CN101693059A - 玫瑰多酚制备方法及其在妇产科应用 - Google Patents

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CN101693059A CN200910113484A CN200910113484A CN101693059A CN 101693059 A CN101693059 A CN 101693059A CN 200910113484 A CN200910113484 A CN 200910113484A CN 200910113484 A CN200910113484 A CN 200910113484A CN 101693059 A CN101693059 A CN 101693059A
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Abstract

本发明涉及玫瑰多酚制备方法及其在妇产科应用,该方法是采用乙醇温浸提取,经大孔吸附树脂分离方法,等度洗脱和梯度洗脱柱层析法获得提取物,通过该方法获得的玫瑰多酚提取物用于妇女经前、经期舒肝解郁,宁心安神,和血调经,缓解女性经前和经期的不安、焦虑和心烦情绪及产后子宫收缩,增强收缩频率,缩短收缩时间的药物的用途。

Description

玫瑰多酚制备方法及其在妇产科应用
技术领域
本发明涉及妇女用保健品和妇产科药品的开发。
技术背景
玫瑰花(Rosa rugosa Thunb.)原产我国,是一种蔷薇科蔷薇属的丛生落叶灌木。玫瑰花集食用、药用、观赏于一身,维吾尔医认为玫瑰花甘温微苦,气香无毒,为一级寒性,二级干温性,具有收敛干固之功,其药效为理气宽胸,清热强心,消肿润便止血、行气解郁润肤、敛肤、健脾和胃止痛,镇静安神。玫瑰花在维吾尔医的临床上可以作为单方或者复方应用,主治:胃痛,消化不良,肺结核咳血,外伤肿痛,妇科,肠炎下痢,风湿痹痛,肝郁头痛等。(中国民族医药杂志1999.7)
我国是玫瑰花种植大国,具有丰富的玫瑰花资源,但我国玫瑰以粗加工和初级加工产品为主,加工的附加值很低,玫瑰花糖膏就是一例,它自古以来被维吾尔族民间用于妇女生理调节保健和治疗妇科疾病,使用该产品后,对脾胃不和、心烦健忘、神志不安、阴虚体弱、月经不调患者进行临床跟踪研究,结果证明:玫瑰花糖膏对胃不和患者总有效率可达98.7%;心烦健忘、神志不安患者总有效率达到97.3%;阴虚体弱、月经不调患者达到98.1%;肝郁津滞患者总有效率达到78.52%。由于它确切的疗效,深受广大群众的喜爱和信赖。目前,玫瑰花糖膏已收载在《中华人民共和国药品标准——维吾尔药分册》中。玫瑰花糖膏疗效好,但工艺传统、粗陋,作用物质和效应强度不清楚。目前,各级政府在加大开发绿色产品的力度,在整个世界呼吁保护环境、崇尚回归自然、笃信天然药品食品的大趋势下,用人们普遍喜食的鲜花为原料,以“高疗效,低成本,纯天然,无公害”的优势,制成玫瑰花功能因子保健品和药品,用于食品、保健品业和医药上,提高玫瑰花的附加值,意义深远。所以,本专利充分利用玫瑰花营养特性和药用特性,利用高新分离技术提取分离玫瑰花中含有的对妇女有益的功能成分,如酚酸、黄酮,应用在妇女保健和妇产科药品。
