CN101680031A - 对青少年特发性脊柱侧凸分类的方法，所用的分离核酸分子及使用该核酸分子的试剂盒 - Google Patents

Abstract

一种对具有青少年特发性脊柱侧凸(AIS)的对象分类的方法，包括：提供从该对象分离的细胞样品；检测该细胞样品中的成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)表达；该检测步骤的结果能将具有AIS的对象分为属于某AIS亚类。

Description

对青少年特发性脊柱侧凸分类的方法，所用的分离核酸分子及使用该核酸分子的试剂盒

相关申请的交叉引用

按照35U.S.C.§119(e)，本申请要求2007年3月19日提交的美国临时申请序列号60/895,490和2007年3月28日提交的美国临时申请序列号60/908,417的优先权。以上文件的内容通过引用全文纳入本文。

发明领域

本发明涉及对青少年特发性脊柱侧凸分类的方法，该方法所用的分离核酸分子及使用该核酸分子的试剂盒。

发明背景

脊柱畸形，特别是脊柱侧凸代表了儿童和青少年中最常见的整形外科畸形(人群的0.2-6％)。公布的研究提示1-6％的人群会发生脊柱侧凸。该疾病导致脊柱形成严重的畸形，就数量和严重性而言主要影响女性青少年。

目前，青少年特发性脊柱侧凸(AIS)的原因尚不清楚(Connor JM，ConnerAN，Connor RA，Tolmie JL，Yeung B，Goudie D.早期儿童脊柱侧凸的遗传学方面(Genetic aspects of early childhood scoliosis.)Am J Med Genet.1987；27：419-424；和Machida M.特发性脊柱侧凸的原因(Cause ofidiopathic scoliosis).Spine.1999；24：2576-2583)，需要对具有脊柱侧凸的儿童或青少年分类，鉴定具有患AIS风险的儿童或青少年并鉴定患病个体中哪些具有(疾病)进展的风险。

现已证明Pitx1+/-小鼠在断奶后发生严重的脊柱畸形。成对样同源异型域转录因子1(Pitx1，以前称为Ptx1)是在整个垂体发育中最早检测到的同源异型域转录因子。Pitx-家族含有3个相关成员：Pitx1、Pitx2和Pitx3，它们是同源异型域蛋白的成对类别的成员。该三种Pitx因子具有相似的转录特性(Drouin，J.，

，C.，&Tremblay，J.J.同源异型域转录因子Ptx家族(La famille Ptx des facteurs de transcription àhoméodomaine).药物/科学(Médecine/Sciences)14，335-339(1998)；Drouin，J.，Lamolet，B.，Lamonerie，T.，Lanctot，C.，&Tremblay，J.J.垂体发育期间同源异型域转录因子的PTX家族(The PTX family of homeodomain transcription factors during pituitarydevelopments).Mol.Cell Endocrinol.140，31-36(1998)；和

，C.，Lamolet，B.，&Drouin，J.bicoid-相关同源异型蛋白Ptx1确定胚胎的最前部区域并区分后与前侧中胚层(The bicoid-related homeoprotein Ptx1 defines themost anterior domain of the embryo and differentiates posterior from anteriorlateral mesoderm).Development 124，2807-2817(1997))。其中，该转录因子控制哺乳动物中颅面和后肢特定结构的发育。在发育期间pitx1基因在小鼠后肢长骨中高度表达，通过对后肢长骨切片实施免疫组化方法检测到Pitx1蛋白质的高水平积累主要发生在沿软骨膜的关节周围区域(包括髋关节和膝关节)，以及增殖性软骨细胞的核中(

，C.，Lamolet，B.，&Drouin，J.bicoid-相关同源异型蛋白Ptx1确定胚胎的最前部区域并区分后与前侧中胚层(The bicoid-related homeoprotein Ptx1 defines the most anterior domain ofthe embryo and differentiates posterior from anterior lateral mesoderm).Development 124，2807-2817(1997))。还在颅面结构，例如下颌和颞下颌关节中检测到Pitx1表达。现已证明靶向灭活小鼠pitx1基因严重损害颅面和后肢发育。虽然没有小鼠在出生时死亡，但所有出生时正常的PITX1+/-小鼠发展成严重的脊柱畸形(2个月时100％)。

本说明书参考许多文件，它们的内容通过引用全文纳入本文。

发明概述

本发明提供对具有青少年特发性脊柱侧凸(AIS)的对象分类的方法，包括：提供从该对象分离的细胞样品；检测该细胞样品中的成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)表达；从而该检测步骤的结果能将具有AIS的对象分为属于某AIS亚类。

本发明另一方面提供为临床试验而对具有青少年特发性脊柱侧凸(AIS)的对象分类的方法，包括：提供从该对象分离的细胞样品；检测该细胞样品中的成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)表达；和根据检测步骤的结果对临床试验的对象分类。

本发明另一方面提供预测对象发生青少年特发性脊柱侧凸(AIS)风险的方法，包括：提供从该对象分离的细胞样品；检测该细胞样品中的成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)表达；其中不存在Pitx1表达表示该对象具有发生AIS的风险。

在这些方法的一具体实施方式中，不存在Pitx1表达表示该对象具有出现45°及以上科布角的风险。在另一具体实施方式中，用Pitx1转录产物的特异性分离核酸分子实施该检测步骤。在另一具体实施方式中，该分离核酸分子作可检测标记。在另一实施方式中，用与Pitx1特异性结合的抗体实施该检测步骤。在另一具体的实施方式中，该细胞样品选自：成骨细胞样品、软骨细胞样品、骨骼成肌细胞样品和血液样品。在另一具体的实施方式中，该细胞样品是成骨细胞样品。在另一具体实施方式中，该方法还包括鉴于该检测步骤的结果而选择预防措施或治疗方法的步骤。在另一具体实施方式中，所述对象被预先诊断为发生青少年特发性脊柱侧凸的可能候选对象。

本发明的另一方面提供选择可能用于治疗青少年特发性脊柱侧凸的化合物的方法，所述方法包括以下步骤：(a)将测试化合物与已知表达成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)的至少一种细胞接触；和(b)测定Pitx1表达水平；其中如果与没有测试化合物存在下相比，有其存在下Pitx1表达水平增加，则选择该测试化合物。

在一具体实施方式中，所述细胞是成骨细胞。在另一具体实施方式中，所述细胞来自具有青少年特发性脊柱侧凸(AIS)的对象。在另一具体实施方式中，所述对象是人。

本发明的另一方面提供试剂盒，其装有对成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)的转录产物具有特异性的分离核酸分子和利用该探针预测某对象是否具有发生青少年特发性脊柱侧凸风险的使用说明书。

本发明另一方面提供试剂盒，其装有对成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)的转录产物具有特异性的分离核酸分子和利用该探针对具有发生青少年特发性脊柱侧凸的对象分类的使用说明书。

在另一具体实施方式中，所述试剂盒还装有用于对象的核苷酸样品的容器。

本发明另一方面提供试剂盒，其装有对成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)具有特异性的抗体和利用该抗体预测对象是否具有发生青少年特发性脊柱侧凸风险的使用说明书。

本发明另一方面提供试剂盒，其装有对成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)具有特异性的抗体和利用该抗体对具有发生青少年特发性脊柱侧凸的对象分类的使用说明书。

本文利用冠词“一”、“一个”和“该”指一个或更多个(即，至少一个)该冠词的语法对象。

本文利用术语“包括”和“包含”表示短语“包括但不限于”和“包含但不限于”，并可与上述短语互换使用。

本文利用术语“例如”表示短语“例如但不限于”，并可与该短语互换使用。

本文所用的术语“发生青少年特发性脊柱侧凸的可能候选对象”包括至少双亲之一具有青少年特发性脊柱侧凸的儿童。年龄(青少年)、性别和其它家族病史等因素是已知导致发生脊柱侧凸风险的因素，并且在某种程度上可用于评估发生AIS的风险。在某些对象中，脊柱侧凸在很短时期内快速发展到需要矫型外科手术的地步(常是在畸形达到科布角≥50°时)。目前在诊断到AIS之时(脊柱侧凸明显时)可用的做法包括目测观察(科布角约为10-25°时)、整形外科装置(科布角约为25-30°时)和外科手术(超过45°)。更可靠地测定进展的风险能1)选择合适的饮食以除去鉴定为导致脊柱侧凸的某些食品；2)选择最佳治疗剂；和/或3)选择介入性最低的可用治疗方法，例如体位锻炼、整形外科装置，或介入性较低的外科手术或不融合(fusion)的外科手术(不融合脊椎且保留脊柱运动性的外科手术)。本发明包括根据测定的发生AIS的风险，选择最有效且介入性最低的已知预防措施或治疗方法。本发明还包括采用本发明方法对AIS患者分类。

