CN101744857A - 小花鬼针草提取物及其制备方法和在制备抗前列腺疾病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种小花鬼针草提取物及其制备方法和用途。本发明提供的小花鬼针草提取物中总黄酮含量是60％～90％，主要含有芦丁、金丝桃苷、槲皮苷等黄酮类成分。小花鬼针草提取物的制备方法是将小花鬼针草原料用氯仿、乙酸乙酯或30％～95％乙醇提取浓缩后得到。本发明还提供了一种药用组合物，其含有药学有效量的小花鬼针草提取物和药用辅料。小花鬼针草提取物抗前列腺增生和抗前列腺癌的活性测试结果表明，其在制备抗前列腺疾病药物方面具有广泛的应用。

Description

小花鬼针草提取物及其制备方法和在制备抗前列腺疾病药物中的应用

技术领域

本发明涉及中药提取物及其应用领域，尤其涉及小花鬼针草提取物及其制备方法和小花鬼针草提取物在制备抗前列腺疾病药物中的应用。

背景技术

前列腺增生是腺体内细胞不受控制的非恶性增殖，这些增殖细胞常常发生在围绕尿道的周围组织，随着增生的不断加重，腺体会挤压尿道，并会梗阻尿路，致使膀胱不再完全排空，这样就为感染、膀胱结石和慢性前列腺炎的发生制造了环境。如不予以治疗，慢性梗阻还会导致尿液倒流入输尿管，从而威胁到肾的功能。常用的治疗方法为药物疗法和手术疗法。手术治疗是一种创伤性和破坏性的操作，前列腺体积偏大、患者年龄偏高增加了手术的潜在风险。术后尿失禁、尿道狭窄、性功能障碍等各种副作用以及高昂的治疗费用，均给患者带来很大的心理和经济负担，严重影响了患者的生活质量。过去的十年中，采用手术治疗的人群大幅度减少，而转向用药物疗法来控制症状，使药物疗法成为目前临床最为常用的治疗手段。药物治疗的短期目标是缓解患者的下尿路症状，长期目标是延缓疾病的临床进展，预防并发症的发生，在减少副作用的同时，保持患者较高的生活质量。

目前，抗前列腺增生药物主要包括针对病因治疗的5a-还原酶抑制剂，如非那甾胺(Finasteride)、度他雄胺(Dutasteride)等，和针对病症治疗的a-受体阻滞剂，如特拉唑嗪(Terazosin)、多沙唑嗪(Doxazosin)、坦索罗辛(Tamsulosin)。5a-还原酶抑制剂可降低前列腺体积和血液中PSA水平，从而缓解前列腺增生症状并可阻止疾病的进程，是目前治疗前列腺增生最为常用的有效药物。但该类制剂由于降低雄激素水平，会产生与雄激素减少相关的一系列副作用。a-受体阻滞剂主要是通过阻滞分布在前列腺和膀胱颈部平滑肌表面的a-肾上腺能受体，起到松弛平滑肌、缓解尿路梗阻的作用。该类制剂可缓解尿路梗阻急性症状(如延迟尿潴留发生的时间)，或延缓手术时间，但长期治疗并不能降低上述病情的发生机率。其副作用主要表现为体位性低血压、头晕、无力、心悸等症状。临床也常会将5a-还原酶抑制剂和a-受体阻滞剂联合应用，以期达到短期迅速缓解症状和长期治疗和阻止疾病进展的目的，但联合用药的不良反应和费用亦相应增加。

尽管上述两类药物是目前用于治疗前列腺增生的主流药物，但由于前列腺增生是慢性疾病，需长期服药，因此上述药物的毒副作用常会困扰患者。另外，这两种制剂作用靶点较为单一，前者为降低腺体内雄激素的活性形式，后者是缓解平滑肌张力，但对前列腺增生所引发的感染、炎症等并发症状则多无治疗作用。这种情况导致了人们对中药及植物药物的关注。

