CN101675050A

CN101675050A - 作为半胱氨酸蛋白酶抑制剂的嘌呤

Info

Publication number: CN101675050A
Application number: CN200880014542A
Authority: CN
Inventors: 乔斯·M·科特龙-洛佩斯; 比阿特丽斯·迪亚斯-赫尔南德斯; 乔斯·M·菲安多-罗曼; 玛丽亚·马科-马丁
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Current assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 2007-03-02
Filing date: 2008-02-28
Publication date: 2010-03-17
Also published as: JP2010520254A; EP2118106A1; WO2008107368A1; US20100105652A1

Abstract

本发明涉及式I的取代的杂芳基腈衍生物，它们的制备方法，包含所述化合物的药物组合物，及其作为半胱氨酸蛋白酶抑制剂的用途。

Description

作为半胱氨酸蛋白酶抑制剂的嘌呤

技术领域

本发明涉及某些取代的杂芳基腈衍生物，其为蛋白酶抑制剂。更具体地，该化合物为半胱氨酸蛋白酶的抑制剂。尤其是，该化合物抑制木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶，更特别是falcipain家族的那些半胱氨酸蛋白酶，其为疟疾寄生虫恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)中发现的半胱氨酸蛋白酶。

发明背景

疟疾是发展中国家的重要疾病问题之一。在人类中造成最易感染的疟疾的寄生虫为恶性疟原虫，其是每年数亿疟疾病例的病因，且其被认为每年造成超过一千万人死亡，Breman，J.G.，等人，(2001)Am.Trop.Med.Hyg.64，1-11。在疟疾治疗中面临的一个问题就是寄生虫对已知药物产生抗药性。因此，存在开发新的抗疟疾药物的需求。

鉴定具有抗疟疾活性的潜在新药的一种方法就是研究恶性疟原虫寄生虫中发现的生物学靶点，再研究其中可被确定的具体靶点的生理学通路。在恶性疟原虫中，血红蛋白被运输至酸性食物泡，其中其被降解。似乎多种酶，包括食物泡半胱氨酸、天冬氨酸，和金属蛋白酶，以及胞质氨基肽酶，有助于血红蛋白水解，Francis S.E.等人，(1997)Annu.Rev.Microbiol.51，97-1 23；Rosenthal P.J.Protease inhibitors.In：Rosenthal P.J.，ed.AntimalarialChemotherapy：Mechanisms of Action，Resistance，和New Directions in DrugDiscovery，Totowa，N.J.：Humana Press，(2001)325-345。因此，疟原虫血红蛋白酶(Plasmodial haemoglobinases)为潜在的治疗靶点。

几年前，半胱氨酸蛋白酶抑制剂显示出通过红细胞寄生虫而阻断血红蛋白降解，造成了表征上的形态学异常，其中食物泡被未降解的血红蛋白填充，且寄生虫的发育被阻断，Rosenthal P.J.，等人，(1998)J.Clin.Invest.82，1560-6；Gamboa de Dominguez N.D.和Rosenthal P.J.，(1996)Blood 87，4448-54。确定引起血红蛋白降解酶的努力导致了将“falcipain”表征为一种营养子食物泡半胱氨酸蛋白酶，Rosenthal P.J.和Nelson R.G.，(1992)MolBiochem Parasitol 51，143-52；Salas F.等人，(1995)Infect.Immun.63 2120-5。最近才发现″falcipain″实际上包括具有很多不寻常特征的三种相关的木瓜蛋白酶-家族半胱氨酸蛋白酶，称为falcipain-1、falcipain-2和falcipain-3，Rosenthal，P.J.，等人，(2002)Curr.Pharm.Des.8，1659-1672。Falcipain-2为恶性疟原虫营养子的主要的半胱氨酸蛋白酶，Shenai B.R.等人，(2000)J BiolChem 275，29000-10。重要地，抑制falcipain-2的半胱氨酸蛋白酶抑制剂始终阻断血红蛋白的水解和寄生虫的发育。这些数据表明falcipain-2为关键的靶向酶，然而可能其它的两种falcipain也是合适的靶点，且在很多情形中，它们也被对falcipain-2有活性的相同的化合物所抑制。同falcipain-2一样，falcipain-3在适度地还原条件下容易地水解天然血红蛋白，该条件相似于在生理学体系中发现的那些条件，Shenai B.R.等人，(2000)J.Biol.Chem.275，29000-10；Sijwali P.S.等人，(2001)Biochem.J.360，481-9；Shenai B.R.和Rosenthal P.J.，(2002)Mol.Biochem.Parasitol.122，99-104。Falcipain-2和falcipain-3在结构上类似，而falcipain-1的关系更加疏远；认为该酶在恶性疟原虫裂殖子入侵红血球中起着重要的作用，而在红内期中对于正常的发育并不重要，Sijwali，P.S.，等人，Proceedings of the National Academy ofSciences of the United States of America 101，8721-8 26。falcipain-1是否也在血红蛋白处理中起作用不得而知。最近，已经发现了第四种木瓜蛋白酶-家族半胱氨酸蛋白酶，现称为falcipain-2′。Falcipain-2′在序列上与falcipain-2几乎相同，不同仅在于3个氨基酸，其没有一个位于活性位点处。falcipain-2′的结构未知，但其很可能与falcipain-2的结构非常类似。尽管可能与falcipain-2的结构并不相同，但是仍期望falcipain-2′的生理作用与其非常类似。无论如何，半胱氨酸蛋白酶抑制，尤其是falcipain-2的抑制，阻止了寄生虫的发展。因此，Falcipain-2和相关的疟原虫半胱氨酸蛋白酶是抗疟疾化疗的合理靶点，且从而存在对于为这些靶点抑制剂的化合物的需求。

间日疟原虫(P.vivax)是继恶性疟原虫(P.falciparum)之后的第二种最重要的人疟疾寄生虫。尽管易感染性比恶性疟原虫较小，但是间日疟原虫是分布最广泛的人疟疾寄生虫，且其造成了广泛的发病率(Mendis，K.，Sina，B.J.，Marchesini，P.和Carter，R.(2001)″The neglected burden of Plasmodium vivaxmalaria″Am.J.Trop.Med.Hyg.64，97-106)。这两种寄生虫造成了大于90％的人疟疾事件，每年总共几亿的病例。然而，由于技术上的缺点，对于间日疟原虫的全面研究是有限的。特别地，与恶性疟原虫的情况不同，不能获得间日疟原虫的常规体外培养，并且动物模型限制于灵长类。最近(Na，B.K.，Shenai，B.R.，Sijwali，P.S.，Choe，Y.，Pandey，K.C.，Singh，A.，Craik，C.S.，Rosenthal，P.J.(2004)identification and biochemical characterization ofvivapains，cysteine proteases of the malaria parasite Plasmodium vivax.Biochem.J.378，529-538)，来源于间日疟原虫两种半胱氨酸蛋白酶基因(vivapain-2和vivapain-3)已经被确定且克隆，异源性表达的基因产物已经被生化地表征。发现这些半胱氨酸蛋白酶为falcipain-2和falcipain-3的表观直向同源基因(orthologues)，但主要的不同在于疟原虫蛋白酶的生化性质，其保证了对于在评价抗疟疾蛋白酶抑制中的各种酶抑制的关注。

组织蛋白酶为一族酶，其为半胱氨酸蛋白酶的木瓜蛋白酶超家族的一部分。某些组织蛋白酶(如S)已经描述于文献中。

组织蛋白酶在动物(包括人)的蛋白质降解的正常生理学过程中起作用，例如在结缔组织的降解中起作用。然而，这些酶在身体中的水平升高可产生导致疾病的病理学状况。因此，组织蛋白酶已经显示在多种疾病状态中作为病原体，所述疾病包括但不限于，由卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii)、克鲁兹锥虫(Trypsanoma cruzi)、布鲁斯锥虫(Trypsanoma brucei)，和肌束短膜虫(Crithidia fusiculata)感染；以及血吸虫病、疟疾、癌症，例如胰腺癌(参见JoyceJ.A.等人，Cancer Cell(2004)5，443-453和Gocheva V.，Genes & Development(2006)20，543-556)，肿瘤侵袭和肿瘤转移、异染性脑白质营养不良、肌营养不良、肌萎缩(amytrophy)、炎症、类风湿性关节炎、骨关节炎、骨质疏松、冠状动脉疾病、动脉粥样硬化、自身免疫性疾病、呼吸系统疾病如阻塞性肺病(COPD)、免疫介导的疾病(immunologically mediated diseases)(例如，移植排斥反应)，和其它相关疾病，参见：国际公开号WO 94/04172，公开于1994年3月3日，和其中引用的文献；也参见：欧洲专利申请EP 0603873A1，和其中引用的文献。源自P.gingivallis的两种细菌半胱氨酸蛋白酶(称为gingipains)和牙龈炎的发病机制有关，Potempa，J.，等人，(1994)Perspectivesin Drug Discovery and Design 2，445-458。

组织蛋白酶S与几种疾病有关，包括免疫性和自身免疫性疾病、类风湿性关节炎、炎症、炎性肠病、重症肌无力(myesthania gravis)、动脉粥样硬化、淋巴组织增生性疾病、癌症，例如胰腺癌、肿瘤转移(Lecaille，等人，(2002)Chem.Rev.102，4459和Liu，等人，(2004)，Arterioscler Throm Vasc Biol.24，1359)。认为组织蛋白酶S在不变链降解和抗原递呈中起作用，组织蛋白酶S缺失的小鼠已经显示出胶原-诱导的关节炎减轻(Nakagawa，等人，(1999)Immunity，10，207)，这表明其在类风湿性关节炎中起有效作用。

考虑到许多病理学响应和病症受组织蛋白酶，尤其是组织蛋白酶S的介导(mediate)，存在可用于治疗各种病症的这些组织蛋白酶的抑制剂的需求。

WO 2005/085210A1公开了某些稠合的双环嘧啶化合物，其作为组织蛋白酶的抑制剂，尤其是组织蛋白酶K的抑制剂，用于治疗骨病如骨质疏松等。WO 2005/103012A1公开了某些肼-杂环腈化合物，作为组织蛋白酶的抑制剂，尤其是组织蛋白酶K的抑制剂，用于治疗骨病如骨质疏松等。

发明概述

本发明涉及新的杂芳基腈衍生物及其它们作为蛋白酶抑制剂，更具体为半胱氨酸蛋白酶的抑制剂，甚至更具体地为木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶的抑制剂的用途。在本发明的一方面中，该半胱氨酸蛋白酶为那些falcipain家族，例如falcipain-2和falcipain-3中的半胱氨酸蛋白酶，其为在疟疾中显示的半胱氨酸蛋白酶的实例。

本发明涉及下式表示的化合物，包含所述化合物的药物组合物以及该化合物作为蛋白酶抑制剂的用途。

发明详述

本发明提供了式I化合物：

其中：

B表示

R¹表示C_1-4烷基；-C_1-5亚烷基-NR^ER^F；-C_1-2亚烷基-N-邻苯二甲酰亚胺；-C(O)-E；或氢；

R⁵表示氢或C_1-5亚烷基-NR^ER^F；

R²表示-苯基-C_0-3亚烷基-X；-苯基-C_0-3亚烷基-X-R^J；-O^tBu；-吡啶基-苯基-C_0-3亚烷基-X；-吡啶基-苯基-C_0-3亚烷基-X-R^J；-吡啶基-C_0-3亚烷基-X；或-吡啶基-C_0-3亚烷基-X-R^J；

其中苯基任选被一个选自卤素或CF₃的基团所取代；

R^J表示Z、-C_1-3亚烷基-Z或-C(O)Z；

E、X和Z独立地表示含有一个或两个氮原子的4-、5-或6-元单环饱和烃基，其任选被选自下列的基团所取代：C_1-4烷基、C_1-4烷基OH、OH和NR^ER^F；

A表示CH₂且n表示0或1；或A表示-O-或N(C(O)C_1-3烷基)且n表示1；

当A表示CH₂且n表示0时，R^X表示在与其相连的环的任一碳原子上的任选的甲基取代基，否则R^X不存在；

R^E和R^F在各种情况下独立地表示氢或C_1-4烷基；

条件是R¹、R²、R⁵或B中的至少一个包含一个或多个氮原子，且其中如果一个或多个氮原子仅位于R¹中，则在R¹中存在至少一个氮原子不直接与C(O)基团相键合；

或其可药用衍生物。

在本发明的一方面中，提供式IA化合物：

其中：

B表示

R⁵表示氢或C_1-5亚烷基-NR^ER^F；

R²表示-苯基-C_0-3亚烷基-X；-苯基-C_0-3亚烷基-X-R^J；-吡啶基-苯基-C_0-3亚烷基-X；-吡啶基-苯基-C_0-3亚烷基-X-R^J；-吡啶基-C_0-3亚烷基-X；或-吡啶基-C_0-3亚烷基-X-R^J；

其中苯基任选被一个选自卤素或CF₃的基团所取代；

R^J表示Z、-C_1-3亚烷基-Z或-C(O)Z；

A表示CH₂且n表示0或1；或A表示-O-或N(C(O)C_1-3烷基)且n表示1；

R^E和R^F在各种情况下独立地表示氢或C_1-4烷基；

或其可药用衍生物。

在本发明的另一方面中，提供式IB化合物：

其中：

B表示

R¹表示C_1-4烷基、C_1-5亚烷基-NR^ER^F或C_1-2亚烷基-N-邻苯二甲酰亚胺；

R⁵表示氢或C_1-5亚烷基-NR^ER^F；

R²表示-苯基-C_1-3亚烷基-X、-苯基-C_1-3亚烷基-X-R^J、-O^tBu、吡啶基-苯基-C_1-3亚烷基-X，或吡啶基-苯基-C_1-3亚烷基-X-R^J，

其中苯基任选被一个选自卤素或CF₃的基团所取代；

R^J表示Z、-C_1-3亚烷基-Z或-C(O)Z；

X和Z独立地表示含有一个或两个氮原子的4-、5-或6-元单环饱和烃基，其任选被选自下列的基团所取代：C_1-4烷基、C_1-4烷基OH、OH和NR^ER^F；

A表示CH₂且n表示0或1；或A表示-O-或N(C(O)C_1-3烷基)且n表示1；

R^E和R^F在各种情况下独立地表示氢或C_1-4烷基；

条件是R¹、R²、R⁵或B中的至少一个包含至少一个氮原子；

或其可药用衍生物。

在本发明的另一方面中，提供式IC化合物：

其中：

B表示

R⁵表示氢或C_1-5亚烷基-NR^ER^F；

其中苯基任选被一个选自卤素或CF₃的基团所取代；

R^J表示Z、-C_1-3亚烷基-Z或-C(O)Z；

A表示CH₂且n表示0或1；或A表示-O-或N(C(O)C_1-3烷基)且n表示1；

R^E和R^F在各种情况下独立地表示氢或C_1-4烷基；

条件是R¹、R²、R⁵或B中至少一个包含至少一个氮原子，其中如果至少一个氮原子位于R¹中，则其不直接与C(O)基团键合；

或其可药用衍生物。

在本发明的其它方面中，提供式ID化合物：

其中：

B表示

R⁵表示氢或C_1-5亚烷基-NR^ER^F；

其中苯基任选被一个选自卤素或CF₃的基团所取代；

R^J表示Z、-C_1-3亚烷基-Z或-C(O)Z；

A表示CH₂且n表示0或1；或A表示-O-或N(C(O)C_1-3烷基)且n表示1；

R^E和R^F在各种情况下独立地表示氢或C_1-4烷基；

或其可药用衍生物。

在本发明的一方面中，B表示

在另一方面中，B表示

在另一方面中，B表示

在另一方面中，B表示

在本发明的一方面中，R¹表示C_1-4烷基；C_1-5亚烷基-NR^ER^F或-C(O)-E。

在本发明的另一方面中，R¹表示C_1-4烷基或C_1-5亚烷基-NR^ER^F。

在本发明的一方面中，R⁵表示氢。

在本发明的一方面中，R²表示-苯基-C_0-3亚烷基-X；-苯基-C_0-3亚烷基-X-R^J；-吡啶基-苯基-C_0-3亚烷基-X；-吡啶基-苯基-C_0-3亚烷基-X-R^J；-吡啶基-C_0-3亚烷基-X；或-吡啶基-C_0-3亚烷基-X-R^J，其中苯基任选被一个选自卤素或CF₃的基团所取代。在本发明的另一方面中，R²表示-苯基-C_0-3亚烷基-X；-苯基-C_0-3亚烷基-X-R^J；-O^tBu；-吡啶基-苯基-C_0-3亚烷基-X；或-吡啶基-C_0-3亚烷基-X，其中苯基任选被一个选自卤素或CF₃的基团所取代。在本发明的另一方面中，R²表示-苯基-C_0-3亚烷基-X；-苯基-C_0-3亚烷基-X-R^J；-吡啶基-苯基-C_0-3亚烷基-X；或-吡啶基-C_0-3亚烷基-X，其中苯基任选被一个选自卤素或CF₃的基团所取代。在另一方面中，R²表示-苯基-C_0-3亚烷基-X或-苯基-C_0-3亚烷基-X-R^J，其中苯基任选被一个选自卤素或CF₃的基团所取代；或-O^tBu。在另一方面中，R²表示-苯基-C_0-3亚烷基-X-R^J，其中苯基任选被一个选自卤素或CF₃的基团所取代；或-O^tBu。在另一方面中，R²表示-苯基-C_0-3亚烷基-X-R^J，其中苯基任选被一个选自卤素或CF₃的基团所取代。在本发明的一方面中，R²表示-苯基-C_1-3亚烷基-X、-苯基-C_1-3亚烷基-X-R^J或-O^tBu。在另一方面中，R²表示-苯基-C_1-3亚烷基-X-R^J或-O^tBu。在另一方面中，R²表示-苯基-C_1-3亚烷基-X-R^J。在一个实施方案中，R²中的苯基没有任选的取代基。

在本发明的一方面中，E表示任选取代的含有一个或两个氮原子的6-元单环饱和烃基。在另一方面中，E表示任选取代的哌嗪。在另一方面中，E被C_1-4烷基(例如甲基)取代。

在本发明的一方面中，X表示任选取代的含有一个或两个氮原子的4-或6-元单环饱和烃基。在另一方面中，X表示任选取代的含有一个或两个氮原子的6-元单环饱和烃基。在另一方面中，X表示哌啶或哌嗪。在另一方面中，X为未被取代的。

在另一方面中，Z表示任选取代的含有一个或两个氮原子的5-或6-元单环饱和烃基。在另一方面中，Z表示任选取代的含有一个或两个氮原子的6-元单环饱和烃基。在另一方面中，Z表示哌啶或哌嗪。在另一方面中，Z为未被取代的。

在本发明的一方面中，A表示CH₂且n表示0或1。在本发明的另一方面中，当A表示CH₂时，n表示0。在另一方面中，当A表示CH₂时，n表示1。在另一方面中，A表示-O-或N(C(O)C_1-3烷基)。

在本发明的一方面中，当A表示CH₂且n表示0时，R^X不存在。

在本发明的一方面中，R^E和R^F在各种情况下独立地表示C_1-4烷基。

在式I或其任何亚式中任何出现在其上的任何官能团或取代基的含义，除非另有说明，在每次出现时，其意义与其含义，或任何其它官能团或取代基的含义是相互独立的。

应当理解，本发明包含如上所述的本发明不同方面的基团的所有组合。

术语和定义

在此使用的作为基团或基团的一部分的术语″烷基″指的是包含所示碳原子数的直链或支链烷基。此类基团的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基等。