本文所用的术语“严重的AIS”指特征在于科布角为45°或以上的脊柱侧凸。

本文所用的术语“Pitx1表达”指Pitx1转录和/或Pitx1翻译。在一更具体的实施方式中，Pitx1表达指Pitx1转录。

本文所用的术语“发生AIS的风险”和“AIS进展的风险”可互换使用，指某对象发生脊柱侧凸(即，脊柱畸形)和/或在将来发生更严重的脊柱侧凸的遗传或代谢倾向性。

本文所用的术语“对象”指任何哺乳动物，包括人、小鼠、大鼠、狗、猫、猪、猴、马等。在一具体实施方式中，其指人。在另一具体实施方式中，其指马，更具体地说，指赛马。

本文所用的术语“血液样品”是全血，包含外周血单核细胞的细胞样品。

已知表达Pitx1的细胞包括肌肉、骨和软骨的细胞，例如成骨细胞、软骨细胞和骨骼成肌细胞，但不限于此。

本发明还涉及测定单基因，例如pitx1的转录物或翻译产物的表达水平的方法。因此，本发明包括用于这种测定的任何已知方法，包括实时PCR和竞争性PCR、Northern印迹、核酶保护、噬菌斑杂交和狭线印迹。

本发明还涉及分离的核酸分子，包括探针和引物以检测Pitx1。在具体的实施方式中，分离的核酸分子具有不超过300、或不超过200、或不超过100、或不超过90、或不超过80、或不超过70、或不超过60、或不超过50、或不超过40或不超过30个核苷酸。在具体的实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少17、或至少18、或至少19、或至少20、或至少30、或至少40个核苷酸。在其它具体的实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少20且不超过300个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少20且不超过200个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少20且不超过100个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少20且不超过90个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少20且不超过80个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少20且不超过70个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少20且不超过60个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少20且不超过50个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少20且不超过40个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少17且不超过40个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少20且不超过30个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少17且不超过30个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少30且不超过300个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少30且不超过200个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少30且不超过100个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少30且不超过90个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少30且不超过80个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少30且不超过70个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少30且不超过60个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少30且不超过50个核苷酸。在其它具体实施方式中，所述分离的核酸分子具有至少30且不超过40个核苷酸。应该知道在实时PCR中，引物还构成探针，而不是该术语的传统含义。可采用已知的方法，利用分布在Pitx1核苷酸序列中的序列设计适合在本发明方法中检测Pitx1的引物或探针。(Buck等，惯常DNA测序引物的设计策略和性能(Design Strategiesand Performance of Custom DNA Sequencing primers).Biotechniques27：528-536(1999年9月))。

虽然本文包括Pitx1的氨基酸和核苷酸序列，但本发明不限于此，包括检测从对象分离的任何Pitx1蛋白质或核苷酸。本发明包括检测表1所示的Pitx1，但不限于此。

表1.Pitx1序列的登录号

所用的本发明探针可以含天然产生的糖-磷酸主链以及修饰的主链，包含硫代磷酸酯、连二硫酸酯、膦酸烷酯和α-核苷酸等。修饰的糖-磷酸主链是公知的(Miller，1988.Ann.Reports Med.Chem.23：295；Moran等，1987.Nucleic Acids Res.，14：5019)。本发明探针可由核糖核酸(RNA)或脱氧核糖核酸(DNA)，优选DNA构成。

可用探针的检测方法的类型包括Southern印迹(DNA检测)、斑点或狭线印迹(DNA、RNA)和Northern印迹(RNA检测)。虽然不是最优选，但标记的蛋白质还可用于检测与其结合的特定核酸序列。其它检测方法包括含有在浸渍片装置上的探针的试剂盒，等等。

本文所用的术语“可检测标记的”指标记本发明的探针或抗体，从而能在本发明方法和试剂盒中检测Pitx1表达。虽然本发明并不特别依赖于利用标记物来检测特定的核酸序列，但这种标记物因提高检测的灵敏度而可能有益。此外，它能实现自动化。可按照熟知的方法标记探针(Sambrook，J.，Fritsch，E.F.和Maniatis，T.(1989).《分子克隆：实验室手册》(MolecularCloning：A Laboratory Manual)，冷泉港实验室出版社(Cold Spring HarborLaboratory Press)，冷泉港(Cold Spring Harbor)，纽约)。标记物的非限制性例子包括3H、14C、32P和35S。可检测标记的非限制性例子包括配体、荧光团、化学发光剂、酶和抗体。可与探针联用并能提高本发明方法的灵敏度的其它可检测标记包括生物素和放射性核苷酸。本领域普通技术人员应明白特定标记物的选择决定了其与探针或抗体的结合方式。

公知可通过几种方法将放射性核苷酸掺入本发明探针。它们的非限制性例子包括利用γ32P ATP和多核苷酸激酶激活(kinasing)探针的5’端，有放射性dNTP存在下利用大肠杆菌的Pol I Klenow片段(例如，在低熔点凝胶中利用随机寡核苷酸引物均匀标记的DNA探针)，有一种或多种放射性NTP存在下利用SP6/T7系统转录DNA区段，等等。

本发明还涉及选择化合物的方法。本文所用的术语“化合物”表示包括天然、合成或半合成的化合物，包括但不限于化学物质、大分子、细胞或组织提取物(取自植物或动物)、核酸分子、肽、抗体和蛋白质。

本发明还涉及阵列。本文所用的“阵列”是有意产生的分子集合，其可经合成或生物合成制备。阵列中的分子可以彼此相同或不同。阵列可采取各种形式，例如可溶性分子文库；系于树脂珠、二氧化硅芯片或其它固体支持物上的化合物文库。

本文所用的“核酸分子阵列”是有意产生的核酸分子集合，其可经合成或生物合成制备成各种不同形式(例如可溶性分子文库；系于树脂珠、二氧化硅芯片或其它固体支持物上的寡核苷酸文库)。此外，该术语“阵列”包括可通过在基板上点样基本上任意长度(例如，长度为1-约1000个核苷酸单体)的核酸来制备的那些核酸文库。本文所用的术语“核酸”指含有嘌呤和嘧啶碱基，或其它天然的、化学或生物化学修饰的，非天然或衍生的核苷酸碱基的任何长度的核苷酸，即核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的聚合物形式或肽核酸(PNA)。多核苷酸的主链可包含RNA或DNA中常见的糖和磷酸基团，或修饰或取代的糖或磷酸基团。多核苷酸可包含修饰的核苷酸，例如甲基化核苷酸和核苷酸类似物。核苷酸序列可间插以非核苷酸组分。因此核苷、核苷酸、脱氧核苷和脱氧核苷酸这些术语通常包括类似物，例如本文所述的那些。这些类似物是某些结构特征与天然产生的核苷或核苷酸相同的那些分子，从而在掺入核酸或寡核苷酸序列时能与溶液中天然产生的核酸序列杂交。这些类似物一般通过替代和/或修饰碱基、核糖或磷酸二酯部分而衍生自天然产生的核苷和核苷酸。可视需要调整这些改变以使杂交形成稳定或去稳定或提高与互补核酸序列杂交的特异性。

本文所用的“固体支持物”、“支持物”和“基板”可互换使用，指具有刚性或半刚性表面的材料或一组材料。在许多实施方式中，固体支持物的至少一个表面应基本上是平的，虽然在一些实施方式中优选为不同的化合物而使用例如孔、凸起的区域、针、蚀刻槽等来物理分隔合成区域。按照其它实施方式，固体支持物可采取珠、树脂、凝胶、微球的形式或其它几何构型。

本发明可利用任何已知的核酸阵列。例如，这些阵列包括基于短或较长寡核苷酸探针或引物以及cDNA或聚合酶链式反应(PCR)产物的那些阵列(Lyons P.，2003.“用于表达概况分析的点样微阵列资源进展”(Advances inspotted microarray ressources for expression profiling).“功能基因组和蛋白质组学简报”(Briefings in Functionnal Genomics and Proteomics)2，21-30)。其它方法包括基因表达系列分析(SAGE)、差异显示(Ding G.和Cantor C.R.，2004.“核酸的定量分析-最近几年的进展”(Quantitative analysis of nucleicacids-the last few years of progress).J Biochem Biol 37，1-10)以及消减杂交法(Scheel J.，Von Brevern M.C.，Horlein A.，Fisher A.，Schneider A.，BachA.2002.“转录组学黄页”(Yellow pages to the transcriptome).Pharmacogenomics 3，791-807)、差异筛选(DS)、RNA任意引物(RAP)-PCR、差异表达序列的限制性内切核苷酸分析(READS)、扩增限制性片段-长度多态性(AFLP)。

就核酸杂交实验，例如Sourthern和Northern杂交而言，“严格杂交条件”和“严格杂交洗涤条件”是序列依赖性的，并且在不同环境参数下不同。T_m是50％靶序列与完美匹配探针杂交的温度(在规定的离子强度和pH下)。特异性通常与杂交后洗涤有函数关系，关键因素是最终洗涤溶液的离子强度和温度。对于DNA-DNA杂交体，可从Meinkoth和Wahl，1984的公式大致获得T_m：T_m 81.5℃+16.6(log M)+0.41(％GC)-0.61(％form)-500/L；其中M单价阳离子的摩尔浓度，％GC是DNA中鸟苷和胞嘧啶核苷酸的百分比，％form是杂交溶液中甲酰胺的百分比，L是以碱基对计的杂交体长度。对于每1％的错配，T_m降低约1℃；因此，可调节T_m、杂交和/或洗涤条件以杂交具有所需相同性的序列。例如，如果要找寻＞90％相同性的序列，可将T_m降低10℃。选择的严格条件通常比特异性序列及其互补序列在规定离子强度和pH下的热解链温度I约低5℃。然而，极其严格的条件采用的杂交和/或洗涤比热解链温度I低1、2、3或4℃；中等严格条件采用的杂交和/或洗涤比热解链温度I低6、7、8、9或10℃；低严格条件采用的杂交和/或洗涤比热解链温度I低11、12、13、14、15或20℃。采用所述的方程、杂交和洗涤条件以及所需的T，普通技术人员知道杂交和/或洗涤溶液的严格性有固有差异。如果所需程度的错配导致T低于45℃(水溶液)或32℃(甲酰胺溶液)，优选增加SSC浓度从而可采用较高的温度。核酸杂交的详细指导可见Tijssen，1993。选择的高严格杂交和洗涤条件通常比特异性序列在规定离子强度和pH下的热解链温度T_m约低5℃。

