CN110373363A - 一种胶冻样芽孢杆菌的浓缩菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种胶冻样芽孢杆菌的浓缩菌剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种胶冻样芽孢杆菌的浓缩菌剂及其制备方法和应用，涉及菌肥制备技术领域。本发明所述浓缩菌剂中胶冻样芽孢杆菌的有效活菌数≥10亿/mL；所述胶冻样芽孢杆菌胶为胶冻样芽孢杆菌三炬01号菌株，所述胶冻样芽孢杆菌三炬01号菌株的保藏编号为CGMCC No.3995。本发明所述浓缩菌剂中胶冻样芽孢杆菌的含量远远高于《农用微生物菌剂》(GB20287‑2006)技术指标要求，针对作物的使用效果更加显著；工艺流程简单，可操作性强，且有效活菌数较高，营养丰富，从而促进作物的光合作用效率，增强抗逆性，利于作物的生长，最终提高作物的品质和产量。

Description

一种胶冻样芽孢杆菌的浓缩菌剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于菌肥制备技术领域，具体涉及一种胶冻样芽孢杆菌的浓缩菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
微生物菌肥是根据土壤微生态学原理、植物营养学原理、以及现代“有机农业”的基本概念而研制出来的，含有多达十余种高效活性有益微生物菌，适用于各种作物使用，可活化养分，提高养分利用率，具有广普性，打破了普通生物肥的“专一性”“局限性”“专用肥”的固有弱点，微生物肥料是以活性(可繁殖)微生物的生命活动导致作物得到所需养分(肥料)的一种新型肥料生物制品，是农业生产中肥料的一种(也称第三代肥料)。
但是目前市面上出现的微生物菌肥中，几乎都是多种有益菌的复合菌肥，且有效活菌数量较低，并不能有效的发挥微生物菌肥的效果。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种胶冻样芽孢杆菌的浓缩菌剂及其制备方法和应用，浓缩菌剂中有效活菌数高，将其制备成微生物肥料后，可调节植物的内源激素，提高光合作用效率，增强植物的抗逆能力；同时迅速为作物补充养分、有机质、氨基酸等，促进作物生长、改善作物品质。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种胶冻样芽孢杆菌的浓缩菌剂，所述浓缩菌剂中胶冻样芽孢杆菌的有效活菌数≥10亿/mL；所述胶冻样芽孢杆菌胶为胶冻样芽孢杆菌三炬01号菌株，所述胶冻样芽孢杆菌三炬01号菌株的保藏编号为CGMCC No.3995。
本发明还提供了所述浓缩菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将所述胶冻样芽孢杆菌接种于活化培养基中进行活化，得活化菌；所述活化培养基中包括以下浓度的原料：蔗糖5～10g/L、磷酸二氢钾0.3～0.8g/L、硫酸镁0.1～0.4g/L、氯化钠0.15～0.35g/L、碳酸钙0.5～1.2g/L和琼脂20g/L；
(2)将所述活化菌接种到种子培养基中进行扩大培养，得种子发酵液；所述种子培养基中包括以下浓度的原料：蔗糖5～10g/L、磷酸氢二钾0.3～0.8g/L、硫酸镁0.1～0.4g/L、氯化钠0.15～0.35g/L和碳酸钙0.5～1.2g/L；
(3)将所述种子发酵液接种于发酵培养基中进行发酵，得发酵液；所述发酵培养基中包括以下浓度的原料：淀粉5.0～7.5g/L、酵母粉1.0～1.8g/L、豆粕粉5.0～7.0g/L、硫酸镁0.8～1.6g/L、磷酸氢二钾1.6～2.4g/L、碳酸钙5.0～10.0g/L和氯化钠0.1～0.4g/L；
(4)将所述发酵液进行膜浓缩，所述膜浓缩的操作压力为3～5Bar，所述膜浓缩的流道直径为4mm，所述膜浓缩时每只膜芯的过滤面积为0.286m2。
优选的，步骤(1)所述活化的温度为28～32℃，所述活化的时间为48～72h。
优选的，步骤(2)所述扩大培养包括一级扩大培养和二级扩大培养。
优选的，所述一级扩大培养为在150～200r/min的摇床上培养24～36h，所述摇床的温度为30～35℃。