用于治疗前列腺增生的植物提取物制剂目前在世界各地，尤其是欧洲国家已被广泛采用。国外常用植物类药物有伯泌松、吾真宁、舍尼通、通尿灵等，这些制剂分别来源于沙巴棕(Serenoa repens，在欧洲也称为蓝棕)、沙巴棕[Serenoa repens(bartram)small]和紫锥花(Echinacea anagustifolia)、裸麦(Secalecereale)花粉、非洲臀果木(Prunus Africana L.)等等。国内用于治疗前列腺增生的中药制剂种类较多，如前列通(蒲公英、黄柏、车前子等)、前列安胶囊(膜荚黄芪、地鳖虫、冬葵果、桃仁等)、前列康(油菜花花粉)等。这些植物制剂在治疗前列腺增生的同时，往往可治疗前列腺炎。而且这些植物制剂的毒副作用较低，还未见有毒性的报道。目前的植物制剂大多起效缓慢不适于急性症状或增生较为明显的患者，因此提高药效是突出植物制剂治疗该疾病优越性的关键步骤。近年来，从天然产物中挖掘更为有效、低毒的抗前列腺增生有效成分是我们所面临的机遇和挑战。

PSA(Prostate specific antigen前列腺特异性抗原)是临床诊断前列腺增生和前列腺癌的最重要指标之一。PSA是一种由前列腺上皮细胞分泌的丝氨酸蛋白酶，存在于前列腺上皮细胞的胞浆内，正常情况下被分泌入前列腺液或精液中。PSA(t-PSA)在血液中有两种形式存在：少量呈游离小碎片形式的f-PSA；大部分与a1-胰蛋白酶(ACT)结合，呈复合物c-PSA形式。通常血清中总的PSA(t-PSA)水平以f-PSA与c-PSA之和表示。

PSA主要由前列腺上皮中已分化的柱状细胞分泌产生，基底细胞基本不产生PSA。正常情况下，富含PSA的前列腺腺泡内容物与淋巴系统间存在着由基底膜、基底细胞和内皮层构成的屏障，使PSA很少或不会通过血液循环，所以外周血中PSA浓度很低。前列腺炎症破坏了前列腺腺管及原有生理屏障的完整性，使腺管及腺泡内的PSA渗漏进入血循环，从而引起血清PSA浓度升高。故血液中PSA含量升高通常提示前列腺有疾患存在，PSA含量测定已成为男性例行健康检查中的常规指标。前列腺增生症、前列腺炎等良性疾病，PSA可轻微升高，但升高幅度不大，一般小于10μg/L，经有效治疗后一般能恢复至正常水平。但应注意的是，在其临床演变过程中，若PSA浓度呈明显增高或由低逐渐转高，则提示有可能伴发前列腺癌(PCa)。故PSA作为前列腺癌的早期诊断资料具有一定的价值。PCa患者PSA升高幅度大，一般大于10μg/L，如果大于20μg/L，则很少幸免于PCa。PCa患者在进行化疗、放疗、去势或抗雄激素治疗后，如原增高的PSA水平逐渐恢复，则可以判断治疗有效。可以说，PSA虽不能完全特异性地鉴别诊断PCa，但临床医师如能根据PSA升高的程度以及随时间的变化规律加以正确分析，可提高其诊断价值及观察疗效、判定预后、预测复发的能力。在没有癌变的情况下，前列腺体积的大小与血液中PSA含量成正相关。因此在排除前列腺癌后，PSA也是临床评价前列腺增生疾病进展情况的重要指标。

前列腺癌患者中，PSA的含量之所以显著升高，是因体内前列腺癌细胞会分泌大量PSA的缘故。因此，能否抑制前列腺癌细胞分泌PSA成为体外抗前列腺癌活性评价的重要指标。但是，前列腺增生也同样会导致血液中PSA的含量升高。在这种增生病变中，PSA则是由非癌变的细胞所分泌。但不论是在正常、增生还是癌变的前列腺上皮细胞中，PSA的表达主要是通过雄激素/雄激素受体进行调控，因此在体外检测能够抑制癌细胞分泌PSA的活性物质，在体内亦可能降低正常的上皮细胞分泌PSA。有研究表明，PSA含量与前列腺增生体积大小成正对数相关，体内的PSA水平降低并趋于正常时，常常是增生症状得以缓解的标志。临床用于治疗前列腺增生的一线药物非那甾安，体外活性测试具有抑制LNCaP细胞分泌PSA的活性，在治疗过程中也会降低前列腺体积的大小和降低血液中PSA的水平。ELISA法作为临床上较为常用的测定PSA方法，已有文献报道。