高严格洗涤条件的一个例子是72℃，0.15M NaCl，约15分钟。严格洗涤条件的例子是65℃，0.2×SSC洗涤15分钟(SSC缓冲液可参见Sambrook，J.，Fritsch，E.F.和Maniatis，T.(1989).《分子克隆：实验室手册》，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约)。常先进行低严格洗涤以除去背景检测信号再进行高严格洗涤。用于双链体，例如100核苷酸以上的中等严格洗涤的例子是，例如45℃，1×SSC，15分钟。用于双链体，例如100核苷酸以上的低严格洗涤的例子是，例如40℃，4-6×SSC，15分钟。对于短探针(例如，约10-50个核苷酸)，严格条件通常涉及低于约1.5M的盐浓度，更优选约0.01-1.0M Na离子(或其它盐)浓度，pH 7.0-8.3，温度通常是至少约30℃，对于长探针至少约为60℃(例如，＞50个核苷酸)。还可通过加入去稳定剂，例如甲酰胺实现严格条件。总之，与在特定杂交试验中用无关探针观察到的信噪比相比，2×(或更高的)信噪比表明检测到特异性杂交。如果所编码的蛋白质基本上相同，那么在严格条件下彼此不杂交的核酸仍是基本上相同的。例如，当利用遗传密码所允许的最大密码子简并性产生核酸拷贝时，便发生这种情况。

对于特定的探针，选择的非常严格条件等于T_m。在Sourthern或Northern印迹的滤膜上，与具有100个以上互补残基的互补核酸杂交的严格条件的例子是50％甲酰胺，例如37℃，在50％甲酰胺、1M NaCl、1％SDS中杂交，60-65℃、0.1×SSC洗涤。示范性低严格条件包括37℃，用含30-35％甲酰胺、1M NaCl、1％SDS(十二烷基硫酸钠)的缓冲液杂交，50-55℃、1×至2×SSC(20×SSC＝3.0M NaCl/0.3M柠檬酸三钠)洗涤。示范性中等严格条件包括37℃，在40-45％甲酰胺、1.0M NaCl、1％SDS中杂交，和55-60℃、0.5×至1×SSC洗涤。

用含氯化四甲铵(TeMAC)的溶液洗涤能利用寡核苷酸杂交检测单错配，因为这种错配可导致退火温度产生10℃的差异。确定洗涤温度的公式是Tm(℃)＝]-682(L^-1)+97，其中L表示用于杂交的寡核苷酸长度。

本发明涉及将AIS分类和/或预测某对象是否具有发生AIS风险的试剂盒，所述试剂盒装有本发明的分离核酸、蛋白质或配体，例如抗体。例如，本发明的分区试剂盒(compartmentalized kit)包括试剂包含在不同容器中的任何试剂盒。这些容器包括小玻璃容器、塑料容器或者塑料条或纸条。这些容器能将试剂自一个隔室有效地转移至另一隔室，因而样品和试剂不会交叉污染，还能将各容器中的试剂或溶液以定量方式自一个隔室加入另一个。这些容器包括容纳对象样品(DNA基因组核酸、细胞样品或血液样品)的容器，含有(在本发明的一些试剂盒中)本发明方法所用探针的容器，含有酶的容器，含有洗涤试剂的容器和含有用于检测延伸产物的试剂的容器。本发明试剂盒还装有利用这些探针和/或抗体对AIS分类或预测某对象是否具有发生AIS风险的使用说明书。

本文在“纯化抗体”这一表述中所用的术语“纯化”只是意味着区分人造抗体与动物针对其自己的抗原而天然产生的抗体。因此，含有抗-Pitx1抗体的原始血清和杂交瘤培养基是本发明含义内的“纯化抗体”。

本文所用的术语“配体”宽泛地指天然、合成或半合成的分子。因此，术语“分子”表示，例如化学物质、大分子、细胞或组织提取物(取自植物或动物)等。分子的非限制性例子包括核酸分子、肽、抗体、碳水化合物和药剂。可通过各种方法选择和筛选适合本发明的配体，包括随机筛选、理性选择和采用例如蛋白质或配体建模方法，如计算机建模的理性设计。术语“理性选择”或“理性设计”用于限定根据本发明的相互作用结构域的构型而选择的化合物。普通技术人员应知道具有非天然产生的修饰的大分子也属于术语“配体”的范围内。例如，可通过上述建模方法产生医药工业熟知的肽模拟物(peptidomimetic)，通常称为肽类似物。

抗体

针对Pitx1的单克隆和多克隆抗体均属于本发明的范围内，因为可通过本领域技术人员熟知的方法产生它们。此外，针对第一抗体的任何第二抗体(单克隆或多克隆)也包括在本发明的范围内。

本文所用的术语“抗-Pitx1抗体”和“免疫特异性抗-Pitx1抗体”指与Pitx1蛋白质特异性结合(与其相互作用)，并且除与Pitx1蛋白质共有相同抗原决定簇的蛋白质外，与其它天然产生的蛋白质基本上不结合的抗体。术语抗体或免疫球蛋白以最宽泛的含义使用，涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体和抗体片段，只要它们显示所需生物学活性。抗体片段包含全长抗体的一部分，通常是其抗原结合区或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab′、F(ab′)₂和Fv片段，双抗体、线性抗体、单链抗体分子、单域抗体(例如，来自羊驼)、鲨鱼NAR单域抗体和由抗体片段构成的多特异性抗体。抗体片段还指包含CDR或抗原结合结构域的结合部分，包括但不限于VH区(V_H、V_H-V_H)、抗运载蛋白(anticalin)、PepBodies^TM、抗体-T-细胞表位融合体(Troybodies)或肽抗体。此外，针对第一抗体的任何第二抗体(单克隆或多克隆)也包括在本发明范围内。

总之，制备抗体(包括单克隆抗体和杂交瘤)和利用抗体检测抗原的技术是本领域熟知的(Campbell，1984，刊于《单克隆抗体技术：生物化学和分子生物学的实验室技术》(Monoclonal Antibody Technology：LaboratoryTechniques in Biochemistry and Molecular Biology)，埃尔赛维科学出版公司(Elsevier Science Publisher)，阿姆斯特丹，荷兰)和Harlow等，1988(刊于：《抗体实验室手册》(Antibody A Laboratory Manual)，CSH实验室(CSHLaboratories))。术语抗体在本文包括多克隆、单克隆抗体和抗体变体，例如单链抗体、人源化抗体、嵌合型抗体和抑制或中和其对映体(Hyphen)中的各相互作用结构域和/或对其有特异性的抗体的免疫活性片段(例如，Fab和Fab’片段)。

优选通过多次皮下(sc)、静脉内(iv)或腹膜内(ip)注射相关抗原(用或不用佐剂)在动物中产生多克隆抗体。利用双功能或衍生剂，例如马来酰亚胺苯甲酰磺基琥珀酰亚胺酯(maleimidobenzoyl sulfosuccinimide ester)(通过半胱氨酸残基偶联)、N-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl₂或R¹N＝C＝NR(其中R和R¹是不同的烷基)，将相关抗原与在待免疫的物种中有免疫原性的蛋白质，例如匙孔

血蓝蛋白、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂偶联可能是有用的。

可利用抗原、免疫原性偶联物或衍生物，通过将抗原或偶联物(例如，对于家兔是100μg，对于小鼠是5μg)与3体积的完全弗氏佐剂混合并在多个部位真皮内注射该溶液来免疫动物。一个月后，通过在多个部位皮下注射用完全弗氏佐剂配制的该抗原或偶联物(例如，用于免疫的原始剂量的1/5-1/10)来加强免疫动物。7-14天后，对动物采血，分析血清的抗体滴度。加强免疫动物直至滴度达到平台期。对于偶联物免疫，优选用抗原相同但偶联于不同蛋白质和/或通过不同交联剂的偶联物加强动物。还可在重组细胞培养物中将偶联物制备成蛋白质融合体。聚集剂，例如明矾也适用于增强免疫应答。

可采用Kohler等在Nature，256：495(1975)中首次描述的杂交瘤方法，或可通过重组DNA方法(例如，美国专利号6,204,023)制备单克隆抗体。还可采用美国专利号6,025,155和6,077,677以及美国专利申请公布号2002/0160970和2003/0083293所述的技术制备单克隆抗体(也可参见，例如Lindenbaum等，2004)。

在杂交瘤方法中，免疫(如上所述)小鼠或其它合适的宿主动物，例如大鼠、仓鼠或猴以引发产生或能产生特异性结合免疫所用抗原的抗体的淋巴细胞。或者，可体外免疫淋巴细胞。然后利用合适的融合剂，例如聚乙二醇将淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合以形成杂交瘤细胞。