优选的，所述二级扩大培养为在125～200r/min的发酵罐中培养24～48h，所述发酵罐的温度为30～35℃。
优选的，步骤(3)所述发酵时的溶解氧体积百分比为18～22％，所述发酵的温度为28～32℃，所述发酵的pH值为7.2，所述发酵的时间为36～48h。
优选的，步骤(4)所述膜浓缩用膜为陶瓷膜19/4，1200MM。
本发明还提供了一种微生物肥料，包所述浓缩菌剂或利用所述制备方法制备得到的浓缩菌剂、无机养分和有机养分；所述无机养分以N、P2O5和K2O计，所述无机养分的重量≥10g/L；所述有机养分包括氨基酸、糖蜜粉或腐植酸，所述有机养分的重量≥5g/L。
优选的，所述肥料中还包括保护剂，所述保护剂的重量为所述微生物肥料重量的0.1～5％；所述保护剂包括甘油、甘露醇、山梨醇、吐温20、黄原胶、海藻糖和维生素C中的一种或多种的混合。
本发明提供了一种胶冻样芽孢杆菌的浓缩菌剂，所述浓缩菌剂中胶冻样芽孢杆菌的有效活菌数≥10亿/mL；所述胶冻样芽孢杆菌胶为胶冻样芽孢杆菌三炬01号菌株，所述胶冻样芽孢杆菌三炬01号菌株的保藏编号为CGMCC No.3995。本发明所述浓缩菌剂，可为作物提供可吸收利用的营养元素，同时产生赤霉素、细胞激动素、微生物酶、细菌多糖等生理活性物质，促进作物营养吸收和生长代谢。
本发明还提供了所述浓缩菌剂的制备方法和利用所述浓缩菌剂制备得到的微生物肥料，将所述浓缩菌剂作为溶剂添加无机养分和有机养分，兼具浓缩菌剂的优点，同时还能迅速为作物补充养分、有机质、氨基酸等，两者结合可更好促进了作物对养分的吸收，增进肥效，促进作物生长、改善作物品质。
生物保藏信息
胶冻样芽孢杆菌(Bacillus Mucilaginosus)，菌株编号为三炬01号菌株，保藏时间为2010年7月2日，保藏地点为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，具体地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.3995。
附图说明
图1为本发明制备微生物肥料的技术流程图。
具体实施方式
本发明提供了一种胶冻样芽孢杆菌的浓缩菌剂，所述浓缩菌剂中胶冻样芽孢杆菌的有效活菌数≥10亿/mL；所述胶冻样芽孢杆菌胶为胶冻样芽孢杆菌三炬01号菌株，所述胶冻样芽孢杆菌三炬01号菌株的保藏编号为CGMCC No.3995。
本发明还提供了所述浓缩菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将所述胶冻样芽孢杆菌接种于活化培养基中进行活化，得活化菌；所述活化培养基中包括以下浓度的原料：蔗糖5～10g/L、磷酸二氢钾0.3～0.8g/L、硫酸镁0.1～0.4g/L、氯化钠0.15～0.35g/L、碳酸钙0.5～1.2g/L和琼脂20g/L；
(2)将所述活化菌接种到种子培养基中进行扩大培养，得种子发酵液；所述种子培养基中包括以下浓度的原料：蔗糖5～10g/L、磷酸氢二钾0.3～0.8g/L、硫酸镁0.1～0.4g/L、氯化钠0.15～0.35g/L和碳酸钙0.5～1.2g/L；
(3)将所述种子发酵液接种于发酵培养基中进行发酵，得发酵液；所述发酵培养基中包括以下浓度的原料：淀粉5.0～7.5g/L、酵母粉1.0～1.8g/L、豆粕粉5.0～7.0g/L、硫酸镁0.8～1.6g/L、磷酸氢二钾1.6～2.4g/L、碳酸钙5.0～10.0g/L和氯化钠0.1～0.4g/L；
(4)将所述发酵液进行膜浓缩，所述膜浓缩的操作压力为3～5Bar，所述膜浓缩的流道直径为4mm，所述膜浓缩时每只膜芯的过滤面积为0.286m2。