小花鬼针草(Bidens parviflora Willd.)为菊科鬼针草属植物，又名细叶刺针草，小刺叉，小鬼叉，锅叉草，一包针；分布在东北、华北、河南、山东、江苏、陕西、四川；生在山坡、路旁或农田中。小花鬼针草性苦、味平、无毒，药用全草，具有清热解毒、散瘀消肿的功效，主治咽喉肿痛、泄泻、痢疾、疔疮肿毒、蛇虫咬伤、风湿痹痛。

关于小花鬼针草的药理作用和临床应用文献报道较少。小花鬼针草与鬼针草同属菊科鬼针草属植物，具有相似的药理作用。主要是抗菌抑菌作用、抗炎镇痛作用、对中枢神经系统的作用、抗高血脂及血栓形成作用、抗胃溃疡作用、对体外白血病细胞的抑制作用以及对血小板聚集功能的影响。其临床应用与鬼针草相似，主要用于治疗前列腺肥大、高血压、阑尾炎、预防感冒、流感。

目前对小花鬼针草的活性化学成分的研究报道较少。迄今为止，文献报道从小花鬼针草中分离得到的化合物有以下几类：黄酮类化合物、黄酮苷类化合物、酚酸类化合物、咖啡酰基奎宁酸类化合物及其甲酯、苯丙苷类化合物、聚炔苷类化合物、挥发油类成分以及木脂素、糖酯等其它类化学成分。

发明内容

本发明提供了小花鬼针草提取物及其制备方法和用途。

本发明一方面提供了一种小花鬼针草提取物，该提取物中总黄酮的含量是60％～90％。该提取物中的黄酮类成分包括芦丁、金丝桃苷、槲皮苷。

本发明另一方面提供了一种小花鬼针草提取物的制备方法，是将小花鬼针草原料用溶剂提取后浓缩得到提取物，该溶剂可以是三氯甲烷、乙酸乙酯或30％～95％乙醇。其中，提取方法可以是加热提取、常温萃取或冷浸提取。

该提取物可以进一步用溶剂萃取纯化，合并萃取液溶剂，减压干燥，浓缩得到纯化后的提取物。萃取溶剂优选水饱和过的正丁醇-乙酸乙酯混合溶剂，正丁醇与乙酸乙酯的体积比在1∶1～5∶1之间，优选正丁醇与乙酸乙酯体积比为4∶1的水饱和过的正丁醇-乙酸乙酯混合溶剂。

可以选择地，原料用溶剂提取后浓缩得到的提取物也可以进一步用树脂纯化，合并洗脱液溶剂，减压干燥，浓缩得到纯化后的提取物。树脂纯化优选大孔吸附树脂柱，纯化过程用30％～95％乙醇洗脱，优选45％～75％乙醇洗脱，更优选60％乙醇洗脱。

本发明再一方面提供了一种药用组合物，该药用组合物含有药学有效量的小花鬼针草提取物和药用辅料。该小花鬼针草提取物中总黄酮的含量范围是60％～90％。该提取物中的黄酮类成分包括芦丁、金丝桃苷、槲皮苷。

该药用组合物中小花鬼针草提取物的制备方法，是将小花鬼针草原料用溶剂提取后浓缩得到提取物，该溶剂可以是三氯甲烷、乙酸乙酯或30％～95％乙醇。其中，提取方法可以是加热提取、常温萃取或冷浸提取。

该提取物可以进一步用溶剂萃取纯化，合并萃取液溶剂，减压干燥，浓缩得到纯化后的提取物。萃取溶剂优选水饱和过的正丁醇-乙酸乙酯混合溶剂，正丁醇与乙酸乙酯的体积比在1∶1～5∶1之间，优选正丁醇与乙酸乙酯体积比为4∶1的水饱和过的正丁醇-乙酸乙酯混合溶剂。

可以选择地，原料用溶剂提取后浓缩得到的提取物也可以进一步用树脂纯化，合并洗脱液溶剂，减压干燥，浓缩得到纯化后的提取物。树脂纯化优选大孔吸附树脂柱，纯化过程用30％～95％乙醇洗脱，优选45％～75％乙醇洗脱，更优选60％乙醇洗脱。

