CN101653531B - 一种抗呼吸道病毒的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
一种中药复方抗呼吸道病毒的有效部位及制备方法。它是以甘草、麻黄、苦杏仁、半夏、生石膏、细茶、五味子按一定重量份配比的原料药用水蒸气蒸馏法提取的中药复方挥发油部位、萃取法提取的乙酸乙酯部位。本发明具有制备工艺简单、重现性好、成本低的优点，同时较大限度地提高复方中有效成分的提取率。经体外试验证明本发明提供的中药复方挥发油部位、乙酸乙酯部位具有较强的抗甲型流感病毒作用；乙酸乙酯部位具有较强的抗合胞病毒作用；挥发油部位具有抗乙型流感病毒作用。本发明的中药复方挥发油部位、乙酸乙酯部位可用于制备防治上呼吸道相关病毒感染的中药新药，为利用具有传统治疗优势的中药复方制备抗呼吸道病毒药物供了新的选择。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药复方的抗呼吸道病毒的有效部位及其制备方法，以及在制备治疗抗呼吸道病毒中的应用，属于中医药领域中中药复方有效部位提取与应用技术领域。
背景技术
呼吸道病毒感染是临床的常见疾病，可发生于各年龄段，临床表现较为多样，其中严重者呈细支气管炎和肺炎，可引起急性呼吸窘迫和心衰，甚至导致死亡。呼吸道病毒易发生变异，从而时常发生一些新的疾病，对人类的生命构成威胁，所以尤其引起广泛的重视。
中医药在两千多年与疾病做斗争的历程中，总结了系统的理论，积累了治疗病毒感染性疾病的丰富经验，尤其是众多的方剂和用药经验，为我们今天运用中医学理论和方药治疗这些疾病打下了坚实的基础。现今临床大量病例显示，中医药以辨证辨病结合治疗呼吸道病毒感染具有独特的治疗优势，值得深入挖掘其科学内容。但是目前对复方所具有的效应部位、效应成分，对呼吸道常见病毒的药理作用及机制的研究，仍然报道较少，这与广大患者的实际需求存在较大差距。
本发明涉及的中药复方是治疗“感冒风邪，鼻塞声重”经典名方三拗汤(《局方》卷二)的类方。方中麻黄配石膏，清宣肺中郁热；杏仁宣降肺气；半夏、五味子燥湿化痰、敛肺止咳，芽茶化痰除热，甘草合麻黄辛甘发散而解表，合杏仁止嗽化痰而利肺。全方具有发散风寒，止嗽平喘的功效。
发明内容
技术问题：本发明的目的是提供一种中药复方抗呼吸道病毒的有效部位及其制备方法，以及在制备防治呼吸道病毒药物中的应用。
本发明公开了该复方挥发油部位和乙酸乙酯部位的制备方法，适用于工业化生产。
本发明公开了该复方挥发油部位和乙酸乙酯部位在防治呼吸道病毒制备药物中的应用。
技术方案：本发明的目的是通过以下的技术方案来实现的：
一种抗呼吸道病毒的中药组合物，由中药复方的挥发油部位和乙酸乙酯部位组成，所述中药复方为甘草4-40份，麻黄6-60份，苦杏仁10-100份，半夏10-100份，生石膏20-200份，细茶(古籍中记载为细茶，此处的细茶可为红茶、绿茶，泛指从茶树上采摘的茶叶)10-100份，五味子6-60份。
甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根及根茎，产地内蒙古杭锦旗；麻黄为麻黄科植物草麻黄Ephedra sinica Stapf的草质茎，产地山西浑源；苦杏仁为蔷薇科植物山杏Prunus armeniaca L.var.ansu Maxim.的成熟种子，产地河北承德；半夏为天南星科植物半夏Pinellia ternata(Thunb.)Breit.的干燥块茎，产地安徽；生石膏为硫酸盐类矿物硬石膏族石膏Gypsum Fibrosum主含含水硫酸钙(CaSO4·2H2O)，产地山东；五味子为木兰科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实，产地辽宁。以上药材均经南京中医药大学中药鉴定教研室吴德康教授鉴定。
