CN101641338A - 作为抗增殖制剂的多功能小分子 - Google Patents

作为抗增殖制剂的多功能小分子 Download PDF

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蔡雄
钱长庚
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Abstract

本发明涉及使用单个的小分子对一些细胞靶向或者分子靶向进行选择性抑制的新途径的组合物、方法以及应用。更具体的，本发明涉及多功能小分子，其功能之一在于能够抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)，并且它的其他功能在于能够抑制在异常细胞增殖、分化或者存活中所涉及到的不同的细胞途径或者分子途径。

Description

作为抗增殖制剂的多功能小分子
相关申请
本申请要求享有申请日为2006年9月11日的美国临时申请No.60/843590以及申请日为2007年3月20日的美国临时申请No.60/895889的权益。上述申请的全部内容在此引入作为参考。
背景技术
对于涉及有多种致病途径以及众多分子组分的许多疾病的复杂特性以及多因子特性的阐述表明，多靶向的治疗可能比单靶向的治疗更有利。近来，使用两种或者更多制剂对于肿瘤学领域、传染病、心血管病以及其他复杂病理学领域的许多这类疾病进行的组合治疗，证明了相较于单独组分的使用而言，这种组合途径在克服药物抗性、降低毒性方面具有优势，并且在某些情况下产生协同治疗效应。
利用这样的组合途径已经对某些癌症进行了有效的治疗；然而，利用细胞毒素性药物的鸡尾酒疗法的治疗方案通常受到剂量限制性毒性(DLT)以及药物-药物间的相互作用的限制。分子靶向药物的新近发展为癌症的组合治疗提供了新的途径，其允许同时使用多个靶向制剂，或者将这些新疗法与标准化的化学疗法或者放射疗法相结合，在不达到剂量限制性毒性的情况下改善结果。然而，当前利用这种组合的能力受到药物的限制，仅限于那些表现出相容性的药理学和药效学性质的药物。除此之外，与相应的单一制剂试验相比，用以证明组合疗法的安全性以及有效性的常规需求更加昂贵并且漫长。一旦被证实，组合策略还可能关系到患者成本的增加，并且由于需要更加复杂的剂量范例而导致患者顺从度的降低。
在以蛋白质和多肽为基础的治疗学领域，制备共轭蛋白质或者融合蛋白质已经成为普遍现象，所述的共轭蛋白或者融合蛋白含有两种不同蛋白质/多肽的大部分氨基酸序列或者全部的氨基酸序列，并且保留了两种单独的蛋白质/多肽各自的结合活性。这种方式是由下列原因促成的：组分蛋白质结构域能够独立折叠，并且大分子的共轭物允许其组分以本质上独立的形式与其细胞靶向相互结合。然而，这种方式在小分子治疗法中并不是通常切实可行的，在小分子疗法中，即使二级结构的改变也可能导致产物分子在靶向结合性和/或药物动力学/药效学性质上发生重要改变。
组蛋白的乙酰基化是一种可逆的调节，在被称为组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)的一大类酶的催化下发生脱乙酰基化。组蛋白脱乙酰基酶被分为四个截然不同的类(参见J Mol Biol《分子生物学杂志》，2004年，338：1，17-31)。在哺乳动物中，I类组蛋白脱乙酰基酶(HDAC 1-3，以及HDAC8)与酵母PRD3HDAC相关，II类(HDAC 4-7，HDAC9以及HDAC10)与酵母HDA1相关，IV类(HDAC11)，以及III类(包括抗衰老酶在内的一个截然不同的种类，与酵母Sir2相关)。
Csordas于1990年在Biochem.J.(《生物化学杂志》)286：23-38中发表的文章教导，组蛋白受支配于(subject to)N-末端赖氨酸残基的ε-氨基的转译后乙酰化作用，这个反应是由组蛋白乙酰基转移酶(HAT1)催化的。乙酰化作用中和了所述赖氨酸侧链的正电荷，并且被认为影响了染色质的结构。事实上，组蛋白高乙酰化作用增强了转录因子与染色质模板的接触，并且在所述染色体组的转录沉默区域内发现了未脱乙酰基化组蛋白H4的富集(参见Tanuton等人于1996年在Science《科学》272：408-411中发表的文章)。在肿瘤抑制基因中，由于组蛋白修饰而导致的转录沉默可能导致瘤原性转化以及癌症。
当前，临床调查者对几类组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂进行了评价。首先被FDA(食品及药品管理局)认证的组蛋白脱乙酰基酶抑制剂是辛二酰基苯胺异羟肟酸(SAHA，Zolinza
Figure G2007800418082D00031
)，用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)。其他的组蛋白脱乙酰基酶抑制剂包括氧肟酸，环肽，苯甲酰胺，以及短链脂肪酸。氧肟酸衍生物PXD101以及LAQ824当前正处于临床研究之中。在苯甲酰胺类组蛋白脱乙酰基酶抑制剂中，MS-275，MGCD0103以及CI-99已经通过了临床试验。Mourne等人(摘要#4725，AACR2005)证明了硫苯基修饰的苯甲酰胺显著的增强了对抗HDAC1的组蛋白脱乙酰基酶抑制剂活性。
将组蛋白脱乙酰基酶抑制剂与各种分子靶向疗法以及标准化的化学疗法和放射疗法进行结合使用，表现出产生了协同效应。与辛二酰基苯胺异羟肟酸(SAHA)的共同治疗显著增加了由表皮生长因子受体2(EGFR2)抗体曲妥珠单抗诱导的BT-474以及SKBR-3细胞的凋亡，并且诱导产生抗乳腺癌细胞的协同细胞毒性效应(参见Bali于2005年在Clin.Cancer.Res.《癌症临床研究》11，3392中发表的文章)。组蛋白脱乙酰基酶抑制剂，例如辛二酰基苯胺异羟肟酸，已经被证明当其与吉非替尼(gefitinib)联合用于头部以及颈部肿瘤细胞系时，会产生协同的抗增殖效应以及凋亡效应，所述的肿瘤细胞系包括对吉非替尼单一治疗具有抗性的细胞系(参见Bruzzese等人于2004年在Proc.AACR中的文章)。使用组蛋白脱乙酰基酶抑制剂MS-275对吉非替尼抗性细胞系进行预处理，会产生与吉非替尼敏感性非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系中相类似的吉非替尼生长抑制性以及凋亡效应，包括那些隐藏有EGFR(表皮生长因子受体)突变的细胞系(参见Witta S.E.等人于2006年在Cancer Res《癌症研究》66：2，944-50中发表的文章)。已经证明，组蛋白脱乙酰基酶抑制剂PXD101与表皮生长因子受体1抑制剂它赛瓦(Tarceva)(埃罗替尼)协同性的抑制扩增(WO2006082428A2)。
类似的，已经表明组蛋白脱乙酰基酶活性的抑制与血管生成的抑制性是具有协同性的(参见Kim，MS等人于2001年在NatMed，7：4，437-43中发表的文章；Deroanne，CF等人于2002年在Oncogene《致癌基因》21：3，427-36中发表的文章)。事实上，在PC3异种移植物中观察到的组蛋白脱乙酰基酶抑制剂FK228的抗肿瘤活性是由血管生成因子的抑制所决定的，所述的血管生成因子是例如血管内皮生长因子(VEGF)以及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)(参见Sasakawa等人于2003年在Biochem.Pharmacol《生化药物学》66，897中发表的文章)。当与血管内皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂PTK787/ZK222584组合使用时，所述组蛋白脱乙酰基酶抑制剂NVP-LAQ824已经表现出抑制血管的生成并且具有更强的抗肿瘤效应(参见Qian等人于2004年在Cancer Res.《癌症研究》64，66260中发表的文章)。上述抗肿瘤活性的增强与内皮细胞中的血管生成因子-2，Tie-2，以及凋亡抑制基因(survivin)的去调节有关，与肿瘤细胞中的低氧诱导因子-1的去调节以及血管内皮生长因子的表达有关。类似的，已经表明组蛋白脱乙酰基酶抑制剂LBH589以内皮细胞为靶向，从而导致血管生成应答的降低(参见Qian等人于2006年在Clin Cancer Res《癌症临床研究》12：2，634-42中发表的文章)。
已经证明，在格列瓦敏感性以及格列瓦抗性(Bcr/Abl+)人类骨髓白血病细胞中，组蛋白脱乙酰基酶抑制剂都能够促进格列瓦(甲磺酸伊马替尼)介导的细胞凋亡，参见Yu等人于2003年在Cancer Res《癌症研究》63：9，2118-26中发表的文章；Nimmanapalli等人于2003年在Cancer Res《癌症研究》63：16，5126-35中发表的文章。类似的，证明了在NVP-LAQ824与甲磺酸伊马替尼之间产生了强烈的协同效应，抵抗BCR/ABL表达性骨髓白血病细胞系K562。当单独使用时，这些化合物表现出最低程度的毒性，一旦组合使用，将产生显著增加的线粒体损害(例如，细胞色素C，Smac/DIABLO(第二个线粒体来源的胱氨酸酶激活剂)，以及细胞凋亡诱导因子的释放)，凋亡蛋白酶的活性，以及细胞凋亡(参见Weisberg等人于2004年在Leukemia《白血病》18，1951中发表的文章)。
除此之外，已经证明当与标准化的化学疗法组合使用时，组蛋白脱乙酰基酶抑制剂能够协同性的阻断细胞增殖，所述的化学疗法包括氟尿嘧啶(5-FU)，托泊替康(Topotecan)，吉西他滨(Gemcitabine)，顺铂(Cisplatin)，多柔比星(Doxorubicin)，艾素(Docetaxle)，它莫西芬(Tomoxifen)，5-阿扎胞苷(5-Azacytidine)，力比泰(Alimta)，以及伊立替康(Irinotecan)(WO2006082428A2)。组蛋白脱乙酰基酶抑制剂MS-275与核苷类似物氟达拉滨(fludarabine)的组合显著的增强了白血病细胞中的线粒体损伤，凋亡蛋白酶活性以及细胞凋亡(参见Maggio，SC等人于2004年在Cancer Res《癌症研究》64：7，2590-600中发表的文章)。组蛋白脱乙酰基酶抑制剂辛二酰基苯胺异羟肟酸以及拓扑异构酶II抑制剂(例如，表阿霉素，多柔比星，胺苯吖啶，鬼臼噻吩甙，以及替尼泊苷)的添加同样被证实了在增加细胞死亡方面具有协同效应(参见Marchion，DC于2004年在JCell Biochem《生物化学细胞杂志》92：2，223-37中发表的文章)。类似的，当与放射疗法组合使用时(参见Paoluzzi，L于2004年在Cancer Biol Ther《癌症的生物学疗法》3：7，612-3中发表的文章；Entin-Meer，M于2005年在Mol Cancer Ther《癌症的分子学疗法》4：12，1952-61中发表的文章；Cerna，D于2006年在Curr Top Dev Biol《当代前沿生物学进展》73，173-204中发表的文章)，组蛋白脱乙酰基酶抑制剂表现出的协同性进一步的说明了组蛋白脱乙酰基酶与其他癌症疗法之间潜在的协同性。
进一步的，已经表明组蛋白脱乙酰基酶抑制剂与有丝分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)活化激酶(MEK)、细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)、蛋白酶体、人热休克蛋白90(HSP90)、以及TRAIL抑制剂具有协同性(参见MolPharmacol《分子药物学》，2006年，69(1)，288-98；BiochemBiophys Res Commun，2006年，27，339(4)，1171-7；Mol Pharmacol《分子药物学》，2005年，67(4)：1166-76；Blood《血液学》，2005年，105(4)，1768-76；Cancer Res《癌症研究》2006年，66(7)，3773-81；Acta Haematol，2006年，115(1-2)，78-90；Clin Cancer Res《癌症临床研究》，2004年，10(11)，3839-52；Oncogene《致癌基因》，2005年24(29)，4609-23；Mol Cancer Ther《癌症的分子学疗法》2003年，2(12)，1273-84；BiochemPharmacol《生化药物学》，2003年，66(8)，1537-45；以及MolCancer Ther《癌症的分子学疗法》2005年，4(11)，1772-85)。
上述类型的当前治疗方案试图通过施用多种制剂来解决药物抗性的问题。然而，由于脱靶副作用以及药物-药物间相互作用而产生的多种制剂的联合毒性通常限制了这种方式的有效性。而且，通常情况下很难将具有不同药物动力学的化合物组合形成一个单一的剂量形式，随之而来的需求是要在不同的时间间隔进行多种药物治疗，由此产生患者顺从度的问题，将对药物组合物的功效产生破坏。除此之外，用于进行组合治疗的卫生保健成本可能高于单一的分子治疗。此外，与单一制剂相比，由于证明两种制剂的组合所产生的活性/安全性的负担较重，因此获得组合治疗的管理标准可能更加困难(参见Dancey J&Chen H于2006年在Nat.Rev.Drug Dis 5：649中发表的文章)。研究一种新型的制剂，其通过合理的设计而非依靠交叉反应来选择多个治疗靶向，这将帮助改善患者的使用效果，同时避免了上述限制。因此，仍然需要付出巨大的努力来研发选择性抗肿瘤药物，以及已知抗肿瘤药物的新组合和更加有效的组合。
发明内容
然而，本发明人惊讶的发现，可以设计出单一的化合物，通过组合至少两个药效团来制备，所述化合物在多个治疗靶位上存在活性，并且能够有效的治疗疾病。此外，在某些情况下我们更加惊奇的发现，与含有不同活性的单独分子的组合所产生的活性相比，所述化合物具有增强的活性。换句话说，与单独的药效团相比，将所述药效团组合成的单个分子可以提供协同效应。更具体的，已经发现可能制备这样一类化合物，其同时含有所述分子的一部分，能够结合锌离子，并且因此容许抑制组蛋白脱乙酰基酶和/或基质金属蛋白酶(MMP)活性，并且含有所述分子的至少另一部分，容许结合到另外的不同靶位，从而提供治疗效应。
本发明涉及使用单个的小分子对几个细胞靶向进行选择性抑制的新途径的组合物、方法以及应用。更具体的，本发明涉及多功能小分子，所述多功能小分子中的一个药效团的功能在于能够结合锌离子，因而抑制锌依赖酶(例如，组蛋白脱乙酰基酶(HDAC))，基质金属蛋白酶(MMP)共价结合于第二个药效团，所述药效团具有一种或者一种以上能够抑制细胞异常增殖、分化或者存活中所涉及到的不同的细胞途径或者分子途径或者生物功能的功能。所述的细胞异常增殖、分化或者存活可以在例如癌症、癌前生长或者损伤、增生、以及发育异常之类的疾病当中观察到。
在一个优选的实施方式中，结合锌的药效团抑制组蛋白脱乙酰基酶，并且与第二个药效团连接，所述药效团诱导细胞凋亡，抑制血管新生，和/或抑制异常增殖。
在一个实施方式中，所述的多功能小分子具有小于1000克/摩的分子量，并且优选小于600克/摩，最优选小于550克/摩。
在一个实施方式中，所述第二个药效团选自，但不局限于，具有下述功能的化学化合物：抑制酪氨酸激酶活性，抑制丝氨酸/苏氨酸激酶活性，抑制DNA甲基转移酶(DNMT)活性，抑制蛋白酶体活性，以及抑制热休克蛋白质(HSP)活性，抑制血管内皮生长因子受体(VEGFR)活性，抑制血小板衍生生长因子受体(PDGFR)活性，抑制成纤维生长因子受体(FGFR)活性，抑制有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK/MEK)活性，抑制细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)活性，以及抑制磷脂酰肌醇4，5-二磷酸-AKT-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白途径[P13K-AKT(RAF，mTOR)]活性，抑制基质金属蛋白酶活性，抑制法尼基转移酶活性，以及抑制细胞凋亡。
在一个最优选的实施方式中，所述第二个药效团选自，但不局限于，具有下述功能的化学化合物：抑制DNA甲基转移酶(DNMT)活性，抑制表皮生长因子受体(EGFR)活性，抑制ErbB2活性，抑制ErbB3活性，抑制ErbB4活性，抑制人表皮生长因子受体(HER-2)活性，抑制血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1)活性，抑制血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)活性，抑制血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)活性，抑制Flt-3活性，抑制c-kit活性，抑制Abl活性，抑制JAK活性，抑制α型血小板衍生生长因子受体(PDGFR-α)活性，抑制β型血小板衍生生长因子受体(PDGFR-β)活性，抑制胰岛素样生长因子I受体(IGF-IR)活性，抑制c-Met活性，抑制成纤维生长因子受体1(FGFR1)活性，抑制成纤维生长因子受体3(FGFR3)活性，抑制成纤维生长因子受体4(FGFR4)活性，抑制c-Ret活性，抑制Src活性，抑制Lyn活性，抑制Yes活性，抑制PKC活性，抑制细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)活性，抑制细胞外信号调节蛋白激酶(Erk)活性，抑制Merk活性，抑制PI3K-Akt活性，抑制哺乳动物雷帕霉素标靶(mTOR)活性，抑制Raf活性，抑制细胞周期检测点激酶(CHK)活性，抑制极光(Aurora)活性，抑制热休克蛋白质90(HSP90)活性，抑制TRAILR活性，抑制凋亡蛋白酶活性，抑制免疫抑制酸性蛋白(IAP)活性，抑制B细胞白血病-2(Bcl-2)活性，抑制凋亡抑制基因活性，抑制麦迪霉素2(MDM2)活性，抑制麦迪霉素4(MDM4)活性。
本发明的另一个方面利用本发明所述一种或者一种以上化合物对癌症进行治疗、预防或者复发(recurrence)。
在一个实施方式中，本发明所述一种或者一种以上化合物可以与另外的疗法进行组合，所述疗法包括，但不局限于，抗肿瘤制剂，免疫治疗剂，抗体，佐剂，仪器，放射疗法，细胞保护剂，疫苗，和/或脱甲基化制剂。
附图说明
前述内容所述的以及本发明其他的目的、特征以及优点将在接下来对本发明优选实施方式的更加详细的描述中显现出来，如附图中所述，相似的对照特征代表的是不同观点中的相同部分。所述附图并不必须进行衡量、强调，相反，其意在说明本发明的原理。
附图1：(a)描述的是表皮生长因子受体酶检测结果的曲线图，(b)描述的是组蛋白脱乙酰基酶酶检测结果的曲线图。
附图2描述的是MDA-MB-468乳腺癌细胞系中组蛋白脱乙酰基酶以及表皮生长因子受体的抑制：(a)Ac-H4积累；(b)Ac-H3积累；(c)表皮生长因子受体抑制。
附图3表示的是几个不同的肿瘤细胞系的抗增殖活性对比数据：(a)胰腺癌(BxPC3)，(b)非小细胞肺癌(H1703)，(c)乳腺癌(MDA-MB-468)，(d)前列腺癌(PC3)。
附图4描述的是化合物12在肿瘤细胞中诱导细胞凋亡的能力：(a)HCT-116(直肠，24小时)，(b)SKBr3(乳腺，24小时)。
附图5表示的是化合物12在A431表皮肿瘤异种移植物模型中的功效(腹膜内给药剂量)。
附图6表示的是化合物12在H358非小细胞肺癌异种移植物模型中的功效(2分钟静脉内输注)。
附图7表示的是化合物12在H292非小细胞肺癌异种移植物模型中的功效(2分钟静脉内输注)。
附图8表示的是化合物12在BxPC3胰腺癌异种移植物模型中的功效(2分钟静脉内输注)。
附图9表示的是化合物12在PC3前列腺癌异种移植物模型中的功效(2分钟静脉内输注)。
附图10表示的是化合物12在HCT116直肠癌异种移植物模型中的功效(2分钟静脉内输注)。
附图11A表示的是在A549非小细胞肺癌异种移植物模型中，使用化合物12或者溶媒治疗导致的动物的肿瘤尺寸变化的比率。
附图11B表示的是在A549非小细胞肺癌异种移植物模型中，使用埃罗替尼以及对照治疗导致的动物的肿瘤尺寸变化的比率。
附图12A表示的是在HPAC胰腺癌细胞中，使用化合物12、埃罗替尼或者溶媒治疗导致的动物的肿瘤尺寸变化的比率。
附图12B表示的是在HPAC胰腺癌细胞中，使用化合物12、埃罗替尼或者溶媒治疗导致的动物体重变化的比率。
附图13表示的是在施用化合物12的盐酸盐、柠檬酸盐、钠盐以及酒石酸盐之后，化合物12在血浆、肺以及直肠中的浓度。
附图14表示的是将化合物12溶于30％的CAPTISOL(多阴离子β环糊精)中进行施用，化合物12在小鼠血浆中的浓度。
附图15表示的是将化合物12以静脉内给药剂量溶于30％的CAPTISOL(多阴离子β环糊精)(多阴离子β环糊精)中进行施用之后(25毫克/千克，50毫克/千克，100毫克/千克，200毫克/千克以及400毫克/千克)，小鼠体重变化的比率。
附图16表示的是将化合物12以腹膜内给药剂量溶于30％的CAPTISOL中重复施用7天之后(25毫克/千克，50毫克/千克，100毫克/千克，200毫克/千克以及400毫克/千克)，小鼠体重变化的比率。
附图17表示的是将化合物12以静脉内给药剂量溶于30％的CAPTISOL(多阴离子β环糊精)中进行施用之后(25毫克/千克，50毫克/千克，100毫克/千克以及200毫克/千克)，大鼠体重变化的比率。
具体实施方式
本发明提供一类新的制剂，能够抑制多种生物学活性。本发明所述制剂被设计为具有两种或者更多种活性或者功能，其中所述化合物包括一个与锌离子结合的药效团，抑制例如组蛋白脱乙酰基酶以及基质金属蛋白酶之类的锌依赖酶，而第二个药效团与结合锌的半族共价结合，其抑制一种或者一种以上不同的信号途径或者生物学功能。在一个实施方式中，所述第一个药效团与锌离子结合并且抑制组蛋白脱乙酰基酶。在具体的实施方式中，所述化合物具有控制细胞的异常增殖、分化和/或存活的活性。有利的，这类新制剂具有肿瘤选择性以及抗肿瘤特性。
大部分已知的组蛋白脱乙酰基酶具有相似的基本结构特征，例如锌螯合剂，脂肪族连接体以及疏水芳香区域。各种已知的组蛋白脱乙酰基酶抑制剂的晶体结构已经被解答。参见Proc NatlAcad Sci USA 101：42，15064-9(2004年)；Nature《自然》401：6749，188-93(1999年)。根据针对从这些晶体结构中表现出来的结合进行的分析，本发明人研究出了组蛋白脱乙酰基酶抑制剂的药效团模型，并且所述药效团可以与各种小分子进行加成，从而生成具有双重或者多种不同活性的化合物。假定组蛋白脱乙酰基酶抑制剂具有广泛的抗肿瘤活性，并且它们具有与其他目标制剂产生协同作用的能力，那么这种多药效团模型应当广泛的被应用于小分子的研究中，用于进行癌症的治疗。
这种新的多功能制剂的通式结构如下式的式(I)所示：
A-B-C
(I)
或者是其几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物或者溶剂化物，其中A是制剂的一个药效团，抑制异常细胞增殖、分化或者存活。在本发明的一个优选的方面，A是一种抗癌症制剂，B是连接体而C是锌结合半族。
在一个优选的实施方式中，所述的锌结合药效团抑制组蛋白脱乙酰基酶，并且与另一个药效团相连接，所述另一个药效团能够诱导细胞凋亡，抑制血管新生，和/或抑制异常增殖。在一个实施方式中，所述多功能小分子具有小于1000克/摩的分子量，并且优选小于600克/摩，最优选小于550克/摩。
在本发明的一个实施方式中，本发明所述化合物的药效团可以选自商业上使用的或者用于临床评价或临床前评价的大量抗肿瘤制剂。这些制剂可以影响一种或者一种以上蛋白激酶，这些蛋白激酶中有很多已经被证实属于首要致癌基因。这些激酶可能通过过表达或者变异方式自身成为致癌基因。因此，通过抑制这些蛋白的蛋白激酶活性，可以阻断疾病的发展。
在一个实施方式中，所述第二个药效团抑制DNA甲基转移酶(DNMT)。异常的DNA甲基化形式与表观遗传突变或者表型突变具有密切的联系，表观遗传突变与表型突变可能产生相同的结果：基因突变。例如，许多肿瘤表现出高甲基化以及肿瘤抑制基因的伴发性沉默。几种发育性疾病还与异常DNA甲基化相关。因此，DNA甲基化作用的改变对于发育性以及增殖性疾病而言具有很重要的作用，特别是在肿瘤形成过程中。对于DNA甲基化作用的抑制，特别是对于DNA甲基转移酶的抑制，更特别的是对于DNA甲基转移酶1的抑制，被认为是用于治疗增殖性疾病的有希望的方法。阿扎胞苷已经被证实可以用于对具有骨髓增生异常综合症(MDS)亚型低患病危险以及高患病危险的患者进行治疗，而地西他滨(decitabine)当前正处于FDA(食品与药品管理局)的审核之中(Christine 2006；Lewis等人2005)。已经被广泛接受的是，组蛋白修饰与DNA甲基化之间具有复杂的相互关联，它们共同决定了基因表达的情况并且决定了细胞的命运(参见Yoo&Jones于2006年在Nat.Rev.Drugs Dis，5，37-发表的文章)。Cameron等人公开了脱甲基作用与组蛋白脱乙酰基酶抑制性对于癌症中沉默的基因的重新表达所产生的协同性(Nat.Genet.1999年，21，103-)。组蛋白脱乙酰基酶抑制剂曲古抑菌素(TSA)与DNA甲基转移酶抑制剂2’-去氧-5-氮胞苷协同性的对DNA甲基化沉默基因(REF)进行了重新活化。组蛋白脱乙酰基酶抑制剂降低了DNA甲基转移酶-3B信使RNA的稳定性，并且对人类子宫内膜细胞中的重新合成(de novo)DNA甲基转移酶活性进行去调节(参见Xiong等人于2005年在CancerRes.《癌症研究》65，2684中发表的文章)。上述DNA甲基转移酶抑制剂(2’-去氧-5-氮胞苷)与组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(曲古抑菌素A)的组合在人类ER-阴性乳腺癌细胞系中诱导了300-400倍增加的ER mRNA表达(单独使用2’-去氧-5-氮胞苷增加30-40倍&单独使用曲古抑菌素A增加5倍)(参见Yang等人于2001年在Cancer Res《癌症研究》61，7025中发表的文章)。
在一个实施方式中，所述第二个药效团抑制有丝分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)活化激酶(MEK)。MEK抑制剂抑制大量的人类肿瘤细胞，并且显著加强组蛋白脱乙酰基酶抑制剂诱导细胞凋亡细胞死亡的功效(参见Ozaki等人于2006年于BBRC，339，1171发表的文章)。组蛋白脱乙酰基酶抑制剂戊丙酸(VPA)抑制血管生成并且增加细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)的磷酸化作用。PD98059，一种有丝分裂原活化蛋白激酶抑制剂，防止所述戊丙酸诱导的细胞外信号调节蛋白激酶磷酸化作用。戊丙酸(VPA)与PD98059的组合协同性的抑制了体外以及体内的血管新生(参见Michaelis等人于2006年在Cell Death Differ.《细胞死亡分化》13，446中发表的文章)。组蛋白脱乙酰基酶抑制剂辛二酰基苯胺异羟肟酸(SAHA)以及有丝分裂原活化蛋白激酶抑制剂PD 184352(或者U0126)的共同施用在K562以及LAMA 84细胞中产生了协同性加强的线粒体损害、凋亡蛋白酶活性、以及细胞凋亡(参见Yu等人于2005年在Leukemia《白血病》19中发表的文章)。
在一个实施方式中，所述第二个药效团抑制细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)。许多遗传事件以及表观事件引发人类肿瘤细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶的细胞周期过度活跃，对于它们的抑制能够同时导致细胞周期停止以及细胞凋亡(参见Shapiro于2006年在J Clin Oncol，24，1770中发表的文章)。利用组蛋白脱乙酰基酶抑制剂LAQ824以及细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂roscovitine对人类白血病细胞进行组合治疗，中断了细胞成熟反应并且协同性的诱导细胞凋亡，进一步的支持了将新的组蛋白脱乙酰基酶抑制剂以及细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂进行组合这种抗白血病的策略(参见Rosato等人于2005年在Mol.Cancer Ther.《癌症的分子学治疗》4，1772中发表的文章)。细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂弗拉平度(flavopiridol)与组蛋白脱乙酰基酶抑制剂辛二酰基苯胺异羟肟酸以及丁酸盐的共同施用协同性的加强了野生型细胞以及B细胞白血病-2(Bcl-2)或者B细胞白血病-x(L)(Bcl-x(L))过表达细胞(U937以及HL-60)中的线粒体损害、凋亡蛋白酶活性、多聚(ADP-核糖)聚合酶降解、以及细胞死亡，并且诱导克隆形成能力产生了显著的损失。组合使用细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂以及组蛋白脱乙酰基酶抑制剂的策略对于过表达Bcl-2或者Bcl-x(L)的药物抗性白血病细胞可能是有效的(参见Dasmahapatra等人于2006年在Mol.Pharmacol.《分子药物学》69，288中发表的文章)。
在一个实施方式中，所述第二个药效团抑制蛋白体。对于蛋白体的抑制，能够破坏细胞内蛋白质的自我平衡，从而导致细胞凋亡，这一现象可以在恶性细胞中被优先观察到。保特佐米(Bortezomib)(Velcade
Figure G2007800418082D00161
)，已经被证实可作为抗肿瘤制剂的第一代蛋白体抑制剂，能够激活多种骨髓瘤细胞发生组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(丁酸以及异羟肟酸)诱导的线粒体功能紊乱、凋亡蛋白酶9、凋亡蛋白酶8以及凋亡蛋白酶3的活性、以及多聚聚合酶的降解(参见Pei等人于2004年在Clin.Cancer.Res《癌症的临床研究》10，3839中发表的文章)。在骨髓白血病细胞系HL-60以及K562中，所述蛋白体抑制剂保特佐米显著的加强了组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(缩酚酸肽)诱导的细胞凋亡以及Bax的线粒体迁移(参见Sutheesophon等人于2006年在Acta Haematol.115，78中发表的文章)。
在一个实施方式中，所述第二个药效团促进了癌细胞的细胞凋亡。当前已经探索出的用于癌症药物研究中的细胞凋亡靶向包括，肿瘤坏死因子(TNF)相关凋亡诱导配位(TRAIL)受体，B细胞白血病-2(BCL-2)家族抗凋亡蛋白，细胞凋亡抑制蛋白(IAP)以及麦迪霉素2(MDM2)。上述组蛋白脱乙酰基酶抑制剂，Suberic bishydroxamate(SBHA)，激活黑素瘤发生TRAIL-诱导的细胞凋亡(参见Zhang等人于2003年在Biochem.Pharmacol.《生化药物学》66，1537中发表的文章)。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配位体(TRAIL)与组蛋白脱乙酰基酶抑制剂的共同施用能够协同性的诱导细胞凋亡，并且导致人类骨髓白血病细胞中线粒体损伤以及凋亡蛋白酶级联反应活性的显著增加(参见Rosato等人于2003年在Mol.Pharmacol《分子药物学》2，1273中发表的文章)。组蛋白脱乙酰基酶抑制剂通过多种机理加强了白血病细胞中TRAIL诱导细胞凋亡的能力(参见Shankar等人于2005年在Int.J.Mol.Med.16，1125中发表的文章)。
在一个实施方式中，A是选自抗肿瘤化合物的药效团，所述抗肿瘤化合物例如但不局限于：
1.酪氨酸激酶
1-1ErbB家族(表皮生长因子受体EGFR，ErbB2，ErbB3，ErbB4)
Figure G2007800418082D00171
Figure G2007800418082D00181
1-2裂解激酶家族
血管内皮生长因子受体家族-VEGFR-1，VEGFR-2，Flt-3，c-Kit，Abl，JAK
血小板衍生生长因子受体家族-PDGFR-a，PDGFR-b，IGF-IR，c-Met
成纤维细胞生长因子家族-FGFR1，FGFR3，FGFR4，c-Ret
Figure G2007800418082D00191
Figure G2007800418082D00201
1-3组合的ErbB激酶以及裂解激酶家族(表皮生长因子受体与血管内皮生长因子受体)
Figure G2007800418082D00221
1-4Scr家族激酶：Src，Lyn，Yes
Figure G2007800418082D00222
2.丝氨酸/苏氨酸激酶：PKC，CDK，Erk，Mek，PI3K-Akt，mTOR，Raf，CHK，极光激酶
Figure G2007800418082D00231
Figure G2007800418082D00251
3.DNA甲基转移酶(DNMT)
Figure G2007800418082D00252
4.蛋白体
Figure G2007800418082D00253
Figure G2007800418082D00261
Figure G2007800418082D00262
.基质金属蛋白酶
Figure G2007800418082D00263
6.法尼基转移酶
7.热休克蛋白(HSP)，特别是HSP90
8.细胞凋亡制剂：TRAILR，凋亡蛋白酶(caspases)，IAP，B细胞白血病-2(Bcl-2)，凋亡抑制基因(Survivin)，MDM2，MDM4
Figure G2007800418082D00272
Figure G2007800418082D00281
在一个优选的实施方式中，A是选自抗肿瘤化合物的药效团，所述抗肿瘤化合物具有至少一个含有杂环或者异芳基环的氮。
在一个优选的实施方式中，C是锌结合半族，选自：
(a)
Figure G2007800418082D00291
；其中W是O或者S；Y是缺失，N或者CH；Z是N或者CH；R7以及R9各自独立的表示氢，OR’，脂肪族或者取代的脂肪族，其中R’是氢，酰基，脂肪族或者取代的脂肪族；假定如果R7与R9同时存在，则R7与R9中的一个必须是OR’，而如果Y是缺失，R9必须是OR；并且R8是氢，酰基，脂肪族，取代的脂肪族；
(b)
Figure G2007800418082D00292
；其中W是O或者S；J是O，NH，或者NCH3；并且R10是氢或者低级烷基；
(c)
Figure G2007800418082D00293
；其中W是O或者S；Y1以及Z1各自独立的表示N，C或者CH；并且
(d)
Figure G2007800418082D00294
；其中Z、Y以及W如前述所定义；R11以及R12各自独立的表示氢或者脂肪族；R1、R2以及R3各自独立的选自氢，羟基，氨基，卤素，烷氧基，取代的烷氧基，烷氨基，取代的烷氨基，二烷氨基，取代的二烷氨基，取代的或者未被取代的烷硫基，取代的或者未被取代的烷基磺酰基，CF3，CN，NO2，N3，磺酰基，酰基，脂肪族，取代的脂肪族，芳基，取代的芳基，异芳基，取代的异芳基，杂环以及取代的杂环。
在一个最优选的实施方式中，C选自：
(a)
Figure G2007800418082D00301
；其中R8选自氢或者低级烷基；并且
(b)
Figure G2007800418082D00302
；其中R1、R2以及R3各自独立的选自氢，羟基，CF3，NO2，N3，卤素，低级烷基，低级烷氧基，低级烷氨基，烷氧烷氧基(优选甲氧乙氧基)，烷氨基氧基(优选甲氨基乙氧基)，苯基，硫苯基，呋喃基，吡嗪基，取代的吡嗪基，以及吗啉基；并且R12选自氢或者低级烷基。
在一个优选的实施方式中，所述二价的B是一个直接的键，或者是直链或者支链的、取代或者未被取代的烷基，取代或者未被取代的烯基，取代或者未被取代的炔基，芳基烷基，芳基烯基，芳基炔基，异芳基烷基，异芳基烯基，异芳基炔基，杂环烷基，杂环烯基，杂环炔基，芳基，异芳基，杂环，环烷基，环烯基，烷基芳基烷基，烷基芳基烯基，烷基芳基炔基，烯基芳基烷基，烯基芳基烯基，烯基芳基炔基，炔基芳基烷基，炔基芳基烯基，炔基芳基炔基，烷基异芳基烷基，烷基异芳基烯基，烷基异芳基炔基，烯基异芳基烷基，烯基异芳基烯基，烯基异芳基炔基，炔基异芳基烷基，炔基异芳基烯基，炔基异芳基炔基，烷基杂环烷基，烷基杂环烯基，烷基杂环炔基，烯基杂环烷基，烯基杂环烯基，烯基杂环炔基，炔基杂环烷基，炔基杂环烯基，炔基杂环炔基，烷基芳基，烯基芳基，炔基芳基，烷基异芳基，烯基异芳基，或者炔基异芳基，其中一个或者多个亚甲基可以被O、S、S(O)、SO2、N(R8)、C(O)、取代的或者未被取代的芳基、取代的或者未被取代的异芳基、取代的或者未被取代的杂环中断或者终止；所述的二价B连接基团包括但不局限于烷基，烯基，炔基，烷基芳基，烯基芳基，炔基芳基，烷氧基芳基，烷氨基芳基，烷氧基烷基，烷氨基烷基，烷基杂环烷基，烷基异芳基烷基，烷氨基，N(R8)烯基，N(R8)炔基，N(R8)烷氧基烷基，N(R8)烷氨基烷基，N(R8)烷氨基羰基，N(R8)烷基芳基，N(R8)烯基芳基，N(R8)炔基芳基，N(R8)烷氧基芳基，N(R8)烷氨基芳基，N(R8)环烷基，N(R8)芳基，N(R8)异芳基，N(R8)杂环烷基，N(R8)烷基杂环烷基，烷氧基，O-烯基，O-炔基，O-烷氧基烷基，O-烷氨基烷基，O-烷氨基羰基，O-烷基芳基，O-烯基芳基，O-炔基芳基，O-烷氧基芳基，O-烷氨基芳基，O-环烷基，O-芳基，O-异芳基，O-杂环烷基，O-烷基杂环烷基，C(O)烷基，C(O)烯基，C(O)炔基，C(O)烷基芳基，C(O)烯基芳基，C(O)炔基芳基，C(O)烷氧基烷基，C(O)烷氨基烷基，C(O)烷氨基羰基，C(O)环烷基，C(O)芳基，C(O)异芳基，C(O)杂环烷基，CON(R8)，CON(R8)烷基，CON(R8)烯基，CON(R8)炔基，CON(R8)烷基芳基，CON(R8)烯基芳基，CON(R8)炔基芳基，CON(R8)烷氧基芳基，CON(R8)烷氨基烷基，CON(R8)烷氨基羰基，CON(R8)烷氧基芳基，CON(R8)烷氨基芳基，CON(R8)环烷基，CON(R8)芳基，CON(R8)异芳基，CON(R8)杂环烷基，CON(R8)烷基杂环烷基，N(R8)C(O)烷基，N(R8)C(O)烯基，N(R8)C(O)炔基，N(R8)C(O)烷基芳基，N(R8)C(O)烯基芳基，N(R8)C(O)炔基芳基，N(R8)C(O)烷氧基烷基，N(R8)C(O)烷氨基烷基，N(R8)C(O)烷氨基羰基，N(R8)C(O)烷氧基芳基，N(R8)C(O)烷氨基芳基，N(R8)C(O)环烷基，N(R8)C(O)芳基，N(R8)C(O)异芳基，N(R8)C(O)杂环烷基，N(R8)C(O)烷基杂环烷基，NHC(O)NH，NHC(O)NH-烷基，NHC(O)NH-烯基，NHC(O)NH-炔基，NHC(O)NH-烷基芳基，NHC(O)NH-烯基芳基，NHC(O)NH-炔基芳基，NHC(O)NH-烷氧基芳基，NHC(O)NH-烷氨基芳基，NHC(O)NH-环烷基，NHC(O)NH-芳基，NHC(O)NH-异芳基，NHC(O)NH-杂环烷基，NHC(O)NH-烷基杂环烷基，S-烷基，S-烯基，S-炔基，S-烷氧基烷基，S-烷氨基烷基，S-烷基芳基，S-烷氨基羰基，S-烯基芳基，S-炔基芳基，S-烷氧基芳基，S-烷氨基芳基，S-环烷基，S-芳基，S-异芳基，S-杂环烷基，S-烷基杂环烷基，S(O)烷基，S(O)烯基，S(O)炔基，S(O)烷氧基烷基，S(O)烷氨基烷基，S(O)烷氨基羰基，S(O)烷基芳基，S(O)烯基芳基，S(O)炔基芳基，S(O)烷氧基芳基，S(O)烷氨基芳基，S(O)环烷基，S(O)芳基，S(O)异芳基，S(O)杂环烷基，S(O)烷基杂环烷基，S(O)2烷基，S(O)2烯基，S(O)2炔基，S(O)2烷氧基烷基，S(O)2烷氨基烷基，S(O)2烷氨基羰基，S(O)2烷基芳基，S(O)2烯基芳基，S(O)2炔基芳基，S(O)2烷氧基芳基，S(O)2烷氨基芳基，S(O)2环烷基，S(O)2芳基，S(O)2异芳基，S(O)2杂环烷基，S(O)2烷基杂环烷基，SO2NH，SO2NH-烷基，SO2NH-烯基，SO2NH-炔基，SO2NH-烷基芳基，SO2NH-烯基芳基，SO2NH-炔基芳基，SO2NH-环烷基，SO2NH-芳基，SO2NH-异芳基，SO2NH-杂环烷基，SO2NH-烷基杂环烷基，烷基芳氧基烷氧基，烷基芳氧基烷氨基，烷基芳氨基烷氧基，烷基芳氨基烷氨基，烷基芳基烷氨基烷氧基，烷基芳基烷氨基烷氧基，烯基芳氧基烷氧基，烯基芳氧基烷氨基，烯基芳氨基烷氧基，烯基芳氨基烷氨基，烯基芳基烷氨基烷氧基，烯基芳基烷氨基烷氨基。可以理解，所述的烷基，烯基，炔基，芳基，异芳基，环烷基，杂环以及类似物可以被进一步的取代。
在一个更加优选的实施方式中，B是直链烷基，烯基，炔基，芳基烷基，芳基烯基，芳基炔基，异芳基烷基，异芳基烯基，异芳基炔基，杂环烷基，杂环烯基，杂环炔基，芳基，异芳基，杂环，环烷基，环烯基，烷基芳基烷基，烷基芳基烯基，烷基芳基炔基，烯基芳基烷基，烯基芳基烯基，烯基芳基炔基，炔基芳基烷基，炔基芳基烯基，炔基芳基炔基，烷基异芳基烷基，烷基异芳基烯基，烷基异芳基炔基，烯基异芳基烷基，烯基异芳基烯基，烯基异芳基炔基，炔基异芳基烷基，炔基异芳基烯基，炔基异芳基炔基，烷基杂环烷基，烷基杂环烯基，烷基杂环炔基，烯基杂环烷基，烯基杂环烯基，烯基杂环炔基，炔基杂环烷基，炔基杂环烯基，炔基杂环炔基，烷基芳基，烯基芳基，炔基芳基，烷基异芳基，烯基异芳基，或者炔基异芳基。其中一个或者多个亚甲基可以被-O-、-N(R8)-、-C(O)-、C(O)N(R8)-、或者-C(O)O-所中断或者终止。优选的，所述C基团通过B内的脂肪族半族与B连接。
在一个实施方式中，所述的连接基团B具有1-24个原子，优选具有4-24个原子，优选具有4-18个原子，更加优选具有4-12个原子，并且最优选具有大约4-10个原子。
在一个最优选的实施方式中，B选自直链C1-C10烷基，C1-C10烯基，C1-C10炔基，C1-C10烷氧基，烷氧基C1-C10烷氧基，C1-C10烷氨基，烷氧基C1-C10烷氨基，C1-C10烷基羰基氨基，C1-C10烷氨基羰基，芳氧基C1-C10烷氧基，芳氧基C1-C10烷氨基，芳氧基C1-C10烷氨基羰基，C1-C10-烷氨基烷氨基羰基，C1-C10烷基(N-烷基)氨基烷基-氨基羰基，烷氨基烷基氨基，烷基羰基氨基烷氨基，烷基(N-烷基)氨基烷氨基，(N-烷基)烷基羰基氨基烷氨基，烷氨基烷基，烷氨基烷氨基烷基，烷基哌嗪基烷基，哌嗪基烷基，烷基哌嗪基，烯基芳氧基C1-C10烷氧基，烯基芳氨基C1-C10烷氧基，烯基芳基烷氨基C1-C10烷氧基，烯基芳氧基C1-C10烷氨基，烯基芳氧基C1-C10烷氨基羰基，哌嗪基烷基芳基，异芳基C1-C10烷基，异芳基C2-C10烯基，异芳基C2-C10炔基，异芳基C1-C10烷氨基，异芳基C1-C10烷氧基，异芳氧基C1-C10烷基，异芳氧基C2-C10烯基，异芳氧基C2-C10炔基，异芳氧基C1-C10烷氨基，异芳氧基C1-C10烷氧基。在最优选的实施方式中，所述C基团通过B内的脂肪族半族碳链与B相连接。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是式(II)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00341
其中Ar是芳基，取代的芳基，异芳基，或者取代的异芳基；
Q是缺失，或者是取代的或者未被取代的烷基；
X是O，S，NH，或者是烷氨基；
B以及C如前述内容所定义。
在一个最优选的实施方式中，Ar是苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，吡啶基，取代的吡啶基，呋喃基，取代的呋喃基，吡咯基，取代的吡咯基，吡唑基，取代的吡唑基，恶唑基，取代的恶唑基，硫苯基，取代的硫苯基；Q是缺失或者取代的或未被取代的烷基；X是O，S，NH，或者烷氨基；R4各自独立的选自氢，羟基，氨基，卤素，CF3，CN，N3，NO2，磺酰基，酰基，取代或者未被取代的烷基，取代或者未被取代的烯基，取代或者未被取代的炔基，芳基烷基，芳基烯基，芳基炔基，异芳基烷基，异芳基烯基，异芳基炔基，杂环烷基，杂环烯基，杂环炔基，芳基，异芳基，杂环，环烷基，环烯基，烷基芳基烷基，烷基芳基烯基，烷基芳基炔基，烯基芳基烷基，烯基芳基烯基，烯基芳基炔基，炔基芳基烷基，炔基芳基烯基，炔基芳基炔基，烷基异芳基烷基，烷基异芳基烯基，烷基异芳基炔基，烯基异芳基烷基，烯基异芳基烯基，烯基异芳基炔基，炔基异芳基烷基，炔基异芳基烯基，炔基异芳基炔基，烷基杂环烷基，烷基杂环烯基，烷基杂环炔基，烯基杂环烷基，烯基杂环烯基，烯基杂环炔基，炔基杂环烷基，炔基杂环烯基，或者炔基杂环炔基，其中所述一个或者多个亚甲基可以被O、S、S(O)、SO2、N(R8)、C(O)、取代的或者未被取代的芳基、取代的或者未被取代的异芳基、取代的或者未被取代的杂环中断或者终止；其中R8是氢，酰基，脂肪族或者被取代的脂肪族；B和C分别如前述最优选的实施方式中所定义。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(III)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
其中X1是N，CR8；其中R8如前述内容所定义；
L是缺失或者是NH；
Cy是芳基，被取代的芳基，异芳基，或者是被取代的异芳基；
R20、R21以及R22各自独立的选自氢，羟基，氨基，卤素，烷氧基，被取代的烷氧基，烷氨基，被取代的烷氨基，二烷氨基，被取代的二烷氨基，取代或者未被取代的烷基硫，取代或者未被取代的烷基磺酰基，CF3，CN，N3，NO2，磺酰基，酰基，脂肪族，被取代的脂肪族，芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基，杂环，以及被取代的杂环；
R23是氢或者脂肪族；
B，C，R1、R2以及R3如前述内容中所定义。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(IV)以及式(V)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
其中Ra是羟基，氨基，烷氧基，烷氨基，二烷氨基；
Rb是氢，脂肪族基团，酰基；
Rc选自R1；
G是S或者O；
B，C，R1、R2以及R3如前述内容中所定义。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(VI)以及式(VII)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00371
其中Z2是O，S，NH，或者是烷氨基；
Y2是N或者CR20；其中R20选自氢，卤素，脂肪族，芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基；
B，C，Q，X以及Ar如前述内容中所定义。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(VIII)以及式(IX)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00372
其中Cz选自芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基，以及杂环；
X3是NH，烷氨基，O或者S；
C，B，Y2，Z2，Ar以及R8如前述内容中所定义。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(X)以及式(XI)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00381
其中U是N，CH或者C；
Ar是芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基，环烷基，被取代的环烷基，杂环或者被取代的杂环；
Q是O，S，SO，SO2，NH，取代的或者未被取代的烷氨基，或者取代的或者未被取代的C1-C3烷基；
Y10是O，S或者NH；
X10以及Z10各自独立的表示NH，取代的或者未被取代的烷氨基，取代的或者未被取代的C1-C3烷基；