该提取物可加入相应药用辅料，制成片剂、冲剂、胶囊剂、颗粒剂。

此外，本发明提供了小花鬼针草提取物在制备抗前列腺疾病药物中的应用。细胞实验结果表明本发明小花鬼针草提取物可明显抑制LNCaP细胞分泌PSA。

本发明小花鬼针草提取物以及含有该小花鬼针草提取物的药用组合物采用口服给药，服用方便，副作用小。

本发明小花鬼针草提取物的有效量是12.5～30.7mmol/L。

本发明小花鬼针草提取物是从中药材小花鬼针草中提取的有效成分，可明显抑制LNCaP细胞分泌PSA，该提取物的制备方法及其在抗前列腺疾病方面的用途可以广泛的应用于开发和制备更为有效、低毒的抗前列腺疾病天然药物，尤其是抗前列腺增生药物和抗前列腺癌药物，具有广阔的应用前景。

具体实施方式

以下所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。

一、提取物的制备

实施例一

小花鬼针草干燥全草2.0kg，用20倍量三氯甲烷提取两次，每次48小时，合并提取液，减压回收溶剂，得到浸膏，该提取物为黄红色粉末。用体积比为4∶1的水饱和过的正丁醇-乙酸乙酯混合溶剂萃取，反复多次至萃取液颜色变淡，合并萃取液溶剂，减压干燥，得小花鬼针草总黄酮提取物176.0g。经紫外可见分光光度法测定，该提取物中总黄酮含量为88％。

实施例二

小花鬼针草干燥全草2.0kg，用20倍量乙酸乙酯提取两次，每次48小时，合并提取液，减压回收溶剂，得到浸膏，该提取物为黄红色粉末。再用体积比为4∶1的水饱和过的正丁醇-乙酸乙酯混合溶剂萃取，反复多次至萃取液颜色变淡，合并萃取液溶剂，减压干燥，得小花鬼针草总黄酮提取物178.2g。经紫外可见分光光度法测定，该提取物中总黄酮含量为89％。

实施例三

小花鬼针草干燥全草2.0kg，用20倍量60％乙醇加热回流提取两次，每次1.0小时，合并提取液，减压回收溶剂，得到浸膏，该提取物为褐色粉末。将60％乙醇提取物混悬于10倍量水中，上大孔吸附树脂柱(柱床体积15L)，依次用3倍保留体积的水，30％乙醇，60％乙醇，95％乙醇洗脱，合并30％乙醇、60％乙醇以及95％乙醇洗脱液，减压干燥，得到小花鬼针草总黄酮提取物202.0g。经紫外可见分光光度法测定，该提取物中总黄酮含量为60％。

实施例四

小花鬼针草干燥全草2.0kg，用20倍量60％乙醇加热回流提取两次，每次1.0小时，合并提取液，减压回收溶剂，得到浸膏，该提取物为褐色粉末。将60％乙醇提取物混悬于10倍量水中，上大孔吸附树脂柱(柱床体积15L)，依次用3倍保留体积的水，30％乙醇，60％乙醇，95％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，减压干燥，得到小花鬼针草总黄酮提取物105.0g。经紫外可见分光光度法测定，该提取物中总黄酮含量为65％。

二、小花鬼针草提取物中黄酮类成分的指认

1、液相色谱条件

色谱柱：SHIMADZU VP-C₁₈(4.6mm×250mm，5μm)分析柱；

流动相：乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)

梯度洗脱：0～1min(10％A)，1～30min(10％～25％A)，30～45min(25％～50％A)，45～55min(50％～100％A)，55～60min(100％A)。

检测波长：254nm；

柱温：25℃；

流速：1.0mL/min

乙腈(色谱纯，Merck Company)；水(Millipore-Q自制超纯水)；甲酸(分析纯，广州化学试剂厂)；Agilent 1100高效液相色谱仪，配有在线脱气机、四元梯度洗脱泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器和色谱工作站。

2、质谱条件

离子源：电喷雾离子电离源(ESI源)；

检测方式：负离子检测；

扫描方式：MRM

干燥气：氮气(300L/h)；碰撞气：氩气(真空度2.6×10^-3mbar)