在合适培养基中接种和培养如此制备的杂交瘤细胞，所述培养基中最好含有一种或多种抑制未融合亲代骨髓瘤细胞的物质。例如，如果亲代骨髓瘤细胞缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT或HPRT)，杂交瘤的培养基通常包含次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(HAT培养基)，这些物质防止HGPRT-缺陷型细胞生长。

结合附图阅读下文对具体实施方式(只是举例)的非限制性描述后可更明白本发明的其它目的、优点和特征。

附图简述

在附图中：

图1比较了严重患病的AIS患者和匹配对照对象的成骨细胞的Pitx1表达。对照对象(n＝46)和AIS患者(n＝29)的人成骨细胞中pitx1基因表达的逆转录-聚合酶链式反应。在对照组织中检测Pitx1特异性mRNA转录物。在所有检测的AIS样品中观察到pitx1基因表达丧失，β-肌动蛋白表达用作内标；

图2显示了10kb pitx1启动子区域(SEQ ID NO：1)的序列和人对象之间该pitx1启动子区域的多态性。用于覆盖不同扩增子的引物见下表4，所述扩增子覆盖该10kb区域；

图3显示Pitx1mRNA的序列(SEQ ID NO：2)(NM_002653)；和

图4显示Pitx1氨基酸序列(SEQ ID NO：3)(NP_002644)。

说明性实施方式的描述

本发明通过RT-PCR分析证明从严重AIS患者(n＝46)的外科手术获得的活检样品的成骨细胞中pitx1基因表达丧失，而从非-脊柱侧凸患者(外伤病例)得到的成骨细胞仍表达Pitx1(n＝29)。

通过以下非限制性实施例进一步详细说明了本发明。

人样品

获得了蒙特利尔的圣贾斯汀大学医院(Ste-Justine University Hospital)、蒙特利尔儿童医院(Montreal’s Children Hospital)和兄弟会儿童医院(TheShriners Hospital for Children)的个体和集体机构检查委员会(individual andcollective Institutional Review Board)各自批准的所有研究参与人员的知情同意书。所有个体经过包括病史和临床数据在内的一系列步骤筛选，以确保该问题的特发性性质。然后检查脊柱X光照片。如果某人的病史和体检与特发性脊柱侧凸的诊断一致，在X光照片上发现冠状面(coronal plane)有最少10度曲率并伴有脊椎扭转，则认为他患有AIS。还根据该疾病的潜在家族性分布逐个筛选了参与者。如果发现该疾病是家族性的，平行筛选家族成员是否存在该状况。来看外伤门诊的其它患者(无脊柱侧凸)用作对照。

检查的AIS和对照对象的临床特征分别示于表2和表3。诊断为非AIS的脊柱侧凸患者作为对照对象测试。

表2.检查的AIS对象的临床特征

编号	性别	年龄	弯曲类型	科布角	遗传性
						1006	f	12,65	双主弯(double major)	61-46	否
1007	m	18,67	右胸腰	61	是
						1045	f	19,48	左胸腰	38	否
1066	f	17,33	右胸	53	是
						1137	f	20,54	双主弯	65-42	否
1167	m	14,58	左胸	49	否
						1263	f	13,32	双主弯	53	否
1266	m	15,56	双主弯	52	否
						1274	f	13,27	双主弯	42	否
1276	f	15,26	左胸	42	否
						1277	f	12,73	双主弯	57-48	否
1280	f	14,4	双主弯	56-46	否
						1294	f	16,92	左胸	N/A	是
1306	f	13,15	双主弯	77-48	是
						1308	f	15,3	双主弯	77-20	否

1310	f	15,52	双主弯	55-42	否
						1311	f	14,6	双主弯	78	是
1315	f	14,62	右胸	91	否
						1317	f	13,97	右胸	53	是
1318	f	13,7	左胸腰	49	否
						1322	f	13,11	双主弯	51	否
1325	f	16,16	左胸	44	是
						1329	m	14,02	右胸腰	61	是
1335	f	17,6	双主弯	47-50	否
						1337	f	14,13	双主弯	57-48	是
1339	f	14,28	右胸	31	否
						1346	f	13,54	双主弯	50-34	是
1347	f	18,55	双主弯	56-45	否
						1349	f	11,69	左胸腰	74	否
1352	f	7,8	右胸	51	否
						1360	f	9,92	双主弯	53-46	是
1385	f	16,06	双主弯	42-23	否
						1390	f	15,61	左胸腰	53	否
1391	f	15,01	左腰	54	否
						1395	f	17,79	左胸腰	84	是
1402	f	15,82	右胸	51	否
						1406	f	14,89	双主弯	62-60	否
1409	f	13,62	右胸	40	否
						1410	f	13,73	右胸	56	是
1417	f	13,24	右胸	59	是
						1418	f	13,08	右胸	41	否
1420	f	13,42	双主弯	60-48	是
						1422	f	12,44	双主弯	60-50	是
1425	f	13,42	右胸	68	是
						1439	f	N/A	右胸	69	是
1442	f	N/A	右胸	60	否

N/A：无法获得

表3.检查的对照对象的临床特征

编号	性别	年龄	健康状况	弯曲类型	科布角	遗传性
							C100	f	N/A	健康	nd	nd	否
C101	N/A	N/A	健康	nd	nd	否
							C102	f	18	健康	nd	nd	否
C103	N/A	N/A	健康	nd	nd	否
							C104	f	14	健康	nd	nd	否

C105	f	11	健康	nd	nd	否
							C106	m	12	健康	nd	nd	否
C107	f	13	健康	nd	nd	否
							C108	f	12	健康	nd	nd	否
C109	m	14	健康	nd	nd	否
							C110	m	15	健康	nd	nd	否
C111	m	14	健康	nd	nd	否
							C112	f	11	健康	nd	nd	否
C113	m	14	健康	nd	nd	否
							C114	N/A	N/A	健康	nd	nd	否
C115	m	17	健康	nd	nd	否
							C116	m	12	健康	nd	nd	否
C117	m	16	健康	nd	nd	否
							C118	m	12	健康	nd	nd	否
C119	f	15	健康	nd	nd	否
							C120	f	15	健康	nd	nd	否
C121	f	8	健康	nd	nd	否
							1285	f	15,87	麻痹性脊柱侧凸	N/A	72	是
1293	m	11,79	先天性脊柱侧凸	左腰	38	否
							1341	f	11,14	先天性脊柱侧凸	双主弯	61-65	否
1375	f	13,71	先天性脊柱侧凸	右胸腰	53	是
							1431	m	19,13	神经性脊柱侧凸	双主弯	90-90	否
1434	f	12,43	先天性脊柱侧凸	双主弯	79-77	否
							1436	f	13,93	脊柱后侧凸	脊柱后凸	120	否

N/A：无法获得；nd：未检测

成骨细胞培养

从AIS患者的脊柱手术和对照对象的外伤手术中取得的骨样品中获得成骨细胞。选择该类细胞作为上述该项研究的细胞模型(Rodriguez MM，Ron D，Touhara K，Chen CH，Mochly-Rosen D.“RACK1，一种蛋白激酶C锚定蛋白协调活化蛋白激酶C的结合与体外选择普列克底物蛋白同源结构域”(RACK 1，a protein kinase C anchoring protein，coordinates the binding ofactivated protein kinase C and select pleckstrin homology domains in vitro).Biochemistry.1999；38：13787-13794)。

分离人成骨细胞

在所有情况中，在手术中从源自脊椎(根据所进行的外科手术从T3到L4)的骨样品获得成骨细胞。无菌条件下用截骨刀(bone cutter)将骨片段机械截成小片，在100mm培养皿中采用以下条件温育：37℃、5％CO₂，在含有10％胎牛血清(FBS)(认证的FBS，加拿大安大略省伯灵顿的英杰公司(Invitrogen，Burlington，ON，Canada))和1％青霉素/链霉素的DMEM培养基(英杰公司(Invitrogen))存在下。30-天后，通过胰蛋白酶处理将衍生自骨小片的汇合成骨细胞与剩余的骨片段分开。

总RNA分离和RT-PCR

采用标准的Trisol试剂法(英杰公司)从成骨细胞中提取RNA。

取自成骨细胞的RNA用于cDNA合成，所述合成用英杰公司Thermoscript^TM RT-PCR系统和各自的方案进行，条件如下所示：所用的酶：英杰(Invitrogen)^TM的Taq DNA聚合酶。PCR条件：95℃，5分钟，热启动(1个循环)。随后是3个反应(32个循环)：94℃，45秒变性；55℃，45秒；引物退火；72℃，1分钟延伸；72℃，2分钟最终延伸(1个循环)；4℃，20分钟暂停；持续时间：2小时42分钟。利用正义引物5’-GGAAATCGTGCGTGACAT-3’(SEQ  ID NO：4)和反义引物5’-TCATGATGGAGTTGAATGTAGTT-3’(SEQ ID NO：5)扩增人β-肌动蛋白的233bp片段来测试cDNA的质量。对于定量分析，相对于持家基因β-肌动蛋白对所有扩增产物进行标准化。用1.5％琼脂糖凝胶分离PCR扩增产物，通过溴化乙锭染色来目测观察。

