CN101708175A

CN101708175A - 以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN101708175A
Application number: CN200910248730A
Authority: CN
Inventors: 胡风庆; 张月
Original assignee: Liaoning University
Current assignee: Liaoning University
Priority date: 2009-12-24
Filing date: 2009-12-24
Publication date: 2010-05-19

Abstract

本发明涉及一种以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂及其制备方法。公开了以PHBHHx为材料，制备缓释微球的方法，得到了能够缓慢释放药物的微球。方法主要将药物溶解和/或混悬和/或乳化分散在PHBHHx的有机溶剂溶液中，再乳化在水相中，形成乳状液，挥发除去有机溶剂，形成骨架型微小球状实体。本发明制备的缓释微球药物制剂具有在体内逐渐释放，延长药效，并使药效达到难以施药的部位的优点，应用到制药工业中，可以消除间歇给药和药量不均产生的峰、谷现象；可以长期稳定控制靶向部位药物浓度或血药浓度，提高药物的生物利用度，较小剂量即可达到疗效，降低副作用，提高治愈效果；可避免药物的迅速代谢，延长其在体内的半衰期。

Description

以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及以新型生物可降解材料PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂及其制备方法，属于微生物和制药工程领域。

背景技术

生物医用材料(Biomedical materials)也被称为生物材料(Biomaterials)，是一种能对机体的细胞、组织和器官进行诊断、治疗、替代、修复、诱导、再生或增进其功能的特殊的功能材料。当今，生物医用材料已从20世纪的第一代和第二代生物医用材料发展到基于细胞和分子水平的第三代生物医用材料。第三代生物医用材料在生物体内能被降解，最终为机体所吸收，同时材料本身又具有生物活性，能够参与机体的生理活动，在分子水平上激活基因，刺激相关细胞产生相应，从而诱导组织和器官的形成，是细胞和基因的活性化材料(Cell and Gene-activatingmaterials)。目前，第三代生物医用材料已成为国际上材料前沿领域一个十分活跃的研究方向。

随着生物医用材料及药物剂型的深入研究，缓释微球药物制剂逐步得到了开发。微囊和微球是20世纪70年代末发展起来的新型给药系统，国内外已经进行了大量的研究工作。目前产品有β-胡萝卜素微囊、红霉素微囊、双氯芬酸钠微囊、注射用丙氨瑞林微球、植入黄体酮微球、阿昔诺韦微球、布洛芬微球等。制备微囊与微球的过程称微型包囊术(microencapsulation)，简称微囊化。利用天然的或合成的高分子材料(统称为囊材，coating material)作为囊膜(membrane wall)，将固态药物或液态药物(统称为囊心物)包裹而成药库型微型胶囊，简称微囊(microcapsules)。缓释微球药物具有在体内逐渐释放，延长药效，并使药效达到难以施药的部位的优点。因此科研人员也在不断研究开发可作为缓释制剂的材料，PHBHHx作为缓释制剂材料在国内外还未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种以PHBHHx为包材，利用微囊技术，制备的能够缓慢释放药物的缓释微球药物制剂。

本发明的另一目的是提供以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂，是利用PHBHHx为载体对包埋物水溶性、脂溶性或蛋白质药物进行微胶囊化，获得被包埋物的长效缓释制剂。