源温度：105℃；去溶剂温度：300℃；

毛细管电压：3.5kV；锥孔电压：25V；

3、小花鬼针草提取物供试品溶液及对照品溶液

(1)供试品溶液

取干燥恒重的小花鬼针草粉末(40目)2.0g，精密称定，置100ml烧杯中，加60％乙醇40ml，分别超声(功率250W，频率40kHz)提取两次，每次30min，提取液过滤后减压回收乙醇，残渣用甲醇溶解，转移至10mL容量瓶中，并用甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液备用。

(2)对照品溶液

精密称取各对照品芦丁、金丝桃苷、槲皮苷适量，分别用甲醇溶解并稀释成含芦丁、金丝桃苷、槲皮苷2.48、2.52、2.04mg/mL的溶液。

3、具体操作

分别称取芦丁、金丝桃苷和槲皮苷对照品溶液。将小花鬼针草供试品溶液和上述对照品溶液按上述色谱条件进行分析，根据同一化合物相同色谱分离条件下保留时间相同，紫外光谱图一致的原则，比较小花鬼针草供试品和各对照品的色谱峰，分别指认出芦丁、金丝桃苷、槲皮苷。并且通过多级质谱裂解规律进一步对其进行了确认，并通过文献检索加以证明。芦丁、金丝桃苷和槲皮苷的液相色谱的保留时间、其LC-MS(n)质谱裂解情况及化合物结构详见表1。

表1

三、提取物的活性实验

本发明选用体外抑制LNCaP细胞分泌PSA活性作为抗前列腺增生和抗前列腺癌的活性评价体系，对小花鬼针草提取物进行活性评价。

1、实验材料

(1)供试品：小花鬼针草药材分别按照实施例一、实施例二、实施例三和实施例四中的方法制备得到的不同提取物。

(2)细胞来源：雄激素依赖型前列腺癌细胞LNCaP。细胞接种于含10％热灭活胎牛血清(Hyclone)，100U/ml青/链霉素的RPMI-1640培养液中，在37℃，5％CO₂培养箱中培养。

2、实验方法

(1)样品配制与给药

将各测试部分溶解于DMSO中，分别配制成终浓度为50μg/ml或100μg/ml(DMSO的终浓度应小于5‰)。将细胞接种于96孔培养板中，每孔细胞数为10000个。培养48h后，进行给药，并设有溶剂对照组。给药后培养48h后，进行ELISA和MTS测试。

(2)酶联免疫法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)

抗原溶液制备：将LNCaP细胞以10000细胞/孔，接种于96孔培养板中。培养48小时后，换入新鲜培养液，然后将不同浓度的待测馏分或单体化合物加入，并设置溶剂对照组、阳性药组(10μM非那甾安)和空白组(未接种细胞)，每一浓度均设置三个复孔。给药后继续培养48小时，然后将培养液吸出，并转入另一干净的96孔板中，用于测试其中的PSA含量。同时，采用MTS法对细胞的存活情况进行测试。

包被ELISA培养板：在测试前需将ELISA板预先用抗体包被。将兔抗原PSA多克隆抗体用包被缓冲液(Na₂CO₃ 0.159g，NaH₂CO₃ 0.293g，溶解于100mlH₂O中)稀释至4μg/ml，以100μl/well加入96孔ELISA培养板中，4℃下过夜。

封闭：将包被好的ELISA板，用PBST[0.1％Tween 20，PBS(KH₂PO₄ 0.2g，Na₂HPO₄.12H₂O 2.9g，NaCl 8.0g，KCl 0.2g，H₂O 1000ml)]洗涤一次，加入200μl/well的封闭液[1％BSA(上海伯奥)溶于PBS]，37℃，封闭1小时。

加入待测抗原溶液：封闭完成后，PBST洗涤板两次，倒扣控干，将收集的待测抗原溶液，以及用抗原稀释液(5％FBS RPMI-1640)配制成不同浓度的(0，1，3，6，10ng/ml)标准PSA(Fitzgerald)溶液加入ELISA板中，37℃，作用2小时。

加入一次抗体：与抗原作用完成后，PBST洗涤板三次，倒扣控干，将鼠抗原PSA单克隆抗(Biodesign)用抗体稀释液(0.5％BSA溶于PBST)稀释至200ng/ml，100μl/well加入ELISA板中，37℃，作用1小时。