抗呼吸道病毒的中药组合物的制备方法，中药复方的挥发油部位的制备步骤为：按重量，取甘草4-40份，麻黄6-60份，苦杏仁10-100份，半夏10-100份，生石膏20-200份，细茶10-100份，五味子6-60份，粉碎后加药材质量10倍量纯净水，振摇混合后，浸泡30～40min，连接回流冷凝管；自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，加热至沸腾，并保持110℃微沸8～10小时，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻30～40min，开启测定器下端活塞，将水放出，静置1小时，经无水硫酸钠干燥后得挥发油为红黄色透明油状液体，具有特殊浓郁香味。
抗呼吸道病毒的中药组合物的制备方法，中药复方的乙酸乙酯部位的制备步骤为：按重量，取甘草4-40份，麻黄6-60份，苦杏仁10-100份，半夏10-100份，生石膏20-200份，细茶10-100份，五味子6-60份，粉碎后加药材质量10倍量纯净水，振摇混合后，浸泡30～40min，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持110℃微沸2小时，停止加热，冷却至室温，将其中药液过滤倒出，得滤液A，滤渣再加入8倍质量纯净水，振摇混合后，浸泡30min，连接回流冷凝管，加热至110℃沸腾，并保持1小时，停止加热，冷却至室温，将其中药液过滤倒出，得滤液B；合并A、B药液，减压浓缩至相对4℃的水密度为1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加入乙醇使含醇量达70～80wt％，搅匀，静置不少于12h，滤过沉淀，上清液回收乙醇至相对4℃的水密度为1.20～1.25(70℃)的清膏，使用环己烷、乙酸乙酯、正丁醇依次对其进行萃取，并减压回收其中有机溶剂，得到该复方乙酸乙酯部位。
上述的中药复方的挥发油部位、乙酸乙酯部位组合物在制备防治呼吸道病毒感染药物中的应用。
一种中药复方挥发油的指纹图谱
(1)样品：称取全方挥发油49.09mg，用丙酮溶解并定容，得到全方挥发油样品9.02mg/mL。
(2)GC-MS联用条件：
色谱条件：色谱柱HP-5，石英毛细管色谱柱(0.25mm×30m×0.25μm)；进样口温度200℃，检测器温度250℃；程序升温：初始温度60℃，以4℃/min的速率升温至150℃保持3min，以25℃/min的速率升温至200℃保持10min，分流比：(40∶1)，进样量1μl；载气为氦气(纯度＞99.99％)，流速为1.0mL/min。
质谱条件：电子轰击(EI)离子源，电离电压70eV，离子源温度220℃，加速电压200eV；扫描质量m/z 35～550。
分析方法：对该复方总离子流图中的化学色谱峰通过气相质谱分析工作站NIST标准图库进行检索并参照有关文献进行确认，按峰面积归一化法计算各组分相对百分含量，对该复方挥发油进行分析。
(3)分析结果：该复方挥发油中百分含量大于1％的成分共有16个。其中含量最高的是苯甲醛，保留时间为6.15min，相对百分含量为18.93％。其次含量较高的有α-衣兰油烯和γ-杜松油烯，保留时间分别为22.86、23.32min，百分含量分别为8.71％和8.62％。其它百分含量高于1％的成分有：α-松油醇(百分含量为1.65％，保留时间为13.12min)，α-檀香烯(百分含量为1.83％，保留时间为19.50min)，γ-衣兰油烯(百分含量为1.23％，保留时间为21.65min)，β-花柏烯(百分含量为1.49％，保留时间为22.30min)，α-古芸烯(百分含量为1.39％，保留时间为22.66min)，α-雪松烯(百分含量为2.60％，保留时间为24.03min)，大根香叶烯(百分含量为1.77％，保留时间为24.48min)，Cubenol(百分含量为1.57％，保留时间为27.22min)，α-檀香醇(百分含量为1.86％，保留时间为27.92min)和广藿香烯(百分含量为2.76％，保留时间为29.40min)。