Cy是芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基，环烷基，或者杂环烷基；
R210各自独立的选自氢，羟基，氨基，卤素，取代或者未被取代的烷氧基，取代或者未被取代的烷氨基，取代或者未被取代的二烷氨基，取代或者未被取代的烷基硫，取代或者未被取代的烷基磺酰基，CF3，CN，NO2，N3，磺酰基，酰基，芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基，杂环，被取代的杂环，脂肪族，以及被取代的脂肪族；
C以及B如前述内容中所定义。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(XII)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00391
其中U是N，或者CH；
W20是N或者CH；
X20是缺失，O，S，S(O)，S(O)2，N(R8)，CF2或者C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，其中所述一个或者多个亚甲基可以被O，S，SO，SO2，N(R8)所中断或者终止。R8是氢，酰基，脂肪族或者被取代的脂肪族；
Y20各自独立的表示氢，卤素，NO2，CN，或者低级烷基；
Z20是氨基，烷氨基，或者二烷氨基；
Q20是芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基，环烷基，或者杂环烷基；
V是氢，直链或者支链的、取代或者未被取代的烷基，取代或者未被取代的烯基，取代或者未被取代的炔基，其中一个或者多个亚甲基可以被O、S、S(O)、SO2、N(R8)、C(O)、取代的或者未被取代的芳基、取代的或者未被取代的异芳基、取代的或者未被取代的杂环、取代的或者未被取代的环烷基所中断或者终止；
并且其中Q20和/或V进一步的被
Figure G2007800418082D00401
所取代；
C，B以及U如前述内容中所定义。
在一个优选的实施方式中，C是锌结合半族，选自：
(a)；其中W是O或者S；Y是缺失，N或者CH；Z是N或者CH；R7以及R9各自独立的表示氢，羟基，脂肪族基团；假定如果R7与R9同时存在，则R7与R9中的一个必须是羟基，而如果Y是缺失，则R9必须是羟基；并且R8是氢或者脂肪族基团；
(b)
Figure G2007800418082D00403
；其中W是O或者S；J是O，NH，或者NCH3；并且R10是氢或者低级烷基；
(c)；其中W是O或者S；Y1以及Z1各自独立的表示N，C或者CH；并且
(d)
Figure G2007800418082D00412
；其中Z、Y以及W如前述所定义；R11以及R12各自独立的选自氢或者脂肪族；R1、R2以及R3各自独立的选自氢，羟基，氨基，卤素，烷氧基，烷氨基，二烷氨基，CF3，CN，NO2，磺酰基，酰基，脂肪族，被取代的脂肪族，芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基，杂环以及被取代的杂环。
在一个最优选的实施方式中，C选自：
(a)；其中R8选自氢或者低级烷基；并且
(b)
Figure G2007800418082D00414
；其中R1、R2以及R3各自独立的选自氢，羟基，CF3，NO2，卤素，低级烷基，低级烷氧基，低级烷氨基，烷氧烷氧基(优选甲氧乙氧基)，烷氨基氧基(优选甲氨基乙氧基)，苯基，硫苯基，呋喃基，吡嗪基，被取代的吡嗪基，以及吗啉基；并且R12选自氢或者低级烷基。
在一个优选的实施方式中，所述二价的B是一个直接的键，或者是直链或者支链的、取代或者未被取代的烷基，取代或者未被取代的烯基，取代或者未被取代的炔基，芳基烷基，芳基烯基，芳基炔基，异芳基烷基，异芳基烯基，异芳基炔基，杂环烷基，杂环烯基，杂环炔基，芳基，异芳基，杂环，烷基芳基烷基，烷基芳基烯基，烷基芳基炔基，烯基芳基烷基，烯基芳基烯基，烯基芳基炔基，炔基芳基烷基，炔基芳基烯基，炔基芳基炔基，烷基异芳基烷基，烷基异芳基烯基，烷基异芳基炔基，烯基异芳基烷基，烯基异芳基烯基，烯基异芳基炔基，炔基异芳基烷基，炔基异芳基烯基，炔基异芳基炔基，烷基杂环烷基，烷基杂环烯基，烷基杂环炔基，烯基杂环烷基，烯基杂环烯基，烯基杂环炔基，炔基杂环烷基，炔基杂环烯基，炔基杂环炔基，其中一个或者多个亚甲基可以被O、S、S(O)、SO2、N(R8)、C(O)、取代的或者未被取代的芳基、取代的或者未被取代的异芳基、取代的或者未被取代的杂环中断或者终止；所述的二价B连接基团包括但不局限于烷基，烯基，炔基，烷基芳基，烯基芳基，炔基芳基，烷氧基芳基，烷氨基芳基，烷氧基烷基，烷氨基烷基，烷基杂环烷基，烷基异芳基烷基，烷氨基，N(R8)烯基，N(R8)炔基，N(R8)烷氧基烷基，N(R8)烷氨基烷基，N(R8)烷氨基羰基，N(R8)烷基芳基，N(R8)烯基芳基，N(R8)炔基芳基，N(R8)烷氧基芳基，N(R8)烷氨基芳基，N(R8)环烷基，N(R8)芳基，N(R8)异芳基，N(R8)杂环烷基，N(R8)烷基杂环烷基，烷氧基，O-烯基，O-炔基，O-烷氧基烷基，O-烷氨基烷基，O-烷氨基羰基，O-烷基芳基，O-烯基芳基，O-炔基芳基，O-烷氧基芳基，O-烷氨基芳基，O-环烷基，O-芳基，O-异芳基，O-杂环烷基，O-烷基杂环烷基，C(O)烷基，C(O)烯基，C(O)炔基，C(O)烷基芳基，C(O)烯基芳基，C(O)炔基芳基，C(O)烷氧基烷基，C(O)烷氨基烷基，C(O)烷氨基羰基，C(O)环烷基，C(O)芳基，C(O)异芳基，C(O)杂环烷基，CON(R8)，CON(R8)烷基，CON(R8)烯基，CON(R8)炔基，CON(R8)烷基芳基，CON(R8)烯基芳基，CON(R8)炔基芳基，CON(R8)烷氧基芳基，CON(R8)烷氨基烷基，CON(R8)烷氨基羰基，CON(R8)烷氧基芳基，CON(R8)烷氨基芳基，CON(R8)环烷基，CON(R8)芳基，CON(R8)异芳基，CON(R8)杂环烷基，CON(R8)烷基杂环烷基，N(R8)C(O)烷基，N(R8)C(O)烯基，N(R8)C(O)炔基，N(R8)C(O)烷基芳基，N(R8)C(O)烯基芳基，N(R8)C(O)炔基芳基，N(R8)C(O)烷氧基烷基，N(R8)C(O)烷氨基烷基，N(R8)C(O)烷氨基羰基，N(R8)C(O)烷氧基芳基，N(R8)C(O)烷氨基芳基，N(R8)C(O)环烷基，N(R8)C(O)芳基，N(R8)C(O)异芳基，N(R8)C(O)杂环烷基，N(R8)C(O)烷基杂环烷基，NHC(O)NH，NHC(O)NH-烷基，NHC(O)NH-烯基，NHC(O)NH-炔基，NHC(O)NH-烷基芳基，NHC(O)NH-烯基芳基，NHC(O)NH-炔基芳基，NHC(O)NH-烷氧基芳基，NHC(O)NH-烷氨基芳基，NHC(O)NH-环烷基，NHC(O)NH-芳基，NHC(O)NH-异芳基，NHC(O)NH-杂环烷基，NHC(O)NH-烷基杂环烷基，S-烷基，S-烯基，S-炔基，S-烷氧基烷基，S-烷氨基烷基，S-烷基芳基，S-烷氨基羰基，S-烯基芳基，S-炔基芳基，S-烷氧基芳基，S-烷氨基芳基，S-环烷基，S-芳基，S-异芳基，S-杂环烷基，S-烷基杂环烷基，S(O)烷基，S(O)烯基，S(O)炔基，S(O)烷氧基烷基，S(O)烷氨基烷基，S(O)烷氨基羰基，S(O)烷基芳基，S(O)烯基芳基，S(O)炔基芳基，S(O)烷氧基芳基，S(O)烷氨基芳基，S(O)环烷基，S(O)芳基，S(O)异芳基，S(O)杂环烷基，S(O)烷基杂环烷基，S(O)2烷基，S(O)2烯基，S(O)2炔基，S(O)2烷氧基烷基，S(O)2烷氨基烷基，S(O)2烷氨基羰基，S(O)2烷基芳基，S(O)2烯基芳基，S(O)2炔基芳基，S(O)2烷氧基芳基，S(O)2烷氨基芳基，S(O)2环烷基，S(O)2芳基，S(O)2异芳基，S(O)2杂环烷基，S(O)2烷基杂环烷基，SO2NH，SO2NH-烷基，SO2NH-烯基，SO2NH-炔基，SO2NH-烷基芳基，SO2NH-烯基芳基，SO2NH-炔基芳基，SO2NH-环烷基，SO2NH-芳基，SO2NH-异芳基，SO2NH-杂环烷基，SO2NH-烷基杂环烷基，烷基芳氧基烷氧基，烷基芳氧基烷氨基，烷基芳氨基烷氧基，烷基芳氨基烷氨基，烷基芳基烷氨基烷氧基，烷基芳基烷氨基烷氧基，烯基芳氧基烷氧基，烯基芳氧基烷氨基，烯基芳氨基烷氧基，烯基芳氨基烷氨基，烯基芳基烷氨基烷氧基，烯基芳基烷氨基烷氨基。可以理解，所述的烷基，烯基，炔基，芳基，异芳基，环烷基，杂环以及类似物可以被进一步的取代。
在一个更加优选的实施方式中，B是直链烷基，烯基，炔基，芳基烷基，芳基烯基，芳基炔基，异芳基烷基，异芳基烯基，异芳基炔基，杂环烷基，杂环烯基，杂环炔基，芳基，异芳基，杂环，环烷基，环烯基，烷基芳基烷基，烷基芳基烯基，烷基芳基炔基，烯基芳基烷基，烯基芳基烯基，烯基芳基炔基，炔基芳基烷基，炔基芳基烯基，炔基芳基炔基，烷基异芳基烷基，烷基异芳基烯基，烷基异芳基炔基，烯基异芳基烷基，烯基异芳基烯基，烯基异芳基炔基，炔基异芳基烷基，炔基异芳基烯基，炔基异芳基炔基，烷基杂环烷基，烷基杂环烯基，烷基杂环炔基，烯基杂环烷基，烯基杂环烯基，烯基杂环炔基，炔基杂环烷基，炔基杂环烯基，炔基杂环炔基。其中一个或者多个亚甲基可以被-O-、-N(R8)-、-C(O)-、C(O)N(R8)-、或者-C(O)O-所中断或者终止。
在最优选的实施方式中，B选自直链C1-C10烷基，C1-C10烯基，C1-C10炔基，C1-C10烷氧基，烷氧基C1-C10烷氧基，C1-C10烷氨基，烷氧基C1-C10烷氨基，C1-C10烷基羰基氨基，C1-C10烷氨基羰基，芳氧基C1-C10烷氧基，芳氧基C1-C10烷氨基，芳氧基C1-C10烷氨基羰基，C1-C10-烷氨基烷氨基羰基，C1-C10烷基(N-烷基)氨基烷基-氨基羰基，烷氨基烷基氨基，烷基羰基氨基烷氨基，烷基(N-烷基)氨基烷氨基，(N-烷基)烷基羰基氨基烷氨基，烷氨基烷基，烷氨基烷氨基烷基，烷基哌嗪基烷基，哌嗪基烷基，烷基哌嗪基，烯基芳氧基C1-C10烷氧基，烯基芳氨基C1-C10烷氧基，烯基芳基烷氨基C1-C10烷氧基，烯基芳氧基C1-C10烷氨基，烯基芳氧基C1-C10烷氨基羰基以及哌嗪基烷基芳基。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是式(II)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00451
其中Ar是芳基，被取代的芳基，异芳基，或者被取代的异芳基；
Q是缺失，或者是取代的或者未被取代的烷基；
X是O，S，NH，或者是烷氨基；
B，C以及R1如前述内容所定义。
在一个最优选的实施方式中，Ar是苯基，被取代的苯基，萘基，被取代的萘基，吡啶基，被取代的吡啶基，呋喃基，被取代的呋喃基，吡咯基，被取代的吡咯基，吡唑基，被取代的吡唑基，恶唑基，被取代的恶唑基，硫苯基，被取代的硫苯基；Q是缺失或者取代的或未被取代的烷基；X是O，S，NH，或者烷氨基；R1各自独立的选自氢，羟基，卤素，低级烷基，低级烷氧基，烷氧烷氧基(优选甲氧乙氧基)，烷氨基烷氧基(优选甲氨基乙氧基)，低级烷氨基或者低级二烷氨基；B和C分别如前述最优选的实施方式中所定义。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(III)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00461
其中X1是N，CR8；其中R8如前述内容所定义；
L是缺失或者是NH；
Cy是芳基，被取代的芳基，异芳基，或者是被取代的异芳基；
R20、R21以及R22各自独立的选自氢，羟基，CF3，CN，NO2，卤素，低级烷基，低级烷氧基，低级烷氨基，烷氧烷氧基(优选甲氧乙氧基)，烷氨基烷氧基(优选甲氨基乙氧基)，苯基，硫苯基，呋喃基，吡嗪基，被取代的吡嗪基，以及吗啉基；并且R12选自氢或者低级烷基；
R23是氢或者脂肪族；
B，C，R1、R2以及R3如前述内容中所定义。
在最优选的实施方式中，X1是CH，C(低级烷基)；L是缺失；Cy是苯基，被取代的苯基，吡啶基，被取代的吡啶基，呋喃基，被取代的呋喃基，吡咯基，被取代的吡咯基，吡唑基，被取代的吡唑基，恶唑基，被取代的恶唑基，硫苯基，或者被取代的硫苯基；G是O；R1，R2以及R3各自独立的选自氢，羟基，CF3，NO2，卤素，低级烷基，低级烷氧基，烷氧烷氧基(优选甲氧乙氧基)，烷氨基烷氧基(优选甲氨基乙氧基)，低级烷氨基以及低级二烷氨基；B和C如前述最优选的实施方式中所定义。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(IV)以及式(V)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00471
其中Ra是羟基，氨基，烷氧基，烷氨基，二烷氨基；
Rb是氢，脂肪族基团，酰基；
Rc选自R1；
n是0，1，2，或者3；
G是S或者O；
B，C，R1、R2以及R3如前述内容中所定义。
在一个最优选的实施方式中，Ra是羟基，氨基，烷氧基，烷氨基，二烷氨基；Rb是氢，低级烷基，酰基；G是O；，R1，R2，R3以及Rc各自独立的选自氢，羟基，CF3，NO2，卤素，低级烷基，低级烷氧基，烷氧烷氧基(优选甲氧乙氧基)，烷氨基烷氧基(优选甲氨基乙氧基)，低级烷氨基以及低级二烷氨基；B和C如前述最优选的实施方式中所定义。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(VI)以及式(VII)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00481
其中Z2是O，S，或者是NH；
Y2是N或者CR20；其中R20选自氢，卤素，脂肪族，芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基；
X2是缺失，芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基，杂环，被取代的杂环；
B，C，Q，X以及Ar如前述内容中所定义。
在一个最优选的实施方式中，Z2是O，S，或者是NH；Y2是NH，CH，C(低级烷基)；X2是苯基，被取代的苯基，吡啶基，被取代的吡啶基，呋喃基，被取代的呋喃基，吡咯基，被取代的吡咯基，吡唑基，被取代的吡唑基，恶唑基，被取代的恶唑基，硫苯基，或者被取代的硫苯基；Ar是苯基，被取代的苯基，萘基，被取代的萘基，吡啶基，被取代的吡啶基，呋喃基，被取代的呋喃基，吡咯基，被取代的吡咯基，吡唑基，被取代的吡唑基，恶唑基，被取代的恶唑基，硫苯基，被取代的硫苯基；Q是缺失或者是取代的或者未被取代的烷基；X是O，S，NH，或者是烷氨基；B和C如前述最优选的实施方式中所定义。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(VIII)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00491
其中Cz选自芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基，以及杂环；
X3是NH，O或者S；
C，B，Y2，Z2，Ar以及R8如前述内容中所定义。
在一个最优选的实施方式中，Cz是苯基，被取代的苯基，吡啶基，嘧啶基，被取代的嘧啶基，吡嗪基，被取代的吡嗪基，吡唑基，被取代的吡唑基，恶唑基，被取代的恶唑基，噻唑基，被取代的噻唑基；Y2是NH，CH，C(低级烷基)；Z2是O，S，或者NH；X3是NH，O，或者S；Ar是苯基，被取代的苯基，萘基，被取代的萘基，吡啶基，被取代的吡啶基，呋喃基，被取代的呋喃基，吡咯基，被取代的吡咯基，吡唑基，被取代的吡唑基，恶唑基，被取代的恶唑基，硫苯基，被取代的硫苯基；R8是氢或者低级烷基；B以及C如前述最优选的实施方式中所定义。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(IX)或者式(X)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00501
其中Cy10以及Cy11分别独立的选自芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基，杂环，被取代的杂环，环烷基以及被取代的环烷基；
Y30是N，NR8或者CR8，其中R8是氢，酰基，脂肪族或者被取代的脂肪族；
X30是CR8，NR8，N，O或者S；
W30是氢，酰基，脂肪族或者被取代的脂肪族；
B是连接基团；
C是前述第一种实施方式中所定义的内容。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(XI)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00502
其中Cy40分别独立的选自芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基，杂环，被取代的杂环，环烷基以及被取代的环烷基；
W40分别独立的选自氢，卤素，酰基，脂肪族，被取代的脂肪族，芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基，杂环，被取代的杂环，环烷基以及被取代的环烷基；
Z40是O，S，S(O)，SO2，SO2NH，NR8，C(O)或者C(O)NH2；
Y40是N或者CR8，其中R8是氢，酰基，脂肪族或者被取代的脂肪族；
X40是CR8，NR8，O或者S；
B是连接基团；
C是前述第一种实施方式中所定义的内容。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(XII)或者式(XIII)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00511
其中Cy以及Cy1分别各自独立的选自芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基，杂环，被取代的杂环，环烷基以及被取代的环烷基；
Ar是芳基，被取代的芳基，异芳基，或者被取代的异芳基；
Y是N，NR8或者CR8，其中R8是氢，酰基，脂肪族或者被取代的脂肪族；
Z是O，S，CR8或者NR8；
R20以及R21分别各自独立的选自氢，酰基，脂肪族以及被取代的脂肪族；或者，R20与R21可以连接在一起并且与它们所连接的原子一同形成一个杂环或者被取代的杂环；
m是1，2，或者3；
n是1，2，3，或者4；
R22以及R23分别各自独立的选自氢，酰基，脂肪族以及被取代的脂肪族；
X1-X4各自独立的表示N或者CR25，其中R25各自独立的选自氢，羟基，氨基，卤素，取代或者未被取代的烷氧基，取代或者未被取代的烷氨基，取代或者未被取代的二烷氨基，CF3，CN，NO2，N3，磺酰基，酰基，脂肪族，以及被取代的脂肪族；
B是连接基团；
C如前述第一种实施方式中所定义。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(XIV)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00531
其中Cy50选自芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基，杂环，被取代的杂环，环烷基以及被取代的环烷基；
R50是低级烷基；
X1-X4各自独立的表示N或者CR21，其中R21各自独立的选自氢，羟基，氨基，卤素，低级烷氧基，低级烷氨基，CF3，CN，NO2，N3，磺酰基，酰基，C1-C3烷基，C2-C3烯基，C2-C3炔基；
B是连接基团；
C如前述第一种实施方式中所定义
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(XV)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00541
其中
Z1，Z2以及Z3各自独立的选自CR21，NR8，N，O，或者S，其中R8是氢，酰基，脂肪族或者被取代的脂肪族；R21各自独立的选自氢，羟基，氨基，卤素，取代的或者未被取代的烷氧基，取代的或者未被取代的烷氨基，取代的或者未被取代的二烷氨基，CF3，CN，NO2，N3，磺酰基，酰基，脂肪族，以及被取代的脂肪族；
X1-X3各自独立的表示C，N或者CR21；
Y60是NR8，O，S，SO，SO2，脂肪族，以及被取代的脂肪族；
M各自独立的选自氢，羟基，氨基，卤素，CF3，CN，NO2，N3，磺酰基，酰基，取代的或者未被取代的烷基，取代的或者未被取代的烯基，取代的或者未被取代的炔基，芳基烷基，芳基烯基，芳基炔基，异芳基烷基，异芳基烯基，异芳基炔基，杂环烷基，杂环烯基，杂环炔基，芳基，异芳基，杂环，环烷基，环烯基，烷基芳基烷基，烷基芳基烯基，烷基芳基炔基，烯基芳基烷基，烯基芳基烯基，烯基芳基炔基，炔基芳基烷基，炔基芳基烯基，炔基芳基炔基，烷基异芳基烷基，烷基异芳基烯基，烷基异芳基炔基，烯基异芳基烷基，烯基异芳基烯基，烯基异芳基炔基，炔基异芳基烷基，炔基异芳基烯基，炔基异芳基炔基，烷基杂环烷基，烷基杂环烯基，烷基杂环炔基，烯基杂环烷基，烯基杂环烯基，烯基杂环炔基，炔基杂环烷基，炔基杂环烯基，或者炔基杂环炔基，其中一个或者多个亚甲基可以被O、S、S(O)、SO2、N(R8)、C(O)、取代的或者未被取代的芳基、取代的或者未被取代的异芳基、取代的或者未被取代的杂环中断或者终止；其中R8是氢，酰基，脂肪族或者被取代的脂肪族；
B是连接基团；
C如前述第一种实施方式中所定义。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(XVI)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
Figure G2007800418082D00551
其中
Z1，Z2以及Z3各自独立的选自CR21，NR8，N，O，或者S，其中R8是氢，酰基，脂肪族或者被取代的脂肪族；R21各自独立的选自氢，羟基，氨基，卤素，取代的或者未被取代的烷氧基，取代的或者未被取代的烷氨基，取代的或者未被取代的二烷氨基，CF3，CN，NO2，N3，磺酰基，酰基，脂肪族，以及被取代的脂肪族；
X1-X8各自独立的表示C，N或者CR21；
Y70是NR8，O，S，SO，SO2，脂肪族，以及被取代的脂肪族；
B是连接基团；
C如前述第一种实施方式中所定义。
在一个实施方式中，本发明所述多功能化合物是如下所示的式(XVII)所表示的化合物，或者是该化合物的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物以及溶剂化物：
其中
Cy80以及Cy81各自独立的选自芳基，被取代的芳基，异芳基，被取代的异芳基，杂环，被取代的杂环，环烷基以及被取代的环烷基；
X80是NR8，O，S，SO，SO2，CO，烷基或者被取代的烷基；
R23是氢，脂肪族，被取代的脂肪族或者酰基；
B是连接基团；
C如前述第一种实施方式中所定义。
本发明进一步提供了预防或者治疗疾病或者症状的方法，所述的疾病或者症状涉及到细胞的异常增殖、分化或者存活。在一个实施方式中，本发明进一步提供了本发明所述一种或者一种以上化合物用于制备药剂的用途，所述药剂用于治愈或者减轻涉及细胞异常增殖、分化或者存活的疾病。在优选的实施方式中，所述的疾病是癌症。在一个实施方式中，本发明涉及为需要接受治疗的宿主治疗癌症的方法，包括给所述的宿主施用治疗有效剂量的本发明所述化合物。
所述的术语“癌症”指的是由恶性肿瘤细胞的增殖而引起的任何癌症，例如肿瘤，赘生物，恶瘤，肉瘤，白血病，淋巴瘤以及类似癌症。例如，癌症包括，但不局限于，间皮瘤，白血病以及淋巴瘤例如皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)，非皮肤外周T细胞淋巴瘤，与人类T细胞淋巴病毒(HTLV)相关的淋巴瘤，例如成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)，B细胞淋巴瘤，急性非淋巴细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病，慢性骨髓性白血病，急性骨髓性白血病，淋巴瘤，以及多发性骨髓瘤，非霍奇金淋巴瘤，急性淋巴白血病(ALL)，慢性淋巴白血病(CLL)，霍奇金淋巴瘤，伯基特淋巴瘤(Burkitt)，成人T细胞白血病淋巴瘤，急性骨髓系白血病(AML)，慢性骨髓系白血病(CML)，或者肝细胞癌。进一步的例子包括骨髓增生异常综合症(myelodisplasticsyndrome)，儿童实体瘤例如脑瘤，成神经细胞瘤，视母细胞瘤，肾母细胞瘤，骨癌，以及软组织肉瘤，普通成人实体瘤例如脑癌以及颈癌(例如，口部，喉部，鼻咽部，以及食道内)，泌尿生殖器肿瘤(例如，前列腺，膀胱，肾脏，子宫，卵巢，睾丸)，肺癌(例如，小细胞癌以及非小细胞癌)，乳腺癌，胰腺癌，黑素瘤以及其他皮肤癌，胃癌，脑瘤，肿瘤相关性高林综合症(Gorlin’s)(例如，成神经管细胞瘤，脑膜瘤，等等)以及肝癌。可以由本发明目标化合物治疗的癌症类型的其他范例包括，但不局限于，骨癌或者平滑肌肉瘤，胃癌，小肠癌，直肠癌，唾液腺癌，子宫内膜癌，肾上腺癌，肛门癌，直肠癌，副甲状腺癌，以及垂体癌。
使用本发明所述化合物有效的预防、治疗以及研究的其他癌症是，例如，直肠癌，家族性腺瘤性息肉病以及遗传性非息肉病性结肠直肠癌，或者是黑素瘤。进一步的，癌症包括，但不局限于，嘴唇癌，喉癌，咽癌，舌癌，唾液腺癌，胃癌，腺癌，甲状腺癌(骨髓性甲状腺癌以及乳头状甲状腺癌)，肾癌，肾实质癌，子宫颈癌，子宫体癌，子宫内膜癌，绒毛膜癌，睾丸癌，尿道癌，黑素瘤，脑部肿瘤例如成胶质细胞瘤，星形细胞瘤，脑膜瘤，成神经管细胞瘤，外周神经外胚层肿瘤，胆囊瘤，支气管瘤，多发性骨髓瘤，基底细胞样瘤，畸胎瘤，眼癌，脉络膜黑素瘤，精原细胞瘤，横纹肌肉瘤，脑咽瘤，骨肉瘤，软骨肉瘤，肌肉瘤，脂肪肉瘤，骨纤维肉瘤，尤文氏肉瘤，以及将细胞瘤。在本发明的一个方面，本发明提供了本发明所述一种或者一种以上化合物用于制备药剂的用途，所述药剂用于治疗癌症。
在一个实施方式中，本发明包括本发明所述一种或者一种以上化合物在制备药剂中的用途，所述的药剂能够预防进一步的细胞异常增殖、分化或者存活。例如，本发明所述化合物可以有效的预防肿瘤尺寸的增长或者预防肿瘤发展到转移的程度。可以施用本发明所述目标化合物用以终止癌症的恶化或者发展，或者用以诱导肿瘤细胞凋亡或者抑制肿瘤的血管生成。除此之外，本发明包括使用所述目标化合物预防癌症的复发。
本发明进一步包括了治疗或者预防细胞增殖性疾病的方法，所述的细胞增殖性疾病是例如增生，发育异常以及癌前病变。发育异常是病理学者可以通过活组织切片检查所识别出的癌前病变的最早形式。可以施用本发明所述目标化合物以达到预防所述增生、发育异常或者癌前病变的目的，阻止其继续发展或者阻止其衍变成癌症。癌前病变的例子可能发生在皮肤，食道组织，乳房以及子宫颈上皮内组织。
“组合治疗”包括将本发明所述目标化合物进一步与其他生物活性成分(例如，但不局限于，另外一种不同的抗肿瘤制剂)以及非药物治疗(例如，但不局限于，外科手术或者放射性治疗)一同施用。例如，本发明所述化合物可以与其他药物学活性化合物组合施用，优选所述药物学活性化合物能够增强本发明所述化合物的功效。本发明所述化合物可以与其他药物治疗同时施用(以一种单一的制剂形式或者是分别的制剂形式)或者依次施用。通常，预想的组合治疗是在一个治疗周期中或者在治疗的整个过程中施用两种或者多种药物。
在本发明的一个方面，所述目标化合物可以与一种或者一种以上单独的制剂进行组合，其中所述的单独的制剂能够调节各种不同疾病状态所涉及的蛋白激酶。这类激酶的例子包括，但不局限于：丝氨酸/苏氨酸特异性激酶，受体酪氨酸特异性激酶以及非受体酪氨酸特异性激酶。丝氨酸/苏氨酸激酶包括有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)，减数分裂特异性激酶(MEK)，RAF以及极光激酶。受体激酶家族的例子包括表皮生长因子受体(EGFR)(例如，人表皮生长因子受体-2/neu，HER3，HER4，ErbB，ErbB2，ErbB3，ErbB4，Xmrk，DER，Let23)；成纤维细胞生长因子(FGF)受体(例如，FGF-R1，FGF-R2/BEK/CEK3，FGF-R3/CEK2，FGF-R4/TKF，KGF-R)；肝细胞生长因子受体/分散因子受体(HGFR)(例如，MET，RON，SEA，SEX)；胰岛素受体(例如，IGFI-R)；Eph(例如，CEK5，CEK8，EBK，ECK，EEK，EHK-1，EHK-2，ELK，EPH，ERK，HEK，MDK2，MDK5，SEK)；Ax1(例如，Mer/Nyk，Rse)；RET；以及血小板衍生生长因子受体(PDGFR)(例如，PDGFα-R，PDGβ-R，CSF1-R/MS，SCF-R/C-KIT，VEGF-R/FLT，VEGF-R/FLT，NEK/FLK1，FLT3/FLK2/STK-1)。非受体酪氨酸激酶家族包括，但不局限于，BCR-ABL(例如p43ab1，ARG)；BTK(例如，ITK/EMT，TEC)；CSK，FAK，FPS，JAK，SRC，BMX，FER，CDK以及SYK。
在本发明的另外一个方面，所述目标化合物可以与一种或者一种以上单独的制剂进行组合，其中所述的单独的制剂能够调节非激酶生物靶向或者过程。这类靶向包括组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)，DNA甲基转移酶(DNMT)，热休克蛋白(例如，HSP90)，以及蛋白体。
在一个优选的实施方式中，所述目标化合物可以与抗肿瘤制剂(例如，小分子，单克隆抗体，反义RNA，以及融合蛋白)进行组合，所述抗肿瘤制剂能够抑制一种或者一种以上生物靶向，例如Zolinza，它赛瓦(Tarceva)，易瑞沙(Iressa)，拉帕替尼(Tykerb)，格列卫(Gleevec)，舒尼替尼(Sutent)，扑瑞赛(Sprycel)，多吉美(Nexavar)，索拉菲尼(Sorafinib)，CNF2024，RG108，BMS387032，Affinitak，阿瓦斯丁(Avastin)，赫赛汀(Herceptin)，爱必妥(Erbitux)，AG24322，PD325901，ZD6474，PD184322，Obatodax，ABT737以及AEE788。上述组合能够增强治疗功效，使该功效高于单独使用上述任何制剂所产生的功效，并且能够预防或者延缓抗性突变体的出现。
在某些优选的实施方式中，本发明所述化合物是与一种化学治疗剂组合使用的。化学治疗剂包含了肿瘤学治疗领域中很宽范围的治疗制剂。这些制剂在所述疾病的不同阶段进行施用，目的在于缩小肿瘤，摧毁外科手术之后残留的剩余癌症细胞，促进缓解、持续缓解和/或减轻由所述肿瘤及其治疗而引发的症状。这类制剂的例子包括，但不局限于，烷烃化制剂例如芥子气衍生物(氮芥，环磷酰胺，苯丁酸氮芥，美法仑，异环磷酰胺)，氮杂环丙烷(三胺硫磷，六甲基三聚氢胺)，烷基磺酸盐(白消安)，联氨以及三嗪(六甲蜜胺，甲基苄肼，三嗪咪唑胺以及替莫唑胺)，亚硝脲(亚硝脲氮芥，洛莫斯汀以及链脲佐菌素)，异环磷酰胺及其金属盐(卡铂，顺铂，以及奥沙利铂)；植物碱例如鬼臼毒素(依托泊甙以及Tenisopide)，紫杉醇类(紫杉醇Paclitaxel以及多西他赛)，长春花植物碱(长春新碱，长春碱，长春地辛，长春瑞滨)，以及喜数碱类似物(伊立替康以及托泊替康)；抗肿瘤抗生素例如色霉素(放线菌素D以及光辉霉素)，蒽环霉素(亚德里亚霉素，柔红霉素，表阿霉素，米托蒽醌，戊柔比星以及伊达比星)，以及杂合的抗生素例如丝裂霉素，放线菌素以及博来霉素；抗代谢物例如叶酸拮抗剂(甲氨蝶呤，培美曲塞二钠，雷替曲占，氨基蝶呤)，嘧啶拮抗剂(5-氟尿嘧啶，氟尿苷，阿糖胞苷，卡培他滨，以及吉西他滨)，嘌呤拮抗剂(6-巯基嘌呤以及6-硫鸟嘌呤)以及腺甙脱氨酶抑制剂(克拉利宾，氟达拉滨，巯基嘌呤，氯法拉滨，硫鸟嘌呤，奈拉滨，喷司他丁)；拓扑异构酶抑制剂例如拓扑异构酶I抑制剂(伊立替康，托泊替康)以及拓扑异构酶II抑制剂(胺苯吖啶，依托泊甙，磷酸依托泊甙，替尼泊苷)；单克隆抗体(阿仑单抗，吉妥珠单抗奥唑米星，利妥昔单抗，曲妥珠单抗，替伊莫单抗，西妥昔单抗，帕尼单抗，托西莫单抗，贝伐单抗)；以及杂合的抗肿瘤制剂例如核糖核苷酸还原酶抑制剂(羟基脲)；肾上腺皮质类固醇抑制剂(米托坦)；酶类(天冬酰胺酶以及培门冬酶)；抗微管制剂(雌莫斯汀)；以及类维生素A(视黄醇，异维A酸，维A酸(ATRA))。
在某些优选实施方式中，本发明所述化合物与一种化学治疗制剂组合施用。化学治疗制剂起到了保护机体或者使化学治疗的副作用最小化的作用。这类制剂的例子包括，但不局限于，阿米福汀(amfostine)，美司那(mesna)，以及右雷佐生(dexrazoxane)。
在本发明的一个方面，所述目标化合物与放射性疗法组合施用。放射线通常来自于发射光子射线(x-射线或者γ-射线)或者粒子射线的仪器，通过内部(在肿瘤位点附近植入放射性材料)或者外部传递放射线。如果所述组合治疗进一步包括放射性治疗，则所述放射性治疗可以在任意适当的时间进行，只要所述治疗制剂与所述放射性治疗的组合的共同实施取得了有益的效果即可。例如，在适当的情况下，当临时将所述放射性治疗从所述治疗制剂中移除或许几天甚至几周的时间时，仍然可以取得这种有益的效果。
可以预期的是，本发明所述化合物可以与一种免疫治疗制剂进行组合施用。免疫治疗的一种形式是通过在远离所述肿瘤的位点施用一种疫苗组合物，使宿主原产生一种活性全身系统性肿瘤特异性免疫应答。已经被认证的各种类型的疫苗包括分离的肿瘤抗原疫苗以及抗独特型疫苗。另外一种途径是利用来自于所述接受治疗的宿主的肿瘤细胞，或者利用这类细胞的衍生物(参见Schirrmacher等人(于1995年)在J.Cancer Res.Clin.Oncol.12：487中发表的文章)。在美国专利No.5484596中，Hanna Jr等人请求保护一种治疗可切除性癌症以防止其复发或者转移的方法，包括通过外科手术移除所述肿瘤，使用胶原酶分散所述细胞，对所述细胞进行照射，并且以使用大约107个细胞的至少三次连续剂量对所述患者进行接种。
可以预期的是，本发明所述化合物可以有利的与一种或者一种以上辅助治疗制剂联合施用。用于辅助治疗的适当的制剂的例子包括5羟色胺1(5-HT1)拮抗剂，例如曲坦类药物(triptan)(例如舒马曲坦或者那拉曲坦)；腺苷A1拮抗剂；EP配位体；N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)调节剂，例如甘氨酸拮抗剂；钠通道阻滞剂(例如，拉莫三嗪)；P物质拮抗剂(例如，神经激肽NK1拮抗剂)；大麻类；对乙酰氨基酚或者乙酰对氨苯乙醚；5-脂肪加氧酶抑制剂；白三烯受体拮抗剂；病情缓解抗风湿药物(DMARD)(例如，甲氨蝶呤)；加巴喷丁(gabapentin)及其相关化合物；三环抗抑郁剂(例如，amitryptilline)；神经元稳定化抗癫痫药物；单胺能吸收抑制剂(例如，文拉法辛)；基质金属蛋白抑制剂；一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂，例如iNOS抑制剂或者nNOS抑制剂；肿瘤坏死因子α的释放、活性抑制剂；抗体治疗法，例如单克隆抗体治疗法；抗病毒剂，例如核苷抑制剂(例如，拉米夫定)或者免疫系统调节剂(例如，干扰素)；阿片类止痛剂；局部止痛剂；刺激物，包括咖啡因；H2拮抗剂(例如，雷尼替丁)；质子泵抑制剂(例如，奥咪拉唑)；抗酸剂(例如，氢氧化铝或者氢氧化镁)；排气剂(例如，二甲基硅油)；解充血药(例如，苯肾上腺素，苯丙醇胺，伪麻黄碱，羟甲唑啉，肾上腺素，萘甲唑啉，塞洛唑啉，六氢脱氧麻黄碱，或者左旋脱氧麻黄碱)；止咳药(例如，可待因，羟基可待因，carmiphen，喷拖维林，或者dextramethorphan)；利尿剂；或者镇静性或者非镇静性抗组胺剂。
基质金属蛋白酶(MMP)是一类锌依赖性中性肽链内切酶家族，该家族能够降解基本上所有的基质组分。在药物学研究中具有超过20种基质金属蛋白酶调节制剂，其中几乎一半是针对癌症的。多伦多大学的研究人员已经报道，组蛋白脱乙酰基酶调节基质金属蛋白酶在3T3细胞中的表达以及活性。具体而言，曲古抑菌素A(TSA)对于组蛋白脱乙酰基酶的抑制已经表现出能够预防肿瘤的形成和转移，降低mRNA以及明胶酶A(基质金属蛋白酶2；IV类胶原酶)的酶谱活性，所述明胶酶A是一种基质金属蛋白酶，其本身暗含于肿瘤的形成和转移过程中(参见Ailenberg M.，Silverman M.于2002年在Biochem Biophys ResCommun.《生物化学和生物物理学研究通讯》298：110-115中发表的文章)。在Young D.A.等人于2005年在ArthritisResearch&Therapy《关节炎的研究与治疗》7：503中发表了另外一篇新近的文章，讨论了组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)与基质金属蛋白酶(MMP)之间的关系。进一步的，组蛋白脱乙酰基酶与基质金属蛋白酶之间具有的共性是它们的锌结合功能。因此，在本发明的一个方面，本发明所述化合物可以被用作基质金属蛋白酶抑制剂，并且可以被用于治疗与基质金属蛋白酶的异常调节相关的疾病。已知基质金属蛋白酶的过表达以及活化能够诱导组织损坏，并且还与许多特异性疾病相关，所述的特异性疾病包括风湿性关节炎，牙周疾病，癌症以及动脉硬化症。
本发明所述化合物还可以被用来治疗涉及组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)的调节异常或者与组蛋白脱乙酰基酶的调节异常相关的疾病。已经表明或者已经已知有很多种疾病是至少部分由组蛋白脱乙酰基酶活性介导的，已知其中所述的组蛋白脱乙酰基酶活性在触发(trigger)疾病发病中发挥作用，或者已知或已经表明这些疾病的症状可以通过组蛋白脱乙酰基酶抑制剂进行缓解。预期能够使用本发明所述化合物进行顺利治疗的这种类型的疾病包括下述疾病但不局限于：抗增殖性疾病(例如，癌症)；神经衰退性疾病包括亨廷顿舞蹈症(Huntington’s disease)，多聚谷氨酰胺疾病，帕金森病，阿尔茨海默氏症，惊厥(Seizures)，纹状体黑质变性(Striatonigral degeneration)，进行性核上性麻痹，扭转性肌张力不全，痉挛性斜颈以及运动功能障碍，家族遗传性颤抖，注意力缺陷过动症，弥漫性路易体病，进行性核上性麻痹，皮克病，脑出血，原发性脊侧索硬化，脊骨肌肉萎缩，肌萎缩侧索硬化症，肥厚性间质性多发性神经病(Hypertrophic interstitialpolyneuropathy)，视网膜色素变性，遗传性视神经萎缩，遗传性痉挛性截瘫，进行性共济失调以及害羞拖拉者综合症(SDS)；代谢类疾病包括2型糖尿病；眼部变性疾病包括青光眼，老年黄斑变性，Rubeotic青光眼；炎性疾病和/或免疫系统疾病包括风湿性关节炎(RA)，骨关节炎，青少年慢性关节炎，移植物抗宿主病，牛皮癣，哮喘，脊柱关节病，克罗恩氏病，炎性肠病肠溃烂，酒精性肝炎，糖尿病，干燥综合症，多发性硬化症，强直性脊柱炎，膜性肾病，椎间盘源性痛，系统性红斑狼疮，与血管生成相关的疾病包括癌症，牛皮癣，风湿性关节炎；心理疾病包括双极性疾患，精神分裂症，狂躁症，抑郁症以及痴呆；心血管疾病包括心力衰竭，(心瓣)再狭窄以及动脉硬化；纤维化疾病包括肝纤维化症，囊肿性纤维化以及血管纤维瘤；感染性疾病包括真菌性感染，例如白色念珠菌，细菌性感染，病毒性感染，例如单纯疱疹，原生动物性感染，例如疟疾，利什曼原虫感染，布氏锥虫感染，弓形体病和球虫病(coccidlosis)以及造血疾病包括地中海贫血症，贫血症以及镰刀形红细胞贫血症。
在一个实施方式中，本发明所述化合物可以被用来诱导或者抑制细胞凋亡，所述的细胞凋亡是一种对于正常的发展和自我平衡而言至关重要的生理学细胞死亡过程。细胞凋亡途径的改变归因于各种不同人类疾病的发病机理。本发明所述化合物作为细胞凋亡调节剂，将能够有效的用于治疗细胞凋亡异常的多种人类疾病，包括癌症(特别是，但不局限于，卵泡淋巴瘤，p53变异引起的癌症，乳腺荷尔蒙依赖性肿瘤，前列腺癌以及卵巢癌，以及癌前病变例如家族性腺瘤性息肉病)，病毒性感染(包括，但不局限于，疱疹病毒，痘病毒，爱泼斯坦-巴尔二氏病毒，新德必斯病毒以及腺病毒)，自身免疫性疾病(包括，但不局限于，系统性狼疮，红斑，免疫调节的血管球性肾炎，风湿性关节炎，牛皮癣，炎性肠病，以及自身免疫性糖尿病)，神经衰退性疾病(包括，但不局限于，阿尔茨海默氏症，AIDS相关性痴呆，帕金森氏病，肌萎缩性侧索硬化症，色素性视网膜炎，脊骨肌肉萎缩，以及小脑衰退)，AIDS(获得性免疫缺陷综合症)，骨髓增生异常综合症，再生障碍性贫血症，缺血损伤性心肌梗塞，击打性再灌注损伤(stroke and reperfusion injury)，心律不齐，动脉硬化症，毒素诱发或者酒精诱发的肝病，血液疾病(包括，但不局限于，慢性贫血症以及再生障碍性贫血症)，肌肉与骨骼系统的衰退性疾病(包括，但不局限于，骨质疏松症以及关节炎)，阿司匹林敏感性鼻窦炎，囊肿性纤维化，多发性硬化症，肾病，以及癌性疼痛。
在一个方面，本发明提供了本发明所述化合物用于治疗和/或预防免疫应答或者免疫介导的应答以及疾病的用途，例如用于预防或者治疗由于人造移植材料、细胞、器官或组织或者有机移植材料、细胞、器官或组织的植入来取代所述组织的全部功能或者部分功能时所产生的排异反应(rejection)，所述组织是例如心脏，肾脏，肝脏，骨髓，角膜，脉管，肺脏，胰腺，肠，四肢，肌肉，神经组织，十二指肠，小肠，胰岛细胞，包括器官移植物等等；用以治疗或者预防移植物抗宿主病，自身免疫性疾病，例如风湿性关节炎，系统性红斑狼疮，甲状腺炎，桥本甲状腺炎，多发性硬化症，重症肌无力，I型糖尿病性葡萄膜炎，青少年发病型糖尿病或者近期发病型糖尿病，弥漫性甲状腺肿伴甲状腺功能亢进症(Graves disease)，牛皮癣，遗传性过敏性皮炎，克罗恩氏病，溃疡性结肠炎，脉管炎，自身抗体介导的疾病，再生障碍性贫血，伊文症侯群，自身免疫溶血性贫血症，以及类似疾病；并且进一步用于治疗感染性疾病引发的异常免疫应答和/或活化，例如外伤或者病原体诱导的免疫失调，包括例如，由B型肝炎以及C型肝炎感染、HIV(人类免疫缺陷病毒)、金黄色葡萄状球菌感染、病毒性脑炎、脓血症、寄生虫病引发的免疫失调，其中所述的伤害是炎性应答(例如，麻风病)所诱导的；用于预防或者治疗循环性疾病，例如动脉硬化，动脉硬化症，脉管炎，结节性多动脉炎以及心肌炎。除此之外，本发明可以用于预防/抑制与基因治疗处理相关的免疫应答，例如外源基因向自体细胞中的导入以及所述编码产物的表达。因此在一个实施方式中，本发明涉及治疗免疫应答疾病或障碍或者免疫调节性应答或障碍的方法，该方法包括为需要接受治疗的宿主施用治疗有效剂量的本发明所述化合物。
在一个方面，本发明提供了本发明所述化合物用于治疗各种神经衰退性疾病的用途，所述的神经衰退性疾病的非穷尽性列表包括：I.在不存在其他显著的神经病学迹象的情况下，由进行性痴呆表征的疾病，例如阿尔茨海默氏症；阿尔茨海默氏类型的老年痴呆症；以及皮克病(脑叶萎缩)；II.进行性痴呆与其他显著的神经病学迹象组合的综合症，例如A)主要发生在成人期的综合症(例如，亨廷顿舞蹈症，将共济失调和/或帕金森病与痴呆组合显现的多发性系统性萎缩症，进行性核上性麻痹(Steel-Richardson-Olszewski)，弥漫性路易体病，以及皮质基底节变性)；以及B)主要发生在儿童期或者青少年期的综合症(例如，哈勒沃登-施帕茨病以及进行性家族性阵挛性癫痫)；III.体态和运动逐步发展异常的综合症，例如震颤麻痹(帕金森病)，纹状体黑质变性，进行性核上性麻痹，扭转性肌张力异常(扭转性痉挛，变形性肌张力障碍)，痉挛性斜颈以及其他运动功能障碍，家族性震颤，以及抽动秽语综合症(Gilles de 1a Tourettesyndrome)；IV.进行性共济失调综合症例如小脑变性(例如，小脑皮层变性以及橄榄体脑桥小脑萎缩(OPCA))；以及脊髓小脑变性(Friedreich’s atazia及其相关障碍)；V.中枢自律神经系统失调综合症(害羞拖拉者综合症)；VI.不发生感官变化的肌肉无力以及萎缩综合症(运动神经元疾病例如肌萎缩性脊髓侧索硬化，脊骨肌肉萎缩(例如，婴儿期脊骨肌肉萎缩(克-霍夫曼症)，青少年脊骨肌肉萎缩(Wohlfart-Kugelberg-Welander)以及其他形式的家族性脊骨肌肉萎缩)，原发性侧索硬化症，以及遗传性痉挛性截瘫；VII.具有感官变化的肌肉物理以及萎缩综合症(进行性神经系统肌肉萎缩症；慢性家族性多发性神经病)例如腓骨肌肉萎缩症(查克特-玛丽-图斯病)，肥厚性间质性多发性神经病(德-索氏病)，以及其他各种类型的慢性进行性神经病；VIII.进行性视力损伤综合症例如视网膜色素变性(retinitis pigmentosa)，以及遗传性视神经萎缩(利伯病)。进一步的，本发明所述化合物也可以被用来进行染色质改造。
本发明包括含有如上所述的本发明所述化合物的药物可接受性盐的药物组合物。本发明还包括含有本发明所述化合物的水合物的药物组合物。所述术语“水合物”包括但不局限于半水合物，一水合物，二水合物，三水合物以及类似物。本发明进一步包括含有本发明所述化合物的任意固体或者液体实物形态的药物组合物。例如，所述化合物可以是晶体形式，无定形形式，或者具有任意的颗粒大小。所述颗粒可以是被微粉化的，或者被凝胶化的，微粒颗粒，粉末，油，油状悬浮液或者是其他任何类型的固体或者液体实物形态。
本发明所述化合物及其衍生物、片段、类似物、同系物(homologs)、药物可接受性盐或者水合物可以与药物可接受性载体或者赋形剂一同被制成适合于施用的药物组合物。这种组合物通常包括治疗有效剂量的如上所述的任何一种化合物，以及药物可接受性载体。优选的，当治疗癌症时，所述的有效剂量是能够有效的选择性的诱导适当的肿瘤细胞发生末端分化(terminaldifferentiation)的剂量，并且这一剂量低于能够在患者体内引发毒性的剂量。
本发明所述化合物可以以任何适当的方式进行施用，所述方式包括，但不局限于，非肠道、静脉内、肌肉内、皮下、灌输、口服、舌下腺、口腔、鼻腔、肺部、透皮、局部、阴道内、直肠内、，以及透粘膜的施用方式或者类似方式。局部施用还可以包括透皮给药形式的使用，例如透皮贴剂或者电离子渗入装置。药物剂型包括含有本发明所述化合物作为活性成分的固体、半固体或者液体剂型(片剂，小球剂，药片，胶囊，栓剂，霜剂，膏剂，气溶胶，粉末，液体，乳状液，悬浮液，糖浆，注射剂，等等)，可以依据给药形式选择适当的剂型。在一个实施方式中，所述药物组合物通过口服形式施用，并且因此将其配制成适合于口服给药的剂型，即，制备成固体或者液体剂型。适当的固体口服剂型包括片剂，胶囊剂，丸剂，颗粒剂，小球剂，袋装剂以及泡腾剂，粉末，以及类似剂型。适当的液体口服剂型包括溶液，悬浮液，分散液，乳状液，油以及类似剂型。在本发明的一个实施方式中，本发明所述组合物除含有上述活性化合物以及惰性载体或者稀释剂之外，还含有硬明胶胶囊。
通常用作载体或者稀释剂的任何惰性赋形剂都可以用于本发明所述制剂中，例如，胶体，淀粉，糖，纤维质原料，丙烯酸盐，或者上述物质的混合物。一种优选的稀释剂是微晶纤维素。所述组合物可以进一步含有裂解剂(例如，交联羧甲基纤维素钠)以及润滑剂(例如，硬脂酸镁)，并且还可以含有一种或者一种以上添加剂，所述的添加剂选自粘合剂，缓冲剂，蛋白酶抑制剂，表面活性剂，增溶剂，可塑剂，乳化剂，稳定剂，粘性增强剂，甜味剂，成膜剂，或者上述物质的任意组合。进一步的，本发明所述组合物可以以控释制剂或者立释制剂的形式存在。
对于液体剂型而言，药物学可接受性载体可以是水性或者非水性的溶液，悬浮液，乳状液或者油。非水性溶剂的例子是丙二醇，聚乙二醇，以及注射用有机酯例如油酸乙酯。水性载体包括水，乙醇/水溶液，乳状液或者悬浮液，包括生理盐水以及缓冲介质。油类的例子是石油，动物、植物或者人造来源的油，例如，花生油，大豆油，矿物油，橄榄油，向日葵油，以及鱼肝油。溶液或者悬浮液还可以包括下述组分：无菌稀释液例如注射用水，生理盐水溶液，不挥发性油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或者其他合成类溶剂；抗菌制剂例如苄甲醇或者对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂例如抗坏血酸或者重亚硫酸钠；螯合剂例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲剂例如醋酸盐，柠檬酸盐或者磷酸盐，以及用于调整紧张性(tonicity)的试剂例如氯化钠或者葡萄糖。可以使用酸或者碱对pH值进行调节，例如盐酸或者氢氧化钠。