随着人们生活节奏的加快和对美好生活的向往,妇产科镇痛和妇女产后的快速消炎、产后性器官迅速恢复,如子宫收缩:增强收缩频率,缩短收缩时间已受到大众的关注。妇女产褥期胎盘娩出后的子宫需要恢复到未孕状态,这个过程叫子宫复旧(它包括宫体肌纤维缩复和子宫内膜再生)。产褥期妇女如发现子宫收缩乏力,要肌注子宫收缩剂(麦角新碱或催产素)或使用产复欣和产后康等中药口服药物。产后调理的中药一般由复方组成,如菟丝子、枸杞子、北沙参、当归、白芍、阿胶、地骨皮、益母草、蒲黄和荆芥穗等,本发明所提供的玫瑰多酚功能因子组分是一个经单方药材提取纯化、含量达到62%以上的妇科用保健品/药品,经药理实验表明,明显对子宫平滑肌收缩频率增加,收缩张力增加,具有激动大鼠离体子宫平滑肌自发收缩活动的药效作用。另处,对醋酸所致的小鼠扭体反应有明显的抑制作用,对二甲苯引发的小鼠外耳廓炎性肿胀有明显的抑制作用,可以用于产褥期妇女子宫复旧和消炎镇痛。
妇女的更年期综合症:由于肝郁血虚、虚火内扰神明引起的心烦、健忘、心悸气短、神志不安、血虚体弱等已经成为一个社会问题,困扰着中老年妇女及其家人;妇女月经期间均有不同成度的不适反应,有一些人甚至需要药物治疗;妇女经前紧张症急需舒肝解郁,宁心安神,活血化瘀、温经止痛、和血调经的药物调理。药理实验证实玫瑰多酚功能因子组分对雌性大鼠阴虚症状的改善和行血缩短凝血时间的作用可以应用于妇女经期和经前这些症状的缓解与消除。
从最近10年国际植物化学发展趋势看,脱离生物活性的纯植物化学成分研究已经日趋萎缩,围绕重大疾病寻找生物活性成分和活性部位是今后研究的最主要趋势,玫瑰花的研究正是基于这一思路开展的。前期研究过玫瑰花有效部位(黄酮部分)对改善睡眠的保健品的研究(玫瑰花有效部位及其制备方法和用途,专利公开号:CN101002841A)。本发明深入研究用于妇产科的玫瑰多酚成分的制备方法,通过体内外药理学试验证明药效作用和作用强度,形成本研究成果。
发明内容
本发明目的在于提供一种玫瑰多酚制备方法及其在妇产科应用,该方法是采用乙醇温浸提取,经大孔吸附树脂分离方法,等度洗脱和梯度洗脱柱层析法获得提取物,该提取物含总多酚以没食子酸C7H6O5计为60.2%-68.3%,收率为13%。通过提取、分离与纯化得到化合物十几个,并对这十几个化合物进行了结构测定,已鉴定出结构的化合物有:没食子酸、原儿茶酸、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖(2→1)-O-β-D-吡喃葡糖苷、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(2→1)-O-β-D-吡喃葡糖苷、鞣花酸、山柰酚、广寄生苷、胡桃苷、黄芪苷、苯乙醇-O-β-D-葡糖苷和金丝桃苷等。通过该方法获得的玫瑰多酚提取物作为制备治疗妇女经期和经前调养保健和产后子宫收缩的药物的用途。
本发明所述的玫瑰多酚的制备方法,采用乙醇温浸提取,经大孔吸附树脂分离方法获得的提取物含总多酚以没食子酸C7H6O5计为60.2%-68.3%,具体操作按下列步骤进行:
a、将干燥玫瑰花加10倍量浓度为20%-90%乙醇,在温度30-60℃温浸1-2次,每次2-8小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
b、取上清液加入大孔吸附树脂层析柱,然后分别用水,50%乙醇洗脱;
c、将步骤b中50%乙醇洗脱部位减压浓缩和真空干燥或冷冻干燥或喷雾干燥,得到玫瑰花提取物玫瑰多酚;
d、将步骤c玫瑰花提取物按照常规制剂方法制成颗粒剂、硬胶囊、软胶囊和片剂即可。
所述步骤a温浸用乙醇浓度为50%-75%。
所述步骤b大孔吸附树脂型号为HPD600或DA201或AB-8或NKA-9或D101或HPD750或D140或X-5。
所述步骤a温浸温度优选为40-50℃.