一种中药复方乙酸乙酯部位的指纹图谱
(1)仪器：高效液相-质谱联用系统：Waters UPLC ACQUITYTM系统；Waters Synapt Q-TOF-MS质谱仪，配有Lock-spray接口；电喷雾离子源(ESI)；Waters Masslynx 4.1质谱工作站软件。
(2)样品：称取一定量该复方乙酸乙酯部位干浸膏280.43mg，加入甲醇溶液超声5min待全部溶解后并定容，即得浓度为28.04mg/mL的样品，以0.22μm微孔滤膜滤过，备HPLC-MS用。
(3)色谱条件：Hypersil ODS色谱柱(4.6mm×250mm，5.0μm)；柱温30℃；流动相：乙腈(A)-水(B)梯度洗脱，流速0.50mL/min。
(4)质谱条件：电喷雾质谱(ESI)：采用负离子源模式，毛细管电压：3.0kV，锥孔电压：40V，萃取电压：4.0V，离子源温度：100℃，脱溶剂气温度：350℃，鞘气(N2)，气锥孔气流量：50L/h，脱溶剂气流量：600L/h，离子能量：1V，质量扫描范围：60-1000m/z。
(5)分析结果：根据质谱(ESI-MS)和串联质谱(ESI-MSn)，并结合UV谱图及文献报道，对该复方乙酸乙酯部位HPLC分离出的主要峰进行分析，大致确定了19个主要成分的可能结构。其中一些代表性成分，经与对照品比对分析后，确定其结构。鉴定出的可能化合物的名称、准分子离子峰及特征离子的多级质谱分析见下表。
表1 该复方乙酸乙酯部位HPLC-MS分析结果
| 编号 | 保留时间(min) | 成分鉴定 | [M-H]- | MSn特征离子 |
| 1 | 24.49 | 甘草素-4′-芹糖苷Liquiritigenin-4′-apiosyl(1→2)-glucoside | 549 | 255，135 |
| 2 | 25.14 | 甘草苷Liquiritin | 417 | 255，135 |
| 3 | 32.40 | 异甘草苷Isoliquiritin | 417 | 255，135 |
| 4 | 33.26 | 大黄酚Chrysophanol | 253 | |
| 5 | 36.45 | 甘草素Liquiritigenin | 255 | 135 |
| 6 | 44.99 | 五味子醇甲Schizandrin | 431 | |
| 7 | 46.64 | 2，3-二氢异甘草素2，3-Dihydroiso-liquiritigenin | 257 | |
| 8 | 48.10 | 异甘草素Isoliquiritigenin | 255 | |
| 9 | 48.93 | 芒柄花素Formononetin | 267 | |
| 10 | 51.02 | Acetylbinankadsurin B | 459 | |
| 11 | 54.84 | Benzoylgomisin Q | 551 | |
| 12 | 56.76 | 甘草醇Glycyrol | 367 | 337，267 |
| 13 | 57.87 | 甘草异黄酮乙Licosisoflavone B | 351 | |
| 14 | 58.97 | 甘草二氢异黄酮Licoisoflavanone | 353 | 296，269 |
| 15 | 60.84 | 甘草利酮Licoricone | 381 | |
| 16 | 62.70 | 新甘草酚Neoglycyrol | 365 | 307，279，251 |
| 17 | 66.96 | 光甘草酮Glabrone | 351 | |
| 18 | 69.14 | 异甘草醇Isoglycyrol | 363 | |
| 19 | 69.81 | 3′-甲氧基光甘草定3′-Methyoxy-glabridin | 369 |
上述的中药复方挥发油和乙酸乙酯部位在制备防治呼吸道病毒药物中的应用