除此之外，所述组合物可以进一步含有粘合剂(例如，阿拉伯胶，玉米淀粉，明胶，卡波姆，乙基纤维素，瓜尔胶，羟丙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，聚乙烯吡啶酮)，裂解剂(例如，玉米淀粉，马铃薯淀粉，褐藻酸，二氧化硅，交联羧甲基纤维素钠，交联聚乙烯吡啶酮，瓜尔胶，羟乙酸淀粉钠，Primogel)，不同pH以及离子强度的缓冲剂(例如，tris-HCL，醋酸盐，磷酸盐)，用来防止表面吸收的添加剂例如白蛋白或者明胶，清洁剂(例如，吐温20，吐温80，聚醚F68，胆汁酸盐)，蛋白酶抑制剂，表面活性剂(例如，月桂酸钠)，渗透促进剂，增溶剂(例如，甘油，聚乙二醇)，助流剂(例如，胶体二氧化硅)，抗氧化剂(例如，抗坏血酸，偏亚硫酸氢钠，丁基-羟基苯甲醚)，稳定剂(例如，羟丙基纤维素，羟丙基甲基纤维素)，粘度增强剂(例如，卡波姆，胶体二氧化硅，乙基纤维素，瓜尔胶)，甜味剂(例如，蔗糖，阿斯巴甜，柠檬酸)，风味剂(例如，薄荷油，水杨酸甲酯，或者香橙风味剂)，防腐剂(例如，硫柳汞，苄甲醇，甲酯)，润滑剂(例如，硬脂酸，硬脂酸镁，聚乙二醇，月桂酸钠)，流动助剂(例如，胶体二氧化硅)，可塑剂(例如，邻苯二甲酸乙酯，柠檬酸三乙酯)，乳化剂(例如，卡波姆，羟丙基纤维素，月桂酸钠)，聚合物涂层(例如，泊洛沙姆或者保丽视明)，涂层以及膜形成剂(例如，乙基纤维素，丙烯酸盐，聚甲基丙烯酸酯)和/或佐剂。
在一个实施方式中，将所述化合物与能够保护所述化合物避免从机体中快速消失的载体一同进行制备，所述载体是例如控释制剂，包括植入体以及微胶囊给药系统。可以使用生物可降解性、生物相容性聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯，聚酐，聚乙醇酸，胶原，聚原磷酯，以及聚乳酸。制备这类制剂的方法对于本领域技术人员而言将是显而易见的。这些原料也可以从Alza公司以及Nova(诺华)制药公司购买获得。脂质体悬浮液(包括以感染细胞为靶向的脂质体与单克隆抗体偶联从而导向病毒抗原)也可以作为药物可接受性载体。可以利用本领域技术人员已知的方法对其进行制备，例如，使用美国专利No.4522811中描述的方法。
制备以剂量单位(dosage unit)形式存在的口服组合物是尤其有利的，其方便施用并且保持了剂量的一致性。这里所说的剂量单位形式指的是适合以整体的剂量施用于接受治疗的宿主的物理上离散的剂量单位；每个单位含有预先设定数量的活性化合物，所述的量是经过计算得到的与所需要的药物学载体相关联的能够产生治疗功效的量。本发明所述剂量单位形式的具体值根据所述活性化合物的独特性质以及希望达到的具体治疗功效所指示，并且直接取决于所述活性化合物的独特性质以及希望达到的具体治疗功效，并且需要考虑这样的活性化合物的组合在对个体的治疗中所固有的局限性。
所述的药物组合物可以与给药说明书一同装入容器内、包裹内(pack)或者分液器内。
可以在连续几天至几年的时间内重复进行每日给药。口服治疗可以持续一周至所述患者的一生。优选在连续的五天内给药，在此之后对患者进行评价，以确定其是否需要进行进一步的给药。所述的给药可以是连续性的或者是间歇性的，例如，在一定的连续天数内治疗，随后停止一定时间。在治疗的第一天，可以通过静脉内给药的方式施用本发明所述化合物，在第二天以及随后的所有天进行口服给药。
含有活性成分的药物组合物的制备方法是本领域熟知的，例如，通过混合、造粒、或者压片方法。所述的活性治疗成分通常与药物可接受性载体进行混合，并且所述的药物可接受性载体与所述活性成分具有相容性。对于口服给药而言，将所述活性制剂与常规用于口服目的的添加剂进行混合，所述添加剂是例如溶媒，稳定剂，或者惰性稀释剂，并且通过常规方法将其转化成适合的给药形式，例如片剂，包衣片剂，硬明胶胶囊或者软明胶胶囊，水性溶液，酒精性溶液或者油溶液，以及如上详述的类似物。
施用于所述患者的本发明所述化合物的剂量低于能够在患者体内引发毒性的剂量。在某些实施方式中，施用于所述患者的所述化合物的剂量低于使所述患者血浆中所述化合物的浓度等于或者高于所述化合物毒性水平的浓度的剂量。优选的，将患者血浆中所述化合物的浓度保持在大约10nM。在一个实施方式中，将患者血浆中所述化合物的浓度保持在大约25nM。在一个实施方式中，将患者血浆中所述化合物的浓度保持在大约50nM。在一个实施方式中，将患者血浆中所述化合物的浓度保持在大约100nM。在一个实施方式中，将患者血浆中所述化合物的浓度保持在大约500nM。在一个实施方式中，将患者血浆中所述化合物的浓度保持在大约1000nM。在一个实施方式中，将患者血浆中所述化合物的浓度保持在大约2500nM。在一个实施方式中，将患者血浆中所述化合物的浓度保持在大约5000nM。根据本发明的精神，应当施用于患者的所述化合物的最佳剂量应当取决于所使用的具体化合物以及进行治疗的癌症的类型。
定义
下面给出的是用于描述本发明的各种术语的定义。这些定义适用于说明书以及权利要求中使用到的术语，除非在具体情况中特别限定，这些术语无论是单独出现还是作为更宽的定义的一部分出现，都具有下述定义。
“脂肪族基团”或者“脂肪族”指的是非芳香性半族，其可以是饱和的(例如，单键)或者含有一个或者多个不饱和单元(例如，双键和/或三键)。一个脂肪族基团可以是直链的、支链的或者环状的，含有碳、氢，或者任选的含有一个或者多个杂原子，并且可以是取代的或者是未被取代的。一个脂肪族基团优选含有大约1个至大约24个原子，更加优选含有大约4个至大约24个原子，更加优选具有大约4-12个原子，更典型的具有大约4个至大约8个原子。
所述术语“酰基”指的是氢，烷基，部分饱和或者全部饱和的环烷基，部分饱和或者全部饱和的杂环，芳基，以及异芳基取代的羰基基团。例如，酰基包括的基团是例如(C1-C6)链烷醇基(例如，甲酰基，乙酰基，丙酰基，丁酰基，戊酰基，己酰基，叔丁基酰基，等等)，(C3-C6)环烷基羰基(例如，环丙基羰基，环丁基羰基，环戊基羰基，环己基羰基，等等)，杂环羰基(例如，吡咯烷基羰基，吡咯烷基-2-酮-5-羰基，哌啶基羰基，哌嗪基羰基，四氢呋喃基羰基，等等)，芳酰基(例如，苯甲酰基)以及异芳酰基(例如，硫苯基-2-羰基，硫苯基-3-羰基，呋喃基-2-羰基，呋喃基-3-羰基，1H-吡咯基-3-羰基，苯并[b]硫苯基-2-羰基，等等)。除此之外，所述酰基基团中的烷基部分、环烷基部分、杂环部分、芳基部分以及异芳基部分可以是如上述相关定义中所描述的基团中的任意一种。当表示为“任选被取代”时，所述酰基基团可以是未被取代的或者是任选被一个或者多个取代基(通常情况下是一个至三个取代基)取代的，所述取代基各自独立的选自下述对“被取代的”的内容中定义的基团，或者所述酰基基团中的烷基部分、环烷基部分、杂环部分、芳基部分以及异芳基部分可以被上述内容中分别描述的取代基的优选列举以及更优选列举所取代。
为了简便，化学物质半族被定义为指的是在本领域技术人员明晓的适当结构的情况下，可以是单价的化学物质半族(例如，烷基，芳基，等等)，或者是多价的半族。例如，“烷基”半族可以指的是单价的自由基(例如，CH3-CH2-)，或者在其他情形下，一个二价的连接半族可以是“烷基”，在这种情形下本领域技术人员将理解所述的烷基是一个二价的自由基(例如，-CH2-CH2-)，其等价于所述术语“亚烃基”。类似的，在下述情形中，当需要存在二价半族并且将所述二价半族称为“烷氧基”、“烷氨基”、“芳氧基”、“烷基硫基”、“芳基”、“异芳基”、“杂环”、“烷基”、“烯基”、“炔基”、“脂肪族”、或者“环烷基”时，本领域技术人员将会明白所述术语“烷氧基”、“烷氨基”、“芳氧基”、“烷基硫基”、“芳基”、“异芳基”、“杂环”、“烷基”、“烯基”、“炔基”、“脂肪族”、或者“环烷基”指的是所述相应的二价半族。
所述术语“烷基”包含具有1个至大约20个碳原子的直链或者支链自由基，或者优选的，具有1个至大约12个碳原子。更加优选烷基自由基是“低级烷基”自由基，具有1个至大约10个碳原子。最优选的是具有1个至大约8个碳原子的低级烷基自由基。这类自由基的例子包括甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，异戊基，己基以及类似基团。
所述术语“烯基”包含具有至少一个碳-碳双键的2个至大约20个碳原子的直链或者支链自由基，或者优选的，具有2个至大约12个碳原子。更加优选烯基自由基是具有2个至大约10个碳原子的“低级烯基”自由基，并且更加优选具有大约2个至大约8个碳原子。烯基自由基的例子包括乙烯基，烯丙基，丙烯基，丁烯基以及4-甲基丁烯基。所述术语“烯基”以及“低级烯基”包含具有“顺式”或者“反式”结构的自由基，或者具有“E”以及“Z”结构的自由基。
所述术语“炔基”包含具有至少一个碳-碳三键的2个至大约20个碳原子的直链或者支链自由基，或者优选的，具有2个至大约12个碳原子。更加优选炔基自由基是“低级炔基”自由基，具有2个至大约10个碳原子，并且更加优选具有大约2个至大约8个碳原子。炔基自由基的例子包括炔丙基，1-丙炔基，2-丙炔基，1-丁炔基，2-丁炔基以及1-戊炔基。
所述术语“环烷基”包含具有3个至大约20个碳原子的饱和的碳环自由基。所述术语“环烷基”包含具有3个至大约12个碳原子的饱和的碳环自由基。更加优选环烷基自由基是“低级环烷基”自由基，具有3个至大约8个碳原子。这样的自由基的例子包括环丙基，环丁基，环戊基以及环己基。
所述术语“环烯基”包含具有3个至12个碳原子的部分不饱和的碳环自由基。含有两个双键(可以是共轭的或者不是共轭的)的部分不饱和碳环自由基的环烯基自由基可以被称为“环烷基二烯基(cycloalkyldienyl)”。更加优选环烯基自由基是“低级环烯基”自由基，具有4个至大约8个碳原子。这样的自由基的例子包括环丁烯基，环戊烯基以及环己烯基。
所述术语“烷氧基”包含直链或者支链的含氧自由基，所述每个含氧自由基具有一个有1个至大约20个碳原子的烷基部分，或者优选的，具有1个至大约12个碳原子。更加优选烷氧基自由基是“低级烷氧基”自由基，具有1个至大约10个碳原子，并且更加优选具有1个至大约8个碳原子。这样的自由基的例子包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，丁氧基以及叔丁氧基。
所述术语“烷氧基烷基”包含连接有一个或者多个烷氧基自由基的烷基自由基，从而形成单烷氧基烷基以及二烷氧基烷基自由基。
所述术语“芳基”无论单独使用还是组合使用，指的是含有1个、两个或者3个环的碳环芳香族体系，其中所述的环可以是以不确定的方式连接在一起的，或者可以是稠和的。所述术语“芳基”包含芳香族自由基，例如苯基，萘基，四氢萘基，二氢化茚以及联苯。
所述术语“羰基”无论是单独使用还是与其他术语一同使用，例如“烷氧基羰基”，表示的都是(C＝O)。
所述术语“氨基甲酰基(carbonyl)”无论是单独使用还是与其他术语一同使用，例如“芳基氨基甲酰基烷基”，表示的都是C(O)NH。
所述术语“杂环”包含饱和的、部分不饱和的以及不饱和的含有杂原子的环形自由基，其也可以被相应的称为“杂环基”、“异环烯基”以及“异芳基”，其中所述的杂原子可以选自氮，硫以及氧。饱和的杂环自由基的例子包括饱和的、含有1个至4个氮原子的具有3个至6个成员的单杂环基团(例如，吡咯烷基，咪唑烷基，哌啶基，哌嗪基，等等)；饱和的、含有1个至2个氧原子以及1个至3个氮原子的具有3个至6个成员的单杂环基团(例如，吗啉基，等等)；饱和的、含有1个至2个硫原子以及1个至3个氮原子的具有3个至6个成员的单杂环基团(例如，噻唑烷基，等等)。部分不饱和的杂环自由基的例子包括二氢噻吩，二氢吡喃，二氢呋喃以及二氢噻唑。杂环自由基可以包括一个五价的氮，例如在四唑以及吡啶自由基中。所述术语“杂环”还包含与芳基或者环烷基自由基相互稠和的杂环自由基。这类稠和的双环自由基的例子包括苯并呋喃，苯并噻吩，以及类似自由基。
所述术语“异芳基”包含不饱和的杂环自由基。异芳基自由基的例子包括不饱和的、含有1个至4个氮原子的具有3个至6个成员的单杂环基团，例如，吡咯基，吡咯啉基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，嘧啶基，吡嗪基，哒嗪基，三唑基(例如，4H-1，2，4-三唑基，1H-1，2，3-三唑基，2H-1，2，3-三唑基，等等)，四唑基(例如，1H-四唑基，2H-四唑基，等等)等等；含有1个至5个氮原子的不饱和缩合杂环基团，例如，吲哚基，异吲哚基，氮茚基，苯并咪唑基，喹啉基，异喹啉基，吲唑基，苯并三唑基，四唑哒嗪基(例如，四唑[1，5-b]哒嗪基，等等)，等等；不饱和的、含有一个氧原子的具有3个至6个成员的单杂环基团，例如，吡喃基，呋喃基，等等；不饱和的、含有一个硫原子的具有3个至6个成员的单杂环基团，例如，噻吩基，等等；不饱和的、含有1个至2个氧原子以及1个至3个氮原子的具有3个至6个成员的单杂环基团，例如，恶唑基，异恶唑基，恶二唑基(例如，1，2，4-恶二唑基，1，3，4-恶二唑基，1，2，5-恶二唑基，等等)等等；含有1个至2个氧原子以及1个至3个氮原子的不饱和缩合杂环基团(例如，苯并恶唑基，苯并恶二唑基，等等)；不饱和的、含有1个至2个硫原子以及1个至3个氮原子的具有3个至6个成员的单杂环基团，例如，噻唑基，噻二唑基(例如，1，2，4-噻二唑基，1，3，4-噻二唑基，1，2，5-噻二唑基，等等)等等；含有1个至2个硫原子以及1个至3个氮原子的不饱和缩合杂环基团(例如，苯并噻唑基，苯并噻二唑基，等等)以及类似自由基。
所述术语“杂环烷基”包含杂环取代的烷基自由基。更加优选杂环烷基自由基是“低级杂环烷基”自由基，在所述杂环烷基自由基上具有1个至6个碳原子。
所述术语“烷基硫基”包含具有1个至大约10个与二价硫原子相互连接的碳原子的直链或者支链的烷基自由基。优选烷基硫基自由基中的烷基自由基具有1个至大约20个碳原子，或者优选具有1个至大约12个碳原子。更加优选烷基硫基自由基具有的烷基自由基是“低级烷基硫基”自由基，具有1个至大约10个碳原子。最优选的烷基硫基自由基具有1个至大约8个碳原子的低级烷基自由基。这样的低级烷基硫基自由基的例子是甲硫基，乙硫基，丙硫基，丁硫基以及己硫基。
所述术语“芳烷基”或者“芳基烷基”包含芳基取代的烷基自由基，例如苯甲基，二苯甲基，三苯甲基，苯乙基，以及二苯乙基。
所述术语“芳氧基”包含通过一个氧原子与其他自由基相互连接的芳基自由基。
所述术语“芳烷氧基”或者“芳基烷氧基”包含通过一个氧原子与其他自由基相互连接的芳基烷基自由基。
所述术语“氨基烷基”包含用氨基自由基进行取代的烷基自由基。优选的氨基烷基自由基中的烷基自由基具有大约1个至大约20个碳原子，或者优选具有1个至大约12个碳原子。更加优选氨基烷基自由基是“低级氨基烷基”，其中的烷基自由基具有1个至大约10个碳原子。最优选的氨基烷基自由基所具有的低级烷基自由基具有1个至8个碳原子。这类自由基的例子包括氨基甲基，氨基乙基，以及类似自由基。
所述术语“烷基氨基”表示的是被一个或者两个烷基自由基所取代了的氨基基团。优选的烷基氨基自由基所具有的烷基自由基具有大约1个至大约20个碳原子，或者优选具有1个至大约12个碳原子。更加优选的烷基氨基自由基是“低级烷基氨基”，其中的烷基自由基具有1个至大约10个碳原子。最优选的烷基氨基自由基所具有的低级烷基自由基具有1个至大约8个碳原子。适当的低级烷基氨基可以是单取代的N-烷基氨基或者二取代的N，N-烷基氨基，例如N-甲基氨基，N-乙基氨基，N，N-二甲基氨基，N，N-二乙基烷基或者类似自由基。
所述术语“连接基团(linker)”指的是连接化合物的两部分的有机半族。连接基团通常包括直键或者原子例如氧原子或者硫原子，例如NR8，C(O)，C(O)NH，SO，SO2，SO2NH的单元，或者原子链，例如被取代的或者未被取代的烷基，被取代的或者未被取代的烯基，被取代的或者未被取代的炔基，芳基烷基，芳基烯基，芳基炔基，异芳基烷基，异芳基烯基，异芳基炔基，杂环烷基，杂环烯基，杂环炔基，芳基，异芳基，杂环，环烷基，环烯基，烷基芳基烷基，烷基芳基烯基，烷基芳基炔基，烯基芳基烷基，烯基芳基烯基，烯基芳基炔基，炔基芳基烷基，炔基芳基烯基，炔基芳基炔基，烷基异芳基烷基，烷基异芳基烯基，烷基异芳基炔基，烯基异芳基烷基，烯基异芳基烯基，烯基异芳基炔基，炔基异芳基烷基，炔基异芳基烯基，炔基异芳基炔基，烷基杂环烷基，烷基杂环烯基，烷基杂环炔基，烯基杂环烷基，烯基杂环烯基，烯基杂环炔基，炔基杂环烷基，炔基杂环烯基，炔基杂环炔基，烷基芳基，烯基芳基，炔基芳基，烷基异芳基，烯基异芳基，炔基异芳基，其中一个或者多个亚甲基可以被O，S，S(O)，SO2，N(R8)，C(O)中断或者终止，被取代的或者未被取代的芳基，被取代的或者未被取代的异芳基，被取代的或者未被取代的杂环；其中R8是氢，酰基，脂肪族或者被取代的脂肪族。在一个实施方式中，所述的连接基团B具有1个至24个原子，优选具有4个至24个原子，优选具有4个至18个原子，更加优选具有4个至12个原子，并且最优选具有大约4个至10个原子。
所述术语“被取代的”指的是用指定的取代基取代给定结构中的一个或者多个氢自由基，所述指定的取代基包括，但不局限于：卤素，烷基，烯基，炔基，芳基，杂环，硫基，烷基硫基，芳基硫基，烷基硫基烷基，芳基硫基烷基，烷基磺酰基，烷基磺酰基烷基，芳基磺酰基烷基，烷氧基，芳氧基，芳基烷氧基，氨基羰基，烷基氨基羰基，芳基氨基羰基，烷氧基羰基，芳氧基羰基，卤素烷基，氨基，三氟甲基，氰基，硝基，烷基氨基，芳基氨基，烷基氨基烷基，芳基氨基烷基，氨基烷基氨基，羟基，烷氧基烷基，羧基烷基，烷氧基羰基烷基，氨基羰基烷基，酰基，芳基烷氧基羰基，羧酸，磺酸，磺酰基，磷酸，芳基，异芳基，杂环，以及脂肪族。可以理解的是，上述取代基可以进一步被取代。
这里所使用的所述术语“卤素”指的是选自氟，氯，溴以及碘的原子。
这里所使用的所述术语“异常增殖”指的是不正常的细胞生长。
所述短语“协同治疗”包括使用能够减小或者避免由本发明所述的组合治疗而带来的副作用的制剂对宿主进行治疗，所述制剂包括，但不局限于，例如，减小抗肿瘤药物的毒性效应的制剂，例如，骨再吸收抑制剂，心脏保护制剂；预防或者减轻由化疗、放射性疗法或者手术带来的恶心以及呕吐的发生的制剂；或者降低由施用骨髓抑制性抗肿瘤药物而带来的感染的发生的制剂。
这里所使用的所述术语“血管生成”指的是血管的形成。具体的，血管生成是一个多步骤的过程，其中，内皮细胞基质性降解，并且侵入其自身的基底膜，透过间隙基质接近血管生成刺激点，增殖到最接近移动尖端，形成血管，并且重新结合在新合成的基底膜上(参见Folkman等人(于1985年)在Adv.Cancer.Res《高等癌症研究》第43卷第175-203页发表的文章)。抗血管生成制剂干扰这一过程。干扰这些步骤中的某些步骤的制剂的例子包括血小板反应素-1，血管抑素，内皮抑素，干扰素α以及例如基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂这样的化合物，所述化合物阻断用于清除并且建立新生成血管的途径的酶的活性；例如αvβ.3抑制剂这样的化合物，所述化合物对被血管细胞用来桥接母本血管与肿瘤的分子产生干扰；例如特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂这样的制剂，所述制剂能够阻止形成新血管的细胞生长；以及同时对上述靶向中的几个产生干扰的基于蛋白的化合物。
这里所使用的所述术语“细胞凋亡”指的是在细胞的年龄以及细胞健康和症状状态的指示下，由机能正常的人类细胞以及动物细胞的细胞核发出信号的程序细胞死亡。“细胞凋亡诱导剂”引发程序细胞死亡的过程。
这里所使用的所述术语“癌症”表示的是一类疾病或者病症，所述疾病或者病症的特征在于细胞不受控制的分化以及这些细胞入侵其他组织的不受控制的能力，或者是通过入侵作用直接生长至相邻组织，或者通过转移作用被植入远端位点处。
所述术语“化合物”在这里被定义为包括具有本发明所列举的化学式的化合物的药物可接受性盐，溶剂化物，水合物，同质异像体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体以及类似物质。
所述术语“装置”指的是被设计成用以实现一个特定功能的任意器具，通常是机械的或者是电学的。
这里所使用的所述术语“发育异常”指的是不正常的细胞生长，并且通常指的是病理学者在活组织切片中识别出的癌前病变的最早形式。
这里所使用的所述术语“增生”指的是过度的细胞分化或者生长。
所述短语“免疫治疗剂”指的是通过接种作用将免疫供体例如另外的人或者动物的免疫性转移给宿主的制剂。所述术语包含血清或者γ球蛋白的使用，所述血清或者γ球蛋白含有由另外的个体或者动物所产生的执行抗体(performed antibodies)；非特异性系统性刺激；佐剂；活性特异性免疫治疗；以及过继免疫治疗。过继免疫治疗指的是利用包括血清或者γ球蛋白中的激活的淋巴细胞、转移因子、免疫RNA、或者抗体的宿主接种的疗法或者制剂对于疾病进行的治疗。
在肿瘤形成、肿瘤生长或者肿瘤细胞生长的情况中，所述术语“抑制”可以通过下述方面进行评价：对初级肿瘤或者次级肿瘤的出现的延迟，对初级肿瘤或者次级肿瘤的形成的减慢，对初级肿瘤或者次级肿瘤的发生的减少，对疾病的次级效应的严重程度的减缓或者降低，终止肿瘤的生长以及肿瘤的衰退，以及其他。本发明中所述的极端、完善的抑制指的是预防或者化学预防。
这里所使用的所述术语“转移”指的是癌症细胞从初始肿瘤位点经由血液以及淋巴导管进行的移动，在其他组织中形成癌症。转移同样是用于表示在一个远端位点生长的次级癌症的术语。
如这里使用的术语“赘生物”是指一种由过度的细胞分裂引起的不规则组织块。赘生物可以是良性的(非癌症)、或者是恶性的(癌症)，并且可以被叫做肿瘤。术语“肿瘤形成”是指导致肿瘤形成的病理过程。
这里所使用的所述术语“癌前(癌症前期)”指的是非恶性的病症，但是如果不对其进行治疗，则有可能转变为恶性。
所述术语“增殖”指的是细胞经受有丝分裂。
所述短语“放射性治疗制剂”指的是在肿瘤形成的治疗过程中所使用的电磁放射或者粒子放射。
这里所使用的所述术语“复发”指的是经历过一段康复时期后癌症的重新出现。这可能是归因于初始癌症中的细胞的不完全移除，并且可能在原位发生(初始癌症的相同位点)，在区域内发生(初始癌症的邻近，可能在淋巴结或者组织中)，和/或作为转移的结果而在远处发生。
所述术语“治疗”指的是对哺乳动物，包括人类进行医疗救助的任何方法、行动、施用、治疗或者类似手段，其目的在于直接或者间接的改善所述哺乳动物的病症。
所述术语“疫苗”包括诱导患者的免疫系统设定针对所述肿瘤的免疫应答的制剂，所述免疫应答是通过攻击表达肿瘤相关性抗原的细胞来进行的(Teas)。
在所述的治疗方法中，这里所使用的所述术语“目标化合物的治疗有效剂量”指的是目标化合物的剂量，当作为所期望的药剂方案的一部分进行释放时，该剂量带来例如细胞增殖速率的改变和/或分化状态的改变和/或细胞存活速率的改变，使其达到临床上可接受的标准。这一剂量可以进一步的在一定程度上缓解肿瘤疾病的一种或者一种以上症状，包括，但不局限于：1)癌症细胞数量的减少；2)肿瘤尺寸的减小；3)抑制(即，在一定程度上减慢，优选终止)癌症细胞向周边器官中的渗透；4)抑制(即，在一定程度上减慢，优选终止)肿瘤的转移；5)在一定程度上抑制肿瘤的生长；6)在一定程度上缓解或者减轻与所述病症相关的症状；和/或7)缓解或者减轻与抗肿瘤制剂的施用相关的副作用。
这里所使用的所述术语“药物可接受性盐”指的是在合理的医学判断范围之内、适合用于接触人类以及低等动物的组织、不具有不适当的毒性、刺激性、过敏性反应以及类似反应、并且相称具有合理的效益/风险比的盐类。药物可接受性盐是本领域熟知的。例如，S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Science《药物科学杂志》66：1-19(于1977年)中详细描述的药物可接受性盐类。所述盐类可以在本发明所述化合物的最终分离以及纯化过程中在原位(in situ)进行制备，或者通过将自由基官能团与适当的有机酸或者无机酸进行反应来单独进行制备。药物可接受性非毒性酸加成盐的例子包括，但不局限于，氨基基团与无机酸形成的盐类、与有机酸形成的盐类、或者使用本领域所使用的其他方法例如离子交换法形成的盐类，其中所述的无机酸是例如盐酸，氢溴酸，磷酸，硫酸以及高氯酸，所述的有机酸是例如醋酸，马来酸，酒石酸，柠檬酸，琥珀酸，乳糖酸或者丙二酸。其他药物可接受性盐类包括，但不局限于，己二酸盐，藻酸盐，抗坏血酸盐，天冬氨酸盐，苯磺酸盐，安息香酸盐，硫酸氢盐，硼酸盐，丁酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，柠檬酸盐，环戊基丙酸盐，二葡萄糖酸盐，十二烷基磺酸盐，乙基磺酸盐，甲酸盐，延胡索酸盐，葡庚糖酸盐，甘油磷酸盐，葡萄糖酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，氢碘酸盐，2-羟基-乙基磺酸盐，乳糖酸盐，乳酸盐，月桂酸盐，月桂醇硫酸盐，苹果酸盐，马来酸盐，丙二酸盐，甲基磺酸盐，2-萘基磺酸盐，尼克酸盐，硝酸盐，油酸盐，草酸盐，棕榈酸盐，双羟萘酸盐(pamoate)，pectinate，过硫酸盐，3-苯丙酸盐，磷酸盐，苦味酸盐，三甲基乙酸盐，丙酸眼，硬脂酸盐，琥珀酸盐，硫酸盐，酒石酸盐，硫氰酸盐，对甲苯磺酸盐，十一酸盐，戊酸盐以及类似盐类。代表性的碱金属盐或者碱土金属盐包括钠盐，锂盐，钾盐，钙盐，镁盐以及类似盐类。其他的药物可接受性盐类包括，如果适当的话，非毒性铵，季铵，以及通过相反电荷的离子形成的氨阳离子，所述相反电荷的离子是例如卤化物，氢氧化物，羧酸盐，硫酸盐，磷酸盐，硝酸盐，具有1个至6个碳原子的烷基，磺酸盐以及酰基磺酸盐。
这里所使用的所述术语“药物可接受性酯类”指的是在有机体内水解的酯类，并且包括那些在人体内容易分解以释放所述母体化合物或者其盐的酯类。适合的酯基团包括，例如，那些来自于药物可接受性脂肪族羧酸的酯基团，所述的脂肪族羧酸特别是链烷酸，链烯酸，环链烷酸以及双链烷酸，其中每个烷基或者烯基半族有利的具有不超过6个碳原子。具体的酯的例子包括，但不局限于，甲酸酯，乙酸酯，丙酸酯，丁酸酯，丙烯酸酯以及乙基琥珀酸酯。
这里所使用的所述术语“药物可接受性前体药物”指的是在合理的医学判断范围之内、适合用于接触人类以及低等动物的组织、不具有不适当的毒性、刺激性、过敏性反应以及类似反应、相称具有合理的效益/风险比、并且具有有效的预设用途的本发明所述化合物的前体药物，如果可能的话，也包括本发明所述化合物的两性离子形式。这里所使用的“前体药物”指的是在有机体内通过代谢方式(例如，通过水解)可以转化成本发明所述化合物的化合物。药物前体的不同形式是本领域已知的，例如，在Bundgaard(编辑)的Design of Prodrugs《前体药物的设计》，Elsevier(1985年)中所述的；在Widder等人(编辑)的Methodsin Enzymology《酶学方法》第4卷，Academic Press(学术出版社)(1985年)中所述的；在Krogsgaard-Larsen等人(编辑)的“Design and Application of Prodrugs《前体药物的设计与应用》”，Textbook of Drug Design and Development《药物设计与研究手册》第5章，113-191(1991年)中所述的；Bundgaard等人在Journalof Drug Deliver Reviews《药物释放评论杂志》8：1-38(1992年)中所述的；Bundgaard在J.of Pharmaceutical Science《药物科学杂志》77：285页至最后(1988年)中所述的；在Higuchi以及Stella(编辑)的Prodrugs as Novel Drug Delivery Systems《作为新的药物释放体系的前体药物》，American Chemical Society(美国化学协会)(1975年)中所述的；以及Bernard Testa&Joachim Mayer在“Hydrolysis In Drug And Prodrug Metabolism：Chemistry，Biochemistry And Enzymology《化学、生物化学以及酶学中药物与前体药物代谢中的水解》”，John Wiley and Sons有限公司(2002年)中所述的。
这里所使用的“药物可接受性载体”意在包括任意的以及全部的溶剂，分散介质，涂层，抗细菌以及抗真菌制剂，等渗以及吸收延迟制剂，以及类似制剂，其与药物的给药方式相一致，例如是无菌的非热原性水。适合的载体在最新版本的雷明顿药物科学(Remington’s Pharmaceutical Sciences)中有所描述，上述书籍是本领域标准的参考课本，其内容在此引入作为参考。这样的载体或者稀释剂的优选例子包括，但不局限于，水，生理盐水，罗格氏溶液，葡萄糖溶液，以及5％的人血清白蛋白。脂质体以及非水性溶媒例如不挥发性油也可以被使用。在药物学活性物质中可以使用的这类介质以及制剂是本领域熟知的。除了与所述活性化合物不相容的任何常规介质或者制剂之外，在所述组合物中使用上述介质以及制剂是可以预期的。辅助的活性化合物也可以被加入到所述组合物当中。
这里所使用的所述术语“癌前”指的是非恶性的病症，但是如果不对其进行治疗，则有可能转变为恶性。
这里所使用的所述术语“宿主“指的是动物。优选所述的动物是哺乳动物。更加优选所述的哺乳动物是人类。宿主还可以指的是，例如，狗，猫，马，牛，猪，豚鼠，鱼，鸟以及类似哺乳动物。
本发明所述化合物可以通过被追加适当的官能团而进行修饰，以增强其选择性的生物特性。这种修饰是本领域已知的，并且可以包括那些增加对一个给定生物体系(例如，血液，淋巴系统，中枢神经系统)的生物渗透性的修饰，增加口服可利用率的修饰，增加溶解性以允许进行注射给药的修饰，改变代谢的修饰以及改变排泄速率的修饰。
可以从反应混合液中分离出所述的合成化合物，并且通过某种方法将其进一步纯化，所述方法是例如柱层析，高效液相色谱，或者重结晶。本领域技术人员能够理解，合成本发明所述式中所示化合物的其他方法对于本领域普通技术人员而言将是显而易见的。此外，各种合成步骤可以以互换的次序或者顺序进行，从而制备所期望的化合物。本发明所描述的在合成所述化合物中使用到的合成性化学转化以及保护基团方法(保护以及去保护)是本领域已知的，并且包括，例如，那些在R.Larock，Comprehensive Organic Transformations《综合有机转化》，VCH出版社(1989年)中所描述的；T.W.Greene以及P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis《有机合成中的保护性基团》第二版，John Wileyand Sons(1991年)中所述的；L.Fieser以及M.Fieser，Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis《有机合成中的费舍尔以及 费舍尔试剂》，John Wiley and Sons(1995年)中所述的；以及上述文献的后期版本。
本发明所述的化合物含有一种或者一种以上立体异构形式，并且因而引发出对映异构体、非对映异构体、以及其他立体异构形式，根据绝对立体化学，对于氨基酸而言，这些立体异构形式可以被定义为(R)-或者(S)-，或者(D)-或者(L)-。本发明意在包括所有的这类可能的异构体，以及它们的外消旋体或者光学纯净形式。光学异构体可以利用上文描述的方法通过它们各自的光学活性前体进行制备，或者通过外消旋混合物的解析作用进行制备。所述的解析作用可以在解析试剂的存在下进行，通过色谱或者通过重复结晶或者通过这些技术的某种组合来完成，这些技术是本领域技术人员已知的。关于解析作用的其他细节可以在Jacques等人的Enantiomers，Racemates，and Resolutions(对 映异构体，外消旋体，以及解析作用)(John Wiley&Sons，1981年)中找到。当本发明中描述的化合物含有石蜡双键，其他不饱和键，或者其他几何对称中心时，除非另外指明，其意在表明所述化合物包括E几何异构体以及Z几何异构体，和/或顺式异构体以及反式异构体。同样的，所有的互变异构形式也意在被包括在内。这里出现的任何碳-碳双键的构型仅仅是为了方便而进行的选择，并不意在指定一种特定的构型，除非文章中这样声明；因此本发明随意描述为反式(trans)的碳-碳双键或者碳-杂原子双键可以是顺式的、反式的、或者是以任意比例混合的上述两种形式的混合物。
药物组合物
本发明所述的药物组合物包括与一种或者一种以上药物可接受性载体或者赋形剂配制在一起的治疗有效剂量的本发明所述化合物。
这里所使用的所述术语“药物可接受性载体或者赋形剂”指的是非毒性的、惰性固体，半固体或者液体填充物，稀释剂，胶囊化材料或者任何类型的配制辅助剂。能够作为药物可接受性载体的所述材料的某些例子是糖类例如乳糖，葡萄糖以及蔗糖；环糊精类例如α-环糊精，β-环糊精以及γ-环糊精；淀粉类例如玉米淀粉以及马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物例如羧甲基纤维素钠，乙基纤维素以及纤维素乙酯；粉末状黄芪胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂例如可可油以及栓蜡；油类例如花生油，棉花籽油，红花油，芝麻油，橄榄油，玉米油以及大豆油；乙二醇类例如丙二醇；酯类例如油酸乙酯以及月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂例如氢氧化镁以及氢氧化铝；褐藻酸；非热原性水；等渗生理盐水；罗格氏溶液；普通酒精，以及磷酸缓冲溶液，以及其他非毒性兼容性润滑剂例如十二烷基硫酸钠以及硬脂酸镁，以及着色剂，释放剂，涂层剂，甜味剂，风味剂以及香味剂，防腐剂以及抗氧化剂也可以存在于本发明所述组合物中，根据配方设计师的判断进行选择。
本发明所述的药物组合物可以通过口服，肠胃外，通过吸入喷雾，局部，直肠内，鼻腔内，口腔内，阴道内或者经由灌注泵来进行给药，优选通过口服给药或者通过注射给药。本发明所述的药物组合物可以含有任意常规的非毒性药物可接受性载体，佐剂或者溶媒。在某些情况中，可以利用药物可接受性酸、碱或者缓冲剂对所述制剂的pH进行调整，从而增强所述配制型化合物的稳定性或者其释放形式。这里所使用的所述术语肠胃外包括皮下，透皮，静脉内，肌肉内，关节内，动脉内，滑膜内，胸骨内，鞘内，病灶内以及颅内注射技术或者输液技术。
用于进行口服给药的液体剂型包括药物可接受性乳液，微乳液，溶液，悬浮液，糖浆以及酏剂。除了所述的活性化合物之外，所述的液体剂型形式可以含有本领域普遍使用的惰性稀释剂例如，水或者其他溶剂，增溶剂以及乳化剂例如普通酒精，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苯甲醇，苯甲酸苄酯，丙二醇，1，3-丁二醇，二甲基甲酰胺，油类(特别是，棉花籽油，落花生油，玉米油，胚芽油，橄榄油，蓖麻油，以及芝麻油)，丙三醇，四氢糠醇，聚乙二醇以及山梨聚糖的脂肪酸酯，以及上述物质的混合物。除了惰性稀释剂，所述的口服组合物还可以包括佐剂例如润湿剂，乳化剂以及悬浮剂，甜味剂，风味剂，以及香味剂。
注射型制剂，例如，无菌注射型水性悬浮液或者无菌注射型油性悬浮液，可以根据已知的技术通过适当的分散剂或者润湿剂以及悬浮剂来制备。所述的无菌注射型制剂还可以是无菌注射型溶液、悬浮液或者乳液，所述的溶液、悬浮液或者乳液溶解/悬浮于非毒性肠胃外可接受性稀释剂或者溶剂之中，所述的稀释剂或者溶剂是例如1，3-丁二醇。在所述的可接受性溶媒以及溶剂之中，可以使用的是水，罗格氏溶液，U.S.P以及等渗氯化钠溶液。除此之外，无菌的不挥发性油也通常被用来作为溶剂或者悬浮介质。为了达到这一目的，可以使用任何温和性的不挥发性油，包括合成的单甘油酯或者甘油二酯。除此之外，脂肪酸例如油酸也被用在注射型制剂中。
所述的注射型制剂可以是无菌的，例如，通过经由细菌截留型过滤器的过滤，或者通过加入以无菌固体组合物形式存在的无菌试剂来达到无菌目的，所述的无菌固体组合物在使用之前可以被溶解或者分散于无菌水或者其他无菌注射型介质中。
为了延长药物的功效，通常期望在皮下注射或者肌肉内注射之后减慢所述药物的吸收。这可以通过使用具有差的水溶性的晶体物质或者无定形物质的液体悬浮液来实现。那么，所述药物的吸收速率取决于其分解速率，分解速率继而可能取决于晶体大小以及晶体类型。或者，通过将所述的药物分解于或者悬浮于一种油溶媒中，来实现肠胃外给药的药物形式的延迟吸收。通过将所述药物在生物可降解性聚合物中形成微胶囊基质，来制备注射型储备形式(depot)，所述的生物可降解性聚合物是例如聚丙交酯-聚乙交酯。根据药物与聚合物的比例以及所使用到的具体聚合物的性质，可以控制所述药物的释放速率。其他生物可降解性聚合物的例子包括聚原酸酯以及聚酸酐。储备可注射型制剂还可以通过将所述药物包埋在脂质体或者微乳液中的方法进行制备，其中所述的脂质体或者微乳液与机体组织具有相容性。
用于进行直肠内给药或者阴道内给药的组合物优选是栓剂，其可以通过将本发明所述的化合物与适当的非刺激性赋形剂或者载体进行混合来制备，其中所述的非刺激性赋形剂或者载体是例如可可油，聚乙二醇或者栓蜡，上述物质在环境温度下为固体，而在机体温度下为液体，因此能够在直肠腔内或者阴道腔内溶化，并且释放所述活性化合物。
用于进行口服给药的固体药剂形式包括胶囊剂，片剂，丸剂，粉末剂，以及颗粒剂。在这些固体药剂形式中，所述的活性化合物与至少一种惰性的药物可接受性赋形剂或者载体例如柠檬酸钠或者磷酸氢钙进行混合，和/或还含有：a)填充剂或者补充剂例如淀粉，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露醇，以及硅酸，b)粘合剂例如，羧甲基纤维素，褐藻酸盐，明胶，聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖，以及阿拉伯树胶，c)保湿剂例如丙三醇，d)分解剂例如琼脂，碳酸钙，马铃薯淀粉或者木薯淀粉，褐藻酸，某些硅酸盐，以及碳酸钠，e)溶解阻滞剂例如石蜡，f)吸收促进剂例如季铵类化合物，g)润湿剂例如，鲸蜡醇以及硬脂酸单甘油酯，h)吸收剂例如高岭土以及斑脱土，以及i)润滑剂例如滑石，硬脂酸钙，硬脂酸镁，固体聚乙二醇，十二烷基硫酸钠，以及上述物质的混合物。当以胶囊剂、片剂以及丸剂形式存在时，所述药剂形式还可以包括缓冲剂。
类似类型的固体组合物也可以作为填充物被利用，将其包封于软填充以及硬填充的明胶胶囊中，其中使用这样的赋形剂，例如乳糖以及高分子量的聚乙二醇以及类似赋形剂。
可以在片剂、糖衣丸、胶囊剂、丸剂、以及颗粒剂的固体药剂形式外制备涂层或者外壳，例如肠衣涂层以及药物配制领域熟知的其他涂层。其中可以任选的含有遮光剂，并且其也可以是这样的一种组合物：任选的以一种延迟的方式仅仅，或者优先，在所述肠道内的某一部分释放所述的活性成分。可以使用的包埋组合物的例子包括聚合物质以及蜡。
用于进行局部给药或者透皮给药的本发明所述化合物的药剂形式包括药膏剂，贴剂，霜剂，乳液，啫喱，粉末剂，溶液，喷雾剂，吸入剂或者片剂。所述的活性组分在无菌条件下与药物可接受性载体、以及可能需要的任意必需的防腐剂或者缓冲剂进行混合。眼科制剂，滴耳液，眼部药膏，粉末以及溶液也被预期的包括在本发明所述的范围之内。
除了本发明所述的活性化合物之外，所述的药膏剂、贴剂、霜剂以及啫喱可以含有赋形剂例如动物脂肪以及植物脂肪，油，蜡，石蜡，淀粉，黄芪胶，纤维素衍生物，聚乙二醇，硅树脂，斑脱土，硅酸，滑石以及氧化锌，或者上述物质的混合物。
除了本发明所述的化合物之外，粉末剂以及喷雾剂可以含有赋形剂例如乳糖，滑石，硅酸，氢氧化铝，硅酸钙以及聚酰胺粉末，或者是这些物质的混合物。喷雾剂中还可以含有惯用的推进剂例如氯氟烃。
透皮贴剂具有的额外的优点是为化合物在所述机体内的释放提供控制。这样的药剂形式可以通过将所述化合物分解于或者分散于所述适当的介质中来制备。还可以使用吸收促进剂，以增加所述化合物透过皮肤的通量。可以通过提供一种速率控制膜或者通过将所述化合物分散于一种聚合物基质或者胶体中的方式来控制所述的速率。
为了在肺部进行释放，配制本发明所述的治疗组合物并且使其以固体微粒或者液体微粒的形式通过直接给药的方式向所述的患者施用，例如，通过呼吸系统的吸入作用。为实现本发明而制备的固体微粒或者液体微粒形式的所述活性化合物包括具有可呼吸的尺寸的粒子：即，足够小到能够通过吸入作用穿越口部以及喉部并且进入支气管以及肺泡的颗粒的大小。气雾剂式的治疗剂的释放，特别是气雾剂式的抗生素的释放是本领域已知的(参见，例如VanDevanter等人的美国专利No.5767068，Smith等人的美国专利No.5508269，以及Montgomery的WO98/43650，上述全部文献的内容在此引入作为参考)。关于抗生素的肺部释放的讨论也可以在美国专利No.6014969中找到，在此引入作为参考。
本发明所述化合物的“治疗有效剂量”指的是为被治疗的宿主提供治疗效应的所述化合物的量，其具有适用于任何医学治疗的合理的效益/风险比。所述的治疗效应可以是客观的(即，通过某些试验或者标记测量的)或者是主观的(即，宿主产生了有效应的迹象或者感觉)。上面所描述的所述化合物的有效剂量可以在大约0.1毫克/千克至大约500毫克/千克的范围之内，优选在大约1至大约50毫克/千克的范围之内。有效剂量将根据给药途径以及与其他试剂的共同使用的可能性而发生改变。然而，可以理解的是，本发明所述化合物以及组合物的每日总剂量将由主治医师在合理的医学判断范围之内决定。对于任意特定的患者而言，所述的具体的治疗有效剂量水平将取决于多种因素，包括准备治疗的病症以及所述病症的严重程度；所使用的具体化合物的活性；所使用的具体组合物；所述患者的年龄，体重，常规健康，性别以及饮食；给药时间，给药途径，以及所使用的具体化合物的排泄速率；治疗周期；与所使用的具体化合物组合使用或者同时期使用的药物；以及医疗领域熟知的其他因素。
以单一剂量或者分解剂量施用给人或者其他动物的本发明所述化合物的每日总剂量可以是，例如，从0.01至50毫克/千克体重，或者更加通常从0.1至25毫克/千克体重。单一剂量的组合物可以含有这样的剂量，或者含有该剂量的约数剂量，从而组成所述的每日剂量。一般而言，根据本发明所述的治疗方案包括以单一剂量或者多重剂量形式每天给需要进行这类治疗的患者施用大约10毫克至大约1000毫克本发明所述的化合物。
本发明所述的所述化合物的制剂可以，例如，通过静脉内、动脉内、真皮下、腹膜内、肌肉内、或者皮下途径注射给药；或者通过口服、口腔内、鼻腔内、透粘膜、局部形式、通过眼科制剂的形式、或者通过吸入剂的形式给药，所述的给药剂量在大约0.1至大约500毫克/千克体重的范围之内，或者在1毫克至1000毫克/剂量的范围之内，每4小时至120小时，或者根据所使用的具体药物的要求确定剂量。本发明所述的方法预期使用有效剂量的化合物或者化合物的组合物能够达到所期望的或者所声称的效应。典型的，本发明所述的药物组合物将以每天大约1次至大约6次的频率施用，或者以连续的输液形式施用。这样的给药形式可以用来作为慢性治疗或者急性治疗。能够与药物学赋形剂或者载体进行组合以形成单一剂量的所述活性成分的量将根据被治疗的宿主以及具体的给药方式而发生改变。一个典型的制剂将含有大约5％至大约95％的活性化合物(重量/重量)。或者，这样的制剂可能含有大约20％至大约80％的活性化合物。
可能需要低于或者高于上文所述剂量的剂量。对于任意特定的患者而言，具体的剂量以及治疗方案将取决于多种因素，包括所使用的具体化合物的活性，所述患者的年龄、体重、常规健康状况、性别、饮食，给药时间，排泄速率，药物组合，所述疾病、病症或者症状的严重程度以及过程，所述患者对于所述疾病、病症或者症状的处置，以及所述治疗医师的判断。
当患者的病症改善时，如果需要，可以施用维持剂量的本发明所述的化合物、组合物或其组合。随后，给药的剂量或者频率，或者给药的剂量以及频率可以被降低，作为其症状的函数，降低至当所述症状已经被缓解至所期望的水平时，能够保持这种改善的状况的水平。然而，当疾病的症状出现任何的复发时，患者可以要求在一段长的时间内接受间歇性的治疗。
合成方法以及实施例
本发明所述的化合物以及方法将通过下面的代表性的合成方案以及实施例更好的被理解，所述的代表性的合成方案以及实施例仅仅意在进行阐述，并不构成对本发明的范围的限制。对于所述公开的实施方式的各种改变以及修饰对于本领域技术人员而言将是显而易见的，并且这些改变以及修饰包括，但不局限于，在不背离本发明所述的实质以及后附的权利要求的范围的前提下，那些涉及本发明所述的化学结构、取代基、衍生物、制剂和/或方法的改变以及修饰。
第一部分：
表1-A
Figure G2007800418082D00962
Figure G2007800418082D00971
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Figure G2007800418082D01151
方案1
方案2
方案3
Figure G2007800418082D01201
方案4
Figure G2007800418082D01211
方案5
Figure G2007800418082D01212
方案6
Figure G2007800418082D01221
方案7
Figure G2007800418082D01231
方案9
Figure G2007800418082D01232
方案10
Figure G2007800418082D01233
方案11
Figure G2007800418082D01241
方案12
Figure G2007800418082D01242
方案13
Figure G2007800418082D01251
方案14
Figure G2007800418082D01261
方案15
Figure G2007800418082D01271
实施例1：2-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-羟基乙酰胺(化合物1)的制备方法
步骤1a.6，7-二甲氧基喹唑啉基-4(3氢)-酮(化合物0102)
将2-氨基-4，5-二甲氧基苯甲酸甲酯0101(2.1克，10毫摩)、甲酸铵(0.63克，10毫摩)以及甲酰胺(7毫升)组成的混合液搅拌，并且加热至190-200℃达2小时。之后将所述混合液冷却至室温。分离得到的沉淀，用水进行洗涤并且干燥，从而获得棕色固体形式的所述标题化合物0102(1.8克，84.7％)：LCMS：m/z207[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜.)δ3.87(s，3H)，3.89(s，3H)，7.12(s，1H)，7.43(s，1H)，7.97(s，1H)，12.08(bs，1H)。
步骤1b.6-羟基-7-甲氧基喹唑啉基-4(3氢)-酮(化合物0103)
向处于搅拌状态的甲基磺酸(68毫升)中分次加入6，7-二甲氧基喹唑啉基-4(3氢)-酮(0102)(10.3克，50毫摩)。随后，加入L-甲硫胺酸(8.6克，57.5毫摩)，并且将得到的混合液加热至150-160℃达5小时。将所述混合液冷却至室温，并且将其倒入冰水混合液(250毫升)中。通过加入氢氧化钠水溶液(40％)对所述混合液进行中和。分离得到的沉淀，用水进行洗涤并且干燥，从而获得灰色固体形式的标题化合物0103(10克，粗产物)：LCMS：m/z 193[M+1]+。
步骤1c.3，4-二氢-7-甲氧基-4-氧代喹唑啉基-6-基乙酸(化合物0104)
将6-羟基-7-甲氧基喹唑啉基-4(3氢)-酮(0103)(10克，粗产物)、无水醋酸(100毫升)以及吡啶(8毫升)组成的混合液进行搅拌，并且加热回流3小时。将所述混合液冷却至室温，并且将其倒入冰水混合液(250毫升)中。分离得到的沉淀，并且干燥从而获得灰色固体形式的所述标题产物0104(5.8克，两个步骤的总产率50％)：LCMS：m/z 235[M+1]+；1H NMR(氘代氯仿.)δ2.27(s，3H)，3.89(s，3H)，7.28(s，1H)，7.72(s，1H)，8.08(d，1H)，12.20(bs，1H)。
步骤1d.4-氯-7-甲氧基喹唑啉基-6-基乙酸(化合物0105)
将3，4-二氢-7-甲氧基-4-氧代喹唑啉基-6-基乙酸(0104)(2.0克，8.5毫摩)以及三氯氧磷(20毫升)组成的混合液进行搅拌，并且加热回流3小时。当得到澄清溶液时，在减压条件下除去过量的三氯氧磷。将得到的残余物溶解于二氯甲烷(50毫升)中，并且使用碳酸氢钠水溶液(20毫升x2)以及盐水(20毫升x1)对得到的有机层进行洗涤，并且通过硫酸镁进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得黄色固体形式的所述标题产物0105(1.4克，65％)：LCMS：m/z 249[M+1]+；1H NMR(氘代氯仿.)