Pitx1的表达分析

利用正义引物5’-GACCCAGCCAAGAAGAAGAA-3’(SEQ ID NO：6)和反义引物5’-GAGGTTGTTGATGTTGTTGAGG-3’(SEQ ID NO：7)从cDNA扩增501bp长度的Pitx1编码区，PCR条件如下所示：所用的酶：英杰^TM的Taq DNA聚合酶。PCR条件：95℃，10分钟，热启动(1个循环)；随后是3个反应(34个循环)：94℃，45秒变性；69℃，45秒，引物退火；72℃，1分钟延伸；72℃，2分钟最终延伸(1个循环)；4℃，20分钟；4℃暂停；持续时间：2小时34分钟11秒。

Pitx1启动子测序

扩增和测序pitx1启动子的10kb区域以筛选突变。所用酶：英杰^TM的高保真铂金

Taq DNA聚合酶，所用条件如下所示：95℃，5分钟热启动(1个循环)。随后是3个反应，35个循环：94℃，45秒变性；61.8℃，45秒引物退火；72℃，1分钟延伸；72℃，5分钟最终延伸(1个循环)；4℃，20分钟；和4℃暂停。

将100ng基因组DNA混合成含有200微摩尔dNTP、1,5mM MgCl₂、10pM各引物(所用引物的清单见下表4)和1U Pfx DNA-聚合酶(英杰公司)或其它DNA聚合酶的25μl最终体积。

PCR条件：用英杰^TM的铂

pfx DNA聚合酶扩增区域PP1、PP2、PP3、PP6、PP7，PCR条件如下所示：95℃，5分钟热启动(1个循环)；随后是3个反应(35个循环)：94℃，30秒变性；60℃，30秒引物退火；68℃，1分钟20秒延伸；68℃，2分钟最终延伸(1个循环)；4℃，20分钟；4℃暂停。持续时间：2小时35分钟26秒。

用英杰^TM的高保真铂

Taq DNA聚合酶扩增区域PP4、PP5、PP8、PP9和PP10，所用条件如下所示。95℃，2分钟热启动(1个循环)；随后是3个反应(35个循环)：94℃，45秒变性；60℃，45秒引物退火；72℃，1分钟20秒延伸；72℃，5分钟最终延伸(1个循环)；4℃，20分钟；和4℃暂停；持续时间：2小时53分钟4秒。

表4：PITX启动子引物

PP1(962bp)	正向引物5’-CTGTTTGCTCAAGACGCTGA-3’(SEQ ID NO：8)反向引物5’-CTCGGCCTCACAAAAGAAAC-3’(SEQ ID NO：9)
		PP2(966bp)	正向引物5’-TGTCTGCATTCAGGCTGTTC-3’(SEQ ID NO：10)反向引物5’-GATTCCCTCCTCGAGTCCTT-3’(SEQ ID NO：11)
PP3(1039bp)	正向引物5’-CAAGTGAGCTGGATGCTGAA-3’(SEQ ID NO：12)反向引物5’-AGGGAGTGTCCCTTCACAGA-3’(SEQ ID NO：13)
		PP4(1085bp)	正向引物5’-GCTCAGCCATTCTCAGGAAC-3’(SEQ ID NO：14)反向引物5’-GCCATTGTCCCAGTCAAGAT-3’(SEQ ID NO：15)
PP5(1011bp)	正向引物5’-TCGCGTCAAGAGGGTATTTT-3’(SEQ ID NO：16)反向引物5’-TAGGACCCATGGCTCTACCC-3’(SEQ ID NO：17)
		PP6(1098bp)	正向引物5’-CACGAGTCAGGTGGGAAACT-3’(SEQ ID NO：18)反向引物5’-GACGTCTGCTGCTTTTCTGC-3’(SEQ ID NO：19)
PP7(963bp)	正向引物5’-AGGCACGGACTAGCAGGAC-3’(SEQ ID NO：20)反向引物5’-ATGCGGACGAAGCCAGAG-3’(SEQ ID NO：21)
		PP8(986bp)	正向引物5’-TTAGCATTCAGCCCCTCTGT-3’(SEQ ID NO：22)反向引物5’-TTCATGAGATGCAGTCAGCAG-3’(SEQ ID NO：23)
PP9(951bp)	正向引物5’-ACAACTGGTAGGGGCAACAG-3’(SEQ ID NO：24

	反向引物5’-TGTGTGGCTTTGGCAAATAA-3’(SEQ ID NO：25)
		PP10(990bp)	正向引物5’-GCACTGTGCTCCAACTGTGT-3’(SEQ ID NO：26)反向引物5’-GGGGGAGTGTTCTTTTCCTT-3’(SEQ ID NO：27)

实施例1

比较AIS对象的成骨细胞和匹配对照的成骨细胞中的Pitx1表达

为测定pitx1是否在AIS发生和/或进展中起到遗传控制的作用，利用从成骨细胞培养物制备的RNA进行pitx1基因的表达分析，该培养物源自AIS严重患者(n＝46)和非-脊柱侧凸患者(外伤病例)对照对象(n＝29)进行手术时获得的活检样品。

从图1可以看出，源自AIS患者的所有成骨细胞显示pitx1mRNA表达丧失，而对照对象仍表达该mRNA。

实施例2

测定对象样品中的Pitx1表达

从患者分离诸如肌肉(在脊柱旁区域中利用，例如针)、骨、软骨、外周血单核细胞(PBMC，如T和B淋巴细胞以及巨噬细胞)等组织或衍生自表达Pitx1的组织的任何细胞。采用任何标准RNA提取方法，例如标准Trisol试剂方法从这些组织中提取RNA。采用例如RT-PCR或实时PCR从cDNA扩增501bp长度的Pitx1编码区。正义引物是5’-GACCCAGCCAAGAAGAAGAA-3’(SEQ ID NO：6)，反义引物是5’-GAGGTTGTTGATGTTGTTGAGG-3’(SEQ ID NO：7)，PCR条件如下所示：所用酶：英杰^TM的Taq DNA聚合酶。PCR条件：95℃，5分钟热启动(1个循环)。随后是3个反应(32个循环)：94℃，45秒变性；55℃，45秒引物退火；72℃，1分钟延伸；72℃，2分钟最终延伸(1个循环)；4℃，20分钟暂停。持续时间：2小时42分钟。

虽然上文借助具体实施方式描述了本发明，但本发明可作出改进而不脱离随附权利要求书所限定的本发明构思和性质。

序列表

<110>褚圣-贾斯汀公司(CHU Sainte-Justine)

     A.莫罗(Moreau，Alain)

<120>对青少年特发性脊柱侧凸分类的方法，所用的分离核酸分子及使用该核酸分子的试剂盒

<130>14033.35

<140>US 60/908,417

<141>2007-03-28

<150>US 60/895,490

<151>2007-03-19

<160>27

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>10006

<212>DNA

<213>智人(Homo Sapiens)