在此使用的作为基团或基团的一部分的术语″亚烷基″指的是含有所示碳原子数的直链或支链饱和烃连接基团。此类基团的实例包括亚甲基、亚乙基等。

在此使用的术语″卤素″或″卤代″指的是氟(氟代)、氯(氯代)、溴(溴代)或碘(碘代)原子。

在此使用的术语″蛋白酶″为通过在酰胺键上亲核取代，从而催化肽和蛋白质的酰胺键的裂解，最终致使水解的酶。该蛋白酶包括：半胱氨酸蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶，和金属蛋白酶。蛋白酶″抑制剂″相比底物更加紧密地结合至酶上，并且一般不会在酶催化的亲核试剂(nucleophile)的进攻后发生裂解。因此，它们竞争性地防止蛋白酶识别并水解天然底物，且因此起抑制剂作用。

在本发明的一方面中，提供选自下列的化合物：

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-(环戊基甲基)-4-{[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-哌啶基]甲基}苯甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-(环戊基甲基)-4-({4-[(1-甲基-4-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)苯甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-(环戊基甲基)-4-({4-[(1-甲基-3-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)苯甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-4-{[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-哌啶基]甲基}苯甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-4-({4-[(1-甲基-4-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)苯甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-4-({4-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-1-哌啶基}甲基)苯甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-4-{[3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]甲基}苯甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环己基-4-{[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-哌啶基]甲基}苯甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环己基-4-({4-[(1-甲基-4-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)-苯甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环己基-4-({4-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-1-哌啶基}甲基)苯甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环己基-4-{[3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]甲基}苯甲酰肼；

2-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-(环戊基甲基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯；

基2-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-(环戊基甲基)肼甲酸1，1-二甲基乙酯；

N′-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-(环戊基甲基)-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

2-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯；

2-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-(环戊基甲基)-1-[3-(二甲基氨基)丙基]肼甲酸1，1-二甲基乙基酯；

N′-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-6-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-2-吡啶甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-5-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-3-吡啶甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-6-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-2-吡啶甲酰肼；

2-{2-氰基-9-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-9H-嘌呤-6-基}-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯；

N′(2-氰基-1H-嘌呤-6-基)-N′-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

N′-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼；

N′-{2-氰基-9-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

2-{2-氰基-9-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-9H-嘌呤-6-基}-2-环己基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环己基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼；

N′-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环戊基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼；

N′-{2-氰基-9-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

2-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯；

N′-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

N′-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环戊基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼；

N′-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环戊基-6-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-2-吡啶甲酰肼；

2-(2-氰基-9-{2-[(1，1-二甲基乙基)(甲基)氨基]乙基}-9H-嘌呤-6-基)-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯；

N′-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

N′-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环己基-6-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-2-吡啶甲酰肼；

N′-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环己基-6-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-2-吡啶甲酰肼；

N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

2-(2-氰基-9-{[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]羰基}-9H-嘌呤-6-基)-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯；和

2-[2-氰基-9-({[4-(二甲基氨基)丁基]氨基}羰基)-9H-嘌呤-6-基]-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯；

或其可药用衍生物。

在本发明的一方面中，提供选自下列的化合物：实施例1-11、14、17、18、22、23、26-28、30-34、36-38、40-42和44-47；

或其可药用衍生物。

在此使用的术语“可药用衍生物”是指任何可药用盐、溶剂合物或前药例如式I化合物的酯，一旦将其给药至接受者，其能够提供(直接或间接地)式I化合物，或其活性代谢产物或残余物。例如，当式I化合物具有羟基(OH)时，可药用衍生物可为其酯，如烷基酯(例如乙酸酯)。此类可药用衍生物对于本领域的技术人员而言是公知的，而不用过多的试验。然而，可参考文献的教导：Burger’s Medicinal Chemistry and Drug Discovery，5th Edition，Vol 1：Principles and Practice，将其在此引入作为参考以说明此类衍生物。在本发明的另一方面中，可药用衍生物为盐、溶剂合物和酯。在另一方面中，可药用衍生物为盐和溶剂合物。

本发明的化合物可为可药用盐的形式和/或以可药用盐给药。事实上，在本发明的某些实施方案中，根据式I化合物的可药用盐，与各个游离碱或游离酸相比是优选的，这是因为此类盐赋予了分子较大的稳定性或溶解度，从而利于配制成剂型。相应地，本发明进一步涉及根据式I化合物的可药用盐。

在此使用的术语″可药用盐″指的是保留所需目标化合物的生理学活性且显示最小的不需要的毒理学作用的盐。对于适宜的盐的综述，参见：Berge等人，J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19。术语″可药用盐″既包括可药用酸加成盐也包括可药用碱加成盐。这些可药用盐可在化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或通过以游离酸或游离碱形式的纯化的化合物独立地分别与适宜的碱或酸反应而制备。该盐可从溶液中沉淀出来，且可通过过滤收集，或可通过蒸发溶剂而回收。

可药用酸加成盐可通过如下方式形成：式I化合物与适宜的无机酸或有机酸(如氢溴酸、盐酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、马来酸、羟基马来酸、丙烯酸、甲酸、乙酸、羟基乙酸、苯基乙酸、丁酸、异丁酸、丙酸、富马酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、扁桃酸、苯甲酸、邻-乙酰氧基苯甲酸、氯苯甲酸、甲基苯甲酸、二硝基苯甲酸、羟基苯甲酸、甲氧基苯甲酸、水杨酸、谷氨酸、硬脂酸、抗坏血酸、棕榈酸、油酸、丙酮酸、扑酸、丙二酸、月桂酸、戊二酸、天冬氨酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、萘磺酸(例如2-萘磺酸)、对-氨基苯磺酸(即对苯胺磺酸)、己酸、庚酸或邻苯二甲酸)，任选在适宜的溶剂如有机溶剂中反应得到所述盐，该盐通常通过如结晶和过滤进行分离。式I化合物的可药用酸加成盐可包含或可为例如氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、琥珀酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、蔗糖酸盐、丙酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、萘磺酸盐(例如2-萘磺酸盐)、甲磺酸盐、乙磺酸盐、对甲苯磺酸盐、羟乙基磺酸盐或己酸盐。在一个实施方案中，提供本发明化合物的三氟乙酸盐。在另一实施方案中，提供本发明化合物的盐酸盐。

可药用碱加成盐可按如下方式形成：通过式I化合物与适宜的无机碱或有机碱(例如氨、三乙胺、乙醇胺、三乙醇胺、胆碱、精氨酸、赖氨酸或组氨酸)，任选在适宜的溶剂如有机溶剂中反应得到碱加成盐，该盐通常通过如结晶和过滤进行分离。可药用碱加成盐包括铵盐和与有机碱形成的盐，所述有机碱包括伯胺、仲胺和叔胺(包括脂肪族胺、芳香族胺、脂肪族二胺，和羟基烷基胺，如甲胺、乙胺、异丙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、三甲胺、二环己基胺、二乙醇胺、环己基胺和N-甲基-D-葡糖胺)。其它适宜的可药用碱加成盐包括可药用金属盐，例如可药用碱金属盐或碱土金属盐，如钠、钾、锂、钙、镁、铝和锌的氢氧化物、碳酸盐和碳酸氢盐；尤其是可在式I化合物中存在的一个或多个羧酸部分的可药用金属盐。

例如在分离本发明化合物中可以使用其它的非可药用盐例如草酸盐。

本发明在其范围内包括所有可能的立体异构体和非-立体异构体形式的式I化合物的盐。

在此使用的术语″本发明的化合物″是指根据式I的化合物及其可药用衍生物。术语″本发明的化合物″是指任何一种如上所定义的本发明的化合物。

本发明的化合物可以作为固体或液体存在，这两种均包括在本发明内。在固态下，本发明化合物可以无定形物质或晶形或其混合物存在。应当理解，可以形成本发明化合物的溶剂合物，其中在结晶期间溶剂分子嵌入至晶格中。这些溶剂合物可涉及非水性溶剂如乙醇、异丙醇、DMSO、乙酸、乙醇胺、和乙酸乙酯，或它们可包含水作为嵌入至晶格中的溶剂。其中嵌入晶格中的溶剂为水的溶剂合物通常称为″水合物″。本发明包括所有的此类溶剂合物。

进一步应当理解的是，本发明化合物的所有的晶形、多晶形、几何异构体、立体异构体(包括对映异构体和非对映异构体)和互变异构体，或其混合物，均包括在本发明的范围内。除非另有说明，对于具有立体中心且因此可形成对映异构体的化合物而言，该化合物包含1∶1对映异构体的混合物，即，对映异构体的外消旋混合物。

根据本发明的另一方面，提供式I化合物或其可药用衍生物，用于人或兽医治疗。

本发明的化合物为半胱氨酸蛋白酶抑制剂，如木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶的抑制剂，例如falcipain家族，包括falcipain-2或falcipain-3的半胱氨酸蛋白酶的抑制剂。本发明的化合物也为木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶的抑制剂，例如那些组织蛋白酶家族如组织蛋白酶S的半胱氨酸蛋白酶抑制剂。

本发明的化合物也可用于治疗其中涉及半胱氨酸蛋白酶的病症，包括由引起最易感染的疟疾的寄生虫的恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)引起的感染，以及由间日疟原虫(Plasmodium vivax)、卡氏肺囊虫(Pneumocystiscarinii)、克鲁兹锥虫(Trypsanoma cruzi)、布鲁斯锥虫(Trypsanoma brucei)，和肌束短膜虫(Crithidia fusiculata)引起的感染；以及用于治疗病症如疟疾。相应地，本发明涉及一种治疗此类病症的方法。

在本发明的一个方面，提供式I化合物或其可药用衍生物，其用于治疗通过抑制半胱氨酸蛋白酶，尤其是抑制木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶，如falcipain家族的那些半胱氨酸蛋白酶(包括falcipain-2或falcipain-3)而调节(mediated)的病症。

在本发明的另一方面，提供式I化合物或其可药用衍生物在制备用于治疗通过抑制半胱氨酸蛋白酶，尤其是抑制木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶，如falcipain家族的那些半胱氨酸蛋白酶(包括falcipain-2或falcipain-3)而调节的病症的药物中的用途。

在本发明的另一方面，提供一种治疗患有通过抑制半胱氨酸蛋白酶，尤其是抑制木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶，如falcipain家族的那些半胱氨酸蛋白酶(包括falcipain-2或falcipain-3)而调节的病症(例如疟疾)的人或动物的方法，该方法包括给药有效量的式I化合物或其可药用衍生物，或给药包含式I化合物或其可药用衍生物的药物组合物。

本发明的化合物为半胱氨酸蛋白酶抑制剂，且可用于治疗通过抑制半胱氨酸蛋白酶，尤其是抑制木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶，如falcipain家族的那些半胱氨酸蛋白酶(包括falcipain-2或falcipain-3)而调节的病症，例如用于治疗疟疾。相应地，本发明进一步涉及包含式I化合物或其可药用衍生物的药物组合物。

本发明的治疗方法包括向有此需要的患者给药安全且有效量的式I化合物，或其可药用衍生物，或给药包含式I化合物或其可药用衍生物的药物组合物。

在此使用的术语″治疗″是指：(1)减轻或预防正在治疗的病症或正在治疗病症的一种或多种生理学体征，(2)干扰(a)导致或响应于正在治疗的病症的生理学级联的一个或多个点，或(b)正在治疗的病症的一种或多种生理学体征，或(3)减轻与正在治疗的病症相关联的一种或多种症状或作用。本领域的技术人员会理解，″预防″并不是绝对的术语。在医药中，″预防″理解为药物的预防性给药以使病症或其生理学体征的可能性或严重程度基本上减轻，或延迟此类病症或其生理学体征的发作。

在此使用的术语″安全且有效量″是指在合理的医学判断范围内，足以显著地引起所要治疗的病症的阳性变化，且足够低以避免严重副反应的化合物的量(处于合理的效益/风险比)。本发明化合物的安全且有效量会随着所选择的具体化合物(例如依赖于化合物的效力、功效，和半衰期)；所选择的给药途径；正在治疗的病症；正在治疗的病症的严重程度；正在治疗的患者的年龄、大小、重量和身体状况；要进行治疗的患者的病史；治疗持续时间；同时治疗的性质；所需的治疗效果；和类似因素而发生变化，但其可由本领域的技术人员常规地确定。

在此使用的术语″患者″指的是人或其它动物。

本发明的化合物可通过任何适宜的给药途径给药，包括全身性给药和局部给药。全身性给药包括口服给药、肠胃外给药、透皮给药、直肠给药，和通过吸入给药。肠胃外给药指的是除了肠内、透皮或通过吸入给药外的给药途径，且通常为注射或输注给药。肠胃外给药包括静脉内、肌内，和皮下注射或输注。吸入指的是给药至患者的肺内，无论是通过口还是通过鼻通路吸入。局部给药包括施用至皮肤以及眼内、眼睛(optic)、阴道内，和鼻内给药。

本发明的化合物可以一次给药或根据在一段给定的时期内以变化的时间间隔多次给药的给药方案给药。例如，给药可以为每天给药一次、两次、三次或四次。可以一直给药直到达到所需的治疗效果或无期限地维持在所需的治疗效果。本发明化合物的适宜的剂量方案取决于该化合物的药代动力学性质，如吸收、分布和半衰期，其可由本领域技术人员确定。此外，本发明化合物的适宜的给药方案，包括此类方案给药所持续的时间，取决于正在治疗的病症、正在治疗的病症的严重程度、正在治疗的患者的年龄和身体状况、要进行治疗的患者的病史、同时进行的治疗的性质、所需的治疗效果等本领域技术人员知识和技能范围内的因素。本领域技术人员应当进一步理解的是，适宜的给药方案在给定的单个患者对于给药方案的响应或随着时间推移单个患者需要变化时，可能需要调节。

典型的日剂量可根据所选择的具体给药途径而变化。对于口服给药，典型的日剂量为约0.01至约25mg/kg，在一个实施方案中，为约0.1至约14mg/kg。对于肠胃外给药，典型的日剂量为约0.001至约10mg/kg；在一个实施方案中，为约0.01至约6mg/kg。式I化合物，也可与其它治疗剂组合使用。因此，在另一方面，本发明提供组合药物(combination)，其包含式I化合物或其可药用衍生物以及其它治疗剂。当式I化合物或其可药用衍生物与抗相同疾病状态的第二活性治疗剂组合使用时，各个化合物的剂量可与单独使用化合物时不同。本领域的技术人员会容易知道适宜的剂量。应当理解，在治疗中使用所需要的本发明化合物的量会随着正在治疗的病症的性质和患者的年龄和身体状况而变化，且最终由主治医师或兽医决定。

本发明的化合物可以单独使用或与一种或多种其它活性剂(如其它半胱胺酸蛋白酶抑制剂或抗疟疾药)组合使用。

此类其它的活性剂包括抗疟疾药物，如叶酸(例如氯喹、甲氟喹、伯氨喹、乙胺嘧啶、奎宁、青蒿素、卤泛群、多西环素、阿莫地喹(amodiquine)、阿托伐醌(atovaquine)[阿托伐醌(atovaquone)]、他非诺喹)和抗叶酸剂(例如氨苯砜、氯胍、磺胺多辛、乙胺嘧啶、chlorcycloguanil、恩波环氯胍)或抗菌药物如阿奇霉素、多西环素、环丙沙星和克林霉素。

上述的组合药物可便利地以药物制剂的形式存在，且因此药物制剂包含如上所定义的组合药物以及可药用载体或赋形剂，这构成了本发明的另一方面。此类组合药物的单个成分可以以单独或组合的药物制剂通过任何常规的途径依次或同时给药。

当依次给药时，本发明的化合物或第二治疗剂可以首先给药。当同时给药时，该组合药物可以以相同或不同的药物组合物给药。当以相同的制剂组合时，可以理解的是两种化合物必须是稳定的且互相并且与制剂的其他成分之间是相容的。当分别配制时，它们可以以任何适宜的制剂提供，以在本领域中已知用于此类化合物的方式适宜地提供。

组合物

本发明的化合物通常会(但不是必须的)在向患者给药前，配制成药物组合物。在一个方面，本发明涉及包含本发明化合物的药物组合物。在另一方面，本发明涉及包含本发明化合物和可药用载体和/或赋形剂的药物组合物。该载体和/或赋形剂在与制剂的其它成分相容的意义上是“可接受的”且不会损害其接受者。

本发明的药物组合物可被制备并且以散装形式(bulk form)封装，从散装形式中可以取出安全且有效量的本发明化合物，且然后以如粉末或糖浆给予患者。或者，本发明的药物组合物可被制备并且以单位剂型封装，其中各个物理分隔的单位含有安全且有效量的本发明化合物。当以单位剂型制备时，本发明药物组合物通常包含对于口服剂型约0.5mg至约1750mg，例如约5mg至约1000mg，以及对于肠胃外剂型约0.05mg至约700mg，例如约0.5mg至约500mg。

本发明的药物组合物通常包含一种本发明化合物。然而，在某些实施方案中，本发明的药物组合物包含多于一种本发明化合物。例如，在某些实施方案中，本发明的药物组合物包含两种本发明化合物。此外，本发明的药物组合物可任选还包含一种或多种其它的药物活性化合物。相反地，本发明的药物组合物通常包含多于一种可药用赋形剂。然而，在某些实施方案中，本发明的药物组合物包含一种可药用赋形剂。

在此使用的术语“可药用”是指适于药物用途。

本发明的化合物和可药用赋形剂通常配制成适于通过所需给药途径给药至患者的剂型。例如，剂型包括那些适于下列给药途径的剂型：(1)口服给药，如片剂、胶囊、囊片、丸剂、含片、粉末、糖浆、酏剂、悬浮液、溶液、乳液、小药袋，和扁囊剂；(2)肠胃外给药，如无菌溶液、悬浮液，和用于重构的粉末；(3)透皮给药，如透皮贴片；(4)直肠给药，如栓剂；(5)吸入给药，如气雾剂和溶液；和(6)局部给药，如乳剂、油膏、洗剂、溶液、糊剂、喷雾剂、泡沫和凝胶。

适宜的可药用赋形剂会根据选择的具体剂型而变化。此外，对于它们在组合物中所起到的具体作用，可选择适宜的可药用赋形剂。例如，可以选择能够利于制备均匀剂型的某些可药用赋形剂。可以选择能够利于制备稳定剂型的某些可药用赋形剂。可以选择一旦给药至患者，能够利于携带或运输本发明化合物从一个器官或身体的一部分至另一器官或身体的另一部分的某些可药用赋形剂。可选择能够增加患者适应性的某些可药用赋形剂。

适宜的可药用赋形剂包括下列类型的赋形剂：粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、制粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、助溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、调味剂、气味掩蔽剂、着色剂、防结块剂、保湿剂、鳌合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。本领域的技术人员会理解某些可药用赋形剂可能起到多于一种作用，且可起到替代作用，这取决于赋形剂在制剂中存在的量的多少以及制剂中存在何种其他成分。

本领域的技术人员具有本领域的知识和技术以使得他们能够对于本发明使用而言选择适宜量的适宜的可药用赋形剂。此外，存在许多对于本领域技术人员而言可获得的资源，其描述了可药用赋形剂且可在选择适宜的可药用赋形剂中有用。实例包括Remington′s Pharmaceutical Sciences(MackPublishing Company)，The Handbook of Pharmaceutical Additives(GowerPublishing Limited)，和The Handbook of Pharmaceutical Excipients(theAmerican Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press)。

本发明的药物组合物利用对于本领域的技术人员而言已知的技术和方法而制备。本领域中常用的一些方法描述于Remington′s PharmaceuticalSciences(Mack Publishing Company)。