用本发明提供的复方部位进行体外抗呼吸道病毒的实验，表明该复方乙酸乙酯部位对合胞病毒具有较强抑制作用；该复方挥发油部位、该复方乙酸乙酯部位对甲型流感病毒具有较强抑制作用；该复方挥发油部位对乙型流感病毒具有抑制作用。
本发明体外抗呼吸道病毒的药效，具体实验结果如下：
1、体外对合胞病毒的影响
(1)实验材料
药物：该复方的乙酸乙酯部位(15.11mg)相当于生药3.32g。病毒唑(利巴韦林)：100mg/mL。
人喉癌上皮细胞(HEP-2)。
呼吸道合胞病毒(RSV)，Long株A型。
HEp-2细胞在含100mL/L灭活胎牛血清的DMEM中37℃，50mL/LCO2条件下培养，细胞长满单层后，RSV接种HEp-2细胞，继续在含20mL/L灭活胎牛血清的DMEM的维持液中培养，待细胞病变达100％时收获病毒，存于-70℃冰箱中，反复冻融2次(18℃)，2500r/m in离心(4℃、8m in)，取上清备用。RSV滴度在HEP-2细胞中的组织半数感染量(TCID50)为10-4.5
(2)实验方法
①药物对细胞的毒性作用
将HEP-2细胞按1.5×104的浓度，接种到96孔细胞培养板上，每孔0.2mL，2d后长成单层细胞，备用。弃去上清，将含不同浓度的细胞培养液0.2mL加入细胞，每个浓度4个复孔，37℃5％CO2培养4d；利用MTT法测定细胞活力，以最大无毒浓度为起始浓度，稀释3个浓度，进行抗病毒试验。
②抗病毒试验
将HEP-2细胞用胰蛋白酶消化后，按1.5×104的浓度接种96孔细胞培养板，每孔0.2mL，培养2d后长成单层细胞吸除旧的培养液，每孔加入50μL100TCID50病毒液37℃，5％培养箱吸附2h后，用Hank’s液洗去未吸附的病毒。加入含不同浓度药物的细胞培养液200μl，实验设细胞空白对照、病毒对照、阳性药物病毒唑对照组(0.25mg/mL、)和该复方乙酸乙酯部位(15.11mg/mL)；高剂量(1∶10)、中剂量(1∶20)、低剂量(1∶40)组。每个稀释度设4复孔，置于37℃5％CO2培养培养箱中培养，显微镜下观察药物对病毒致细胞病变的抑制作用，同时利用MTT法测定细胞活力。
③MTT法测定细胞活力
于实验结束前4h加入终浓度为0.5g/L的MTT，37℃、5％CO2下作用4h后弃去上清液，每孔加入DMSO150μL，置振荡器上振荡10min使结晶充分溶解，用酶标仪570nm测定OD值，观察细胞活力。
(3)结果
①细胞毒性结果最大无毒浓度：该复方乙酸乙酯部位为3.022mg/mL。阳性药病毒唑的细胞毒性结果最大无毒浓度为0.625mg/mL，见表2。
表2 药物对细胞毒性的影响
| 组别 | 药物浓度(mg/mL) | OD值 |
| 该复方乙酸乙酯部位 | 3.022 | 1.257±0.243 |
| 1.511 | 1.274±0.131 | |
| 0.756 | 1.426±0.146 | |
| 0.378 | 1.500±0.194 | |
| 0.189 | 1.693±0.224 | |
| 病毒唑 | 5 | 0.897±0.162** |
| 2.5 | 1.027±0.225* | |
| 1.25 | 1.054±0.170* | |
| 0.625 | 1.232±0.127 | |
| 0.313 | 1.330±0.089 | |
| 正常对照 | - | 1.742±0.422 |
注：和正常对照组相比，**P＜0.01；*P＜0.05
②抗病毒活性测定结果
MTT法结果表明，该复方乙酸乙酯部位为0.756mg/mL对合胞病毒有较强的抑制作用，OD值和病毒对照组相比，有显著性差异(P＜0.01、P＜0.05)。结果见表3。
显微镜下观察药物对病毒的半数细胞病变抑制浓度基本与MTT法吻合。
表3 对合胞病毒的抑制作用
| 组别 | 药物浓度(mg/mL) | OD值 |
| 该复方乙酸乙酯部位 | 3.022 | 2.908±0.110** |
| 1.511 | 2.830±0.053** | |