上述以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂的制备方法如下：

(1)当包埋物是水溶性药物时，制备方法如下：

1)取水溶性药物，磷脂和胆固醇，溶解于四氢呋喃中，常温下，旋转蒸干，得混合药物；

2)将PHBHHx溶解于有机溶剂中，配制成重量体积百分浓度为2～4％的PHBHHx有机溶剂溶液；

3)将旋转蒸干的混合药物均匀分散于PHBHHx有机溶剂溶液中，作为油相O；

4)配制重量体积百分浓度为0.5～1％的乳化剂水溶液，做为水相W；

5)将油相O逐滴加入到500～1000rpm磁力搅拌着的水相W中，形成O/W乳液，磁力搅拌16～20h；

6)12000rpm离心10min，水洗，干燥。得到以PHBHHx为载体的水溶性药物缓释微球药物制剂。

所述的有机溶剂是三氯甲烷或二氯甲烷，优选二氯甲烷；所述的乳化剂是十二烷基苯磺酸钠(SDS)或聚乙烯醇(PVA)，优选SDS。

(2)当包埋物是脂溶性药物时，制备方法如下：

1)将PHBHHx溶解于有机溶剂中，配制成重量体积百分浓度为2～4％的PHBHHx有机溶剂溶液，加入脂溶性药物，搅拌均匀做油相O；

2)配制重量体积百分浓度为0.5～1％的乳化剂水溶液，做为水相W；

3)将油相O滴加到水相W中，500～1500rpm条件下搅拌形成O/W乳液，磁力搅拌16～20h；

4)12000rpm离心10min，水洗，干燥。得到以PHBHHx为载体的脂溶性药物缓释微球药物制剂。

所述的有机溶剂是二氯甲烷；所述的乳化剂是SDS。

(3)当包埋物是蛋白质药物时，制备方法如下：

1)以每毫升含有10～30mg蛋白质药物的0.2％聚乙烯醇水溶液，作为内水相W1；

2)将PHBHHx溶解于有机溶剂中，配制成重量体积百分浓度为2～4％的PHBHHx有机溶剂溶液，做为油相O；

3)将内水相W1加入到油相O中，400w超声3min，形成W1/O乳剂；

4)配制重量体积百分浓度为0.5～2％的乳化剂水溶液，做为外水相W2；

5)将W1/O乳剂滴加到外水相W2中，500～1000rpm条件下搅拌形成W1/O/W2乳剂，磁力搅拌16～20h；

6)12000rpm离心10min，水洗，干燥。得到以PHBHHx为载体的蛋白质药物缓释微球药物制剂。

所述有机溶剂是二氯甲烷；所述的乳化剂是PVA。

PHBHHx是由3-羟基丁酸(3HB)和3-羟基己酸(3HHx)组成的共聚物，具有良好的机械性能和可加工性。PHBHHx作为缓释材料的研究在国内外还未见报道，而缓释微球的制备工艺与材料的性质密切相关，本发明的目的是经过探索，找出适宜的以PHBHHx作为缓释材料制备缓释微球药物制剂的工艺。本发明通过单因素分析，正交试验，获得了水溶性药物、脂溶性药物、蛋白质药物PHBHHx微球的优选工艺条件，通过模拟体内环境对其进一步体外释药性研究，验证本发明的缓释药物制剂具有长期缓释给药的效果。本发明制备的缓释药物制剂具有骨架型微小球状实体，粒径范围为1-250μm。

本发明的有益效果是：PHBHHx是可生物降解的材料，且生物相容性好，可作为抗癌药物的长期缓释材料。本发明的方法为进一步将PHBHHx用在其它药物缓释制剂的应用上奠定工作基础。由于本发明制备的缓释微球药物制剂具有在体内逐渐释放，延长药效，并使药效达到难以施药的部位的优点，应用到制药工业中，可以消除间歇给药和药量不均产生的峰、谷现象；可直接注射于癌变部位或动脉栓塞，长期稳定控制靶向部位药物浓度或血药浓度，提高药物的生物利用度，较小剂量即可达到疗效，降低副作用，提高治愈效果；无需频繁给药；可避免药物的迅速代谢，延长其在体内的半衰期。

附图说明

图1是实施例2制备的PHBHHx-5Fu缓释微球的微球显微镜照片；

图2是实施例2制备的PHBHHx-5Fu缓释微球的积累释药曲线。

具体实施方式

实施例1

利用野生嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila CGMCC 0911发酵生产聚羟基丁酸羟基己酸酯PHBHHx

培养基：

1、种子LB培养基：

酵母粉5.0g/L，

蛋白胨10.0g/L，

NaCl 10.0g/L。

2、微生物矿物盐培养基(MM)：

组分I(20×)：Na₂HPO₄·12H₂O(180g/L)和KH₂PO₄(30g/L)

组分II：(NH₄)₂SO₄(1g/L)和MgSO₄·7H₂O(0.41g/L)

组分III(100×)：Fe(III)-NH₄-Citrate(17％)(5g/L)和CaCl₂·2H₂O(2g/L)