在一方面，本发明涉及固体或液体口服剂型如液体、片剂、锭剂或胶囊，其包含安全且有效量的本发明化合物和载体。该载体可为稀释剂或填料的形式。适宜的稀释剂和填料通常包括乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨糖醇、淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉，和预胶化淀粉)、纤维素及其衍生物(例如微晶纤维素)、硫酸钙，和磷酸氢钙。液体剂型通常包括化合物或盐于液体载体例如，乙醇、橄榄油、甘油、葡萄糖(糖浆)或水(例如具有添加的调味剂、助悬剂或着色剂)中的悬浮液或溶液。当该组合物为片剂或锭剂的形式时，可以使用用于制备固体制剂常规使用的任何药物载体。此类载体的实例包括硬脂酸镁、石膏粉、滑石、明胶、阿拉伯胶、硬脂酸、淀粉、乳糖和蔗糖。当组合物为胶囊形式时，任何常规的包封是适宜的，例如利用前述的载体或半固体例如甘油的单、二-癸酸酯(mono diglyceride of capric acid)、Gelucire^TM和Labrasol^TM，或硬胶囊壳如明胶。当组合物为软壳胶囊如明胶时，可以考虑用于制备分散液或悬浮液常规使用的任何药物载体，例如水性胶或油，且可以掺入至软胶囊壳中。

口服固体剂型还包含粘合剂形式的赋形剂。适宜的粘合剂包括淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉，和预胶化淀粉)、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、海藻酸、西黄芪胶、瓜尔胶、聚维酮，和纤维素及其衍生物(例如微晶纤维素)。口服固体剂型还可包含崩解剂形式的赋形剂。适宜的崩解剂包括交聚维酮、淀粉羟基乙酸钠、交联羧甲基纤维素、海藻酸，和羧基甲基纤维素钠。口服固体剂型还可包含润滑剂形式的赋形剂。适宜的润滑剂包括硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙，和滑石。

本发明还提供制备药物组合物的方法，该方法包括将式I化合物或其可药用衍生物与可药用载体和/或赋形剂混合。

用于口服给药的制剂可被适宜地配制以得到活性化合物的控制/延长释放。

在本说明书中所引用的所有出版物，包括但不局限于专利和专利申请，在此将它们引入作为参考文献，就像每个单独的出版物具体地和单独地引入作为参考文，恰如在此被充分阐述。

缩写

在发明的描述中，化学元素的命名按照元素周期表。本文中所使用的缩写和符号按照化学领域中技术人员对于此类缩写和符号的常规用法。本文使用如下缩写：

ACN 乙腈

AcOEt/EtOAc 乙酸乙酯

AcOH 乙酸

AFC 7-酰氨基-4-三氟甲基香豆素

AMC 7-酰氨基-4-甲基香豆素

anh. 无水

aq. 含水

brine 用盐(NaCl)饱和的水

℃ 摄氏度

ca. 约

cat. 催化剂

CDCl₃ 氘代氯仿

CHAPS 3-[(3-胆酰氨基丙基)二甲基铵]-1-丙磺酸内盐

CYS 半胱氨酸

δ/d 化学位移

DABCO 1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷

dba 二亚苄基丙酮

DCC N，N′-二环己基-碳二亚胺

DCE 1，2-二氯-乙烷

DCM 二氯甲烷

DHP 3，4-二氢-2H-吡喃

DIPEA N，N-二-异丙基-乙基-胺

DMA/DMAC 二甲基乙酰胺

DME 二甲氧基乙烷

DMF 二甲基甲酰胺

DMSO-d6/d6-DMSO 氘代二甲亚砜

DMSO 二甲亚砜

dppf 1，1’-双-(二苯基膦基)二茂铁

DTT 二硫苏糖醇

E64 反式-环氧丁二酰基-L-亮氨酰胺基(4-胍基)丁

烷

EDCI N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺

EDTA 乙二胺四乙酸

ES+MS 正离子电喷雾质谱

ES-MS 负离子电喷雾质谱

EtOH 乙醇

g 克

h 小时

H-D-VLR-AFC HD-缬氨酰-亮氨酰-精氨酰-7-酰氨基-4-三氟甲

基香豆素

Hex 己烷(己烷的混合物)

¹H-NMR 质子核磁共振

HPLC 高效液相色谱

i-PrOH 异丙醇

kg 千克

KQKLR-AMC N-乙酰基-赖氨酰-谷氨酰-赖氨酰-亮氨酰-精氨

酰-7-酰氨基-4-甲基香豆素

LC-MS 液相色谱-质谱

M 摩尔浓度

MeOH 甲醇

MES 2-(N-吗啉代)乙磺酸

MHz 兆赫兹

min 分钟

mg 毫克

mL 毫升

mm 毫米

mmol 毫摩尔

m/z 质荷比

uL 微升

N 当量浓度

NBS N-溴琥珀酰亚胺

nM 纳摩尔浓度

NMR 核磁共振

ⁱPrOH 异丙醇

Pd₂(dba)₃/Zn 三(二亚苄基丙酮)合二钯(0)/锌

ppm 百万分之一(parts per million)

p-TsOH/TsOH 4-甲苯磺酸

r.t./rt 室温

s 秒

sat. 饱和

tBu 叔丁基

TEA 三乙胺

TFA 三氟乙酸

THF 氢呋喃

THP 四氢吡喃

TsOH 4-甲苯磺酸

Z-LR-AMC 苄氧基羰基-亮氨酰-精氨酰-7-酰氨基-4-甲基

香豆素

化合物制备

用于合成式I化合物的通用方法描述于方案1-13中，且在实施例中示例性地说明。

其中R⁵为氢的式I化合物可根据方案1，通过式II化合物、式III化合物和式IV化合物之间的反应制备，式II中，R¹和B如式I中所定义，式III中，Hal为氯、溴或碘，式IV中，X和R^J如式I中所定义。化合物II与化合物III在适宜的碱如DIPEA或K₂CO₃存在下，在适宜的溶剂如THF或ACN中反应，接着添加化合物IV，得到化合物I。

方案1

或者，其中R⁵为氢的式I化合物，可根据方案2，通过式V化合物和式IV化合物之间的反应制备，式V中，R¹和B如式I中所定义，且Hal为氯、溴或碘，式IV中，X和R^J如式I中所定义。化合物V与IV在适宜的碱如DIPEA或K₂CO₃存在下，在适宜的溶剂如THF或ACN中反应。

方案2

或者，其中R⁵为氢的式I化合物，可根据方案3，通过式II化合物和式VI化合物之间的反应制备，其中X和R^J如式I中所定义，且Hal为氯、溴或碘。化合物II与化合物VI在适宜的碱如DIPEA或K₂CO₃的存在下，在适宜的溶剂如THF或ACN中反应。

方案3

式III化合物或者商购得到，或者它们可从相应的苯甲酸通过与适宜的试剂如亚硫酰氯(以制备酰氯)反应而合成。

化合物VI可按如下合成：从相应的式III化合物的苯甲酸的甲基酯前体和化合物I之间的反应起始：或者

i)当VI中的亚烷基为C_1-3时：在适宜的碱如碳酸钾的存在下，于适宜的溶剂如DMF中；或者

ii)当VI中的亚烷基为C₀时：在碱和催化剂混合物，例如碳酸铯、Pd₂(dba)₃和+/-BINAP的存在下；

接着通过使用适宜的试剂如氢氧化锂在适宜的溶剂如MeOH中将甲基酯部分转化为苯甲酸部分，接着通过使用适宜的试剂如亚硫酰氯(以制备酰氯)转化为酰卤化物，得到化合物VI。

式V化合物可根据方案4，通过式II化合物和式III化合物之间的反应制备。化合物II与化合物III在适宜的碱如DIPEA或K₂CO₃的存在下，在适宜的溶剂如THF、ACN或DCM中反应。

方案4

式II化合物可根据方案5，从式VII化合物(其中R¹和B如式I中所定义)，通过在适宜的酸如三氟乙酸或TsOH的存在下，在适宜的溶剂如DCM或ACN中脱保护基而制备。

方案5

其中R¹表示C_1-4烷基的式VII化合物，可根据方案6，按如下制备：从式VIII化合物(其中R¹表示C_1-4烷基，且B如式I中所定义)，通过氰化反应，利用多种条件置换式VIII化合物中的氯取代基，例如通过使用氰化钾、氰化钠或氰化锌，在适宜的碱如DABCO的存在下，或在适宜的催化剂如Pd₂(dba)₃/Zn存在下，在适宜的溶剂如DMSO或DMA中，在高温例如100-160℃，或在微波存在下处理。

方案6

式VIII化合物可根据方案7，通过式IX化合物(其中B如式I中所定义)和式X化合物(其中R¹表示C_1-4烷基)之间反应制备。例如根据Luo G.等人，(2002)Tetrahedron Letters，43(33)，5739-5742给出的文献方法，化合物IX与化合物X在适宜的溶剂如EtOH，例如于室温反应3-4天。或者，化合物IX与化合物X在适宜的碱如DIPEA的存在下，在适宜的溶剂如i-PrOH或甲苯中，在高温如80-120℃或在微波存在下反应。

方案7

式IX化合物可根据方案8，从式XI化合物通过与羰基化合物XII还原胺化而制备，其中A、n和R^X如式I中所定义。式XI化合物肼基甲酸叔丁基酯为商购的(ALDRICH)。式XII化合物也是商购的。例如根据Hilpert，H.(2001)Tetrahedron，57，7675-7683或Dyker，H.等人，(2001)J.Org.Chem.66，3760-3766)给出的文献方法，化合物XII与化合物XI的还原胺化在适宜的还原剂如氢气，以及适宜的催化剂如铂或钯或氧化铂，或者使用NaBH₃CN或NaBH(AcO)₃，在酸如AcOH的存在下，在适宜的溶剂如i-PrOH，EtOH，MeOH，DCE或THF中进行。

方案8

或者，其中R¹为C_1-4烷基且R⁵为氢的式I化合物可根据方案9，按如下制备：从式XIII化合物(其中R¹为C_1-4烷基，R⁵为氢且R²和B如式I中所定义)通过氰化反应，利用多种条件置换式XIII化合物的氯取代基，例如通过使用氰化钾、氰化钠或氰化锌，在适宜的碱如DABCO的存在下，或在适宜的催化剂如Pd₂(dba)₃/Zn的存在下，在适宜的溶剂如DMSO或DMA中，在高温例如100-160℃，或在微波的存在下进行处理。

方案9

式XIII化合物可根据方案10，通过式XIV化合物(其中R¹为C_1-4烷基，R⁵为氢，B如式I中所定义，且Hal为氯、溴或碘)和式IV化合物之间的反应制备。化合物XIV与IV在适宜的碱如DIPEA的存在下，在适宜的溶剂如THF或ACN中反应。

方案10

式XIV化合物可根据相似于上面制备式V化合物描述的方法制备。

式VII化合物(其中R¹表示C_1-4烷基、C_1-5亚烷基-NR^ER^F或C_1-2亚烷基-N-邻苯二甲酰亚胺)可根据方案11，由式XV化合物(其中B如式I中所定义)和烷基化试剂Hal-R¹(其中Hal为氯、溴或碘)，在适宜的碱如K₂CO₃的存在下，在适宜的溶剂如DMF中而制备。

如果使用过当量的烷基化试剂Hal-R¹，式XVI化合物可根据方案11制备。当R¹为C_1-5亚烷基-NR^ER^F时，其中R^E和R^F为C_1-4烷基，得到的式XVI化合物可转化为式I化合物，其中R¹和R⁵均为C_1-5亚烷基-NR^ER^F且R^E和R^F为C_1-4烷基，利用相似于上面关于其中R⁵为氢的化合物描述的方法。

方案11

式XV化合物可根据方案12，通过式XVII化合物(其中PG为适宜的保护基团如2-THP，且B如式I中所定义)的脱保护基反应而制备。当PG为2-THP时，脱保护基可在适宜的酸例如Dowex 50x 2200树脂，在适宜的溶剂如EtOH中，在高温如60-79℃下进行。

方案12

式XVII化合物可利用相似于那些对于式VII化合物描述的方法合成，例如从化合物XVIII(参见方案13)开始。例如，化合物XVIII可用2-THP基团保护，例如通过化合物XVIII与DHP在适宜的酸如p-TsOH的存在下，在适宜的溶剂如AcOEt中而反应，然后利用与对于化合物VII描述的相似方法制备化合物XVII(参见方案6)。

式X化合物(其中R¹表示C_1-4烷基)可根据方案13，从商购的式XVIII化合物，通过与式C_1-4烷基-Hal化合物(其中Hal为氯、溴或碘)，在适宜的溶剂如DMF或DMSO中进行烷基化反应而制备。

方案13

对于本领域的技术人员而言，显而易见的是其它式I化合物可利用相似于那些上面列出的方法，或通过参考在本文中提供的实施例中详述的实验方法制备。

本领域的技术人员也会理解在式I化合物或其溶剂合物的制备中，可能必须和/或需要在分子或合适的中间体中保护一个或多个敏感性基团以避免不需要的副反应。对于本发明使用的适宜的保护基团为本领域技术人员所公知的，且可以常规方式使用。参见，例如，“Protective groups in organicsynthesis”，T.W.Greene和P.G.M.Wuts(John Wiley & sons 1991)或“ProtectingGroups”，P.J.Kocienski(Georg Thieme Verlag 1994)。适宜的氨基保护基团的实例包括酰基类型的保护基团(例如甲酰基、三氟乙酰基、乙酰基)、芳香族氨基甲酸酯型保护基团(例如苄氧基羰基(Cbz)和取代的Cbz)、脂肪族氨基甲酸酯型保护基团(例如9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、叔丁基氧基羰基(Boc)、异丙基氧基羰基、环己基氧基羰基)和烷基或芳烷基型保护基团(例如苄基、三苯甲基、氯三苯甲基)。适宜的氧保护基团的实例可包括例如烷基甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基或叔丁基二甲基甲硅烷基；烷基醚如四氢吡喃基或叔丁基；或酯如乙酸酯。

实施例

下面的实施例示例性地说明本发明。这些实施例并不意欲限制本发明的范围，但对于本领域的技术人员提供制备以及使用本发明的化合物、组合物及方法的指导。当描述本发明的具体实施方案时，本领域的技术人员会理解可以进行各种变化和改进而不偏离本发明的精神和范围。

中间体

中间体1：2-(环戊基甲基)-肼-甲酸1，1-二甲基乙基酯

向肼甲酸叔丁基酯(Fluka，4.79g，36.3mmol)于无水MeOH(80mL)中的溶液中加入环戊烷甲醛(Aldrich，3.56mg，36.3mmol)，NaBH₃CN(Aldrich，4.55g，72.4mmol)和冰醋酸(8.2mL)。混合物于室温搅拌过夜，经冰浴冷却，并使用2N NaOH溶液中和。将溶剂蒸发，残余物在DCM和H₂O之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩至干。残余物在硅胶上(己烷/EtOAc，9/1)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：5.96(br s，1H)，3.35(br s，1H)，2.77(d，2H，J＝7.3Hz)，2.10-1.88(m，1H)，1.83-1.69(m，2H)，1.69-1.46(m，4H)，1.45(s，9H)，1.28-1.12(m，2H)ppm。

中间体2：2，6-二氯-9-甲基-9H-嘌呤

于室温，将2，6-二氯-1H-嘌呤(5g，26.5mmol)溶于DMSO(150mL)。滴加无水碳酸钾(4g，30.7mmol)和碘甲烷(3.29mL，53mmol)。将混合物搅拌过夜。溶液倾倒至冰水中，并用乙酸乙酯萃取。有机层用无水硫酸钠干燥。粗产物通过硅胶柱层析(洗脱液：己烷∶乙酸乙酯混合物，从100∶0至60∶40)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δppm：8.09(s，1H)；3.92(s，3H)。[ES+MS]m/z 203(MH)⁺。

中间体3：2-(2-氯-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-2-(环戊基-甲基)-肼-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将中间体2(860mg，4.2mmol)溶于i-PrOH(100mL)。加入中间体1(1.0g，4.6mmol)和DIPEA(1.45mL，8.5mmol)，并将得到的混合物回流12小时。反应混合物冷却至室温，在减压下除去溶剂，并将粗产物溶于DCM。有机层依次用饱和NH₄Cl，1N NaHCO₃和盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。粗混合物通过硅胶柱层析(洗脱液：己烷∶乙酸乙酯混合物，从100∶0至60∶30)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δppm：7.72(s，1H)；7.40-6.62(br.，1H)；4.33(br，1H)；3.89(br，1H)；3.78(s，3H)；2.40(m，1H)；1.82-1.22(m，18H)。[ES+MS]m/z 381(MH)⁺。

中间体4：2-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-2-(环戊基甲基)-肼-甲酸1，1-二甲基乙基酯

在氩气下，将中间体3(1g，2.63mmol)，1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁(Aldrich，20mg)，锌(Aldrich，58mg)，氰化锌(Aldrich，185mg，1.58mmol)和三-(二亚苄基-丙酮)合二钯(0)(Aldrich，47.6mg)置于圆底烧瓶中。在氩气下加入DMAC(130mL)，并将得到的溶液在150℃加热2小时。混合物冷却至室温，并通过塞力特硅藻土(Celite)过滤。过滤后，溶剂在减压下蒸发。粗产物通过硅胶柱层析(洗脱液：己烷∶乙酸乙酯混合物，从100∶0至60∶30)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δppm：7.87(s，1H)；7.26-6.57(br，1H)；4.41(br，1H)；3.93(br，1H)；3.84(s，3H)；2.41(m，1H)；1.81-1.26(m，18H)。[ES+MS]m/z 372(MH)⁺。

中间体5：6-[1-(环戊基甲基)肼基]-9-甲基-9H-嘌呤-2-甲腈

将中间体4(880mg，2.4mmol)溶于DCM(20mL)，并加入TFA(4mL)。混合物于室温搅拌4小时，在减压下浓缩，并溶于DCM。有机层用碳酸氢钠洗涤，并用无水硫酸钠干燥。粗产物通过硅胶柱层析(洗脱液：己烷∶乙酸乙酯混合物，从100∶0至70∶30)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δppm：7.86(s，1H)；4.22(br，3H)；3.84(s，1H)；2.50(m，1H)；1.80-1.22(br，9H)。[ES+MS]m/z 272(MH)⁺。

中间体6：4-(溴甲基)-N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-(环戊基甲基)苯甲酰肼

于室温，将中间体5(472mg，1.74mmol)溶于ACN(60mL)；然后，加入无水碳酸钾(Aldrich，228mg，2.09mmol)和4-溴甲基苯甲酰溴(Aldrich，483mg，1.74mmol)。混合物于室温搅拌20分钟，然后，加入1N NaOH。溶液在减压下浓缩，残余物用AcOEt(3×15mL)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，并真空浓缩。粗产物通过硅胶柱层析(洗脱液：己烷∶乙酸乙酯混合物，从100∶0至60∶40)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δppm：1.41-1.11(br.1H)；8.50-8.27(br.1H)；7.92(d，1H)；7.58(d，1H)；4.77(s，2H)；3.88(br.，1H)；3.80(m，1H)；3.73(s，3H)；2.34(m，1H)；1.85-1.22(m，9H).