本发明在制备所述浓缩菌剂时，将所述胶冻样芽孢杆菌接种于活化培养基中进行活化，得活化菌；所述活化培养基中包括以下浓度的原料：蔗糖5～10g/L、磷酸二氢钾0.3～0.8g/L、硫酸镁0.1～0.4g/L、氯化钠0.15～0.35g/L、碳酸钙0.5～1.2g/L和琼脂20g/L。本发明所述活化培养基中优选包括以下浓度的原料：蔗糖6～10g/L、磷酸二氢钾0.4～0.7g/L、硫酸镁0.12～0.3g/L、氯化钠0.16～0.3g/L、碳酸钙0.6～1.1g/L和琼脂粉20g/L；更优选包括：蔗糖8～10g/L、磷酸二氢钾0.45～0.6g/L、硫酸镁0.18～0.22g/L、氯化钠0.18～0.25g/L、碳酸钙0.8～1g/L和琼脂粉20g/L；最优选包括：蔗糖10g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、硫酸镁0.2g/L、氯化钠0.2g/L、碳酸钙1g/L和琼脂粉20g/L。本发明对所述活化培养基的原料来源及制备方法并没有特殊限定，优选的将市售试剂混合后进行灭菌，所述灭菌优选为在121℃下灭菌30min。本发明在所述活化培养基中进行菌种的活化，所述活化的温度优选为28～32℃，所述活化的时间优选为48～72h。本发明所述活化到有效活菌数达2亿/mL时停止活化。
得活化菌后，本发明将所述活化菌接种到种子培养基中进行扩大培养，得种子发酵液；所述种子培养基中包括以下浓度的原料：蔗糖5～10g/L、磷酸氢二钾0.3～0.8g/L、硫酸镁0.1～0.4g/L、氯化钠0.15～0.35g/L和碳酸钙0.5～1.2g/L。本发明所述种子培养基中优选包括以下浓度的原料：蔗糖8～10g/L、磷酸氢二钾0.4～0.6g/L、硫酸镁0.15～0.3g/L、氯化钠0.18～0.25g/L和碳酸钙0.8～1.1g/L，更优选包括：蔗糖10g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.2g/L，氯化钠0.2g/L，碳酸钙1g/L。本发明对所述种子培养基的各原料的来源并没有特殊限定，利用本领域的常规试剂即可。本发明所述接种的接种量优选为8～12％，更优选为9～11％，最优选为10％。本发明所述扩大培养优选包括一级扩大和二级扩大，所述一级扩大优选在摇床上进行，所述二级扩大优选在发酵罐中进行。本发明所述一级扩大时优选伴随震荡，所述震荡的转速优选为150～200r/min，所述一级扩大的时间优选为24～36h，所述摇床的温度优选为30～35℃。本发明将一级扩大得到的一级种子发酵液接种于种子发酵罐中进行二级扩大，所述接种的接种量优选为8～12％，更优选为9～11％，最优选为10％。本发明所述二级扩大的温度优选为30～35℃，所述二级扩大的时间优选为24～48h。本发明所述二级扩大时优选伴随震荡，所述震荡的转速优选为125～200r/min。
得种子发酵液后，本发明将所述种子发酵液接种于发酵培养基中进行发酵，得发酵液；所述发酵培养基中包括以下浓度的原料：淀粉5.0～7.5g/L、酵母粉1.0～1.8g/L、豆粕粉5.0～7.0g/L、硫酸镁0.8～1.6g/L、磷酸氢二钾1.6～2.4g/L、碳酸钙5.0～10.0g/L和氯化钠0.1～0.4g/L。本发明所述接种优选按照1:10的体积比进行接种。本发明所述所述发酵培养基中优选包括以下浓度的成分：淀粉5.1～6.5g/L、酵母粉1.2～1.7g/L、豆粕粉5.2～6.8g/L、硫酸镁0.9～1.55g/L、磷酸氢二钾1.7～2.3g/L、碳酸钙6～9.5g/L和氯化钠0.12～0.35g/L；更优选包括：淀粉5.3～6g/L、酵母粉1.4～1.6g/L、豆粕粉5.5～6g/L、硫酸镁1.2～1.5g/L、磷酸氢二钾1.8～2.1g/L、碳酸钙8～9g/L和氯化钠0.16～0.28g/L；最优选包括：淀粉5.5g/L，酵母粉1.58g/L，豆粕5.76g/L，硫酸镁1.4g/L，磷酸氢二钾2.0g/L，碳酸钙8.5g/L和氯化钠0.2g/L。本发明对所述发酵培养基的制备方法并没有特殊限定。本发明对所述发酵培养基的各原料来源并没有特殊限定，利用本领域的常规试剂即可。本发明所述发酵优选为有氧发酵，设置发酵罐调节溶解氧控制在18～22％(V/V)，更优选为20％。本发明所述发酵的温度优选为28～32℃，发酵罐内压力优选为0.05～0.06MPa，发酵时间优选为36～48h。本发明在所述发酵过程中，优选利用质量浓度为10％的氢氧化钠和10％的盐酸控制pH值为7.2。