加入二次抗体：一抗作用完成后，PBST洗涤板三次，扣干，将经辣根过氧化物酶标记羊抗鼠抗体(DAKO)用二抗稀释液(0.5％BSA in PBST，不含NaN₃)稀释4000倍，100μl/well加入ELISA板中，37℃，作用半小时。

显色：二抗作用完成后，PBST洗涤板六次，扣干，将显色液[9ml底物缓冲液(柠檬酸0.51g，Na₂HPO₄.2H₂O 1.84g，H₂O 100ml)1％OPD(1g溶于100ml底物缓冲液)，30％H₂O₂ 15μl]100μl/well加入ELISA板中。10～15分钟后，加入反应终止液(1M H₂SO₄溶于H₂O)，50μl/well。采用

340PC微孔分光光度计(Molecular Devices Cor.)，490nm处测定OD值。

(3)MTS检测法：

MTS(Sigma)溶液：250mg MTS溶于125ml DPBS(Gibico，100mgMgCl₂.6H₂O and 133mg CaCl₂.2H₂O溶解于1L DPBS H₂O)，于4℃避光保存；

PMS(Promega)溶液：0.92mg/ml PMS溶于DPBS。

药物作用后的细胞数量用MTS检测法检测，按照Aqueous One Solution CellProliferation Assay Kit(Promega)试剂盒所述的实验程序进行。简要为：将培养板中培养液吸走，每孔加入MTS混合液[1.1mL MTS，55μL PMS，5.5mL 5％FBS/RPMI-1640]60μl。置于37℃培养箱，作用2小时。然后用

340PC微孔分光光度计(Molecular Devices Cor.)，490nm处测定OD值。

(4)数据处理

ELISA检测法：以标准PSA浓度为纵轴，OD值为横轴做标准曲线，根据拟合的标准曲线公式y＝156.57x³-40.222x²+15.726x-0.0141，R²＝0.9999，计算待测PSA的浓度。

MTS法：测得OD值减去空白组OD值，为实际OD值，用ODa表示。

每孔、每个细胞相对于对照组分泌PSA量的计算公式如下：

每一数据点以三个复孔的平均值表示。

3、实验结果

对小花鬼针草的不同提取物进行体外抑制LNCaP细胞分泌PSA活性实验，结果见表2。

表2

	三氯甲烷提取物	乙酸乙酯提取物	30％乙醇洗脱	60％乙醇洗脱	95％乙醇洗脱	非那甾胺
							抑制率1*	57.13	58.64	28.34	54.78	9.82
抑制率2*	65.57	72.38	35.38	67.84	13.21	44.29

1^*测试浓度50μg/L；2^*测试浓度100μg/L

结果表明，小花鬼针草乙酸乙酯提取物具有较好的抑制LNCaP细胞分泌PSA活性，三氯甲烷提取物抑制LNCaP细胞分泌PSA活性次之。乙醇提取物部分，60％乙醇洗脱部位具有较好的抑制LNCaP细胞分泌PSA活性，30％乙醇洗脱部位活性次之，95％乙醇洗脱部位基本没有活性。提取物及洗脱部位的测试浓度为100μg/ml，阳性药非那甾安(Fina.)的测试浓度为10μM。

Claims (10)

1.一种小花鬼针草提取物，其特征在于，所述提取物中总黄酮的含量是60％～90％。

2.如权利要求1所述的提取物，其特征在于，所述提取物中的黄酮类成分包括：芦丁、金丝桃苷、槲皮苷。

3.一种小花鬼针草提取物的制备方法，是将小花鬼针草原料用溶剂提取后浓缩得到提取物，其特征在于，所述溶剂可以是三氯甲烷、乙酸乙酯或30％～95％乙醇。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，进一步包括将所述提取物用溶剂萃取纯化。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述溶剂是正丁醇-乙酸乙酯混合溶剂，所述正丁醇与乙酸乙酯的体积比是1∶1～5∶1。

6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，进一步包括将所述提取物用树脂纯化。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，纯化过程用30％～95％乙醇洗脱。

8.一种药用组合物，其特征在于，含有药学有效量的小花鬼针草提取物和药用辅料。

9.如权利要求8所述的药用组合物，其特征在于，所述小花鬼针草提取物中总黄酮的含量是60％～90％。

10.小花鬼针草提取物在制备抗前列腺疾病药物中的应用。