中间体7：2，6-二氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤

在N₂下，将2，6-二氯嘌呤溶于无水THF(100mL)，并加入催化剂TsOH(A1drich，62mg，0.36mmol)。将混合物在80℃加热，并加入3，4-二氢-2H-吡喃(Aldrich 2.89mL，32mmol)。将混合物回流下搅拌10小时，以及于室温搅拌2天。滴加NH₄OH(0.5mL)，并在减压下除去溶剂。粗产物溶于AcOEt(40mL)并用饱和NH₄Cl和盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，然后，混合物通过硅胶柱层析(洗脱液：己烷∶乙酸乙酯混合物，从60∶40至0∶100)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO)δppm：8.94(s，1H)；5.73(m，1H)；4.0(m，1H)；3.72(m，1H)；2.23(m，1H)；1.97(m，2H)；1.76(m，1H)；1.58(m，2H)。

中间体8：2-[2-氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基]-2-(环戊基甲基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

将中间体7(4.9g，18mmol)溶于i-PrOH(90mL)；加入中间体1(4.2g，19.6mmol)和DIPEA(Fluka，3.8mL，21.6mmol)。混合物在回流下加热6小时，冷却至室温，在减压下除去溶剂，粗产物溶于DCM，用饱和NH₄Cl，1NNaHCO₃和盐水萃取，并用无水硫酸钠干燥。粗产物通过硅胶柱层析(洗脱液：己烷∶乙酸乙酯混合物，从100∶0至60∶40)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO)δppm：9.89-9.49(br，1H)；8.49-8.40(br，1H)；5.59(m，1H)；4.20(m，1H)；3.97(m，1H)；3.68(m，2H)；2.57(m，1H)；2.26(m，2H)；1.93(m，2H)；1.69-1.16(m，20H)。[ES+MS]m/z 451(MH)⁺。

中间体9：2-[2-氰基-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基]-2-(环戊基甲基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

在氩气下，将中间体8(5g，11.08mmol)，1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁(Aldrich，244mg，0.44mmol)，锌(Aldrich，87mg)，氰化锌(Aldrich，775mg，6.6mmol)和三-(二亚苄基-丙酮)合二钯(0)(Aldrich，203mg，0.22mmol)置于圆底烧瓶中。在氩气下加入DMAC(130mL)，溶液在150℃加热2小时。混合物冷却至室温并通过塞力特硅藻土过滤。过滤后，在减压下除去溶剂，粗产物通过硅胶柱层析(洗脱液：己烷∶乙酸乙酯混合物，从100∶0至70∶30)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO，80℃)δppm：9.42(br，1H)；8.57(s，1H)；5.70(d，1H)；4.28-3.87(m，3H)；3.74(m，1H)；2.42-2.16(m，2H)；1.98(m，2H)；1.80-1.22(m，20H)。[ES+MS]m/z 442(MH)⁺。

中间体10：2-(2-氰基-1H-嘌呤-6-基)-2-(环戊基-甲基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

将中间体9(4.4g，9.96mmol)溶于EtOH(130mL)，并加入DOWEX50x2-200离子交换树脂(1.5g)。溶液在80℃加热1小时。混合物冷却至室温，过滤，且树脂用EtOH洗涤。在减压下除去溶剂，粗混合物通过硅胶柱层析(洗脱液：己烷∶乙酸乙酯混合物，从100∶0至70∶30)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO 25℃)δppm：9.89-9.50(br，1H)；8.45(s，1H)；4.30(br，1H)；3.70(br，1H)；2.29(m，1H)；1.73-1.24(m，17H)。[ES+MS]m/z358(MH)⁺。

中间体11：2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

将环戊酮(Aldrich，4mL，45mmol)于MeOH(160ml)中的溶液用肼基甲酸叔丁基酯(Fluka，5.9g，45mmol)，NaBH₃CN(Aldrich，4.24g，67.5mmol)和冰醋酸(10mL)处理。混合物于室温搅拌过夜，经冰浴冷却，并使用2N NaOH溶液中和。将溶剂蒸发，残余物在DCM和H₂O之间分配。有机相用盐水洗涤，干燥且溶剂在减压下蒸发，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δppm：8.20(br.s，1H)；4.09(br.s，1H)；1.30-1.59(m，8H)；1.37(s，9H)。

中间体12：2-[2-氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基]-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

将中间体11(2.4g，12mmol)，中间体7(3.28g，12mmol)和DIPEA(Fluka，4.1ml，24mmol)于无水i-PrOH(43ml)中的混合物回流下搅拌15小时。混合物在减压下浓缩，残余物在DCM和1M氯化铵之间分配。有机层用盐水处理，并用MgSO₄干燥。残余物通过快速层析(洗脱液：Hex/AcOEt混合物，98∶2至50∶50)纯化，得到标题化合物。[ES+MS]m/z 437(MH)⁺

中间体13：2-[2-氰基-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基]-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

将中间体12(210mg，0.48mmol)，Zn(CN)₂(Aldrich，34mg，0.29mmol)，Pd₂(dba)₃(Aldrich，9mg，0.01mmol)，dppf(Aldrich，11mg，0.02mmol)，和锌粉(Aldrich，4mg，0.06mmol)的混合物置于充有氩气的微波瓶中。通过注射器加入DMA(Aldrich，4mL)。得到的混合物在微波中于150℃和12巴的压力下加热180秒。混合物冷却至室温，通过塞力特硅藻土过滤，真空浓缩，残余物通过快速层析(洗脱液：Hex/AcOEt混合物，95∶5至50∶50)纯化，得到标题化合物。[ES+MS]m/z 428(MH)⁺。

中间体14：2-(2-氰基-1H-嘌呤-6-基)-2-环戊基-肼-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将中间体13(2.76g，6.5mmol)和Dowex D-50(H⁺)(Aldrich，1.1g)于EtOH(150mL)中的混合物回流，直到起始物料消耗完(1小时，经HPLC跟踪)。将混合物冷却，过滤，残余物用热EtOH洗涤。将合并的有机级分真空浓缩，残余物通过快速层析(洗脱液：Hex/AcOEt混合物，98∶2至0∶100)纯化，得到标题化合物。[ES+MS]m/z 344(MH)⁺。

中间体15：2-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-2-环戊基-肼-甲酸1，1-二甲基乙基酯

在0℃，向室温的中间体14(955mg，2.78mmol)于DMF(25mL)中的溶液中加入无水碳酸钾(Aldrich，461mg，3.34mmol)和碘甲烷(Aldrich，0.26mL，4.17mmol)。得到的混合物在0℃于N₂下搅拌2小时，残余物在AcOEt和水之间分配，水层用AcOEt萃取3次。有机层用盐水处理，并用MgSO₄干燥。残余物通过快速层析(洗脱液：Hex/AcOEt混合物，98∶2至50∶50)纯化，得到标题化合物。[ES+MS]m/z 358(MH)⁺。

中间体16：6-(1-环戊基肼基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-甲腈

向中间体15(750mg，2.1mmol)于ACN(16mL)中的溶液中加入TsOH(Aldrich，904mg，5.25mmol)，并将得到的反应混合物于室温搅拌过夜。将混合物真空浓缩，残余物在DCM和水之间分配。有机层用碳酸氢钠饱和溶液，盐水处理，并用无水Na₂SO₄干燥。残余物通过快速层析(洗脱液：Hex/AcOEt混合物，98∶2至30∶70)纯化，得到标题化合物。[ES+MS]m/z 258(MH)⁺。

中间体17：4-(溴甲基)-N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-苯甲酰肼

向中间体16(458mg，1.78mmol)于THF(16mL)中的溶液中加入DIPEA(Fluka，755μl，4.45mmol)和4-溴甲基苯甲酰溴(Aldrich，495mg，1.78mmol)。将得到的反应混合物于室温于N₂中搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩，残余物在DCM和水之间分配；有机层用1N NaOH，盐水处理，并用无水Mg₂SO₄干燥。残余物通过快速层析(洗脱液：Hex/AcOEt混合物，95∶5至30∶70)纯化，得到标题化合物。[ES+MS]m/z 454(MH)⁺。

中间体18：甲磺酸1-(二苯基甲基)-3-氮杂环丁烷基酯

在氮气氛下，将TEA(0.9mL，6.5mmol)加至先前冷却至0℃的1-二苯甲基氮杂环丁烷-3-醇(Maybridge，1.03g，4.3mmol)于无水DCM(15mL)中的溶液中。5分钟后，加入甲磺酰氯(Aldrich，0.4mL，5.2mmol)，并将得到的反应混合物在0℃搅拌2小时。然后加入水，混合物用DCM萃取。合并的有机层用无水MgSO₄干燥，并在真空下除去溶剂，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δppm：7.58-7.10(br.，10H)；5.19-5.03(br.，1H)；4.60-4.42(br.，1H)；3.63-3.42(br.，2H)；3.17(br.s，3H)；3.15-2.97(br.，2H)。

中间体19：1-[1-(二苯基甲基)-3-氮杂环丁烷基]吡咯烷

将中间体18(0.5g，1.6mmol)溶于吡咯烷(Aldrich，3mL，36mmol)，并将得到的反应混合物加热至60℃，持续2小时，然后加热至70℃，再持续2小时，最后回流8小时，然后冷却至室温过夜。加入碳酸氢钠的饱和水溶液，产物用DCM萃取。合并的有机层用无水Na₂SO₄干燥，且溶剂在减压下蒸发，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δppm：7.45-7.36(m，4H)；7.31-7.11(m，6H)；4.39(s，1H)；3.55-3.46(m，1H)；3.13-3.04(m，1H)；3.04-2.92(m，1H)；2.84-2.76(m，2H)；2.37-2.23(b r.，4H)；1.70-1.56(br.，4H)。[ES+MS]m/z 293(MH)⁺。

中间体20：1-(3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐

向中间体19(1.6mmol)于EtOH(5.2mL)中的溶液中加入1N HCl(1.4mL)和氢氧化钯/碳(Aldrich，0.05mg，0.38mmol)，并将得到的反应混合物于室温和3巴下氢化，持续过周末。加入另外的1N HCl(3mL)，且再保持氢化4天。然后将反应混合物冻干，且然后加入MeOH。得到的溶液用EtOAc、己烷、DCM和乙醚洗涤，得到标题化合物，其在随后步骤中使用而不用任何进一步纯化。[ES+MS]m/z 127(MH)⁺

中间体21：2-环己基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

该中间体利用相似于对于中间体11描述的方法制备，但是环戊酮用环己酮代替。[ES+MS]m/z 215(MH)⁺。

中间体22：2-(2-氯-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-2-环己基-肼-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将中间体21(1.55g，7.25mmol)，中间体2(1.62g，7.98mmol)，DIPEA(Fluka，2.5ml，14.5mmol)和无水i-PrOH(26ml)的混合物回流下搅拌48小时。混合物在减压下浓缩，并将残余物在DCM和1M氯化铵之间分配。有机层用盐水处理，并用MgSO₄干燥。残余物通过快速层析(洗脱液：Hex/AcOEt混合物，95∶5至30∶70)纯化，得到标题化合物。[ES+MS]m/z 381(MH)⁺。

中间体23：2-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-2-环己基-肼-甲酸1，l-二甲基乙基酯

将中间体22(400mg，1.05mmol)，Zn(CN)₂(Aldrich，74mg，0.63mmol)，Pd₂(dba)₃(Aldrich，19mg，0.02mmol)，dppf(Aldrich，23mg，0.04mmol)，和锌粉(Aldrich，9mg，0.13mmol)的混合物置于充有氩气的微波瓶中。通过注射器加入DMA(Aldrich，5mL)。得到的混合物在微波中于150℃和12巴的压力下加热300秒。将混合物冷却至室温，通过塞力特硅藻土过滤，并用DCM洗涤。溶液在真空下浓缩，且残余物通过快速层析(洗脱液：Hex/AcOEt混合物，98∶2至0∶100)纯化，得到标题化合物。[ES+MS]m/z 372(MH)⁺。

中间体24：6-(1-环己基肼基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-甲腈

向中间体23(1.36g，3.7mmol)于DCM(32mL)中的溶液中加入TsOH(Aldrich，1.6g，9.25mmol)，并将得到的反应混合物于室温搅拌过夜。混合物在减压下浓缩，且残余物在DCM和水之间分配，有机层用饱和的碳酸氢钠溶液，盐水处理，并用无水Na₂SO₄干燥，得到标题化合物。残余物通过快速层析(洗脱液：Hex/AcOEt混合物，92∶8至20∶80)纯化，得到标题化合物。[ES+MS]m/z 272(MH)⁺。

中间体25：4-(溴甲基)-N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环己基-苯甲酰肼

向中间体24(865mg，3.19mmol)于THF(25mL)中的溶液中加入DIPEA(Fluka，1.4mL，7.96mmol)和4-溴甲基苯甲酰溴(Aldrich，887mg，3.19mmol)。得到的反应混合物于室温和N₂下搅拌过夜。混合物在减压下浓缩，且将残余物在DCM和水之间分配，有机层用1N NaOH，盐水处理，并用无水Mg₂SO₄干燥。残余物通过快速层析(洗脱液：Hex/AcOEt混合物，95∶5至30∶70)纯化，得到标题化合物。[ES+MS]m/z 468(MH)⁺。

中间体26：2-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-(环戊基甲基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐

在氮气下，将中间体10(50mg.，0.14mmol)溶于无水DMF(5mL)。加入无水碳酸钾(39mg，0.28mmol)和3-二甲基-氨基-丙基氯盐酸盐(Aldrich，30mg，0.21mmol)，并将该混合物在50℃搅拌过夜。将溶液过滤，并在减压下浓缩。将粗产物溶于DCM，并依次用饱和NH₄Cl和盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩至干，且残余物通过制备型HPLC(SUNFIRE 19×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO，80℃)δppm：9.34(br，1H)；8.43(s，1H)；4.29(t，2H)；3.12(m，2H)；2.78(s，6H)；2.35(m，1H)；2.25(m，2H)；2.0-1.15(m，17H)。[ES+MS]m/z 443(MH)⁺。

中间体27：2-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-(环戊基甲基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐

在N₂下，将中间体10(50mg.，0.14mmol)溶于无水DMF(5mL)。加入无水碳酸钾(Aldrich，39mg.，0.28mmol)和2-二甲基氨基乙基氯盐酸盐(Aldrich，30mg，0.21mmol)，并将混合物在50℃搅拌过夜。然后将溶液过滤，并在减压下浓缩。将粗产物溶于DCM，并依次用饱和NH₄Cl和盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩至干，且残余物通过制备型HPLC(SUNFIRE 19×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO，80℃)δppm：7.98(d，2H)；7.53(d，2H)；7.76-7.61(br，1H)；4.51(br，1H)；4.20(s，2H)；4.01(br，1H)；3.78(s，3H)；3.50(br，2H)；3.36(m，1H)；3.18(br，3H)；2.88(br，3H)；2.77(s，3H)；2.37(m，1H)；2.00-1.2I(m，13H)。[ES+MS]m/z 429(MH)⁺。

中间体28：6-[1-(环戊基甲基)肼基]-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-2-甲腈三氟乙酸盐

在N₂下，将中间体27(300mg.，0.7mmol)溶于DCM(30mL)，并加入TFA(2.5mL)。混合物于室温搅拌过夜。溶剂在减压下除去，且得到的油状物在下一步中使用而不用其它纯化步骤。

中间体29：6-(1-环戊基肼基)-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-2-甲腈三氟乙酸盐

在N₂下，将实施例15(100mg，0.23mmol)溶于DCM(10mL)，并加入TFA(Fluka，1mL)。将混合物于室温搅拌过夜。在减压下除去溶剂，且粗产物通过制备型HPLC(SUNFIRE 19×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO+D₂O)δppm：8.37(s，1H)；5.68(br，1H)；4.24(t，2H)；3.04(m，2H)；2.73(s，6H)；2.16(m，2H)；1.91-1.43(m，8H)。

中间体30：2-(2-甲基丙基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

在0℃，将肼甲酸1，1-二甲基乙基酯(ALDRICH，9.2g，70mmol)于i-PrOH(50ml)中的溶液使用异丁醛(6.4ml，70mmol)处理15分钟，并在0℃搅拌2小时，然后将混合物于室温搅拌5小时。向含有中间体腙的该溶液中加入PtO₂，且将该悬浮液于室温和2.6巴下氢化48小时。过滤悬浮液，并在减压下除去溶剂，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δppm：6.02(br.s，1H)，3.92(br.s，1H)，2.66(d，2H)，1.73(m，1H)，1.46(s，9H)，0.93(d，6H)。[ES+MS]m/z 189(MH⁺)。

中间体31：2-(2，2-二甲基丙基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

标题化合物通过相似于上面对于中间体30描述的方法制备，异丁醛用三甲基乙醛代替。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δppm：8.19(s，1H)，3.34(br.s，1H)，2.46(d，2H)，1.37(s，9H)，0.85(s，9H)。[ES+MS]m/z 203(MH⁺)。

中间体32：2-(2-氯-4-嘧啶基)-2-(2-甲基丙基)-肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

将中间体30(12.07g，64mmol)，2，4-二氯嘧啶(19.07g，128mmol)，三乙胺(10.7ml，145mmol)和无水EtOH(100ml)的混合物于室温搅拌3天。混合物在减压下浓缩，且将残余物在DCM和1M氯化铵之间分配。有机层用盐水处理，并用MgSO₄干燥。残余物通过快速层析(洗脱液：Hex/AcOEt混合物，97∶3至50∶50)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δppm：9.77(br.s，1H)，8.15(d，1H)，6.52(br.s，1H)，3.76(br.s，1H)，3.17(br.s，1H)，1.92(m，1H)，1.43(s，9H)，0.87(m，6H)。[ES-MS]m/z 299(MH^-)。

中间体33：2-(2-氯-4-嘧啶基)-2-(2，2-二甲基丙基)-肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

标题化合物通过相似于上面对于中间体32描述的方法制备，中间体30用中间体32代替。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δppm：8.12(d，1H)，6.64(br.s，1H)，6.58(d，1H)，1.50(s，9H0，1.00(s，9H)。[ES-MS]m/z 313(MH^-)。

中间体34：2-(2-氰基-4-嘧啶基)-2-(2-甲基丙基)-肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

于室温，将氰化钾(3.5g，54.6mmol)加至中间体32(13.69g，45.51mmol)和DABCO(5.10g，45.51mmol)于85/15的DMSO/H₂O混合物(195ml)中的悬浮液中。反应混合物在100℃搅拌1.7小时，倾倒至冰水(250ml)中。将白色固体滤出并干燥。化合物通过快速层析(洗脱液：Hex/AcOEt混合物，4∶1至3∶1)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δppm：9.88(br.s，1H)，8.37(d，1H)，6.80(b r.s，1H)，3.60(br.s，1H)，3.25(b r.s，1H)，1.95(m，1H)，1.43(s，9H)，0.88(m，6H)。[ES-MS]m/z 290(MH^-)。

中间体35：2-(2-氰基-4-嘧啶基)-2-(2，2-二甲基丙基)-肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

标题化合物通过相似于上面对于中间体34描述的方法制备，中间体32用中间体33代替。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：9.89(br.s，1H)，8.39(d，1H)，6.79(br.s，1h)，3.96(d，1H)，3.10(d，1H)，1.43(s，9H)，0.93(s，9H)。[ES+MS]m/z 306(MH⁺)。

中间体36：4-[1-(2-甲基丙基)肼基]-2-嘧啶甲腈

将中间体34(8.2g，28.15mmol)溶于TFA(12ml)于DCM(120ml)中的混合物中。反应混合物于室温搅拌过夜。加入另外的TFA(5ml)，且2小时后反应完成。混合物用水(2×100ml)，10％NaHCO₃(100ml)处理，用Na₂SO₄干燥，并在减压下蒸发，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：8.17(d，1H)，7.23(d，1H)，4.93(s，2H)，3.52(d，1H)，2.17(m，1H)，0.84(d，6H)。[ES+MS]m/z 292(MH⁺)。

中间体37：4-[1-(2，2-二甲基丙基)肼基]-2-嘧啶甲腈

标题化合物通过相似于上面对于中间体36描述的方法制备，中间体34用中间体35代替。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：8.19(d，1H)，7.22(d，1H)，4.99(s，2H)，3.55(s，2H)，0.94(s，9H)。[ES+MS]m/z 206(MH)⁺。

中间体38：4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酸

将N-甲基哌嗪(ALDRICH，1.46ml，13.1mmol)于二甲基甲酰胺(5ml)中的溶液冷却至0℃，然后，加入碳酸钾(K₂CO₃，1.81g，13.1mmol)。将该混合物在0℃搅拌30分钟。然后，加入4-(溴甲基)苯甲酸甲基酯(ALDRICH，3g，13.1mmol)。将反应混合物温热至室温，并搅拌17小时。混合物在减压下浓缩。将残余物溶于DCM，并用水洗涤，水层用DCM萃取。合并有机层，用水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，且溶剂在减压下除去，得到相应的4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酸甲基酯。¹H RMN(300MHz，CDCl3-d6)：7.97(d，2H)，740(d，2H)，3.90(s，3H)，3.55(s，2H)，2.47(br.m，8H)，2.28(s，3H)。