得发酵液后，本发明将所述发酵液进行膜浓缩，所述膜浓缩的操作压力为3～5Bar，所述膜浓缩的流道直径为4mm，所述膜浓缩时每只膜芯的过滤面积为0.286m2。本发明所述膜浓缩用膜优选为陶瓷膜，膜芯采用中德合资的高强度陶瓷膜芯，具有烧结活性的多空陶瓷，此种陶瓷膜通量大，过滤阻力小，节能，耐酸碱清晰，具有很好的过滤性能，而且长期使用不易污染膜材料，易清洗。本发明将所述发酵液经过膜浓缩后即可得到所述浓缩菌剂。
本发明还提供了一种微生物肥料，包括所述浓缩菌剂或利用所述制备方法制备得到的浓缩菌剂、无机养分和有机养分；所述无机养分以N、P2O5和K2O计，所述无机养分的重量≥10g/L；所述有机养分包括氨基酸、糖蜜粉或腐植酸，所述有机养分的重量≥5g/L。
本发明所述微生物肥料中，所述无机养分优选来源于磷酸二氢钾、硝酸钾和磷酸一铵中的一种或多种的混合。本发明对所述无机养分的种类及配比并没有特殊限定，优选使N、P2O5和K2O的总量≥10g/L即可。本发明所述肥料中优选还包括保护剂，所述保护剂的重量为所述微生物肥料重量的0.1～5％。本发明所述保护剂优选包括甘油、甘露醇、山梨醇、吐温20、黄原胶、海藻糖和维生素C中的一种或多种的混合。本发明对所述保护剂的来源并没有特殊限定，利用本领域的常规试剂即可。
下面结合实施例对本发明提供的浓缩菌剂及其制备方法和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
按照图1所示流程制备微生物肥料，其中：
活化培养基配方为：蔗糖10g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.2g/L，氯化钠0.2g/L，碳酸钙1g/L，琼脂粉20g/L，pH 7.5，121℃高压灭菌30min；
扩大培养基配方为：蔗糖10g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.2g/L，氯化钠0.2g/L，碳酸钙1g/L，pH 7.0～7.5，121℃高压灭菌30min；一级种子培养的条件是30～35℃，150～200r/min条件下培养24～36h；二级种子培养的条件可于种子发酵罐中，30～35℃，125～200r/min条件下培养24～48h；
发酵培养基配方为：淀粉5.5g/L，酵母粉1.58g/L，豆粕5.76g/L，硫酸镁1.4g/L，磷酸氢二钾2.0g/L，碳酸钙8.5g/L和氯化钠0.2g/L；发酵条件为：转速200～250r/min，通过转速和通气量的调节使溶解氧控制20％(V/V)，罐温控制在30℃，罐压保持在0.05～0.06MPa，通过10％和10％的盐酸控制pH值为7.2，发酵时间36～48h；
将所得的胶冻样芽孢杆菌发酵液进行膜浓缩工艺，操作压力在3～5Bar范围内，流道直径为4mm，单只膜芯的过滤面积为0.286m2，即产生高度浓缩的胶冻样芽孢杆菌，有效活菌数大于10亿/mL；
以上述浓缩菌剂为溶剂，向内添加磷酸二氢钾1％(m/m，N+P2O5+K2O≥10g/L)，氨基酸0.5％(有机质≥5g/L)，糖蜜粉1.2％。
实施例2
除添加的无机养分为磷酸二氢钾1.2％，有机养分为糖蜜粉1.2％外，其他同实施例1，且无机养分中N+P2O5+K2O≥10g/L，有机质≥5g/L，有效活菌数≥10.0亿/mL。
实施例3
除添加的有机养分为氨基酸2％和糖蜜粉1.2％外，其他同实施例1。且无机养分中N+P2O5+K2O≥10g/L，有机质≥5g/L，有效活菌数≥10.0亿/mL。
对比例
制备一种常见的浓缩型复合微生物肥料，具体步骤如下：
1、制备混合菌剂，所述混合菌剂各组分所占质量分数为：芽孢菌30～50％，酵母菌5～20％，乳酸菌5～20％，解磷细菌5～15％，解钾细菌5～15％，光合菌5～15％。将所述混合菌剂各组分按照定量充分搅拌均匀得到所述混合菌剂。
2、制备浓缩型复合微生物肥料，所述浓缩型复合微生物肥料各组分所占质量分数为：碳源25～45％，氮源15～40％，磷、钾5～25％，黄腐酸3～20％，混合菌剂、缓释剂、微量元素5～25％。将所述浓缩型复合微生物肥料各组分按照设定量充分搅拌均匀得到所述浓缩型复合微生物肥料。
对上述浓缩型复合微生物肥料进行检测，其pH在3～6之间，氮磷钾含量＞30％，微量元素包括锰、铁、锌、硼。
对实施例1～3及对比例的微生物肥料进行对比，性能测试结果如表1所示：
表1实施例1～3和对比例制备的肥料的性能测试结果
