、卤素、-C1-20烷基、-C2-20烯基、-C2-20-炔基，-C5-6环烷基、芳基、芳烷基、金刚烷基、杂环基、羟基、羟烷基、或-N-(R1，R2)基团；
n是0、1、2、3或4；
每个R1和R2可以独立地是氢、直链或支链烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基，其中每个都是未取代的或卤素取代的；或
R1和R2与其间的氮一起形成五元或六元环；
A是单键、-O-、-S-、-CH2-、或NH-；
Y是O或S；
Z是O或S；
每个R’和R”独立地是甲基、乙基、异丙基、异丁基、仲丁基或叔丁基；
但是若疾病状态是癌症或炎症，则具有如下限制：
X(n)不能全是氟，及
A是单键，及
Y以及Z是O，及
R’以及R”是异丙基，及
R1和R2同时为氢。
26.通过影响细胞囊泡系统，特别是脂滴的形成和/或功能而适于治疗疾病状态的化合物的用途，其特征在于所述化合物具有式I结构：
Figure FPA00001029719800061
其中
每个X独立地是氢、卤素、-C1-20烷基、-C2-20烯基、-C2-20-炔基，-C5-6环烷基、芳基、芳烷基、金刚烷基、杂环基、羟基、羟烷基、或-N-(R1，R2)基团；
n是0、1、2、3或4；
每个R1和R2可以独立地是氢、直链或支链烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基，其中每个都是未取代的或卤素取代的；或
R1和R2与其间的氮一起形成五元或六元环；
A是单键、-O-、-S-、-CH2-、或NH-；
Y是O或S；
Z是O或S；
R’和R”表示独立的甲基、乙基、异丙基、异丁基、仲丁基或叔丁基；
但是若疾病状态是癌症或炎症，则具有如下限制：
X(n)不能全是氟，及
A是单键，及
Y以及Z是O，及
R’以及R”是异丙基，及
R1和R2同时为氢。
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