<400>1

cccaaattgt ctatctgtga tagtggctgt gccccttcgg gccctgagca ccctgtgtcc   60

tgtgcagcag tcagatatct ggagggagac tgaggcactg gctgcagagc ttgtgatcat  120

gagagagact cactaggact acagatgggt aaactgaggc cttcgagggg gcagctccag  180

aaaggcaggg gccataatgt ctcaccttca tatttcccgt gccaagctgt ggccttctgc  240

attcatggca gatgagtgga caaaggctga tggactgatg gagaaacaaa gggatagatg  300

gagcagctgg gcagctcagc aaatgatgct gcaatgatct gcttccaact cacctcaaat  360

ccatccttct ctctccaggc agagtgggct tttaagatac acatctggcc aggtctctca  420

ctgttcaaac ccttcatctg ctcctttttg ccttcaggat aacatcccac cctcctatca  480

aggactatgg agccctgtgg gatctggttc ccacttgatt ctccaacttc ctcttcccct  540

atgccctgcc ttctcatctg ttccagtgct attatgaagc cacacgttct tcctttatta  600

tcaagcatac cacagtttat ctcacctcag aggctttgca cagtatattt tcctagggag  660

gggtccccag gtggtagaaa aacggttaca gccaactcct ccatgtgtca ctcaagaccc  720

ttcaacagca ggctgcagat ttcctctcca gcactgtgct ccaactgtgt aatggatttc  780

tgtgtctgcc tccttgactc aacccaaatg aacaagagcc atctatctct gtatctctgc  840

aatcacaggc acaaaatagg tgctctctac attttttcca acctgagagg ccattctaga    900

agggtctcag gccacggttc tgtccagtat tccatgcaga tgctgacagg actgcaatta    960

aaaaaatact tgagatgccc aaatgcccaa atagcttctc attttgcttt gactaccaat    1020

aattgcacag tgcaatagaa taatgctcaa atacattaac atcttacttg atcctagggg    1080

gtcctctcta cttttaaagc ctcaaacttc ctccctctca caggtgaaaa ggggagtaca    1140

aatacattcc ctcccttgct ctgcggatcc attcctacag gtagtcaaga ctctgagctt    1200

cccctctgac tttctggcag tgcttcacct ctccccacag atgagtgcag gaacaattct    1260

aacagacttc agactcttcc aacagagcca atccctcccc atcacgttgg agtggacttg    1320

ctacccacac catcaacagg cccctgagaa acttcacagg gcaggggctt ctttggtaaa    1380

accaaccctt tccttccacc agctcagaga agttgttcca gatagatgcc aggattcttg    1440

gaggagcatg gtgattctgg ggtggagcct ctgaccctgg ccaaccaaag gcctgagcca    1500

ctcttccccc acaaagtgat tggcgcagga gtgggcatgt aagctggacc cagccaatca    1560

gcataaccaa atcccttgcc caccctgggg agggtcctat agttgttgcc aagagaggct    1620

cacccctgtt ctcaagaagc ttacaactgg taggggcaac aggttttaat ctatcattac    1680

acaaatattt aatttcaata ctgttgcaat aagagctatg aaggaaaaga acactccccc    1740

tacttttact tggtgttaag atttgaagaa gaaaaaaaaa aaacactgcc tgaaggattg    1800

ttatggcctt ctatataata gtggctgcag acatttgccc attatgttca gcatgaaccc    1860

atgtgacaaa ttcatcaaag cgttttgcac tagggagaaa aatttgtatt agaggaagca    1920

cagcagtttg gactgaaaga caaagaaaat tcagccaatt ctgctgatct tttttgatgg    1980

ggcacctgga agctgaaagc taaagtggta ctcaggaaca gggactgcta cttctgttcc    2040

tggtgaatcc tgccccaaac ctcctctctc tctgattcct gattccactg tgccagtggg    2100

aatatatgct ccccaagatg tcaaaactaa agggaaattg caaaaaatat atacatatat    2160

ttttagagag aaaataagat tataaaaaat gtgttttgta ccccccaagt ttcactaaga    2220

acttcctgac ttccaggccc tggttgtgcc ccacgcacca gcctgcccag ctttcctgga    2280

ccaaacttcc tagcacctaa gcaggggatg agggcagata aactaaatca gaaaagggat    2340

ctgttcctcc tagactcaac caacatgacc accgtgggga aagaagaaac aaaaacaaga    2400

gcaaactctc ttaaagagca gcctggcagc tatcaccatt agcattcagc ccctctgtcc    2460

acaggactca ggaccaaacc cctcaccttc actatcccat ccgtttccca agaagcagaa    2520

atacttattc tcacatttca cagatgggga agctgaggct aggagaggtt atgttatttg    2580

ccaaagccac acaactagta aaagccactg acaagattct ggctcaggcc atcaggtgcc    2640

agaggcagca ttttttggca ccacaggccc tgcctgggaa caagagcatg cagaaaatct    2700

cacaagagat gggaacaaaa tttggaaaat tgctagcgtg cagggagggg ggaaggtgtg    2760

atttcctgct acagacgcca gagtaaaagc caccccagga gtgcctgtgc agccctccat    2820

agtaaggtcc agcggctgca tttatgccca aagatgcccc tggtgcttgg agtggaagga    2880

agattccaga gacaagatta gaaacttctc agcttagcag ctctagggct ggacccgcca    2940

acaagccatt ttacacataa agcagtcaat gggagggggt agacgtaggg ggctaaactc    3000

cccacagcac agggtccaag ttggtagact gcactttctc caggcgcagg tccgctagtg    3060

ccggcatcgg ggactcgtta tcttaacttg cgaccctggg tgcacagagc cctgcacaca    3120

ccactggaga ggggttcctg ctgtcgaggg ttgagaggag ggtatggagt ccctggaaca    3180

gcacgacagg gtgcagaggc cacctggcag ggcctgaaca ccgaggcctc tgtgagcttg    3240

ggtcgggccg gcttcccgct tcggaggttg gggagggggt cgtgggtctc tgcgttccca    3300

ggccaagcgg ccctggaggc acggactagc aggacgccga ggtggcgcgg gtcgcggcct    3360

ctcccgcagc agctgtcggc gagaaccagg cagggaggcg ccgctgctga ctgcatctca    3420

tgaaagattc aggcccggct gccgcgctgc catctcccgg caccttgcgc cggaaacggt    3480

cgctctggag cccgtggccg tcggcgggca ggcttagccg ctccagtccc tgagaaaggc    3540

aggccacagc ccgacctgcc ctgtggtccc atcccataat cccaacagca agcaggctca    3600

ggctgggcac ttcggggtac caggagtagg ttcggccaac tggtttccac catgaggctt    3660

cgcgcacagg gttatctggc cacgaggcaa cgctggggag ccctgtggcc tgagggtggg    3720

caaaggacag gctcccagtt cccttgcgtc cagcccgtct cccagcggca gccagccagg    3780

aacggcctgc ggggccacag gggtggaggc gtcaccgttc gcaggcccgc agcaggatgg    3840

tcgctggggg atgtgcaggc ataggggttg gacaaggggc cccagaagtg tctgtcctga    3900

ggggttggtg tgccctttcc tcaccagccc agcccctgag gagagggaag aaggcaattc    3960

ccccaaccag ggcaggtcgg gcggttgccc caccctaaca ccccctaccc ccaaacacag    4020

aaaacctggg gtctgtcctc aaacctccct ggctgccacg ctctgggcag cggactctcc    4080

ctgccaacac gcaagaccag ctccctcccg caggctgagc agaaagaaga aaggtccaat    4140

ctcaaaaccc caaactcgac caccagcccc cgtctaaacg gaagtagggc cagcccctca    4200

cgagtcaggt gggaaactgg gcccagggag agaaagtgcc ccagggccag gctgggaccc    4260

gctctggctt cgtccgcatg cggcagggcc cctccacgga ggtcccaggg cgcgctcccc    4320

ggcctcgagg cccggccgcc agccgcgcgg accccagcct acgccccgag ggaggccagg    4380

acccctagcc ggcgggactg cgcgccgccc ctctccccgc aggtcccggc gaacacctag    4440

cttcccctcc ccccaccctt cccgcctccc ggccagtgtc cccgccttcc ccgcgggcga    4500

cgggcggcgg cggcgggagg agcgggccga gccgaggaag ccccggcctc gcgcgctggg    4560

atgtagcgaa ccagcagggg ccgaagaacc gtgcagtgcc agagccagag ctggatccgg    4620

ggccccagcc ggagccgaaa cctgagccag agtccgcggc gggcgagccc ggagcccacg    4680

agccgcagac gcagcgctgc ccaggtgggg taagagacgc tgggctaggg gcgcagggtc    4740

tccgcggtgg aggggcgcag ggaggtggcg gccgagtcct gcgcagtttg ctcctggcgt    4800

gtgtgggtcc acccggcggc gcgggacagc gcaaggcgcg gaaggtcagg agccttcgag    4860

gcagcgcgag gagctcgttc ctgcgcccag ggcacagtca tagccgccgt caccgggtgc    4920

tacctcaccc aaccggcggg atcaaccctc tgctttggct ccgggcacct caagagggta    4980

gcagcctcgg gggcacgggc cacggccccg cgaagggcac aacctgagaa gcccgtggca    5040

gcccctcgca gcgtcgggtg acacagggct cccccacccc caggagaagt gggcaggaga    5100

gagggccgcc cgctgctccc cgctgcgtcc agggatggag ggccccacca cccatggaat    5160

tgctggcccc tctgcgtggc ccgggacttc agccgtggct tcgcgtcaag agggtatttt    5220

tcctaaacga aaccgcttcg ttcgttcgtt cgttcgttcg ttcgggcagc aatgccgcag    5280

aaaagcagca gacgtcggtc cgcgccctgg ctctcttcgc cccggacccc gacgtcccgc    5340

cgcagcgctc ggaggtgccc ccagcccaag gcagcctgct ctcgccggca caggtcgggc    5400

tttttcttcc caggagagaa accccaattc ccttcgtaac gtccaataaa gacattcccg    5460

cggcttctcc caggtttggt tgttgacgca gggtcccgga gcacgcagtc gcttctcaag    5520

aaccgggtct cggatttctg aaattgacca gcttcgtaaa ttggagccta ttctcccgcg    5580

gcaaaggcag ggccccaaag ccgggatcgc agtaatggga accccaggct ggaatccggg    5640

tcccaagctt ttccgattta ggaattcccc gaatctacaa atatttagtc cacttttctg    5700

aaaaactaaa ttctgaaaaa cacaaattct cttgacatcc ctgtgacctc tgaaagccac    5760

cagggccaga gggaggaaat cccaggttgc tgtccactgg gggaggattc aggtctaggg    5820