| 0.756 | 2.182±0.221** | |
| 病毒唑 | 0.625 | 2.491±0.241** |
| 正常对照 | - | 2.981±0.126** |
| 病毒对照 | - | 1.472±0.118 |
注：和病毒对照组相比，**P＜0.01，*P＜0.05
(4)结论
该复方乙酸乙酯部位具有较小的细胞毒性，具有良好的体外抗合胞病毒作用；MTT法结果表明，为0.756mg/mL时对合胞病毒具有明显的抑制作用，OD值和病毒对照组相比较，有显著性差异(P＜0.01)。显微镜下观察药物对病毒的半数细胞病变抑制浓度基本与MTT法吻合。
2、体外对流感副流感病毒的影响
(1)实验材料
药物：该复方挥发油部位(15.58mg)相当于生药10.43g，该复方乙酸乙酯部位(15.11mg)相当于生药3.32g。病毒唑(利巴韦林)：100mg/mL。
细胞株：狗肾传代细胞(MDCK)。
病毒：甲型流感病毒A/PR8/34(H1N1)，乙型流感病毒B/京防98-76。
(2)实验方法
流感病毒鸡胚增毒试验：将甲、乙流感病毒毒株分别接种于9日龄鸡胚尿囊中，37℃培养48h后取出第1次增毒的尿囊液。再将第1次增毒的尿囊液再接种于鸡胚尿囊中，重复4次后用于实验。实验前做血凝试验。
血凝试验：结果血凝试验(HA)为分别1∶640。
细胞培养液为RPMI-1640培养液。
病毒毒力测定：CK细胞按1×105的浓度，接种到96孔细胞培养板上，每孔0.2mL，24h长成单层细胞，弃去上清，将病毒不同稀释比例(100、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5)，加入20μL病毒液，每个浓度4个复孔，吸附1h，用Hank’s溶液洗去未吸附的病毒，加入细胞培养液1mL，37℃5％CO2培养72h。根据出现细胞病变情况，用Reed-Munch公式计算病毒的TCID50。
药物对细胞的毒性作用：将MDCK细胞按1×105的浓度，接种到96孔细胞培养板上，每孔0.2mL，24h后长成单层细胞，备用。弃去上清，将含不同浓度的细胞培养液0.2mL加入细胞，每个浓度4个复孔，37℃5％CO2培养3d；利用MTT法测定细胞活力，以最大无毒浓度为起始浓度，稀释3个浓度，进行抗病毒试验。
抗病毒试验：将MDCK细胞按1×105的浓度，接种到96孔细胞培养板上，每孔0.2mL，24h后长成单层细胞，备用。实验设细胞空白对照、病毒对照、阳性药物病毒唑对照组(1.25mg/mL、)和药物该复方挥发油部位(15.58mg/mL)、分别为高剂量(1∶5)、中剂量(1∶10)、低剂量(1∶20)；该复方乙酸乙酯部位(15.11mg/mL)高剂量(1∶10)、中剂量(1∶20)、低剂量(1∶40)共36个组。取长成单层的细胞，弃去上清，分别加入甲、乙50μL 100TCID50病毒液，吸附1h，用Hank’s液洗去未吸附的病毒，加入含不同浓度药物的细胞培养液200μl，每个浓度4个复孔，37℃5％CO2培养72h。利用MTT法测定细胞活力。
MTT法测定细胞活力：于实验结束前4h加入终浓度为0.5g/L的MTT，℃、5％CO2下作用4h后弃去上清液，每孔加入DMSO150μL，置振荡器上振荡10min使结晶充分溶解，用酶标仪490hm测定OD值，观察细胞活力。
(3)结果
①病毒毒力测定结果
甲型流感病毒的TCID50＝10-3.3，乙型流感病毒的TCID50＝10-4.6。见表5、6。
表4 甲型流感病毒的毒力测定
| 复孔 | 100 | 10-1 | 10-2 | 10-3 | 10-4 | 10-5 | 10-6 | 10-7 | CK |
| 1 | ++++ | ++++ | ++++ | ++++ | - | - | - | - | - |
| 2 | ++++ | ++++ | ++++ | +++ | + | - | - | - | - |
| 3 | ++++ | ++++ | ++++ | ++++ | - | - | - | - | - |