Figure G2007800418082D01291
2.40(s，3H)，4.03(s，3H)，7.44(s，1H)，7.90(s，1H)，8.95(bs，1H)。
步骤1e.4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基盐酸乙酯(化合物0108)
将4-氯-7-甲氧基喹唑啉基-6-基乙酸(0105)(1.3克，5.1毫摩)以及存在于异丙醇(45毫升)中的3-氯-4-氟苯胺0106(1.5克，10.2毫摩)组成的混合液进行搅拌，并且加热回流3小时。将得到的混合液冷却至室温，并且分离得到的沉淀。随后，将得到的固体干燥，从而获得淡黄色固体形式的所述标题化合物0108(1.6克，79％)：LCMS：m/z 362[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜.)δ2.36(s，3H)，3.98(s，3H)，7.49(s，1H)，7.52(d，1H)，7.72(m，1H)，8.02(dd，1H)，8.71(s，1H)，8.91(s，1H)，11.4(bs，1H)。
步骤1f.4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-醇(化合物0109)
将化合物(0107)(1.41克，3.5毫摩)、一水合氢氧化锂(0.5克，11.7毫摩)的甲醇(100毫升)溶液以及水(100毫升)组成的混合液在室温下搅拌0.5小时。通过加入稀释的乙酸中和所述的混合液。分离得到的沉淀，并且进行干燥，从而获得灰色固体形式的所述标题化合物0109(1.06克，94％)：LCMS：m/z320[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜.)δ3.99(s，3H)，7.20(s，1H)，7.38(t，1H)，7.75(s，1H)，7.81(m，1H)，8.20(m，1H)，8.46(s，1H)，9.46(s，1H)，9.68(s，1H)。
步骤1g.2-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)乙酸乙酯(化合物0110-1)
将化合物0109(300毫克，0.94毫摩)与2-溴乙酸乙酯(163毫克，0.98毫摩)以及存在于N，N-二甲基甲酰胺(6毫升)中的碳酸钾(323毫克，2.35毫摩)组成的混合液进行搅拌，并且加热至40℃保持30分钟。利用薄层层析法(TLC)对上述反应过程进行监控。过滤得到的混合液。在减压条件下浓缩滤液。使用二乙醚对得到的残余物进行洗涤，并且干燥，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物0110-1(280毫克，74％)：LCMS：m/z406[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜.)δ1.23(t，3H)，3.96(s，3H)，4.20(q，2H)，4.95(s，2H)，7.24(s，1H)，7.44(t，1H)，7.75(m，1H)，7.82(s，1H)，8.10(dd，1H)，8.51(s，1H)，9.54(s，1H)。
步骤1h.2-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基乙酰胺(化合物1)
在0℃下，向处于搅拌状态的盐酸羟胺(4.67克，67毫摩)的甲醇(24毫升)溶液中加入氢氧化钾(5.61克，100毫摩)的甲醇(14毫升)溶液。在加入之后，在0℃下将得到的混合液搅拌30分钟，并且允许其在低温下放置。分离由此得到的沉淀，并且处理得到的溶液从而得到游离的羟胺。
将上述新鲜制备的羟胺溶液(1.4毫升，2.4毫摩)放置于5毫升的长颈瓶中。向所述溶液中加入化合物0110-1(250毫克，0.6毫摩)，并且在0℃下搅拌10分钟，随后升至室温。利用薄层层析法(TLC)对上述反应过程进行监控。使用乙酸中和所述的混合液。在减压条件下浓缩所述混合液。通过制备型高效液相色谱(HPLC)对得到的残余物进行纯化，从而得到灰色固体形式的所述标题化合物1(50毫克，21％)：LCMS：m/z 393[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜.)δ3.96(s，3H)，4.62(s，2H)，7.24(s，1H)，7.45(t，1H)，7.78(m，1H)，7.86(s，1H)，8.10(dd，1H)，8.52(s，1H)，9.07(s，1H)，9.57(s，1H)，10.80(s，1H)。
实施例2：4-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-羟基丁酰胺(化合物3)的制备方法
步骤2a.4-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)丁酸乙酯(化合物0110-3)
制备出的所述标题化合物0110-3是黄色固体形式(220毫克，80.5％)，是由步骤1f得到的化合物0109(200毫克，0.63毫摩)以及4-溴丁酸乙酯(135毫克，0.69毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：m/z 434[M+1]+；1H NMR(氘代氯仿.)δ1.36(t，3H)，2.23(m，2H)，2.57(t，2H)，4.03(s，3H)，4.32(m，4H)，7.15(t，1H)，7.25(m，1H)，7.87(s，1H)，8.00(m，2H)，8.15(bs，1H)，8.57(s，1H)。
步骤2b.4-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基丁酰胺(化合物3)
制备出的所述标题化合物3是灰色固体形式(25毫克，12％)，是由化合物0110-3(200毫克，0.23毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：m/z421[M+1]+；1H NMR(二甲基亚
Figure G2007800418082D01313
δ2.06(m，2H)，2.22(t，2H)，3.95(s，3H)，4.15(t，2H)，7.21(s，1H)，7.43(t，1H)，7.83(s，2H)，8.14(dd，1H)，8.51(s，1H)，8.75(s，1H)，9.56(s，1H)，10.50(s，1H)。
实施例3：7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-羟基己酰胺(化合物5)的制备方法
步骤3a.6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)己酸乙酯(化合物0110-5)
制备出的所述标题化合物0110-5是黄色固体形式(510毫克，68％)，是由步骤1f得到的化合物0109(510毫克，1.6毫摩)以及6-溴己酸乙酯(430毫克，1.9毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：m/z 462[M+1]+；1H NMR(氘代氯仿
Figure G2007800418082D01321
δ1.24(t，3H)，1.55(m，2H)，1.74(m，2H)，1.91(m，2H)，2.38(m，2H)，3.97(s，3H)，4.13(m，4H)，7.15(t，1H)，7.25(m，2H)，7.60(m，1H)，7.86(m，1H)，7.91(dd，1H)，8.61(s，1H)。
步骤3b.7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基己酰胺(化合物5)
制备出的所述标题化合物5是灰色固体形式(100毫克，34％)，是由化合物0110-5(305毫克，0.66毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点206.6～207.1℃(分解)；LCMS：m/z 449[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜.)δ1.44(m，2H)，1.64(m，2H)，1.82(m，2H)，1.99(t，2H)，3.93(s，3H)，4.12(t，2H)，7.19(s，1H)，7.43(t，1H)，7.79(m，2H)，8.12(dd，1H)，8.49(s，1H)，8.68(s，1H)，9.53(s，1H)，10.37(s，1H)。
实施例4：7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物6)的制备方法
步骤4a.7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0110-6)
制备出的所述标题化合物0110-6是黄色固体形式(390毫克，53％)，是由步骤1f得到的化合物0109(512毫克，1.6毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(438毫克，1.8毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：m/z 476[M+1]+；1H NMR(氘代氯仿.)δ1.24(t，3H)，1.43(m，4H)，1.66(m，2H)，1.88(m，2H)，2.32(t，2H)，3.97(s，3H)，4.07(t，2H)，4.12(q，2H)，7.15(t，1H)，7.23(t，2H)，7.66(m，1H)，7.75(m，1H)，7.87(dd，1H)，8.65(s，1H)。
步骤4b.7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物6)
制备出的所述标题化合物6是灰色固体形式(80毫克，25％)，是由化合物0110-6(323毫克，0.68毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点180.8～182.3℃(分解)；LCMS：m/z 463[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜.)δ1.34(m，2H)，1.50(m，4H)，1.81(m，2H)，1.96(t，2H)，3.92(s，3H)，4.11(t，2H)，7.18(s，1H)，7.43(t，1H)，7.78(m，2H)，8.12(dd，1H)，8.48(s，1H)，8.64(s，1H)，9.50(s，1H)，10.33(s，1H)。
实施例5：2-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-羟基乙酰胺(化合物7)的制备方法
步骤5a.4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基盐酸乙酯(化合物0111)
将4-氯-7-甲氧基喹唑啉基-6-基乙酸(0105)(2.6克，10.2毫摩)以及存在于异丙醇(100毫升)中的3-乙炔基苯胺(0107)(2.4克，20.5毫摩)组成的混合液进行搅拌，并且加热回流3小时。将得到的混合液冷却至室温。分离得到的沉淀，并且对其进行干燥，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物0111(2.6克，68％)：LCMS：m/z 334[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜.)δ2.39(s，3H)，3.17(s，1H)，3.98(s，3H)，7.35(m，1H)，7.40(s，1H)，7.47(m，1H)，7.72(m，1H)，7.90(s，1H)，8.57(s，1H)，8.87(s，1H)，10.99(bs，1H)。
步骤5b.4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-醇(化合物0112)
将化合物0111(2.0克，5.4毫摩)、一水合氢氧化锂(0.75克，17.9毫摩)的甲醇(100毫升)溶液以及水(100毫升)组成的混合液在室温下搅拌0.5小时。通过加入稀释的乙酸中和所述的混合液。分离得到的沉淀，并且对其进行干燥，从而获得灰色固体形式的所述标题化合物0112(1.52克，96％)：LCMS：m/z292[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜.)δ3.17(s，1H)，3.98(s，3H)，7.18(d，1H)，7.21(s，1H)，7.37(t，1H)，7.80(s，1H)，7.90(d，1H)，8.04(m，1H)，8.47(s，1H)，9.41(s，1H)，9.68(bs，1H)。
步骤5c.2-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)乙酸乙酯(化合物0113-7)
制备出的所述标题化合物0113-7是黄色固体形式(450毫克，69％)，是由化合物0112(500毫克，1.72毫摩)以及2-溴乙酸乙酯(300毫克，1.8毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：m/z 378[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜.)δ1.22(t，3H)，3.97(s，3H)，4.21(q，2H)，4.97(t，2H)，7.22(d，1H)，7.24(s，1H)，7.42(t，1H)，7.84(m，2H)，7.86(d，1H)，7.96(s，1H)，8.51(s，1H)。
步骤5d.2-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基乙酰胺(化合物7)
制备出的所述标题化合物7是灰色固体形式(100毫克，23％)，是由化合物0113-7(448毫克，1.2毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：m/z 365[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜.)δ 4.00(s，3H)，4.26(s，1H)，4.65(s，2H)，7.27(s，1H)，7.37(d，1H)，7.49(t，1H)，7.73(d，1H)，7.85(s，1H)，8.03(s，1H)，8.78(s，1H)，9.17(bs，1H)，10.60(s，1H)，10.85(s，1H)。
实施例6：4-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-羟基丁酰胺(化合物9)的制备方法
步骤6a.4-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)丁酸乙酯(化合物0113-9)
制备出的所述标题化合物0113-9是黄色固体形式(438毫克，59％)，是由化合物0112(500毫克，1.72毫摩)以及4-溴丁酸乙酯(349毫克，1.8毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：m/z 406[M+1]+；1H NMR(氘代氯仿.)δ1.37(t，3H)，2.34(m，2H)，2.56(t，2H)，3.07(s，1H)，4.03(s，3H)，4.32(m，4H)，7.21(m，1H)，7.25(s，1H)，7-36(t，1H)，7.94(s，1H)，7.97(m，1H)，8.20(s，1H)，8.28(m，1H)，8.70(s，1H)。
步骤6b.4-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基丁酰胺(化合物9)
制备出的所述标题化合物9是灰色固体形式(60毫克，31％)，是由化合物0113-9(200毫克，0.49毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：m/z393[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜.)δ2.06(m，2H)，2.22(t，2H)，3.30(s，1H)，3.95(s，3H)，4.16(t，2H)，7.19(m，2H)，7.40(t，1H)，7.85(s，1H)，7.91(d，1H)，8.02(s，1H)，8.51(s，1H)，8.74(s，1H)，9.49(s，1H)，10.49(s，1H)。
实施例7：6-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-羟基己酰胺(化合物11)的制备方法
步骤7a.6-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)己酸乙酯(化合物0113-11)
制备出的所述标题化合物0113-11是黄色固体形式(543毫克，73％)，是由步骤5b得到的化合物0112(500毫克，1.72毫摩)以及6-溴己酸乙酯(401毫克，1.8毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：m/z 434[M+1]+；1H NMR(氘代氯仿.)δ1.24(t，3H)，1.53(m，2H)，1.72(m，2H)，1.90(m，2H)，2.37(t，3H)，3.08(s，1H)，3.97(s，3H)，4.10(m，4H)，7.19(s，1H)，7.25(m，2H)，7.34(t，1H)，7.67(s，1H)，7.78(m，1H)，7.84(m，1H)，8.67(s，1H)。
步骤7b.6-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基己酰胺(化合物11)
制备出的所述标题化合物11是灰色固体形式(110毫克，41％)，是由化合物0113-11(275毫克，0.63毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点193.4～195.8℃(分解)；LCMS：m/z 421[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜.)δ1.44(m，2H)，1.60(m，2H)，1.84(m，2H)，1.99(t，2H)，3.93(s，3H)，4.13(t，2H)，4.19(s，1H)，7.19(m，2H)，7.40(t，1H)，7.81(s，1H)，7.88(d，1H)，7.98(s，1H)，8.49(s，1H)，8.68(s，1H)，9.47(s，1H)，10.39(s，1H)。
实施例8：7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物12)的制备方法
步骤8a.6-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0113-12)
制备出的所述标题化合物0113-12是黄色固体形式(305毫克，84％)，是由步骤5b得到的化合物0112(247毫克，0.85毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(211毫克，0.89毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：448[M+1]+；1H NMR(氘代氯仿
Figure G2007800418082D01371
：δ1.15(t，J＝7.5Hz，3H)，1.33-1.60(m，6H)，1.81(m，2H)，2.28(t，J＝7.5Hz，2H)，3.92(s，3H)，4.03(q，J＝7.2Hz，2H)，4.12(t，J＝6.6Hz，2H)，4.18(s，1H)，7.19(m，2H)，7.39(t，J＝7.8Hz，1H)，7.80(s，1H)，7.89(d，J＝8.1Hz，1H)，7.97(s，1H)，8.48(s，1H)，9.44(s，1H)。
步骤8b.7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物12)
制备出的所述标题化合物12是灰色固体形式(100毫克，41％)，是由化合物0113-12(250毫克，0.56毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点171.8～177.2℃(分解)；LCMS：435[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.36(m，2H)，1.52(m，4H)，1.83(m，2H)，1.97(m，2H)，3.94(s，3H)，4.14(t，J＝6.3Hz，2H)，4.20(s，1H)，7.21(m，2H)，7.41(t，J＝8.1Hz，1H)，7.83(s，1H)，7.90(d，J＝8.1Hz，1H)，8.00(s，1H)，8.50(s，1H)，8.66(s，1H)，9.48(s，1H)，10.35(s，1H)。
实施例8(方法2)：7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹 唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物12)的制备方法
步骤8a’.3-羟基-4-甲氧基苯甲酸乙酯(化合物0402-12)
向3，4-二羟基苯甲酸乙酯0401(12.52克，68.7毫摩)的二甲基甲酰胺(50毫升)溶液中加入碳酸钾(9.48克，68.7毫摩)。将得到的混合液搅拌15分钟之后，向其中逐滴加入碘甲烷(9.755克，68.7毫摩)的二甲基甲酰胺(10毫升)溶液。在20℃下将得到的反应混合液搅拌24小时。反应过后过滤所述的混合液，并且浓缩滤液。将得到的残余物溶解于二氯甲烷中并且利用盐水进行洗涤。将得到的有机相通过硫酸钠进行干燥，过滤并且真空浓缩，从而得到粗产物。利用柱层析对得到的粗产物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述标题化合物0402-12(7.1克，53％)：LCMS：197[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.29(t，J＝6.6Hz，3H)，3.83(s，3H)，4.25(q，J＝6.6Hz，2H)，7.00(d，J＝8.4Hz，1H)，7.38(d，J＝1.8Hz，1H)，7.43(dd，J＝8.4Hz，2.1Hz，1H)，9.36(s，1H)。
步骤8b’.3-(7-乙氧基-7-氧代庚氧基)-4-甲氧基苯甲酸乙酯(化合物0403-12)
将化合物0402-12(6.34克，32.3毫摩)、7-溴庚酸乙酯(7.66克，32.3毫摩)以及碳酸钾(13.38克，96.9毫摩)的二甲基甲酰胺(80毫升)溶液组成的混合液在60℃下搅拌3小时。反应过后过滤所述的混合液。所述滤液进行真空浓缩并且将得到的残余物溶解于二氯甲烷中，并且利用盐水进行两次洗涤。将得到的有机相通过硫酸钠进行干燥，过滤并且浓缩，从而得到白色固体形式的所述标题化合物0403-12(9.87克，86.7％)：LCMS：353[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.17(t，J＝6.9Hz，3H)，1.31(t，J＝7.2Hz，3H)1.39(m，4H)，1.54(m，2H)，1.72(m，2H)，2.29(t，J＝7.2Hz，2H)，3.83(s，3H)，3.98(t，J＝7.2Hz，2H)，4.06(q，J＝6.9Hz，2H)，4.29(q，J＝7.2Hz，2H)，7.06(d，J＝8.4Hz，1H)，7.42(d，J＝1.8Hz，1H)，7.57(dd，J＝8.4Hz，1.8Hz，1H)。
步骤8c’.5-(7-乙氧基-7-氧代庚氧基)-4-甲氧基-2-硝基苯甲酸乙酯(化合物0404-12)
将化合物0403-12(9.87克，28.0毫摩)溶解于乙酸(20毫升)之中并且在20℃下进行搅拌。向其中缓慢的逐滴加入发烟硝酸(17.66克，280.0毫摩)。在20℃下将所述混合液搅拌1小时。反应过后将所述混合液倒入冰水中并且使用二氯甲烷提取两次。使用盐水、碳酸氢钠水溶液以及盐水对得到的混合有机相进行洗涤。将所述的混合有机相通过硫酸钠进行干燥，过滤并且浓缩，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物0404-12(10.75克，96.4％)：LCMS：398[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.17(t，J＝7.2Hz，3H)，1.27(t，J＝7.2Hz，3H)，1.38(m，4H)，1.53(m，2H)，1.74(m，2H)，2.29(t，J＝7.2Hz，2H)，3.91(s，3H)，4.03(q，J＝7.2Hz，2H)，4.08(t，J＝6.3Hz，2H)，4.30(q，J＝7.2Hz，2H)，7.29(s，1H)，7.63(s，1H)。
步骤8d’.2-氨基-5-(7-乙氧基-7-氧代庚氧基)-4-甲氧基苯甲酸乙酯(化合物0405-12)
将0404-12(10.75克，27.0毫摩)、乙醇(120毫升)、水(40毫升)以及盐酸(4毫升)组成的混合液进行搅拌以形成透明的溶液。向所述溶液中分批加入铁粉(15.16克，27.0毫摩)。将得到的混合液搅拌回流30分钟，并且随后冷却至室温，使用10％的氢氧化钠溶液将pH值调整至8，并且过滤。将得到的滤液浓缩以除去乙醇，并且使用二氯甲烷提取两次。将得到的混合有机相通过盐水进行洗涤，并且通过硫酸钠进行干燥，过滤并且浓缩，从而获得黄色固体形式的所述标题产物0405-12(8.71克，87.8％)：LCMS：368[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.17(t，J＝7.2Hz，3H)，1.28(t，J＝7.2Hz，3H)，1.37(m，4H)，1.53(m，2H)，1.66(m，2H)，2.29(t，J＝7.2Hz，2H)，3.74(s，3H)，3.78(t，J＝6.9Hz，2H)，4.06(q，J＝7.2Hz，2H)，4.22(q，J＝7.2Hz，2H)，6.35(s，1H)，6.44(s，2H)，7.15(s，1H)。
步骤8e’.7-(7-甲氧基-4-氧代-3，4-二氢喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0406-12)
在180℃下将化合物0405-12(8.71克，23.7毫摩)、甲酸铵(1.48克，23.7毫摩)以及甲酰胺(40毫升)组成的混合液搅拌3小时。反应过后将所述的混合液冷却至室温。在减压条件下除去所述甲酰胺，并且将得到的残余物溶解于二氯甲烷中并且利用盐水进行洗涤。将得到的有机相通过硫酸钠进行干燥，过滤并且浓缩，从而获得灰白色固体形式的所述标题产物0406-12(8.18克，99％)：LCMS：349[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.17(t，J＝6.9Hz，3H)，1.38(m，4H)，1.55(m，2H)，1.75(m，2H)，2.29(t，J＝7.2Hz，2H)，3.90(s，3H)，4.05(m，4H)，7.13(s，1H)，7.42(s，1H)，7.97(d，J＝3.6Hz，1H)，12.07(s，1H)。
步骤8f’.7-(4-氯-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0407-12)
将产物0406-12(8.18克，23.5毫摩)以及三氯氧磷(50毫升)组成的混合液搅拌回流4小时。反应过后在减压条件下将过量的三氯氧磷除去。将得到的残余物溶解于二氯甲烷中并且使用水、碳酸氢钠水溶液以及盐水进行洗涤。将得到的有机相通过硫酸钠进行干燥，过滤并且浓缩，从而获得黄色固体形式的所述标题产物0407-12(5.93克，69.7％)：LCMS：367[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.17(t，J＝6.9Hz，3H)，1.38(m，4H)，1.54(m，2H)，1.81(m，2H)，2.30(t，J＝7.2Hz，2H)，4.02(s，3H)，4.06(q，J＝6.9Hz，2H)，4.18(t，J＝6.3Hz，2H)，7.37(s，1H)，7.45(s，1H)，8.87(s，1H)。
步骤8g’.7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0408-12)
将产物0407-12(5.93克，16.4毫摩)以及3-乙炔基苯胺(1.92克，16.4毫摩)的异丙醇(80毫升)溶液所组成的混合液搅拌回流4小时。反应过后将得到的混合液冷却至室温，并且分离得到的沉淀，使用异丙醇以及乙醚对其进行洗涤，并且干燥，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物0408-12(4.93克，67.1％)：LCMS：448[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.16(t，J＝7.2Hz，3H)，1.36-1.59(m，6H)，1.80(m，2H)，2.29(t，J＝7.2Hz，2H)，3.93(s，3H)，4.04(q，J＝6.9Hz，2H)，4.13(t，J＝6.6Hz，2H)，4.19(s，1H)，7.20(m，2H)，7.39(t，J＝7.8Hz，1H)，7.81(s，1H)，7.89(d，J＝8.4Hz，1H)，7.97(s，1H)，8.48(s，1H)，9.45(s，1H)。
步骤8h’.7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物0408-12)
将新鲜制备的羟胺溶液(30毫升，110毫摩)放置于50毫升的长颈瓶中。向所述溶液中加入化合物0408-12(4.93克，11.0毫摩)并且在25℃下搅拌24小时。反应过后利用乙酸对所述混合液进行中和，并且分离得到的沉淀，用水进行洗涤，并且干燥，从而获得白色固体形式的化合物12(3.99克，83.6％)：熔点174.1～177.2℃.LCMS：435[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.36(m，2H)，1.52(m，4H)，1.83(m，2H)，1.98(m，2H)，3.94(s，3H)，4.14(t，J＝6.6Hz，2H)，4.20(s，1H)，7.21(m，2H)，7.41(t，J＝7.8Hz，1H)，7.80(s，1H)，7.90(d，J＝7.8Hz，1H)，8.00(s，1H)，8.50(s，1H)，8.66(s，1H)，9.48(s，1H)，10.35(s，1H)。
实施例9：2-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N- 羟基乙酰胺(化合物13)的制备方法
步骤9a.6-羟基喹唑啉基-4(3氢)-酮(化合物0202)
对2-氨基-5-羟基苯甲酸0201(30.6克，0.2摩)的甲酰胺溶液进行搅拌，并且将其加热至190℃保持0.5小时。将得到的混合液冷却至室温。分离得到的沉淀，使用乙醚进行洗涤并且干燥，从而获得所述标题化合物0202(32克，褐色固体，99％)：LCMS：m/z 163[M+1]；1H NMR(二甲基亚砜.)δ7.25(dd，1H)，7.40(d，1H)，7.46(d，1H)，7.88(s，1H)。
步骤9b.3，4-二氢-4-氧代喹唑啉基-6-基乙酸(化合物0203)
对化合物0202(30.0克，0.185毫摩)以及吡啶(35毫升)的无水醋酸(275毫升)溶液所组成的混合液进行搅拌，并且在100℃下加热2小时。将得到的反应混合液倒入冰水混合液中(500毫升)。分离得到的沉淀，用水进行洗涤并且干燥，从而获得所述标题化合物0203(24克，灰白色固体，产率：61％)：LC-MS：m/z 205[M+1]；1H NMR(二甲基亚砜.)δ2.32(s，3H)，7.50(dd，1H)，7.80(d，1H)，7.98(s，1H)，8.02(s，1H)。
步骤9c.4-氯喹唑啉基-6-基乙酸(化合物0204)
对化合物0203(20.0克，0.1摩)的三氯氧磷(150毫升)混合液进行搅拌，并且加热回流2小时。蒸发所述的反应混合液，并且使用乙酸乙酯以及饱和的碳酸氢钠水溶液将得到的残余物进行分离。将得到的有机相用水进行洗涤，通过硫酸钠进行干燥并且蒸发。通过柱层析对得到的混合物进行纯化(硅胶，洗脱剂：1∶2＝乙酸乙酯/石油)，从而获得所述标题化合物0204(7.5克，白色固体，产率：35％)：LCMS：m/z 223[M+1]；1H NMR(氘代氯仿.)2.40(s，3H)，7.74(dd，1H)，8.00(d，1H)，8.09(d，1H)，9.05(s，1H)。
步骤9d.4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-基乙酸(化合物0207)
对0204(1.0克，4.5毫摩)以及3-氯-4-氟苯胺0205(0.7克，5.0毫摩)的异丙醇(45毫升)溶液所组成的混合液进行搅拌，并且在90℃下加热1小时。将所述的反应混合液冷却至室温并且分离得到的沉淀。将所述固体依次使用异丙醇以及甲醇进行洗涤，干燥，从而获得所述标题化合物0207(1.3克，灰黄色固体，产率：87％)：LCMS：m/z 332[M+1]；1H NMR(二甲基亚砜.)δ2.37(s，3H)，7.54(t，1H)，7.75(m，1H)，7.94(dd，1H)，7.99(s，1H)，8.02(m，1H)，8.64(s，1H)，8.95(s，1H)。
步骤9e.4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-醇(化合物0209)
将0207(0.8克，2.6毫摩)以及一水合氢氧化锂(0.13克，3.2毫摩)的甲醇(10毫升)/水(15毫升)溶液组成的混合液在室温下搅拌1小时。使用乙酸将其pH调整至4并且过滤。将收集到的黄色固体用水进行洗涤并且干燥，从而获得所述标题化合物0209(0.6克，黄色固体，产率：88％)：LCMS：m/z 290[M+1]；1H NMR(二甲基亚砜.)δ7.42(s，1H)，7.45(m，1H)，7.70(d，1H)，7.76(s，1H)，7.86(m，1H)，8.24(q，1H)，8.48(s，1H)，9.61(s，1H)。
步骤9f.2-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)乙酸乙酯(化合物0210-13)
将0209(0.2克，0.77毫摩)、3-溴丙酸乙酯(0.14克，0.85毫摩)以及存在于二甲基甲酰胺(15毫升)中的碳酸钾(0.8克，5.8毫摩)组成的混合液进行搅拌，并且加热至80℃保持2小时。过滤得到的反应混合液，并且蒸发滤液。使用乙醚对得到的固体进行洗涤，从而获得所述标题化合物0210-13(0.2克，黄色固体，产率：75％)：熔点161-163℃；LC-MS m/z 376[M+1]；1H-NMR(二甲基亚砜)δ1.20(t，3H)，4.20(q，2H)，4.96(s，2H)，7.45(t，1H)，7.55(dd，1H)，7.78(m，2H)，7.94(d，1H)，8.16(dd，1H)，8.54(s，1H)，9.69(s.1H)。
步骤9g.2-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基乙酰胺(化合物13)
在0℃下，向处于搅拌状态的盐酸羟胺(4.67克，67毫摩)的甲醇(24毫升)溶液中加入氢氧化钾(5.61克，100毫摩)的甲醇(14毫升)溶液。在加入之后，在0℃下将得到的混合液搅拌30分钟，并且允许其在低温下放置。分离由此得到的沉淀，并且处理得到的溶液从而得到游离的羟胺。
将上述得到的羟胺溶液(1.4毫升，2.4毫摩)放置于5毫升的长颈瓶中。向所述溶液中加入化合物0210-13(0.1克，0.29毫摩)，并且在0℃下搅拌10分钟，随后使其回暖至室温。利用薄层层析法(TLC)对上述反应过程进行监控。使用乙酸将所述的混合液的pH调整至6，并且随后在减压条件下浓缩所述混合液。通过制备型高效液相色谱(HPLC)对得到的残余物进行纯化，其中使用甲醇/水进行洗脱。收集含有所述产物的带。蒸发溶剂从而得到所述标题化合物13(30毫克，黄色固体，产率：29％)：LCMS：m/z 363[M+1]；1H NMR(二甲基亚砜.)δ4.64(s，2H)，7.46(t，1H)，7.58(d，1H)，7.79(d，2H)，7.7(s，1H)，8.11(s，1H)，8.52(s，1H)，9.02(s，1H)，9.67(s，1H)，10.96(s，1H)。
实施例10：4-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N- 羟基丁酰胺(化合物15)的制备方法
所述标题化合物15(20毫克)是由步骤9e得到的化合物0209以及4-溴丁酸乙酯通过与化合物13的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：熔点128-132℃；LC-MS m/z 391[M+1]；1H-NMR(二甲基亚砜+氘代水)δ2.05(m.2H)，2.24(t，2H)，4.21(t，2H)7.46(t，1H)，7.54(dd，1H)，7.65(m，1H)，7.76(d，1H)，7.82(m1H)，7.99(m，1H)，8.43(s，1H)。
实施例11：6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N- 羟基己酰胺(化合物17)的制备方法
步骤11a.6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)己酸乙酯(化合物0210-17)
所述标题化合物0210-17(0.2克)是化合物02094-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-醇以及6-溴己酸乙酯通过与化合物0210-13的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS m/z 433[M+1]，1H-NMR(二甲基亚砜)δ1.13(t，3H)，1.45(m，2H)，1.60(m，2H)1.76(m，2H)，2.30(t，2H)，4.05(q，2H)，4.11(t，2H)，7.41(d，1H)，7.45(dd，1H)，7.68(d，1H)，7.80(m，1H)，7.86(m，1H)，8.13(dd，1H)，8.48(s，1H)。
步骤11b.6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基己酰胺(化合物17)
所述标题化合物17(30毫克)是由化合物0210-17通过与化合物13的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS[M+1]4191H-NMR(二甲基亚砜)δ1.28(m，，2H)，1.60(m，2H)1.73(m，2H)，2.05(t，2H)，4.17(t，2H)，7.25(d，1H)，7.47(t，1H)，7.55(dd，1H)7.76(d，1H)7.73(m，1H)，8.05(m，1H)，8.48(s，1H)。
实施例12：7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N- 羟基庚酰胺(化合物18)的制备方法
步骤12a.7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0210-18)
所述标题化合物0210-18(0.2克)是由步骤9e中的化合物2-64-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-醇(0209)以及7-溴庚酸乙酯通过与化合物0210-13的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS m/z 433[M+1]，1H-NMR(二甲基亚砜)δ1.13(t，3H)，1.36(m，2H)，1.46(m，2H)，1.54(m，2H)1.78(m，2H)，2.27(t，2H)，4.05(q，2H)，4.11(t，2H)，7.41(d，1H)，7.47(dd，1H)，7.70(d，1H)，7.81(m，1H)，7.84(m，1H)，8.13(dd，1H)，8.50(s，1H)。
步骤12b.7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物18)
所述标题化合物18(20毫克)是由化合物7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-氧基-庚酸乙酯(0210-18)通过与化合物13的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS[M+1]，熔点145-149℃，1H-NMR  (二甲基亚砜)δ1.32(m，，2H)，1.47(m，4H)1.88(m，2H)，1.94(t，2H)，4.12(t，2H)，7.43(t，1H)，7.51(dd，1H)，7.71(d，1H)7.80(m，1H)7.86(d，1H)，8.15(dd，1H)，8.51(s，1H)。
实施例13：2-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N- 羟基乙酰胺(化合物19)的制备方法
步骤13a.4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-基乙酸(化合物0208)
所述标题化合物0208(0.8克，产率：73％)是由4-氯喹唑啉基-6-基乙酸0204以及3-乙炔基苯胺0206通过与化合物0207的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MSm/z 304[M+1]，1H-NMR(二甲基亚砜)δ2.36(s，3H)，4.26(s，1H)，7.43(d，1H)，7.53(t，1H)，7.77(d，1H)，7.95(m，2H)，8.02(d，1H)，8.71(s，1H)，8.96(s，1H)。
步骤13b.4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-醇(化合物0211)
所述标题化合物0211(0.6克，产率：88％)是通过与化合物0209的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS m/z 262[M+1]，1H-NMR(二甲基亚砜)δ4.17(s，1H)，7.19(d，1H)，7.36(t，1H)，7.43(dd，1H，7.65(d，1H)，.82(d，1H)，.95(d，1H)，8.10(s，1H)，.48(s，1H)。
步骤13c.2-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)乙酸乙酯(化合物0212-19)
所述标题化合物0212-19(0.2克，产率：75％)，是由化合物4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-醇0211以及2-溴乙酸乙酯通过与化合物0210-13的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：m/z 322[M+1]；熔点181-182℃)1H-NMR(二甲基亚砜)δ1.28(t.3H)，4.20(q，2H)，4.25(s，1H)4.32(s，2H)，7.23(d，1H)，7.41(t，1H)，7.57(dd，1H)，7.74(d，1H)，7.91(d，1H)，7.95(m，1H)，8.10(s，1H)，8.48(s，1H)。
步骤13d.2-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基乙酰胺(化合物19)
所述标题化合物19(40毫克)是由2-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)乙酸乙酯0212-19通过与化合物13的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS m/z 335[M+1]，熔点：189-191℃，1H-NMR(二甲基亚砜)δ4.27(s.1H)，4.69(s，2H)，7.39(d，1H)，7.49(t，1H)，7.76(m，2H)，7.83(m，2H)，7.88(s，1H)，8.10(s，1H)，8.82(m，1H)。
实施例14：4-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N- 羟基丁酰胺(化合物21)的制备方法
步骤14a.4-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)丁酸乙酯(化合物0212-21)
所述标题化合物0212-21(0.2克，产率：78％)是由化合物4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-醇(0211)以及4-溴丁酸乙酯通过与化合物0210-13的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS m/z 376[M+1]，1H-NMR(二甲基亚砜)δ1.12(t.3H)，1.79(m，2H)，2.32(t，2H)，4.04(q，2H)，4.16(t，2H)，4.21(s，1H)，7.02(dd，1H)，7.21(d，1H)，7.39(dd，1H)，7.70(t，1H)，7.88(s，1H)，8.00(m，1H)，8.51(s，1H)，8.65(s，1H)。
步骤14b.4-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基丁酰胺(化合物21)
所述标题化合物21(50毫克)是由4-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)丁酸乙酯(0212-21)通过与化合物13的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS m/z 363[M+1]，熔点182-186℃，1H-NMR(二甲基亚砜)δ2.02(m，2H)，2.20(t，2H)，4.16(t，2H)，4.20(s，1H)，7.24(d，1H)，7.43(t，1H)，7.52(dd，1H)，7.75(d，1H)，7.94(m，2H)，8.06(s，1H)，8.53(s，1H)。
实施例15：6-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N- 羟基己酰胺(化合物23)的制备方法
步骤15a.6-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)己酸乙酯(化合物0212-23)
所述标题化合物6-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)己酸乙酯(0212-23)(0.3克，64％)是由化合物4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-醇(0211)以及6-溴己酸乙酯通过与化合物0210-13的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS m/z 404[M+1]。
步骤15b.6-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基己酰胺(化合物23)
所述标题化合物23(50毫克)是由6-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)己酸乙酯(0212-23)通过与化合物13的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS m/z 391[M+1]，熔点176-182℃，1H-NMR(二甲基亚砜)δ1.46(m，2H)，1.60(m，2H)，1.81(m，2H)，2.00(t，2H)，4.15(t，2H)，4.20(s，1H)，7.24(d，1H)，7.43(t，1H)，7.52(dd，1H)，7.72(d，1H)，7.92(m，2H)，8.04(s，1H)，8.53(s，1H)。
实施例16：4-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-羟基丁酰胺(化合物4)
步骤16a.4-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)丁酸乙酯(化合物0110-4)
制备出的所述标题化合物0110-4是黄色固体形式(660毫克，88.4％)，是由步骤1f得到的化合物0109(500毫克，1.56毫摩)以及5-溴戊酸甲酯(320毫克，1.64毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：434[M+1]+；1H NMR(氘代氯仿
Figure G2007800418082D01501
δ1.80～1.97(m，4H)，2.48(t，J＝6.6Hz，2H)，3.67(s，3H)，3.97(s，3H)，4.18(t，J＝7.2Hz，2H)，7.14(t，J＝8.7Hz，1H)，7.24(s，1H)，7.29(s，1H)，7.66～7.11(m，1H)，7.96(dd，J＝6.9Hz，2.7Hz，1H)，8.03(s，1H)，8.66(s，1H)。
步骤16b.4-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基丁酰胺(化合物4)
制备出的所述标题化合物4是白色固体形式(140毫克，35％)，是由化合物0110-4(400毫克，0.92毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：435[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6
Figure G2007800418082D01511
：δ1.69～1.84(m，4H)，2.07(t，J＝6.6Hz，2H)，3.94(s，3H)，4.15(t，J＝6.0Hz，2H)，7.21(s，1H)，7.45(t，J＝9.0Hz，1H)，7.78～7.83(m，2H)，8.13(dd，J＝6.9Hz，2.4Hz，1H)，8.03(s，1H)，8.50(s，1H)，8.72(s，1H)，9.54(s，1H)，10.41(s，1H)。
实施例17：5-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-羟基戊酰胺(化合物10)
步骤17a.5-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)戊酸甲酯(化合物0113-10)
制备出的所述标题化合物0113-10是黄色固体形式(500毫克，72％)，是由化合物0112(500毫克，1.7毫摩)以及5-溴戊酸甲酯(211毫克，0.89毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：406[M+1]+。
步骤17b.5-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基戊酰胺(化合物10)
制备出的所述标题化合物10是白色固体形式(200毫克，40％)，是由化合物0113-10(500毫克，1.23毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：407[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.71～1.85(m，4H)，2.07(t，J＝7.2Hz，2H)，3.93(s，3H)，4.16(t，J＝6.3Hz，2H)，4.20(s，1H)，7.19(m，2H)，7.41(t，J＝8.1Hz，1H)，7.84(s，1H)，7.90(dd，J＝8.4Hz，1.2Hz，1H)，8.00(t，J＝1.8Hz，1H)，8.50(s，1H)，8.72(s，1H)，9.48(s，1H)，10.40(s，1H)。
实施例18：5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N- 羟基戊酰胺(化合物16)的制备方法
步骤18a.5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)戊酸乙酯(化合物0210-16)
所述标题化合物0210-16(0.2克，68％)是由化合物02094-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-醇(0.2克，0.69毫摩)以及5-溴戊酸甲酯(0.14克，0.69毫摩)通过与化合物0210-13的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS m/z 376[M+1]+。
步骤18b.5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基戊酰胺(化合物16)
所述标题化合物16(24毫克，67％)是由化合物0210-16(37毫克，0.09毫摩)通过与化合物13的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：熔点：85.9℃；LCMS 405[M+1]+，1HNMR(二甲基亚砜-d6)δ1.74(m，4H)，2.04(t，J＝7.5Hz，2H)，4.14(t，J＝6Hz，2H)，7.44(t，J＝9Hz，1H)，7.51(dd，J＝9Hz，J＝2.4Hz，1H)，7.73(d，J＝8.7Hz，1H)，7.82(m，1H)，7.88(d，J＝2.4，1H)8.16(dd，J＝6.9Hz，J＝2.7Hz 1H)，8.52(s，，1H)，8.69(s，1H)，9.67(s，1H)，10.38(s，1H)。
实施例19：7-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N- 羟基庚酰胺(化合物24)
步骤19a.7-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0212-24)
所述标题化合物0212-24(0.21克，58％)是由化合物4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-醇(0211)(0.23克，0.86毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(0.20克，0.86毫摩)通过与化合物0210-13的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：418[M+1]+。
步骤19b.7-(4-(3-乙炔基苯氨基)喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物24)
所述标题化合物24(50毫克，42％)是由化合物0212-24(123毫克，0.29毫摩)通过与化合物13的制备方法(实施例9)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS 405[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.44(m，2H)，1.48(m，2H)，1.59(m，2H)，1.67(m，2H)，2.11(t，J＝7.2Hz，2H)，3.50(s，1H)，4.17(t，J＝6.3Hz，2H)，7.28(d，J＝7.5Hz，1H)，7.37(t，J＝6.9Hz，1H)，7.48(d，J＝9.0Hz，1H)，7.78(dd，J＝21.3Hz，J＝7.8Hz，1H)，7.93(s，1H)，7.92(m，2H)，8.45(s，1H)。
实施例20：7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基) 喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物30)的合成方法
步骤20a.3-羟基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲酸乙酯(化合物0402-30)
向0401(1.82克，10.0毫摩)的N，N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液中加入碳酸钾(1.38克，10.0毫摩)。将得到的混合液搅拌15分钟并且随后缓慢的逐滴加入4-甲基苯磺酸-2-甲氧基乙酯(2.30克，10.0毫摩)的N，N-二甲基甲酰胺(5毫升)溶液。将得到的混合液在室温下搅拌48小时并且过滤。将得到的滤液真空浓缩，将得到的残余物溶解于乙酸乙酯(30毫升)中，随后利用盐水(20毫升x3)洗涤得到的有机层，并且通过硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得白色固体形式的所述标题产物0402-30(1.2克，50％)：LCMS：241[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6.)：
Figure G2007800418082D01542
1.26(t，J＝7.5Hz，3H)，3.65(m，J＝1.5Hz，2H)，4.11(m，J＝4.5Hz，2H)，4.21(m，J＝4.5Hz，2H)，7.00(d，J＝9Hz，1H)，7.37(m，J＝2Hz，2H)，9.40(s，1H)。
步骤20b.3-(7-乙氧基-7-氧代庚氧基)-4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲酸乙酯(化合物0403-30)
将化合物0402-30(204.0毫克，0.85毫摩)与7-溴庚酸乙酯(201.0毫克，0.85毫摩)以及碳酸钾(353.0毫克，2.50毫摩)的N，N-二甲基甲酰胺(5毫升)在60℃下搅拌3小时。将得到的混合液过滤。真空浓缩所述滤液，并且将得到的残余物溶解于乙酸乙酯(30毫升)中，随后利用盐水(20毫升x3)对得到的有机层进行洗涤，并且通过硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得黄色固体形式的所述标题产物0403-30(325毫克，96％)：LCMS：397[M+1]+。
步骤20c.5-(7-乙氧基-7-氧代庚氧基)-4-(2-甲氧基乙氧基)-2-硝基苯甲酸乙酯(化合物0404-30)
将化合物0403-30(325.0毫克，0.82毫摩)溶解于醋酸(2毫升)中并且在室温下进行搅拌。之后，向其中缓慢的逐滴加入发烟硝酸(0.39克，6.0毫摩)。将得到的混合液在室温下搅拌2小时。将其倒入冰水(50毫升)中并且利用乙酸乙酯(20毫升x2)进行提取。利用碳酸氢钠水溶液(10毫升x3)以及盐水(10毫升x3)对得到的混合有机层进行洗涤，并且通过硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得黄色油形式的所述标题产物0404-30(330毫克，100％)：LCMS：442[M+1]+。
步骤20d.2-氨基-5-(7-乙氧基-7-氧代庚氧基)-4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲酸乙酯(化合物0405-30)
对0404-30(370.0毫克，0.82毫摩)、乙醇(4.4毫升)、水(3毫升)以及盐酸(0.08毫升)组成的混合液进行搅拌，直至形成透明的溶液。向所述溶液中加入铁粉(459.0毫克，8.2毫摩)。将得到的混合液搅拌回流30分钟并且冷却至室温，在冰水浴中利用10％的氢氧化钠溶液将pH调整至8。过滤得到的混合液，并且对滤液进行浓缩以除去乙醇，并且在此之后使用乙酸乙酯(20毫升x2)进行提取。利用盐水(10毫升x3)对得到的混合有机层进行洗涤，并且通过硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得黄色油形式的所述标题产物0405-30(315毫克，93％)：LCMS：412[M+1]+。
步骤20e.7-(7-(2-甲氧基乙氧基)-4-氧代-3，4-二氢喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0406-30)
在190℃下对化合物0405-30(315.0毫克，0.76毫摩)、甲酸铵(48.0毫克，0.76毫摩)以及甲酰胺(2.46毫升)组成的混合液搅拌3小时。将得到的反应混合液冷却至室温。在减压条件下除去所述的甲酰胺，并且将得到的残余物溶解于乙酸乙酯(30毫升)中。利用盐水(10毫升x5)对得到的有机层进行洗涤，并且通过硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得白色固体形式的所述标题产物0406-30(235毫克，98％)：LCMS：393[M+1]+。
步骤20f.7-(4-氯-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0407-30)
将产物0406-30(235.0毫克，0.6毫摩)以及三氯氧磷(3毫升)组成的混合液搅拌回流4小时。将得到透明溶液时，在减压条件下将其中过量的三氯氧磷除去。将得到的残余物溶解于乙酸乙酯(30毫升)中并且依次利用水(10毫升x2)、碳酸氢钠水溶液(10毫升x2)以及盐水(20毫升x1)对得到的有机层进行洗涤，通过硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得黄色固体形式的所述标题产物0407-30(233毫克，94％)：LCMS：411[M+1]+。
步骤20g.7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)-喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0408-30)
将产物0407-30(117.0毫克，0.28毫摩)以及3-氯-4-氟苯胺(50.0毫克，0.34毫摩)的异丙醇(3毫升)溶液所组成的混合液搅拌回流过夜。将得到的混合液冷却至室温并且分离得到的沉淀，利用异丙醇以及乙醚对其进行洗涤。之后，将得到的固体进行干燥，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物0408-30(102毫克，70％)：LCMS：520[M+1]+。
步骤20h.7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物30)
将上述新鲜制备的羟胺溶液(3毫升，2.0毫摩)放置于25毫升的长颈瓶中。向其中加入化合物0408-30(102.0毫克，0.2毫摩)并且在室温下搅拌24小时。利用醋酸/甲醇对所述混合液进行中和。在减压条件下浓缩所述混合液。利用制备型高效液相色谱(HPLC)对得到的残余物进行纯化，从而得到黄色固体形式的化合物30(85毫克，84％)：LCMS：507[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-
Figure G2007800418082D01571
：δ1.33(m，2H)，1.50(m，4H)，1.79(s，2H)，1.94(t，2H)，3.29(s，3H)，3.72(s，2H)，4.11(s，2H)，4.25(s，2H)，7.19(s，1H)，7.42(t，1H)，7.79(s，1H)，8.10(d，1H)，8.47(s，1H)，8.65(s，1H)，9.52(s，1H)，10.33(s，1H)。
实施例21：7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基) 喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物36)的制备方法
步骤21a.7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0408-36)
将产物0407-30(102.0毫克，0.25毫摩)以及3-乙炔基苯胺(35.0毫克，0.3毫摩)的异丙醇(3毫升)溶液所组成的混合液搅拌回流过夜。将得到的混合液冷却至室温并且分离得到的沉淀，利用异丙醇以及乙醚对其进行洗涤。之后，将得到的固体进行干燥，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物0408-36(88毫克，72％)：LCMS：491[M+1]+。
步骤21b.7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物36)
将上述新鲜制备的羟胺溶液(3毫升，2毫摩)放置于25毫升的长颈瓶中。向所述溶液中加入化合物0408-36(88.0毫克，0.18毫摩)并且在室温下搅拌24小时。利用醋酸/甲醇对所述混合液进行中和，并且在减压条件下浓缩所述混合液。利用制备型高效液相色谱(HPLC)对得到的残余物进行纯化，从而得到白色固体形式的化合物36(40毫克，47％)：LCMS：479[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜-d6.)：δ1.33(m，2H)，1.50(m，4H)，1.79(s，1H)，1.94(t，2H)，3.72(s，2H)，4.11(s，2H)，4.25(s，2H)，7.19(s，1H)，7.42(t，1H)，7.79(s，1H)，8.10(d，1H)，8.47(s，1H)，8.65(s，1H)，9.52(s，1H)，10.33(s，1H)。
实施例22：N 1 -(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基 -6-基)-N 5 -羟基戊二酰胺(化合物38)的制备方法
步骤22a.7-氯喹唑啉基-4(3氢)-酮(化合物0302)
在130℃下对化合物0301(17.2克，100毫摩)以及甲酰胺(20毫升)组成的混合液搅拌30分钟，并且在190℃下搅拌4小时。将得到的混合液冷却至室温。之后，将其倒入冰水混合液中。分离得到的沉淀，用水进行洗涤并且干燥，从而获得所述标题化合物0302(15.8克，87.7％)：1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ7.65(dd，1H)，7.72(d，1H)，8.12(d，1H)，8.36(s，1H)。
步骤22b.7-氯-6-硝基喹唑啉基-4(3氢)-酮(化合物0303)
将化合物0302(18.0克，100毫摩)逐步加入到被冷却至0℃的、处于搅拌状态下的由浓硫酸(60毫升)以及发烟硝酸(60毫升)组成的混合液中，在环境温度下将得到的混合液搅拌1小时并且随后加热至45℃过夜。将得到的混合液倒入冰水混合液中。分离得到的沉淀，用水进行洗涤并且干燥。在醋酸中发生重结晶作用，从而获得所述标题化合物0303(14.1克，62.7％)。1HNMR(二甲基亚砜-d6)：δ8.00(s，1H)，8.27(s，1H)，8.65(s，1H)，12.70(s，1H)。
步骤22c.7-甲氧基-6-硝基喹唑啉基-4(3氢)-酮(化合物0304)
在一个密闭的压力容器中将化合物0303(4.0克，18.0毫摩)以及钠(2.4克，45毫摩)的甲醇(50毫升)溶液所组成的混合液在100℃下加热20小时。利用醋酸对所述溶液进行中和并且用水进行稀释，从而获得所述标题化合物0304(3.0克，77％)。1HNMR(二甲基亚砜-d6)：
Figure G2007800418082D01591
4.10.(s，3
Figure G2007800418082D01592
)，7.40(s，1H)，8.24(s，1H)，8.50(s，1H)，12.67(s，1H)。
步骤22d.4-氯-7-甲氧基-6-硝基喹唑啉(化合物0305)
将化合物0304(3.8克，17.2毫摩)悬浮于三氯氧磷(75毫升)中，将得到的混合液加热回流4小时。在真空状态下除去额外的三氯氧磷。将得到的残余物溶解于二氯甲烷(50毫升)以及氢氧化钠水溶液(50毫升)组成的混合液中。干燥得到的有机层并且除去溶剂，从而获得所述标题化合物0305(3.4克，83％)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)：
Figure G2007800418082D01593
4.05(s，3
Figure G2007800418082D01594
，7.44(s，1H)，8.27(s，1H)，8.53(s，1H)。
步骤22e.N-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-硝基喹唑啉基-4-盐酸胺(化合物0307)
对化合物0305(3.4克，14.2毫摩)以及3-氯-4-氟苯胺(0406)(2.2克，15.2毫摩)以及异丙醇(120毫升)组成的混合液搅拌回流3小时。将得到的反应混合液冷却至环境温度并且分离得到的沉淀，使用甲醇以及乙醚对沉淀进行洗涤，并且干燥，从而获所述标题化合物0307(4.66克，85％)：1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ4.10(s，3H)，7.55(dd，2H)，7.74
Figure G2007800418082D01595
，8.07(dd，1H)，8.90(s，1H)，9.55(s，1H)，11.6(s，1H)。
步骤22f.N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-硝基喹唑啉基-4-胺(化合物0308)
将化合物0307(3.5克，10.0毫摩)、铁屑(11.2克，200.0毫摩)、乙醇(100毫升)、浓盐酸(2毫升)以及水(30毫升)所组成的混合液加热回流1小时。通过过滤除去铁屑。将滤液浓缩至1/5的体积。分离得到的沉淀并且干燥，从而获得所述标题化合物0308(2.2克，69％)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ3.97(s，3H)，5.38(s，2H)，7.10(s，1H)，7.36(s，1H)，7.39(t，1H)，7.80(m，1H)，8.08(dd，1H)，8.38(s，1H)，9.39(s，1H)。
步骤22g.3-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氨基甲酰基)丙酸甲酯(化合物0310-38)
将化合物0308(500.0毫克，1.57毫摩)以及三乙胺(165.0毫克，1.65毫摩)溶解于二氯甲烷(50毫升)中。将所述混合液冷却至0℃，并且在0℃以下在20分钟之内向上述混合液中逐滴加入5-氯-5-氧代戊酸甲酯(270毫克，1.65毫摩)的二氯甲烷(5毫升)溶液。在室温下将所述反应混合液搅拌1小时。使用水(50毫升x2)以及盐水(50毫升)对得到的混合液进行洗涤。将所述有机层通过硫酸镁进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得所述标题化合物0310-38(550毫克，78％)，LCMS：448[M+1]+。