将氢氧化锂(ALDRICH，337mg，14.1mmol)于H₂O(10ml)中的溶液加至甲基酯(1.4g，5.63mmol)于MeOH(20ml)中的溶液中，将混合物在回流加热2小时。混合物在减压下浓缩。将残余物溶于DCM，并加入2N盐酸使得pH为5。将水层使用正丁醇(5次)处理，并合并级分，用MgSO₄干燥，过滤并在减压下蒸发，得到标题化合物，为白色固体。¹H RMN(300MHz，DMSO-d₆)：12.83(br.m，1H)，11.05(br.m，1H)，7.90(d，2H)，7.43(d，2H)，4.36(m，1H)，3.60(s，2H)，3.38-2.80(br.m，8H)，2.68(s，3H)。[ES+MS]m/z 235(MH)⁺。

中间体39：2-(5-溴-2-氯-4-嘧啶基)-2-(2-甲基丙基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

向5-溴-2，4-二氯嘧啶(ALDRICH，3.0g，13mmol)和中间体30(2.5g，13mmol)于i-PrOH(80mL)中的溶液中加入N，N-二异丙基乙基胺(3mL，17mmol)，并将得到的反应混合物回流5小时。混合物在减压下浓缩，且残余物在DCM和1M氯化铵之间分配。有机层用水和盐水洗涤，并用无水Na₂SO₄干燥。残余物通过快速层析(洗脱液：9∶1的Hex/EtOAc)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δppm：8.27(br.s，1H)，6.85-6.40(br.m，1H)，4.15-3.00(br.m，2H)，2.06(m，1H)，1.55-1.30(br.m，9H)，0.97(d，6H)。[ES+MS]m/z 379(M)⁺，[ES-MS]m/z 377(M-2H)^-。

中间体40：2-(5-溴-2-氰基-4-嘧啶基)-2-(2-甲基丙基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

于室温，将氰化钾(0.9g，13mmol)加至中间体39(4.1g，11mmol)和DABCO(1.2g，11mmol)于9∶1的DMSO/H₂O混合物中的悬浮液中。反应混合物于室温搅拌3小时，然后，倾倒至冰水中。将沉淀出的乳白色固体滤出，用水充分洗涤，并在空气中干燥。化合物通过快速层析(洗脱液：Hex/EtOAC，19∶1)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δppm：8.46(br.s，1H)，6.85-6.45(br.m，1H)，4.15-3.0(br.m，2H)，2.06(m，1H)，1.52-1.31(br.m，9H)，0.97(d，6H)；¹H NMR(300MHz，d₆-DMSO，80℃)δppm：9.77(br.s，1H)，8.59(s，1H)，3.59(br.s，2H)，2.04(m，1H)，1.41(br.s，9H)，0.92(d，6H)；¹³C NMR(90MHz，d₆-DMSO)δppm：160.7，159.6，153.6，140.6，115.7，104.7，80.4，58.6，27.7，25.5，20.0。[ES+MS]m/z 370(M)⁺。

中间体41：5-溴-4-[1-(2-甲基丙基)肼基]-2-嘧啶甲腈

向中间体40(3.5g，9.4mmol)于无水乙腈(70mL)中的溶液中加入4-甲苯磺酸(4.07g，23.6mmol)，并将得到的反应混合物于室温搅拌24小时。然后将混合物在真空下浓缩，且将残余物在DCM和饱和碳酸氢钠之间分配。残余物通过制备型HPLC(X-TERRA 19×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δppm：8.39(s，1H)，3.75(d，2H)，2.22(m，1H)，0.96(d，6H)。[ES+MS]m/z 270(M)⁺。

中间体42：N′-(5-溴-2-氰基-4-嘧啶基)-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-N′-(2-甲基丙基)苯甲酰肼三氟乙酸盐

制备4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰氯

将中间体38(500mg，2.13mmol)溶于亚硫酰氯(5ml)。反应混合物回流6小时。将溶剂在真空下蒸发，粗产物不用任何进一步纯化而使用。

向搅拌的中间体41(200mg，0.74mmol)于吡啶(10mL)中的溶液中加入先前制备的酰氯(539mg，2.13mmol)和DIPEA(0.26mL，1.48mmol)于无水THF(10mL)中的混合物，得到的反应混合物于室温搅拌2小时。将溶剂在真空下蒸发，粗产物反应混合物通过快速层析(硅胶，二氯甲烷∶甲醇)纯化。固体再通过HPLC(H₂O，0.1％TFA：ACN)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO)δppm：11.36(s，1H)，8.64(s，1H)，7.92(d，2H)，7.48(d，2H)，3.98(m，1H)，3.73(s 2H)，3.38(m，4H)，3.02(m 4H)，2.78(s，3H)2.42(m，1H)，2.05(m，1H)，0.94(d，6H)。[ES+MS]m/z 486(M)⁺。

中间体43：6-甲基-2-吡啶甲酸甲基酯

将6-甲基吡啶甲酸(TCI，2g，15.6mmol)溶于甲醇(30mL)，并加入亚硫酰氯(ALDRICH，5mL)。将混合物回流36小时，在减压下除去溶剂，然后将残余物溶于DCM，并用饱和碳酸氢钠洗涤。有机层用硫酸钠干燥。除去溶剂，且将残余物通过硅胶柱层析(洗脱液：DCM/MeOH，从100∶0至20∶80)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO，25℃)δppm：7.89-7.83(m，2H)，7.53-7.46(m，1H)，3.85(s，3H)，2.52(s，3H)。[ES+MS]m/z 152(MH)⁺。

中间体44：6-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-2-吡啶甲酸甲基酯

将中间体43(2.25g，14.9mmol)溶于四氯化碳(20mL)，然后，加入NBS(ALDRICH，5.3g，29.8mmol)和过氧化苯甲酰(ALDRICH，50mg，0.21mmol)。将混合物回流，同时使用200W卤素灯照射。回流保持7小时30分钟，并周期性加入催化剂过氧化苯甲酰，然后，将混合物冷却至室温。将固体过滤，并溶于DCM(20mL)。将溶液冷却至-70℃，并加入于DCM(10mL)中的N-甲基-哌嗪(ALDRICH，3.9mL，29.8mmol)。使反应混合物达到室温，并将其搅拌过夜。将混合物倾倒至2M碳酸钠溶液中，并用DCM萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下除去溶剂。得到的残余物通过硅胶柱层析(洗脱液：DCM/MeOH，从100∶0至20∶80)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO，25℃)δppm：7.98-7.91(m，2H)，7.66-7.65(m，1H)，3.86(s，3H)，3.62(s，2H)，2.14(s，3H)。

中间体45：6-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-2-吡啶甲酸

将中间体44(790mg，3.17mmol)溶于约5∶1THF/H₂O(15mL)的混合物中；加入于约5∶1THF/H₂O(15mL)的混合物中的氢氧化锂一水合物(ALDRICH，152mg，6.34mmol)，并将混合物于室温搅拌3小时。溶剂在减压下蒸发，在添加DCM和甲醇后形成沉淀。将该沉淀过滤，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO，80℃)δppm：8.02-7.95(m，2H)，7.71-7.68(m，1H)，4.00(s，2H)，2.76(s，3H)。[ES+MS]m/z 236(MH)⁺。

中间体46：5-[4-(羟基甲基)苯基]-3-吡啶甲酸

在N₂下，将5-溴烟酸(FLUKA，2.0g，9.9mmol)溶于1，2-DME(100mL)。加入四-三苯基膦合钯(ALDRICH，572mg，0.49mmol)，并将该混合物于室温搅拌15分钟。依次加入碳酸钠(8.4g，13.86mmol)，水(60mL)和4-(羟基甲基)苯硼酸(LANCASTER，2.1g，13.86mmol)。将得到的混合物在95℃回流21小时，然后，冷却至室温，通过塞力特硅藻土过滤并酸化(2N HCl，调节至pH3)。将该白色沉淀滤出，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δppm：13.53(br，1H)，9.08(m，1H)，9.03(m，1H)，8.43(m，1H)，7.75(d，2H)，7.46(d，2H)，5.27(m，1H)，4.56(m，2H)。

中间体47：6-[4-(羟基甲基)苯基]-2-吡啶甲酸

在N₂下，将6-溴吡啶甲酸(ALDRICH，2.0g，9.90mmol)溶于1，2-DME(100mL)。加入四-三苯基膦合钯(ALDRICH，572mg，0.49mmol)，并将得到的混合物于室温搅拌15分钟。依次加入Na₂CO₃(8.4g，79.20mmol)，H₂O(60mL)和4-(羟基-甲基)-苯硼酸(LANCASTER，2.1g，13.86mmol)。将得到的混合物在95℃回流20小时，然后，将其冷却至室温，通过塞力特硅藻土过滤，酸化(2N HCl，调节至pH3)，并浓缩至干。加入丙酮，并将得到的沉淀滤出，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δppm：8.19-8.13(m，3H)，8.06-8.01(m，1H)，7.96(m，1H)，7.45(d，2H)，4.56(m，2H)。

中间体48：2-[2-氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基]-2-环己基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

标题化合物通过相似于上面对于中间体12描述的方法制备，通过在合成中间体7中用环己酮代替环戊酮。[ES+MS]m/z 451(MH)⁺。

中间体49：6-(1-环己基肼基)-1H-嘌呤-2-甲腈

将含有中间体48(3.8g.8.43mmol)，1，1′-双-(二-苯基-膦基)-二茂铁(ALDRICH，188mg，0.34mmol)，锌(ALDRICH，66mg，1.01mmol)，氰化锌(ALDRICH，594mg，5.06mmol)，三-(二-亚苄基-丙酮)合二-钯(0)(ALDRICH，156mg，0.17mmol)和DMA(130mL)的混合物在150℃加热过夜。冷却至室温后，混合物通过塞力特硅藻土过滤，并在减压下除去溶剂。粗产物在DCM和饱和碳酸氢钠之间分配。有机层用无水硫酸钠干燥，并浓缩至干。粗产物通过硅胶柱层析(洗脱液：己烷/乙酸乙酯混合物，从100∶0至0∶100)纯化，得到标题化合物。[ES+MS]m/z 258(MH)⁺。

中间体50：4-(氯甲基)-N′-(2-氰基-1H-嘌呤-6-基)-N′-环己基苯甲酰肼

在N₂下，将中间体49(1.15g，4.47mmol)，DIPEA(FLUKA，766uL，8.94mmol)和4-(氯甲基)苯甲酰氯(ALDRICH，845mg，4.47mmol)于无水THF(50mL)中的混合物于室温搅拌3小时。在减压下除去溶剂，并将残余物溶于DCM，用1N碳酸氢钠洗涤，取出有机层，用无水硫酸钠干燥，并浓缩至干。粗产物通过硅胶柱层析(洗脱液：己烷/乙酸乙酯混合物，从100∶0至0∶100)纯化，得到标题化合物。[ES+MS]m/z 410(MH)⁺。

中间体51：3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酸

将1-(3-羧甲氧基苯基)-4-甲基哌嗪(ALDRICH，3g，12.8mmol)溶于THF∶H₂O(90∶1)的混合物，并加入氢氧化锂一水合物(ALDRICH，613mg，25.6mmol)。混合物于室温搅拌6小时，然后，缓慢加入1N HCl，调节pH为约7。在减压下除去溶剂，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，25℃)δppm：7.42(m，1H)，7.34(m，2H)，7.21(m，1H)，3.81(s，1H)，3.15(m，4H)，2.43(m，4H)，2.20(s，3H)。

中间体52：6-(1-环戊基肼基)-9-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-9H-嘌呤-2-甲腈

将实施例29(130mg，0.28mmol)溶于ACN(40mL)，并加入对甲苯磺酸一水合物(ALDRICH，143mg，0.84mmol)。将混合物搅拌过夜。在减压下除去溶剂；将粗产物溶于DCM，并用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，除去溶剂，残余物通过硅胶柱层析(洗脱液：己烷/乙酸乙酯混合物，从50∶50至50∶100)纯化，得到标题化合物.¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：8.59(s，1H)，5.91(br s，1H)，5.13(br s，2H)，3.63(br，2H)，2.40(br，4H)2.21(s，3H)，1.96-1.48(m，8H)。[ES+MS]m/z 370(MH)⁺。

中间体53：2-[2-氰基-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基]-2-环己基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

在Ar下，将中间体48(5g.11.1mmol)1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁(ALDRICH，244mg，0.44mmol)，锌(ALDRICH，87mg，1.33mmol)，氰化锌(ALDRICH，782mg，6.66mmol)和三-(二亚苄基丙酮)合二钯(0)(ALDRICH，156mg，0.17mmol)于DMA(150mL)中的混合物在150℃加热3小时。冷却至室温后，混合物通过塞力特硅藻土过滤，在减压下除去溶剂，得到的残余物通过硅胶层析(洗脱液：己烷/乙酸乙酯混合物，从100∶0至0∶100)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，25℃)δppm：9.70-9.25(d，1H)，8.73-8.62(d，1H)，5.69(t，1H)，5.40-4.64(d.，1H)，3.98(m，1H)，3.71(m，1H)，2.21(m，1H)，1.98-1.02(m，23H)。

中间体54：2-(2-氰基-1H-嘌呤-6-基)-2-环己基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

将中间体53和Dowex 50x2-200树脂(400mg)于乙醇(100mL)中的混合物回流1天，然后，于室温搅拌2天。将粗混合物冷却至室温后，在减压下除去溶剂，残余物通过硅胶层析(洗脱液：己烷/乙酸乙酯混合物，100∶0至0∶100)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，25℃)δppm：13.70-13.53(m，1H)，9.61-9.17(d，1H)8.46-8.35(m，1H)，5.46-4.63(d，1H)，1.86-1.01(m，19H)。

中间体55：6-(1-环己基肼基)-9-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-9H-嘌呤-2-甲腈

将实施例35(200mg，0.41mmol)溶于ACN(40mL)，加入对甲苯磺酸一水合物(ALDRICH，214mg，1.24mmol)，并将该混合物于室温搅拌过夜。加入另外的对甲苯磺酸一水合物(ALDRICH，214mg，1.24mmol)，并将该混合物再搅拌7小时。在减压下除去溶剂；将粗产物溶于DCM，用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，除去溶剂，残余物通过硅胶柱层析(洗脱液：己烷/乙酸乙酯混合物，从50∶50至50∶100)纯化，得到标题化合物。[ES+MS]m/z 384(MH)⁺。

中间体56：2-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐

向中间体14(0.1g，0.29mmol)于无水DMF(3mL)中的溶液中加入碳酸钾(ALDRICH，0.06g，0.4mmol)和含有2-二-甲基-氨基-乙基氯盐酸盐(ALDRICH，0.05g，0.3mmol)和DIPEA(FLUKA，0.06mL，0.34mmol)于无水DMF(2mL)中的混合物。将得到的反应混合物首先于室温下搅拌，然后，加热至100℃。40小时后，加入另外的2-二-甲基-氨基-乙基氯盐酸盐(ALDRICH，0.03g，0.2mmol)和DIPEA(0.03mL，0.2mmol)，并将该混合物再加热4小时。在减压下除去溶剂，且将残余物在DCM和饱和NH₄Cl之间分配。有机层用盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥。将溶剂在真空下蒸发，粗产物通过制备型HPLC(SunFire 19×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度：10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，d₆-DMSO，80℃)δppm：9.43-9.07(br.，1H)，8.45(s.，1H)，5.86-5.38(br.，1H)，4.64-4.60(t，2H)，3.64-3.60(t，2H)，2.86(s，6H)，1.97-1.09(br.，17H)。[ES+MS]m/z 415(M)⁺。

中间体57：6-(1-环戊基肼基)-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-2-甲腈

向中间体56(2.5g，6.2mmol)于ACN(25mL)中的溶液中加入TsOH(ALDRICH，3.2g，18.5mmol)，并将得到的反应混合物于室温搅拌40小时。然后，加入另外的TsOH(1.1g，6.2mmol)，将反应混合物再于室温搅拌24小时。在减压下除去溶剂，且将残余物在DCM和饱和NaHCO₃之间分配。有机层用水和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥。将溶剂在真空下蒸发，粗产物通过快速层析(洗脱液：DCM/MeOH混合物，100∶0至19∶1)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，d₆-DMSO)δppm：8.36(s.，1H)，4.29-4.25(t，2H)，4.12-4.07(dd.，1H)，3.17(d，2H)，2.66-2.62(t，2H)，2.16(s，6H)，2.0-1.45(br.，8H)。

中间体58：6-[4-(氯甲基)苯基]-2-吡啶甲酰氯

在氮气氛下，将中间体47(0.1g，0.5mmol)溶于亚硫酰氯(ALDRICH，4mL，54.8mmol)，并将得到的橙色反应混合物加热至回流。2小时后，在减压下除去溶剂，得到标题化合物，认为其是所需的产物，并随后使用而不用任何进一步的纯化。

中间体59：6-[4-(氯甲基)苯基]-N′-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环戊基-2-吡啶甲酰肼

在氮气氛下，将中间体57(0.1g，0.3mmol)和DIPEA(0.1mL 0.6mmol)加至中间体58(0.13g，0.5mmol)于无水THF(4mL)中的溶液中。将得到的反应混合物于室温搅拌16小时。然后在真空下除去溶剂，并将得到的残余物溶于EtOAc(25mL)，并用饱和NaHCO₃(25mL)和盐水(25mL)洗涤。有机层用无水Na₂SO₄干燥，并蒸发至干。使用DCM/己烷混合物进行沉淀，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，d₆-DMSO)δppm：11.13-10.71(br.，1H)，8.59-7.55(br.，8H)，5.81-5.30(br.，1H)，4.93-4.68(br.，3H)，4.0-2.62(br.，8H)，2.11-1.82(m，4H)，1.8-1.5(br.，4H)。

中间体60：2-[2-氰基-9-(2-羟基乙基)-9H-嘌呤-6-基]-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

将中间体14(0.5g，1.46mmol)溶于DMF(30mL)，然后，加入碳酸钾(ALDRICH，203mg，1.46mmol)和2-溴-乙醇(ALDRICH，181mg，1.46mmol)。在50℃加热后，将混合物冷却至室温，并搅拌5天。然后，将反应过滤，并将残余物用饱和NH₄Cl洗涤，用CH₂Cl₂萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，并通过硅胶柱层析(洗脱液：DCM/MeOH，从100∶0至20∶80)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，25℃)δppm：9.70-9.29(m，1H)，8.44-8.33(m，1H)，6.04-5.18(m，1H)，5.00(t，1H)，4.25(m，2H)，3.73(dt，2H)，1.79-1.22(m，17H)。[ES+MS]m/z 388(MH)⁺。

中间体61：2-(2-氰基-9-{2-[(甲基磺酰基)氧基]乙基}-9H-嘌呤-6-基)-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

在0℃和于N₂中，将中间体60(145mg，0.37mmol)溶于吡啶(15mL)。然后，加入甲磺酰氯(ALDRICH，72uL，0.94mmol)，使反应混合物温热至室温，并搅拌过夜。在减压下除去溶剂。粗残余物溶于CH₂Cl₂，并用饱和NH₄Cl，饱和NaHCO₃和盐水洗涤。合并的有机层用无水硫酸钠干燥。产物在下一步中使用而不用进一步纯化。

中间体62：2-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-环己基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

在氮气下，将中间体54(4g，11.2mmol)和K₂CO₃(2.32g，16.8mmol)于DMF(80mL)中的溶液搅拌15分钟。将(2-氯-乙基)二-甲基胺(1.77g，12.3mmol)和DIPEA(2.1mL，12.3mmol)于DMF(20mL)中的溶液搅拌15分钟。将第二溶液加至第一溶液中，并将得到的反应混合物在60℃加热30分钟，然后，将其于室温搅拌过夜。LC-MS显示反应已经完全。反应粗产物用饱和NH₄Cl(两次)和盐水洗涤，用DCM萃取，合并的有机层用MgSO₄干燥，过滤并在减压下蒸发。残余物通过快速层析(4-10％DCM/MeOH)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(DMSO)δppm：9.62-9.22(d；1H)；8.49-8.37(d；1H)；5.44-4.64(d；1H)；4.3(brs，2H)；2.65(m；1H)；2.16(s；6H)；2-1(m；16H)。