| 4 | ++++ | ++++ | ++++ | ++++ | + | - | - | - | - |
注：1.“-”表示细胞没有发生病变，“+”表示大约25％的细胞发生了病变，“++”表示大约50％的细胞发生病变，“+++”表示大约75％的细胞发生病变，“++++”表示100％的细胞发生病变。
2.以下表中符号意义相同。
表5 乙型流感病毒的毒力测定
| 复孔 | 100 | 10-1 | 10-2 | 10-3 | 10-4 | 10-5 | 10-6 | 10-7 | CK |
| 1 | ++++ | ++++ | ++++ | ++++ | ++++ | + | - | - | - |
| 2 | ++++ | ++++ | ++++ | +++ | ++++ | - | - | - | - |
| 3 | ++++ | ++++ | ++++ | +++ | ++++ | - | - | - | - |
| 4 | ++++ | ++++ | ++++ | +++ | ++++ | + | - | - | - |
②药物对细胞毒性测定结果
结果显示，细胞毒性结果最大无毒浓度该复方挥发油部位为3.116mg/mL，该复方乙酸乙酯部位为1.511mg/mL。阳性药病毒唑的细胞毒性结果最大无毒浓度为1.25mg/mL，见表7。
表6 药物对细胞毒性的影响
| 组别 | 药物浓度(mg/mL) | OD值 |
| 该复方挥发油部位 | 3.116 | 1.824±0.198 |
| 1.558 | 1.865±0.038 | |
| 0.779 | 1.948±0.024 | |
| 0.390 | 1.862±0.146 | |
| 0.195 | 1.948±0.043 | |
| 该复方乙酸乙酯部位 | 3.022 | 1.138±0.111* |
| 1.511 | 1.675±0.214 | |
| 0.756 | 1.979±0.281 | |
| 0.378 | 1.697±0.171 | |
| 0.189 | 1.737±0.251 | |
| 病毒唑 | 10 | 0.997±0.137* |
| 5 | 1.027±0.083* | |
| 2.5 | 1.181±0.057* | |
| 1.25 | 1.845±0.133 | |
| 0.625 | 1.664±0.033 | |
| 正常对照 | - | 1.883±0.561 |
注：和正常对照组相比，*P＜0.05
③抗病毒活性测定结果
MTT法结果表明，该复方挥发油部位为0.799mg/mL，该复方乙酸乙酯部位为0.756mg/mL时对甲型流感病毒H1N1株具有明显的抑制作用，OD值和病毒对照组相比较，有显著性差异(P＜0.01)。该复方挥发油部位为1.558mg/mL，该复方乙酸乙酯部位为1.324mg/mL，对乙型流感病毒均具有较强的抑制作用，OD值和病毒对照组相比，有显著统计学差异(P＜0.01，P＜0.05)。结果见表8、9。
表7 对甲型流感病毒的抑制作用
注：和病毒对照组相比，**P＜0.01，*P＜0.05
表8 对乙型流感病毒的抑制作用
| 组别 | 药物浓度 | OD值 |
| 该复方挥发油部位 | 3.116 | 2.858±0.383* |
| 1.558 | 2.667±0.482* | |
| 0.779 | 2.292±0.442 | |
| 该复方乙酸乙酯部位 | 3.022 | 2.446±0.372 |
| 1.511 | 2.487±0.299 | |
| 0.756 | 2.503±0.499 | |
| 病毒唑 | 1.25 | 2.797±0.158** |
| 正常对照 | - | 2.459±0.106* |
| 病毒对照 | - | 1.933±0.345 |
注：和病毒对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