步骤22h.N1-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基)-N5-羟基戊二酰胺(化合物38)
在0℃下，向处于搅拌状态的盐酸羟胺(4.67克，67毫摩)的甲醇(24毫升)溶液中加入氢氧化钾(5.61克，100毫摩)的甲醇(14毫升)溶液。加入之后，在0℃下将得到的混合液搅拌30分钟，并且允许其在低温下进行放置。分离得到的沉淀，并且处理得到的溶液从而得到游离的羟胺。
将上述新鲜制备的羟胺溶液(5.6毫升，10.0毫摩)放置于10毫升的长颈瓶中。向所述溶液中加入化合物0310-38(550.0毫克，1.23毫摩)，并且在0℃下搅拌10分钟，随后允许其回暖至室温。利用薄层层析法(TLC)对上述反应过程进行监控。使用乙酸中和所述的混合液。在减压条件下浓缩所述混合液。通过制备型高效液相色谱(HPLC)对得到的残余物进行纯化，从而得到灰色固体形式的所述标题化合物38(250毫克，45％)：LCMS：m/z 488[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜.)δ1.85(m，2H)，2.06(t，J＝7.5Hz，2H)，2.48(t，J＝7.2Hz，2H)，4.00(s，3H)，7.24(s，1H)，7.42(t，J＝9.0Hz，1H)，7.80(m，1H)，8.10(dd，J＝7.2Hz，2.7Hz，1H)，8.52(s，1H)，8.70(s，1H)，8.82(s，1H)，9.48(s，1H).9.79(s，1H)，10.40(s，1H)。
实施例23：N 1 -(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基 -6-基)-N 8 -羟基辛二酰胺(化合物40)的制备方法
步骤23a.8-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氨基)-8-氧代辛酸甲酯(化合物0310-40)
制备出的所述标题化合物0310-40是黄色固体形式(350毫克，78％)，是由化合物0308(319毫克，1.0毫摩)以及8-氯-8-氧代辛酸甲酯(227毫克，1.1毫摩)通过与化合物0310-38的制备方法(实施例22)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：489[M+1]+。
步骤23b.N1-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基)-N8-羟基辛二酰胺(化合物40)
制备出的所述标题化合物40是黄色固体形式(120毫克，30％)，是由化合物0310-38(400毫克，0.8毫摩)通过与化合物38的制备方法(实施例22)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：490[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.29(m，4H)，1.48(m，2H)，1.59(m，2H)，1.93(t，J＝7.2Hz，2H)，2.45(t，J＝7.2Hz，2H)，4.00(s，3H)，4.18(s，1H)，7.26(s，1H)，7.41(t，J＝9.0Hz，1H)，7.74(m，1H)，8.08(d，J＝1.2Hz，1H)，8.54(s，1H)，8.66(s，1H)，8.83(s，1H)，9.46(s，1H)，9.95(s，1H)，10.33(s，1H)。
实施例24：N 1 -(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 基)-N 5 -羟基戊二酰胺(化合物42)的制备方法
步骤24a.N-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基-6-硝基喹唑啉基-4-盐酸胺(化合物0307-42)
制备出的所述标题化合物0307-42是黄色固体形式(4.7克，84.5％)，是由化合物0305(350毫克，0.78毫摩)以及3-乙炔基苯胺(2.34克，20.0毫摩)通过与化合物0306-38的制备方法(实施例22)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：321[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ4.11(s，3H)，4.24(s，1H)，7.42(d，1H)，7.50(t，1H)，7.61(s，1H)，7.79(d，1H)，7.93(m，1H)，8.93(s，1H)，9.57(s，1H)，11.56(bs，1H)。
步骤24b.N4-(3-乙炔基苯基)-7-甲氧基喹唑啉基-4，6-二胺(化合物0309-42)
制备出的所述标题化合物0309-42是黄色固体形式(2.0克，69％)，是由化合物0307-42(3.2克，10.0毫摩)通过与化合物0308-38的制备方法(实施例22)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：291[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ3.95(s，3H)，4.14(s，1H)，5.33(s，2H)，7.08(m，2H)，7.34(m，2H)，7.88(m，1H)，8.04(s，1H)，8.36(s，1H)，9.29(s，1H)。
步骤24c.5-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氨基)-5-氧代戊酸甲酯(化合物0311-42)
制备出的所述标题化合物0311-42是黄色固体形式(450毫克，77％)，是由化合物0309-42(407毫克，1.4毫摩)以及5-氯-5-氧代戊酸甲酯(254毫克，1.54毫摩)通过与化合物0310-38的制备方法(实施例22)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：419[M+1]+。
步骤24d.N1-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基)-N5-羟基戊二酰胺(化合物42)
制备出的所述标题化合物42是黄色固体形式(100毫克，47％)，是由化合物0311-42(211毫克，0.5毫摩)通过与化合物38的制备方法(实施例22)中所描述的类似方法制备得到的。
实施例25：N 1 -(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 基)-N 6 -羟基己二酰二胺(化合物43)的制备方法
步骤25a.6-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氨基)-6-氧代己酸甲酯(化合物0311-43)
制备出的所述标题化合物0311-43是黄色固体形式(530毫克，71％)，是由化合物0309-42(500毫克，1.72毫摩)以及6-氯-6-氧代己酸甲酯(323毫克，1.81毫摩)通过与化合物0311-42的制备方法(实施例24)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：433[M+1]+。
步骤25b.N1-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基)-N6-羟基己二酰二胺(化合物43)
制备出的所述标题化合物43是黄色固体形式(105毫克，24％)，是由化合物0311-43(432毫克，1.0毫摩)通过与化合物42的制备方法(实施例24)中所描述的类似方法制备得到的：熔点191.2～196.7℃；LCMS：434[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：1.58(m，4H)，1.98(t，J＝6.3Hz，2H)，2.44(m，2H)，3.99(s，3H)，4.16(s，1H)，7.18(d，J＝7.8Hz，1H)，7.25(s，1H)，7.37(t，J＝8.1Hz，1H)，7.84(d，J＝8.4Hz，1H)，7.98(s，1H)，8.51(s，1H)，8.66(s，1H)，8.82(s，1H)，9.42(s，1H)，9.73(s，1H)，10.35(s，1H)。
实施例26：N 1 -(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 基)-N 8 -羟基辛二酰胺(化合物44)
步骤26a.8-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氨基)-8-氧代辛酸甲酯(化合物0311-44)
制备出的所述标题化合物0311-44是黄色固体形式(150毫克，78％)，是由化合物0309-42(120毫克，0.4毫摩)以及8-氯-8-氧代辛酸甲酯(91毫克，0.44毫摩)通过与化合物0311-42的制备方法(实施例24)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：461[M+1]+。
步骤26b.N1-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基)-N8-羟基辛二酰胺(化合物44)
制备出的所述标题化合物44是黄色固体形式(30毫克，20％)，是由化合物0311-44(150毫克，0.3毫摩)通过与化合物42的制备方法(实施例24)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：462[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.30(m，4H)，1.51(m，2H)，1.62(m，2H)，1.95(t，J＝7.2Hz，2H)，2.45(t，J＝7.2Hz，2H)，4.00(s，3H)，4.18(s，1H)，7.19(d，J＝7.2Hz，1H)，7.26(s，1H)，7.38(t，J＝7.8Hz，1H)，7.86(d，J＝7.8Hz，1H)，7.99(s，1H)，8.52(s，1H)，8.83(s，1H)，9.44(s，1H)。
实施例27：(E)-3-(4-(2-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧 基喹唑啉基-6-氧基)乙氧基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(化合物 66)的制备方法
步骤27a.(E)-3-(4-羟基苯基)丙烯酸甲酯(化合物0501-66)
将4-羟基肉桂酸(8.2克，50毫摩)以及硫酸液滴的甲醇(30毫升)溶液组成的混合液加热回流过夜。之后蒸发溶剂，将得到的残余物溶解于乙酸乙酯中，利用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤两次，利用盐水进行洗涤，通过硫酸镁进行干燥，浓缩，从而获得白色固体形式的所述标题化合物0501-66(8.7克，98％)：LCMS：179[M+1]+。
步骤27b.(E)-3-(4-(2-甲苯磺酰氧基)乙氧基)苯基)丙烯酸甲酯(化合物0502-66)
在80℃下对化合物0501-66(5.0克，28.0毫摩)、2-溴乙醇(3.9克，62.0毫摩)以及碳酸钾的N，N-二甲基甲酰胺溶液所组成的混合液搅拌24小时。利用薄层层析法(TLC)对上述反应过程进行监控。将得到的混合液过滤。在减压条件下浓缩滤液。利用二乙醚对得到的残余物进行洗涤并且干燥，从而获得黄色固体形式的(E)-3-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)-丙烯酸甲酯(1.6克，26.0％)：LCMS：223[M+1]+。
向三乙胺(0.3克，3毫摩)以及二氯甲烷(20毫升)的混合液中分批加入甲苯磺酰氯(285毫克，1.5毫摩)并且搅拌0.5小时。向上述混合液中加入化合物(E)-3-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)丙烯酸甲酯(333毫克，1.5毫摩)并且加热回流24小时。向所述反应混合液中加入饱和的氯化铵溶液，并且分离得到的有机层，利用盐水进行洗涤，干燥(硫酸镁)，蒸发，从而获得白色固体形式的化合物0502-66(200毫克，36％)：LCMS：377[M+1]+。
步骤27c.(E)-3-(4-(2-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)乙氧基)苯基)丙烯酸甲酯(化合物0503-66)
在80℃下将化合物0109(176毫克，0.55毫摩)、0502-66(152毫克，0.94毫摩)以及碳酸钾的N，N-二甲基甲酰胺溶液组成的混合液搅拌24小时。利用薄层层析法(TLC)对上述反应过程进行监控。将得到的混合液过滤。在减压条件下浓缩滤液。利用二乙醚对得到的残余物进行洗涤并且干燥，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物0503-66(281毫克，98％)：LCMS：524[M+1]+。
步骤27d.(E)-3-(4-(2-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)乙氧基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺(化合物66)
制备出的所述标题化合物66是白色固体形式(65毫克，19％)，是由化合物0503-66(346.0毫克，0.66毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：525[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ3.93(s，3H)，4.48(s，4H)，6.31(d，J＝16.2Hz，1H)，7.05(d，J＝8.1Hz，2H)，7.21(s，1H)，7.44(t，J＝9.0Hz，1H)，7.52(d，J＝8.1Hz，2H)，7.78(d，J＝10.2Hz，1H)，7.88(m，1H)，8.12(dd，J＝6.6Hz，2.7Hz，1H)，8.50(s，1H)，8.96(s，1H)，8.50(s，1H)，9.56(s，1H)，10.65(s，1H)。
实施例28：N 1 -(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-甲氧基乙氧 基)喹唑啉基-6-基)-N 5 -羟基戊二酰胺(化合物68)的制备方法
步骤28a.7-(2-甲氧基乙氧基)-6-硝基喹唑啉基-4-(3氢)-酮(化合物0304-68)
在0℃下向2-甲氧基乙醇(125毫升)中加入钠(2.07克，90毫摩)直至钠溶解。向所述溶液中加入化合物0303(6.77克，30.0毫摩)。在90℃下将得到的混合液搅拌24小时，并且在此之后利用醋酸将pH调整至7。向所述混合液中加入水(50毫升)并且分离得到的黄色沉淀，用水进行洗涤并且干燥，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物0304-68(7.003克，88％)：LCMS：266[M+1]+。
步骤28b.4-氯-7-(2-甲氧基乙氧基)-6-硝基喹唑啉(化合物0305-68)
将产物0304-68(5.30克，20.0毫摩)以及三氯氧磷(50毫升)组成的混合液搅拌回流5小时。当得到一种透明溶液时，在减压条件下除去其中过量的三氯氧磷。将得到的残余物溶解于乙酸乙酯(100毫升)中并且依次使用水(30毫升x 2)、碳酸氢钠水溶液(20毫升x2)以及盐水(20毫升x1)对得到的有机层进行洗涤，通过硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得黄色固体形式的所述标题产物0305-68(5.31克，94％)：LCMS：284[M+1]+。
步骤28c.N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-甲氧基乙氧基)-6-硝基喹唑啉基-4-胺(化合物0306-68)
将产物0305-68(5.31克，18.7毫摩)以及3-氯-4-氟苯胺(5.45克，37.4毫摩)的异丙醇(150毫升)溶液组成的混合液搅拌回流过夜。将所述混合液冷却至室温并且分离得到的沉淀，利用甲醇以及乙醚进行洗涤。之后将得到的固体进行干燥，从而获得黄色固体形式的0306-68(5.70克，77％)：LCMS：393[M+1]+。
步骤28d.N4-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-4，6-二胺(化合物0308-68)
对0306-68(5.70克，14.5毫摩)、乙醇(165毫升)、水(43.5毫升)以及盐酸(2.9毫升)所组成的混合液进行搅拌直至形成透明溶液。向其中加入铁粉(16.24克，290.9毫摩)。将得到的混合液搅拌回流2小时。将其冷却至室温，在冰水浴中利用10％的氢氧化钠溶液将其pH调整至11，并且进行过滤。浓缩滤液以除去乙醇并且使用乙酸乙酯(100毫升x2)进行提取。利用盐水(30毫升x3)对得到的混合有机层进行洗涤并且通过硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得黄色固体形式的所述标题产物0308-68(4.92克，93％)：LCMS：363[M+1]+。
步骤28e.5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-6-氨基)-5-氧代戊酸甲酯(化合物0310-68)
向化合物0308-68(0.22克，0.6毫摩)的30毫升二氯甲烷溶液以及三乙胺(0.48克，4.8毫摩)中加入5-氯-5-氧代戊酸甲酯(0.198克，1.2毫摩)。在0℃下将所述混合液搅拌2小时。之后，将所述的反应混合液用水进行洗涤并且通过硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得褐色油形式的所述标题产物0310-68(270毫克，92％)：LCMS：491[M+1]+。
步骤28f.N1-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-6-基)-N5-羟基戊二酰胺(化合物68)
在0℃下，向处于搅拌状态的盐酸羟胺(4.67克，67毫摩)的甲醇(24毫升)中加入氢氧化钾(5.61克，100毫摩)的甲醇(14毫升)溶液。在加入之后，在0℃下将得到的混合液搅拌30分钟，并且允许其在低温下放置。分离由此得到的沉淀，并且处理得到的溶液从而得到游离的羟胺。
将上述新鲜制备的羟胺溶液(6毫升，4.0毫摩)放置于25毫升的长颈瓶中。向所述溶液中加入化合物0310-68(270毫克，0.55毫摩)，并且在室温下搅拌4小时。使用乙酸/甲醇中和所述的混合液。在减压条件下浓缩所述混合液。通过制备型高效液相色谱(HPLC)对得到的残余物进行纯化，从而得到黄色固体形式的所述标题化合物68(220毫克，75％)：LCMS：m/z 492[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜.)1.83(m，J＝7.5Hz，2H)，2.05(t，J＝7.2Hz，2H)，2.43(t，J＝6.9Hz，2H)，3.31(s，3H)，3.76(t，J＝4.5Hz，2H)，4.32(t，J＝4.2Hz，2H)，7.28(s，1H)，7.40(t，J＝9Hz，1H)，7.77(m，1H)，8.10(m，J＝2.1Hz，1H)，8.50(s，1H)，8.67(s，1H)，8.752(s，1H)，9.33(s，1H)，9.77(s，1H)，10.38(s，1H)。
实施例29：N 1 -(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-甲氧基乙氧 基)喹唑啉基-6-基)-N 6 -羟基己二酰二胺(化合物69)的制备方 法
步骤29a.6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-6-氨基)-6-氧代己酸甲酯(化合物0310-69)
向化合物0308-68(0.15克，0.4毫摩)、25毫升二氯甲烷以及三乙胺(0.162克，1.6毫摩)的溶液中加入6-氯-6-氧代己酸甲酯(0.36克，1.76毫摩)。在0℃下将得到的反应混合液搅拌2小时。将所述的反应混合液用水进行洗涤并且通过硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得褐色油形式的所述标题产物0310-69(185毫克，92％)：LCMS：505[M+1]+。
步骤29b.N1-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-6-基)-N6-羟基己二酰二胺(化合物69)
将新鲜制备的羟胺溶液(6毫升，4毫摩)放置于25毫升的长颈瓶中。向所述溶液中加入化合物0310-69(185毫克，0.38毫摩)，并且在室温下搅拌4小时。使用乙酸/甲醇中和所述的混合液。在减压条件下浓缩所述混合液。通过制备型高效液相色谱(HPLC)对得到的残余物进行纯化，从而得到白色固体形式的所述标题化合物69(150毫克，74％)：LCMS：506[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-
Figure G2007800418082D01701
：1.58(m，4H)，1.98(t，J＝5.7Hz，2H)，2.46(t，2H)，3.30(s，3H)，3.78(t，J＝4.2Hz，2H)，4.32(t，J＝5.1Hz，2H)，7.28(s，1H)，7.39(t，J＝9Hz，1H)，7.79(m，1H)，8.11(m，J＝2.7Hz，1H)，8.50(s，1H)，8.64(s，1H)，8.75(s，1H)，9.25(s，1H)，9.76(s，1H)，10.33(s，1H)。
实施例30：N 1 -(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-甲氧基乙氧 基)喹唑啉基-6-基)-N 8 -羟基辛二酰胺(化合物70)的制备方法
步骤30a.8-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-6-氨基)-8-氧代辛酸甲酯(化合物0310-70)
向化合物0308-68(0.219克，0.6毫摩)、30毫升二氯甲烷以及三乙胺(0.48克，2.4毫摩)的溶液中加入8-氯-8-氧代辛酸甲酯(0.496克，2.4毫摩)。在0℃下将得到的反应混合液搅拌2小时。将所述的反应混合液用水进行洗涤并且通过硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得褐色油形式的所述标题产物0310-70(281毫克，88％)：LCMS：533[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6.)，.1.35(m，4H)，1.58(m，2H)，1.61(m，2H)，2.29(t，J＝7.2Hz，2H)，2.41(t，J＝7.2Hz，2H)，3.35(s，3H)，3.77(t，J＝4.5Hz，2H)，4.32(t，J＝4.5Hz，2H)，7.28(s，1H)，7.40(t，J＝9.3Hz，1H)，7.78(m，1H)，8.11(m，1H)，8.50(s，1H)，8.74(s，1H)，9.24(s，1H)，9.76(s，1H)。
步骤30b.N1-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-6-基)-N8-羟基辛二酰胺(化合物70)
将新鲜制备的羟胺溶液(6毫升，4毫摩)放置于25毫升的长颈瓶中。向所述溶液中加入化合物0310-70(281毫克，0.53毫摩)，并且在室温下搅拌4小时。使用乙酸/甲醇中和所述的混合液。在减压条件下浓缩所述混合液。通过制备型高效液相色谱(HPLC)对得到的残余物进行纯化，从而得到黄色固体形式的所述标题化合物70(126毫克，40％)：LCMS：506[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.)，.1.35(m，4H)，1.58(m，J＝6.9Hz，2H)，1.61(m，J＝7.2Hz，2H)，1.93(t，J＝7.2Hz，2H)，2.42(t，J＝7.5Hz，2H)，3.35(s，3H)，3.77(t，J＝4.5Hz，2H)，4.32(t，J＝4.5Hz，2H)，7.28(s，1H)，7.40(t，J＝9.3Hz，1H)，7.78(m，1H)，8.11(m，J＝2.4Hz，1H)，8.50(s，1H)，8.62(d，J＝1.5Hz，1H)，8.75(s，1H)，9.25(s，1H)，9.76(s，1H)，10.31(s，1H)。
实施例31：7-(4-(3-乙炔基-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉 基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物75)的制备方法
步骤31a.2-溴-1-氟-4-硝基苯(化合物0602)
向1-溴-2-氟苯(35.0毫克，200毫摩)的200毫升浓硫酸溶液中加入20毫升68％的硝酸。将所述混合液的温度保持在20℃以下。当上述加入过程完成之后，在10℃下将得到的混合液搅拌过滤，之后使用冰水进行稀释。过滤收集得到的固体。将所述固体从石油醚中重结晶出来，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物0602(38克，89％)：熔点.55.8-56.7℃，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ7.66(t，J＝9Hz，1H)，8.32(m，1H)，8.58(dd，J＝3Hz，6Hz，1H)。
步骤31b.((2-氟-5-硝基苯基)乙炔基)三甲基硅烷(化合物0603)
在氩气环境下，将化合物0602(11.0克，50毫摩)、乙炔基三甲基硅烷(7.5克，75毫摩)、三苯基膦(0.5克)以及醋酸钯(II)(0.25克)的125毫升脱气三乙胺溶液所组成的混合液在100℃下加热过夜。将得到的反应混合液冷却并且过滤，并且将所述滤液浓缩至出现深褐色的油，将所述深褐色的油在减压条件下蒸馏，从而获得淡褐色固体形式的所述标题化合物0603(4.7克，40％)。1H NMR(氘代氯仿)：δ0.3(s，9H，SiCH)，7.22(t，J＝9.0Hz，1H)，8.2-8.5(m，2H)。
步骤31c.4-氟-3-((三甲基硅烷基)乙炔基)苯胺(化合物0604)
向25毫升的甲醇中混合化合物0603(3.5克，14.8毫摩)以及铁屑(4.14克，74.0毫摩)。向所述混合液中加入浓盐酸以及水，调整pH至4-5。将得到的混合液加热回流3小时，冷却，并且通过硅胶进行过滤。浓缩滤液从而获得黄色固体残余物，之后将所述残余物用乙醚进行提取。将得到的混合有机相通过硫酸镁进行干燥并且浓缩，从而获得褐色固体形式的所述标题化合物0604(2.69克，88％)：LCMS：208[M+1]+。
步骤31d.3-乙炔基-4-氟苯胺(化合物0605)
在室温下，利用100毫克氢氧化钾的20毫升甲醇溶液对上述获得的化合物0604进行处理过夜。将得到的溶液浓缩，用水进行稀释，调节至中性，并且随后利用乙醚进行提取。将得到的混合有机相通过硫酸镁进行干燥，浓缩从而获得褐色油形式的所述标题化合物0605(1.49克，85％)：LCMS：136[M+1]+。所述产物无需进行进一步的纯化即可应用于下一步骤中。
步骤31e.4-(3-乙炔基-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基乙酸(化合物0606)
将4-氯-7-甲氧基喹唑啉基-6-基乙酸(化合物0105)(252毫克，1.0毫摩)以及3-乙炔基-4-氟苯胺(0605)(200毫克，1.5毫摩)的异丙醇(10毫升)溶液所组成的混合液搅拌并且加热回流3小时。将所述混合液冷却至室温并且分离得到的沉淀。之后，将所述固体干燥，从而获得淡黄色固体形式的所述标题化合物0606(260毫克，74.0％)：LCMS：352[M+1]+。
步骤31f.4-(3-乙炔基-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-醇(化合物0607)
在室温下将化合物0606(260毫克，0.74毫摩)、一水合氢氧化锂(250毫克，5.8毫摩)的甲醇(25毫升)溶液以及水(25毫升)组成的混合液搅拌0.5小时。通过加入稀醋酸将所述混合液调节至中性。分离得到的沉淀并且干燥，从而获得灰色固体形式的所述标题化合物0607(234毫克，100％)：LCMS：310[M+1]+。
步骤31g.7-(4-(3-乙炔基-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0608-75)
制备出的所述标题化合物0608-75是黄色固体形式(300毫克，87.0％)，是由化合物0607(230毫克，0.74毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(176毫克，0.74毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：466[M+1]+。
步骤31h.7-(4-(3-乙炔基-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物75)
制备出的所述标题化合物75是白色固体形式(176毫克，70％)，是由化合物0608(250毫克，0.54毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点150.4～164.5℃(分解)；LCMS：453[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.33(m，2H)，1.48(m，4H)，1.80(m，2H)，1.94(t，J＝7.2Hz，2H)，3.91(s，3H)，4.10(t，J＝6.0Hz，2H)，4.51(s，1H)，7.17(s，1H)，7.31(t，J＝7.5Hz，1H)，7.77(s，1H)，7.85(m，1H)，7.98(m，1H)，8.45(s，1H)，8.65(s，1H)，9.47(s，1H)，10.33(s，1H)。
实施例32：(R)-N-羟基-6-(7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨基) 喹唑啉基-6-氧基)-己酰胺(化合物77)的制备方法
步骤32a.(R)-7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-醇(化合物0701-77)
在60℃下将化合物0105(2.0克，8.0毫摩)、(R)-1-苯乙胺(2.91克，24.0毫摩)以及异丙醇(50毫升)组成的混合液搅拌过夜。除去所述异丙醇并且利用柱层析对得到的残余物进行纯化，从而获得所述标题化合物0701-77(1.32克，56％)。LCMS：296[M+1]+。
步骤32b.(R)-6-(7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-氧基)己酸乙酯(化合物0702-77)
将化合物0701-77(500.0毫克，1.69毫摩)、碳酸钾(700.0毫克，5.07毫摩)、6-溴己酸乙酯(378.0毫克，1.69毫摩)以及二甲基甲酰胺(20毫升)组成的混合液在60℃下加热3小时。在减压条件下除去其中的二甲基甲酰胺(DMF)，将得到的残余物悬浮于水中，并且收集得到的固体并干燥，从而得到所述标题化合物0702-77(320毫克，43％)。LCMS：438[M+1]+。
步骤32c.(R)-N-羟基-6-(7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-氧基)-己酰胺(化合物77)
将化合物0702-77(320.0毫克，0.73毫摩)以及1.77摩/升的羟胺/甲醇(4.0毫升，6.77毫摩)组成的混合液在室温下搅拌0.5小时。利用醋酸(AcOH)将所述反应混合液调节至中性并且进行浓缩。将得到的残余物悬浮于水中并且分离得到的固体并进行干燥，从而获得粗产物。利用制备型高效液相色谱(HPLC)对所述粗产物进行纯化，从而获得所述标题化合物77(36毫克，12％)。LCMS：425[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.46(m，2H)，1.59(m，5H)，1.82(m，2H)，2.01(t，J＝8.7Hz，2H)，3.90(s，3H)，4.10(t，J＝6.3Hz，2H)，5.63(m，1H)，7.09(s，1H)，7.21(m，1H)，7.32(m，2H)，7.42(d，J＝7.2Hz，2H)，7.75(s，1H)，8.06(d，J＝8.4Hz，1H)，8.27(s，1H)，8.67(s，1H)，10.36(s，1H)。
实施例33：(R)-N-羟基-6-(4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基 -6-氧基)-己酰胺(化合物78)的制备方法
步骤33a.(R)-4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-醇(化合物0701-78)
在90℃下将化合物0204(1.0克，4.5毫摩)以及(R)-1-(3-氯-4-氟-苯基)乙胺(0.87克，5.0毫摩)的异丙醇(50毫升)溶液组成的混合液搅拌1小时。将所述混合液冷却至室温并且分离得到的沉淀。将得到的固体依次使用异丙醇以及甲醇进行洗涤，干燥，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物(R)-4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-基乙酸(0.62克，61％)：LCMS：308[M+1]+。
将上述产物(0.7克，2.3毫摩)以及一水合氢氧化锂(0.29克，6.81毫摩)的甲醇(10毫升)/水(15毫升)溶液组成的混合液在室温下搅拌1小时。利用醋酸将其pH调整至4并且过滤。将收集到的黄色固体用水洗涤并且干燥，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物0701-78(0.42克，62％)，LCMS：266[M+1]+。
步骤33b.(R)-6-(4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-氧基)己酸乙酯(化合物0702-78)
将化合物0701-78(0.31克，1.2毫摩)、6-溴己酸乙酯(0.27克，1.2毫摩)以及碳酸钾(0.8克，5.8毫摩)的二甲基甲酰胺(15毫升)溶液所组成的混合液进行搅拌并且加热至80℃保持2小时。将得到的混合液过滤并且蒸发滤液。将得到的固体用乙醚进行洗涤，从而获得灰黄色固体形式的所述标题化合物0702-78(0.2克，42.5％)，LCMS：408[M+1]+。
步骤33c.(R)-N-羟基-6-(4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-氧基)-己酰胺(化合物78)
制备出的所述标题化合物78是灰黄色的固体(42毫克，26％)，是由化合物0702-78(168毫克，0.41毫摩)通过与化合物77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS 395[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.47(m，2H)，1.52(m，2H)1.65(d，J＝7.2Hz，3H)1.71(m，2H)，2.05(t，J＝3.9Hz，2H)，4.04(t，J＝6.3Hz，2H)，5.56(q，J＝6.3Hz，1H)7.13(t，J＝7.2Hz，1H)，7.26(t，J＝7.8Hz，2H)，7.32(dd，J＝2.7，J＝9.0Hz，1H)7.39(d，J＝7.2Hz，2H)，7.56(d，J＝7.2Hz，1H)，7.65(m，1H)，8.26(s，1H)。
实施例34：(R)-N-羟基-7-(7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨基) 喹唑啉基-6-氧基)-庚酰胺(化合物79)的制备方法
步骤34a.(R)-7-(7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0702-79)
将化合物0701-79(500毫克，1.69毫摩)、碳酸钾(700毫克，5.07毫摩)、7-溴庚酸乙酯(401毫克，1.69毫摩)以及二甲基甲酰胺(20毫升)组成的混合液在60℃下加热3小时。在减压条件下除去其中的二甲基甲酰胺(DMF)，将得到的残余物悬浮于水中，并且收集得到的固体并干燥，从而得到所述标题化合物0702-79(340毫克，44％)。LCMS：452[M+1]+。
步骤34b.(R)-N-羟基-7-(7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-氧基)-庚酰胺(化合物79)
所述标题化合物79(41毫克，12％)是由化合物0702-79(340毫克，0.75毫摩)通过与化合物77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：439[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.34(m，2H)，1.52(m，4H)，1.58(d，J＝7.5Hz，2H)，1.80(m，2H)，1.99(t，J＝8.7Hz，2H)，3.89(s，3H)，4.10(t，J＝6.3Hz，2H)，5.62(m，1H)，7.08(s，1H)，7.20(m，1H)，7.31(m，2H)，7.41(d，J＝7.2Hz，2H)，7.74(s，1H)，8.05(d，J＝8.1Hz，1H)，8.26(s，1H)，8.63(s，1H)，10.32(s，1H)。
实施例35：(S)-N-羟基-7-(7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨基) 喹唑啉基-6-氧基)-庚酰胺(化合物80)的制备方法
步骤35a.(S)-7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-醇(化合物0701-80)
制备出的所述标题化合物0701-80是黄色固体形式(556毫克，62.8％)，是由化合物0105(750毫克，3.0毫摩)以及(S)-1-苯基乙胺(1089毫克，9.0毫摩)通过化合物0701-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：296[M+1]+。
步骤35b.(S)-7-(7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-氧基)-庚酸乙酯(化合物0702-80)
制备出的所述标题化合物0702-80是黄色固体形式(160毫克，70.95％)，是由化合物0701-80(148毫克，0.5毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(120毫克，0.5毫摩)通过与化合物0702-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：452[M+1]+。
步骤35c.(S)-N-羟基-7-(7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-氧基)-庚酰胺(化合物80)
制备出的所述标题化合物80是白色固体形式(95毫克，61.9％)，是由化合物0702-80(160毫克，0.35毫摩)以及新鲜的羟胺/甲醇(3毫升，5.31毫摩)通过与化合物77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：熔点106.7～111.3℃，LCMS：439[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.42(m，6H)，1.57(d，J＝6.6Hz，3H)，1.79(m，2H)，1.95(t，J＝7.2Hz，2H)，3.88(s，3H)，4.08(t，J＝6.9Hz，2H)，5.62(m，J＝6.6Hz，1H)，7.06(s，1H)，7.21(t，J＝7.5Hz，1H)，7.30(t，J＝7.5Hz，2H)，7.41(d，J＝7.5Hz，2H)，7.75(s，1H)，8.15(d，J＝9.6Hz，1H)，8.29(s，1H)，8.60(s，1H)，10.30(s，1H)。
实施例36：(R)-7-(4-(1-(4-氟苯基)乙氨基)-7-甲氧基 喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物81)的制备方法
步骤36a.(R)-4-(1-(4-氟苯基)乙氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-醇(化合物0701-81)
制备出的所述标题化合物0701-81是黄色固体形式(495毫克，52.71％)，是由化合物0105(750毫克，3.0毫摩)以及(R)-1-(4-氟苯基)乙胺(1251毫克，9.0毫摩)通过化合物0701-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：314[M+1]+。
步骤36b.(R)-7-(4-(1-(4-氟苯基)乙氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-庚酸乙酯(化合物0702-81)
制备出的所述标题化合物0702-81是黄色固体形式(190毫克，81.0％)，是由化合物0701-81(156毫克，0.5毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(120毫克，0.5毫摩)通过与化合物0702-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：470[M+1]+。
步骤36c.(R)-7-(4-(1-(4-氟苯基)乙氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物81)
制备出的所述标题化合物81是白色固体形式(100毫克，54.12％)，是由化合物0702-81(190毫克，0.40毫摩)以及新鲜的羟胺/甲醇(3毫升，5.31毫摩)通过与化合物77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：熔点118.2-144.3℃，LCMS：457[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.33(m，2H)，1.47(m，4H)，1.56(d，J＝7.2Hz，3H)，1.78(m，2H)，1.95(t，J＝7.2Hz，2H)，3.87(s，1H)，4.07(t，J＝6.0Hz，2H)，5.60(m，1H)，7.06(s，1H)，7.11(t，J＝9.0Hz，2H)，7.44(m，2H)，7.71(s，1H)，8.04(d，J＝7.5Hz，1H)，8.25(s，1H)，8.65(s，1H)，10.33(s，1H)。
实施例37：(R)-7-(4-(1-(4-氯苯基)乙氨基)-7-甲氧基 喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物82)的制备方法
步骤37a.(R)-4-(1-(4-氯苯基)乙氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-醇(化合物0701-82)
制备出的所述标题化合物0701-82是黄色固体形式(0.65克，49％)，是由化合物0105(1.0克，4毫摩)以及(R)-1-(4-氯苯基)乙胺(1.87克，12毫摩)通过化合物0701-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：300[M+1]+。
步骤37b.(R)-7-(4-(1-(4-氯苯基)乙氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-庚酸乙酯(化合物0702-82)
制备出的所述标题化合物0702-82是黄色固体形式(460毫克，56％)，是由化合物0701-82(550毫克，1.7毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(404毫克，1.7毫摩)通过与化合物0702-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：486[M+1]+。
步骤37c.(R)-7-(4-(1-(4-氯苯基)乙氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物82)
制备出的所述标题化合物82是白色固体形式(145毫克，29％)，是由化合物0702-81(510毫克，1.05毫摩)以及新鲜的0.77摩/升的羟胺/甲醇(4.7毫升，8.4毫摩)通过与化合物77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：473[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.34(m，2H)，1.47(m，4H)，1.57(d，J＝6.9Hz，3H)，1.80(m，2H)，1.97(t，J＝7.2Hz，2H)，3.89(s，3H)，4.10(t，J＝6.6Hz，2H)，5.57(m，1H)，7.08(s，1H)，7.38(d，J＝8.4Hz，2H)，7.43(d，J＝8.4Hz，2H)，7.73(s，1H)，8.04(d，J＝7.8Hz，1H)，8.23(s，1H)，8.64(s，1H)，10.33(s，1H)。
实施例38：(R)-N-羟基-7-(7-甲氧基-4-(1-(4-甲氧基苯 基)乙氨基)喹唑啉基-6-氧基)-庚酰胺(化合物83)的制备方 法
实施例38a.(R)-7-甲氧基-4-(1-(4-甲氧基苯基)乙氨基)喹唑啉基-6-醇(化合物0701-83)
将化合物0105(1.0克，4.0毫摩)、(R)-1-(4-甲氧基苯基)乙胺(1.81克，12.0毫摩)以及异丙醇(25毫升)组成的混合液在60℃下搅拌过夜。除去异丙醇并且利用柱层析对得到的残余物进行纯化，从而获得所述标题化合物0701-83(0.81克，62％)。LCMS：326[M+1]+。
实施例38b.(R)-7-(7-甲氧基-4-(1-(4-甲氧基苯基)乙胺)喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0702-83)
将化合物0701-83(630毫克，1.94毫摩)、碳酸钾(804毫克，5.8毫摩)、7-溴庚酸乙酯(459毫克，1.94毫摩)以及二甲基甲酰胺(20毫升)组成的混合液加热至60℃并保持3小时。在减压条件下除去其中的二甲基甲酰胺(DMF)，将得到的残余物悬浮于水中，收集得到的固体并且进行干燥，从而获得所述标题化合物0702-83(440毫克，47％)。LCMS：482[M+1]+。
步骤38c.(R)-N-羟基-7-(7-甲氧基-4-(1-(4-甲氧基苯基)乙氨基)-喹唑啉基-6-氧基)-庚酰胺(化合物83)
将化合物0702-83(530毫克，1.1毫摩)以及1.77摩/升的羟胺/甲醇(5毫升，8.8毫摩)组成的混合液在室温下搅拌0.5小时。使用醋酸将所述的反应混合液调节至中性并且随后将混合液浓缩，将得到的残余物悬浮于水中，分离得到的沉淀并且进行干燥，从而获得粗产物。利用制备型高效液相色谱(HPLC)对得到的粗产物进行纯化，从而得到所述标题化合物83(151毫克，29％)。LCMS：469[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.32(m，2H)，1.45(m，4H)，1.54(d，J＝6.9Hz，3H)，1.78(m，2H)，1.95(t，J＝7.2Hz，2H)，3.69(s，3H)，3.87(s，3H)，4.07(t，J＝6.3Hz，2H)，5.56(m，1H)，6.87(d，J＝8.7Hz，2H)，7.05(s，1H)，7.31(d，J＝8.7Hz，2H)，7.70(s，1H)，7.96(d，J＝8.1Hz，1H)，8.26(s，1H)，8.62(s，1H)，10.31(s，1H)。
实施例39：7-(4-(苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N- 羟基庚酰胺(化合物85)的制备方法
步骤39a.4-(苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-醇(0701-85)
向化合物0105(1.0克，4.0毫摩)以及2-丙醇(50毫升)组成的混合液中加入苄基胺(1.28克，12.0毫摩)。之后，将得到的反应混合液搅拌回流3小时。将所述混合液冷却至室温并且分离得到的沉淀。随后，将得到的固体进行干燥，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物0701-85(854毫克，76％)：LCMS：282[M+1]+。
步骤39b.7-(4-(苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0702-85)
制备出的所述标题化合物0702-85是黄色固体液体形式(270毫克，62％)，是由化合物0701-85(281毫克，1.0毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(236毫克，1毫摩)通过与化合物0702-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：438[M+1]+。
步骤39c.7-(4-(苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物85)
制备出的所述标题化合物85是黄色固体形式(64毫克，24％)，是由化合物0702-85(270毫克，0.62毫摩)通过与化合物77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：425[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.32(m，2H)，1.42(m，2H)，1.51(m，2H)，1.76(m，2H)，1.94(t，J＝7.2Hz，2H)，3.88(s，3H)，4.03(t，J＝6.3Hz，2H)，4.76(d，J＝5.4Hz，2H)，7.08(s，1H)，7.21(t，J＝6.0Hz，2H)，7.30(t，J＝6.0Hz，2H)，7.33(t，J＝6.6Hz，1H)，7.63(s，1H)，8.29(s，1H)，8.42(t，J＝6.0Hz，1H)，8.64(s，1H)，10.32(s，1H)。
实施例40：7-(4-(4-氟苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基) -N-羟基庚酰胺(化合物86)的制备方法
步骤40a.4-(4-氟苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-醇(0701-86)
制备出的所述标题化合物0701-86是黄色固体形式(489毫克，54.5％)，是由化合物0105(750毫克，3.0毫摩)以及(4-氟苯基)甲胺(1125毫克，9.0毫摩)通过与化合物0701-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：300[M+1]+。
步骤40b.7-(4-(4-氟苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0702-86)
制备出的所述标题化合物0702-86是黄色液体形式(408毫克，89.67％)，是由化合物0701-86(300毫克，1.0毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(237毫克，1.0毫摩)通过与化合物0702-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：456[M+1]+。
步骤40c.7-(4-(4-氟苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物86)
制备出的所述标题化合物86是白色固体形式(300毫克，69.97％)，是由化合物0702-86(442毫克，0.97毫摩)以及新鲜的羟胺/甲醇(4毫升，7.08毫摩)通过与化合物77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：443[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.31～1.54(m，6H)，1.77(m，2H)，1.94(t，J＝7.5Hz，2H)，3.88(s，3H)，4.03(t，J＝6.3Hz，2H)，4.74(d，J＝5.4Hz，2H)，7.11(m，3H)，7.38(m，2H)，7.68(s，1H)，8.30(s，1H)，8.40(m，1H)，8.60(s，1H)，10.30(s，1H)。
实施例41：7-(4-(3，4-二氟苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物87)的制备方法
步骤41a.4-(3，4-二氟苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-醇(化合物0701-87)
制备出的所述标题化合物0701-87是淡黄色固体形式(500毫克，52.6％)，是由化合物0105(750毫克，3.0毫摩)以及(3，4-二氟苯基)甲胺(1072毫克，7.5毫摩)通过与化合物0701-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：318[M+1]+。
步骤41b.7-(4-(3，4-二氟苄氨基)-7-甲氧基-4a，5-二氢喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0702-87)
制备出的所述标题化合物0702-87是淡黄色固体形式(205毫克，86.7％)，是由化合物0701-87(160毫克，0.5毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(237毫克，1.0毫摩)通过与化合物0702-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：474[M+1]+。
步骤41c.7-(4-(3，4-二氟苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物87)
制备出的所述标题化合物87是白色固体形式(75毫克，44.5％)，是由化合物0702-87(173毫克，0.366毫摩)以及新鲜的羟胺/甲醇(2毫升，3.4毫摩)通过与化合物77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：461[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.30(m，2H)，1.50(m，4H)，1.77(m，2H)，1.94(t，J＝7.2Hz，2H)，3.88(s，1H)，4.03(t，J＝6.6Hz，2H)，4.72(d，J＝6.0Hz，2H)，7.08(s，1H)，7.19(s，1H)，7.35(m，2H)，7.61(s，1H)，8.30(s，1H)，8.46(t，J＝6.0Hz，1H)，8.64(s，1H)，10.32(s，1H)。
实施例42：7-(4-(3-氯-4-氟苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物88)的制备方法
步骤42a.4-(3-氯-4-氟苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-醇(化合物0701-88)
制备出的所述标题化合物0701-88是淡黄色固体形式(500毫克，50.1％)，是由化合物0105(750毫克，3.0毫摩)以及(3-氯-4-氟苯基)甲胺(1435毫克，9毫摩)通过与化合物0701-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：334[M+1]+。
步骤42b.7-(4-(3-氯-4-氟苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0702-88)
制备出的所述标题化合物0702-88是黄色固体形式(306毫克，92.02％)，是由化合物0701-88(227毫克，0.68毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(161毫克，0.68毫摩)通过与化合物0702-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：490[M+1]+。
步骤42c.7-(4-(3-氯-4-氟苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物88)
制备出的所述标题化合物88是白色固体形式(210毫克，70.02％)，是由化合物0702-88(306毫克，0.63毫摩)以及新鲜的羟胺/甲醇(3毫升，5.31毫摩)通过与化合物77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：熔点143.1℃(分解)，LCMS：477[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.31(m，2H)，1.48(m，4H)，1.77(m，2H)，1.94(t，J＝7.2Hz，2H)，3.89(s，3H)，4.04(t，J＝6.6Hz，2H)，4.74(d，J＝5.4Hz，2H)，7.09(s，1H)，7.35(d，J＝7.8Hz，2H)，7.54(d，J＝8.4Hz，1H)，7.63(s，1H)，8.35(s，1H)，8.58(m，1H)，8.65(s，1H)，10.33(s，1H)，11.92(s，1H)。
实施例43：7-(4-(3-溴苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基) -N-羟基庚酰胺(化合物89)的制备方法
步骤43a.4-(3-溴苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-醇(0701-89)
制备出的所述标题化合物0701-89是黄色固体形式(543毫克，50.2％)，是由化合物0105(750毫克，3.0毫摩)以及(3-溴苯基)甲胺(1674毫克，9毫摩)通过与化合物0701-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：360[M+1]+。
步骤43b.7-(4-(3-溴苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0702-89)
制备出的所述标题化合物0702-89是黄色固体形式(230毫克，89.15％)，是由化合物0701-89(180毫克，0.5毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(120毫克，0.5毫摩)通过与化合物0702-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：516[M+1]+。
步骤43c.7-(4-(3-溴苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物89)
制备出的所述标题化合物89是白色固体形式(105毫克，53.96％)，是由化合物0702-89(200毫克，0.39毫摩)以及新鲜的羟胺/甲醇(3毫升，5.31毫摩)通过与化合物77的制备方法
(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：503[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.31～1.56(m，6H)，1.75(m，2H)，1.94(t，J＝7.2Hz，2H)，3.88(s，3H)，4.06(t，J＝6.6Hz，2H)，4.75(d，J＝5.7Hz，2H)，7.08(s，1H)，7.27(t，J＝7.5Hz，1H)，3.7.33(m，2H)，7.42(s，1H)，7.61(s，1H)，7.93(s，1H)，8.30(s，1H)，8.41(t， J＝6.0Hz，1H)，8.60(s，1H)，10.29(s，1H)。
实施例44：4-(2-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉 基-6-氧基)乙氧基)-N-羟基苯甲酰胺(化合物92)的制备方法
步骤44a.4-(2-溴乙氧基)苯甲酸甲酯(化合物0502-92)
将化合物4-羟基苯甲酸甲基酯(457.0毫克，3.0毫摩)、碳酸钾(828毫克，6毫摩)以及1，2-二溴乙烷(10毫升)组成的混合液在130℃下加热8小时。在减压条件下除去其中的1，2-二溴乙烷，并且将得到的残余物悬浮于水中。分离得到的沉淀并且进行干燥，从而获得白色固体形式的所述标题化合物0502-92(440毫克，57％)。LCMS：259[M+1]+。
步骤44b.4-(2-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)乙氧基)苯甲酸甲酯(化合物0503-92)
将化合物0109(384毫克，1.2毫摩)、碳酸钾(276毫克，2毫摩)、化合物0502-92(311毫克，1.2毫摩)以及二甲基甲酰胺(10毫升)组成的混合液在40℃下加热过夜。在减压条件下除去其中的二甲基甲酰胺(DMF)并且将得到的残余物悬浮于水中。收集得到的沉淀并且进行干燥，从而获得白色固体形式的所述标题化合物0503-92(430毫克，72％)。LCMS：259[M+1]+。
步骤44c.4-(2-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)乙氧基)-N-羟基苯甲酰胺(化合物92)
将化合物0502-92(249毫克，0.5毫摩)以及1.77摩/升的羟胺/甲醇(5毫升，8.85毫摩)组成的混合液在室温下搅拌0.5小时。使用醋酸将所述的反应混合液调节至中性并且随后将混合液浓缩，并且将得到的残余物悬浮于水中。分离得到的沉淀并且进行干燥，从而获得粗产物。利用制备型高效液相色谱(HPLC)对得到的粗产物进行纯化，从而得到白色固体形式的所述标题化合物92(80毫克，32％)。LCMS：439[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.07(s，2H)，3.93(s，3H)，4.50(s，4H)，7.08(d，J＝8.4Hz，2H)，7.22(s，2H)，7.44(t，J＝9.0Hz，1H)，7.76(m，3H)，7.89(s，1H)，8.12(m，1H)，8.51(s，1H)，8.87(s，1H)，9.54(s，1H)，11.05(s，1H)。
实施例45：7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-甲氧基庚酰胺(化合物95)的制备方法
将化合物0802(544毫克，1.25毫摩)、碘甲烷(0804)(177毫克，1.25毫摩)以及碳酸钾(1.0克，7.25毫摩)的N，N-二甲基甲酰胺(15毫升)溶液所组成的混合液在室温下搅拌12小时。在减压条件下除去溶剂并且将得到的残余物溶解于乙酸乙酯(50毫升)中。利用饱和的碳酸氢钠水溶液(20毫升)以及盐水(20毫升)对得到的有机层进行洗涤。将所述有机层通过硫酸镁进行干燥并且浓缩，从而获得灰黄色固体形式的所述标题化合物95(500毫克，89％)。熔点195.8～197.0℃；LCMS：449[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜-d6)
Figure G2007800418082D01891
δ1.35(m，2H)，1.50(m，4H)，1.80(m，2H)，1.94(t，J＝7.2Hz，2H)，3.54(s，3H)，3.92(s，3H)，4.12(t，J＝6.3Hz，2H)，4.19(s，1H)，7.19(m，2H)，7.40(t，J＝7.8Hz，1H)，7.80(s，1H)，7.87(d，J＝9.6Hz，1H)，7.97(s，1H)，8.48(s，1H)，9.45(s，1H)，10.92(s，1H)。
实施例46：N-乙酰氧基-7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧 基喹唑啉基-6-氧基)庚酰胺(化合物96)的制备方法
将化合物0801(50毫克，0.108毫摩)、醋酸酐(204毫克，2.0毫摩)以及醋酸(2毫升)组成的混合液在室温下搅拌1小时。使用碳酸氢钠饱和溶液将所述反应混合液调节至中性。分离得到的沉淀并且进行干燥，从而获得产物96(42毫克，77％)。LCMS：505[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.40(m，2H)，1.50(m，2H)，1.55(m，2H)，1.80(m，2H)，2.09(s，3H)，2.12(m，2H)，3.94(s，3H)，4.13(t，J＝6.9Hz，2H)，7.20(s，1H)，7.43(t，J＝9.0Hz，1H)，7.78(m，1H)，7.84(s，1H)，8.12(m，1H)，8.49(s，1H)，9.67(s，1H)。
实施例47：N-乙酰氧基-7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基 喹唑啉基-6-氧基)庚酰胺(化合物97)的制备方法
制备出的所述标题化合物97是固体形式(45毫克，86.0％)，是由化合物0802(48毫克，0.11毫摩)以及醋酸酐(204毫克，2毫摩)通过与化合物96的制备方法(实施例46)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：476.5[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.40(m，2H)，1.46(m，2H)，1.58(m，2H)，1.80(m，2H)，2.12(s，3H)，2.13(m，2H)，3.94(s，3H)，4.14(t，J＝6.6Hz，2H)，4.19(s，1H)，7.20(d，J＝6.3Hz，2H)，7.40(t，J＝7.8Hz，1H)，7.83(s，1H)，7.89(d，J＝7.8Hz，1H)，7.99(s，1H)，8.49(s，1H)，9.50(s，1H)，11.55(s，1H)。
实施例48：N-(环己基羰氧基)-7-(4-(3-乙炔基苯氨基) -7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)庚酰胺(化合物98)的制备方法
将化合物0802(218毫克，0.5毫摩)以及三乙胺(75毫克，0.75毫摩)溶解于丙酮(20毫升)以及N，N-二甲基甲酰胺(2毫升)中。将所述反应混合液冷却至0℃并且向其中逐滴加入环己基羰基氯(73毫克，0.5毫摩)的丙酮(5毫升)溶液。将所述反应混合液回暖至环境温度并且搅拌1小时。在减压条件下浓缩所述混合液并且利用柱层析对得到的残余物进行纯化，从而得到黄色固体形式的所述标题化合物98(50毫克，18％)：LCMS：545[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.21～1.63(m，15H)，1.81(m，4H)，2.11(t，J＝7.2Hz，2H)，3.92(s，3H)，4.12(t，J＝7.2Hz，2H)，4.17(s，1H)，7.19(m，2H)，7.39(t，J＝7.8Hz，1H)，7.81(s，1H)，7.88(d，J＝8.4Hz，1H)，7.97(s，1H)，8.47(s，1H)，9.45(s，1H)，11.50(s，1H)。
实施例49：7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-(异丁酰氧基)庚酰胺(化合物99)的制备方法
制备出的所述标题化合物99是黄色固体形式(100毫克，44.0％)，是由化合物0802(195毫克，0.45毫摩)以及异丁酰基氯(48毫克，0.45毫摩)通过与化合物98的制备方法(实施例48)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：505[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.10(d，J＝7.2Hz，6H)，1.39(m，2H)，1.47(m，2H)，1.56(m，2H)，1.81(m，2H)，2.11(t，J＝7.5Hz，2H)，2.68(m，J＝7.2Hz，2H)，3.92(s，3H)，4.12(t，J＝6.6Hz，2H)，4.17(s，1H)，7.19(m，2H)，7.38(t，J＝7.8Hz，1H)，7.82(s，1H)，7.88(d，J＝8.7Hz，1H)，7.97(s，1H)，8.47(s，1H)，9.50(s，1H)，11.55(s，1H)。
实施例50：7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-(丙酰氧基)庚酰胺(化合物100)的制备方法
制备出的所述标题化合物100是黄色固体形式(100毫克，41.0％)，是由化合物0802(218毫克，0.5毫摩)以及丙酰基氯(47毫克，0.5毫摩)通过与化合物98的制备方法(实施例48)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：491[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.05(t，J＝7.5Hz，3H)，1.39(m，2H)，1.48(m，2H)，1.56(m，2H)，1.81(m，2H)，2.12(t，J＝6.6Hz，2H)，2.41(q，J＝7.5Hz，2H)，3.92(s，3H)，4.12(t，J＝6.6Hz，2H)，4.18(s，1H)，7.19(m，2H)，7.38(t，J＝7.8Hz，1H)，7.80(s，1H)，7.88(d，J＝8.1Hz，1H)，7.97(s，1H)，8.47(s，1H)，9.45(s，1H)，11.53(s，1H)。
实施例51：N-(苯甲酰氧基)-7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-7- 甲氧基喹唑啉基-6-氧基)庚酰胺(化合物101)的制备方法