ttcaggtcta cggtagtcag ggcaaaagct acaggcagca ggggcagcac aggagacttg    5880

ctgtccccgt gccctttccc ggggctgctt tcggcctccc gcatctcttc cagggaaagg    5940

aaaagaggtg ggctggggct tggagaccag gctgtctgga ctctaggatg cagaggcctc    6000

cagacaggct cagggtgctc ttctcccatg aaagcagccg ctgggaggag gaggctatgg    6060

tgcatccata agttgcccct ctgctcccca gttgtgcgac cagctgctac ctccttccta    6120

gtcttcttcc ccacagctca gccattctca ggaaccagac agcgtccatg gacttaggtg    6180

agagatgggc cgggtagagc catgggtcct accagccgct gactgagcgg cccacggcac    6240

agagtcctga gttccatact cccatctgtg cctcactggc ggcagtcctg ctcaaataca    6300

tcctggctct ccccgggaca ggctggggat ccccatttgg caggaagcct cagactgggg    6360

tcccaggaag cctaaaggag ccagtgaggt ctttccagcc cctacctgag caccctcctc    6420

cccacttacc cagtaattgc tgtattcaaa gaaacgggag cttttattgg ggagggggtg    6480

ttagatcagg cagaaagagg taggtggtcc aaacctgcac tcccaaaaca gggttttcaa    6540

gtttgaactt ctccacggac taagaggctt agggctggaa tgtcccagag agtcatggat    6600

agccctggtg gcaggccatg gcacattcct tcctttttcc taaaatacct tgattctggg    6660

agcaaggatt agggcacggt gcccccgtgg gtgggtagaa ggatgccccc ccactgagag    6720

ccttccaacc acccttccca aattacatta ctaaaccatt cttgggcaca gggtgttttt    6780

agtgagccag gcttcaggaa gggtcctcat ggtgactact tcaaccccac aacagcccaa    6840

gctcttctgc tcagcccagc caagacccta aactccaaaa ttcttgaaaa tcagagaatc    6900

attgctggct ttgtgtggtc acggaggggt ggggaacagg gcacatggtt ccagctccac    6960

taagccccct tccctcctct cttcgtgtcc catcagcaag tgagctggat gctgaagcag    7020

caggcagagt ccggtgttgg acatgggaac tgaggcacag tgcagatcaa gccttaacct    7080

tgagggaaac acaggtcaca tagcacagct gggggaacac aaagcctctg cttactcctg    7140

aaagagtgct gttttctgtc ctgtatgtgt gacgtgtctg tgagcgtgca agaagcccct    7200

atcttgactg ggacaatggc cagtgagtgt agctggggaa gaattgagag catgtccagg    7260

tcccttcccc agccaacgcc caagatcagg ccacagcctc ctcacaatca attgcctcct    7320

cactccttga tcactcagtg ctgcccaggc ccagcagaac agactctgcc agcaggcccc    7380

actagcccca gctcctcttt gggtctcagg tcccctgagg atatggggct tcacctgaaa    7440

tggtctgagg gcttttcctt ctacacagca ggcatcaaga tcaccaaata aagggactat    7500

tgtgcctgcc tggagccctg ccagaggttt gggcccagag gggcacacag caggtgctca    7560

ataactgcat taaatgcact aacagtgagg aaacacgccc ctcagactaa gcagtgagtg    7620

ctgctcacag aatagtcccc attgggggat ggcccaaaga gtcactttgg tccctctggg    7680

aagtgagaag gcaagtgaga aggctgtgag tcttaacctc ctctagaggc ccacagacag    7740

accattcatt tctaagtctc tacccagaga cgcactgtgc ttcccacctt ggcctgacat    7800

gtggcagggt tagaacacac ctcctatccc ctgccagccc gcgttcatgc caagtagcac    7860

atatatgcct aaactcagca cttccatagt gcagtgaata catgtgtgtg tacagcatct    7920

ccgcatggat gtacaggatg tgtgtgtgtg tgcgtgcccc catgctgtct gcattcaggc    7980

tgttcttttt ggtaagacag ctaaaaaaag aatggtctgt gaagggacac tccctagcac    8040

gctgcaacac ctgaatatct ccttgaaagg agggatcttc tactgcagga gactcgtggt    8100

aaaggtggcc aagaaacatg gcaacggtgg ggctgagggc aaatgctggg caactgtgct    8160

tccccatgtt cccctccccg tagccaagac tcatttcatg gagggagatc tcagcttgga    8220

agaaggcagg agtcactgag cctccccaat ccaaacccct gagaagtgtc ctccctctgg    8280

cctcagaccc tgcatcctgt ggtcacagac ccacagtgag aaaggaccag gccctaagga    8340

gctgtgctgt ctctccacgg cccagagcgg gggatgggga tggggatggg gatggggatg    8400

gggatgggga tgggggtagg ggtgggggtg ctttggacta acgtggaggg aatggaaggc    8460

aggcctggtt ccaccctgca tgcccgaccc tggccccagc agcccccaca aggagctcag    8520

ctgaccctgg gtgtctccct gtgatgggaa ggggtaagac gaggactcaa aggcagaacc    8580

tgcagagtgc cccagacgct gatacctgca cagtcagtgc cacccaccca ggagttgagg    8640

aggcactggg ttttggggtg aggacactgg acacctccct gcttctttcc caggcagaca    8700

atcctggcgc agctcccttg ggttgctgtg tctggtggag ctgatcacag gtgaggggca    8760

gagggcagtc tggggtccgc ctatggccag aggagcaggt cagggcggcg ccttgccgcc    8820

ccagctgtgg cctgtttgct caagacgctg aggtctcggg gccagctaac aattgttgag  8880

caaaatcctt cgacaaactt cacctacgtg caaggactcg aggagggaat cactcttagg  8940

agtgggagag taatgtcttt gcctgtgccc agtgaaggcc cattggagct gcagctcagc  9000

taccactgtg tgggagagaa gctggaagac tgagggcttc ctgggctgct ggcccagggt  9060

tgggagacag cagtcacctg gcttaccagg cctatgcctg aagccctggg aagccaggac  9120

gcaggcccca ggctgggaca aagctaccct gaaggagggc aaaggctgcc aaggccaacc  9180

ccatgcctgc caaggccagg cctggcccat ttggccaagg cctaaggtgt aaaacaaggg  9240

gagaggtaca agaggctgtg gggtctggct gggatccttg gggtcttcct tctgcattct  9300

ccaaacgcct agagccagca gaaacgtttc gtctgattag aagccatcat ttctatccca  9360

atcccggaaa attgactgcg gtgcagagag ggaggcctga gaagcagccg taggggagaa  9420

ggtccaagct aattaggagg cagcatccgg gggcccatta gagcgcaggc tgctgtcact  9480

cagccgggct gagttcccgg gagaagaggc tggagaagga ggggcaggcg gcccctcgac  9540

gaggacaccg ctgggagctg ccggaacggg ccccgggctc tgcccccgcc ccggcgctgg  9600

ctcgaaggcg cccgctcggt gcgatcctgt tcggcaaaca ttcactcatc ctgggctgtt  9660

ctcgccaggg ctggggactt cgaggcggcc gagacgggag ttgattctag gcgaaacaag  9720

tcatttgagg cctgaggtgt gcacgagccg cccgggactc gcaggccaga tgcgtttctt  9780

ttgtgaggcc gagggagaac tcggtgtgtc accggggaag gagggagagg cgcggcgagg  9840

ccgcgggggg cggggaggcg gcgggaaggt ggctgcggag ggggagggcg cgggcgaggc  9900

agggagggag ggagggcggc agtgagggcg cggcggcgcg ggcggcttgg ggctggattc  9960

cgcccgcgct ccctcgctcg ctcgctccct ccccagcccc ctccca                 10006

<210>2

<211>2373

<212>DNA

<213>智人(Homo Sapiens)

<400>2

cccaggccca ccccacccag cacccctggc gcagggactg ctggaacctg gctgtgcgcg   60

ctgtcgcttt aagacagact ctgccggcgc cgtccggagc cttagaaacc ggccccggat  120

cgcgagccgg agccggagcc ggagccgggg ccggccgggc tgctgaggcc cgagcggcag  180

gagcgcagcg cggagcgctg agccaggcgc ccagtcgcga gaagctgccg ccgcctctgc    240

ccgcccggcg ccgcagcccc gggcggtcca tggggcgggc acggcgtcgc tgcaggcgcc    300

ggcagccctg gagggcagcc gcttaggcgc tgcgctcttg tccccgcagg tcgcagccag    360

ggcggcgggg cgcgcccagc cccggcccct ggagcgcccg ccgcggtccc cacctccatg    420

gacgccttca aggggggcat gagcctggag cggctgccgg aggggctccg gccgccgccg    480

ccgccacccc atgacatggg gcccgccttc cacctggccc ggcccgccga cccccgcgag    540

ccgctcgaga actccgccag cgagtcgtct gacacggagc tgccagagaa ggagcgcggc    600

ggggaaccca aggggcccga ggacagtggt gcgggaggca cgggctgcgg cggcgcagac    660

gacccagcca agaagaagaa gcagcggcgg caacgtacgc acttcacaag ccagcagttg    720

caagagctag aggccacgtt ccagaggaac cgctaccccg acatgagcat gagggaggag    780

atcgccgtgt ggaccaacct caccgagccg cgcgtgcggg tctggttcaa gaaccggcga    840

gccaagtggc gtaagcgcga gcgtaaccag cagctggacc tgtgcaaggg tggctacgtg    900

ccgcagttca gcggcctagt gcagccctac gaggacgtgt acgccgccgg ctactcctac    960

aacaactggg ccgccaagag cctggcgcca gcgccgctct ccaccaagag cttcaccttc    1020

ttcaactcca tgagcccgct gtcgtcgcag tccatgttct cagcacccag ctccatctcc    1080

tccatgacca tgccgtccag catgggccca ggcgccgtgc ctggcatgcc caactcgggc    1140

ctcaacaaca tcaacaacct caccggctcc tcgctcaact cggccatgtc gccgggcgct    1200

tgcccgtacg gcactcccgc ctcgccctac agcgtctacc gggacacgtg caactcgagc    1260

ctagccagcc tgcggctcaa gtccaaacag cactcgtcgt ttggctacgg cgccctgcag    1320

ggcccggcct cgggcctcaa cgcgtgccag tacaacagct gaccgccccg ccgcaccacg    1380

cgggccggcg gccggagcgg ggaagggcgc gggcgcggag gacgcacgcg gggccccggc    1440

tcgcaagccc cagctcaccg cgccgcggac ctcacacctg cgcagccccc tcctcccact    1500

tcccactccg ggttggtttt gtgtttgctt ttccggaccc cactctgccc tccaaaaaga    1560

caaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaagcaaaaa gacgtcggag aaaagtgccg cgaaaaaatg    1620