(4)结论
该复方挥发油部位、该复方乙酸乙酯部位具有较小的细胞毒性，体外试验结果显示对MDCK细胞的最大无细胞毒性浓度该复方挥发油部位为3.116mg/mL，该复方乙酸乙酯部位为1.511mg/mL。该复方挥发油部位、该复方乙酸乙酯部位具有良好的体外抗甲型流感病毒作用；该复方挥发油部位具有良好的体外抗乙型流感病毒作用。
MTT法结果表明，该复方挥发油部位为0.799mg/mL、该复方乙酸乙酯部位为0.756mg/mL时对甲型流感病毒H1N1株具有明显的抑制作用，OD值和病毒对照组相比较，有显著性差异(P＜0.01)。该复方挥发油部位为1.558mg/mL对乙型流感病毒具有较强抑制作用(P＜0.05)。
有益效果：本发明提供的用于提取中药复方挥发油部位、乙酸乙酯部位的制备方法，从甘草、麻黄、苦杏仁、半夏、生石膏、细茶、五味子组成的中药复方中，提取挥发油部位、乙酸乙酯部位，并进行指纹图谱分析。该制备工艺简单、重现性好、成本低，同时较大限度地提高复方中有效成分的提取率。用本发明提供的中药复方挥发油部位和乙酸乙酯部位，进行体外抗呼吸道病毒实验，结果表明，挥发油部位、乙酸乙酯部位具有良好的抗甲型流感病毒作用；乙酸乙酯部位具有良好的抗合胞病毒作用；挥发油部位具有良好的抗乙型流感病毒作用。
本发明提供的中药复方挥发油部位、乙酸乙酯部位及其制备方法技术稳定，可用于涉及在制备防治呼吸道病毒感染药物中的应用，从而为临床提供制备与使用方便、有效部位较明确、重复性好的中药新药提供了新的选择。
具体实施方式
以下实施例用来说明本发明，但本发明的内容并不局限于此。
实施例1 一种中药复方挥发油部位的制备：
取甘草40g，麻黄60g，苦杏仁100g，半夏100g，生石膏200g，细茶100g，五味子60g，组成全方共660g，粉碎后置于20000mL圆底烧瓶中，加药材质量10倍量纯净水，振摇混合后，浸泡30min；
连接挥发油提取器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中缓缓加热至110℃沸腾，并保持微沸8小时，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止。放置1小时以上，再开启活塞时油层下降至其上端恰与刻度0线平齐。经无水硫酸钠干燥后得挥发油为红黄色透明油状液体，具有特殊浓郁香味。得到挥发油的量为1.1mL。
实施例2 一种中药复方挥发油的制备方法，步骤如下：
取甘草80g，麻黄120g，苦杏仁200g，半夏200g，生石膏400g，细茶200g，五味子120g，组成全方共1320g，粉碎后置于20000mL圆底烧瓶中，加药材10倍质量纯净水，振摇混合后，浸泡30min。
连接挥发油提取器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油提取器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中缓缓加热至110℃沸腾，并保持微沸8小时，至提取器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启提取器下端活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止。放置1小时以上，再开启活塞时油层下降至其上端恰与刻度0线平齐。经无水硫酸钠干燥后得挥发油为红黄色透明油状液体，具有特殊浓郁香味。得到挥发油的量为2.3mL。
实施例3 一种中药复方乙酸乙酯部位的制备方法，步骤如下：
取甘草40g，麻黄60g，苦杏仁100g，半夏100g，生石膏200g，细茶100g，五味子60g，组成全方共660g，粉碎后置于20000mL圆底烧瓶中，加药材质量10倍量纯净水，振摇混合后，浸泡30min，连接回流冷凝管。置电热套中缓缓加热至110℃沸腾，并保持微沸2小时，停止加热，放置至烧瓶温度接近室温，将其中药液过滤倒出。