中间体63：6-(1-环己基肼基)-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-2-甲腈

将中间体62(3.5g，8.17mmol)溶于ACN(80mL)，然后，加入TsOH(4.66g，24.5mmol)，并将反应混合物于室温搅拌过夜。LC-MS和HPLC(HPLC：X-TERRA 4.6X50mm；H₂O：ACN，0.1％TFA，梯度10-100％)显示反应完成。将其在冰浴中冷却，用饱和NaHCO₃中和，有机层(DCM)用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，并在减压下蒸发。黄色粗产物通过快速层析(2-10％DCM/MeOH)纯化。¹H NMR(DMSO)δppm：8.38(s；1H)；5.4-4.9(d；2H)；4.29(t；2H)；2.71(t；2H)；2-1.5(m；8H)；1.5-1(m；7H)。[ES+MS]m/z 329(MH)⁺。

中间体64：6-[4-(氯甲基)苯基]-N′-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环己基-2-吡啶甲酰肼

将中间体63(190.5mg，0.58mmol)溶于THF(5ml)，并加至中间体58(232mg，0.87mmol)中；最后，加入DIPEA(0.199ml，1.16mmol)。将反应混合物搅拌过夜。反应进程通过分析型HPLC(HPLC：X-TERRA 4.6×50mm；H₂O/ACN，0.1％TFA，梯度10-100％)监测，其显示反应进行完全。粗产物用DCM稀释，并用饱和NaHCO₃洗涤，然后使用盐水洗涤。有机层用Na₂SO₄干燥，过滤并在真空下蒸发。残余物溶于DCM/己烷混合物，黄色固体沉淀出来，并过滤。所得化合物在下一步使用而不用进一步纯化。¹H NMR(DMSO，80℃)δppm：10.9(s；1H)；8.34(d；2H；8.3Hz)；8.3-8(m；6H)；7.6(d；2H；8.3Hz)；4.83(m；3H)；4.76(m；1H)；4.28(t；2H)；3.9(m；1H)；2.7(m；2H)；2.2(s；6H)；2(d；2H)；1.8(d；3H)；1.6(m；4H)；1.4(m；2H)；1.27(m；3H)。[ES+MS]m/z 558(MH)⁺。

中间体65：6-(1-环己基肼基)-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-2-甲腈

标题化合物通过相似于对于中间体63描述的方法制备，使用3-氯-丙基-二-甲基-胺代替2-氯-乙基-二-甲基-胺。[ES+MS]m/z 343(MH)⁺。

中间体66：6-[4-(氯甲基)苯基]-N′-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环己基-2-吡啶甲酰肼

标题化合物通过相似于对于中间体64描述的方法制备，中间体63用中间体65代替。[ES+MS]m/z 572(MH)⁺。

实施例

实施例1：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-(环戊基甲基)-4-{[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-哌啶基]甲基}苯甲酰肼三氟乙酸盐

将中间体6(125mg，0.27mmol)溶于ACN(10mL)。加入无水碳酸钾(Aldrich，45mg，0.32mmol)和1-甲基-4-(哌啶-4-基)-哌嗪(Fluorochem，49mg，0.27mmol)，并将该混合物于室温搅拌约5小时。然后将溶液过滤，并在减压下浓缩。粗产物通过制备型HPLC(XTERRA 19×150mm，CAN：H₂O，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δppm：7.98(d，2H)；7.53(d，2H)；7.76-7.61(br，1H)；4.51(br，1H)；4.20(s，2H)；4.01(br，1H)；3.78(s，3H)；3.50(br，2H)；3.36(m，1H)；3.18(br，3H)；2.88(br，3H)；2.77(s，3H)；2.37(m，1H)；2.00-1.21(m，13H)。[ES+MS]m/z 571(MH)⁺。

实施例2：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-(环戊基甲基)-4-({4-[(1-甲基-4-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)苯甲酰肼三氟乙酸盐

将中间体6(50mg，0.11mmol)溶于ACN(10mL)。加入无水碳酸钾(Aldrich，18mg，0.13mmol)和1-(N-甲基-4-哌啶-甲基)-哌嗪(Fluorochem，22mg，0.11mmol)，并将该混合物于室温搅拌1小时。然后将该溶液过滤，并在减压下浓缩。残余物产物通过制备型HPLC(XTERRA 19×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO)δppm：11.43-11.14(m，1H)；9.52(br.，1H)；8.51-8.25(m，1H)；7.97(m，2H)；7.56(m，2H)；4.75-2.60(m，14H)；3.80(s，2H)；3.742(s，3H)；2.75(s，3H)；2.74(s，2H)；2.23(m，1H)；1.96-121(m，13H)。[ES+MS]m/z 585(MH)⁺。

实施例3：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-(环戊基甲基)-4-({4-[(1-甲基-3-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)苯甲酰肼三氟乙酸盐

将中间体6(50mg，0.11mmol)溶于ACN(10mL)。加入无水碳酸钾(Aldrich，18mg，0.13mmol)和1-(N-甲基-3-哌啶基-甲基)-哌嗪(Fluorochem，21mg，0.11mmol)，并将该混合物于室温搅拌1小时。然后将该反应粗产物过滤，并在减压下浓缩。残余物通过制备型HPLC(XTERRA 19×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO)δppm：11.45-11.17(m，1H)；9.65(br.，1H)；8.51-8.25(m，1H)；8.0(m，2H)；7.60(m，2H)；4.75-2.56(m，14H)；3.81(s，2H)；3.75(s，3H)；2.75(s，3H)；2.74(s，2H)；2.23(m，1H)；1.96-121(m，13H)。[ES+MS]m/z 585(MH)⁺。

实施例4：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-4-{[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-哌啶基]甲基}苯甲酰肼三氟乙酸盐

向中间体17(165mg，0.36mmol)于ACN(4mL)中的溶液中加入DIPEA(Fluka，92μl，0.54mmol)和1-甲基-4-(哌啶-4-基)-哌嗪(Fluorochem，80mg，0.44mmol)。得到的反应混合物于室温以及在N₂气氛下搅拌过夜。溶剂在减压下蒸发，得到的粗产物通过制备型HPLC(SUNFIRE 30×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度20-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：10.86(br.s，1H)；8.27(br.s，1H)；8.02(dd，2H)；7.66(dd，2H)；5.54(m，1H)；4.36(s，2H)；3.78(s，3H)；2.56-3.73(m，13H)；2.78(s，3H)；1.54-2.04(m，12H)。[ES+MS]m/z 557(MH)⁺。

实施例5：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-4-({4-[(1-甲基-4-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)苯甲酰肼三氟乙酸盐

向中间体17(143mg，0.32mmol)于ACN(4mL)中的溶液中加入DIPEA(Fluka，79μl，0.47mmol)和1-(N-甲基-4-哌啶-甲基)-哌嗪(Fluorochem，75mg，0.38mmol)。将得到的反应混合物于室温以及在N₂气氛下搅拌过夜。溶剂在减压下蒸发，得到的粗产物通过制备型HPLC(SUNFIRE 30×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度20-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：10.80(br.s，1H)；8.26(br.s，1H)；7.96(dd，2H)；7.55(dd，2H)；5.58(m，1H)；3.67-4.16(m，14H)；3.78(s，3H)；3.44(m，3H)；2.77(s，3H)；1.26-2.02(m，12H)。[ES+MS]m/z 571(MH)⁺。

实施例6：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-4-({4-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-1-哌啶基}甲基)苯甲酰肼三氟乙酸盐

向中间体17(135mg，0.30mmol)于ACN(4mL)中的溶液中加入DIPEA(Fluka，76μl，0.45mmol)和(4-甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-4-基-甲酮.2HCl(Fluorochem，75mg，0.36mmol)。将得到的反应混合物于室温以及在N₂气氛下搅拌过夜。溶剂在减压下蒸发，得到的粗产物通过制备型HPLC(SUNFIRE30×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度20-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：10.86(br.s，1H)；8.27(br.s，1H)；8.02(dd，2H)；7.67(dd，2H)；5.52(m，1H)；4.35(s，2H)；3.78(s，3H)；2.54-3.81(m，13H)；2.78(s，3H)；1.54-2.03(m，12H)。[ES+MS]m/z 585(MH)⁺。

实施例7：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-4-{[3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]甲基}苯甲酰肼三氟乙酸盐

向中间体17(132mg，0.29mmol)于ACN(3mL)中的溶液中加入DIPEA(Fluka，147μl，0.87mmol)和中间体20(69mg，0.35mmol)。将得到的反应混合物于室温以及在N₂气氛下搅拌过夜。溶剂在减压下蒸发，得到的粗产物通过制备型HPLC(SUNFIRE 30×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：10.79(br.s，1H)；8.26(br.s，1H)；7.95(dd，2H)；7.51(dd，2H)；4.67(m，1H)；4.10(s，2H)；3.51-4.02(m，14H)；3.08(m，2H)；1.54-2.03(m，8H)。[ES+MS]m/z 500(MH)⁺

实施例8：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环己基-4-{[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-哌啶基]甲基}苯甲酰肼三氟乙酸盐

向中间体25(161mg，0.34mmol)于ACN(4mL)中的溶液中加入DIPEA(Fluka，87μl，0.51mmol)和1-甲基-4-(哌啶-4-基)-哌嗪(Fluorochem，75mg，0.41mmol)。将得到的反应混合物于室温以及在N₂气氛下搅拌过夜。溶剂在减压下蒸发，得到的粗产物通过制备型HPLC(SUNFIRE 30×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度20-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：10.77(br.s，1H)；8.26(br.s，1H)；8.02(dd，2H)；7.65(dd，2H)；5.07(m，1H)；4.31(s，2H)；3.78(s，3H)；2.83-3.74(m，13H)；2.76(s，3H)；1.03-2.02(m，14H)。[ES+MS]m/z 571(MH)⁺。

实施例9：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环己基-4-({4-[(1-甲基-4-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)-苯甲酰肼三氟乙酸盐

向中间体25(146mg，0.31mmol)于ACN(4mL)中的溶液中加入DIPEA(Fluka，79μl，0.47mmol)和1-(N-甲基-4-哌啶-甲基)-哌嗪(Fluorochem，73mg，0.37mmol)。将得到的反应混合物于室温以及在N₂气氛下搅拌过夜。溶剂在减压下蒸发，得到的粗产物通过制备型HPLC(SUNFIRE 30×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度20-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：10.72(br.s，1H)；8.27(br.s，1H)；7.98(dd，2H)；7.55(dd，2H)；4.90(m，1H)；4.01(br.s，2H)；3.78(s，3H)；2.81-3.73(m，15H)；2.77(s，3H)；0.99-2.03(m，14H)。[ES+MS]m/z 585(MH)⁺。

实施例10：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环己基-4-({4-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-1-哌啶基}甲基)苯甲酰肼三氟乙酸盐

向中间体25(149mg，0.32mmol)于ACN(4mL)中的溶液中加入DIPEA(Fluka，81μl，0.48mmol)和(4-甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-4-基-甲酮.2HCl(Fluorochem，81mg，0.38mmol)。将得到的反应混合物于室温以及在N₂气氛下搅拌过夜。溶剂在减压下蒸发，得到的粗产物通过制备型HPLC(SUNFIRE30×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度20-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：10.80(br.s，1H)；8.26(br.s，1H)；8.03(dd，2H)；7.66(dd，2H)；5.01(m，1H)；4.37(s，2H)；3.78(s，3H)；2.86-3.60(m，13H)；2.79(s，3H)；0.99-2.03(m，14H)。[ES+MS]m/z 599(MH)⁺。

实施例11：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环己基-4-{[3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]甲基}苯甲酰肼三氟乙酸盐

向中间体25(156mg，0.33mmol)于ACN(3mL)中的溶液中加入DIPEA(Fluka，168μl，0.99mmol)和中间体20(80mg，0.4mmol)。将得到的反应混合物于室温以及在N₂气氛下搅拌过夜。溶剂在减压下蒸发，得到的粗产物通过制备型HPLC(SUNFIRE 30×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：10.72(br.s，1H)；8.25(br.s，1H)；7.96(dd，2H)；7.52(dd，2H)；4.67(m，1H)；4.13(s，2H)；3.65-4.06(m，12H)；3.10(m，4H)；1.54-2.03(m，10H)。[ES+MS]m/z 514(MH)⁺。

实施例12：2-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-(环戊基甲基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐

该化合物的制备已经作为中间体26进行了描述。

实施例13：2-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-(环戊基甲基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐

该化合物的制备已经作为中间体27进行了描述。

实施例14：N′-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-(环戊基甲基)-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐

将中间体28(粗产物，0.7mmol)溶于THF(30mL)。加入DIPEA(Fluka，0.24mL，1.4mmol)和4-溴甲基苯甲酰溴(Aldrich，185mg，0.67mmol)。混合物于室温搅拌1小时。加入N-甲基哌嗪(Aldrich，0.15mL.，1.4mmol)和DIPEA(Fluka，0.24mL，1.4mmol)，并将该混合物于室温搅拌。除去溶剂，粗产物通过制备型HPLC(XTERRA 19×150mm，ACN：H2O，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO 80℃)δppm：11.06(br，1H)；8.37(br，1H)；7.94(d，2H)；7.48(d，2H)；4.60(m，2H)；4.0-2.56(m，14H)；3.70(s，3H)；2.86(s，6H)；2.79(s，4H)；1.85(m，1H)；1.65-1.32(m，8H)。[ES+MS]m/z 545(MH)⁺。

实施例15：2-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐

在氩气下，将中间体14(200mg，0.5mmol)溶于无水DMF(10mL)，并加入无水碳酸钾(138mg.1mmol)。混合物于室温搅拌，并加入3-二甲基氨基丙基氯盐酸盐(Aldrich，87mg.0.55mmol)。混合物于室温搅拌2天。将混合物过滤，并在减压下除去溶剂。粗产物通过制备型HPLC(SUNFIRE 19×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO 80℃)δppm：9.29(br.1H)；8.42(s，1H)；5.68(br.1H)；4.30(t，2H)；3.12(m，2H)；2.78(s，6H)；2.23(m，2H)；1.86-1.25(m，17H)。[ES+MS]m/z 429(MH)⁺

实施例16：2-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-(环戊基甲基)-1-[3-(二甲基氨基)丙基]肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐

在氮气下，将中间体10(50mg.，0.14mmol)溶于无水DMF(5mL)。加入无水碳酸钾(39mg.，0.28mmol)和3-二-甲基-氨基-丙基-氯.HCl(Aldrich，30mg，0.21mmol)，并将该混合物在50℃搅拌过夜。将该溶液过滤，并在减压下浓缩。粗产物溶于DCM，用饱和NH₄Cl和盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥。粗产物通过制备型HPLC(SUNFIRE 19×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO 80℃)δppm：9.57(br，1H)；8.50(s，1H)；4.31(t，2H)；3.72(br.1H)；3.16(m，4H)；2.78(s，12H)；2.38(m，1H)；2.25(m，2H)；2.02(m，2H)；1.83-1.10(m，17H)。[ES+MS]m/z 528(MH)⁺。

实施例17：N′-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐

在N₂下，将中间体29(28mg.，0.08mmol)溶于无水THF(10mL)。加入4-溴甲基苯甲酰溴(Aldrich，21mg，0.07mmol)和DIPEA(Fluka，27.4mL，0.16mmol)。将该混合物于室温搅拌45分钟。然后，加入于THF(5mL)中的N-甲基哌嗪(Aldrich，1.1mL，0.09mmol)，并将该混合物搅拌过夜。在减压下除去溶剂，溶于DCM，并依次用饱和NaHCO₃和盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，溶剂在减压下蒸发。粗产物通过制备型HPLC(XTERRA 19×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO 80℃)δppm：10.75(br.1H)；9.36(br.1H)；8.35(s，1H)；7.92(d，2H)；7.48(d，2H)；5.65(br，1H)；4.29(t，2H)；3.70(s，2H)；2.81-2.78(m，11H)；2.23(m，3H)；1.90(m，4H)；1.61(m，4H)。[ES+MS]m/z 545(MH)⁺。

用相似方法制备：

实施例18：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-(环戊基甲基)-4-{[4-(1-甲基-4-哌啶基)-1-哌嗪基]甲基}苯甲酰肼三氟乙酸盐；[ES+MS]m/z 571(MH)⁺

实施例19：2-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐；[ES+MS]m/z 445(MH)⁺

实施例20：2-(1-乙酰基-4-哌啶基)-2-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯；[ES+MS]m/z 415(MH)⁺

实施例21：2-{2-氰基-9-[2-(1，3-二氧代-1，3-二氢-2H-异吲哚-2-基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-(环戊基甲基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯；[ES+MS]m/z531(MH)⁺

实施例22：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-N′-(2-甲基丙基)苯甲酰肼；[ES+MS]m/z 462(MH)⁺

实施例23：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-(环戊基甲基)-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐；[ES+MS]m/z 488(MH)⁺

比较实施例24：N′-(2-氰基-4-嘧啶基)-N′-(2，2-二甲基丙基)-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐

向中间体38(50mg，0.20mmol)于DCM(10ml)中的溶液中加入DCC(ALDRICH，163mg，0.8mmol)，并于室温搅拌1小时。向该溶液中加入中间体37(45mg，0.22mmol)，并于室温搅拌过夜。然后加入DCC(ALDRICH，41mg，0.20mmol)和三乙胺(ALDRICH，0.31μl，0.22mmol)，并于室温搅拌7小时。此后，加入三乙胺(ALDRICH，0.31μl，0.22mmol)，得到碱性pH，并将该反应于室温搅拌过夜。将该反应蒸发，产物通过柱层析(DCM/MeOH混合物，100∶0至0∶100)纯化。产物通过制备型HPLC(Luna 21×250mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度25-100％)纯化，得到标题化合物。1H NMR(DMSO-d₆，300MHz)δppm：11.16(m，1H)，9.45(m，1H)，8.36(m，2H)，7.90(d，2H)，7.50(d，2H)，6.88(br.，1H)，4.09-4.16(m，1H)，2.90-3.35(br.m，7H)，2.77(s，3H)，2.25-2.39(m，2H)，0.99(s，9H)。[ES+MS]m/z 422(MH)⁺。

比较实施例25：N′-(5-溴-2-氰基-4-嘧啶基)-N′-异丁基苯甲酰肼

标题化合物通过相似于对于中间体42描述的方法制备，中间体38的酰氯用苯甲酰氯代替。

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δppm：8.47(s，1H)；8.18(s，1H)；7.85-7.80(m，2H)；7.67-7.42(m，3H)；3.90-3-70(m，2H)；2.20-2.00(m，1H)；1.03(d，J＝6.6Hz，6H)。[ES+MS]m/z 374(M)⁺。

实施例26：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-6-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-2-吡啶甲酰肼三氟乙酸盐

在Ar下，将中间体45(438mg，1.86mmol)和草酰氯(ALDRICH，3mL)于无水DCM(2mL)中的混合物于室温搅拌过夜。在减压下除去溶剂，得到固体，将其加至中间体16(240mg.0.93mmol)，KO^tBu(ALDRICH，147mg，1.31mmol)和DIPEA(FLUKA，481mg，3.72mmol)于THF(10mL)中的混合物中。将该混合物搅拌过夜，然后加入催化剂4-二甲基氨基吡啶(ALDRICH)和另外的酰氯(1.86mmol)。将混合物再搅拌8小时，在减压下除去溶剂，残余物溶于DCM，并用饱和NaHCO₃洗涤。有机层用Na₂SO₄干燥，得到的残余物通过硅胶柱层析(洗脱液：DCM/MeOH从100∶0至20∶80)纯化，然后通过制备型HPLC(SUNFIRE，19×150mm，ACN：H₂O 0.1％TFA，梯度10-30％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO，80℃)δppm：10.74(s，1H)，8.22(s，1H)，8.05-7.92(m，2H)，7.71-7.69(d，1H)，5.61(br，1H)，3.94(s，2H)，3.77(s，3H)，2.77(s，3H)，2.04-1.52(m，8H)。[ES+MS]m/z 475(MH)⁺。