gatgagttgc aatttctctc gggatggcgc gggtggtgtg tgtgtgttcc cacgggcccc    1680

ggaggcccac tccgcggagg gcacgcggcg cggtaggcga gcgccgaggc ccagcggccg    1740

ggggaggacg acctcgtatc ccgcgtcccc gccgcgctgg atccggactg agtggccggg  1800

cctgcggact ggatgtgcgg ggcctggact tgcctaggat ttcccgaccc cgtacaaacc  1860

aagttgccct ctccgagcta ggcccggccg agagcgcctt agctcgagtc ggatccgtgt  1920

tggggcgggc gttgggtttg gggggacggt gcccccagcc caggatcggg cactcagtgg  1980

agccgcacac ggccccggcg cgcctggtag agcctcgctg gccccgcgcc ccggagccct  2040

atattaaggc cacggagcga cagcgggcag tgcgggcctg gcgggaggtg ggggaggtcc  2100

atctcagaac accccagcct tgagcttagc tgcaggccca ggccctctgc tctgctcccg  2160

ggctaggagg tggccctctg tctgggcgaa cagccccctc ctcaccgccc gccgtgcaag  2220

agtcgagccg gcagagcaag gggcgcggcc ccagggccct gcgcccactt tgcacacccg  2280

ctctccggcc cgcgcccctg tttacagcgt ccctgtgtat gttggactga ctgtaataaa  2340

tctgtctata tcgactaaaa aaaaaaaaaa aaa                               2373

<210>3

<211>314

<212>PRT

<213>智人(Homo Sapiens)

<400>3

Met Asp Ala Phe Lys Gly Gly Met Ser Leu Glu Arg Leu Pro Glu Gly

1               5                   10                  15

Leu Arg Pro Pro Pro Pro Pro Pro His Asp Met Gly Pro Ala Phe His

            20                  25                  30

Leu Ala Arg Pro Ala Asp Pro Arg Glu Pro Leu Glu Asn Ser Ala Ser

        35                  40                  45

Glu Ser Ser Asp Thr Glu Leu Pro Glu Lys Glu Arg Gly Gly Glu Pro

    50                  55                  60

Lys Gly Pro Glu Asp Ser Gly Ala Gly Gly Thr Gly Cys Gly Gly Ala

65                  70                  75                  80

Asp Asp Pro Ala Lys Lys Lys Lys Gln Arg Arg Gln Arg Thr His Phe

                85                  90                  95

Thr Ser Gln Gln Leu Gln Glu Leu Glu Ala Thr Phe Gln Arg Asn Arg

            100                 105                 110

Tyr Pro Asp Met Ser Met Arg Glu Glu Ile Ala Val Trp Thr Asn Leu

        115                 120                 125

Thr Glu Pro Arg Val Arg Val Trp Phe Lys Asn Arg Arg Ala Lys Trp

    130                 135                 140

Arg Lys Arg Glu Arg Asn Gln Gln Leu Asp Leu Cys Lys Gly Gly Tyr

145                 150                 155                 160

Val Pro Gln Phe Ser Gly Leu Val Gln Pro Tyr Glu Asp Val Tyr Ala

                165                 170                 175

Ala Gly Tyr Ser Tyr Asn Asn Trp Ala Ala Lys Ser Leu Ala Pro Ala

            180                 185                 190

Pro Leu Ser Thr Lys Ser Phe Thr Phe Phe Asn Ser Met Ser Pro Leu

        195                 200                 205

Ser Ser Gln Ser Met Phe Ser Ala Pro Ser Ser Ile Ser Ser Met Thr

    210                 215                 220

Met Pro Ser Ser Met Gly Pro Gly Ala Val Pro Gly Met Pro Asn Ser

225                 230                 235                 240

Gly Leu Asn Asn Ile Asn Asn Leu Thr Gly Ser Ser Leu Asn Ser Ala

                245                 250                 255

Met Ser Pro Gly Ala Cys Pro Tyr Gly Thr Pro Ala Ser Pro Tyr Ser

            260                 265                 270

Val Tyr Arg Asp Thr Cys Asn Ser Ser Leu Ala Ser Leu Arg Leu Lys

        275                 280                 285

Ser Lys Gln His Ser Ser Phe Gly Tyr Gly Ala Leu Gln Gly Pro Ala

    290                 295                 300

Ser Gly Leu Asn Ala Cys Gln Tyr Asn Ser

305                 310

<210>4

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>4

ggaaatcgtg cgtgacat                     18

<210>5

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>5

tcatgatgga gttgaatgta gtt    23

<210>6

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>6

gacccagcca agaagaagaa        20

<210>7

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>7

gaggttgttg atgttgttga gg     22

<210>8

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>8

ctgtttgctc aagacgctga       20

<210>9

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>9

ctcggcctca caaaagaaac    20

<210>10

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>10

tgtctgcatt caggctgttc    20

<210>11

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>11

gattccctcc tcgagtcctt    20

<210>12

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>12

caagtgagct ggatgctgaa    20

<210>13

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>13

agggagtgtc ccttcacaga    20

<210>14

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>14

gctcagccat tctcaggaac    20

<210>15

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>15

gccattgtcc cagtcaagat    20

<210>16

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>16

tcgcgtcaag agggtatttt    20

<210>17

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>17

taggacccat ggctctaccc    20

<210>18

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>18

cacgagtcag gtgggaaact    20

<210>19

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>19

gacgtctgct gcttttctgc    20

<210>20

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>20

aggcacggac tagcaggac     19

<210>21

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>21

atgcggacga agccagag      18

<210>22

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>22

ttagcattca gcccctctgt    20

<210>23

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>23

ttcatgagat gcagtcagca g    21

<210>24

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>24

acaactggta ggggcaacag      20

<210>25

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>25

tgtgtggctt tggcaaataa      20

<210>26

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>26

gcactgtgct ccaactgtgt      20

<210>27

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物

<400>27

gggggagtgt tcttttcctt    20

Claims (20)

1.一种对具有青少年特发性脊柱侧凸(AIS)的对象分类的方法，包括：提供从该对象分离的细胞样品；检测该细胞样品中的成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)表达；该检测步骤的结果能将具有AIS的对象分为属于某AIS亚类。

2.一种为临床试验而对具有青少年特发性脊柱侧凸(AIS)的对象分类的方法，包括：提供从该对象分离的细胞样品；检测该细胞样品中的成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)表达；和根据检测步骤的结果对临床试验的对象分类。

3.一种预测对象发生青少年特发性脊柱侧凸(AIS)风险的方法，包括：

提供从该对象分离的细胞样品；和

检测该细胞样品中的成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)表达；

其中不存在Pitx1表达表示该对象具有发生AIS的风险。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，不存在Pitx1表达表示该对象具有出现45°及以上科布角的风险。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，用Pitx1转录因子的特异性分离核酸分子实施所述检测步骤。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述分离核酸分子作可检测标记。

7.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，用与Pitx1特异性结合的抗体实施所述检测步骤。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞样品选自下组：成骨细胞样品、软骨细胞样品、骨骼成肌细胞样品和血液样品。

9.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞样品是成骨细胞样品。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，还包括根据所述检测步骤的结果而选择预防措施或治疗方法的步骤。

11.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述对象被预先诊断为发生青少年特发性脊柱侧凸的可能候选对象。

12.一种选择可能用于治疗青少年特发性脊柱侧凸的化合物的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)将测试化合物与已知表达成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)的至少一种细胞接触；和

(b)测定Pitx1表达水平；

其中如果与没有测试化合物的条件下相比，在其存在下Pitx1表达水平增加，则选择该测试化合物。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述细胞是成骨细胞。

14.如权利要求12或13所述的方法，其特征在于，所述细胞来自具有青少年特发性脊柱侧凸(AIS)的对象。

15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象是人。

16.一种试剂盒，其装有对成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)的转录产物具有特异性的核酸分子和利用该探针预测某对象是否具有发生青少年特发性脊柱侧凸风险的使用说明书。

17.一种试剂盒，其装有对成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)的转录产物具有特异性的核酸分子和利用该探针对具有青少年特发性脊柱侧凸的对象分类的使用说明书。

18.如权利要求16-17中任一项所述的试剂盒，其特征在于，还装有用于对象的核苷酸样品的容器。

19.一种试剂盒，其装有对成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)具有特异性的抗体和利用该抗体预测对象是否具有发生青少年特发性脊柱侧凸风险的使用说明书。

20.一种试剂盒，其装有对成对样同源异型域转录因子1(Pitx1)具有特异性的抗体和利用该抗体对具有青少年特发性脊柱侧凸的对象分类的使用说明书。

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