所述温浸时间优选为3-4小时,
所述方法获得的玫瑰多酚提取物作为制备治疗妇女经期和产后子宫收缩的药物的用途。
所述方法获得的玫瑰多酚提取物作为制备治疗妇女经前调养保健品用途。
本发明所述的玫瑰多酚制备方法及其在妇产科应用,该方法通过提取、分离与纯化得到化合物十几个,并对这十几个化合物进行了结构测定,已鉴定出结构的化合物有:没食子酸、原儿茶酸、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖(2→1)-O-β-D-吡喃葡糖苷、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(2→1)-O-β-D-吡喃葡糖苷、鞣花酸、山柰酚、广寄生苷、胡桃苷、黄芪苷、苯乙醇-O-β-D-葡糖苷和金丝桃苷等。其中多酚提取物中没食子酸,原儿茶酸,鞣花酸,广寄生苷,黄芪苷和胡桃苷的含量分别为6.48,7.61,32.41,18.54,23.78,9.25mg·g-1,主成分为鞣花酸。
附图说明
图1为本发明玫瑰多酚组分构成图,其中1-没食子酸,2-原儿茶酸,3-金丝桃苷,4-鞣花酸,5-广寄生苷,6-黄芪苷,7-胡桃苷,8-槲皮素。
具体实施方式
实施例1
将干燥玫瑰花100g,加1L浓度为70%乙醇,水浴温浸50℃,提取2次,每次2小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
取上清液上样于HPD600型大孔吸附树酯层析柱,然后分别用水,50%乙醇,依次洗脱;
将50%乙醇洗脱得到的部位减压浓缩、真空干燥,粉碎,过80目筛,得玫瑰花提取物;
将玫瑰花提取物,按照常规制剂方法制成颗粒剂、硬胶囊、软胶囊或片剂。
实施例2:
将干燥玫瑰花100g,加1L浓度为60%乙醇,水浴温浸60℃,提取1次,时间4小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
取上清液一样于D101型大孔吸附树酯层析柱,然后分别用水,50%乙醇,依次洗脱;
将50%乙醇洗脱得到的部位减压浓缩、喷雾干燥,过80目筛,得玫瑰花提取物;
将玫瑰花提取物,按照常规制剂方法制成颗粒剂、硬胶囊、软胶囊或片剂。
实施例3:
将干燥玫瑰花100g,加1L浓度为55%乙醇,水浴温浸50℃,提取2次,每次2小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
取上清液上样于AB-8型大孔吸附树酯层析柱,然后分别用水,50%乙醇,依次洗脱;
将50%乙醇洗脱得到的部位减压浓缩、冷冻干燥,过80目筛,得玫瑰花提取物;
将玫瑰花提取物,按照常规制剂方法制成颗粒剂、硬胶囊、软胶囊或片剂。
实施例4
将干燥玫瑰花100g,加1L浓度为50%乙醇,水浴温浸45℃,提取1次,每次4小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
取上清液上样于NKA-9型大孔吸附树酯层析柱,然后分别用水,50%乙醇,依次洗脱;
将50%乙醇洗脱得到的部位减压浓缩、真空干燥,过80目筛,得玫瑰花提取物;
将玫瑰花提取物,按照常规制剂方法制成颗粒剂、硬胶囊、软胶囊或片剂。
实施例5
将干燥玫瑰花100g,加1L浓度为75%乙醇,水浴温浸60℃,提取2次,每次4小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
取上清液上样于D140型大孔吸附树酯层析柱,然后分别用水,50%乙醇,依次洗脱;
将50%乙醇洗脱得到的部位减压浓缩、真空干燥,过80目筛,得玫瑰花提取物;
将玫瑰花提取物,按照常规制剂方法制成颗粒剂、硬胶囊、软胶囊或片剂。
实施例6:
干燥玫瑰花100g,加1L浓度为50%乙醇,水浴温浸30℃,提取2次,每次3小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