组分IV(1000×)：ZnSO₄·7H₂O(100mg/L)、MnCl₂·4H₂O(30mg/L)、H₃BO₃(300mg/L)、CoCl₂·6H₂O(200mg/L)、CuSO₄·5H₂O(10mg/L)、NiCl₂·6H₂O(20mg/L)和NaMoO₄·2H₂O(30mg/L)。

灭菌方法：灭菌时以组分II为基底，组分I、组分III和组分IV分别以母液灭菌，培养前混合。

培养条件：

一级种子：从平板上挑取单菌落接入LB培养基(20ml培养基/50ml摇瓶)。30℃培养14hr，摇床转速200r/min。

二级种子：采用摇瓶种子培养基(100ml培养基/500ml摇瓶)，接种量：5％(v/v)。30℃培养12hr，摇床转速200r/min。

三级种子：采用摇瓶种子培养基，接种量：5％(v/v)。培养条件与二级种子相同。

30L发酵罐：配制14.1L基底溶液包括组分II(14.1g(NH₄)₂SO₄和5.781gMgSO₄·7H₂O)和月桂酸180g，同发酵罐一同灭菌，之后取已分装灭过菌的250ml组分I、150ml组分III和15ml组分IV贮液，无菌条件下加入发酵罐，共同作为发酵培养基，30℃，分别用1M HCl和1M NaOH来调节酸碱度至pH 7.0。接种量：5％(v/v)。溶氧D.O.通过搅拌自动控制在15％左右。搅拌转速控制范围为200-500r/min。采用月桂酸为碳源发酵72小时，不补加月桂酸。

培养结束后，用气相色谱检测PHBHHx。结果，提取PHBHHx产量为1.3g/L，产率为45％。

本实施例提供了一种以野生嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophilaCGMCC 0911为原料，利用月桂酸为碳源，合成PHBHHx的方法，合成出的PHBHHx用于以下实施例制备缓释微球药物制剂，但是并不说明本发明微球药物制剂中的载体PHBHHx只适用于按实施例1方法获得的PHBHHx。本发明的目的是提供以PHBHHx为载体，制备缓释微球药物制剂及制备方法，并不在于PHBHHx的合成，只要任何能在市面上购买得到的或按现有技术合成出的PHBHHx都适用于本发明。因此在本发明中不再一一列举合成PHBHHx的方法。

实施例2

包埋物为水溶性药物的，以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂——PHBHHx-5-Fu缓释微球

本实施例中水溶性药物选用5-氟尿嘧啶(5-Fu)

(一)制备方法如下：

1)取20～50mg水溶性药物，20mg磷脂和10mg胆固醇，完全溶解在30ml四氢呋喃中，常温下，旋转蒸干；

2)将200～400mg的PHBHHx溶解于有机溶剂中，并稀释至100ml。配制成重量体积百分浓度为2～4％(wt/v)的PHBHHx有机溶剂溶液。有机溶剂选用三氯甲烷或二氯甲烷；

3)将旋转蒸干的药物均匀分散于PHBHHx有机溶剂溶液中，作为油相(O)；

4)将0.5～1mg的乳化剂溶于蒸馏水中，并稀释至100ml。配制重量体积百分浓度为0.5～1％(wt/v)的乳化剂水溶液，作为水相(W)。乳化剂选用SDS、PVA或Tween80；

5)将油相(O)逐滴加入到500～1000rpm磁力搅拌着的水相中(W)，形成O/W乳液，磁力搅拌16～20h，充分挥发掉有机溶剂；

6)将所得产物移入离心管中，12000rpm离心10min，得固体微球，水洗微球，12000rpm离心10min，重复水洗三次以去掉残留在微球表面的乳化剂和药物，37℃恒温培养箱中常压干燥，得到白色粉末状的目标产物，即PHBHHx-5-Fu缓释微球。

(二)检测方法结果如下：

1、载药量和包封率的测定方法：

微球10mg溶于2ml CHCl₃中，使其完全溶解，加入5mlNa₂HPO₄/NaH₂PO₄缓冲液(pH＝7.4)。将混合物涡旋3min，12000r/min离心10min取上清，于265nm波长处用紫外分光光度计测定吸光度。由标准曲线计算得到载药量和包封率。

