CN101735953A - 黑青霉及其代谢产物的生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种黑青霉及其代谢产物的生产方法，通过工业化生产，大量获取黑青霉菌体、孢子及其代谢产物的人工培养方法。将培养基置入培养容器内，灭菌后，接种一定量的黑青霉，在一定的温度、湿度、压力、pH条件下，通以无菌空气，经一段时间培养后，将培养基质连同黑青霉菌体、孢子和次生带产物一起收集，制得产品。该生产方法简便，生产过程不需要高温、高压、易燃易爆原辅材料，无三废排放。

Description

黑青霉及其代谢产物的生产方法

技术领域：

本发明涉及一种微生物及其代谢产物的培养生产方法。

背景技术：

黑青霉(Penicillium nigricans Bainier)是一种青霉属丝状真菌，天然存在于土壤中，能抑制引起多种植物枯萎病等病害发生的尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)的生长繁殖，是西瓜枯萎病、黄瓜枯萎病、番茄枯萎病、辣椒枯萎病等多种植物枯萎病病原菌的天然拮抗微生物。

发明内容：

本发明目的在于提供一种黑青霉及其代谢产物的生产方法，通过工业化生产，大量获取黑青霉菌体、孢子及其代谢产物的人工培养方法。

本发明的目的是通过以下措施实现的：

黑青霉及其代谢产物的生产方法，其特征是：生产过程如下：

将重量份为：0-13％豆饼粉、0-6.8％菜子饼粉、0.5-6％小麦粉、0-4％硫酸铵、0-0.2％硫酸镁、0-0.3％氯化钙、0-0.4％磷酸氢二钾，上述原料投入发酵罐内，以自来水配制培养基，调整PH为4.5～5.5，保持发酵罐内温度为121℃，压力为0.12MPa，灭菌30～45分钟；

发酵罐降温，使罐内培养基质温度为32～35℃后，接种黑青霉，接种量占罐内培养基的重量比为1～8.5％；

接种后，保持发酵罐压力为0.03～0.1Mpa，连续向罐内通入无菌空气，通气量保持在0.4～0.5VVM；

液体培养时间约为3～5天，结束后，收集活菌及代谢产物，再进行干燥、浓缩、吸附、蒸发，添加吸附剂，在胶体磨中碾磨，制得产品。

发酵罐压力控制为前期0.04Mpa，中期0.1Mpa，后期0.03Mpa。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

黑青霉在生长过程中与病原菌争夺营养和空间，并分泌拮抗物质直接抑制尖孢镰刀菌的生长，从而控制植物病害的发生，是一种生态有益微生物。由于其能在土壤中存活多年，孢子的抗逆性很强且能在大田土壤中重复循环增殖，施用到植物和土壤后，能较长时间的保持对植物病原菌尖孢镰刀菌产生抑制作用，因此是有很有前途的微生物源农药。可用于防治农田葫芦科、茄科、禾本科等作物的枯萎病，有独特的效果，用量省、成本低、效果好、专业性强、污染少、不伤害天敌、环境友好，因此是农林牧及园艺上的优良生物农药，有利于人类可持续发展和生态平衡。

本发明生产方法，操作简便，生产过程不要高温、高压和易燃易爆原辅材料，也不产生三废，同时利用现代微生物工艺技术能很容易实现室内工业化、规模化生产，生产条件和生产过程容易人工调控，质量容易控制，产品能进行连续化、批量化生产，特别是作为生物农药使用的黑青霉制剂能大大降低生产和使用成本，提高产品单位效价，而且不同于一般的制剂类生物农药，该制剂由活菌、孢子和代谢产物组成，施用到土壤和植物上后，活菌和孢子能继续生长繁殖，并抑制病原菌，具有很高的经济价值和良好的应用前景。

为了提高生产率，本发明还对各类步骤工艺选择了适宜的相应条件，利于黑青霉的生长。

生产方法简便，生产过程不需要高温、高压、易燃易爆原辅材料，无三废排放；产品为培养基和活菌体、活孢子及次生代谢产物组成，不是提取的纯制剂，不需要提取醇化设备，节省投资，同时产品使用到植物和土壤上后，活菌和活孢子能循环生长繁殖，持续控制土传病害。本发明中接种所使用的黑青霉可以从有关高等院校、科研院所或科技公司购买。

具体实施方式：

现举两个实施例，进一步说明。

液体培养法

1、将0-13％豆饼粉、0-6.8％菜子饼粉、0.5-6％小麦粉、0-4％硫酸铵、0-0.2％硫酸镁、0-0.3％氯化钙、0-0.4％磷酸氢二钾等上述原料投入发酵罐内，加入足量水份，使培养料含水量约为80-99％，调整PH为4.5-5.5，保持发酵罐内温度为121℃，压力为0.12MPa，灭菌30-45分钟。

2、发酵罐降温，使罐内培养基质温度为35℃后，接种黑青霉，接种量占罐内培养基的重量比为1-8％。

3、接种后，保持发酵罐压力为0.04MPa(前期)、0.1MPa(后期)、0.03MPa(后期)，连续向罐内通入无菌空气，通气量保持在0.4-0.5VVM。

4、液体培养时间约为3～5天，结束后，可进行干燥、浓缩、吸附、蒸发、胶体磨碾磨，添加占产品总重10％吸附剂(300-400目碳酸钙)和占产品总重10％载体(粘土)及不同助剂(1-2％洗衣粉)，在胶体磨中碾磨，制成产品。

Claims (5)

1.黑青霉及其代谢产物的生产方法，其特征是：生产过程如下：

将重量份为：0-13％豆饼粉、0-6.8％菜子饼粉、0.5-6％小麦粉、0-4％硫酸铵、0-0.2％硫酸镁、0-0.3％氯化钙、0-0.4％磷酸氢二钾，上述原料投入发酵罐内，以自来水配制培养基，调整PH为4.5～5.5，保持发酵罐内温度为121℃，压力为0.12MPa，灭菌30～45分钟；

发酵罐降温，使罐内培养基质温度为32～35℃后，接种黑青霉，接种量占罐内培养基的重量比为1～8％；

接种后，保持发酵罐压力为0.03～0.1Mpa，连续向罐内通入无菌空气，通气量保持在0.4～0.5VVM；培养过程中不断进行搅拌，搅拌速度：初期30-50转/分，中期80-100转/分，后期30-40转/分。

液体培养时间约为3～5天，结束后，收集活菌及代谢产物，再进行干燥、浓缩、吸附、蒸发，添加吸附剂，在胶体磨中碾磨，制得产品。

2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征是：接种后，控制发酵罐压力控制为：前期0.04Mpa，中期0.1Mpa，后期0.03Mpa。

3.根据权利要求1所述的生产方法，其特征是：所述吸附剂为碳酸钙、粘土或两者的混合，吸附剂的添加量为产品总重的10-60％。

4.根据权利要求1所述的生产方法，其特征是：制得产品中还可以添加占产品总重1-2％的助剂。

5.根据权利要求4所述的生产方法，其特征是：所述助剂为洗衣粉。