由表1可知，本发明提供的微生物菌剂中有效活菌数远远高于对比例0.5亿/mL，NPK含量和有机质含量相差不多，说明本发明提供的微生物菌剂有效活菌数较高，可调节植物的内源激素，促进作物光合作用，从而提高作物产量。
将实施例1～3制备得到的微生物肥料应用在柑橘上，并设置对照例：
应用例：于2018年4月18日穴施，施用量为每株2kg，即每666.7m2用量为110kg；
对照例1：无菌基质+常规施肥
对照例2：常规施肥
柑橘常规施肥方法：每666.7m2施复合肥〔N+P5O2+K2O≥45％(18-10-17)〕100.0kg、钙镁磷肥50.0kg、硫酸钾50.0kg、硫酸镁50.0kg。施肥时间与施肥量为：2018年1月21日施基肥，施用干猪粪500kg/666.7m2、钙镁磷肥50.0kg/666.7m2、硫酸镁50.0kg/666.7m2；4月15日施促梢保花肥，6月3日施保果肥，施用量均为每666.7m2施复合肥40.0kg、硫酸钾25.0kg；9月15日施壮果肥，每666.7m2施复合肥20.0kg。
柑橘于2018年12月25日采收实测产量，检测柑橘品质:
1不同处理对柑橘产量影响
试验实收产量(见表2)可算出，处理A(微生物菌剂+常规施肥)产量最高，平均666.7m2产量为1540.2kg，比处理B(无菌基质+常规施肥)每666.7m2产量1411.5kg增加128.7kg，增产9.12％；比处理C(常规施肥)每666.7m2产量1397.2kg增加143.0kg，增产10.23％。
表2不同处理对柑橘产量的影响
注：小区面积为60.6平方米。
对试验处理小区产量方差分析，F＝13.892＞F0.01＝8.02，说明处理间产量差异达极显著水平。
表3方差分析表
表4多重比较
注：LSD0.05＝6.796kg/小区，LSD0.01＝10.612kg/小区，不同小写字母表示经LSD检验为差异显著，不同大写字母表示经LSD检验为差异极显著。
多重比较结果表明(见表4)：处理A与处理B、C产量差异达极显著水平，处理B与处理C产量差异不显著。施用微生物菌剂可显著提高柑橘产量，分析原因主要是微生物菌剂能够增强柑橘的光合作用，促进柑橘叶片增厚、浓绿；菌剂中的芽孢杆菌可活化土壤的生物肥力，改善根系生长环境，促进柑橘对肥料吸收利用及抗病能力的提高。
2不同处理对柑橘品质的影响
从柑橘品质分析来看(表5)，处理A比处理B、C、柑橘品质均有所提高，处理A可溶性总糖含量、可溶性固形物和维生素C含量均有提高的趋势，可滴定酸含量有下降的趋势。处理A比处理B可溶性总糖含量、可溶性固形物和维生素C含量分别提高0.6％、0.4％和1.3mg/100g；可滴定酸含量下降0.11g/100g。分析原因可能是供试肥料中的有益微生物等的作用，通过叶片吸收有益微生物能较好地促进柑橘叶片的生长，有利于果实可溶性总糖含量、可溶性固形物和维生素C含量的积累，从而提高果实品质。
表5不同处理对柑橘品质的影响
3不同处理间柑橘的产值及投产比
柑橘按6元/kg、微生物菌剂按3元/kg计算投入产出比。处理A(微生物菌剂+常规施肥)产量比处理C(常规施肥)产量每666.7m2增加143.0kg，增加产值858.0元，扣除每666.7m2微生物菌剂成本330元及施用微生物菌剂工钱120元(每666.7m2)，每666.7m2增收408.0元(见表6)。
表6不同处理对柑橘产值影响
处理A(微生物菌剂+常规施肥)比处理C(常规施肥)每666.7m2多投入微生物菌剂330元及施用微生物菌剂工钱120元，增加产值858.0元，投入产出比1∶1.91。
田间调查表明，柑橘施胶冻样类芽孢杆菌高度浓缩菌剂后柑橘树体生长健壮，叶色较绿、叶片较厚有光泽，柑橘根系生长粗壮，促进幼果平衡生长，树体长势旺盛。
柑橘施冻样类芽孢杆菌高度浓缩菌剂增产效果极显著，其产量比施无菌基质+常规施肥增产9.12％，比常规施肥增产10.23％。
柑橘施胶冻样类芽孢杆菌高度浓缩菌剂具有较好的经济效益，比常规施肥每666.7m2增收408.0元，投入产出比为1∶1.91。
柑橘施胶冻样类芽孢杆菌高度浓缩菌剂增产效果极显著，分析原因主要是微生物菌剂能够增强柑橘的光合作用，促进柑橘叶片增厚、浓绿；菌剂中的芽孢杆菌等可活化土壤的生物肥力，改善根系生长环境，促进柑橘对肥料吸收利用及抗病能力的提高。