制备出的所述标题化合物101是黄色固体形式(150毫克，56.0％)，是由化合物0802(218毫克，0.5毫摩)以及苯甲酰基氯(72毫克，0.5毫摩)通过与化合物98的制备方法(实施例48)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：539[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.51(m，4H)，1.61(m，2H)，1.84(m，2H)，2.21(t，J＝7.5Hz，2H)，3.93(s，3H)，4.14(t，J＝6.9Hz，2H)，4.19(s，1H)，7.19(m，2H)，7.38(t，J＝7.8Hz，1H)，7.55(m，2H)，7.72(t，J＝7.8Hz，1H)，7.82(s，1H)，7.89(d，J＝8.7Hz，1H)，7.99(m，3H)，8.48(s，1H)，9.48(s，1H)，11.88(s，1H)。
实施例52：7-(4-(3-乙炔基苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物90)的制备方法
步骤52a.4-(3-乙炔基苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-醇(0701-90)
制备出的所述标题化合物0701-90是淡黄色固体形式(406毫克，65％)，是由化合物0105(520毫克，2.06毫摩)以及3-乙炔基苄胺(600毫克，4.6毫摩)的异丙醇(20毫升)溶液通过化合物0701-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：306[M+1]+。
步骤52b.7-(4-(3-乙炔基苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物0702-90)
制备出的所述标题化合物0702-90是黄色固体形式(350毫克，57％)，是由化合物0701-90(406毫克，1.33毫摩)、碳酸钾以及7-溴庚酸乙酯通过与化合物0702-77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：462[M+1]+。
步骤52c.7-(4-(3-乙炔基苄氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物90)
制备出的所述标题化合物90是白色固体形式(30毫克，8.8％)，是由化合物0702-90(350毫克，0.76毫摩)以及新鲜的羟胺/甲醇(2毫升，3.54毫摩)通过与化合物77的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：449[M+1]+，1HNMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.30-1.53(m，6H)，1.74-1.78(m，2H)，1.92-1.96(m，2H)，3.88(s，3H)，4.04(t，J＝6.6Hz，2H)，4.11(s，1H)，4.75(d，J＝4.5Hz，2H)，7.08(s，1H)，7.33-7.37(m，3H)，7.43(s，1H)，7.61(s，1H)，8.30(s，1H)，8.41(t，J＝6.6Hz，1H)，8.60(s，1H)，10.29(s，1H)。
实施例53：N-(6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉 基-6-氧基)己基)-N-羟基乙酰胺(化合物103)的制备方法
步骤53a.6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-1-己醇(化合物0901)
将化合物0109(1.1克，3.44毫摩)以及碳酸钾(1.9克，13.76毫摩)的二甲基甲酰胺(20毫升)溶液所组成的混合液在40℃下搅拌10分钟。向其中加入6-溴-1-己醇(0.64克，3.44毫摩)并且将得到的混合液在60℃下搅拌6小时。在减压条件下除去二甲基甲酰胺并且将得到的残余物悬浮于水中。收集得到的固体并且进行干燥，从而获得产物0901(1.35克，93％)。LC-MS：420[M+1]+。
步骤53b.N-乙酰氧基乙酰胺(化合物0902-103)
将氯羟胺(1.39克，20毫摩)、醋酸钠(2.46克，30毫摩)以及无水醋酸(20.4克，200毫摩)的醋酸(40毫升)溶液所组成的混合液加热回流48小时。将得到的反应混合液过滤并且浓缩。向所述残余物中添加水(20毫升)并且利用乙酸乙酯(30毫升x3)进行提取。收集得到的有机层，利用饱和的碳酸氢钠溶液、盐水进行洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤并且浓缩，从而得到黄色液体形式的所述化合物0902-103(2.11克，90％)。
步骤53c.N-乙酰氧基-N-(6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)己基)乙酰胺(化合物0903-103)
将化合物0902-103(117毫克，1.0毫摩)、化合物0901(210毫克，0.5毫摩)以及三苯基膦(PPh3)(524毫克，2.0毫摩)的混合液溶解于无水四氢呋喃(50毫升)中。将得到的混合液在室温下搅拌并且随后缓慢加入(E)-二异丙基二氮烯-1，2-乙二酸(404毫克，2.0毫摩)。将所述混合液加热回流1小时并且浓缩。利用快速柱色谱法对得到的残余物(4.53克)进行纯化，其中所述快速柱色谱法利用的是硅胶，并且使用石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1的洗脱剂，从而得到黄色固体形式的化合物0903-103(50毫克，19％)。
步骤53d.N-(6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)己基)-N-羟基乙酰胺(化合物103)
向化合物0903(50毫克，0.1毫摩)的甲醇(2毫升)溶液与水(2毫升)组成的混合液中加入一水合氢氧化锂(6毫克，0.15毫摩)。将得到的反应混合液在室温下搅拌30分钟并且使用醋酸将其调节至中性。将得到的混合液蒸发以除去甲醇。过滤得到的固体，用水、二乙醚进行洗涤，从而得到橙色固体形式的所述标题化合物103(32毫克，70％)。LCMS：477[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)
Figure G2007800418082D01951
m，2H)，1.50(m，4H)，1.82(m，2H)，1.94(s，3H)，3.46(t，J＝7.2Hz，2H)，3.97(s，3H)，4.14(t，J＝6.3Hz，2H)，7.28(s，1H)，7.54(t，J＝9.0Hz，1H)，7.70(m，1H)，8.03(dd，1H)，8.16(s，1H)，8.82(s，1H)，9.70(s，1H)。
实施例54：N-(6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉 基-6-氧基)己基)-N-羟基丙酰胺(化合物106)的制备方法
步骤54a.N-(丙酰氧基)丙酰胺(化合物0902-106)
将氯羟胺(1.39克，20毫摩)溶解于二甲基甲酰胺(20毫升)以及丙酮(20毫升)中。利用冰/盐浴将所述反应混合液冷却至-10℃。向所述冷溶液中加入三乙胺(Et3N)(20毫升，120毫摩)并且随后缓慢加入丙酰基氯(7.4克，80毫摩)。在此之后，将所述混合液回暖至室温并且搅拌1小时。向所述反应混合液中加入水(50毫升)并且利用乙酸乙酯(100毫升x3)进行提取。收集得到的有机层，利用饱和的碳酸氢钠溶液(20毫升x2)以及盐水(20毫升)进行洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤并且浓缩，从而得到橙色液体形式的所述标题产物0902-106(3.93克，100％)：LCMS：146[M+1]+。
步骤54b.7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基-N-甲基庚酰胺(化合物0903-106)
在室温下，向化合物0902-106(795毫克，5.5毫摩)、化合物0901-106(419毫克，1.0毫摩)以及三苯基膦(PPh3)(1.31克，5.0毫摩)的无水四氢呋喃(40毫升)溶液所组成的混合液中缓慢加入(E)-二异丙基二氮烯-1，2-乙二酸(1.01克，5毫摩)。将所述混合液加热回流1小时并且浓缩，从而获得粗产物0903-106(4.53克)，上述粗产物无需进一步的纯化即可在下一步骤中使用。
步骤54c.N-(6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)己基)-N-羟基丙酰胺(化合物106)
在冰/水浴温度下向化合物0903-106(4.53克粗产物)中加入氨水/乙醇(EtOH)溶液(20毫升)。之后，将所述反应混合液回暖至室温并且在室温下搅拌过夜。过滤所述的反应混合液并且将滤液浓缩直至得到残余物，利用快速柱层析对得到的残余物进行纯化，其中所述的快速柱层析使用的是硅胶，并且使用乙酸乙酯/石油醚(1：1)作为洗脱剂，从而获得白色固体形式的所述标题化合物106(89毫克，两个步骤的总产率19％)：熔点149.2～158.0℃(分解)；LCMS：491[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ0.92
Figure G2007800418082D01961
t，J＝7.5Hz，3H)，1.33(m，2H)，1.50(m，4H)，1.81(m，2H)，2.29(m，2H)，3.46(t，J＝7.2Hz，2H)，3.90(s，3H)，4.09(t，J＝5.4Hz，2H)，7.16(s，1H)，7.41(t，J＝9.0Hz，1H)，7.76(s，1H)，7.78(s，1H)，8.07(dd，1H)，8.46(s，1H)，9.51(s，1H)，9.53(s，1H)。
实施例55：(R)-N-羟基-5-(5-(7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨 基)喹唑啉基-6-基)呋喃-2-基)-4-戊炔酰胺(化合物124)的制 备方法
步骤55a.(R)-6-碘-7-甲氧基-N-(1-苯乙基)喹唑啉基-4-胺(化合物1001)
将浓硫酸(7.1克)、乙腈(96毫升)、醋酸(96毫升)以及含有化合物0308(3.0克，9.4毫摩)的水(96毫升)所组成的混合液冷却至0℃并且搅拌0.5小时。所述反应混合液变成一种透明溶液。在0℃下向所述溶液中加入亚硝酸钠(0.72克，10.4毫摩)。将得到的溶液在室温下搅拌0.5小时并且之后在50℃下将其逐滴加入碘化钾(4.68克，28毫摩)的水(96毫升)溶液中。在加入完成之后，将得到的溶液在50℃下继续搅拌0.5小时。随后将所述反应混合液冷却并且过滤，用水进行洗涤并且干燥，从而获得黄色固体形式的产物1001(2.5克，50％产率)。1H NMR(d6-二甲基亚砜)δ10.12(s，1H)，9.16(s，1H)，8.92(s，1H)，8.00(dd，J1，J2＝6.9Hz，2.4Hz，1H)，7.66-7.70(m，1H)，7.54(t，J＝9.0Hz，1H)，7.20(s，1H).LC-MS：406(M+1)。
步骤55b.(R)-6-(呋喃-2-基)-7-甲氧基-N-(1-苯乙基)喹唑啉基-4-胺(化合物1002)
将1001(4.29克，10毫摩)、2-呋喃硼酸(2.2克，20毫摩)、醋酸铅(224毫克，1.0毫摩)、三苯基膦(524毫克，2.0毫摩)、三乙胺(10毫升)以及二甲基甲酰胺(30毫升)组成的混合液在80℃下搅拌16小时。将所述反应混合液冷却至室温并且加入水(150毫升)。利用乙酸乙酯(120毫升x4)对得到的混合液进行提取，干燥并且蒸发。利用柱层析法对所述残余物进行纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3)，从而获得白色固体形式的所述产物1002(2.5克，67％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ10.01(s，1H)，8.83(s，1H)，8.53(s，1H)，8.16-8.17(m，1H)，7.84-7.86(m，2H)，7.41(t，J＝8.1Hz，1H)，7.29(s，1H)，7.06(s，1H)，6.66(s，1H)，4.05(s，3H).LC-MS：370(M+1)。
步骤55c.(R)-6-(呋喃-2-基)-7-甲氧基-N-(1-苯乙基)喹唑啉基-4-胺(化合物1003)
向1002(1.48克，4毫摩)的三氟乙酸(2毫升)以及乙腈(40毫升)溶液中加入N-碘代丁二酰亚胺(NIS)(650毫克，5毫摩)。将所述溶液在室温下搅拌10分钟。利用碳酸钠水溶液将混合液调节至中性并且对其进行浓缩。利用乙酸乙酯对得到的混合液进行提取，用水进行洗涤，干燥并且浓缩，从而获得残余物，利用柱层析法对所述残余物进行纯化，从而获得黄色固体形式的1003(1.1克，58％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ10.08(s，1H)，8.72(s，1H)，8.55(s，1H)，8.15(dd，J1，J2＝6.9Hz，2.7Hz，1H)，7.79-7.83(m，1H)，7.45(t，J＝9.0Hz，1H)，7.31(s，1H)，7.00(d，J＝3.6Hz，1H)，6.91(d，J＝3.6Hz，1H)，4.06(s，3H).LC-MS：496(M+1)。
步骤55d.(R)-5-(5-(7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-基)呋喃-2-基)炔酸甲酯(化合物1004-24)
在氮气环境下，将1003(250毫克，0.5毫摩)、4-戊炔酸甲酯(112毫克，1.0毫摩)、醋酸铅(35毫克，0.05毫摩)、三苯基膦(13毫克，0.05毫摩)、碘化亚铜(CuI)(10毫克，0.05毫摩)、三乙胺(0.5毫升)以及二甲基甲酰胺(3毫升)组成的混合液在40℃下搅拌16小时。随后，将所述混合液用水(120毫升)稀释并且使用乙酸乙酯(100毫升x4)进行提取。将得到的混合有机层进行浓缩并且利用柱层析法进行纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4)，从而获得黄色固体形式的1004-124(180毫克，78％产率)。LC-MS：480(M+1)。
步骤55e.(R)-N-羟基-5-(5-(7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-基)呋喃-2-基)-4-戊炔酰胺(化合物124)
向装有化合物1004-124(180毫克，0.37毫摩)的长颈瓶中添加羟胺的甲醇(3.0毫升)溶液。将所述混合液在室温下搅拌0.5小时。之后，利用醋酸将其pH调整至7。过滤所述混合液，利用甲醇进行洗涤，从而得到白色固体形式的所述产物124(100毫克，55％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)
Figure G2007800418082D01991
10.52(s，1H)，10.13(s，1H)，8.85(s，1H)，8.79(s，1H)，8.53(s，1H)，8.12-8.16(m，1H)，7.79-7.83(m，1H)，7.43(t，J＝9.6Hz，1H)，7.30(s，1H)，7.09(d，J＝3.6Hz，1H)，6.85(d，J＝3.6Hz，1H)，4.05(s，3H)，2.73(t，J＝7.2Hz，2H)，2.26(t，J＝7.2Hz，2H).LC-MS：481(M+1)。
实施例56：(R)-N-羟基-6-(5-(7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨 基)喹唑啉基-6-基)呋喃-2-基)-5-己炔酰胺(化合物125)的制 备方法
步骤56a.(R)-6-(5-(7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-基)呋喃-2-基)-5-己炔酸甲酯(化合物1004-125)
制备出的所述标题化合物1004-125是黄色固体形式(180毫克，77％)，是由化合物1003(250毫克，0.5毫摩)以及5-己炔酸甲酯(126毫克，1.0毫摩)通过与化合物1004-124的制备方法(实施例55)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：494[M+1]+。
步骤56b.(R)-N-羟基-6-(5-(7-甲氧基-4-(1-苯基乙氨基)喹唑啉基-6-基)呋喃-2-基)-5-己炔酰胺(化合物125)
制备出的所述标题化合物125是白色固体形式(60毫克，13％)，是由化合物1004-125(160毫克，0.34毫摩)以及羟胺的甲醇(3.0毫升)溶液通过与化合物124的制备方法(实施例55)中所描述的类似方法制备得到的：1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ10.43(s，1H)，10.11(s，1H)，8.79(s，1H)，8.73(s，1H)，8.53(s，1H)，8.12-8.15(m，1H)，7.77-7.82(m，1H)，7.43(t，J＝9.0Hz，1H)，7.30(s，1H)，7.09(d，J＝3.6Hz，1H)，6.86(d，J＝3.6Hz，1H)，4.05(s，3H)，2.52(t，J＝6.6Hz，2H)，2.10(t，J＝7.2Hz，2H)，1.72-1.82(m，2H).LC-MS：495(M+1)。
实施例57：5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 基)-4-戊炔酸甲酯(化合物138)的制备方法
步骤57a.5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基)-4-戊炔酸甲酯(化合物1101-138)
将1001(215毫克，0.5毫摩)、4-戊炔酸甲酯(224毫克，2.0毫摩)、醋酸铅(140毫克，0.2毫摩)、三苯基膦(52毫克，0.2毫摩)、碘化亚铜(CuI)(76毫克，0.4毫摩)、三乙胺(2.5毫升)以及二甲基甲酰胺(5毫升)组成的混合液在80℃下搅拌16小时。向所述反应混合液中加入水(120毫升)并且将得到的混合液利用乙酸乙酯。合并得到的有机相，干燥，过滤并且浓缩，将留下的残余物利用柱层析法进行纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4)，从而获得黄色固体形式的1101(160克，77％产率)。LC-MS：414(M+1)。
步骤57b.5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基)-4-戊炔酸甲酯(化合物138)
向装有化合物1101-138(102毫克，0.25毫摩)的长颈瓶中添加新鲜制备的羟胺的甲醇(3.0毫升)溶液。将得到的混合液在室温下搅拌0.5小时。之后，利用醋酸将其pH调整至7。过滤得到的沉淀并且利用甲醇进行洗涤，从而获得白色固体形式的所述产物138(75毫克，74％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ10.49(s，1H)，9.81(s，1H)，8.81(s，1H)，8.56(s，1H)，8.55(s，1H)，8.17-8.20(m，1H)，7.79-7.84(m，1H)，7.42(t，J＝9.0Hz，1H)，7.19(s，1H)，3.94(s，3H)，2.72(t，J＝7.2Hz，2H)，2.28(t，J＝7.2Hz，2H).LC-MS：415(M+1)。
实施例58：6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 基)-N-羟基-5-己炔酰胺(化合物139)的制备方法
步骤58a.6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基)-5-己炔酸甲酯(化合物1101-39)
制备出的所述标题化合物1101-139是黄色固体形式(890毫克，53％)，是由化合物1001(1.7克，3.96毫摩)以及5-己炔酸甲酯(378毫克，3.0毫摩)通过与化合物1101-138的制备方法(实施例57)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：428[M+1]+。
步骤58b.6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基)-N-羟基-5-己炔酰胺(化合物139)
制备出的所述标题化合物139是白色固体形式(80毫克，73％)，是由化合物1101-139(110毫克，0.26毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇(3.0毫升)溶液通过与化合物138的制备方法(实施例57)中所描述的类似方法制备得到的：1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ10.42(s，1H)，9.91(s，1H)，8.70(s，1H)，8.60(s，1H)，8.58(s，1H)，8.16-8.19(m，1H)，7.78-7.85(m，1H)，7.43(t，J＝9.0Hz，1H)，7.20(s，1H)，3.95(s，3H)，2.51(t，J＝7.2Hz，2H)，2.15(t，J＝7.2Hz，2H)，1.75-1.84(m，2H).LC-MS：429(M+1)。
实施例59：5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 基)-N-羟基戊酰胺(化合物144)的制备方法
步骤59a.6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基)-5-己炔酸甲酯(化合物1102-144)
向1101-138(500毫克，0.21毫摩)的甲醇(30毫升)溶液中添加50毫克的钯炭(Pd/C)(10％)。在氮气环境下(1atm)将所述混合液在室温下搅拌16小时。将混合液过滤，并且将滤液浓缩，从而得到所述粗产物1102-144(480毫克，94％产率)，所述粗产物可以直接在下一步骤中使用。LC-MS：418(M+1)。
步骤59b.5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基)-N-羟基戊酰胺(化合物144)
向装有化合物1102-144(480毫克，1.14毫摩)的长颈瓶中添加新鲜制备的羟胺的甲醇(5.0毫升)溶液。将所述混合液在室温下搅拌0.5小时。之后，利用醋酸将其pH转变至7。将得到的固体过滤，用甲醇进行洗涤，从而获得白色固体形式的所述产物144(400毫克，83％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ10.34(s，1H)，9.69(s，1H)，8.68(s，1H)，8.53(s，1H)，8.24(s，1H)，8.19-8.23(m，1H)，7.80-7.88(m，1H)，7.41(t，J＝9.0Hz，1H)，7.17(s，1H)，3.94(s，3H)，2.71(t，J＝6.6Hz，2H)，2.00(t，J＝7.2Hz，2H)，1.58-1.60(m，4H)，1.26-1.36(m，2H).LC-MS：419(M+1)。
实施例60：5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 基)-N-羟基戊酰胺(化合物145)的制备方法
步骤60a.6-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基)-5-己炔酸甲酯(化合物1102-145)
制备出的所述标题化合物1102-145是粗产物形式(210毫克，99％产率)，是由化合物1101-139(215毫克，0.5毫摩)通过化合物1102-144的制备方法(实施例59)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：432(M+1)。
步骤60b.5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基)-N-羟基戊酰胺(化合物145)
制备出的所述标题化合物145是白色固体形式(90毫克，43％)，是由化合物1102-145(210毫克，0.5毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇(3.0毫升)溶液通过与化合物144的制备方法(实施例59)中所描述的类似方法制备得到的：1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ10.33(s，1H)，9.68(s，1H)，8.66(s，1H)，8.52(s，1H)，8.21(s，1H)，8.15-8.19(m，1H)，7.80-7.85(m，1H)，7.41(t，J＝9.0Hz，1H)，7.16(s，1H)，3.93(s，3H)，2.71(t，J＝7.2Hz，2H)，1.95(t，J＝7.2Hz，2H)，1.50-1.67(m，4H)，1.26-1.36(m，2H).LC-MS：433(M+1)。
实施例61：4-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 硫基)-N-羟基丁酰胺(化合物149)的制备方法
步骤61a.S-4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基苯甲硫酸(化合物1201)
在氮气环境下，将化合物1001(4.8克，11.4毫摩)、硫代苯甲酸(7.8克，56.9毫摩)、1，10-菲罗啉(phenathroline)(0.45克，2.3毫摩)、碘化亚铜(0.22克，1.1毫摩)以及N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(2.94克，22.8毫摩)的甲苯(20毫升)溶液所组成的混合液在110℃下搅拌24小时。在此之后，通过降低压力除去溶剂，并且利用柱层析法对得到的残余物进行纯化，从而获得褐色固体形式的所述粗目标化合物(1.0克，20％)。LCMS：440[M+1]+。
步骤61b.2-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-硫基)乙酸乙酯(化合物1202-149)
在氮气环境下，将化合物1201(0.3克，0.68毫摩)以及碳酸钾(0.14克，1.0毫摩)的二甲基甲酰胺溶液所组成的混合液在50℃下搅拌6小时。之后，通过注射器向所述混合液中加入4-溴丁酸乙酯(0.14克，0.71毫摩)并且继续搅拌3小时。上述反应完成之后，通过降低压力除去溶剂并且利用柱层析法对得到的残余物进行纯化，从而获得灰黄色固体形式的所述目标化合物1202-149(50毫克，16％)。LCMS：450[M+1]+。
步骤61c.4-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-硫基)-N-羟基丁酰胺(化合物149)
将化合物1202-149(48毫克，0.11毫摩)以及新鲜制备的羟胺甲醇溶液(1.77M，3.5毫升)组成的混合液在室温下搅拌30分钟。利用醋酸将所述混合液的pH调整至等于7.0并且除去所述的溶剂。收集所述固体并且利用柱层析法进行纯化，从而获得灰黄色粉末形式的所述目标化合物149(14毫克，30％)。LCMS：437.7[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ10.72(s，1H)，9.82(s，1H)，8.94(s，1H)，8.55(s，1H)，8.38(m，1H)，8.19(s，1H)，8.06(m，1H)，7.39(m，1H)，7.20(s，1H)，3.97(s，3H)，3.03(m，2H)，2.22(m，2H)，1.91(brs，2H)。
实施例62：5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 硫基)-N-羟基戊酰胺(化合物151)的制备方法
步骤62a.5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-硫基)戊酸乙酯(化合物1202-151)
制备出的所述标题化合物1202-151是灰黄色固体形式(90毫克，28％产率)，是由化合物1201(300毫克，0.68毫摩)通过与化合物1202-149的制备方法(实施例61)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：464[M+1]+。
步骤62b.5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-硫基)-N-羟基戊酰胺(化合物151)
制备出的所述标题化合物151是灰黄色粉末形式(25毫克，29％)，是由化合物1202-151(87毫克，0.19毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇(1.77M，4.0毫升)溶液通过与化合物149的制备方法(实施例61)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：451.7[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ10.74(brs，1H)，10.40(s，1H)，8.75(s，1H)，8.21(s，1H)，7.99(m，1H)，7.67(m，1H)，7.52(m，1H)，7.20(s，1H)，4.01(s，3H)，3.12(brs，2H)，2.00(brs，2H)，1.67(brs，4H)。
实施例63：5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6- 硫基)-N-羟基戊酰胺(化合物155)的制备方法
步骤63a.2-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-硫基)乙酸乙酯(化合物1202-155)
制备出的所述标题化合物1202-155是灰黄色固体形式(87毫克，26％产率)，是由化合物1201(300毫克，0.68毫摩)通过与化合物1202-149的制备方法(实施例61)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：492[M+1]+。
步骤63b.7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-硫基)-N-羟基庚酰胺(化合物155)
制备出的所述标题化合物155是灰黄色粉末形式(28毫克，34％)，是由化合物1202-155(85毫克，0.19毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇(1.77M，4.0毫升)溶液通过与化合物149的制备方法(实施例61)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：479.7[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ10.32(brs，1H)，9.76(s，1H)，8.65(s，1H)，8.51(s，1H)，8.14(s，1H)，8.09(m，1H)，7.75(m，1H)，7.44(m，1H)，7.19(s，1H)，3.97(s，3H)，3.08(m，2H)，1.92(brs，2H)，1.64(brs，2H)，1.45(m，4H)，1.28(m，2H)。
实施例64：7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉基-7- 氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物161)的制备方法
步骤64a.4-(7-乙氧基-7-氧代庚氧基)-3-羟基苯甲酸乙酯(化合物1301-161)
向3，4-二羟基苯甲酸乙酯(6.0克，33毫摩)的二甲基甲酰胺(50毫升)溶液中加入碳酸钾(4.6克，33毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌15分钟并且随后逐滴加入7-溴庚酸乙酯(7.821克，33毫摩)的二甲基甲酰胺(10毫升)溶液。将所述混合液在20℃下搅拌12小时。反应之后将所述混合液过滤，并且将滤液真空浓缩。将得到的残余物溶解于二氯甲烷中并且利用盐水进行洗涤。收集得到的有机相并且通过硫酸钠进行干燥，过滤并且浓缩，从而获得粗产物。利用柱层析法对所述粗产物进行纯化(乙酸乙酯/石油醚＝1∶10)，从而获得白色固体形式的所述标题产物1301-161(2.44克，22％)：LCMS：338[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.177(t，J＝7.2Hz，3H)，1.247-1.438(m，7H)，1.480-1.553(m，2H)，1.579-1.754(m，2H)，2.245-2.294(t，J＝7.2Hz，2H)，3.972-4.063(m，4H)，4.190-4.261(q，J＝7.2，14.1Hz 2H)，6.958-6.986(d，J＝8.4Hz，1H)，7.358-7.404(m，2H)，9.36(s，1H)。
步骤64b.4-(7-乙氧基-7-氧代庚氧基)-3-甲氧基苯甲酸乙酯(化合物1302-161)
将化合物1301-161(1.2克，3.55毫摩)、碘甲烷(0.504克，3.55毫摩)以及碳酸钾(1.47克，10.65毫摩)的二甲基甲酰胺(15毫升)溶液在80℃下搅拌3小时。反应过后将所述混合液过滤。滤液真空浓缩，并且将得到的残余物溶解于二氯甲烷中并且利用盐水洗涤两次。收集得到的有机相并且使其通过硫酸钠进行干燥，过滤并且浓缩，从而获得白色固体形式的所述标题产物1302-161(1.2克，97％)：LCMS：353[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.131-1.178(t，J＝6.9Hz，3H)，1.267-1.395(m，7H)，1.478-1.574(m，2H)，1.665-1.755(m，2H)，2.242-2.291(t，J＝7.2Hz，2H)，3.792(s，3H)，3.982-4.063(m，4H)，4.229-4.300(q，J＝7.2Hz，2H)，7.025-7.052(d，J＝8.1Hz，1H)，7.418-7.424(d，J＝1.8Hz，1H)，7.529-7.562(dd，J＝8.4Hz，1.8Hz，1H)。
步骤64c.4-(7-乙氧基-7-氧代庚氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酸乙酯(化合物1303-161)
在20℃下，向处于搅拌状态下的化合物1302-161(1.2克，3.47毫摩)的醋酸(10毫升)溶液中逐滴加入发烟硝酸(2.18克，34.7毫摩)。将所述反应混合液在20℃下搅拌1小时并且随后将其倒入冰水中并且利用二氯甲烷提取两次。将得到的混合有机相利用盐水、碳酸氢钠水溶液以及盐水进行洗涤，并且通过硫酸钠进行干燥，过滤并且浓缩，从而获得黄色油形式的所述标题产物1303-161(1.375克，98％)：LCMS：398[M+1]+。
步骤64d.2-氨基-4-(7-乙氧基-7-氧代庚氧基)-5-甲氧基苯甲酸乙酯(化合物1304-161)
将1303-161(1.375克，3.46毫摩)、乙醇(30毫升)、水(10毫升)以及盐酸(1毫升)组成的混合液进行搅拌直至形成透明溶液。向上述溶液中分部分加入铁粉(2.0克，34.6毫摩)。将所述混合液搅拌回流30分钟，并且之后将其冷却至室温。通过加入10％的氢氧化钠溶液将所述反应混合液的pH调整至8并且进行过滤。浓缩滤液以除去乙醇并且随后利用二氯甲烷提取两次。将得到的混合有机相利用盐水进行洗涤并且通过硫酸钠进行干燥，过滤并且浓缩，从而获得黄色固体形式的所述标题产物1304-161(1.07克，84％)：LCMS：368[M+1]+。
步骤64e.7-(6-甲氧基-4-氧代-3，4-二氢喹唑啉基-7-氧基)庚酸乙酯(化合物1305-161)
将化合物1304-161(1.07克，2.92毫摩)、甲酸铵(0.184克，3毫摩)以及甲酰胺(10毫升)组成的混合液在180℃下搅拌3小时。反应过后将所述混合液冷却至室温。在减压条件下除去其中的甲酰胺，并且将得到的残余物溶解于二氯甲烷中并且利用盐水进行洗涤。将所述有机相通过硫酸钠进行干燥，过滤并且浓缩，从而获得褐色固体形式的所述标题产物1305-161(0.684克，67％)：LCMS：349[M+1]+。
步骤64f.7-(4-氯-6-甲氧基喹唑啉基-7-氧基)庚酸乙酯(化合物1306-161)
将产物1305-161(0.684克，1.97毫摩)以及三氯氧磷(20毫升)组成的混合液搅拌回流4小时。反应过后在减压条件下将其中过量的三氯氧磷除去并且将所述残余物溶解于二氯甲烷中并且利用水、碳酸氢钠水溶液以及盐水进行洗涤。将得到的有机相通过硫酸钠进行干燥，过滤并且浓缩，从而获得黄色固体形式的所述标题产物1306-161(0.59克，82％)：LCMS：367[M+1]+。
步骤64g.7-(4-(3-氯-4氟苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉基-7-氧基)庚酸乙酯(化合物1307-161)
将1306-161(336毫克，0.92毫摩)以及3-氯-4氟苯胺(140毫克，0.92毫摩)的异丙醇(10毫升)溶液组成的混合液搅拌回流4小时。反应过后将所述混合液冷却至室温并且分离得到的沉淀，利用异丙醇以及乙醚进行洗涤，并且干燥，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物1307-161(389毫克，89％)：LCMS：476[M+1]+。
步骤64h.7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉基-7-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物161)
向新鲜制备的羟胺溶液(2.5毫升，3.75毫摩)中加入化合物1307-161(359毫克，0.75毫摩)。将得到的反应混合液在25℃下搅拌24小时。反应过后利用醋酸将所述混合液调节至中性，并且分离得到的沉淀，用水进行洗涤，并且干燥，从而获得白色固体形式的所述标题化合物161(60毫克，17％)：熔点238.5～253.4℃，LCMS：463[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.23-1.55(m，6H)，1.76-1.8(m，2H)，1.96(t，J＝7.2Hz，2H)，3.96(s，3H)，4.13(t，J＝6.3Hz，2H)，7.19(s，1H)，7.20(m，2H)，7.46(t，J＝9Hz，1H)，7.78(d，J＝7.5Hz，1H)，8.12-8.15(dd，J＝2.4，6.9Hz，1H)，8.50(s，1H)，8.67(s，1H)，9.57(s，1H)，10.35(s，1H)。
实施例65：7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉基-7- 氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物1612)的制备方法
步骤65a.7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉基-7-氧基)庚酸乙酯(化合物1307-162)
制备出的所述标题化合物1307-162是黄色固体形式(253毫克，46％产率)，是由化合物1306-162(446毫克，1.22毫摩)、3-乙炔基苯胺(142毫克，1.22毫摩)以及异丙醇(10毫升)通过与化合物1307-161的制备方法(实施例64)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：448[M+1]+。
步骤65b.7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉基-7-氧基)-N-羟基庚酰胺)化合物162)
制备出的所述标题化合物162是黄色粉末形式(20毫克，8％)，是由化合物1307-162(246毫克，0.0.55毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇(2.0毫克，2.75毫摩)溶液通过与化合物161的制备方法(实施例64)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：435[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.301-1.541(m，6H)，1.740-1.792(m，2H)，1.929-1.977(m，2H)，3.959(s，3H)，4.123(t，J＝6.6Hz，2H)，4.192(s，1H)，7.176-7.221(m，2H)，7.360-7.427(m，1H)，7.831-7.890(m，2H)，7.966(m，1H)，8.504(s，1H)，8.642(s，1H)，9.547(s，1H)，10.321(s，1H)。
实施例66：7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-6-(2-甲氧基乙氧基) 喹唑啉基-7-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物167)的制备方法
步骤66a.4-(7-乙氧基-7-氧代庚氧基)-3-(2-甲氧基乙氧基)苯甲酸乙酯(化合物1302-167)
制备出的所述标题化合物1302-167是黄色固体形式(1400毫克，97％产率)，是由化合物1301(1223毫克，3.62毫摩)、4-甲基苯磺酸-2-甲氧基乙酯(0.834克，3.62毫摩)、二甲基甲酰胺(15毫升)以及碳酸钾(1.50克，10.86毫摩)通过与化合物1302-161的制备方法(实施例64)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：397[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.152(t，J＝7.2Hz，3H)，1.264-1.405(m，7H)，1.478-1.572(m，2H)，1.663-1.730(m，2H)，2.267(t，J＝7.2Hz，2H)，3.315(s，3H)，3.650(t，J＝5.4Hz，2H)，3.990-4.062(m，4H)，4.089-4.119(m，3H)，4.222-4.293(q，J＝7.2Hz，2H)，7.053(d，J＝8.1Hz，1H)，7.447-7.486(m，1H)，7.539-7.567(dd，J＝8.4Hz，1.8Hz，1H)。
步骤66b.4-(7-乙氧基-7-氧代庚氧基)-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-硝基苯甲酸乙酯(化合物1303-167)
制备出的所述标题产物1303-167是黄色油形式(1510毫克，97％产率)，是由化合物1302-167(1400毫克，3.5毫摩)、醋酸(10毫升)以及发烟硝酸通过与化合物1303-161的制备方法(实施例64)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：442[M+1]+。
步骤66c.2-氨基-4-(7-乙氧基-7-氧代庚氧基)-5-(2-甲氧基乙氧基)苯甲酸乙酯(化合物1304-167)
制备出的所述标题化合物1304-167是黄色油形式(1210毫克，97％产率)，是由化合物1303-167(1500毫克，3.4毫摩)、铁粉(1.9克，34毫摩)、乙醇(30毫升)、水(10毫升)以及盐酸(1毫升)通过与化合物1304-161的制备方法(实施例64)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：412[M+1]+。
步骤66d.7-(6-(2-甲氧基乙氧基)-4-氧代-3，4-二氢喹唑啉基-7-氧基)庚酸乙酯(化合物1305-167)
制备出的所述标题化合物1305-167是黄色固体形式(859毫克，85％产率)，是由化合物1304-167(1210毫克，2.9毫摩)、甲酸铵(0.184克，3毫摩)以及甲酰胺(10毫升)通过与化合物1305-161的制备方法(实施例64)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：393[M+1]+。
步骤66e.7-(4-氯-6-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-7-氧基)庚酸乙酯(化合物1306-167)
制备出的所述标题化合物1306-167是黄色固体形式(572毫克，63％产率)，是由化合物1305-167(859毫克，2.2毫摩)以及三氯氧磷(20毫升)通过与化合物1306-161的制备方法(实施例64)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：411[M+1]+。
步骤66f.7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-6-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-7-氧基)庚酸乙酯(化合物1307-167)
制备出的所述标题化合物1307-167是黄色固体形式(238毫克，76％产率)，是由化合物1306-167(251毫克，0.6毫摩)、3-氯-4-氟苯胺(90毫克，0.6毫摩)以及异丙醇(5毫升)通过与化合物1307-161的制备方法(实施例64)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：520[M+1]+。
步骤66g.7-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)-6-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-7-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物167)
制备出的所述标题化合物167是黄色固体形式(20毫克，9％产率)，是由化合物1307-167(232毫克，0.45毫摩)以及新鲜制备的羟胺溶液(2毫升，2.1毫摩)通过与化合物161的制备方法(实施例64)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：507[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.314-1.539(m，6H)，1.754-1.801(m，2H)，1.926-1.975(m，2H)，3.368(s，3H)，3.770(t，J＝4.8Hz，2H)，4.135(t，J＝6.3Hz，2H)，4.267(t，J＝4.8Hz，2H)，7.19(s，1H)，7.440(t，J＝8.4Hz，1H)，7.764-7.833(m，2H)，8.095-8.126(dd，J＝2.7，6.9Hz，1H)，8.499(s，1H)，8.612(s，1H)，8.635(s，1H)，9.555(s，1H)，10.314(s，1H)。
实施例67：7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-6-(2-甲氧基乙氧基) 喹唑啉基-7-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物168)的制备方法
步骤67a.7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-6-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-7-氧基)庚酸乙酯(化合物1307-168)
制备出的所述标题化合物1307-168是黄色固体形式(214毫克，56％产率)，是由化合物1307-167(320毫克，0.78毫摩)、3-乙炔基苯胺(92毫克，0.78毫摩)、异丙醇(5毫升)通过与化合物1307-161的制备方法(实施例64)中所描述的类似方法制备得出的：LCMS：520[M+1]+。
步骤67b.7-(4-(3-乙炔基苯氨基)-6-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉基-7-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物168)
制备出的所述标题化合物168是黄色固体形式(30毫克，15％产率)，是由化合物1307-168(204毫克，0.42毫摩)以及新鲜制备的羟胺溶液(2毫升，2.1毫摩)通过与化合物161的制备方法(实施例64)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：479[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.314-1.539(m，6H)，1.754-1.800(m，2H)，1.925-1.975(m，2H)，3.370(s，3H)，3.771(t，J＝4.8Hz，2H)，4.131(t，J＝6.3Hz，2H)，4.186(s，1H)，4.275(t，J＝4.8Hz，2H)，7.19(d，J＝7.5Hz，2H)，7.390(t，J＝7.8Hz，1H)，7.847-7.900(m，2H)，7.975(s，1H)，8.487(s，1H)，8.636(s，1H)，9.455(s，1H)，10.316(s，1H)。
实施例68：3-((5-(4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)喹 唑啉基-6-基)呋喃-2-基)甲氨基)-N-羟基丙酰胺(化合物174) 的制备方法
步骤68a.2-氨基-5-碘基苯甲酸甲酯(化合物1402-174)
将2-氨基苯甲酸甲酯(23克，15.2毫摩)溶解于200毫升的水以及32毫升的浓盐酸中；将所述溶液冷却至20℃。通过下述方法制备一氯化碘的盐酸溶液：利用100毫升冷水稀释28毫升浓盐酸，加入刚好足够的碎冰将所述温度控制在5℃，并且，在大约两分钟的时间内，在一氯化物中进行搅拌(25克，15.5毫摩)。快速将所述一氯化碘溶液搅拌加入2-氨基苯甲酸甲酯溶液中。2-氨基-5-碘基苯甲酸甲酯几乎立刻发生分离，其形成一种颗粒状的、棕褐色至紫色的沉淀物。将所述混合液搅拌1小时，之后过滤，利用冷水进行洗涤，并且随后真空干燥，从而获得固体形式的1402-174(17.8克，42％)：LC-MS：278[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ3.70(s，3H)，6.64(d，J＝9.0Hz，1H)，6.78(b，2H)，7.47(dd，J1＝9.0Hz，J2＝1.8Hz，1H)，7.90(d，J＝1.8Hz，1H)。
步骤68b.6-碘基喹唑啉基-4(3氢)-酮(化合物1403-174)
在300毫升甲酰胺中将2-氨基-5-碘基苯甲酸甲酯(17.8克，64毫摩)在190℃下加热2小时。将所述混合液冷却至室温并且过滤所述固体产物并进行真空干燥。所形成的产物1403-174无需进行进一步的纯化即可使用(10克，56.1％)：LC-MS：273[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ7.46(d，J＝9.0Hz，1H)，8.10(m，2H)，8.36(d，J＝2.1Hz，1H)，12.40(s，1H)。
步骤68c.4-氯-6-碘基喹唑啉(化合物1404-174)
将6-碘基喹唑啉基-4(3氢)-酮(10克，37毫摩)在三氯氧磷(100毫升)中回流过夜。之后在真空条件下除去三氯氧磷。将得到的残余物溶解于二氯甲烷(500毫升)中。将得到的有机相用水(100毫升)进行洗涤并且干燥(硫酸镁)。之后在真空条件下除去二氯甲烷，并且获得1404-174(5.7克，53％)：LC-MS：291[M+1]+，1H NMR(氘代氯仿)：δ7.81(d，J＝9.0Hz，1H)，8.21(dd，J1＝9.0Hz，J2＝1.8Hz，1H)，8.65(d，J＝1.8Hz，1H)，9.06(s，1H)。
步骤68d.N-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯基)-6-碘基喹唑啉基-4-胺(化合物1405-174)的合成
将4-氯-6-碘基喹唑啉(5.7克，19.7毫摩)以及3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯胺(4.9克，19.7毫摩)在异丙醇(150毫升)中回流过夜。将所述混合液冷却至室温。将所述固体产物沉淀，过滤并且真空干燥。所述产物1405-174足够纯并且无需进行进一步的纯化即可使用(7.4克，74.2％)：LC-MS：506[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ5.29(s，2H)，7.18(m，1H)，7.33(m，3H)，7.48(m，1H)，7.66(m，1H)，7.74(d，J＝9.0Hz，1H)，7.90(d，J＝2.2Hz，1H)，8.37(d，J＝9.0Hz，1H)，8.94(s，1H)，9.29(s，1H)。
步骤68e.5-(4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)喹唑啉基-6-基)呋喃-2-甲醛(化合物1406-174)
在氮气环境下，向四氢呋喃(10毫升)、乙醇(5毫升)以及三乙胺(0.3毫升)的混合液中加入N-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯基)-6-碘基喹唑啉基-4-胺(387毫克，0.77毫摩)以及5-甲酸呋喃-2-基硼酸(129毫克，0.92毫摩)。之后向所述混合液中加入氯化钯(dppf)(26毫克，0.03毫摩)。将所述混合液回流过夜。之后在真空条件下除去所述溶剂，将所述残余物在硅胶柱上利用乙酸乙酯进行层析，从而获得产物1406-174(240毫克，66.2％)：LC-MS：474[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ5.20(s，2H)，7.17(m，1H)，7.29(m，3H)，7.41(m，2H)，7.74(m，2H)，7.86(d，J＝9.0Hz，1H)，7.97(s，1H)，8.31(d，J＝9.0Hz，1H)，8.56(s，1H)，8.96(s，1H)，9.66(s，1H)，10.11(s，1H)。
步骤68f.3-((5-(4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)喹唑啉基-6-基)呋喃-2-基)甲氨基)丙酸乙酯(化合物1407-174)
将化合物1406-174(240毫克，0.5毫摩)以及盐酸3-氨基丙酸乙酯(77毫克，0.5毫摩)溶解于10毫升四氢呋喃中，之后加入三乙胺(0.1毫升)。将所述混合液搅拌10分钟。之后向所述混合液中加入NaBH(AcO)3(148毫克，0.7毫摩)。将所述混合液继续搅拌1小时。除去所述溶剂，并且将所述残余物在硅胶柱上利用二氯甲烷/甲醇(100∶5)通过层析法进行纯化，从而获得产物1407-174(140毫克，47.9％)：LC-MS：575[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.13(t，J＝6.9Hz，3H)，2.43(m，2H)，2.80(t，J＝6.9Hz，3H)，3.76(s，2H)，4.01(q，J＝6.9Hz，2H)，5.21(s，2H)，6.46(s，1H)，7.03(m，1H)，7.16(m，1H)，7.30(m，3H)，7.46(m，1H)，7.82(m，2H)，8.03(m，1H)，8.14(m，1H)，8.52(s，1H)，8.71(s，1H)，9.90(s，1H)。
步骤68g.3-((5-(4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)喹唑啉基-6-基)呋喃-2-基)甲氨基)-N-羟基丙酰胺(化合物174)
将化合物1407-174(110毫克，0.19毫摩)溶解于新鲜制备的羟胺甲醇溶液(1毫升，1.76摩/升)中。将所述混合液搅拌30分钟，并且利用薄层层析法(TLC)对所述反应进行监控。通过加入过氧乙酸(HOAc)将所述反应混合液的pH值调整至7。在真空条件下除去所述溶剂并且将所述残余物用水(10毫升)进行洗涤。利用制备型液相色谱法对所述产物进行纯化，从而获得黄色固体形式的化合物174(41毫克，37.2％)：熔点170℃.LC-MS：562[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.14(t，J＝6.9Hz，2H)，2.77(t，J＝6.9Hz，2H)，3.79(s，2H)，5.25(s，2H)，6.45(d，J＝3.0Hz，1H)，7.03(d，J＝3.0Hz，1H)，7.18(m，1H)，7.31(m，3H)，7.45(m，1H)，7.72(m，2H)，8.00(m，1H)，8.15(d，J＝7.5Hz，1H)，8.53(s，1H)，8.71(s，2H)，9.92(s，1H)。
实施例69：6-((5-(4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)喹 唑啉基-6-基)呋喃-2-基)甲氨基)-N-羟基己酰胺(化合物177) 的制备方法
步骤69a.6-((5-(4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)喹唑啉基-6-基)呋喃-2-基)甲氨基)己酸甲酯(化合物1407-177)
制备出的所述标题化合物1407-177(260毫克，21.6％产率)是由化合物1406-174(960毫克，2.0毫摩)以及盐酸6-氨基己酸甲酯(362毫克，2毫摩)通过与化合物1407-174的制备方法(实施例68)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：603[M+1]+。
步骤69b.6-((5-(4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)喹唑啉基-6-基)呋喃-2-基)甲氨基)-N-羟基己酰胺(化合物177)
制备出的所述标题化合物177是白色固体形式(22毫克，22％产率)，是由化合物1407-177(100毫克，0.17毫摩)以及新鲜制备的羟胺溶液(1毫升，1.76摩/升)通过与化合物174的制备方法(实施例68)中所描述的类似方法制备得到的：熔点121℃.LC-MS：604[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.03(t，J＝6.0Hz，2H)，1.18(m，2H)，1.47(m，4H)，1.92(t，J＝6.0Hz，2H)，2.54(m，2H)，3.41(s，1H)，3.78(s，2H)，5.26(s，2H)，6.40(s，1H)，7.02(s，1H)，7.17(m，1H)，7.29(m，3H)，7.46(m，1H)，7.76(m，2H)，7.99(s，1H)，8.16(d，J＝8.1Hz，1H)，8.53(s，1H)，8.70(m，2H)，9.90(s，1H)，10.33(s，1H)。
实施例70：7-((5-(4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)喹 唑啉基-6-基)呋喃-2-基)甲氨基)-N-羟基庚酰胺(化合物178) 的制备方法
步骤70a.7-((5-(4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)喹唑啉基-6-基)呋喃-2-基)甲氨基)庚酸乙酯(化合物1407-178)
制备出的所述标题化合物1407-178(270毫克，21.4％产率)是由化合物1406-174(960毫克，2.0毫摩)以及盐酸7-氨基庚酸甲基乙酯(418毫克，2毫摩)通过与化合物1407-174的制备方法(实施例68)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：631[M+1]+。
步骤70b.7-((5-(4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)喹唑啉基-6-基)呋喃-2-基)甲氨基)-N-羟基庚酰胺(化合物178)
制备出的所述标题化合物178是白色固体形式(25毫克，25％产率)，是由化合物1407-178(110毫克，0.17毫摩)以及新鲜制备的羟胺溶液(1毫升，1.76摩/升)通过与化合物174的制备方法(实施例68)中所描述的类似方法制备得到的：熔点120℃.LC-MS：618[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.22(m，4H)，1.42(m，4H)，1.90(t，J＝7.5Hz，2H)，2.54(m，2H)，3.76(s，2H)，5.24(s，2H)，6.42(d，J＝3.0Hz，1H)，7.01(d，J＝3.0Hz，1H)，，7.19(m，1H)，7.31(m，3H)，7.44(m，1H)，7.70(m，2H)，7.99(s，1H)，8.14(m，1H)，8.52(s，1H)，8.69(m，2H)，9.89(s，1H)，10.30(s，1H)。
实施例71：7-(4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)喹唑啉 基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物198)的制备方法
步骤71a.2-氯-1-(3-氟苄氧基)-4-硝基苯(化合物1502)
将2-氯-4-硝基酚(35克，0.2摩)、m-氟溴化苄(45.4克，0.24摩)、碳酸钾(55.2克，0.4摩)以及丙酮(800毫升)组成的混合液在30℃下搅拌16小时。将得到的混合液过滤并且利用丙酮进行洗涤。将所述滤液浓缩，从而获得所述粗产物，将所述粗产物利用石油醚进行洗涤并且干燥，从而获得黄色固体形式的所述产物1502(55.0克，99％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ8.33(d，J＝3.3Hz，1H)，8.21-8.26(m，1H)，7.42-7.50(m，2H)，7.29-7.33(m，2H)，7.16-7.22(m，1H)，5.39(s，2H).LC-MS：282(M+1)。
步骤71b.3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯胺(化合物1503)
将1502(15克，53.5毫摩)、铁粉(30克，0.534摩)、浓盐酸(5.4毫升)、乙醇(360毫升)以及水(120毫升)所组成的混合液回流2小时。随后将所述热溶液过滤并且将所述滤液浓缩，从而获得固体形式的所述产物1503(11.0克，82％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ7.37-7.45(m，1H)，7.21-7.26(m，2H)，7.09-7.16(m，1H)，6.90(d，J＝8.7Hz，1H)，6.63-6.34(m，1H)，6.44(dd，J1，J2＝8.7Hz，1.8Hz，1H)，5.01(s，2H)，4.94(s，2H).LC-MS：252(M+1)。
步骤71c.4-[3-氯-4-(3-氟-苄氧基)-苯氨基]-喹唑啉基-6-基乙酸酯(化合物1504-198)
将化合物0204(方案2)(0.85克，3.8毫摩)以及3-氯4-(3-氟苄氧基)苯胺(1503)(1.26克，5.0毫摩)的异丙醇(20毫升)溶液所组成的混合液进行搅拌并且在90℃下加热20分钟。将所述反应混合液冷却至室温并且分离得到的沉淀。将所述固体利用异丙醇以及甲醇进行洗涤，干燥，从而获得深黄色固体形式的所述标题化合物1504-198(1.5克，90％)。LC-MS：438[M+1]+。
步骤71d.4-[3-氯-4-(3-氟-苄氧基)-苯氨基]-喹唑啉基-6-醇(化合物1505-198)
将化合物1504-198(1.5克，3.4毫摩)以及一水合氢氧化锂(0.29克，6.9毫摩)的甲醇(40毫升)/水(40毫升)溶液所组成的混合液在室温下搅拌4小时。利用醋酸将其pH调整至4并且进行过滤。将收集到的黄色固体用水进行洗涤并且干燥，从而获得黄色固体形式的标题化合物1505-198(1.2克，89％)。LC-MS：395[M+1]+。
步骤71e.7-{4-[3-氯-4-(3-氟-苄氧基)-苯氨基]-喹唑啉基-6-氧基}-庚酸乙酯(化合物1506-198)
将化合物1505-198(0.12克，0.30毫摩)、3-溴丙酸乙酯(72毫克，0.30毫摩)以及碳酸钾(165毫克，1.2毫摩)的二甲基甲酰胺(5毫升)溶液所组成的混合液进行搅拌并且加热至60℃过夜。将所述反应混合液过滤并且蒸发滤液。将得到的固体利用乙醚进行洗涤并且利用薄层层析法(TLC)进行纯化，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物1506-198(80毫克，48％)。LC-MS：551[M+1]+：1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.15(t，J＝7.5Hz，3H)，1.46(m，8H)，1.79(m，2H)，2.29(t，J＝7.2Hz，2H)，3.24(s，1H)，4.02(d，J1＝6.6Hz，J2＝14.4Hz，2H)，4.12(t，J＝6.3Hz，2H)，5.24(s，2H)，7.15(m，1H)，7.45(m，3H)，7.48(m，2H)，7.85(d，J＝2.7Hz，1H)，7.98(d，J＝2.7Hz，1H)，8.47(s，1H)，9.57(s，1H)。
步骤71f.7-{4-[3-氯-4-(3-氟-苄氧基)-苯氨基]-喹唑啉基-6-氧基}-庚酸羟胺(化合物198)
向化合物1506-198(70毫克，0.13毫摩)中加入新鲜制备的羟胺甲醇溶液(0.5毫升，0.89毫摩)。利用薄层层析法(TLC)对所述反应过程进行监控。在所述反应完成之后，利用醋酸将所述混合液调节至中性并且在减压条件下浓缩直至获得残余物，将所述残余物用水洗涤，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物198(35毫克，46％)：LC-MS：539[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.50(m，8H)，1.79(t，J＝6.6Hz，2H)，3.24(s，1H)，1.95(m，2H)，4.12(t，J＝5.1Hz，2H)，5.24(s，2H)，7.15(m，1H)，7.45(m，3H)，7.48(m，2H)，7.70(d，J＝2.7Hz，1H)，7.87(s，1H)，7.97(s，1H)，8.50(s，1H)，8.67(s，1H)，9.70(s，1H)，10.35(s，1H)。
实施例72：7-(4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)-7-甲氧 基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物199)的制备方法
步骤72a.4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-基醋酸(化合物1504-199)
将0105(方案1)(253毫克，1.0毫摩)以及1503(252毫克，1.0毫摩)的异丙醇(10毫升)溶液组成的混合液进行搅拌并且加热回流1小时。将所述混合液冷却至室温并且分离得到的沉淀。将所述固体进行干燥，从而获得灰色固体形式的所述标题化合物1504-199(420毫克，90％)：LCMS：468[M+1]+。
步骤72b.4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-醇(化合物1505-199)
将化合物1504-199(418毫克，0.89毫摩)、一水合氢氧化锂(126毫克，3.0毫摩)的甲醇(20毫升)溶液以及水(10毫升)组成的混合液在室温下搅拌10分钟。通过加入稀醋酸将所述混合液调节至中性。分离所述沉淀并且进行干燥，从而得到灰白色固体形式的所述标题化合物1505-199(376毫克，99％)：LCMS：426[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6 ：δ3.97(s，3H)，5.24(s，2H)，7.19(m，3H)，7.32(m，2H)，7.48(m，1H)，7.74(m，2H)，8.04(d，J＝2.4Hz，1H)，8.43(s，1H)，9.35(s，1H)，9.66(s，1H)。
步骤72c.7-(4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物1506-199)
将化合物1505-199(170毫克，0.4毫摩)、7-溴庚酸乙酯(95毫克，0.4毫摩)以及碳酸钾(166毫克，1.2毫摩)的N，N-二甲基甲酰胺(10毫升)溶液所组成的混合液进行搅拌并且加热至70℃保持4小时。将所述反应混合液过滤。在减压条件下对滤液进行浓缩。将所述残余物悬浮于水中，收集得到的沉淀并且进行干燥，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物1506-199(89毫克，38％)：LCMS：582[M+1]+。
步骤72d.7-(4-(3-氯-4-(3-氟苄氧基)苯氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物199)
将化合物1506-199(88毫克，0.15毫摩)以及新鲜制备的1.77摩/升的羟胺/甲醇(3毫升，5.3毫摩)组成的混合液在室温下搅拌0.5小时。利用醋酸将所述反应混合液调节至中性，分离所述沉淀并且进行干燥，从而获得灰黄色固体形式的所述标题化合物199(48毫克，56％)：LCMS：569[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.35(m，2H)，1.50(m，4H)，1.83(m，2H)，1.98(m，2H)，3.94(s，3H)，4.13(m，2H)，5.26(s，2H)，7.19(m，2H)，7.36(m，3H)，7.48(m，1H)，7.69(m，1H)，7.80(s，1H)，7.95(d，J＝2.7Hz，1H)，8.45(s，1H)，8.68(s，1H)，9.43(s，1H)，10.36(s，1H)。
生物学检测：