实施例27：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-5-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-3-吡啶甲酰肼三氟乙酸盐

在N₂下，将中间体46(107mg.0.47mmol)和草酰氯(ALDRICH，5mL)于无水DCM(5mL)中的混合物于室温搅拌过夜，然后，在减压下除去溶剂，得到相应的酰氯，将其加至中间体16(100mg，0.39mmol)和DIPEA(FLUKA，134uL，0.78mmol)于THF(50mL)中的溶液中。将该混合物于室温搅拌过夜。加入DIPEA(FLUKA，67uL，0.39mmol)和N-甲基哌嗪(ALDRICH，155uL，1.17mmol)，并将该反应混合物于室温搅拌3天。在减压下除去溶剂，残余物溶于DCM，并用饱和氯化铵，饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，浓缩至于，残余物通过制备型HPLC(X-TERRA 19×150mm，ACN：H₂O 0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO，25℃)δppm：9.05(br.s，1H)，8.87(m，1H)，8.63-8.55(d，1H)，8.36-8.30(d，1H)，7.88-7.39(m，5-H)，5.02-4.77(m，1H)，3.83(s，2H)，2，79(s，3H)，1.90-1.60(m，8H)。[ES+MS]m/z 551(MH)⁺。

实施例28：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-6-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-2-吡啶甲酰肼三氟乙酸盐

在N₂下，将中间体47(179mg.0.78mmol)和草酰氯(ALDRICH，5mL)于无水DCM(10mL)中的混合物于室温搅拌过夜，然后，在减压下除去溶剂，得到相应的酰氯，将其不用进一步纯化加至中间体16(100mg 0.39mmol)和DIPEA(FLUKA，134uL，0.78mmol)于THF(30mL)中的溶液中。将该混合物搅拌2天。在减压下除去溶剂，粗产物溶于DCM，并用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，并浓缩至干。残余物溶于DCM(30mL)，加入N-甲基哌嗪(ALDRICH，122uL，1.17mmol)，DIPEA(FLUKA，134uL，0.78mmol)和催化剂碘化钠，并将该混合物于室温搅拌过夜。在减压下除去溶剂，得到的粗产物通过制备型HPLC(X-TERRA 19×150mm，ACN：H₂O0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：11.01(s，1H)，8.32(d，2H)，8.21(m，2H)，8.09(t，1H)，7.95(d，1H)，7.50(d，2H)，5.61(br.s，1H)，3.77(s，3H)，3.74(s，2H)，3.21(m，4H)，2.77(s，3H)，1.97(m，4H)，1.64(m，4H)。[ES+MS]m/z 551(MH)⁺。

实施例29：2-{2-氰基-9-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-9H-嘌呤-6-基}-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯

在N₂下，将含有中间体14(200mg，0.58mmol)，DIPEA(FLUKA，0.1mL，0.58mmol)，4-甲基-1-哌嗪甲酰氯盐酸盐(ALDRICH，116mg，0.58mmol)和DIPEA(FLUKA，0.1mL，0.58mmol)在无水THF(10mL)中的混合物于室温搅拌4天。当需要时，将该混合物与加入的4-甲基-1-哌嗪甲酰氯盐酸盐(ALDRICH，138mg，0.70mmol)和DIPEA(N，N-二异丙基乙基胺)(FLUKA，0.12mL，0.70mmol)再回流4天。在减压下除去溶剂。粗产物溶于DCM，并用1N NH₄Cl和盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩至干，粗产物通过硅胶柱层析(洗脱液：DCM∶MeOH混合物，从100∶0至20∶80)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：9.38(br.s，1H)，8.59(s，1H)，5.50(br s，1H)，3.48(s，4H)，2.44(t，4H)，2.24(s，3H)，1.92-1.23(m，17H)。[ES+MS]m/z 470(MH)⁺。

实施例30：N′-(2-氰基-1H-嘌呤-6-基)-N′-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐

在Ar下，将中间体50(720mg，1.76mmol)溶于无水THF(60mL)；加入DIPEA(FLUKA，0.6mL，3.51mmol)和N-甲基-哌嗪(ALDRICH，0.39mL，3.51mmol)，得到的混合物于室温搅拌3天。在减压下除去溶剂，粗产物通过硅胶层析(洗脱液：DCM/MeOH梯度100∶0至20∶80)纯化，然后，通过HPLC(SUNFIRE 30×150，ACN：H₂O 0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：10.60(s，1H)，8.25(s，1H)，7.89(d，2H)，5.03(br s，1H)，3.55(s，2H)，2.44-2.41(m，4H)，2.37-2.34(m，4H)，1.97-1.03(m，10H)。[ES+MS]m/z 474(MH)⁺。

实施例31：N′-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐

在N₂下，将实施例30(40mg，0.08mmol)溶于无水DMF(10mL)；加入无水K₂CO₃(ALDRICH，22mg.0.16mmol)，并将该混合物于室温搅拌几分钟。然后加入3-二甲基氨基丙基氯(ALDRICH 13mg，0.08mmol)，并将该反应混合物搅拌过夜，然后，在70℃加热3小时。冷却至室温后，在减压下除去溶剂，粗产物通过制备型HPLC(X-TERRA，19×150，ACN：H₂O 0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：10.68(s，1H)，9.49(s，1H)，8.35(s，1H)，7.93(d，2H)，7.48(d，2H)，4.28(m，2H)，3.70(s，2H)，3.12(m，2H)，2.78(s，9H)，2.23(m，2H)，1.97-1.09(m，10H)。[ES+MS]m/z 559(MH)⁺。

实施例32：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼三氟乙酸盐

在N₂下，将4-(4-甲基哌嗪基)苯甲酸(MAYBRIDGE，1g，4.5mmol)溶于草酰氯(ALDRICH，10mL)，并将该混合物于室温搅拌过夜。在减压下除去溶剂，得到相应的酰氯。将该部分固体(372mg，1.56mmol)不用进一步纯化加至中间体16(100mg.0.39mmol)和DIPEA(FLUKA，267uL，1.56mmol)于THF(50mL)中的溶液中。然后，加入叔丁醇钾(ALDRICH，112mg，0.54mmol)，并将该混合物搅拌过夜；加入叔丁醇钾(ALDRICH，22mg，0.2mmol)，并将该反应混合物搅拌3天；加入4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰氯(542mg，2.27mmol)，并将该混合物于室温搅拌过夜。在减压下除去溶剂，粗产物溶于DCM，用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，在减压下除去溶剂，粗产物通过制备型HPLC(SUNFIRE 19×150mm，ACN：H₂O0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：10.55(s，1H)，9.49(s，1H)，8.24(s，1H)，7.86(s，2H)，7.07(d，2H)，5.52(br，1H)3.77(s，2H)，3.55(m，4H)，2.82(s，3H)，2.00-1.48(m，8H)。[ES+MS]m/z 460(MH)⁺。

实施例33：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼三氟乙酸盐

将中间体51(2g，9.08mmol)溶于草酰氯(20mL)，并将该混合物搅拌过夜。在减压下除去溶剂，并将部分残余物(1.1g，4.64mmol)加至中间体16(300mg，1.16mmol)和DIPEA(FLUKA，0.794mL，4.64mmol)于THF(50mL)中的溶液中。加入叔丁醇钾(ALDRICH，260mg，2.32mmol)，并将该混合物于室温搅拌1天。在减压下除去溶剂，粗产物通过制备型HPLC(SUNFIRE30x150mm，ACN：H₂O 0.1％TFA，梯度10％-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：10.70(s，1H)，8.27(s，1H)，7.52-7.38(m，3H)，7.23(d，1H)，5.54(br，1H)，3.78(s，3H)，3.31(br.，4H)，2.84(s，3H)，2.02-1.78(m，4H)，1.74-1.52(m，4H)。[ES+MS]m/z 460(MH)⁺。

实施例34：N′-{2-氰基-9-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐

在N₂以及0℃下，向中间体52(80mg，0.22mmol)于无水THF(100mL)中的溶液中加入4-溴甲基苯甲酰溴(ALDRICH，54mg，0.19mmol)和DIPEA(FLUKA，56uL，0.33mmol)。将混合物温热至室温，然后，加入N-甲基哌嗪(ALDRICH，27uL，0.24mmol)。将混合物搅拌过夜，并在减压下除去溶剂。残余物溶于DCM，并用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，浓缩至干，粗产物通过制备型HPLC(SUNFIRE，19×150，ACN：H₂O 0.1％TFA，梯度0％-80％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO，80℃)δppm：10.89(s，1H)，8.49(s，1H)，7.92(d，2H)，7.49(d，2H)，5.37(br.1H)，3.77(br，4H)，3.71(s，2H)，2.86(s，3H)，2.79(m，5H)，2.04-1.79(m，4H)，1.76-1.53(m，4H)。[ES+MS]m/z 586(MH)⁺。

实施例35：2-{2-氰基-9-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-9H-嘌呤-6-基}-2-环己基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐

在N₂下，将中间体54(400mg，1.12mmol)，K₂CO₃(ALDRICH，155mg，1.12mmol)，4-甲基-1-哌嗪甲酰氯盐酸盐(ALDRICH，223mg，1.12mmol)和DIPEA(FLUKA，0.382mL，2.24mmol)于无水DMF(60mL)中的混合物于室温搅拌过夜，然后，在40℃搅拌3小时。在减压下除去溶剂，粗产物溶于DCM，用饱和氯化铵和盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥。粗产物通过制备型HPLC(X-TERRA，30×150mm，ACN：H₂O 0.1％TFA，梯度20％至100％)纯化。将经纯化的产物溶于DCM，并用饱和碳酸氢钠洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，并除去溶剂，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：δppm：9.28(br.，1H)，8.59(s，1H)，5.06(br.1H)，3.48(br.，4H)，2.43(m，4H)，2.24(s，3H)，1.82-1.10(m，19H)。[ES+MS]m/z 484(MH)⁺。

实施例36：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环己基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼三氟乙酸盐

将中间体51(800mg，3.63mmol)溶于草酰氯(15mL)，并将该混合物搅拌过夜。在减压下除去溶剂，并将得到的部分固体(132mg，0.55mmol)加至中间体24(100mg，0.37mmol)和DIPEA(FLUKA，0.25mL，1.47mmol)于THF(20mL)中的溶液中。然后，加入叔丁醇钾(ALDRICH，60mg，0.52mmol)，并将该混合物于室温搅拌1天。加入叔丁醇钾(ALDRICH，21mg，0.18mmol)和3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰氯(177mg，0.74mmol)，并将该混合物搅拌过夜。在减压下除去溶剂，并将粗产物溶于DCM，用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，浓缩至干，残余物通过制备型HPLC(X-TERRA19×150mm，ACN：H₂O 0.1％TFA，梯度10％-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：10.63(s，1H)，8.28(s，1H)，7.53-7.38(m，3H)，7.22(m，1H)，5.00(br，1H)，3.77(s，3H)，3.36(b r，4H)，2.87(s，3H)，1.95(d，2H)，1.80(d，2H)，1.70-1.00(m，6H)。[ES+MS]m/z 474(MH)⁺。

实施例37：N′-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环戊基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼三氟乙酸盐

将中间体51(273mg，1.24mmol)溶于草酰氯(15mL)，并将该混合物搅拌过夜。在减压下除去溶剂，并将得到的固体(297mg，1.24mmol)加至中间体29(100mg，0.31mmol)和DIPEA(FLUKA，0.212mL.1.24mmol)于THF(30mL)中的溶液中。然后，加入叔丁醇钾(ALDRICH，50mg，0.43mmol)，并将该混合物于室温搅拌过夜。在减压下除去溶剂，粗产物溶于DCM，用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，并除去溶剂。残余物通过制备型HPLC(X-TERRA 19×150mm，ACN：H₂O 0.1％TFA，梯度10％-100％以及X-TERRA 19×150mm，ACN：H₂O 0.1％TFA，等梯度20％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：10.71(s，1H)，8.36(s，1H)，7.51-7.39(m，3H)，7.23(d，1H)，5.54(br，1H)，4.29(t，2H)，3.32(br，4H)，2.85(s，3H)，2.78(s，6H)，2.23(m，2H)，2.01-1.76(m，4H)，1.75-1.50(m，4H)。[ES+MS]m/z 531(MH)⁺。

实施例38：N′-{2-氰基-9-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐

在N₂以及0℃下，向中间体55(45mg，0.12mmol)于无水THF(20mL)中的溶液中加入DIPEA(FLUKA，31uL，0.18mmol)和4-溴甲基苯甲酰溴(ALDRICH，33mg，0.12mmol)。将混合物温热至室温，然后，加入N-甲基哌嗪(ALDRICH，14uL，0.13mmol)和DIPEA(FLUKA，41uL，0.24mmol)，并将该混合物于室温搅拌3小时。在减压下除去溶剂，粗产物通过制备型HPLC(X-TERRA 19×150mm.ACN：H₂O 0.1％TFA，等梯度20％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO，80℃)δppm：10.82(s，1H)，8.45(s，1H)，7.94(d，2H)，7.49(d，2H)，4.82(br，1H)，3.76(br.，4H)，3.71(s，2H)，2.85(s，3H)，2.79(s，3H)，1.96(d，2H)，1.81(d，2H)，1.69-1.03(m，6H)。[ES+MS]m/z 600(MH)⁺。

实施例39：2-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐

该化合物的制备已经作为中间体56进行了描述。

实施例40：N′-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐

向中间体57(0.1g，0.32mmol)于无水THF(10mL)中的溶液中加入4-溴-甲基-苯甲酰溴(ALDRICH，0.09g，0.32mmol)和DIPEA(0.09mL，0.5mmol)，并将该反应混合物于室温搅拌1小时。然后，加入N-甲基-哌嗪(ALDRICH，0.04mL，0.4mmol)，并继续于室温再搅拌2小时。然后在真空下除去溶剂，残余物在DCM和1N NH₄Cl之间分配。有机层用水和盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，并浓缩至干。粗产物通过制备型HPLC(SunFire 19×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度15-80％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，d₆-DMSO，80℃)δppm：10.96-10.73(br.，1H)，8.55-8.16(b r.，1H)，7.9(d，2H)，7.5(d，2H)，6.10-5.23(br.，1H)4.63-4.59(m，2H)，4.28-2.50(br.，21H)，2.06-1.78(m，4H)，1.78-1.48(m，4H)。[ES+MS]m/z 531(M)⁺。

实施例41：N′-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环戊基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼双(三氟乙酸盐)

将中间体51(0.3g，1.36mmol)悬浮于草酰氯(ALDRICH，1mL)中，并将该混合物于室温搅拌16小时。然后，加入无水DCM(4mL)，再搅拌8小时后，加入另外的草酰氯(ALDRICH，2mL)和无水DCM(2mL)。继续添加直到反应完全。然后，在真空下除去溶剂，得到相应的酰氯。然后将其加至中间体57(0.11g，0.37mmol)，叔丁醇钾(ALDRICH，0.14g，1.28mmol)和DIPEA(FLUKA，0.08mL，0.45mmol)于无水THF(12mL)中的溶液中。将该反应混合物于室温搅拌，并加入另外的中间体51(0.09g，0.29mmol)于无水THF(2mL)中的溶液以使得反应完全。2天后，在减压下除去溶剂，残余物在DCM和饱和NH₄Cl之间分配。将水相使用2N NaOH碱化至pH为10，产物用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，并浓缩至干。粗产物通过制备型HPLC(X-Terra 30×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，等梯度20％，然后，使用梯度20-60％再纯化，然后，SunFire 19×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度20-40％)纯化。将得到的产物溶于DCM(25mL)，并用饱和NaHCO₃(25mL)洗涤。有机层用盐水洗涤，然后滴加4M HCl的二噁烷溶液以形成相应的盐酸盐。然后将其通过制备型HPLC(X-Terra，30×150mm，ACN；H₂O，0.1％TFA，等梯度20％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，d₆-DMSO，80℃)δppm：10.86-10.53(br.，1H)，8.48-8.25(br.，1H)，7.56-7.36(m，3H)，7.29-7.19(m，1H)，6.01-5.22(b r.，1H)，4.64-4.50(m，2H)，4.07-2.91(br.，10H)，2.88(s，3H)，2.81(s，6H)，2.07-1.76(m，4H)，1.76-1.50(m，4H)。[ES+MS]m/z 517(M)⁺。

实施例42：N′-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环戊基-6-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-2-吡啶甲酰肼三氟乙酸盐

向中间体59(0.0339g，0.062mmol)于无水THF(2mL)中的溶液中加入N-甲基哌嗪(ALDRICH，0.028mL，0.249mmol)，并将得到的反应混合物于室温搅拌过夜，然后，加热至回流。回流7小时后，反应完全。然后在减压下除去溶剂，得到的残余物溶于MeOH，过滤，并通过制备型HPLC(X-Terra19×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，d₆-DMSO，80℃)δppm：11.13-10.98(br.，1H)，8.55-8.27(br.m，3H)，8.22-8.20(m，1H)，8.13-8.05(m，1H)，7.99-7.71(br.m，1H)，7.5(d，2H)，5.88-5.38(br.，1H)4.64-4.54(m，2H)，4.10-2.56(br.，21H)，2.09-1.87(m，4H)，1.82-1.5(m，4H)。[ES+MS]m/z 608(M)⁺。

实施例43：2-(2-氰基-9-{2-[(1，1-二甲基乙基)(甲基)氨基]乙基}-9H-嘌呤-6-基)-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐

将中间体61(172mg，0.37mmol)溶于纯N-甲基-叔丁基-胺(ALDRICH，4mL)，并将该反应混合物于室温搅拌3天。在减压下除去溶剂。粗产物溶于DCM，并用饱和NH₄Cl，饱和NaHCO₃和盐水洗涤。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。产物通过制备型HPLC(X-TERRA 19×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆+D2O，25℃)δppm：9.73-9.31(m，1H)，8.53-8.43(m，1H)，6.01-5.16(m，1H)，4.61(br，1H)，3.86(br，1H)，3.30(br，1H)，2.82(s，3H)，1.79-1.53(m，8H)，1.44(s，9H)，1.30(s，9H)[ES+MS]m/z 457(MH)⁺。

实施例44：N′-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐

标题化合物通过相似于对于实施例14描述的方法制备，中间体28用中间体63代替。¹H NMR(DMSO，80℃)δppm：10.7(s；1H)；8.4(s；1H)；7.93(d；2H；8.2Hz)；7.48(d；2H；8.2Hz)；4.58(t；2H)；3.6(m；3H)；2.83-2.79(d；6H)；1.96(d；2H)；1.81(d；2H)；1.73-1.3(m；5H)。[ES+MS]m/z 545(MH)⁺。

实施例45：N′-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环己基-6-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-2-吡啶甲酰肼三氟乙酸盐

将中间体64(100mg，0.179mmol)溶于THF(5ml)。加入1-甲基-哌嗪(0.08ml，0.717mmol)，并将该反应混合物在60℃搅拌。16小时后，LC-MS显示反应不完全，仍存在SM，将该反应混合物加热至回流，且3小时后，LC-MS显示反应完全。反应混合物用H₂O和盐水洗涤(萃取溶剂：DCM)。有机层用MgSO₄干燥，过滤并在减压下蒸发。粗物质通过制备型HPLC(柱：X-Terra 19x150mm，梯度：10-100％ACN；0.1％TFA)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(DMSO，80℃)δppm：10.9(s；1H)；8.31(d；2H；8.2Hz)；8.21(dd；1H)；8.1(t；1H)；7.97(dd；1H)；7.5(d；2H)；4.6(m；2H)；3.7(s；3H)；3.2(m；5H)；2.9(s；6H)；2.8(s；3H)；2(m；2H)；1.8(m；2H)；1.6(m；3H)；1.4(m；2H)。[ES+MS]m/z 622(MH)⁺。