本发明提供了一种胶冻样芽孢杆菌的浓缩菌剂及其制备方法和应用，将胶冻样芽孢杆菌进行膜浓缩，远远高于《农用微生物菌剂》(GB 20287-2006)技术指标要求，针对作物的使用效果更加显著；工艺流程简单，可操作性强，且有效活菌数较高，营养丰富，从而促进作物的光合作用效率，增强抗逆性，利于作物的生长，最终提高作物的品质和产量。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种胶冻样芽孢杆菌的浓缩菌剂，其特征在于，所述浓缩菌剂中胶冻样芽孢杆菌的有效活菌数≥10亿/mL；所述胶冻样芽孢杆菌胶为胶冻样芽孢杆菌三炬01号菌株，所述胶冻样芽孢杆菌三炬01号菌株的保藏编号为CGMCC No.3995。
2.权利要求1所述浓缩菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将所述胶冻样芽孢杆菌接种于活化培养基中进行活化，得活化菌；所述活化培养基中包括以下浓度的原料：蔗糖5～10g/L、磷酸二氢钾0.3～0.8g/L、硫酸镁0.1～0.4g/L、氯化钠0.15～0.35g/L、碳酸钙0.5～1.2g/L和琼脂20g/L；
(2)将所述活化菌接种到种子培养基中进行扩大培养，得种子发酵液；所述种子培养基中包括以下浓度的原料：蔗糖5～10g/L、磷酸氢二钾0.3～0.8g/L、硫酸镁0.1～0.4g/L、氯化钠0.15～0.35g/L和碳酸钙0.5～1.2g/L；
(3)将所述种子发酵液接种于发酵培养基中进行发酵，得发酵液；所述发酵培养基中包括以下浓度的原料：淀粉5.0～7.5g/L、酵母粉1.0～1.8g/L、豆粕粉5.0～7.0g/L、硫酸镁0.8～1.6g/L、磷酸氢二钾1.6～2.4g/L、碳酸钙5.0～10.0g/L和氯化钠0.1～0.4g/L；
(4)将所述发酵液进行膜浓缩，所述膜浓缩的操作压力为3～5Bar，所述膜浓缩的流道直径为4mm，所述膜浓缩时每只膜芯的过滤面积为0.286m2。
3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，步骤(1)所述活化的温度为28～32℃，所述活化的时间为48～72h。
4.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，步骤(2)所述扩大培养包括一级扩大培养和二级扩大培养。
5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述一级扩大培养为在150～200r/min的摇床上培养24～36h，所述摇床的温度为30～35℃。
6.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述二级扩大培养为在125～200r/min的发酵罐中培养24～48h，所述发酵罐的温度为30～35℃。
7.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，步骤(3)所述发酵时的溶解氧体积百分比为18～22％，所述发酵的温度为28～32℃，所述发酵的pH值为7.2，所述发酵的时间为36～48h。
8.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，步骤(4)所述膜浓缩用膜为陶瓷膜19/4，1200MM。
9.一种微生物肥料，其特征在于，包括权利要求1所述浓缩菌剂或利用权利要求2～8任一项所述制备方法制备得到的浓缩菌剂、无机养分和有机养分；所述无机养分以N、P2O5和K2O计，所述无机养分的重量≥10g/L；所述有机养分包括氨基酸、糖蜜粉或腐植酸，所述有机养分的重量≥5g/L。
10.根据权利要求9所述微生物肥料，其特征在于，所述肥料中还包括保护剂，所述保护剂的重量为所述微生物肥料重量的0.1～5％；所述保护剂包括甘油、甘露醇、山梨醇、吐温20、黄原胶、海藻糖和维生素C中的一种或多种的混合。
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