再向烧瓶中加入8倍量纯净水，振摇混合后，浸泡30min，连接回流冷凝管。置电热套中缓缓加热至110℃沸腾，并保持微沸1小时，停止加热，放置至烧瓶温度接近室温，将其中药液过滤倒出。
合并两次煎煮药液，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(70℃)的稠膏，减压干燥至干浸膏，即得该复方全方部位约30g。
实施例4 一种中药复方乙酸乙酯部位的制备方法，步骤如下：
取甘草80g，麻黄120g，苦杏仁200g，半夏200g，生石膏400g，细茶200g，五味子120g，组成全方共1320g，粉碎后置于20000mL圆底烧瓶中，加药材质量10倍量纯净水，振摇混合后，浸泡30min，连接回流冷凝管。置电热套中缓缓加热至110℃沸腾，并保持微沸2小时，停止加热，放置至烧瓶温度接近室温，将其中药液过滤倒出。
再向烧瓶中加入8倍量纯净水，振摇混合后，浸泡30min，连接回流冷凝管。置电热套中缓缓加热至110℃沸腾，并保持微沸1小时，停止加热，放置至烧瓶温度接近室温，将其中药液过滤倒出。
合并两次煎煮药液，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(70℃)的稠膏，将其转移至蒸发皿中，减压干燥成干浸膏，即得该复方全方部位约75g。
Claims (3)
1.一种抗呼吸道病毒的中药组合物，其特征在于由中药复方的挥发油部位和乙酸乙酯部位组成，所述中药复方为甘草4-40份，麻黄6-60份，苦杏仁10-100份，半夏10-100份，生石膏20-200份，细茶10-100份，五味子6-60份，所述呼吸道病毒为合胞病毒、甲型流感病毒或乙型流感病毒。
2.权利要求1所述抗呼吸道病毒的中药组合物的制备方法，其特征在于中药复方的挥发油部位的制备步骤为：
a.按重量，取甘草4-40份，麻黄6-60份，苦杏仁10-100份，半夏10-100份，生石膏20-200份，细茶10-100份，五味子6-60份，粉碎后加药材质量10倍量纯净水，振摇混合后，浸泡30～40min，连接回流冷凝管；
b.自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，加热至沸腾，并保持110℃微沸8～10小时，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻30～40min，开启测定器下端活塞，将水放出，静置1小时，经无水硫酸钠干燥后得挥发油为红黄色透明油状液体，具有特殊浓郁香味；
中药复方的乙酸乙酯部位的制备步骤为：
a.按重量，取甘草4-40份，麻黄6-60份，苦杏仁10-100份，半夏10-100份，生石膏20-200份，细茶10-100份，五味子6-60份，粉碎后加药材质量10倍量纯净水，振摇混合后，浸泡30～40min，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持110℃微沸2小时，停止加热，冷却至室温，将其中药液过滤倒出，得滤液A，滤渣再加入8倍质量纯净水，振摇混合后，浸泡30min，连接回流冷凝管，加热至110℃沸腾，并保持1小时，停止加热，冷却至室温，将其中药液过滤倒出，得滤液B；
b.合并A、B药液，减压浓缩至70℃时相对4℃的水密度为1.10～1.15的清膏，冷却至室温，加入乙醇使含醇量达70～80wt％，搅匀，静置不少于12h，滤过沉淀，上清液回收乙醇至70℃时相对4℃的水密度为1.20～1.25的清膏，使用环己烷、乙酸乙酯、正丁醇依次对其进行萃取，并减压回收其中有机溶剂，得到该复方乙酸乙酯部位。
3.如权利要求1所述的中药复方的挥发油部位、乙酸乙酯部位组合物在制备防治合胞病毒、甲型流感病毒或乙型流感病毒感染药物中的应用。
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