如前文中所指明的，本发明中定义的所述衍生物具有抗增殖的活性。这些特性可以通过例如下文中列出的一种或者一种以上方法进行评价：
(a)测定受试化合物抑制表皮生长因子受体(EGFR)激酶 的能力的体外检测。
利用HTScanTM表皮生长因子受体激酶检测试剂盒(CellSignaling Technologies，Danvers，MA)对化合物抑制激酶受体(表皮生长因子受体)活性的能力进行检测。表皮生长因子受体酪氨酸激酶是作为GST-激酶融合蛋白被获得的，其是来自于通过一个具有氨基末端的GST标记的表达人类表皮生长因子受体(His672-A1a1210)(GenBank Accession No.NM_005228)的构建体的杆状病毒表达系统制备得到的。所述蛋白是通过利用谷胱甘肽-琼脂糖的一步亲合色谱法进行纯化的。一种抗磷酸化酪氨酸单克隆抗体P-Tyr-100被用来检测生物素(酰)化的底物肽(表皮生长因子受体，Biotin-PTP1B(Tyr66))的磷酸化作用。酶活性是在下述试剂中检测的：60毫摩羟乙基呱嗪乙硫磺酸(HEPES)，5毫摩氯化镁，5毫摩氯化锰，200微摩三磷酸腺苷(ATP)，1.25毫摩二硫苏糖醇(DTT)，3微摩正矾酸钠(Na3VO4)，1.5毫摩肽，以及50纳克表皮生长因子受体激酶。结合抗体的检测是利用DELFIA系统(PerkinElmer，Wellesley，MA)，所述系统由DELFIA
Figure G2007800418082D02231
铕标记的抗鼠IgG(免疫球蛋白)(PerkinElmer，#AD0124)、DELFIA
Figure G2007800418082D02232
强化溶液(PerkinElmer，#1244-105)、以及DELFIA
Figure G2007800418082D02233
链亲合素涂层的96孔培养板(PerkinElmer，AAAND-0005)构成。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。
将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以得到20毫摩的工作储备浓缩液。每项检测都是通过如下步骤建立的：向1.25毫升、6毫摩的底物肽中加入100微升10毫摩的三磷酸腺苷(ATP)。利用蒸馏水将所述混合液稀释至2.5毫升，从而制备出二倍的(2X)三磷酸腺苷/底物混合液([三磷酸腺苷]＝400毫摩，[底物]＝3毫摩)。将酶从-80℃下迅速转移至冰上。使酶在冰上解冻。在4℃下进行短暂的微离心，从而将液体带入所述试管的底部。立即重新置于冰上。向2.5毫升四倍的(4X)HTScanTM酪氨酸激酶缓冲液(240毫摩pH7.5的羟乙基呱嗪乙硫磺酸，20毫摩氯化镁，20毫摩氯化锰，12毫摩偏矾酸钠)中加入10微升二硫苏糖醇(1.25毫摩)，从而获得二硫苏糖醇/激酶缓冲液。将1.25毫升的二硫苏糖醇/激酶缓冲液转移至酶试管中，从而获得四倍的(4X)反应混合液(在四倍的反应混合液中[酶]＝4纳克/微升)。在室温下以12.5微升/孔的量利用预先稀释的目标化合物(通常在10微摩左右)对12.5微升四倍的(4X)反应混合液培养5分钟。以25微升/孔的量向预先培养的反应混合液/化合物中加入25微升的二倍(2X)三磷酸腺苷/底物混合液。将反应板在室温下培养30分钟。以50微升/孔的量加入终止缓冲液(50毫摩乙二胺四乙酸，pH8)以终止所述反应。将25微升的每种反应液以及75微升/孔的蒸馏水转移至链亲合素涂层的96孔培养板中并且在室温下培养60分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温(磷酸缓冲液，0.05％的吐温-20)洗涤三次。在磷酸缓冲液/吐温(PBS/T)中，以1∶1000的比例利用1％的牛血清白蛋白(BSA)稀释初级抗体磷酸-酪氨酸单克隆抗体(P-Tyr-100)。以100微升/孔的量加入初级抗体。在室温下培养60分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温洗涤三次。在磷酸缓冲液/吐温(PBS/T)中，以1∶500的比例利用1％的牛血清白蛋白(BSA)稀释铕标记的抗鼠免疫球蛋白(IgG)。以100微升/孔的量加入稀释的抗体。在室温下培养30分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温洗涤五次。以100微升/孔的量加入DELFIA强化溶液。在室温下培养5分钟。利用适当的时间分辨培养板读数器(Time-Resolved Plate Reader)检测615纳米处发射出的荧光。
(b)测定受试化合物抑制表皮生长因子刺激型表皮生长因 子受体(EGFR)的磷酸化作用的能力的体外检测。
通过标准的组织培养方法使A431细胞生长于T75长颈瓶中，直至细胞达到接近融合(大约1.5x107)的细胞；D-MEM培养基，10％的细胞染色缓冲液(FBS)。在无菌条件下在96孔微板的每个孔中分散100微升所述细胞悬浮液(每个孔中培养x个细胞)。对细胞进行培养并且监控细胞密度直至融合度达到孔与孔之间的融合；培养大约3天。通过吸取或者人工转移的方式从培养板的孔中除去反应完的培养基。在每个孔中使用50微升预先升温的无血清培养基取代上述培养基并且培养4至16小时。通过预先升温的D-MEM培养基制备两倍的抑制剂的连续稀释液，使所述抑制剂的最终浓度在10微摩至90pM的范围之内。从A431细胞培养板中除去培养基。向细胞中添加100微升连续稀释的抑制剂并且培养1至2小时。通过吸取或者人工转移的方式从培养板的孔中除去抑制剂。通过加入无血清培养基或者含有100纳克/毫升表皮生长因子(EGF)的无血清培养基使细胞休眠(模拟)。允许其在37℃下培养7.5分钟。以人工或者吸取的方式除去活化的培养基或者被激活的培养基。立即利用存在于一倍(1X)磷酸缓冲液中的4％的甲醛对细胞进行固定化。允许其在不被晃动的情况下于室温(RT)下在工作台面上培养20分钟。利用含有0.1％的曲拉通X-100(Triton X-100)的一倍磷酸缓冲液洗涤五次，每次洗涤5分钟。除去固定化溶液。利用一个多通道的移液管加入200微升曲拉通洗涤溶液(一倍的磷酸缓冲液+0.1％曲拉通X-100)。于室温下在旋转器中振荡洗涤5分钟。在人工除去洗液之后重复洗涤步骤四次。利用一个多通道的移液管，通过向每个孔中加入100微升的LI-COR Odyssey封闭缓冲液来封闭细胞/孔。在旋转器的适度振荡下，于室温下封闭90分钟。将上述两种初级抗体加入到含有Odyssey封闭缓冲液的试管中。将所述初级抗体溶液充分混合之后加入到孔中(磷酸化表皮生长因子受体Tyr1045，兔；1∶100稀释；Cell Signaling Technology，2237；完整表皮生长因子受体，小鼠；1∶500稀释；BiosourceInternational，AHR5062)。从上述封闭步骤中除去封闭缓冲液并且加入40微升存在于Odyssey封闭缓冲液中的目标初级抗体，从而覆盖所述每个孔的底部。仅仅向对照孔中加入100微升的Odyssey封闭缓冲液。在室温下，在轻微振荡的条件下利用初级抗体进行培养过夜。在室温下，在轻微振荡的条件下利用一倍的磷酸缓冲液+0.1％的吐温-20对所述培养板进行五次洗涤，每次洗涤五分钟，所使用的缓冲液是大剂量的。利用一个多通道的移液管加入200微升的吐温洗涤溶液。在旋转器上于室温下振荡洗涤五分钟。重复洗涤步骤四次。在Odyssey封闭缓冲液中对荧光素标记的二级抗体(山羊抗小鼠IRDyeTM 680(1∶200稀释；LI-CORCat.#926-32220)山羊抗兔IRDyeTM 800CW(1∶800稀释；LI-CORCat.#926-32211)进行稀释。将所述抗体溶液充分混合并且向每个孔中加入40微升所述的二级抗体溶液。于室温下在轻微振荡的条件下培养60分钟。在培养过程中使培养板免受光照。在室温下，在轻微振荡的条件下利用一倍的磷酸缓冲液+0.1％的吐温-20对所述培养板进行五次洗涤，每次洗涤五分钟，所使用的缓冲液是大剂量的。利用一个多通道的移液管加入200微升的吐温洗涤溶液。在旋转器上于室温下振荡洗涤五分钟。重复洗涤步骤四次。在最后一次洗涤完成后，从孔中完全除去洗涤溶液。将所述培养板正面朝下并且轻敲或者利用纸巾轻轻沾取以除去痕量的洗涤缓冲液。利用Odyssey红外激光成像系统(Odyssey InfraredImaging System)在700以及800纳米的频率下扫描所述培养板以进行检测(700纳米的检测针对IRDyeTM 680抗体而800纳米的检测针对IRDyeTM 800CW抗体)。利用Odyssey软件确定完整蛋白与磷酸化蛋白的比例(700/800)并且利用Graphpad Prism(版本4.0a)绘制所述结果。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。
(c)测定受试化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)酶活 性的能力的体外检测。
利用组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)荧光计检测试剂盒(AK-500，Biomol，Plymouth Meeting，PA)对组蛋白脱乙酰基酶进行筛选。将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以形成20毫摩的工作储备浓缩液。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。每项检测都是通过如下步骤建立的：解冻所有的试剂盒成分并且将其保存于冰上直至使用。在检测缓冲液(50毫摩Tris/Cl，pH8.0，137毫摩氯化钠，2.7毫摩氯化钾，1毫摩氯化镁)中以1∶29的比例稀释HeLa核提取物。在检测缓冲液中制备曲古抑菌素A(TSA，阳性对照)以及受试化合物的稀释液(五倍于最终浓度)。在检测缓冲液中将Fluor de LysTM底物稀释至100微摩(50倍＝2倍的最终浓度)。在冷的检测缓冲液中将Fluor de LysTM显影剂浓缩物稀释20倍(例如，50微升的显影剂浓缩物加入950微升的检测缓冲液)。其次，在一倍的显影剂(Developer)中将0.2毫摩的曲古抑菌素A稀释100倍(例如，1毫升中的10微升；在一倍显影剂中的最终曲古抑菌素A的浓度＝2微摩；加入组蛋白脱乙酰基酶/底物反应液后的最终浓度＝1微摩)。加入检测缓冲液，在所述微量滴定板的适当孔中稀释曲古抑菌素A或者受试抑制剂。在除去阴性对照之外的其他所有孔中加入稀释的HeLa提取物或者其他组蛋白脱乙酰基酶样本。允许被稀释的Fluor deLysTM底物以及所述微量滴定板中的所述样本平衡至检测温度(例如，25℃或者37℃)。通过向每个孔中加入稀释的底物(25微升)并且充分混合来激发组蛋白脱乙酰基酶反应。允许组蛋白脱乙酰基酶反应进行1小时，之后通过加入F1uor de LysTM显影剂(50微升)终止反应。在室温下(25℃)对培养板培养10-15分钟。通过能够在350-380纳米范围内的波长下被激发的微量滴定板读数荧光计对样本进行读数，并且检测440-460纳米范围内的发射光。
下述表1-B列出了本发明代表性的化合物以及它们在组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)检测以及表皮生长因子受体(EGFR)检测中的活性。在这些检测中，使用到下述分级：对于IC50而言，I≥10微摩，10微摩＞II＞1微摩，1微摩＞III＞0.1微摩，以及IV≤0.1微摩。
表1-B
  化合物编号   HDAC   EGFR   HER2/ErB2   VEGFR
  1   I   IV
  2   I   IV
  3   I   IV
  4   III   IV
  5   IV   IV
  6   IV   IV   IV   III
  7   I   IV   IV
  8   I   IV
  9   III   IV
  10   III   IV
  11   IV   IV   III
  12   IV   IV   III
  13   I   IV
  14   II   IV
  15   IV   III
  16   III   IV
  17   IV   IV
  18   IV   IV   III
  19   I   IV
  21   II   III
  22   IV   IV
  23   IV   III
  24   IV   III
  30   IV   IV   III
  36   IV   IV
  38   II   IV
  40   IV   IV   III
  42   III   IV
  43   III   IV
  44   IV   IV   III
  45   I   III
  50   III   III
  63   III   II
  66   III   IV
  68   II   IV
  69   III   IV
  70   IV   IV   IV
  75   IV   IV   III
  76   IV   IV   III
  77   IV   IV
  78   IV   III
  79   IV   IV   III   I
  80   IV   II
  81   III   III
  82   III   III
  83   IV   I
  84   IV   III
  85   IV   IV   III   II
  86   IV   III
  87   IV   III
  88   IV   IV   II
  89   IV   III
  90   IV   N/A
  91   II   IV
  92   III   IV
  93   II   IV
  94   I   IV
  102   IV
  103   I
  107   III
  112   I
  118   II
  121   I
  124   I
  125   III
  138   II
  139   II
  144   III
  145   IV   IV   IV
  151   IV   IV   IV
  155   IV   IV   IV
  161   IV   III
  162   IV   IV   III
  167   IV   IV   III
  168   IV   IV   III
  174   I
  177   III   IV   IV
  178   III
  198   IV   IV   IV
  199   IV   IV   IV
  200   IV   IV   IV
  201   III   IV   IV
  202   III
  203   III
  204   II
  205   II
  206   IV   IV   IV
  207   IV   IV   IV
  208   IV
  209   IV
通过细胞增殖检测法对许多代表性的化合物针对几种不同细胞系的能力进行检测：
细胞增殖检测：
将肿瘤细胞系以每孔5000至10000的量培养于96孔平底培养板中，所述培养板中含有不同浓度的化合物。在0.5％小牛血清的存在下利用化合物对所述细胞进行72小时的培养。利用Perkin Elmer ATPlite(三磷酸腺苷发光检测)试剂盒对三磷酸腺苷(ATP)的含量进行检测从而对生长抑制进行评价。ATPlite是一种以萤火虫荧光素酶为基础的三磷酸腺苷监控系统。简要的说，向每个孔中的50微升不含酚红的培养基中加入25微升哺乳动物细胞裂解溶液，用来裂解细胞并且稳定三磷酸腺苷。之后，向所述孔中加入25微升底物溶液并且随后测量发光情况。
所取得的结果列于下述表C中。在这些检测中，使用到下述分级：对于IC50而言，I≥10微摩，10微摩＞II＞1微摩，1微摩＞III＞0.1微摩，以及IV≤0.1微摩。
表C
Figure G2007800418082D02331
附图1表明：在表皮生长因子受体酶学检测以及组蛋白脱乙酰基酶酶学检测中，本发明所述化合物，例如化合物6以及化合物12比埃罗替尼以及辛二酰基苯胺异羟肟酸(SAHA)更具活性。在所述表皮生长因子受体酶学检测中，本发明所述化合物比埃罗替尼的效力高大约15-20倍。在所述组蛋白脱乙酰基酶酶学检测中，本发明所述化合物比辛二酰基苯胺异羟肟酸(SAHA)的效力高大约5-10倍。
附图2说明：与辛二酰基苯胺异羟肟酸以及埃罗替尼相比，化合物12对于组蛋白脱乙酰基化以及表皮生长因子受体磷酸化分别的抑制性的提高。化合物12对于激酶(表皮生长因子受体)以及非激酶(组蛋白脱乙酰基酶)肿瘤靶位的抑制性。
表D说明了本发明所述化合物的效力。例如，在不同的肿瘤细胞系中(IC50值的单位是微摩)化合物12比埃罗替尼以及辛二酰基苯胺异羟肟酸更具活性。来自于五种主要类型的肿瘤(肺，乳腺，前列腺，直肠，以及胰腺)的细胞系对于化合物12的应答好于埃罗替尼与辛二酰基苯胺异羟肟酸的组合。令人惊奇的是，本发明所述化合物对于对它赛瓦
Figure G2007800418082D02341
以及易瑞沙具有抗性的细胞系具有活性。在这些检测中，使用到下述分级：对于IC50而言，D≥5微摩，5微摩＞C≥0.5微摩，0.5微摩＞B≥0.05微摩，以及A≤0.05微摩。
表D
  肿瘤系   肿瘤类型   SAHA   埃罗替尼   埃罗替尼/SAHA组合   化合物12
  MDA-MB-231   乳腺腺瘤   B   D   B   A
  HCT116   直肠癌   C   D   C   A
  MCF-7   乳腺腺瘤   C   D   C   A
  MDA-MB-468   乳腺腺瘤   C   C   C   A
  SKBr3   乳腺癌   C   D   C   B
  PC-3   前列腺腺瘤   C   D   C   C
  Caki-1   肾癌   B   B   B   A
  A431   表皮瘤   C   C   C   B
  22RV1   前列腺癌   B   B   B   B
附图3表示的是对于几种不同的肿瘤细胞系具有更强的抗增殖活性的例子。附图3还表示出本发明所述化合物比单独的辛二酰基苯胺异羟肟酸、单独的埃罗替尼、以及辛二酰基苯胺异羟肟酸和埃罗替尼的组合更具有效力。
附图3显示的是化合物12在直肠以及乳腺肿瘤细胞中诱导细胞凋亡的效力。通过测量增加的半胱天冬蛋白酶(Caspase)3&7的活性，发现化合物12诱导的细胞凋亡的数量增加了大约4-11倍。埃罗替尼在低于20微摩的浓度下是灭活的。化合物12所表现出的强于埃罗替尼的高效力表明，本发明所述化合物可以被用来治疗对埃罗替尼具有抗性的肿瘤细胞。
附图5-10说明了化合物12在各种不同的肿瘤异种移植物模型中的功效。下面的表E概括了获得附图5-10中所表示的结果的体内试验情况。
表E
模型 癌症类型 剂量组合 给药方法  给药方案(on-off-on) 预处理肿瘤尺寸
 A431   表皮瘤   溶媒6毫克/千克12毫克/千克24毫克/千克48毫克/千克   腹膜内输注   每日一次，21天   156±57mm3
 H358   非小细胞癌   溶媒15毫克/千克30毫克/千克60毫克/千克   静脉内输注-2分钟输注   7-7-5   84±23mm3
 H292   非小细胞癌   溶媒15毫克/千克30毫克/千克60毫克/千克   静脉内输注-2分钟输注   7-7-5   116±23mm3
 BxPC3   胰腺癌   溶媒10毫克/千克20毫克/千克40毫克/千克   静脉内输注-2分钟输注   7-7-2   201±53mm3
 PC3   前列腺癌   溶媒10毫克/千克20毫克/千克40毫克/千克   静脉内输注-2分钟输注   7-7-5   195±50mm3
 HCT116   直肠癌   溶媒15毫克/千克30毫克/千克60毫克/千克SAHA 20毫克/千克   静脉内输注-2分钟输注  5-2-5   91±23mm3
 HCC827(细胞凋亡/抗增殖)   非小细胞癌   溶媒30毫克/千克   静脉内输注-2分钟输注  每日一次，3天   149±36mm3
 BxPC3(细胞凋亡/抗增殖)   胰腺癌   60毫克/千克   静脉内输注-2分钟输注  单次静脉内输注   未测出
用于进行体内试验的一种代表性的方案，如下：
将1-10x106个人类肿瘤细胞通过皮下方式植入到无胸腺(nu/nu)小鼠体内。当所述肿瘤的体积达到大约100立方毫米时，将所述化合物通过尾部静脉内输注的方式施用至所述小鼠。按照常规，一个典型的药效研究需要5组(每组8-12只小鼠)小鼠，包括一组阴性对照，一组阳性对照，以及三组用相同化合物的3个剂量水平处理过的受试组。通常情况下一个典型的研究利用的是7-7-5(on-off-on)的方案。以每周两次的频率利用电子卡钳测量所述肿瘤的尺寸，并且利用天平测量体重。在上述研究结束时，从被处于安乐死的小鼠体内分离出所述肿瘤。将每个肿瘤的一半冷冻于干冰中并且在-80℃下储存，用于进行药物动力学(PK)分析或者Western印迹分析。所述另外一半利用福尔马林进行固定。将固定好的组织利用石蜡进行处理、包埋并且切片，用于进行免疫组织化学染色。
对于人表皮生长因子受体1(HER2)进行的放射性同位素检测方案
将10纳摩人表皮生长因子受体2以及0.1毫克/毫升polyEY放置于反应缓冲液中，并且向其中加入2毫摩氯化锰，1微摩三磷酸腺苷以及最后加入1％的二甲基亚砜。将所述反应混合液在室温下培养2小时。三磷酸腺苷的转化率为22％。
人表皮生长因子受体2(Accession number：GenBank X03363)的特征如下：N-末端具有GST标记的、重组的、人表皮生长因子受体2氨基酸679-1255，由Sf9昆虫细胞中的杆状病毒进行表达。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)以及考马斯亮蓝染色得到的纯度＞90％。分子量(MW)＝91.6kDa。比活度(Specific Activity)为40U/毫克，其中一个酶活单位被定义为在30℃下，每分钟内将1纳摩磷酸转化至30微克/毫升Poly(Glu∶Tyr＝4∶1)底物直至三磷酸腺苷最终浓度达到100微摩的酶的量。所述酶是在25毫摩Tris-HCl，pH8.0，100毫摩氯化钠，0.05％吐温-20，50％丙三醇，10毫摩还原谷胱甘肽，以及3毫摩二硫苏糖醇(DTT)中。
参考文献：
1.Meyer，M.等人，EMBO.J.18，363-374(1999年)
2.Rahimi，N.等人，J.Biol Chem 275，16986-16992(2000年)
已经发现本发明所述化合物针对多种激酶具有活性。例如，表F表示出了化合物12在一组激酶检测中表现出的抑制性。并且，化合物12在人表皮生长因子受体-2检测中表现出明显高于埃罗替尼的活性。
表F
  检测   浓度(微摩)   抑制性(％)
  Abl激酶   5   57
  FGFR2激酶   5   73
  FLT-3激酶   5   85
  VEGFR2激酶   5   64
  Lck激酶   5   56
  Lyn激酶   5   95
  Ret激酶   5   93
人表皮生长因子受体-2(Her-2)
化合物12的IC50＝188纳摩
埃罗替尼的IC50＝1473纳摩
实施例73：化合物12的Captisol(多阴离子β环糊精)制剂 的制备方法
A.25毫克/毫升、30毫克/毫升、40毫克/毫升、50毫克/毫升以及60毫克/毫升化合物12的30％Captisol(多阴离子β环糊精)溶液的制备
(i)使用酒石酸
通过向装有0.9克Captisol(多阴离子β环糊精)的试管中加入2.7毫升的水来制备30％的Captisol制剂。之后，利用漩涡仪将所述混合液进行混合，从而得到大约3毫升的透明溶液。
为了制备化合物12的25毫克/毫升的溶液制剂，向装有25毫克化合物12以及8.6毫克酒石酸的试管中加入1毫升30％的Captisol溶液，将所述得到的混合液放置于漩涡仪上进行混合或者在30℃下超声波降解15至20分钟，从而得到透明的微黄色溶液。得到的溶液在室温下是稳定的。
为了制备化合物12的30毫克/毫升的溶液制剂，在室温下向装有30毫克化合物12以及10.4毫克酒石酸(1.0当量)的试管中加入1毫升30％的Captisol溶液。
为了制备化合物12的40毫克/毫升的溶液制剂，在36℃下向装有40毫克化合物12以及17.9毫克酒石酸(1.3当量)的试管中加入1毫升30％的Captisol溶液。
为了制备化合物12的50毫克/毫升的Captisol制剂，在37℃下向50毫克化合物12以及22.5毫克酒石酸(1.3当量)中加入1毫升30％的Captisol溶液。
为了制备化合物12的60毫克/毫升的Captisol制剂，在36℃下向装有60毫克化合物12以及26.9毫克酒石酸(1.3当量)的试管中加入30％的Captisol溶液。将所述溶液利用一倍的水以及两倍的D5W进行稀释。得到的稀释液在室温下的稳定性持续大于12小时。
(ii)使用柠檬酸
为了制备化合物12的25毫克/毫升的溶液制剂，向装有25毫克化合物12以及11.1毫克柠檬酸(1.0当量)的试管中加入1毫升30％的Captisol溶液，将所述得到的混合液放置于漩涡仪上进行混合或者在室温下超声波降解15至20分钟，从而得到透明的微黄色溶液。
(iii)使用盐酸
为了制备化合物12的25毫克/毫升的溶液制剂，向装有25毫克化合物12以及57.5微升盐酸(1.0当量)的试管中加入1毫升30％的Captisol溶液，将所述得到的混合液放置于漩涡仪上进行混合或者在室温下超声波降解15至20分钟，从而得到透明的微黄色溶液。
(iiii)使用钠盐
为了制备化合物12的7.5毫克/毫升的溶液制剂，向装有7.5毫克化合物12的钠盐的试管中加入1毫升30％的Captisol溶液，将所述得到的混合液放置于漩涡仪上进行混合或者在室温下超声波降解15至20分钟，从而得到透明的微黄色溶液。
B.溶液的过滤
将来自于A(i)中的所述化合物12的制剂通过一个0.2微米的预先灭菌的过滤器进行过滤，回收率大于98％。
C.冻干产物的制备
将来自于A(i)以及A(iii)中的所述化合物12的制剂(25毫克/毫升)进行冻干处理，从而获得黄色粉末形式的冻干产物。
来自于A(i)中的所述制剂的冻干产物在下列温度下具有化学稳定性：-20℃，室温，并且在40℃下能够保持至少两周的化学稳定性。它可以在4℃下储存多于两周的时间而不发生分解。来自于A(iii)中的所述制剂的冻干产物在-20℃下能够保持至少两周的稳定性。
D.稀释液的研究
利用D5W(10倍，20倍，以及50倍)对来自于A(i)中的所述化合物12的制剂进行稀释，其具有化学稳定性并且保持在溶液中不形成沉淀(大于48小时)。
利用D5W(10倍)对来自于A(ii)、A(iii)以及A(iiii)中的所述化合物12的制剂进行稀释，其保持在溶液中不形成沉淀(大于12小时)。
实施例74：在CAPTISOL中配制的化合物12的钠盐、盐酸 盐、柠檬酸盐以及酒石酸盐或其复合物的性质
在30％的CAPTISOL溶液中制备式I所示受试化合物的钠盐、盐酸盐、柠檬酸盐以及酒石酸盐，并且对下述内容进行研究：
表G表示的是化合物12的钠盐、盐酸盐、柠檬酸盐以及酒石酸盐的生理化学性质、药物动力学(PK)性质以及药效性质。
表G
  钠盐   盐酸盐   柠檬酸盐   酒石酸盐
  溶解性   7.5mg/ml   25mg/ml   25mg/ml   60mg/ml
  pH   10-11   2-3   4-5   3-4
  IV Tissue   高 高   低   高
  D5W的稀释度   ＞10倍   ＞10倍   ＞10倍   ＞50倍
  稀释溶液的化学稳定性   ＞12小时   ＞12小时   ＞12小时   ＞12小时
  两周内冻干产物的化学稳定性   ND   -20℃   ND   -20℃，室温，40℃
  在人体内可使用的最高日剂量   220-250mg   ＞750mg   ＞750mg   ＞1800mg
实施例75：在A549非小细胞癌(NSCLC)异种移植物模型 中，存在于30％的CAPTISOL的化合物12的组合物与埃罗替尼 针对原生型表皮生长因子受体i的抗肿瘤活性的比较
在非小细胞癌异种移植物模型中，存在于30％的CAPTISOL中的化合物12的施用削弱了肿瘤的生长。如附图11A中所示，在24小时之后，利用化合物12治疗过的动物的肿瘤尺寸表现出了150％的增长而接受溶媒治疗过的动物的肿瘤尺寸表现出了大约240％的变化。如附图11B中所示，与对照组相比，利用埃罗替尼对动物进行治疗没有对肿瘤尺寸产生显著性的影响。
实施例76：存在于30％的Captisol中的化合物12的组合物 对HPAC胰腺癌细胞的作用
每天给动物施用120毫克/千克存在于30％CAPTISOL中的化合物12、50毫克/千克埃罗替尼或者溶媒，测量随着时间的过去(天)而发生的肿瘤尺寸的变化。如附图12A中所示，与埃罗替尼(po)或者溶媒相比，施用120毫克/千克存在于30％的CAPTISOL中的化合物12(静脉内/腹膜内)对于肿瘤的生长产生了更强的虚弱。
在小鼠(mice)、大鼠(rat)以及狗中进行的药物动力学研 究
在实施例77-83中使用到的试验方法如下。
动物：小鼠(CD-1，雄性，25-30克)，大鼠(Spraque Dawle，260-300克)以及狗(Beagles，雄性，9-11千克)被用于进行所述药物动力学(PK)研究。给动物随意提供球形食物以及水，并且将其放置于具有23±1℃、湿度50-70％、以及12小时光照/12小时黑暗循环的条件的房间内。
药物的制备以及施用。将化合物12溶解于30％的CAPTISOL(多阴离子β环糊精)中，并且加入相同摩尔浓度的酒石酸或者盐酸或者柠檬酸或者氢氧化钠。将所述化合物经由静脉内(iv)输注的方式进行施用。每种动物的静脉内输注条件如下：
小鼠：以20毫克/千克以及60毫克/千克的剂量进行2分钟的静脉内输注
大鼠：以20毫克/千克的剂量进行5分钟的静脉内输注
Beagle(小猎犬)：以25毫克/千克的剂量进行30分钟的静脉内输注
血液和组织样本的收集。在不同的时间点将血液收集并装入含有肝素钠抗凝血剂的试管中。通过离心分离出所述血浆并且将其在-40℃下保存直至进行分析。
血浆样本的提取。通过蛋白的沉淀制备血浆样本。向血浆样本中加入内标。将50微升血浆与150微升乙腈进行混合，旋转，并且在10000rpm下离心10分钟。随后将得到的上清液注入液质联用仪(LC/MS/MS)。
将样本与血浆中制备的标准进行比较。这些标准是通过连续稀释制得的。将内标加入到带有标准的血浆中。
组织样本的提取。利用肺以及直肠样本(20-200毫克)进行提取。将组织在0.8毫升水中进行均质。向所述组织均质物中加入内标。利用1毫升的乙酸乙酯对所述均质物提取三次。在蒸发之后，在0.1毫升的乙腈中使所述残余物进行再生，用于进行液质联用(LC/MS/MS)分析。
LC/MS/MS分析方法
液相色谱(LC)参数如下所示：
液相色谱仪：安捷伦高效液相色谱仪(Agilent HPLC)1100系列
自动进样器：安捷伦(Agilent)G 1367A自动进样器
分析柱：YMC Pro C 18S3(3μ，2.0*50毫米，120
Figure G2007800418082D02451
)
保护柱：YMC Pro C 18S3保护柱(3μ，2.0*10毫米，120)
柱温：   环境温度
流动相： A：乙腈∶水∶蚁酸(5∶95∶0.1，体积/体积/体积)
         B：乙腈∶水∶蚁酸(95∶5∶0.1，体积/体积/体积)
LC梯度安排：0-1分钟：流动相A：100％
            1-2.5分钟：流动相A：100％至20％
            2.5-3分钟：流动相A：20％
            3-4分钟：流动相A：20％至100％
流速：      200微升/分钟
自动进样器温度：环境温度
注入体积：  5微升
质谱参数如下所示：
仪器：PE Sciex API 3000
接口：涡轮离子喷雾(TIS)
极性：阳离子
扫描：多反应监测(MRM)
在小鼠以及大鼠中进行的单一剂量或者多剂量毒性研究
下面所述的用于进行毒性研究的试验方法如下：
试验设计：
1.小鼠的单一剂量的最大耐受剂量(MTD)
a.CD-1(远交系)小鼠，雄性，24-26克
b.以0、50、100、200、400毫克/千克的剂量，静脉内输注2分钟
c.每组8只小鼠
2.大鼠的单一剂量的最大耐受剂量(MTD)
a.Sprague Dawley(远交群)，雄性以及雌性，240-260克
b.以0、25、50、100、200毫克/千克的剂量，静脉内输注5分钟
c.每组6只大鼠(雄性3只，雌性3只)
3.小鼠的7日多剂量的最大耐受剂量(MTD)
a.CD-1(远交系)小鼠，雄性，24-26克
b.以0、50、100、200毫克/千克/天的剂量，腹膜内输注
c.每组6只小鼠
d.在第7天的最后一次剂量后的两小时，收集血液以及器官用于进行血液学研究
4.大鼠的7日多剂量的最大耐受剂量(MTD)
a.Sprague Dawley(远交群)，雄性以及雌性，220-250克
b.以25、50、100、200毫克/千克/天的剂量，静脉内输注5分钟
c.每组6只大鼠(雄性3只，雌性3只)
d.在第7天的最后一次剂量后的两小时，收集血液以及器官用于进行血液学研究
化合物的制备
将所述化合物溶解于30％的Captisol(多阴离子β环糊精)中，并且加入相同摩尔浓度的酒石酸。所述储备溶液是：存在于30％的Captisol中的25毫克/毫升的酒石酸盐形式，1毫升/试管，储存于-40℃。例如，1000毫克化合物，345毫克酒石酸(每毫克化合物0.345毫克酒石酸)以及40毫升30％的Captisol或者1000毫克化合物，2.3毫升1N的盐酸(每毫克化合物2.3微升1N的盐酸)，12克Captisol(多阴离子β环糊精)，加水至40毫升。在使用之前，利用30％的CAPTISOL对储备溶液进行稀释。
实施例77：静脉内给药后受试盐在血浆、肺以及直肠内的药 物动力学性质
为了测定随着时间的过去(小时)通过静脉内(iv)给药后化合物12在血浆、肺以及直肠中的浓度(纳克/毫升)，以静脉内的形式给小鼠施用20毫克/千克剂量的存在于30％的CAPTISOL中的化合物12的盐酸盐、柠檬酸盐、钠盐以及酒石酸盐。这些研究获得的结果在附图13中有所表示。如附图中所示，观察到所述钠盐、盐酸盐以及酒石酸盐具有相似的血浆药物动力学性质以及组织药物动力学性质。
实施例78：在小鼠中进行的化合物12制剂的药物动力学研 究
以静脉内给药(iv)以及腹膜内(ip)给药的形式向小鼠施用20毫克/千克以及60毫克/千克剂量的存在于30％的CAPTISOL中的化合物12的盐酸盐，并且测定所述半衰期(t1/2)，最大观察浓度(Cmax)以及曲线下面积(AUC)。如下面的表H中所示，当以静脉内的形式给药而非腹膜内形式给药时，化合物12的浓度与剂量成比例。化合物12在组织中的半衰期长于在血浆中的半衰期。
表H
Figure G2007800418082D02491
Figure G2007800418082D02501
实施例79：在大鼠中进行的化合物12制剂的药物动力学研 究
(以静脉内的形式)向大鼠施用20毫克/千克以及60毫克/千克剂量的存在于30％的CAPTISOL中的化合物12的盐酸盐，并且在三十小时之后测定血浆中所述化合物的浓度(纳克/毫升)。如附图14中所示，在所述大鼠血浆中化合物12的浓度与化合物12的给药剂量成比例。
实施例80：在小鼠中进行的化合物12制剂的单一剂量IV的 毒性研究
(以静脉内的形式)向小鼠施用存在于30％的CAPTISOL中的化合物12的单一剂量(25毫克/千克、50毫克/千克、100毫克/千克、200毫克/千克或者400毫克/千克)，并且在九天之后测定小鼠体重的变化，用以评价不同剂量的化合物12的毒性。如附图15中所示，施用高达200毫克/千克剂量的化合物12并没有导致体重发生显著的变化。
实施例81：在小鼠中进行的化合物12制剂的七日重复腹膜 内给药的毒性研究
在七天的时间内(以腹膜内的形式)向小鼠施用存在于30％的CAPTISOL中的化合物12的重复剂量(25毫克/千克、50毫克/千克、100毫克/千克、200毫克/千克或者400毫克/千克)，并且在七天之后测定小鼠体重的变化。如附图16中所示，重复施用高达100毫克/千克剂量的化合物12并没有导致体重发生显著的变化。
实施例82：在大鼠中进行的化合物12制剂的单一剂量IV的 毒性研究
(以静脉内的形式)向大鼠施用存在于30％的CAPTISOL中的化合物12的单一剂量(25毫克/千克、50毫克/千克、100毫克/千克或者200毫克/千克)，并且在八天之后测定大鼠体重的变化，用以评价不同剂量的化合物12的毒性。如附图17中所示，施用高达200毫克/千克剂量的化合物12并没有导致体重发生显著的变化。
第二部分
表2-A
Figure G2007800418082D02512
Figure G2007800418082D02521
Figure G2007800418082D02531
Figure G2007800418082D02541
方案1
Figure G2007800418082D02561
方案2
Figure G2007800418082D02571
方案3
Figure G2007800418082D02572
实施例1：5-((Z)-(5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基) -N-羟基-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺(化合物1)的制备 方法
步骤1a.5-氟吲哚啉基-2-酮(化合物102)
向化合物101(6.0克，36毫摩)、乙二醇(95毫升)以及水合肼(2.6克，52毫摩)组成的混合液中加入氢氧化钾(4.07克，73毫摩)。将得到的反应混合液在80℃下搅拌3小时，并且随后将其冷却至室温并且倒入冰冷的水中。利用12N的盐酸将上述混合液的pH调整至1-2并且将所述混合液在室温下搅拌12小时。之后利用乙酸乙酯对所述混合液进行提取。收集得到的有机相，蒸发，从而获得黄色固体形式的产物102(4.5克，81.9％)。LCMS：m/z 152(M+1)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ3.46(s，2H)，6.95(m，3H)，10.35(s，1H)。
步骤1b.2-(羟基亚氨基)-3-氧代丁酸叔丁基酯(化合物104)
向冷却至5℃的化合物103(69.52克，44摩)的冰醋酸(500毫升)溶液中逐滴加入亚硝酸钠(32.5克，0.446摩)的冷水(50毫升)溶液。将所述混合液搅拌1小时并且将其放置4小时，在这段时间内使其回暖至室温。上述混合液无需进行进一步的纯化即可在下一步骤中被使用。LCMS：m/z 188(M+1)。
步骤1c.3，5-二甲基-1氢-吡咯基-2，4-二羧酸-2-叔丁基-4-乙酯(化合物105)
对上述混合液(104)进行搅拌并且加入部分锌粉(84克，1.29摩)，控制加入锌粉的速率使得所述混合液的温度低于80℃。上述加入过程完成之后，将所述混合液加热至60℃并保持1小时。向上述混合液中加入乙酰乙酸乙酯(60克，0.46摩)并且将所述混合液在85℃下回流4小时。趁热过滤所述混合液以除去所述锌粉，将得到的滤液倒入1升的冰中并且放置过夜。过滤得到的沉淀，从而获得产物105(29克，24.7％)，上述固体无需进行进一步的纯化即可在下一步骤中被使用。LCMS：m/z 268(M+1)。
步骤1d.2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-羧酸乙酯(化合物106)
利用1摩/升(M)的硫酸(240毫升)对105(12克，45毫摩)的乙醇(325毫升)溶液进行处理。将所述溶液在65℃下搅拌4小时，并且随后将其冷却至室温并且蒸发除去大部分的乙醇，并利用二氯甲烷进行提取。合并得到的有机层并且通过硫酸镁进行干燥。在除去所述溶剂之后，获得所述粗产物106(3克，40％)。利用柱层析法(硅胶，洗脱液为10/1的石油/乙酸乙酯)对上述粗产物进行纯化，从而获得褐色固体形式的产物106(1.5克，20％)。LCMS：m/z 168(M+1)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ2.10(s，3H)，2.35(s，3H)，4.13(q，2H)，6.37(s，1H)，10.85(s，1H)。
步骤1e.5-甲酸基-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-羧酸乙酯(化合物107)
在30分钟的时间内，通过滴液漏斗向处于10℃下的二甲基甲酰胺(2克，27毫摩)溶液中加入三氯氧磷(2.6毫升)的10毫升二氯甲烷溶液。在加入之后，将所述混合液在室温下搅拌20分钟。向所述混合液中加入二氯甲烷(10毫升)。当中心温度降低至5℃时，在1小时的时间内通过滴液漏斗向处于搅拌状态下的冷却的混合液中加入化合物106的二氯甲烷(10毫升)溶液，之后将所述混合液在回流温度下搅拌30分钟，随后将其冷却至30℃，向其中加入醋酸钠(17克，125毫摩)的水(100毫升)溶液。将所述反应混合液再次回流30分钟，并且随后冷却至室温，利用二氯甲烷(4x100毫升)对得到的水层进行提取。利用盐水对得到的混合有机层进行洗涤，干燥并且蒸发，从而获得灰色固体形式的产物107(4.42克，90％)。LCMS：m/z 196(M+1)，1HNMR(二甲基亚砜-d6)δ1.35(t，J3H)，2.23(s，3H)，2.48(s，3H)，4.12(q，2H)，9.60(s，1H)，10.58(s，1H)。
步骤1f.5-甲酸基-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-羧酸(化合物108)
向化合物107(7.2克，37毫摩)的乙醇(60毫升)溶液中加入氢氧化钾(6.2克，111毫摩)的水(400毫升)溶液。将所述混合液回流直至上述反应完成。将所述混合液冷却至室温并且利用二氯甲烷对得到的水层进行提取。利用1N的盐酸将所述水层酸化至pH等于2。通过过滤收集得到的沉淀，用水进行洗涤并且干燥，从而获得黄色固体形式的产物108(5.5克，89％)。LCMS：m/z 168(M+1)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ2.40(s，3H)，2.43(s，3H)，9.24(s，1H)，12.14(bs，2H)。
步骤1g.5-((Z)-(5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-N-羟基-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺(化合物1)
将化合物108(4.0克，24毫摩)、102(3.6克，24毫摩)以及吡咯烷(2毫升)的乙醇(200毫升)溶液所组成的混合液进行搅拌并且在78℃下加热6小时。将得到的混合液过滤，从而获得黄色固体，干燥从而获得产物1(5.5克，77％)。LCMS：m/z301(M+1)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ2.39(s，3H)，2.42(s，3H)，6.82(m，2H)，7.77(s，1H)，7.80(m，1H)，10.93(s，1H)，12.23(s，1H)，13.86(s，1H)。
实施例2：N-(2-(羟基氨基甲酰基)乙基)5-((Z)-(5- 氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3- 甲酰胺(化合物2)的制备方法
步骤2a.3-(5-((Z)-(5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺基)丙酸甲酯(化合物110-2)
在室温下向处于搅拌状态下的1(0.5克，1.67毫摩)的二甲基甲酰胺(35毫升)溶液中连续加入1-羟基苯并三唑(HOBt)(1.02克，7.52毫摩)，三乙胺(2.12毫升，15.03毫摩)，盐酸1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI·HCl)(1.44克，1.52毫摩)以及盐酸3-氨基丙酸甲酯(0.7克，5.0毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌24小时并且随后利用水(20毫升)、盐水(20毫升)以及饱和的碳酸氢盐溶液(20毫升)进行稀释，并且利用10摩/升的氢氧化钠将所述溶液的pH调整至11-12。过滤所述混合液并且收集得到的固体，用水进行洗涤，干燥，从而获得黄色固体形式的粗产物110-2(0.44克，68.3％)。LCMS：m/z386(M+1)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ2.38(s，3H)，2.41(s，3H)，2.50(t，2H)，3.44(t，2H)，3.62(s，3H)，6.85(m，2H)，7.71(m，3H)，10.86(s，1H)，13.69(s，1H)。
步骤2b.N-(2-(羟基氨基甲酰基)乙基)5-((Z)-(5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺(化合物2)
在冰浴中向羟基氯化铵(1.08克，15.6毫摩)的二甲基甲酰胺(25毫升)溶液中逐滴加入氢化钠(NaH)(60％，936毫克，23.4毫摩克)。半小时之后，向上述混合液中加入110-2(0.2克，0.52毫摩)的二甲基亚砜(3毫升)溶液。将所述混合液在0℃下搅拌2小时，过滤，利用二甲基甲酰胺对得到的残余物进行洗涤，并且在减压条件下除去所述的二甲基甲酰胺，纯化，从而获得黄色固体形式的2(25毫克，12.5％)。LCMS：m/z 387(M+1)，1HNMR(二甲基亚砜-d6)δ2.25(t，2H)2.41(s，3H)，2.43(s，3H)，6.85(m，2H)，7.64(t，1H)，7.71(s，1H)，7.727(m，1H)，8.75(s，1H)，10.47(s，1H)，10.89(s，1H)，13.68(s，1H)。
实施例3：N-(3-(羟基氨基甲酰基)丙基)5-((Z)-(5- 氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3- 甲酰胺(化合物3)的制备方法
步骤3a.4-(5-((Z)-(5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺基)丁酸甲酯(化合物110-3)
在室温下向处于搅拌状态下的化合物1(0.5克，1.67毫摩)的二甲基甲酰胺(35毫升)溶液中连续加入1-羟基苯并三唑(HOBt)(1.02克，7.52毫摩)，三乙胺(2.12毫升，15.03毫摩)，盐酸1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI·HCl)(1.44克，1.52毫摩)以及盐酸4-氨基丁酸甲酯(0.77克，5.0毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌24小时并且随后利用水(20毫升)、盐水(20毫升)以及饱和的碳酸氢盐溶液(20毫升)进行稀释，并且利用10摩/升的氢氧化钠将所述溶液的pH调整至11-12。过滤所述混合液并且收集得到的固体，用水进行洗涤并且进行干燥，从而获得黄色固体形式的粗产物110-3(0.32克，48.3％)。LCMS：m/z 400(M+1)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.77(m，2H)，2.39(m，4H)，2.42(s，3H)，2.49(s，3H)，3.23(t，2H)，6.85(m，2H)，7.60(t，1H)，7.67(s，1H)，7.71(m，1H)，10.89(s，1H)，13.68(s，1H)。
步骤3b.N-(3-(羟基氨基甲酰基)丙基)5-((Z)-(5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺(化合物3)
在冰浴中向盐酸羟胺(1.04克，15毫摩)的二甲基甲酰胺(25毫升)溶液中逐步加入氢化钠(NaH)(60％，900毫克，22.5毫摩克)。半小时之后，向上述混合液中加入110-3(0.2克，0.5毫摩)的二甲基亚砜(3毫升)溶液。将所述混合液在0℃下搅拌2小时。将所述反应混合液过滤，利用二甲基甲酰胺对得到的残余物进行洗涤，干燥以除去剩余的二甲基甲酰胺，从而获得黄色固体形式的产物3(21.0毫克，10.5％)。LCMS：m/z 401(M+1)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.73(t，2H)，2.02(t，2H)，2.38(s，3H)，2.41(s，3H)，2.43(t，2H)，6.85(m，2H)，7.66(t，1H)，7.72(s，1H)，7.76(m，1H)，8.70(s，1H)，10.40(s，1H)，10.88(s，1H)，13.68(s，1H)。
实施例4：N-(5-(羟基氨基甲酰基)戊基)5-((Z)-(5- 氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3- 甲酰胺(化合物4)的制备方法
步骤4a.6-(5-((Z)-(5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺基)己酸甲酯(化合物110-4)
在室温下向处于搅拌状态下的化合物1(0.5克，1.67毫摩)的二甲基甲酰胺(35毫升)溶液中连续加入1-羟基苯并三唑(HOBt)(1.02克，7.52毫摩)，三乙胺(2.12毫升，15.03毫摩)，盐酸1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI·HCl)(1.44克，1.52毫摩)以及盐酸6-氨基己酸甲酯(0.91克，5.0毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌24小时并且随后利用水(20毫升)、盐水(20毫升)以及饱和的碳酸氢盐溶液(20毫升)进行稀释，并且利用10摩/升(M)的氢氧化钠将所述溶液的pH调整至11-12。过滤所述混合液并且将得到的固体用水进行洗涤并且进行干燥，从而获得黄色固体形式的粗产物110-4(0.47克，65.8％)。LCMS：m/z 428(M+1)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.33(m，2H)，1.54(m，4H)，2.32(t，2H)，2.42(s，3H)，2.50(s，3H)，3.20(t，2H)，3.59(s，3H)，6.85(m，2H)，7.60(t，1H)，7.69(s，1H)，7.71(m，1H)，10.88(s，1H)，13.67(s，1H)。
步骤4b.N-(5-(羟基氨基甲酰基)戊基)5-((Z)-(5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺(化合物4)
在0℃下向盐酸羟胺(0.93克，14.0毫摩)的二甲基甲酰胺(25毫升)溶液中逐步加入氢化钠(NaH)(60％，846毫克，21.3毫摩克)。半小时之后，向上述混合液中加入110-4(0.2克，0.47毫摩)的二甲基亚砜(3毫升)溶液。将所述混合液在0℃下搅拌2小时并且过滤。利用二甲基甲酰胺对收集到的固体进行洗涤，并且在减压条件下除去剩余的二甲基甲酰胺，从而获得黄色固体形式的产物4(22.6毫克，11.2％)。熔点209.7℃(分解)，LCMS：m/z429(M+1)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.27(m，2H)，1.48(m，4H)，1.94(t，2H)，2.38(s，3H)，2.40(s，3H)，3.12(t，2H)，6.87(m，2H)，7.60(t，1H)，7.69(s，1H)，7.72(m，1H)，8.63(s，1H)，10.32(s，1H)，10.82(s，1H)，13.65(s，1H)。
实施例5：(Z)-5-((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基) -N-(2-(4-羟基氨基甲酰基)苯氧基)乙基)-2，4-二甲基-1氢 -吡咯基-3-甲酰胺(化合物8)的制备方法
步骤5a.4-(氰基甲氧基)苯甲酸甲酯(化合物201)
向4-羟基苯甲酸甲酯(5.0克，32.9毫摩)的二甲基甲酰胺(50毫升)溶液中加入2-氯乙腈(2.5克，32.9毫摩)以及碳酸钾(13.6克，98.6毫摩)。将所述混合液在50℃下搅拌4小时。向其中加入水(100毫升)并且对得到的固体进行过滤，从而获得白色固体形式的产物201(6.2克，98％)。上述固体无需进行进一步的纯化即可在下一步骤中被使用。LCMS：192[M+1]+。
步骤5b.4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸甲酯(化合物202)
在氮气环境下，将化合物201(1.5克，7.8毫摩)的四氢呋喃(15毫升)溶液在回流温度下进行搅拌。在30分钟的时间内向其中逐滴加入硼烷甲基硫醚(BH3Me2S)(3.9毫升，7.8毫摩)。将所述溶液回流4小时并且随后将其冷却至室温。向其中加入6N的盐酸(3毫升)并且将所述混合液回流0.5小时并且随后冷却至0℃。将所述反应混合液过滤并且浓缩滤液，从而获得白色固体形式的粗产物202(2.3克)。所述粗产物无需进行进一步的纯化即可在下一步骤中被使用。LCMS：196[M+1]+。
步骤5c.(Z)-4-(2-(5-((5-氟-2氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸甲酯(化合物203)
在0℃下，向处于搅拌状态下的化合物109(0.5克，1.67毫摩)的四氢呋喃(150毫升)溶液中连续加入1-羟基苯并三唑(HOBt)(0.34克，2.8毫摩)，三乙胺(0.6毫升，4.18毫摩)，盐酸1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI·HCl)(0.48克，2.8毫摩)以及化合物202(0.6克，3.33毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌过夜，蒸发除去溶剂，并且利用水(50毫升)、盐水(50毫升)以及饱和的碳酸氢钠溶液(50毫升)进行稀释。利用10摩/升(M)的氢氧化钠将所述溶液的pH调整至11-12。过滤所述混合液，用水进行洗涤并且进行干燥，从而获得黄色固体形式的粗产物203(550毫克，69％)。LCMS：478[M+1]+，1HNMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.40(s，3H)，2.43(s，3H)，3.63(m，2H)，3.82(s，3H)，4.20(t，2H)，6.92(m，2H)，7.07(d，2H)，7.70(m，2H)，7.84(s，1H)，7.91(d，2H)，10.88(s，1H)，13.68(s，1H)。
步骤5d.(Z)-4-(2-(5-((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺基)乙氧基)苯甲酸(化合物8)
在0℃下向盐酸羟胺(750毫克，10.5毫摩)的二甲基甲酰胺(15毫升)溶液中逐步加入氢化钠(NaH)(60％，650毫克，15.75毫摩)。半小时之后，向上述混合液中加入化合物203(500毫克，1.05毫摩)的二甲基甲酰胺(25毫升)溶液。将所述混合液在0℃下搅拌0.5小时并且过滤。利用二甲基甲酰胺对收集到的固体进行洗涤，并且在减压条件下浓缩滤液，从而获得黄色固体形式的产物8(65毫克，17％)。LCMS：479[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.39(s，3H)，2.41(s，3H)，3.59(m，2H)，4.15(t，J＝5.7Hz，2H)，6.83(m，4H)，7.69(m，5H)，8.85(s，1H)，10.84(s，1H)，11.02(s，1H)，13.67(s，1H)。
实施例6：(Z)-5-((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基) -N-(6-(羟基(甲基)氨基)-6-氧代己基)-2，4-二甲基-1氢- 吡咯基-3-甲酰胺(化合物9)的制备方法
在0℃下向N-甲基盐酸羟胺(1克，11.7毫摩)的二甲基甲酰胺(15毫升)溶液中逐步加入氢化钠(NaH)(60％，700毫克，17.55毫摩)。半小时之后，向上述混合液中加入化合物110-4(0.5克，1.15毫摩)的二甲基甲酰胺(25毫升)溶液。将所述混合液在0℃下搅拌15分钟，过滤并且利用二甲基甲酰胺进行洗涤。在减压条件下浓缩滤液，从而获得黄色固体形式的粗产物，将其进行纯化，从而获得黄色固体形式的目标产物9(150毫克，35％)。LCMS：443[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.28(m，2H)，1.47(m，4H)，2.31(m，2H)，2.38(s，3H)，2.40(s，3H)，3.06(s，3H)，3.15(m，2H)，6.83(m，2H)，7.60(t，J＝5.85Hz，1H)，7.69(s，1H)，7.73(m，1H)，9.72(s，1H)，10.86(s，1H)，13.65(s，1H)。
实施例7：N-(2-氨基苯基)-5-((Z)-(5-氟-2-氧代吲哚啉 基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺(化合 物10)的制备方法
在0℃下，向处于搅拌状态下的化合物109(0.2克，0.67毫摩)的二甲基甲酰胺(30毫升)溶液中连续加入1-羟基苯并三唑(HOBt)(0.136克，1.0毫摩)，三乙胺(0.24毫升，1.67毫摩)，盐酸1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI·HCl)(0.192克，1.0毫摩)以及苯基-1，2-二胺(0.2克，2.0毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌72小时，利用水(20毫升)、盐水(20毫升)以及饱和的碳酸氢钠水溶液(20毫升)进行稀释。利用10摩/升(M)的氢氧化钠将所述溶液的pH调整至11-12。过滤所述混合液，用水进行洗涤，干燥，从而获得黄色固体形式的所述产物10(0.13克，50.03％)。LCMS：391[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ4.83(s，2H)，6.58(t，J＝7.2Hz，1H)，6.78(d，1H)，6.84(m，1H)，6.92(t，J＝7.8Hz，2H)，7.25(d，1H)，7.74(m，2H)，9.00(s，1H)，10.90(d，1H)，13.75(s，1H)，1H NMR(DMSO-D2O)δ2.41(s，3H)，2.44(s，3H)，6.62(t，J＝7.4Hz，1H)，6.78(d，1H)，6.89(m，1H)，6.95(m，2H)，7.19(d，1H)，7.67(m，2H)。
实施例8：5-((Z)-(5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基) -N-(2-(4-((E)-3-(羟基氨基)-3-氧代丙-1-烯基)苯氧基) 乙基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺(化合物14)的制备 方法
步骤8a.(E)-3-(4-(2-溴乙氧基)苯基)丙烯酸甲酯(化合物301)
向(E)-3-(4-羟基苯基)丙烯酸甲酯(2.0克，11.24毫摩)的二甲基甲酰胺(2.5毫升)溶液中加入1，2-二溴乙烷(40毫升)以及碳酸钾(4.66克，33.7毫摩)。将所述混合液在90℃下搅拌6小时并且进行过滤。将滤液蒸发，从而获得白色固体形式的产物301(3.05克，95.2％)。LCMS：286[M+1]+。
步骤8b.(E)-3-(4-(2-(1，3-二氧代异吲哚啉基-2-基)乙氧基)苯基)丙烯酸甲酯(化合物302)
将化合物301(1.5克，5.26毫摩)以及邻苯二甲酰亚胺钾(1.07克，5.79毫摩)的二甲基甲酰胺(20毫升)溶液所组成的混合液在100℃下搅拌4小时。将上述反应混合液冷却并且将得到的固体进行过滤。在减压条件下浓缩滤液，从而获得白色固体形式的产物302(1.75克，95.1％)。LCMS：352[M+1]+。
步骤8c.(E)-3-(4-(2-氨基乙氧基)苯基)丙烯酸甲酯(化合物303)
向化合物302(1.85克，5.26毫摩)的乙醇(25毫升)悬浮液中加入水合肼(0.4毫升，7.89毫摩)。将得到的混合液回流10小时并且进行过滤。浓缩滤液，从而获得目标产物303(1.1克，95％)。LCMS：222[M+1]+。
步骤8d.(E)-3-(4-(2-(5-((Z)-(5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺基)乙氧基)苯基)丙烯酸甲酯(化合物304)
在0℃下，向处于搅拌状态下的化合物109(0.5克，1.67毫摩)的二甲基甲酰胺(40毫升)溶液中连续加入1-羟基苯并三唑(HOBt)(0.34克，2.5毫摩)，三乙胺(0.94毫升，6.68毫摩)，盐酸1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI·HCl)(0.48克，2.5毫摩)以及化合物303(0.44克，2.0毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌过夜，蒸发，利用水(50毫升)、盐水(50毫升)以及饱和的碳酸氢钠水溶液(50毫升)进行稀释。利用10摩/升(M)的氢氧化钠将所述溶液的pH调整至11-12。将所述混合液进行过滤，用水进行洗涤，干燥，从而获得黄色固体形式的目标产物304(630毫克，75％)。LCMS：504[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.39(s，3H)，2.41(s，3H)，3.59(m，2H)，3.69(s，3H)，4.15(t，J＝4.5Hz，2H)，6.45(d，1H)，6.94(m，4H)，7.65(m，6H)，10.87(s，1H)，13.66(s，1H)。
步骤8e.5-((Z)-(5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-N-(2-(4-((E)-3-(羟基氨基)-3-氧代丙-1-烯基)苯氧基)乙氧基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺(化合物14)
在0℃下向盐酸羟胺(1.035克，14.9毫摩)的二甲基甲酰胺(15毫升)溶液中逐步加入氢化钠(NaH)(60％，894毫克，22.3毫摩)。半小时之后，向上述混合液中加入化合物304(750毫克，1.49毫摩)的二甲基亚砜(40毫升)溶液。将所述混合液在0℃下搅拌15分钟并且过滤，利用二甲基甲酰胺进行洗涤，在减压条件下浓缩滤液。对所述残余物进行纯化，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物14(25毫克，3.3％)。LCMS：505[M+1]+，1HNMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.38(s，3H)，2.41(s，3H)，3.58(m，2H)，4.13(t，J＝5.4Hz，2H)，6.27(d，1H)，6.98(m，4H)，7.41(d，1H)，7.48(d，2H)，7.69(s，1H)，7.75(m，1H)，7.81(m，1H)，10.87(s，1H)，13.66(s，1H)。
实施例9：(Z)-5-((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基) -N-(7-(羟基-氨基)-7-氧代庚基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3- 甲酰胺(化合物15)的制备方法
步骤9a.(Z)-7-(5-((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺基)庚酸甲酯(化合物110-15)
在室温下，向处于搅拌状态下的化合物109(220.0毫克，0.73毫摩)的二甲基甲酰胺(15毫升)溶液中连续加入1-羟基苯并三唑(HOBt)(148.6毫克，1.1毫摩)，三乙胺(0.21毫升，1.46毫摩)，盐酸1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI·HCl)(210.2毫克，1.1毫摩)以及盐酸7-氨基庚酸甲酯(157.1毫克，0.8毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌24小时并且随后利用水(20毫升)、盐水(20毫升)以及饱和的碳酸氢盐溶液(20毫升)进行稀释。利用10N的氢氧化钠将所述溶液的pH调整至11-12。将所述混合液过滤并且将得到的固体用水进行洗涤，干燥，从而获得黄色固体形式的粗产物110-15(0.3克，93.2％)。LCMS：442[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.31(m，4H)，1.50(m，4H)，2.31(t，J＝7.35Hz，2H)，2.40(s，3H)，2.42(s，3H)，3.19(m，2H)，3.59(s，3H)，6.87(m，2H)，7.71(m，3H)，10.91(s，1H)，13.67(s，1H)。
步骤9b.(Z)-5-((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-N-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺(化合物15)
在冰浴温度下向盐酸羟胺(160毫克，2.3毫摩)的二甲基甲酰胺(3毫升)溶液中加入氢化钠(60％，140毫克，3.5毫摩克)并且搅拌0.5小时。向所述混合液中加入110-15(100.0毫克，0.23毫摩)的二甲基亚砜(5毫升)溶液。将得到的混合液在0℃下搅拌0.5小时并且进行过滤。利用二甲基甲酰胺对得到的固体进行洗涤。在减压条件下浓缩所述混合的滤液，从而得到残余物，利用制备型高效液相色谱(HPLC)对其进行纯化，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物(63毫克，63％)。熔点221℃(分解)LCMS：443[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.29(m，4H)1.48(m，4H)，1.93(t，J＝7.2Hz，2H)，2.38(s，3H)，2.40(s，3H)，3.19(m，2H)，6.87(m，2H)，7.69(m，3H)，10.31(s，1H)，10.87(s，1H)，13.65(s，1H)。
实施例10：(Z)-5-((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基) -N-(8-(羟基氨基)-8-氧代辛基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3- 甲酰胺(化合物16)的制备方法
步骤10a.(Z)-8-(5-((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺基)辛酸甲酯(化合物110-16)
在室温下，向处于搅拌状态下的化合物109(500毫克，1.67毫摩)的二甲基甲酰胺(40毫升)溶液中连续加入1-羟基苯并三唑(HOBt)(337.8毫克，2.5毫摩)，三乙胺(0.94毫升，6.68毫摩)，盐酸1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI·HCl)(477.8毫克，2.5毫摩)以及盐酸8-氨基辛酸甲酯(385.3毫克，1.84毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌24小时并且利用水(20毫升)、盐水(20毫升)以及饱和的碳酸氢钠溶液(20毫升)进行稀释。利用10N的氢氧化钠将所述溶液的pH调整至11-12。将所述混合液过滤并且将得到的固体用水进行洗涤，干燥，从而获得黄色固体形式的粗产物110-16(0.62克，86.1％)。LCMS：456[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.28(m，6H)，1.50(m，4H)，2.28(t，J＝7.35Hz，2H)，2.38(s，3H)，2.40(s，3H)，3.20(m，2H)，3.56(s，3H)，6.84(m，2H)，7.69(m，3H)，10.87(s，1H)，13.65(s，1H)。
步骤10b.(Z)-5-((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-N-(8-(羟基氨基)-8-氧代辛基)-2，4-二甲基-1氢-吡咯基-3-甲酰胺(化合物16)
在冰浴温度下向盐酸羟胺(855毫克，12.3毫摩)的二甲基甲酰胺(15毫升)溶液中加入氢化钠(60％，736毫克，18.4毫摩)并且搅拌0.5小时。向所述混合液中加入110-16(560毫克，1.23毫摩)的二甲基亚砜(25毫升)溶液。将得到的混合液在0℃下搅拌0.5小时并且进行过滤。利用二甲基甲酰胺对得到的固体进行洗涤。在减压条件下浓缩所述混合的滤液，从而得到残余物，利用制备型高效液相色谱(HPLC)对其进行纯化，从而获得黄色固体形式的产物16(40毫克，7％)。熔点213.7℃(分解)。LCMS：457[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.27(m，6H)1.47(m，4H)，1.92(t，J＝6.9Hz，2H)，2.38(s，3H)，2.40(s，3H)，3.18(m，2H)，6.87(m，2H)，7.70(m，3H)，8.66(s，1H)，10.32(s，1H)，10.88(s，1H)，13.66(s，1H)。
实施例11：(Z)-N-(6-(乙酰氧基氨基)-6-氧代己基)-5- ((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡 咯基-3-甲酰胺(化合物17)的制备方法
向化合物4(120毫克，0.28毫摩)的醋酸(15毫升)溶液中加入醋酸酐(1.5毫升)。将所述溶液在室温下搅拌4小时。利用饱和的碳酸氢钠水溶液将所述混合液的pH调整至7-8。通过过滤收集得到的固体。将得到的残余物用水洗涤三次，干燥，从而获得黄色固体形式的目标产物17(100毫克，76％)。LCMS：471[M+1]，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.32(m，2H)，1.53(m，4H)，2.12(m，5H)，2.39(s，3H)，2.41(s，3H)，3.20(m，2H)，6.85(m，2H)，7.581(m，1H)，7.69(m，2H)，10.84(s，1H)，11.52(s，1H)，13.65(s，1H)。
实施例12：(Z)-5-((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基) -N-(6-(异丁酰氧基氨基)-6-氧代己基)-2，4-二甲基-1氢-吡 咯基-3-甲酰胺(化合物18)的制备方法
