CN101735953A - 黑青霉及其代谢产物的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种黑青霉及其代谢产物的生产方法,通过工业化生产,大量获取黑青霉菌体、孢子及其代谢产物的人工培养方法。将培养基置入培养容器内,灭菌后,接种一定量的黑青霉,在一定的温度、湿度、压力、pH条件下,通以无菌空气,经一段时间培养后,将培养基质连同黑青霉菌体、孢子和次生带产物一起收集,制得产品。该生产方法简便,生产过程不需要高温、高压、易燃易爆原辅材料,无三废排放。
Description
技术领域:
本发明涉及一种微生物及其代谢产物的培养生产方法。
背景技术:
黑青霉(Penicillium nigricans Bainier)是一种青霉属丝状真菌,天然存在于土壤中,能抑制引起多种植物枯萎病等病害发生的尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)的生长繁殖,是西瓜枯萎病、黄瓜枯萎病、番茄枯萎病、辣椒枯萎病等多种植物枯萎病病原菌的天然拮抗微生物。
发明内容:
本发明目的在于提供一种黑青霉及其代谢产物的生产方法,通过工业化生产,大量获取黑青霉菌体、孢子及其代谢产物的人工培养方法。
本发明的目的是通过以下措施实现的:
黑青霉及其代谢产物的生产方法,其特征是:生产过程如下:
将重量份为:0-13%豆饼粉、0-6.8%菜子饼粉、0.5-6%小麦粉、0-4%硫酸铵、0-0.2%硫酸镁、0-0.3%氯化钙、0-0.4%磷酸氢二钾,上述原料投入发酵罐内,以自来水配制培养基,调整PH为4.5~5.5,保持发酵罐内温度为121℃,压力为0.12MPa,灭菌30~45分钟;
发酵罐降温,使罐内培养基质温度为32~35℃后,接种黑青霉,接种量占罐内培养基的重量比为1~8.5%;
接种后,保持发酵罐压力为0.03~0.1Mpa,连续向罐内通入无菌空气,通气量保持在0.4~0.5VVM;
液体培养时间约为3~5天,结束后,收集活菌及代谢产物,再进行干燥、浓缩、吸附、蒸发,添加吸附剂,在胶体磨中碾磨,制得产品。
发酵罐压力控制为前期0.04Mpa,中期0.1Mpa,后期0.03Mpa。
本发明与现有技术相比具有以下优点:
黑青霉在生长过程中与病原菌争夺营养和空间,并分泌拮抗物质直接抑制尖孢镰刀菌的生长,从而控制植物病害的发生,是一种生态有益微生物。由于其能在土壤中存活多年,孢子的抗逆性很强且能在大田土壤中重复循环增殖,施用到植物和土壤后,能较长时间的保持对植物病原菌尖孢镰刀菌产生抑制作用,因此是有很有前途的微生物源农药。可用于防治农田葫芦科、茄科、禾本科等作物的枯萎病,有独特的效果,用量省、成本低、效果好、专业性强、污染少、不伤害天敌、环境友好,因此是农林牧及园艺上的优良生物农药,有利于人类可持续发展和生态平衡。
本发明生产方法,操作简便,生产过程不要高温、高压和易燃易爆原辅材料,也不产生三废,同时利用现代微生物工艺技术能很容易实现室内工业化、规模化生产,生产条件和生产过程容易人工调控,质量容易控制,产品能进行连续化、批量化生产,特别是作为生物农药使用的黑青霉制剂能大大降低生产和使用成本,提高产品单位效价,而且不同于一般的制剂类生物农药,该制剂由活菌、孢子和代谢产物组成,施用到土壤和植物上后,活菌和孢子能继续生长繁殖,并抑制病原菌,具有很高的经济价值和良好的应用前景。
为了提高生产率,本发明还对各类步骤工艺选择了适宜的相应条件,利于黑青霉的生长。
生产方法简便,生产过程不需要高温、高压、易燃易爆原辅材料,无三废排放;产品为培养基和活菌体、活孢子及次生代谢产物组成,不是提取的纯制剂,不需要提取醇化设备,节省投资,同时产品使用到植物和土壤上后,活菌和活孢子能循环生长繁殖,持续控制土传病害。本发明中接种所使用的黑青霉可以从有关高等院校、科研院所或科技公司购买。
具体实施方式:
现举两个实施例,进一步说明。
液体培养法
1、将0-13%豆饼粉、0-6.8%菜子饼粉、0.5-6%小麦粉、0-4%硫酸铵、0-0.2%硫酸镁、0-0.3%氯化钙、0-0.4%磷酸氢二钾等上述原料投入发酵罐内,加入足量水份,使培养料含水量约为80-99%,调整PH为4.5-5.5,保持发酵罐内温度为121℃,压力为0.12MPa,灭菌30-45分钟。
2、发酵罐降温,使罐内培养基质温度为35℃后,接种黑青霉,接种量占罐内培养基的重量比为1-8%。
3、接种后,保持发酵罐压力为0.04MPa(前期)、0.1MPa(后期)、0.03MPa(后期),连续向罐内通入无菌空气,通气量保持在0.4-0.5VVM。
4、液体培养时间约为3~5天,结束后,可进行干燥、浓缩、吸附、蒸发、胶体磨碾磨,添加占产品总重10%吸附剂(300-400目碳酸钙)和占产品总重10%载体(粘土)及不同助剂(1-2%洗衣粉),在胶体磨中碾磨,制成产品。
Claims (5)
1.黑青霉及其代谢产物的生产方法,其特征是:生产过程如下:
将重量份为:0-13%豆饼粉、0-6.8%菜子饼粉、0.5-6%小麦粉、0-4%硫酸铵、0-0.2%硫酸镁、0-0.3%氯化钙、0-0.4%磷酸氢二钾,上述原料投入发酵罐内,以自来水配制培养基,调整PH为4.5~5.5,保持发酵罐内温度为121℃,压力为0.12MPa,灭菌30~45分钟;
发酵罐降温,使罐内培养基质温度为32~35℃后,接种黑青霉,接种量占罐内培养基的重量比为1~8%;
接种后,保持发酵罐压力为0.03~0.1Mpa,连续向罐内通入无菌空气,通气量保持在0.4~0.5VVM;培养过程中不断进行搅拌,搅拌速度:初期30-50转/分,中期80-100转/分,后期30-40转/分。
液体培养时间约为3~5天,结束后,收集活菌及代谢产物,再进行干燥、浓缩、吸附、蒸发,添加吸附剂,在胶体磨中碾磨,制得产品。
2.根据权利要求1所述的生产方法,其特征是:接种后,控制发酵罐压力控制为:前期0.04Mpa,中期0.1Mpa,后期0.03Mpa。
3.根据权利要求1所述的生产方法,其特征是:所述吸附剂为碳酸钙、粘土或两者的混合,吸附剂的添加量为产品总重的10-60%。
4.根据权利要求1所述的生产方法,其特征是:制得产品中还可以添加占产品总重1-2%的助剂。
5.根据权利要求4所述的生产方法,其特征是:所述助剂为洗衣粉。
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