公式：载药量＝微球中药物量/微球总重量

包封率＝微球中药物量/总投药量

2、体外释放：

取20mg微球，用3ml Na₂HPO₄/NaH₂PO₄缓冲液(pH＝7.4)溶解，装入透析袋中，在50ml Na₂HPO₄/NaH₂PO₄缓冲液(pH＝7.4)中，37℃水溶摇床50r/min释放，每次取样于265nm波长处用紫外分光光度计测定吸光度，同时更换新鲜的缓冲液，结果见图2。从图2可见，药物缓释20天以上。

(三)实验结果

按表1的制备条件表，取不同条件的投药量，PHBHHx浓度，搅拌速度及乳化剂的浓度，分别制备药物微球。

表1制备条件表

微球制备结果表明，投药量对微球粒径的影响不大；随着PHBHHx浓度的增大，微球的粒径增大；SDS浓度较大时(1％)，搅拌速度对微球粒径影响小，SDS浓度小时(0.5％)，搅拌速度越高，微球粒径越小，微球越小，体外释放的越快；Tween80不适合做该实验的乳化剂，实验未得到微球；PVA做乳化剂微球收率低，SDS是最佳的乳化剂，0.5％就有良好的乳化效果；有机溶剂能够影响载药量，相同条件下，二氯甲烷比三氯甲烷制得的微球包封率高一些，这可能是由于因为二氯甲烷具有较低的蒸气压，更容易蒸发的缘故，使得药物向外水相的扩散的机率减小了，由于5-Fu的水溶性，载药量均较低。

经过单因素分析和正交试验，获得包埋物为水溶性药物时，以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂的优选工艺条件：投药量30mg，PHBHHx浓度4％，有机溶剂选用二氯甲烷，搅拌速度500rpm及乳化剂的浓度0.5％。

(四)优选工艺

1)取30mg水溶性药物，20mg磷脂和10mg胆固醇，完全溶解在30ml四氢呋喃中，常温下，旋转蒸干；

2)将400mg的PHBHHx溶解于二氯甲烷中，并稀释至100ml。配制成重量体积百分浓度为4％(wt/v)的PHBHHx二氯甲烷溶液；

3)将旋转蒸干的药物均匀分散于PHBHHx二氯甲烷溶液中，作为油相(O)；

4)将0.5mg的SDS溶于蒸馏水中，并稀释至100ml。配制重量体积百分浓度为0.5％(wt/v)的SDS水溶液，作为水相(W)；

5)将油相(O)逐滴加入到500rpm磁力搅拌着的水相中(W)，形成O/W乳液，磁力搅拌16～20h，充分挥发掉二氯甲烷；

由此所得微球的形态较圆整、平均粒径约20～40μm、载药量为2％，包封率为32％，药物缓释20天以上。

本实施例中，水溶性药物以5-Fu作为代表进行了验证，并通过试验找到了最佳制备工艺条件，并不说明以上工艺条件只适用于5-Fu，任何水溶性药物都可以按上述方法，制备以PHBHHx为载体的水溶性药物缓释微球药物制剂。

实施例3

包埋物为脂溶性药物的，以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂——PHBHHx-环孢霉素A(CsA)缓释微球

本实施例中脂溶性药物选用环胞霉素A(CsA)

(一)制备方法如下：

1)取200～400mg的PHBHHx溶解于二氯甲烷中，并稀释至100ml。配制成重量体积百分浓度为2～4％(wt/v)的PHBHHx二氯甲烷溶液，加入20～50mg脂溶性药物，搅拌均匀做油相(O)；

2)将0.5～2mg的SDS溶于蒸馏水中，并稀释至100ml。配制重量体积百分浓度为0.5～2％(wt/v)的SDS水溶液，作为水相(W)；

3)将油相(O)逐滴加入到500～1500rpm磁力搅拌着的水相中(W)，形成O/W乳液，磁力搅拌16h，充分挥发去掉二氯甲烷；

4)将所得产物移入离心管中，12000rpm离心10min，得固体微球，水洗微球，再12000rpm离心10min，重复水洗三次以去掉残留在微球表面的乳化剂和药物，37℃恒温培养箱中常压干燥，得到白色粉末状的目标产物，即PHBHHx-环孢霉素A(CsA)缓释微球。