取上清液一样于HPD750型大孔吸附树酯层析柱,然后分别用水,50%乙醇,依次洗脱;
将50%乙醇洗脱得到的部位减压浓缩、真空干燥,过80目筛,得玫瑰花提取物;
将玫瑰花提取物,按照常规制剂方法制成颗粒剂、硬胶囊、软胶囊或片剂。
实施例7
将干燥玫瑰花100g,加1L浓度为55%乙醇,水浴55℃温浸,提取1次,时间2小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
取上清液上样于DA201型大孔吸附树酯层析柱,然后分别用水,50%乙醇,依次洗脱;
将50%乙醇洗脱得到的部位减压浓缩、真空干燥,过80目筛,得玫瑰花提取物;
将玫瑰花提取物,按照常规制剂方法制成颗粒剂、硬胶囊、软胶囊或片剂。
实施例8
将干燥玫瑰花100g,加1L浓度为60%乙醇,水浴温浸45℃,提取2次,每次1.5小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
取上清液一样于X-5型大孔吸附树酯层析柱,然后分别用水,50%乙醇,依次洗脱;
将50%乙醇洗脱得到的部位减压浓缩、真空干燥,过80目筛,得玫瑰花提取物;
将玫瑰花提取物,按照常规制剂方法制成颗粒剂、硬胶囊、软胶囊或片剂。
实施例9
通过本发明所述方法获得的玫瑰多酚提取物作为制备治疗妇女经期和经前调养保健和产后子宫收缩的药理作用试验。
玫瑰多酚对小鼠凝血时间的影响
昆明种小鼠50只,雌雄各半,体重18-22g,按性别体重随机分成空白、阳性、高剂量、中剂量、低剂量五组,高剂量0.6mg.10g-1、中剂量0.4mg.10g-1、低剂量0.2mg.10g-1、阳性对照0.1g.10g-1体重灌胃给药(ig),空白对照组灌胃等量蒸馏水,一日给药一次,连续灌胃一周,末次给药后45min后,颈椎脱臼处死小鼠,取血2ml入枸橼酸钠抗凝采血管,使用血凝仪测定凝血时间(PT)。使用t检验对比空白、阳性对照组与玫瑰花各剂量组之间的差异,以P<0.05表示该剂量的被试药物与各对照组比较,对小鼠凝血时间的影响有统计学意义。见表1。
表1玫瑰花提取物对小鼠凝血时间的影响(s)(X±SD)
Figure G200910113484XD0000081
与空白组对比:**p<0.01;*p<0.05;与阳性对照组对比:##p<0.01;P<0.05。
抗凝血时间试验中,玫瑰花中剂量组对比空白组,有延长凝血时间的趋势,结果具有统计学意义,其中雌性小鼠中,玫瑰花提取物的中、低剂量组有延长凝血时间的趋势,对比阳性对照组,结果有统计学意义。结果提示玫瑰花提取物存在延长凝血时间的药效学作用。
玫瑰多酚对小鼠耳廓微循环的影响
昆明种小鼠50只,雌雄各半,体重18-22g,按性别体重随机分成空白、阳性、高剂量、中剂量、低剂量五组。小鼠20%乌拉坦麻醉(0.065ml.10g-1 ip),试验动物左耳两侧均脱毛后,使用阿拉伯胶固定于载玻片上,置目镜6X、物镜40X光学显微镜下观察,寻找毛细血管清晰、分支较多的部位照相并记录,第二天开始高剂量0.6mg.10g-1、中剂量0.4mg.10g-1、低剂量0.2mg.10g-1、阳性对照0.1g.10g-1体重灌胃给药(ig),空白对照组灌胃等量蒸馏水,一日给药一次,连续灌胃一周后,全体试验动物再次麻醉,左耳双侧脱毛后使用同上方法,在同一个位置照相并记录,统计同一位置微血管管径和毛细血管网交点计数。毛细管管径使用t检验对比空白、阳性对照组与玫瑰花各剂量组之间的差异,毛细血管网交点数使用χ2检验,以P<0.05表示该剂量的被试药物与各对照组比较,对小鼠扩张耳廓微循环管径和增加毛细血管网交点的影响有统计学意义。见表2。
表2玫瑰花提取物对小鼠耳廓微循环的影响(X±SD)
与空白组对比:***p<0.01;*p<0.05;与阳性对照组对比:##p<0.01;P<0.05。
观察耳廓微循环试验中,玫瑰花各剂量组和阳性对照组和空白对照组比较,微血管管径都有明显增加,比较结果有统计学意义(p<0.01)。结果提示玫瑰花提取物有扩张毛细管管径,增加微循环血流量的药效学作用。