实施例46：N′-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N′-环己基-6-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-2-吡啶甲酰肼三氟乙酸盐

标题化合物通过相似于对于实施例45描述的方法制备，中间体64用中间体66代替。¹H NMR(DMSO，80℃)δppm：10.9(s；1H)；10.2-8.7(brs；1H)；8.3(d；2H)；8.2(dd；1H)；8.1(t；1H)；7.97(dd；1H)；7.5(d；2H)；4.3(t；2H)；3.7(s；2H)；2.8(s；2H)；2.2(m；2H)；2(m；2H)；1.8(m；2H)；1.6(m；3H)；1.4(m；2H)。[ES+MS]m/z 636(MH)⁺。

实施例47：N′-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N′-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐

向搅拌的中间体16(100mg，0.39mmol)于THF(5mL)中的溶液中加入DIPEA(FLUKA，0.073mL，0.43mmol)和4-溴-甲基-苯甲酰溴(ALDRICH，97mg，0.35mmol)，并将该反应混合物于室温搅拌1小时。然后，加入N-甲基-哌嗪(ALDRICH，0.052mL，0.47mmol)，并将该反应混合物于室温搅拌2小时。反应粗产物用乙酸乙酯稀释，并用NaHCO₃和盐水洗涤。有机层用MgSO₄干燥，过滤并在减压下蒸发。残余物通过HPLC(X-TERRA 19×150mm，H₂O：ACN，0.1％TFA，梯度10-100％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，d₆-DMSO，80℃)δppm：10.76(s，1H)，8.26(s，1H)，7.92(d，2H)，7.49(d，2H)，5.52(br，1H)，3.77(s，3H)，3.73(s，2H)，3.32-3.14(m，4H)，2.79(s，3H)，2.78-2.61(m，4H)，2.01-1.78(m，4H)，1.70-1.53(m，4H)。[ES+MS]m/z 474(MH)⁺。

实施例48：2-(2-氰基-9-{[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]羰基}-9H-嘌呤-6-基)-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐

在氩气流下，将三光气(ALDRICH，0.086g，0.29mmol)溶于无水THF(2mL)。将中间体14(0.1g，0.29mmol)和DIPEA(FLUKA，0.11mL，0.64mmol)溶于无水THF(2mL)，经30分钟，将得到的溶液缓慢地经管通入三光气溶液中。得到的混合物于室温搅拌15分钟后，将4-二-甲基-氨基-哌啶(LANCASTER，0.037g，0.29mmol)和DIPEA(FLUKA，0.11mL，0.64mmol)于无水THF(2mL)中的溶液经管通入该混合物中。反应混合物于室温搅拌1小时直到反应完全。然后在真空下除去溶剂，残余物溶于DCM，并用10％NaHCO₃水溶液、10％KHSO₄水溶液和盐水洗涤。有机层用无水Na₂SO₄干燥，溶剂在减压下蒸发。粗产物通过制备型HPLC(XTERRA 19×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度20-80％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆，80℃)δppm：9.87-9.15(b r.，2H)；8.59(s，1H)；5.93-5.20(br.，1H)；4.20-3.85(br.，2H)；3.64-3.04(br.，2H)；2.81(s，6H)；2.20-2.01(m，2H)；1.99-1.10(m，20H)。[ES+MS]m/z 498(MH)⁺。

实施例49：2-[2-氰基-9-({[4-(二甲基氨基)丁基]氨基}羰基)-9H-嘌呤-6-基]-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐

在氩气流下，将三光气(ALDRICH，0.104g，0.35mmol)溶于无水THF(2mL)。将中间体14(0.1g，0.29mmol)和DIPEA(FLUKA，0.11mL，0.64mmol)溶于无水THF(2mL)，并经20分钟，将得到的溶液缓慢地经管通入三光气溶液中。得到的混合物于室温搅拌15分钟后，将4-(二-甲基-氨基)-丁基-胺(FRINTON，0.034g，0.29mmol)和DIPEA(FLUKA，0.11mL，0.64mmol)于无水THF(2mL)中的溶液经管通入混合物中。反应混合物于室温搅拌2小时。然后在真空下除去溶剂，将残余物溶于DCM，并用10％NaHCO₃水溶液和盐水洗涤。有机层用无水Na₂SO₄干燥，溶剂在减压下蒸发。粗产物通过制备型HPLC(XTERRA 30×150mm，ACN：H₂O，0.1％TFA，梯度20-80％)纯化，得到标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δppm：9.97-9.4(br.m，1H)；9.40-9.18(br.，1H)；8.94-8.73(br.，1H)；8.58-8.38(br.，1H)；6.03-5.09(br.，1H)；3.52-3.98(br.，4H)；2.8-2.7(d，6H)；1.92-1.09(m，21H)。[ES+MS]m/z486(MH)⁺。

生物试验

本发明的化合物可用几个生物试验之一进行测试以确定具有给定药理作用所需的化合物的浓度。

1)Falcipain-2、Falcipain-3、Vivapain-2和组织蛋白酶S蛋白酶解催化活性的测定

对于Falcipain-2、Falcipain-3和Vivapain-2的试验使用寄生虫重组酶进行。组织蛋白酶S使用人重组酶进行。对于测定动力学常数的标准测试条件使用荧光肽底物，通常为H-D-VLR-AFC(Falcipain-2、Falcipain-3、Vivapain-2)或KQKLR-AMC(组织蛋白酶S)且在含有10mM DTT和0.5mM CHAPS(Falcipain-2、Falcipain-3、Vivapain-2)，或50mM MES，pH6.5，含有0.5mMCHAPS，10mM L-CYS，5mM EDTA(组织蛋白酶S)的100mM乙酸钠，pH5.5中进行测定。在DMSO中以20mM制备底物储备溶液。活性试验包含30uM底物(Falcipain-2、Falcipain-3、Vivapain-2)，和30uM底物(组织蛋白酶S)。所有的试验包含1％DMSO。独立实验发现该水平的DMSO对酶活性或动力学常数没有影响。所有试验在环境温度进行，60分钟后(除了组织蛋白酶S为90分钟外)，试验终点使用16.6uM E-64的1％DMSO溶液猝灭。产物形成(AFC或AMC)从利用LJL Aquest(Molecular Devices)荧光板读取器监测的荧光(激发405nM；发射530nM，AFC，或激发360nM；发射460nM，AMC)确定。在动力学读数(在作用机理研究中使用)的情况中，反应并不进行猝灭，而是在板读取器上每3分钟读数一次，持续约90分钟。另外，对于Falcipain-2的作用机理的研究，使用Z-LR-AMC作为底物。产物形成从利用LJL Acquest(Molecular Devices)荧光板读取器(激发360nM；发射460nM)测量的AMC的荧光确定。

抑制研究

利用猝灭读数(终点)方法，对潜在的抑制剂进行评估。测试在浓度变化的测试化合物存在下进行。反应通过向孔(含有于100％DMSO中的抑制剂)中添加酶和底物而引发。对于终点试验，反应通过添加E64猝灭。使用预置工具，根据方程式1，剂量响应数据拟合IC₅₀曲线：

y＝a+(b-a)/(1+(10^x/10^c)^d) (1)

其中y为在具体抑制剂浓度x时的响应，a为最小响应值，b为最大响应值，c为IC₅₀，且d为IC₅₀曲线的斜率。假定化合物为竞争性抑制剂，表观K_I可从IC₅₀计算，如方程式2所示：

IC₅₀＝appK_I(1+[S]/K_M) (2)

其中appK_I为表观K_I，S为底物浓度，K_M为底物米氏结合常数，且K_I为对于游离酶竞争性抑制剂的结合常数。为了更加直接地测定K_I和结合机理，我们进行了作用机理研究，其包括使用动力学读数的底物和抑制剂的滴定研究。如果对于每个动力学测试的进程曲线为线性时，测量的速率(v)拟合为方程式3：

v＝V_mS/[(K_M(1+[I]/K_I)+[S](1+[I]/αK_I)] (3)

其中V_m为最大速率，S为具有米氏常数K_M的底物的浓度，[I]为抑制剂的浓度，K_I为对于游离酶的抑制剂的结合常数，且αK_I为对于有效酶-底物络合的抑制剂的结合常数。

对于那些进程曲线为非线性的化合物而言，具有酶活性随着时间而降低的时间-依赖性抑制特性，进程曲线拟合为方程式4，得到k_obs：

[AMC]＝v_st+(v₀-v_ss)[1-exp(-k_obst)]/k_obs (4)

其中[AMC]为随时间t形成的产物的浓度，v₀为初始反应速率且v_s为最终稳态速率。k_obs值拟合为方程式5和6，其分别描述了一步和两步时间依赖性结合机理：

k_obs＝k_off(1+[I]/appK_I) (5)

k_obs＝k_off+k_on([I]/(appK_I+[I]) (6)

appK_I＝K_I(1+[S]/K_M) (7)

方程式7描述的为对于竞争性化合物的表观K_I，并且代入方程式5和6，以从拟合途径得到有关结合常数。另外，初始和最终速率拟合为方程式3，以进一步确定结合机理和效力。关于这种动力学处理的全部讨论已经被完整地描述(Morrison等人，Adv.Enzymol.Relat.Areas Mol.Biol.，1988，61，201)。

2)抗恶性疟原虫寄生虫的全细胞活性的测定

根据描述于Sijwali S.和Rosenthal P.J.，(2004)Proceedings of the NationalAcademy of Sciences of the United States of America(PNAS)101(13)，4384-4389(尤其参见4385页″Measurement of Parasite Growth rates andInhibitor Sensitivity″)中的方法，对化合物的抗恶性疟原虫寄生虫的全细胞活性进行评价；IC₅₀值可按照Singh A.和Rosenthal P.J.，(2001)AntimicrobialAgents and Chemotherapy 45(3)，949-951(尤其参见950页，第一栏)中的描述计算；并发寄生虫可按照Divo A.A.等人，(1985)Protozool.32，59-64中的描述制备。

3)比较化合物

使用两个化合物作为比较化合物。比较实施例24为三氟乙酸盐，且比较实施例25为游离碱，按照前述制备。

每个这些化合物的游离碱描述于WO 2005/103012A1(分别于第122-123页，实施例15；和第130页，实施例17(4))。

对于本领域的技术人员而言，应当理解，在上述的酶测试条件下，对于给定化合物的游离碱得到的测试结果认为与当测试化合物的盐时得到的结果是相同的。这是因为在测试中使用的缓冲液确定了化合物在测试下的pH；pH决定了进行测试的化合物的游离碱与其盐的相对量。这已经通过在酶测试本文中示例性的一些化合物的游离碱、盐酸盐和三氟乙酸盐中的测试得到了确证。

falcipain-2和falcipain-3酶试验和全细胞试验的结果

所有的示例性化合物(实施例1-23、26-49，和比较实施例24和25)在对于falcipain-2的酶试验中根据上述方法进行测试。

实施例1、2、4-23、26-49，和比较实施例24和25在对于falcipain-3的酶试验中根据上述方法进行测试。

所有的示例性化合物(实施例1-23、26-49和比较实施例24和25)在全细胞试验中根据上述方法进行测试。

化合物对于falcipain-2和falcipain-3酶试验以及全细胞试验的结果示于下表中。

falcipain-2、falcipain-3和全细胞试验活性表

表格标记

X＝IC₅₀(nM)

X≤1 A

1＜X≤2.5 B

2.5＜X≤15 C

15＜X≤150 D

150＜X≤250 E

250＜X≤400 F

400＜X≤1000 G

X＞1000 H

NT＝未测试

与现有技术的比较实施例24和25相比，实施例1-23和26-48在全细胞试验中显示出改良的活性。实施例49具有作为制备其它式I化合物的中间体的用途。

Claims

1.式I化合物，或其可药用衍生物：

其中：

B表示

R⁵表示氢或C_1-5亚烷基-NR^ER^F；

其中苯基任选被一个选自卤素或CF₃的基团所取代；

R^J表示Z、-C_1-3亚烷基-Z或-C(O)Z；

A表示CH₂且n表示0或1；或A表示-O-或N(C(O)C_1-3烷基)且n表示1；

R^E和R^F在各种情况下独立地表示氢或C_1-4烷基；

条件是R¹、R²、R⁵或B中至少一个含有一个或多个氮原子，且其中如果一个或多个氮原子仅位于R¹中，则在R¹中存在至少一个氮原子不直接与C(O)基团键合。

2.权利要求1的化合物或其可药用衍生物，其中B表示

3.权利要求1或权利要求2的化合物或其可药用衍生物，其中R¹表示C_1-4烷基；C_1-5亚烷基-NR^ER^F或-C(O)-E。

4.权利要求1-3中任一项的化合物或其可药用衍生物，其中R⁵表示氢。

5.权利要求1-4中任一项的化合物或其可药用衍生物，其中R²表示-苯基-C_0-3亚烷基-X；-苯基-C_0-3亚烷基-X-R^J；-吡啶基-苯基-C_0-3亚烷基-X；-吡啶基-苯基-C_0-3亚烷基-X-R^J；-吡啶基-C_0-3亚烷基-X；或-吡啶基-C_0-3亚烷基-X-R^J，其中苯基任选被一个选自卤素或CF₃的基团所取代。

6.权利要求1-5中任一项的化合物或其可药用衍生物，其中E表示任选取代的含有一个或两个氮原子的6-元单环饱和烃基。

7.权利要求1-6中任一项的化合物或其可药用衍生物，其中X表示任选取代的含有一个或两个氮原子的4-或6-元单环饱和烃基。

8.权利要求1-7中任一项的化合物或其可药用衍生物，其中Z表示任选取代的含有一个或两个氮原子的5-或6-元单环饱和烃基。

9.权利要求1-8中任一项的化合物或其可药用衍生物，其中A表示CH₂且n表示0或1。

10.权利要求1-9中任一项的化合物或其可药用衍生物，其中R^E和R^F在各种情况下独立地表示C_1-4烷基。

11.化合物，选自：

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-(环戊基甲基)-4-{[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-哌啶基]甲基}苯甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-(环戊基甲基)-4-({4-[(1-甲基-4-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)苯甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-(环戊基甲基)-4-({4-[(1-甲基-3-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)苯甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-4-{[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-哌啶基]甲基}苯甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-4-({4-[(1-甲基-4-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)苯甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-4-({4-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-1-哌啶基}甲基)苯甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-4-{[3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]甲基}苯甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环己基-4-{[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-哌啶基]甲基}苯甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环己基-4-({4-[(1-甲基-4-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)-苯甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环己基-4-({4-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-1-哌啶基}甲基)苯甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环己基-4-{[3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]甲基}苯甲酰肼；

2-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-(环戊基甲基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯；

N’-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-(环戊基甲基)-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

N’-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-6-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-2-吡啶甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-5-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-3-吡啶甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-6-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-2-吡啶甲酰肼；

N’-(2-氰基-1H-嘌呤-6-基)-N’-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

N’-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼；

N’-{2-氰基-9-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环己基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼；

N’-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环戊基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼；

N’-{2-氰基-9-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

N’-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

N’-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环戊基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼；

N’-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环戊基-6-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-2-吡啶甲酰肼；

N’-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

N’-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环己基-6-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-2-吡啶甲酰肼；

N’-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环己基-6-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-2-吡啶甲酰肼；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼；

或其可药用衍生物。

12.化合物，选自：

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-(环戊基甲基)-4-{[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-哌啶基]甲基}苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-(环戊基甲基)-4-({4-[(1-甲基-4-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-(环戊基甲基)-4-({4-[(1-甲基-3-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-4-{[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-哌啶基]甲基}苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-4-({4-[(1-甲基-4-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-4-({4-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-1-哌啶基}甲基)苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-4-{[3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]甲基}苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环己基-4-{[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-哌啶基]甲基}苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环己基-4-({4-[(1-甲基-4-哌啶基)甲基]-1-哌嗪基}甲基)-苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环己基-4-({4-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-1-哌啶基}甲基)苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环己基-4-{[3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]甲基}苯甲酰肼三氟乙酸盐；

2-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-(环戊基甲基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐；

2-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-(环戊基甲基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐；

N’-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-(环戊基甲基)-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐；

2-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐；

2-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-(环戊基甲基)-1-[3-(二甲基氨基)丙基]肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐；

N’-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-6-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-2-吡啶甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-5-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-3-吡啶甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-6-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-2-吡啶甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-1H-嘌呤-6-基)-N’-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-{2-氰基-9-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐；

2-{2-氰基-9-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-9H-嘌呤-6-基}-2-环己基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环己基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环戊基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-{2-氰基-9-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐；

2-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐；

N’-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环戊基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰肼双(三氟乙酸盐)；

N’-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环戊基-6-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-2-吡啶甲酰肼三氟乙酸盐；

2-(2-氰基-9-{2-[(1，1-二甲基乙基)(甲基)氨基]乙基}-9H-嘌呤-6-基)-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐；

N’-{2-氰基-9-[2-(二甲基氨基)乙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环己基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-{2-氰基-9-[3-(二甲基氨基)丙基]-9H-嘌呤-6-基}-N’-环己基-6-{4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯基}-2-吡啶甲酰肼三氟乙酸盐；

N’-(2-氰基-9-甲基-9H-嘌呤-6-基)-N’-环戊基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]苯甲酰肼三氟乙酸盐；

2-(2-氰基-9-{[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]羰基}-9H-嘌呤-6-基)-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐；和

2-[2-氰基-9-({[4-(二甲基氨基)丁基]氨基}羰基)-9H-嘌呤-6-基]-2-环戊基肼甲酸1，1-二甲基乙基酯三氟乙酸盐。

13.权利要求1-12中任一项的化合物或其可药用衍生物，其用于医学治疗。

14.权利要求1-12中任一项的化合物或其可药用衍生物在制备用于治疗对半胱氨酸蛋白酶抑制剂的调节敏感的病症的药物中的用途。

15.权利要求1-12中任一项的化合物或其可药用衍生物在制备用于治疗疟疾的药物中的用途。

16.权利要求1-12中任一项的化合物或其可药用衍生物，其用于治疗对半胱氨酸蛋白酶抑制剂的调节敏感的病症。

17.权利要求1-12中任一项的化合物或其可药用衍生物，其用于治疗疟疾。

18.治疗患有对半胱氨酸蛋白酶抑制剂的调节敏感的病症的人或动物患者的方法，该方法包括向所述人或动物患者给药有效量的权利要求1-12中任一项的化合物或其可药用衍生物。

19.治疗患有疟疾的人或动物患者的方法，该方法包括向所述人或动物患者给药有效量的权利要求1-12中任一项的化合物或其可药用衍生物。

20.药物组合物，包含权利要求1-12中任一项的化合物或其可药用衍生物，以及一种或多种可药用载体和/或赋形剂。

21.制备权利要求1所述的其中R⁵为氢的式I化合物的方法，根据下列方案，通过式II化合物、式III化合物和式IV化合物之间的反应制备，式II中，R¹和B如式I中所定义，式III中，Hal为氯、溴或碘，以及式IV中，X和R^J如式I中所定义，

22.制备权利要求1所述的其中R⁵为氢的式I化合物的方法，根据下列方案，通过式V化合物和式IV化合物之间的反应制备，式V中，R¹和B如式I中所定义，且Hal为氯、溴或碘，以及式IV中，X和R^J如式I中所定义，

23.制备其中R⁵为氢的式I化合物的方法，根据下列方案，通过式II化合物和式VI化合物之间的反应制备，式VI中，X和R^J如式I中所定义，且Hal为氯、溴或碘。