(二)检测方法结果如下：

1、载药量和包封率的测定方法：

微球10mg溶于1ml CHCl₃中，溶解，加入9ml无水乙醇，静置沉淀，12000r/min离心5min取上清于228nm波长处用紫外分光光度计测定吸光度。由标准曲线计算得到载药量和包封率。

2、体外释放：

取20mg微球，用3ml含10％乙醇的Na₂HPO₄/NaH₂PO₄缓冲液(pH＝7.4)溶解，装入透析袋中，在50ml含10％乙醇的Na₂HPO₄/NaH₂PO₄缓冲液(pH＝7.4)中，37℃水溶摇床50r/min释放，每次取样于228nm波长处用紫外分光光度计测定吸光度，同时更换新鲜的缓冲液。

(三)实验结果

本实施例以实施例2为基础，按表2的正交设计水平因素表，取不同条件的投药量、PHBHHx浓度、SDS浓度和转数，分别制备药物微球。

表2正交设计水平因素表

结果：极差分析表明正交试验各因素对微球粒径、载药量等微球性质的影响不是单一的，而是相互制约共同作用。正交实验归一值分析表明A1B1C2D2微球为最佳微球，即优选微球的制备工艺为：投药量20mg，PHBHHx浓度2％，SDS浓度1％，转数1000rpm的条件。

(四)优选工艺

1)取200mg PHBHHx溶解于二氯甲烷中，并稀释至100ml。配制成重量体积百分浓度为2％(wt/v)的PHBHHx二氯甲烷溶液，加入20mg脂溶性药物，搅拌均匀做油相(O)；

2)将1mg的SDS溶于蒸馏水中，并稀释至100ml。配制重量体积百分浓度为1％(wt/v)的SDS水溶液，作为水相(W)；

3)将油相(O)逐滴加入到1000rpm磁力搅拌着的水相中(W)，形成O/W乳液，磁力搅拌16h，充分挥发掉二氯甲烷；

由此制备的微球粒径集中在5-10μm，形状圆整，大小均匀且分散性好，载药量为5.89％，包封率为47.7％，药物缓释20天以上。

本实施例中，脂溶性药物以环孢霉素A(CsA)作为代表进行了验证，并通过试验找到了最佳制备工艺条件，并不说明以上工艺条件只适用于环孢霉素A(CsA)，任何脂溶性药物都可以按上述方法，制备以PHBHHx为载体的脂溶性药物缓释微球药物制剂。

实施例4

包埋物为蛋白质药物的，以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂——PHBHHx-牛血清白蛋白(BSA)缓释微球

本实施例中蛋白质药物选用牛血清白蛋白(BSA)

(一)制备方法如下：

1)向1ml 0.2％(v/v)PVA水溶液中加10～30mg的蛋白质药物，使其完全溶解，作为内水相(W1)；

2)将200～400mg的PHBHHx溶解于二氯甲烷中，并稀释至100ml。配制重量体积百分浓度为2～4％(wt/v)的PHBHHx二氯甲烷溶液，作为油相(O)；

3)将内水相(W1)加入到油相(O)中，400w超声3min，形成W1/O乳剂；

4)将0.5～2mg的PVA溶于蒸馏水中，并稀释至100ml，配制重量体积百分浓度为0.5～2％(wt/v)的PVA水溶液，作为外水相(W2)；

5)将W1/O乳剂滴加到500～1000rpm磁力搅拌着的外水相(W2)中，形成W1/O/W2乳剂，磁力搅拌16h，挥发去掉二氯甲烷；

6)将所得产物移入离心管中，12000rpm离心10min，得固体微球，水洗微球，再12000rpm离心10min，重复水洗三次以去掉残留在微球表面的乳化剂和蛋白质，37℃恒温培养箱中常压干燥，得到白色粉末状的目标产物，PHBHHx-牛血清白蛋白(BSA)缓释微球。