玫瑰多酚对大鼠离体子宫的影响
未孕、性成熟SD雌性大鼠20只,体重160-180g,试验前两天每天ip苯甲酸雌二醇0.4mg每只活化子宫。试验当天颈椎脱臼处死大鼠,游离卵巢及子宫分叉处之间中段子宫,沿系膜纵轴剖开子宫,经Kreb’s缓冲液漂洗后,每侧子宫依平滑肌纤维纵行方向取宽2mm的肌条,每只大鼠可制备4条子宫平滑肌条标本。新鲜子宫平滑肌条分别置15ml,37℃ Kreb’s液套管中,在1g前负荷下温育1h,每20min更换一次新鲜Kreb’s液,待自发活动稳定后再加入药物,小剂量、中剂量、大剂量的终浓度分别是2、4、8g/L玫瑰花提取物,为药物单用组;肌条自发活动平稳后分别加入苯海拉明(给药终浓度2X10-6mol.L-1)、酚妥拉明(给药终浓度2X10-6mol.L-1)、异搏定(给药终浓度2X10-7mol.L-1)、吲哚美辛(给药终浓度2X10-5mol.L-1)5min后,再加入玫瑰花提取物为受体拮抗剂+药物组。记录平滑肌条收缩波平均振幅和平均持续时间。
离体子宫试验中,单用玫瑰花提取物,对比未使用药物状态,子宫平滑肌收缩频率增加、张力增强,结果有统计学差异(P<0.01),持续时间无明显变化;加入H1受体阻断剂苯海拉明后,玫瑰花提取物对子宫平滑肌作用收缩频率减弱,张力减小(P<0.01),对持续时间无明显改变;加入α受体阻断剂酚妥拉明后,玫瑰花提取物增强了子宫平滑肌收缩力,减慢了收缩持续时间(P<0.05);加入抑制前列腺素合成酶吲哚美辛后,增强了子宫平滑肌收缩频率(P<0.05);加入L型Ca2+通道阻断剂异搏定后,玫瑰花提取物对子宫平滑肌收缩作用增强(P<0.01)。结果提示玫瑰花提取物可能具有激动大鼠离体子宫平滑肌自发收缩活动的药效学作用。其作用可以被苯海拉明、酚妥拉明、异搏定影响。
玫瑰多酚对阴虚内热症大鼠子宫影响
雌性SD大鼠50只,体重160-200g,按体重随机均分成空白、阳性、高剂量、中剂量、低剂量五组。除空白对照组外,ip甲状腺素2.5mg·200g-1体重每天,制造雌性大鼠阴虚模型,连续造模3周后,观察大鼠出现体重下降、脱毛、舌出现肿胀、阴道涂片角质化细胞出现明显增多即为阴虚证造模成功,停止造模给药。高剂量3.0mg·100g-1、中剂量2.0mg·100g-1、低剂量1.0mg·100g-1、阳性对照0.5g·100g-1体重灌胃给药(ig),空白对照组灌胃等量蒸馏水,一日给药一次,连续ig一周,测定体重,颈椎脱臼后测量子宫重量与体重的比值、肛温、阴道冲洗液角质化上皮细胞计数。体重、子宫体重指数、肛温采用t检验,阴道冲洗液角质化上皮细胞计数采用χ2检验,分析空白、阳性对照组与各剂量给药之间的差别,以P<0.05表示该剂量的被试药物与空白、阳性对照组比较,对雌性大鼠阴虚症状的改善有统计学意义。见表3。
表3玫瑰花提取物对阴虚大鼠体征的影响(X±SD)
Figure G200910113484XD0000111
与空白组对比:**p<0.01;*p<0.05;与阳性对照组对比:##p<0.01;P<0.05;与模型组对比:※※p<0.01;※P<0.05。
玫瑰花提取物可以改善阴虚模型大鼠的造模引起的低体温,改善阴虚模型大鼠阴道上皮细胞角质化现象。
玫瑰多酚对小鼠醋酸所致扭体反应的镇痛效果
昆明种小鼠50只,雌雄各半,体重18~22g,按性别体重随机分成空白、阳性、高剂量、中剂量、低剂量五组,高剂量9mg.10g-1、中剂量3mg.10g-1、低剂量1mg.10g-1、阳性对照0.1g.10g-1体重ig,空白对照组灌胃等量蒸馏水,一日给药一次,连续一周灌胃给药,末次给药45min后,小鼠ip 0.6%醋酸0.2ml/只,观察15min,记录小鼠扭体次数,使用t检验对比给药组与空白、阳性对照组与玫瑰花各剂量组之间的差异,以P<0.05表示该剂量的被试药物与各对照组比较,对小鼠的镇痛影响有统计学意义。见表4。
表4玫瑰花提取物对0.6%醋酸致小鼠扭体反应的抑制作用(X±SD)
Figure G200910113484XD0000121
与空白组对比:**p<0.01;*p<0.05;与阳性对照组对比:##p<0.01;P<0.05。
玫瑰花提取物高、中、低各剂量组与空白对照组比较,扭体次数有明显减低,结果均具统计学意义(p<0.05),与阳性对照组比较,扭体次数有明显的减低,结果均具统计学意义(P<0.05)。
玫瑰多酚对小鼠二甲苯所致外耳廓炎性反应的抗炎效果
昆明种小鼠50只,雌雄各半,体重18-22g,按性别体重随机分成空白、阳性、高剂量、中剂量、低剂量五组,高剂量9mg·10g-1、中剂量3mg·10g-1、低剂量1mg·10g-1、阳性对照0.1g·10g-1体重ig,空白对照组灌胃等量蒸馏水,一日给药一次,连续一周以上灌胃给药,末次给药45min后,用含玫瑰花提取物浓度分别为1mg/ml、0.33mg/ml、0.12mg/ml、含阳性对照药1mg/ml的二甲苯溶液0.2ml/只涂抹该组小鼠右侧外耳廓,空白对照组涂抹纯二甲苯;观察4h后,颈椎脱臼处死小鼠,使用打孔器在左右耳同一位置打下面积相同的耳片分别称量,使用t检验对比各组同一个体左右耳片重量差异,以P<0.05表示该剂量的被试药物与各对照组比较,对小鼠的抗炎效果影响有统计学意义。见表5。
表5玫瑰花提取物对二甲苯致小鼠外耳廓炎性反应的抑制作用(X±SD)
Figure G200910113484XD0000122
Figure G200910113484XD0000131
与空白组对比:**p<0.01;*p<0.05;与阳性对照组对比:##p<0.01;P<0.05。
玫瑰花中剂量组与空白对照组比较,外耳廓肿胀度有明显减低,结果具统计学意义(p<0.01),与阳性对照组比较,外耳廓肿胀度有明显减低,结果具统计学意义(p<0.05),玫瑰花中剂量组肿胀抑制率达到57.67%。
玫瑰花高、中、低各剂量对0.6%醋酸所引发的小鼠扭体反应次数均有明显的抑制作用,结果提示玫瑰花提取物可能存在镇痛药物疗效;在抗炎试验中,与空白对照组比较玫瑰花中剂量给药组外耳廓肿胀度有明显减低,肿胀抑制率达到57.67%,提示玫瑰花提取物对二甲苯引发的小鼠外耳廓炎性肿胀有明显的抑制作用,存在潜在的药用抗炎效果。
玫瑰多酚功能因子组分活性:
本发明表现出了优良的抗氧化活性。可用ABTS清除率表征总酚提取物的抗氧化能力,用ABTS清除率表征玫瑰花中多酚和黄酮单体的抗氧化能力。目前分析到的有效功能组分和功能因子有:没食子酸IC50低于1μg·mL-1;鞣花酸IC50<4μg·mL-1;胡桃苷IC50<0.04mg·mL-1;黄芪苷IC50<0.04mg·mL-1和广寄生苷IC50<0.4mg·mL-1参与药效;玫瑰花瓣有效组分的总抗氧化效果可以达到IC500.004mg·mL-1(ABTS)。从测定结果看到,提取物和单体对ABTS自由基均有较高的清除效果,且有剂量与效应关系,随着反应体系有效组分浓度的增加,抑制作用明显增加,最大抑制率达到99.8%;比较不同浓度不同组分/成分,其中抗氧化活性最高的单体没食子酸IC50低于1μg/mL。
药效物质的归属:
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为A[甲醇∶乙腈(1∶1)]-B(0.06%的三氟乙酸溶液),程序梯度洗脱:0至15分钟,15%A升为35%A;15至38分钟,35%A升为62%A;38至50分钟,62%A升为100%A;检测波长254nm,柱温为32℃。理论板数按广寄生苷峰计算应不低于10000。广寄生苷和黄芪苷峰分离度应符合要求。
取本品81mg,精密称定,置50ml量瓶中,加甲醇适量,超声使溶解,加甲醇稀释至刻度,摇匀,离心,取上清液,即得。精密称取没食子酸、原儿茶酸、鞣花酸、广寄生苷、黄芪苷、金丝桃苷、槲皮素和胡桃苷对照品适量,置量瓶中,加甲醇制成每1ml含没食子酸40μg,原儿茶酸58μg,金丝桃苷25.8μg,鞣花酸58.4μg,广寄生苷26μg,黄芪苷55μg、槲皮素10μg和胡桃苷15μg的溶液,即得。