(二)检测方法结果如下：

1、载药量和包封率的测定方法：

微球10mg溶于2ml CHCl₃中，使其完全溶解，加入5ml Na₂HPO₄/NaH₂PO₄缓冲液(pH＝7.4)，将混合物涡旋2min，12000r/min离心10min取上清0.5ml加入5ml考马斯亮蓝染色液，稳定约5分钟后，于595nm波长处用紫外分光光度计测定吸光度。根据标准曲线计算待测液中BSA的浓度，从而计算出测试微球中的BSA含量，即微球的载药量和包封率。

2、体外释放：

取20mg微球，用3ml Na₂HPO₄/NaH₂PO₄缓冲液(pH＝7.4)溶解，装入透析袋中，在20ml的Na₂HPO₄/NaH₂PO₄缓冲液(pH＝7.4)中，37℃水溶摇床50r/min释放，每次取样同时更换新鲜的缓冲液。8000rpm离心10min，量取0.5ml的释放液加入5ml的考马斯亮蓝溶液染色，于595nm波长处用紫外分光光度计测定吸光度。

(三)实验结果

按表3的正交设计水平因素表，取不同条件的投药量，PHBHHx浓度，PAV浓度及转数，分别制备药物微球。

表3正交设计水平因素表

结果：极差分析表明正交试验各因素对微球粒径、载药量等微球性质的影响不是单一的，而是相互制约共同作用。正交实验归一值分析表明A2B3C2D1微球为最佳微球，即优选微球的制备工艺为：投药量20mg，PHBHHx浓度4％，PVA浓度1％，转数500rpm的条件。

(四)优选工艺

1)向1ml 0.2％PVA水溶液中加20mg的蛋白质药物，使其完全溶解，作为内水相(W1)；

2)将400mg的PHBHHx溶解于二氯甲烷中，并稀释至100ml。配制重量体积百分浓度为4％(wt/v)的PHBHHx二氯甲烷溶液，做为油相(O)；

3)将内水相(W1)加入到油相(O)中，400w超声3min，形成W1/O乳剂；

4)将1mg的PVA溶于蒸馏水中，并稀释至100ml。配制重量体积百分浓度为1％(wt/v)的PVA水溶液，作为外水相(W2)；

5)将W1/O乳剂滴加到500rpm磁力搅拌着的外水相(W2)中，形成W1/O/W2乳剂，磁力搅拌16h，挥发去掉二氯甲烷；

由此制得的微球粒径集中在10-15μm，形状圆整，大小均匀且分散性好，载药量为1.5％，包封率为14.6％，药物缓释20天以上。

本实施例中，蛋白质以BSA作为代表进行了验证，并通过试验找到了最佳制备工艺条件，并不说明以上工艺条件只适用于BSA，任何蛋白质药物都可以按上述方法，制备以PHBHHx为载体的蛋白质药物缓释微球药物制剂。

Claims

1.以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂，其特征在于：是利用PHBHHx为载体对包埋物水溶性、脂溶性或蛋白质药物进行微胶囊化，获得被包埋物的缓释微球药物制剂。

2.权利要求1所述的以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂的制备方法，其特征在于当包埋物是水溶性药物时，制备方法如下：

4)配制重量体积百分浓度为0.5～1％的乳化剂水溶液，作为水相W；

6)12000rpm离心10min，水洗，干燥。

3.按照权利要求2所述的以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂的制备方法，其特征在于所述的有机溶剂是三氯甲烷或二氯甲烷；所述的乳化剂是十二烷基苯磺酸钠或聚乙烯醇。

4.权利要求1所述的以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂的制备方法，其特征在于当包埋物是脂溶性药物时，制备方法如下：

2)配制重量体积百分浓度为0.5～2％的乳化剂水溶液，做为水相W；

4)12000rpm离心10min，水洗，干燥。

5.按照权利要求4所述的以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂的制备方法，其特征在于所述的有机溶剂是二氯甲烷；所述的乳化剂是十二烷基苯磺酸钠。

6.权利要求1所述的以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂的制备方法，其特征在于当包埋物是蛋白质药物时，制备方法如下：

3)将内水相W1加入到油相O中，400w超声3min，形成W1/O乳剂；

6)12000rpm离心10min，水洗，干燥。

7.按照权利要求6所述的以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂的制备方法，其特征在于所述的有机溶剂是二氯甲烷；所述的乳化剂是聚乙烯醇。