本发明所述妇女用保健品和妇产科药品,其明确的功能因子成分已由上述指纹图谱表征并分离纯化获得,它是由以鞣花酸为代表的多酚成分组成,总含量达到62.8%;剂型为颗粒剂,软硬胶囊剂,口服液,片剂等。
总含量测定:
对照品溶液和标准曲线的制备
精密称取没食子酸对照品适量,加甲醇制成102μg/ml的溶液。精密量取对照品溶液0.5ml,1.0ml,2.0ml,3.0ml,4.0ml,5.0ml和6.0ml,分别置50ml棕色容量瓶中,各加入磷钼钨酸试液2.0ml,再分别加水23.5ml,23.0ml,22.0ml,21.0ml,20.0ml,19.0ml,18.0ml,用29%碳酸钠溶液定容至刻度,摇匀,放置30分钟,以相应的试剂为空白,照紫外---可见分光光度法(中国药典2005年版附录V A),在757nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。工艺过程控制所测标准曲线结果见表,Y=0.111X+0.0606,r=0.9982
样品测定
经大孔吸附树脂的洗脱液,精密量取1.0ml置50ml棕色量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,从中精密量取1.0ml照标准曲线的制备项下的方法,自“加入磷钼钨酸试液2ml”起,加水23.0ml,依法测定吸光度,从标准曲线中读出洗脱液中没食子酸的量(mg),计算。

Claims (7)

1.一种玫瑰多酚的制备方法,其特征在于采用乙醇温浸提取,经大孔吸附树脂分离方法获得的提取物含总多酚以没食子酸C7H6O5计为60.2%-68.3%,具体操作按下列步骤进行:
a、将干燥玫瑰花加10倍量浓度为20%-90%的乙醇,在温度30-60℃温浸1-2次,每次2-8小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
b、取上清液加入大孔吸附树脂层析柱,然后分别用水,50%乙醇洗脱;
c、将步骤b中50%乙醇洗脱部位减压浓缩和真空干燥或冷冻干燥或喷雾干燥,得到玫瑰花提取物玫瑰多酚;
d、将步骤c玫瑰花提取物按常规药物制剂方法制成颗粒剂、硬胶囊、软胶囊和片剂即可。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤a温浸用乙醇浓度为50%-75%。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤b大孔吸附树脂型号为HPD600或DA201或AB-8或NKA-9或D101或HPD750或D140或X-5。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤a温浸温度优选为40-50℃.
5.根据权利要求1所述的方法,其特征是所述温浸时间优选为3-4小时,
6.根据权利要求1所述方法获得的玫瑰多酚提取物作为制备治疗妇女经期和产后子宫收缩的药物的用途。
7.根据权利要求1所述方法获得的玫瑰多酚提取物作为制备治疗妇女经前调养保健品的用途。
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CN110037222A (zh) * 2018-01-17 2019-07-23 南京农业大学 一种玫瑰多酚泡腾片及其制作方法
CN110638704A (zh) * 2019-10-11 2020-01-03 广东丸美生物技术股份有限公司 玫瑰提取物的提取方法、提取得到的玫瑰提取物及应用和化妆品
CN112999274A (zh) * 2021-03-26 2021-06-22 苏州大学 一种玫瑰多酚提取物及其制备方法和应用

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