向化合物4(500毫克，1.17毫摩)的醋酸(70毫升)溶液中加入异丁酸酐(7毫升，42.2毫摩)。将所述溶液在室温下搅拌4小时并且利用饱和的碳酸氢钠水溶液将所述混合液的pH调整至7-8。通过过滤收集得到的固体，用水洗涤三次，干燥并且利用制备型高效液相色谱(HPLC)进行纯化，从而获得黄色固体形式的目标产物18(35毫克，6％)。LCMS：499[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.12(s，3H)，1.14(s，3H)，1.34(m，2H)，1.55(m，4H)，2.11(t，J＝6.9Hz，2H)，2.39(s，3H)，2.41(s，3H)，2.69(m，1H)，3.18(m，2H)，6.83(m，2H)，7.63(m，3H)，10.88(s，1H)，11.54(s，1H)，13.66(s，1H)。
实施例13：(Z)-N-(6-(苯甲酰氧基氨基)-6-氧代己基) -5-((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢- 吡咯基-3-甲酰胺(化合物19)的制备方法
向化合物4(200毫克，0.47毫摩)的醋酸(40毫升)溶液中加入苯甲酸酐(200毫克，0.88毫摩)。将所述溶液在室温下搅拌4小时并且利用饱和的碳酸氢钠水溶液将所述混合液的pH调整至7-8。通过过滤收集得到的固体，用水洗涤三次，干燥并且利用制备型高效液相色谱(HPLC)进行纯化，从而获得黄色固体形式的产物19(40毫克，16％)。LCMS：533[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.35(m，2H)，1.53(m，4H)，2.12(t，J＝7.05Hz，2H)，2.40(s，3H)，2.41(s，3H)，3.20(m，2H)，6.85(m，2H)，7.57(m，1H)，7.70(m，3H)，7.99(s，1H)，8.01(s，1H)，10.88(s，1H)，11.88(s，1H)，13.66(s，1H)。
实施例14：(Z)-5-((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基) -2，4-二甲基-N-(6-氧代-6-(丙酰氧基氨基)己基)-1氢-吡咯 基-3-甲酰胺(化合物20)的制备方法
向化合物4(500毫克，1.17毫摩)的醋酸(70毫升)溶液中加入丙酸酐(7毫升，54.4毫摩)。将所述溶液在室温下搅拌4小时并且利用饱和的碳酸氢钠将所述混合液的pH调整至7-8。将所述混合液进行过滤，用水洗涤三次，干燥并且利用制备型高效液相色谱(HPLC)进行纯化，从而获得黄色固体形式的产物20(180毫克，32％)。LCMS：485[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.06(t，J＝7.8Hz，3H)，1.31(m，2H)，1.52(m，4H)，2.11(t，J＝7.35Hz，2H)，2.38(s，3H)，2.40(s，3H)，2.44(m，2H)，3.17(m，2H)，6.82(m，2H)，7.66(m，3H)，10.84(s，1H)，11.51(s，1H)，13.64(s，1H)。
实施例15：(Z)-N-(6-(环己基羰氧基氨基)-6-氧代己基) -5-((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢- 吡咯基-3-甲酰胺(化合物21)的制备方法
向化合物4(500毫克，1.17毫摩)的四氢呋喃(120毫升)以及二甲基甲酰胺(5毫升)溶液中加入环己基羧酸酐(5毫升)以及环己基羧酸(150毫克，1.17毫摩)。将所述溶液在室温下搅拌4小时。在真空条件下除去四氢呋喃，并且随后加入水(100毫升)。利用饱和的碳酸氢钠水溶液将所述混合液的pH调整至7-8。通过过滤收集得到的固体，用水洗涤三次，干燥并且利用制备型高效液相色谱(HPLC)进行纯化，从而获得黄色固体形式的产物21(100毫克，13％)。LCMS：539[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.32(m，7H)，1.53(m，5H)，1.66(m，2H)，1.85(m，2H)，2.11(t，J＝6.45Hz，2H)，2.39(s，3H)，2.41(s，3H)，3.20(m，2H)，6.85(m，2H)，7.71(m，3H)，10.89(s，1H)，11.54(s，1H)，13.67(s，1H)。
实施例16：(Z)-N-(7-(乙酰氧基氨基)-7-氧代庚基)-5- ((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡 咯基-3-甲酰胺(化合物28)的制备方法
向化合物15(140毫克，0.32毫摩)的20毫升醋酸溶液中加入醋酸酐(2毫升)。将所述溶液在室温下搅拌4小时。通过缓慢的加入饱和的碳酸氢钠使其pH调整至7-8。通过过滤收集得到的固体，用水洗涤三次，干燥，从而得到粗产物，利用制备型高效液相色谱(HPLC)对所述粗产物进行纯化，从而获得产物28(95毫克，62％)。LCMS：485[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.30(m，4H)，1.51(m，4H)，2.07(m，5H)，2.38(s，3H)，2.40(s，3H)，3.19(m，2H)，6.84(m，2H)，7.62(t，J＝6.0Hz，1H)，7.69(s，1H)，7.75(m，1H)，10.87(s，1H)，11.54(s，1H)，13.65(s，1H)。
实施例17：(Z)-N-(8-(乙酰氧基氨基)-8-氧代辛基)-5- ((5-氟-2-氧代吲哚啉基-3-亚甲基)甲基)-2，4-二甲基-1氢-吡 咯基-3-乙基甲酰胺(化合物29)的制备方法
向化合物16(228毫克，0.5毫摩)的30毫升醋酸溶液中加入醋酸酐(3毫升)。将所述溶液在室温下搅拌4小时。通过缓慢的加入饱和的碳酸氢钠使其pH调整至7-8。通过过滤收集得到的固体，用水洗涤三次，干燥，从而得到粗产物，利用制备型高效液相色谱(HPLC)对所述粗产物进行纯化，从而获得产物29(50毫克，20％)。LCMS：499[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.29(m，6H)，1.49(m，4H)，2.07(t，2H)，2.12(s，3H)，2.38(s，3H)，2.40(s，3H)，3.20(m，2H)，6.85(m，2H)，7.63(t，J＝5.6Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.76(m，1H)，10.88(s，1H)，11.53(s，1H)，13.65(s，1H)。
生物学检测：
如前文中所指明的，本发明中定义的所述衍生物具有抗增殖的活性。这些特性可以通过例如下文中列出的一种或者一种以上方法进行评价：
(a)测定受试化合物抑制受体酪氨酸激酶的能力的体外检 测。
利用HTScanTM受体激酶检测试剂盒(Cell SignalingTechnologies，Danvers，MA)对化合物抑制受体激酶(血管内皮生长因子受体2以及血小板衍生生长因子受体-β)活性的能力进行检测。血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)酪氨酸激酶是通过杆状病毒表达系统制备得到的，其来自于一个含有人类血管内皮生长因子受体2cDNA激酶结构域(Asp805-Val1356)(GenBank accession No.AF035121)片段氨基末端融合有GST-HIS6-Thrombin切割位点的构建体。血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)酪氨酸激酶是通过杆状病毒表达系统制备得到的，其来自于一个含有人类血小板衍生生长因子受体-βcDNA(GenBank Accession No.NM_002609)片段(Arg561-Leu1106)氨基末端融合有GST-HIS6-Thrombin切割位点的构建体。所述蛋白是通过利用谷胱甘肽-琼脂糖的一步亲合色谱法进行纯化的。一种抗磷酸化酪氨酸单克隆抗体P-Tyr-100被用来检测生物素(酰)化的底物肽(血管内皮生长因子受体2，生物素-胃泌激素前体(Tyr87)；血小板衍生生长因子受体-β，生物素化-FLT3(Tyr589))的磷酸化作用。酶活性是在下述试剂中检测的：60毫摩羟乙基呱嗪乙硫磺酸(HEPES)，5毫摩氯化镁，5毫摩氯化锰，200微摩三磷酸腺苷(ATP)，1.25毫摩二硫苏糖醇(DTT)，3微摩正矾酸钠(Na3VO4)，1.5毫摩肽，以及50纳克表皮生长因子受体激酶。结合抗体的检测是利用DELFIA系统(PerkinElmer，Wellesley，MA)，所述系统由DELFIA
Figure G2007800418082D02771
铕标记的抗小鼠IgG(免疫球蛋白)(PerkinElmer，#AD0124)、DELFIA
Figure G2007800418082D02772
强化溶液(PerkinElmer，#1244-105)、以及DELFIA
Figure G2007800418082D02773
链亲合素涂层的96孔培养板(PerkinElmer，AAAND-0005)构成。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。
将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以得到20毫摩的工作储备浓缩液。每项检测都是通过如下步骤建立的：向1.25毫升、6毫摩的底物肽中加入100微升10毫摩的三磷酸腺苷(ATP)。利用蒸馏水将所述混合液稀释至2.5毫升，从而制备出二倍的(2X)三磷酸腺苷/底物混合液([三磷酸腺苷]＝400毫摩，[底物]＝3毫摩)。将酶从-80℃下迅速转移至冰上。使酶在冰上解冻。在4℃下进行短暂的微离心，从而将液体带入所述试管的底部。立即重新置于冰上。向2.5毫升四倍的(4X)HTScanTM酪氨酸激酶缓冲液(240毫摩pH7.5的羟乙基呱嗪乙硫磺酸，20毫摩氯化镁，20毫摩氯化锰，12毫摩偏矾酸钠)中加入10微升二硫苏糖醇(1.25毫摩)，从而获得二硫苏糖醇/激酶缓冲液。将1.25毫升的二硫苏糖醇/激酶缓冲液转移至酶试管中，从而获得四倍的(4X)反应混合液(在四倍的反应混合液中[酶]＝4纳克/微升)。在室温下以12.5微升/孔的量利用预先稀释的目标化合物(通常在10微摩左右)对12.5微升四倍的(4X)反应混合液培养5分钟。以25微升/孔的量向预先培养的反应混合液/化合物中加入25微升的二倍(2X)三磷酸腺苷/底物混合液。将反应板在室温下培养30分钟。以50微升/孔的量加入终止缓冲液(50毫摩乙二胺四乙酸，pH8)以终止所述反应。将25微升的每种反应液以及75微升/孔的蒸馏水转移至链亲合素涂层的96孔培养板中并且在室温下培养60分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温(磷酸缓冲液，0.05％的吐温-20)洗涤三次。在磷酸缓冲液/吐温(PBS/T)中，以1∶1000的比例利用1％的牛血清白蛋白(BSA)稀释初级抗体磷酸-酪氨酸单克隆抗体(P-Tyr-100)。以100微升/孔的量加入初级抗体。在室温下培养60分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温洗涤三次。在磷酸缓冲液/吐温(PBS/T)中，以1∶500的比例利用1％的牛血清白蛋白(BSA)稀释铕标记的抗小鼠免疫球蛋白(IgG)。以100微升/孔的量加入稀释的抗体。在室温下培养30分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温洗涤五次。以100微升/孔的量加入DELFIA强化溶液。在室温下培养5分钟。利用适当的时间分辨培养板读数器(Time-Resolved Plate Reader)检测615纳米处发射出的荧光。
(b)测定受试化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)酶活 性的能力的体外检测。
利用组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)荧光计检测试剂盒(AK-500，Biomol，Plymouth Meeting，PA)对组蛋白脱乙酰基酶进行筛选。将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以形成20毫摩的工作储备浓缩液。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。每项检测都是通过如下步骤建立的：解冻所有的试剂盒成分并且将其保存于冰上直至使用。在检测缓冲液(50毫摩Tris/Cl，pH8.0，137毫摩氯化钠，2.7毫摩氯化钾，1毫摩氯化镁)中以1∶29的比例稀释HeLa核提取物。在检测缓冲液中制备曲古抑菌素A(TSA，阳性对照)以及受试化合物的稀释液(五倍于最终浓度)。在检测缓冲液中将Fluor de LysTM底物稀释至100微摩(50倍＝2倍的最终浓度)。在冷的检测缓冲液中将Fluor de LysTM显影剂浓缩物稀释20倍(例如，50微升的显影剂浓缩物加入950微升的检测缓冲液)。其次，在一倍的显影剂(Developer)中将0.2毫摩的曲古抑菌素A稀释100倍(例如，1毫升中的10微升；在一倍显影剂中的最终曲古抑菌素A的浓度＝2微摩；加入组蛋白脱乙酰基酶/底物反应液后的最终浓度＝1微摩)。加入检测缓冲液，在所述微量滴定板的适当孔中稀释曲古抑菌素A或者受试抑制剂。在除去阴性对照之外的其他所有孔中加入稀释的HeLa提取物或者其他组蛋白脱乙酰基酶样本。允许被稀释的Fluor deLysTM底物以及所述微量滴定板中的所述样本平衡至检测温度(例如，25℃或者37℃)。通过向每个孔中加入稀释的底物(25微升)并且充分混合来激发组蛋白脱乙酰基酶反应。允许组蛋白脱乙酰基酶反应进行1小时，之后通过加入Fluor de LysTM显影剂(50微升)终止反应。在室温下(25℃)对培养板培养10-15分钟。通过能够在350-380纳米范围内的波长下被激发的微量滴定板读数荧光计对样本进行读数，并且检测440-460纳米范围内的发射光。
下述表2-B列出了本发明代表性的化合物以及它们在组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)检测、血管内皮表皮生长因子受体2(VEGFR2)检测以及血小板衍生生长因子受体(PDGFR)检测中的活性。在这些检测中，使用到下述分级：对于IC50而言，I≥10微摩，10微摩＞II＞1微摩，1微摩＞III＞0.1微摩，以及IV≤0.1微摩。
表2-B
  化合物编号   HDAC   VEGFR2   PDGFR
  2   III   IV   III
  3   II   IV   IV
  4   III   IV   IV
  8   III
  9   I   IV
  14   III   IV
  15   IV   IV   III
  16   IV   IV   III
Figure G2007800418082D02801
第三部分：
表3-A
Figure G2007800418082D02811
Figure G2007800418082D02831
Figure G2007800418082D02841
Figure G2007800418082D02851
方案1
Figure G2007800418082D02861
方案2
Figure G2007800418082D02871
方案3
Figure G2007800418082D02881
方案4
Figure G2007800418082D02891
实施例1：N-羟基-4-(2-(4-氨基苯甲酰胺基)-乙基氨基甲 酰基)丁酰胺(化合物29)的制备方法
步骤1a.N1-三苯甲基乙基-1，2-二胺(化合物302)
在2小时的时间内，向乙二胺(30克，0.5摩)以及三乙胺(50克，0.5摩)的二氯甲烷(300毫升)溶液所组成的混合液中逐滴加入三苯基氯甲烷(28.0克，0.1摩)的二氯甲烷(200毫升)溶液。随后将所述混合液在室温下搅拌过夜。将所述反应混合液用水(200毫升x4)进行洗涤，通过硫酸钠进行干燥，浓缩，从而获得所述化合物302(25克，83.3％)。1H NMR(氘代氯仿)δ7.14-7.49(m，15H)，3.78(br，2H)，2.87(d，2H)，2.35(d，2H).LC-MS：m/z 303(M+1)。
步骤1b.4-硝基-N-(2-(三苯甲基氨基)乙基)苯甲酰胺(化合物303)
向含有三乙胺(505毫克，5毫摩)的302(1.4克，4.6毫摩)的二氯甲烷(100毫升)溶液中逐滴加入4-硝基苯甲酰氯801(872毫克，4.7毫摩)的二氯甲烷(20毫升)溶液。将所述混合液搅拌2小时并且利用二氯甲烷(200毫升)进行稀释，用水进行洗涤，干燥并且浓缩，从而获得固体形式的所述化合物303(1.8克，87％产率)。上述产物在下一步骤中可以直接使用。1H NMR(氘代氯仿)
Figure G2007800418082D02901
8.31(d，2H)，7.93(d，2H)，7.19-7.46(m，15H)，3.55-3.57(m，2H)，2.44-2.46(m，2H).LC-MS：m/z 452(M+1)。
步骤1c.N-(2-氨基乙基)-4-硝基苯甲酰胺(化合物304)
在室温下向处于搅拌状态下的化合物303(18.0克，0.04摩)的二氯甲烷(200毫升)溶液中逐滴加入三氟乙酸(8.0毫摩)。搅拌0.5小时之后，出现大量的沉淀。将所述溶液过滤并且利用二氯甲烷(100毫升x2)对得到的固体进行洗涤，从而获得白色固体形式的所述产物304(12.0克，93.7％产率)。1H NMR(重水)
Figure G2007800418082D02902
8.20(d，2H)，7.84(d，2H)，3.60(t，2H)，3.15(t，2H).LC-MS：m/z210(M+1)。
步骤1d.4-(2-(4-硝基苯甲酰胺基)乙基氨基甲酰基)丁酸甲酯(化合物307-29)
向含有三乙胺(4毫升)的304(1.92克，6毫摩)的二氯甲烷(30毫升)溶液中加入4-(甲基过氧基)戊-4-烯酰氯的二氯甲烷(5毫升)溶液。随后将所述混合液在室温下搅拌1小时并且利用200毫升的乙酸乙酯进行稀释。将得到的混合液用水(50毫升x3)进行洗涤，干燥，并且浓缩，从而获得白色固体形式的所述产物307-29。1H NMR(d6-二甲基亚砜)δ8.78-8.82(m，1H)，8.29(d，2H)，8.04(d，2H)，7.94-7.96(m，1H)，3.55(s，3H)，2.26(t，2H)，2.08(t，2H)，1.66-1.72(m，2H)。1H NMR(CD3OD).~.1(d，2H)，8.01(d，2H)，3.62(s，3H)，3.49-3.51(m，2H)，3.40-3.43(m，2H)，2.32(t，2H)，2.23(t，2H)，1.84-1.89(m，2H).LC-MS：m/z 338(M+1)。
步骤1e.4-(2-(4-氨基苯甲酰胺基)乙基氨基甲酰基)丁酸甲酯(化合物308-29)
制备含有化合物307-29(674毫克，2毫摩)、铁粉(1.12克，20毫摩)、乙醇(15毫升)以及水(0.5毫升)的混合液。在室温下向所述混合液中加入0.5毫升浓盐酸。随后将得到的混合液加热至回流。对所述反应混合液进行搅拌直至通过薄层层析法(TLC)监测到上述起始原料消失。将所述反应混合液冷却至室温并且进行过滤。浓缩滤液，从而得到残余物，利用柱层析法在硅胶柱上(乙酸乙酯)对所述残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述产物308-29(240毫克，39％产率)。1H NMR(d6-二甲基亚砜)δ7.97-8.01(m，1H)，7.89-7.92(m，1H)，7.53(d，2H)，6.51(d，2H)，6.57(s，2H)，3.57(s，1H)，3.15-3.24(m，4H)，2.29(t，2H)，2.09(t，2H)，1.70-1.75(m，2H).LC-MS：m/z 308(M+1)。
步骤1f.N-羟基-4-(2-(4-氨基苯甲酰胺基)乙基氨基甲酰基)丁酰胺(化合物29)
制备羟胺的甲醇溶液：将盐酸羟胺(4.67克，67毫摩)溶解于甲醇(24毫升)中以制成溶液A。将氢氧化钾(5.61克，100毫摩)溶解于甲醇(14毫升)中以制成溶液B。将所述溶液A冷却至0℃，并且将溶液B逐滴加入到溶液A中。将所述混合液在0℃下搅拌30分钟，并且在低温下长时间放置。分离得到的沉淀，从而获得羟胺的甲醇溶液。
向装有化合物308-29(40毫克，0.13毫摩)的长颈瓶中加入上述羟胺的甲醇溶液(0.5毫升)。将所述混合液搅拌5分钟。随后利用浓盐酸将其pH调整至8。在经过制备型薄层层析(TLC)分离后(二氯甲烷∶甲醇＝4∶1)，获得所述目标产物29(40毫克，99％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ10.16(s，1H)，8.64(s，1H)，8.02(m，1H)，7.90(m，1H)，7.52(d，2H)，6.51(d，2H)，5.56(s，2H)，3.12-3.23(m，4H)，2.03(t，2H)，3.14(t，2H)，1.65-1.70(m，2H).LC-MS：m/z 309(M+1).熔点：158.9-159.8℃。
实施例2：4-氨基-N-(2-(乙基(3-(羟基氨基)-3-氧代丙 基)氨基)乙基)苯甲酰胺(化合物31)的制备方法
步骤2a.3-(乙基(2-(4-硝基苯甲酰胺基)乙基)氨基)丙酸甲酯(化合物403-31)
向N-(2-(乙基氨基)乙基)-4-硝基苯甲酰胺(402)(1.19克，5毫摩)的二甲基甲酰胺(10毫升)溶液中加入碳酸钾(1.38克，10毫摩)，随后向所述混合液中加入3-溴丙酸甲酯(994毫克，6毫摩)。将所述混合液在40℃下搅拌5小时，并且之后通过过滤除去所述固体。在减压条件下除去溶剂。利用柱层析法对得到的残余物进行纯化，从而获得1380毫克纯净产物403-31(83％产率)。1H NMR(氘代氯仿)δ8.292(t，1H)，8.262(t，1H)，8.081(t，1H)，8.051(t，1H)，3.635(s，3H)，3.56(m，2H)，2.786(t，2H)，2.666(t，2H)，2.539(m，4H)，0.978(t，3H)；LC-MS：323(M+1)。
步骤2b.3-((2-(4-(氨基苯甲酰胺基)乙基)(乙基)氨基)丙酸甲酯(化合物404-31)
向装有化合物403-31(200毫克，0.62毫摩)、铁粉(364毫克，6.5毫摩)、甲醇(10毫升)以及水(0.5毫升)的长颈瓶中加入1滴浓盐酸。将得到的混合液回流3小时，并且随后将其冷却至室温并过滤。浓缩滤液并且通过柱层析法在硅胶柱上(乙酸乙酯)对所述残余物进行纯化，从而获得粘稠液体形式的404-31(141毫克，77.5％产率)。1H NMR(氘代氯仿)δ7.698(m，2H)，6.670(m，2H)，3.629(s，3H)，3.524(t，2H)，2.693(m，8H)，1.235(t，3H)；LC-MS：295(M+1)。
步骤2c.4-氨基-N-(2-(乙基(3-(羟基氨基)-3-氧代丙基)氨基)乙基)苯甲酰胺(化合物31)
向装有化合物404-31(118毫克，0.4027毫摩)的长颈瓶中加入新鲜的羟胺(2.42毫摩)的甲醇(1.34毫升)溶液。将所述混合液搅拌5分钟并且随后利用浓盐酸将其pH调整至8，其中所述的浓盐酸用甲醇进行了稀释。利用柱层析法对得到的粗产物进行纯化，从而获得76毫克的化合物31(64.5％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ10.484(s，1H)，8.765(s，1H)，7.983(s，1H)，7.567(m，2H)，6.539(d，2H)，5.597(s，2H)，2.866(s，2H)，2.694(s，4H)，2.209(t，2H)，1.012(t，3H)；LC-MS：293(M+1)。
实施例3：4-氨基-N-(2-(乙基(4-(羟基氨基)-4-氧代丁 基)氨基)乙基)苯甲酰胺(化合物32)的制备方法
步骤3a.4-(乙基(2-(4-硝基苯甲酰胺基)乙基)氨基)丙酸乙酯(化合物403-32)
所述标题化合物403-32是由402通过与化合物403-31的制备方法(实施例2)中所描述的类似方法制备得到的，其产率为51.8％。1H NMR(氘代氯仿)δ8.28(d，2H)，8.04(d，2H)，4.08(m，2H)，3.52(m，2H)，，2.66(t，2H)，2.52(m，4H)，1.81(m，2H)，1.22(t，3H)，1.00(t，3H)；LC-MS：352(M+1)。
步骤3b.4-((2-(4-氨基苯甲酰胺基)乙基)(乙基)氨基)丙酸乙酯(化合物404-32)
所述标题化合物404-32是由403-32通过与化合物404-31的制备方法(实施例2)中所描述的类似方法制备得到的，其产率为52.5％。1H NMR(氘代氯仿)δ7.658(d，2H)，6.656(d，2H)，4.109(m，2H)，3469(m，2H)，，2.545(t，6H)，2.326(t，2H)，1.816(m，2H)，1.200(t，3H)，1.001(t，3H)；LC-MS：322(M+1)。
步骤3c.4-氨基-N-(2-(乙基(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)氨基)乙基)苯甲酰胺(化合物32)
所述标题化合物32是由404-32通过与化合物31的制备方法(实施例2)中所描述的类似方法制备得到的，其产率为63.3％。1H NMR(甲醇-d6)δ7.61(d，2H)，6.67(d，2H)，3.53(t，3H)，2.85(m，6H)，2.18(t，2H)，1.89(m，2H)，，1.16(t，3H)；LC-MS：309(M+1)。
实施例4：N-羟基-5-(乙基(2-(4-氨基苯甲酰胺基)-乙基) 氨基)-5-氧代戊酰胺(化合物35)的制备方法
步骤4a.N-(2-(乙基氨基)乙基)-4-硝基苯甲酰胺(化合物402)
在0℃下，向N-乙基乙二胺(13.2克，160毫摩)以及三乙胺(32克，320毫摩)的二乙醚(200毫升)溶液所组成的混合液中逐滴加入4-硝基苯甲酰氯901(15克，81.1毫摩)的二乙醚(800毫升)溶液。随后将所述混合液在这一温度下搅拌15分钟。将所述反应混合液过滤并且将滤饼悬浮于水(400毫升)中，向其中加入10％的盐酸将pH调整至3。利用乙酸乙酯(80毫升x3)对得到的酸性混合液进行提取，随后向所述水相中加入15％的氢氧化钠从而将pH调整至8。利用乙酸乙酯(80毫升x3)对这种碱性溶液进行提取和洗涤，将得到的混合有机层通过无水硫酸钠进行干燥，浓缩，从而获得白色固体形式的所述化合物402(7.5克，39％)。1H NMR(氘代氯仿)δ8.28(d，2H)，7.95(d，2H)，6.96(br，1H)，3.53(t，2H)，2.89(t，2H)，2.69(q，2H)，1.13(t，2H).LC-MS：238(M+1)。
步骤4b.5-(乙基(2-(4-硝基苯甲酰胺基)乙基)氨基)-5-氧代戊酸甲酯(化合物405-35)
向5-甲氧基-5-氧代戊酸(0.9克，6毫摩)的二氯甲烷(15毫升)中逐滴加入乙二酰二氯(0.93克，7.2毫摩)，并且随后向所述混合液中加入一滴二甲基甲酰胺作为催化剂。将所述混合液在室温下搅拌1.5小时并且随后在减压条件下浓缩，直至过量的乙二酰二氯被完全除去。在室温下将得到的所述5-氯-5-氧代戊酸甲酯的二氯甲烷(5毫升)溶液逐滴加入到化合物402(0.72克，3毫摩)以及三乙胺(0.61克，6毫摩)的二氯甲烷(10毫升)溶液中。将所述混合液在室温下搅拌过夜，用水进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，并且浓缩。通过快速柱层析法(50％乙酸乙酯/石油)对所述粗产物进行分离，从而得到0.74克白色固体形式的405-35。1H NMR(氘代氯仿)δ8.28(d，2H)，8.01(d，2H)，3.65(m，7H)，3.39(q，2H)，2.43(t，2H)，2.38(t，2H)，1.95(m，2H)，1.23(t，3H)；LC-MS：366(M+1)。
步骤4c.5-(乙基(2-(4-氨基苯甲酰胺基)乙基)氨基)-5-氧代戊酸甲酯(化合物406-35)
向装有化合物405-35(0.74克，2毫摩)、铁粉(1.12克，20毫摩)、甲醇(15毫升)以及水(0.5毫升)的长颈瓶中加入4滴浓盐酸。将得到的混合液回流3小时，并且随后将其冷却至室温并且进行过滤。浓缩滤液并且通过柱层析法在硅胶柱(乙酸乙酯)上对得到的残余物进行纯化，从而获得粘稠液体形式的406-35(0.56克，83％产率)。1H NMR(甲醇-d4)δ7.99(d，1H)，7.90(d，1H)，3.74(s，3H)，3.67(d，4H)，3.62(q，2H)，2.45(m，2H)，2.21(m，2H)，1.91(m，2H)，1.19(m，3H)；LC-MS：336(M+1)。
步骤4d.N-羟基-5-(乙基(2-(4-氨基苯甲酰胺基)乙基)氨基)-5-氧代戊酰胺(化合物35)
向装有化合物406-35(121毫克，0.36毫摩)的长颈瓶中加入新鲜的羟胺(2.16毫摩)的甲醇(1.2毫升)溶液。将所述混合液搅拌5分钟并且随后利用浓盐酸将其pH调整至8，其中所述的浓盐酸用甲醇进行了稀释。利用高效液相色谱法(HPLC)对得到的粗产物进行纯化，从而获得40毫克的化合物35。1HNMR(二甲基亚砜-d6)δ10.23(s，1H)，8.62(s，1H)，8.07-8.19(m，1H)，7.52(m，2H)，5.59(d，2H)，3.21-3.51(m，6H)，2.27(m，2H)，1.95(m，2H)，1.70(m，2H)，0.99-1.08(m，3H)；LC-MS：337(M+1)。
实施例5：N 1 -(2-(4-氨基苯甲酰胺基)乙基)-N 1 -乙基-N 4 - 羟基琥珀酰胺(化合物34)的合成方法
步骤5a.4-(乙基(2-(4-硝基苯甲酰胺基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(化合物405-34)
制备出的所述标题化合物405-34是灰黄色固体形式，是由902以及4-(甲基过氧基)-4-氧代丁酸通过与化合物405-35的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的，其具有77％的产率。1H NMR(氘代氯仿)δ8.26(d，2H)，7.97(d，2H)，3.64(s，3H)，3.65(m，4H)，3.48(q，2H)，2.68(s，4H)，1.25(t，3H)；LC-MS：352(M+1)。
步骤5b.4-((2-(4-氨基苯甲酰胺基)乙基)(乙基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(化合物406-34)
制备出的所述标题化合物406-34是白色粘稠液体的形式，是由405-34通过与化合物406-35的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的。1H NMR(甲醇-d4)δ7.58(d，2H)，6.55(d，2H)，3.69(s，3H)，3.58(m，4H)，3.46(q，2H)，2.70(t，4H)，1.19(m，3H)；LC-MS：322(M+1)。
步骤5c.N1-(2-(4-氨基苯甲酰胺基)乙基)-N1-乙基-N4-羟基琥珀酰胺(化合物34)
制备出的所述标题化合物34是白色粉末形式，是由406-34通过与化合物35的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ10.34(d，1H)，8.65(d，1H)，8.05(m，1H)，7.53(m，2H)，6.59(m，2H)，5.58(d，2H)，3.21-3.48(m，6H)，2.49(m，2H)，2.20(m，2H)，0.97-1.13(m，3H)；LC-MS：323(M+1)。
实施例6：N 1 -(2-(4-氨基苯甲酰胺基)乙基)-N 1 -乙基-N 6 - 羟基乙二酰二胺(化合物36)的制备方法
步骤6a.6-(乙基(2-(4-硝基苯甲酰胺基)乙基)氨基)-6-氧代己酸甲酯(化合物405-36)
制备出的所述标题化合物405-36是白色晶体形式，是由902通过与化合物405-35的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的，其具有81％的产率。1H NMR(氘代氯仿)δ8.26(d，2H)，7.98(d，2H)，3.65(s，3H)，3.64(m，4H)，3.47(q，2H)，2.35(m，4H)，1.66(m，4H)，1.24(t，3H)；LC-MS：380(M+1)。
步骤6b.6-((2-(4-氨基苯甲酰胺基)乙基)(乙基)氨基)-6-氧代己酸甲酯(化合物406-36)
制备出的所述标题化合物406-36是白色粘稠液体的形式，是由405-36通过与化合物406-35的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的。1H NMR(甲醇-d4)δ7.67(d，2H)，6.58(d，2H)，3.63(s，3H)，3.61(m，4H)，3.46(q，2H)，2.35(m，2H)，2.12(m，2H)，1.69(m，4H)，1.20(t，3H)；LC-MS：350(M+1)。
步骤6c.N1-(2-(4-氨基苯甲酰胺基)乙基)-N1-乙基-N6-羟基乙二酰二胺(化合物36)
制备出的所述标题化合物36是白色粉末形式，是由406-36通过与化合物35的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ8.20(m，1H)，7.55(m，2H)，6.53(m，2H)，5.58(d，2H)，3.25-3.48(m，6H)，2.26(m，2H)，1.88(m，2H)，1.45(m，2H)，0.98-1.11(m，3H)；LC-MS：351(M+1)。
实施例7：N-羟基-3-((2-(4-氨基苯甲酰胺基)-乙基)(乙 基)氨基)-3-氧代丙酰胺(化合物37)的制备方法
步骤7a.3-(乙基(2-(4-硝基苯甲酰胺基)乙基)氨基)-3-氧代丙酸甲酯(化合物405-37)
制备出的所述标题化合物405-37是黄色固体形式，是由902以及3-甲氧基-3-氧代丙酸通过与化合物405-35的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的，其具有80％的产率。1H NMR(氘代氯仿)δ8.27(d，2H)，8.00(d，2H)，4.15(s，3H)，3.69(s，4H)，3.51(s，2H)，3.45(q，2H)，1.23(t，3H)；LC-MS：338(M+1)。
步骤7b.3-((2-(4-氨基苯甲酰胺基)乙基)(乙基)氨基)-3-氧代丙酸甲酯(化合物406-37)
制备出的所述标题化合物406-37是白色粘稠液体形式，是由905-37通过与化合物406-35的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的。1H NMR(甲醇-d4)δ7.57(d，2H)，6.52(d，2H)，3.89(s，3H)，3.72(d，4H)，3.54(s，2H)，1.20(m，3H)；LC-MS：308(M+1)。
步骤7c.N-羟基-3-((2-(4-氨基苯甲酰胺基)乙基(乙基)氨基)-3-氧代丙酰胺(化合物37)
制备出的所述标题化合物37是白色粉末形式，是由406-37通过与化合物35的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ10.51(s，1H)，8.89(s，1H)，8.11(m，1H)，7.53(d，2H)，6.52(m，2H)，5.59(d，2H)，3.27-3.51(m，6H)，3.14(d，2H)，0.99-1.14(m，3H)；LC-MS：309(M+1)。
生物学检测：
如前文中所指明的，本发明中定义的所述衍生物具有抗增殖的活性。这些特性可以通过例如下文中列出的一种或者一种以上方法进行评价：
(a)测定受试化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)酶活 性的能力的体外检测。
利用组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)荧光计检测试剂盒(AK-500，Biomol，Plymouth Meeting，PA)对组蛋白脱乙酰基酶进行筛选。将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以形成20毫摩的工作储备浓缩液。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。
每项检测都是通过如下步骤建立的：解冻所有的试剂盒成分并且将其保存于冰上直至使用。在检测缓冲液(50毫摩Tris/C1，pH8.0，137毫摩氯化钠，2.7毫摩氯化钾，1毫摩氯化镁)中以1∶29的比例稀释HeLa核提取物。在检测缓冲液中制备曲古抑菌素A(TSA，阳性对照)以及受试化合物的稀释液(五倍于最终浓度)。在检测缓冲液中将Fluor de LysTM底物稀释至100微摩(50倍＝2倍的最终浓度)。在冷的检测缓冲液中将Fluor de LysTM显影剂浓缩物稀释20倍(例如，50微升的显影剂浓缩物加入950微升的检测缓冲液)。其次，在一倍的显影剂(Developer)中将0.2毫摩的曲古抑菌素A稀释100倍(例如，1毫升中的10微升；在一倍显影剂中的最终曲古抑菌素A的浓度＝2微摩；加入组蛋白脱乙酰基酶/底物反应液后的最终浓度＝1微摩)。加入检测缓冲液，在所述微量滴定板的适当孔中稀释曲古抑菌素A或者受试抑制剂。在除去阴性对照之外的其他所有孔中加入稀释的HeLa提取物或者其他组蛋白脱乙酰基酶样本。允许被稀释的Fluor deLysTM底物以及所述微量滴定板中的所述样本平衡至检测温度(例如，25℃或者37℃)。通过向每个孔中加入稀释的底物(25微升)并且充分混合来激发组蛋白脱乙酰基酶反应。允许组蛋白脱乙酰基酶反应进行1小时，之后通过加入Fluor de LysTM显影剂(50微升)终止反应。在室温下(25℃)对培养板培养10-15分钟。通过能够在350-380纳米范围内的波长下被激发的微量滴定板读数荧光计对样本进行读数，并且检测440-460纳米范围内的发射光。
(b)测定受试化合物抑制DNA甲基转移酶(DNMT)活性 的能力的体外检测。
利用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)对DNA甲基转移酶(DNMT)进行筛选。将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以获得20毫摩的工作储备浓缩液。将HT-29直肠腺癌细胞培养于6孔培养板中并且利用受试化合物或者2.5微摩的2’-去氧-5-氮胞苷处理72小时，每天更换培养基。经过72小时之后，利用非器官DNA提取试剂盒(S4520，ChemiconInternational，Temecula，CA)从细胞中收集DNA。利用CpCenomeDNA修饰试剂盒(S7820，Chemicon International，Temecula，CA)完成亚硫酸氢根的化学修饰。在一个带有螺旋塞的1.5-2.0毫升微离心管中，向存在于100微升水中的1.0微克DNA(10纳克/微升)中加入7.0微升3M的氢氧化钠并且进行混合。将所述DNA在50℃下培养10分钟。向其中加入550微升新鲜制备的DNA修饰试剂I并且进行旋转。在微量恒温仪(heat block)或者避光水浴中将所述混合液在50℃下培养4-16小时。通过剧烈转动使得DNA重新悬浮于DNA修饰试剂III中。将所述悬浮液吸入1毫升的塑料吸液管中并且十倍量分散于任意其他的clumps中。将5微升充分悬浮的DNA修饰试剂III加入到所述试管的DNA溶液中。加入750微升DNA修饰试剂II并且进行简单混合。将所述混合液在室温下培养5-10分钟。在5000X g下将所述试管旋转10秒钟，使所述DNA试剂III呈小球状。弃去上清液。加入1.0毫升70％的乙醇，旋转，在5000X g下离心10秒钟并且弃去得到的上清液。将这一步骤共进行三次。当除去第三次洗涤步骤所产生的上清液之后，将所述试管高速离心2分钟，并且除去由此得到的剩余上清液。向适当的样本中加入50微升20毫摩的氢氧化钠/90％的乙醇溶液。将所述试管短暂旋转从而重新悬浮所述小球，并且在室温下培养5分钟。将所述试管在5000X g下旋转10秒钟，从而除去所述试管顶端的所有组分。加入1.0毫升90％的乙醇并且进行旋转，从而对小球进行洗涤。将所述试管再一次进行旋转并且除去上清液。将这一步骤再重复一次。当除去第二次洗涤步骤所产生的上清液之后，将所述样本高速离心3分钟。除去剩余的上清液并且将所述试管在室温下干燥10-20分钟。将所述样本在50-60℃下培养15分钟，从而洗脱DNA，高速离心2-3分钟并且转移至新的试管当中。利用CpGWIZ p16扩增试剂盒(S7800，Chemicon International，Temecula，CA)进行甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)，其能够检测在p16基因中甲基化与未甲基化的启动子区域。通过PCR产物的溴化乙锭染色凝胶的凝胶密度分析，可以确定甲基化DNA与未甲基化DNA的比例。
下述表3-B列出了本发明代表性的化合物以及它们在组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)检测以及DNA甲基化转移酶(DNMT)检测中的活性。在这些检测中，使用到下述分级：对于IC50而言，I＞10微摩，10微摩≥II≥1微摩，1微摩≥III≥0.1微摩，以及IV＜0.1微摩。
表3-B
  化合物编号   HDAC
  25   I
  28   I
  29   III
  30   II
  31   I
  34   I
  36   II
Figure G2007800418082D03031
第四部分：
表4-A
Figure G2007800418082D03032
Figure G2007800418082D03041
Figure G2007800418082D03061
Figure G2007800418082D03071
Figure G2007800418082D03081
Figure G2007800418082D03091
Figure G2007800418082D03101
Figure G2007800418082D03111
方案1
Figure G2007800418082D03121
方案2
Figure G2007800418082D03131
方案3
Figure G2007800418082D03132
方案4
Figure G2007800418082D03141
方案5
Figure G2007800418082D03151
方案6
Figure G2007800418082D03161
方案7
Figure G2007800418082D03171
方案8
Figure G2007800418082D03181
方案9
方案10
Figure G2007800418082D03191
方案11
Figure G2007800418082D03192
方案12
实施例1：(R)-N-羟基-2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢 -吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)乙酰胺(化合物17)的制 备方法
步骤1a.2-氨基-5-(4-甲氧基苯基)-1氢-吡咯基-3-羧酸乙酯(化合物402)
在氮气环境中于0℃下向乙醇钠(4.08克，60毫摩)的乙醇(60毫升)溶液中加入化合物104(10克，60毫摩)。将所述混合液搅拌20分钟并且向其中加入2-溴-4’-甲氧基-苯乙酮。在室温下搅拌过夜之后，浓缩上述混合液并且利用乙酸乙酯提取所述残余物，用水、盐水进行洗涤，干燥并且浓缩，从而获得残余物，利用柱层析法对所述残余物进行纯化，从而获得固体形式的所述产物402(5.2克，67％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ10.62(s，1H)，7.41(d，J＝6.6Hz，2H)，6.88(d，J＝6.6Hz，2H)，6.30(d，J＝3.0Hz，1H)，5.59(s，2H)，4.13(q，J＝6.9Hz，2H)，3.74(s，3H)，1.24(t，J＝7.2Hz，3H).LC-MS：260(M+1)。
步骤1b.6-(4-甲氧基苯基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-4-醇(化合物403)
将化合物402(4.7克，18毫摩)、甲酰胺(30毫升)、甲酸(7.0毫升)以及N，N-二甲基甲酰胺(15毫升)组成的混合液加热至150℃过夜。将所述混合液冷却至室温并且过滤，用异丙醇、乙醚(Et2O)连续进行洗涤，从而获得固体形式的所述产物403(3.7克，86％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ12.22(s，1H)，11.81(s，1H)，7.84(s，1H)，7.76(d，J＝6.6Hz，2H)，6.98(d，J＝6.6Hz，2H)，6.29(d，J＝2.4Hz，1H)，3.78(s，3H).LC-MS：241(M+1)。
步骤1c.4-氯-6-(4-甲氧基苯基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶(化合物404)
向装有化合物403(4.0克，16.7毫摩)的长颈瓶中加入三氯氧磷(32毫升)并且将所述混合液加热回流2小时。将所述混合液冷却并且倒入冰水中，加入氢氧化钠将pH调整至7。利用乙酸乙酯(250毫升x 4)对得到的水层进行提取。利用盐水对得到的混合有机层进行洗涤，干燥并且浓缩，从而获得黄色固体形式的所述产物404(2.2克，50％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ12.93(s，1H)，8.55(s，1H)，7.98(d，J＝6.9Hz，2H)，7.07(d，J＝6.9Hz，2H)，6.98(d，J＝2.1Hz，1H)，3.82(s，3H).LC-MS：260(M+1)。
步骤1d.(R)-6-(4-甲氧基苯基)-N-(1-苯乙基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-4-胺(化合物405)
将化合物404以及(R)-(+)-α-甲基苄胺(2.23克，2.5当量)组成的混合液加入到正丁醇中并且将得到的混合液加热至145℃过夜。随后向所述反应混合液中加入另外一部分(R)-(+)-α-甲基苄胺(440毫克，0.5当量)。将所述混合液冷却，过滤，利用乙醚进行洗涤，从而获得黄色固体形式的所述产物405(1.8克，70％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ11.88(s，1H)，8.01(s，1H)，7.68-7.71(m，3H)，7.39-7.42(m，2H)，7.25-7.30(m，2H)，7.17-7.19(m，1H)，6.93-7.01(m，2H)，5.49-5.51(m，1H)，3.77(s，3H)，1.51(d，J＝6.9Hz，3H).LC-MS：345(M+1)。
步骤1e.(R)-4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯酚(化合物406)
在氮气环境中在1小时的时间内于0℃下向化合物405(1.13克，3.0毫摩)的二氯甲烷(80毫升)溶液中逐滴加入三溴化硼(BBr3)(3.0毫升)的二氯甲烷(100毫升)溶液。当上述加入步骤完成之后，将所述混合液回暖至室温并且再搅拌5小时。随后向其中加入20毫升水。利用乙酸乙酯(100毫升x 3)对所述水层进行提取，利用盐水进行洗涤，浓缩，从而获得固体形式的所述产物406(500毫克，51％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ13.09(s，1H)，9.76(br，1H)，8.38(d，J＝3.6Hz，1H)，7.68-7.73(m，3H)，7.55-7.57(m，2H)，7.43-7.48(m，2H)，7.34-7.39(m，1H)，6.94-6.96(m，2H)，5.49-5.50(m，1H)，1.73(d，J＝6.9Hz，3H).LC-MS：331(M+1)。
步骤1f.(R)-2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)乙酸乙酯(化合物407-17)
向化合物406(100毫克，0.3毫摩)以及碳酸钾(70毫克，0.5毫摩)的二甲基甲酰胺(1.0毫升)溶液所组成的混合液中加入2-溴乙酸乙酯(50毫克，0.3毫摩)并且将所述混合液在室温下搅拌20小时。向其中加入5毫升的水并且利用乙酸乙酯(25毫升x4)对所述混合液进行提取，干燥并且浓缩，从而获得残余物，利用柱层析法对所述残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述产物407-17(40毫克，32％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ11.89(s，1H)，8.01(s，1H)，7.67-7.72(m，3H)，7.39-7.42(d，J＝8.1Hz，2H)，7.25-7.31(m，2H)，7.17-7.20(m，1H)，6.94-7.00(m，2H)，5.46-5.48(m，1H)，4.80(s，2H)，4.16(q，J＝6.9Hz，2H)，1.51(d，J＝6.9Hz，3H)，1.20(t，J＝7.2Hz，3H).LC-MS：417(M+1)。
步骤1g.(R)-N-羟基-2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)乙酰胺(化合物17)
制备羟胺的甲醇溶液：将盐酸羟胺(4.67克，67毫摩)溶解于甲醇(24毫升)中以制成溶液A。将氢氧化钾(5.61克，100毫摩)溶解于甲醇(14毫升)中以制成溶液B。将所述溶液A冷却至0℃，并且将溶液B逐滴加入到溶液A中。将所述混合液在0℃下搅拌30分钟，并且在低温下放置一段时间。分离得到的沉淀，从而获得羟胺的甲醇溶液。
向装有化合物407-17(35毫克，0.084毫摩)的长颈瓶中加入上述羟胺的甲醇溶液(2.0毫升)。将所述混合液在室温下搅拌30分钟。随后利用浓盐酸将其pH调整至7。将所述混合液浓缩，从而获得残余物，利用柱层析法对所述残余物进行纯化，从而获得固体形式的所述产物17(25毫克，71％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ11.91(s，1H)，8.03(s，1H)，7.69-7.73(m，3H)，7.41-7.44(m，2H)，7.27-7.32(m，2H)，7.19-7.21(m，1H)，6.96-7.04(m，2H)，6.48-6.50(m，1H)，4.50(s，2H)，1.53(d，J＝6.9Hz，3H).LC-MS：404(M+1).熔点：116.8-126.8。
实施例2：(R)-N-羟基-6-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢 -吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)己酰胺(化合物21)的制 备方法
步骤2a.(R)-6-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)己酸乙酯(化合物407-21)
向化合物406(330毫克，1.0毫摩)以及碳酸钾(210毫克，1.5毫摩)的二甲基甲酰胺(2.0毫升)溶液所组成的混合液中加入6-溴己酸乙酯(223毫克，1.0毫摩)并且将所述混合液在40℃下搅拌20小时。向其中加入5毫升的水并且利用乙酸乙酯(25毫升x4)对所述混合液进行提取，干燥并且浓缩，从而获得残余物，利用柱层析法对所述残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述产物407-21(250毫克，53％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ11.87(s，1H)，8.01(s，1H)，7.66-7.69(m，3H)，7.39-7.42(m，2H)，7.25-7.30(m，2H)，7.17-7.19(m，1H)，6.92-6.99(m，2H).5.46-5.48(m，1H)，3.95-4.07(m，4H)，2.29(t，J＝7.2Hz，2H)，1.68-1.73(m，2H)，1.38-1.60(m，8H)，1.15(t，J＝7.2Hz，3H).LC-MS：473(M+1)。
步骤2b.(R)-N-羟基-6-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)己酰胺(化合物21)
制备羟胺的甲醇溶液：将盐酸羟胺(4.67克，67毫摩)溶解于甲醇(24毫升)中以制成溶液A。将氢氧化钾(5.61克，100毫摩)溶解于甲醇(14毫升)中以制成溶液B。将所述溶液A冷却至0℃，并且将溶液B逐滴加入到溶液A中。将所述混合液在0℃下搅拌30分钟，并且在低温下放置一段时间。分离得到的沉淀，从而获得羟胺的甲醇溶液。
向装有化合物407-21(220毫克，0.466毫摩)的长颈瓶中加入上述羟胺的甲醇溶液(3.0毫升)。将所述混合液在室温下搅拌2小时。随后利用浓盐酸将其pH调整至7。将所述混合液浓缩，从而获得残余物，利用柱层析法对所述残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述产物21(130毫克，61％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ11.87(s，1H)，10.32(s，1H)，8.64(s，1H)，8.00(s，1H)，7.66-7.69(m，3H)，7.39-7.41(m，2H)，7.25-7.30(m，2H)，7.16-7.19(m，1H)，6.92-6.99(m，2H).5.46-5.48(m，1H)，3.97(t，J＝6.6Hz，2H)，1.95(t，J＝7.2Hz，2H)，1.67-1.72(m，2H)，1.20-1.39(m，8H).LC-MS：460(M+1)。
实施例3：(R)-N-羟基-7-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢 -吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)庚酰胺(化合物22)的制 备方法
步骤3a.(R)-7-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)庚酸乙酯(化合物407-22)
向化合物406(330毫克，1.0毫摩)以及碳酸钾(210毫克，1.5毫摩)的二甲基甲酰胺(2.0毫升)溶液所组成的混合液中加入7-溴庚酸乙酯(237毫克，1.0毫摩)并且将所述混合液在40℃下搅拌20小时。向其中加入5毫升的水并且利用乙酸乙酯(25毫升x4)对所述混合液进行提取，干燥并且浓缩，从而获得残余物，利用柱层析法对所述残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述产物407-22(150毫克，31％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ11.87(s，1H)，8.01(s，1H)，7.66-7.69(m，3H)，7.41(d，J＝7.5Hz，2H)，7.25-7.30(m，2H)，7.17-7.19(m，1H)，6.92-6.99(m，2H)，5.46-5.48(m，1H)，3.95-4.06(m，4H)，2.24-2.29(t，J＝7.2Hz，2H)，1.67-1.71(m，2H)，1.31-1.55(m，10H)，1.15(t，J＝7.2Hz，3H).LC-MS：487(M+1)。
步骤3b.(R)-N-羟基-7-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)庚酰胺(化合物22)
制备羟胺的甲醇溶液：将盐酸羟胺(4.67克，67毫摩)溶解于甲醇(24毫升)中以制成溶液A。将氢氧化钾(5.61克，100毫摩)溶解于甲醇(14毫升)中以制成溶液B。将所述溶液A冷却至0℃，并且将溶液B逐滴加入到溶液A中。将所述混合液在0℃下搅拌30分钟，并且在低温下放置一段时间。分离得到的沉淀，从而获得羟胺的甲醇溶液。
向装有化合物407-22(120毫克，0.247毫摩)的长颈瓶中加入上述羟胺的甲醇溶液(3.0毫升)。将所述混合液在室温下搅拌2小时。随后利用浓盐酸将其pH调整至7。将所述混合液浓缩，从而获得残余物，利用柱层析法对所述残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述产物22(90毫克，77％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ11.87(s，1H)，10.30(s，1H)，8.62(s，1H)，8.00(s，1H)，7.66-7.69(m，3H)，7.39-7.42(m，2H)，7.25-7.30(m，2H)，7.16-7.19(m，1H)，6.91-6.99(m，2H).5.48-5.49(m，1H)，3.97(t，J＝6.6Hz，2H)，1.93(t，J＝6.9Hz，2H)，1.67-1.72(m，2H)，1.20-1.51(m，10H).LC-MS：474(M+1)。
实施例4：(R)-N-羟基-2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢 -吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)乙酰胺(化合物1) 的制备方法
步骤4a.盐酸3-氨基-3-脒基丙酸乙酯(化合物104)
在-30℃下向无水乙醇(460克，10.0摩)中吹入无水氯化氢，直至获得总重量为821克的盐酸/乙醇溶液(44％重量/重量)。
向所述盐酸/乙醇溶液(292克)中加入氰基乙酸乙酯(452克)，将所述混合液冷却至冰盐浴温度并且搅拌1小时。将所述反应混合液回暖至室温并且放置过夜。获得白色沉淀102，且所述混合液可以直接用于下一步骤中。
将上述获得的混合液加入到乙醚与碳酸钾(828克)的水(2500毫升)溶液组成的混合液中。分离所述乙醚层，通过硫酸钠进行干燥，并且过滤。在减压条件下浓缩滤液，从而获得无色油形式的化合物103(445克)。
将化合物103(445克)以及氯化铵(149.5克)的乙醇(1500毫升)溶液所组成的混合液加热回流8小时。分离所述固体并且对得到的滤液进行浓缩。利用乙醚以及丙酮对所述残余物进行洗涤，从而获得产物104(220克，三个步骤的总产率33％)。LCMS：131[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.22(t，J＝6.9Hz，3H)，3.68(s，2H)，4.16(q，J＝6.9Hz，2H)，9.04(s，2H)，9.32(s，2H)。
步骤4b.4-(2-溴乙酰基)苯甲酸甲酯(化合物106)
将4-乙酰基苯甲酸甲酯105(8.91克，50毫摩)悬浮于醋酸(80毫升)中并且对所述混合液进行搅拌直至形成透明溶液。随后向所述混合液中逐滴加入溴水(8.39克，52毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌直至强烈的橙色消失。将所述溶液冷却至0℃并且收集得到的固体并且利用50％的甲醇水溶液进行洗涤，干燥，从而获得所述化合物106(9.9克，77％)。LCMS：257[M+1]+；1H NMR(氘代氯仿)
Figure G2007800418082D03271
：3.96(s，3H)，4.47(s，2H)，8.03(t，1H)，8.06(t，1H)，8.14(t，1H)，8.16(t，1H)。
步骤4c.5-(4-(甲氧基羰基)苯基)-2-氨基-1氢-吡咯基-3-羧酸乙酯(化合物107)
将钠(1.38克，60毫摩)加入到乙醇(150毫升)中并且进行搅拌直至所述的钠溶解。将所述反应混合液冷却至0℃并且向其中加入盐酸2-亚氨基乙酸乙酯(10.0克，0.06摩)溶液并且搅拌30分钟。随后向其中加入4-(2-溴乙酰基)苯甲酸甲酯106(7.71克，0.03摩)。将得到的混合液在室温下搅拌24小时。浓缩所述反应混合液并且将得到的残余物溶解于乙酸乙酯中，过滤并且将滤液用水洗涤。利用乙酸乙酯对所述水相进行提取。利用盐水对所述合并的有机层进行洗涤，通过硫酸镁进行干燥并且过滤。浓缩滤液并且利用柱层析法对得到的残余物进行纯化，从而获得所述化合物107(7.38克，85.3％)。LCMS：289[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜-d6.)δ1.25(t，J＝6.9Hz，3H)，3.82(s，3H)，4.14(q，J＝6.9Hz，2H)，5.81(s，2H)，6.71(s，1H)，7.61(d，J＝8.7Hz，2H)，7.84(d，J＝8.7Hz，2H)，10.94(s，1H)。
步骤4d.4-(4-羟基-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲酸甲酯(化合物108)
将107(7.0克，24.3毫摩)、蚁酸(12毫升)以及甲酰胺(50毫升)的二甲基甲酰胺(24毫升)溶液所组成的混合液在150℃下加热16小时。将所述反应混合液冷却并且利用异丙醇进行稀释并且分离得到的沉淀，利用异丙醇以及己烷进行洗涤，从而获得所述标题化合物108(4.1克，62.7％)。LCMS：270[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.)δ2.30(s，3H)，6.84(s，1H)，7.19(d，J＝8.1Hz，2H)，7.70(d，J＝8.1Hz，2H)，7.84(s，1H)，11.80(s，1H)，12.24(s，1H)。
步骤4e.4-(4-氯-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲酸甲酯(化合物109)
将化合物108(4.1克，15.2毫摩)以及三氯氧磷(30毫升)组成的混合液加热回流3小时。在减压条件下除去过量的三氯氧磷。将所述残余物溶解于乙酸乙酯中并且利用氢氧化钠水溶液、盐水对得到的有机层进行洗涤，通过硫酸镁进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得粗产物109(5.27克)。LCMS：288[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜-d6.)δ2.34(s，3H)，7.02(s，1H)，7.31(d，J＝8.1Hz，2H)，7.88(d，J＝8.1Hz，2H)，8.55(s，1H)，12.94(s，1H)。
步骤4f.4-(4-((R)-1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲酸甲酯(化合物110)
向化合物109(8.4克，29.0毫摩)的正丁醇(100毫升)悬浮液中加入(R)-苯乙胺(4.5克，37毫摩)。将所述混合液加热回流过夜。利用冰浴对所述反应混合液进行冷却并且分离得到的沉淀并利用正丁醇以及乙醚进行洗涤，干燥，从而获得所述标题化合物110(7.7克，71.3％)。LCMS：373[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.)δ1.53(d，J＝6.9Hz，3H)，3.87(s，3H)，5.51(m，1H)，7.20(d，J＝7.2Hz，1H)，7.31(t，J＝7.2Hz，3H)，7.42(d，J＝7.2Hz，2H)，7.93(t，J＝8.4Hz，3H)，8.00(d，J＝8.4Hz，2H)，8.09(s，1H)，12.20(s，1H)。
步骤4g.(4-(4-((R)-1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基)甲醇(化合物111)
向化合物110(6.15克，16.5毫摩)的无水四氢呋喃(400毫升)悬浮液中分部分加入氢化铝锂(LiAlH4)(1.88克，0.0495摩)。将得到的混合液加热回流30分钟。将所述混合液冷却至室温并且向其中加入水(1.88毫升)，之后加入15％的氢氧化钠水溶液(1.88毫升)以及水(5.64毫升)。通过过滤除去得到的沉淀并且对滤液进行浓缩。将所述残余物悬浮于水中并且收集所述沉淀物并且进行干燥，从而获得所述标题化合物111(4.28克，75.3％)。LCMS：345[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.54(d，J＝7.2Hz，3H)，4.53(d，J＝6.0Hz，2H)，5.20(t，J＝6.0Hz，1H)，5.50(m，1H)，7.08(s，1H)，7.20(t，J＝7.5Hz，1H)，7.30(t，J＝7.5Hz，2H)，7.40(t，J＝8.1Hz，4H)，7.76(t，J＝8.4Hz，3H)，8.05(s，1H)，11.99(s，1H)。
步骤4h.6-(4-(氯甲基)苯基)-N-((R)-1-苯乙基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-4-胺(化合物112)
在-10℃下向亚硫酰氯(SOCl2)(8.85克，74.0毫摩)的甲苯(50毫升)溶液中分部分加入化合物111。将所述混合液回暖至0℃并且搅拌2小时。将所述反应混合液过滤并且利用甲苯以及乙醚对得到的固体进行洗涤从而获得粗产物。将所述粗产物悬浮于水中并且利用饱和的碳酸氢钠水溶液进行处理直至pH大于7。分离所述固体并且用水进行洗涤，干燥，从而获得所述标题化合物112(1.8克，67.0％)。LCMS：363[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.54(d，J＝6.9Hz，3H)，4.79(s，2H)，5.50(m，1H)，7.14(s，1H)，7.20(d，J＝7.2Hz，1H)，7.30(t，J＝7.2Hz，2H)，7.42(d，J＝6.9Hz，2H)，7.49(d，J＝8.4Hz，2H)7.78(d，J＝7.8Hz，2H)，7.82(d，J＝8.4Hz，1H)8.07(s，1H)，12.06(s，1H)。
步骤4i.(R)-2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)乙酸乙酯(化合物113-1)
向混合的二甲基甲酰胺(60毫升)、甲醇(30毫升)以及氢氧化钾(448.0毫克，8.0毫摩)中加入盐酸2-氨基乙酸乙酯(1.11克，8.0毫摩)。将得到的混合液在室温下搅拌10分钟。通过降低压力在40℃下除去甲醇并且加入化合物112(724.0毫克，2.0毫摩)。将得到的混合液在室温下搅拌过夜。在减压条件下除去二甲基甲酰胺，并且将得到的残余物悬浮于水中。收集得到的固体并且进行干燥，从而获得产物113-1(285毫克，33％)。LCMS：430[M+1]+。
步骤4j.(R)-N-羟基-2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)乙酰胺(化合物1)
将化合物113-1(285毫克，0.66毫摩)以及羟胺/甲醇(5毫升，8，85毫摩)组成的混合液在室温下搅拌0.5小时。利用醋酸将所述反应混合液调节至中性并且进行浓缩。将得到的残余物悬浮于水中并且分离得到的沉淀并且干燥，从而获得粗产物。利用制备型高效液相色谱(HPLC)对这一产物进行纯化，从而获得灰黄色固体形式的化合物1(220毫克，80％)。LCMS：417[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.52(d，J＝6.3Hz，3H)，3.02(s，2H)，3.67(s，2H)，5.47(m，1H)，7.06(s，1H)，7.17(t，J＝6.9Hz，1H)，7.28(m，2H)，7.39(m，4H)，7.70(m，J＝7.8Hz，2H)，7.78(d，J＝8.1Hz，1H)8.03(s，1H)，8.80(s，1H)，10.41(s，1H)，11.99(s，1H)。
实施例5：(R)-N-羟基-3-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢 -吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)-丙酰胺(化合物2) 的制备方法
步骤5a.(R)-3-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)丙酸乙酯(化合物113-2)
所述标题化合物113-2(190毫克，53％)是由化合物112(290.0毫克，0.8毫摩)以及盐酸3-氨基丙酸乙酯(368毫克，2.4毫摩)通过与化合物113-1的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的。LCMS：444[M+1]+。
步骤5b.(R)-N-羟基-3-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)丙酰胺(化合物2)
制备出的所述标题化合物2是灰黄色固体形式(45毫克，24％)，是由化合物113-2(190.0毫克，0.43毫摩)以及羟胺/甲醇(2毫升，3.43毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的。LCMS：431[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.52(d，J＝6.9Hz，3H)，2.14(t，J＝7.2Hz，2H)，2.70(t，J＝7.2Hz，2H)，3.69(s，2H)，5.50(m，1H)，7.07(s，1H)，7.19(t，J＝6.9Hz，1H)，7.30(t，J＝7.2Hz，2H)，7.36(d，J＝7.8Hz，2H)，7.42(d，J＝7.8Hz，2H)，7.74(m，3H)，8.05(s，1H)，11.97(s，1H)。
实施例6：(R)-N-羟基-2-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基) -7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)乙酰胺 (化合物11)
步骤6a.(R)-N-(1-苯乙基)-6-(4-(哌嗪基-1-甲基)苯基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-4-胺(化合物301)
将化合物112(0.1克，0.27毫摩)以及哌嗪(0.21克，2.7毫摩)的二甲基甲酰胺(20毫升)溶液所组成的混合液在20℃下搅拌1.5小时。在减压条件下除去所述溶剂并且将得到的残余物用水进行洗涤，干燥并且利用高效液相色谱法(HPLC)进行纯化，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物301(0.10克，87.8％)。LCMS：413[M+1]+。
步骤6b.(R)-2-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)乙酸乙酯(化合物302-11)
将化合物301(0.25克，0.61毫摩)、2-溴乙酸乙酯(0.11克，0.66毫摩)以及三乙胺(0.25克，2.44毫摩)的二甲基甲酰胺(10毫升)溶液所组成的混合液在25-30℃下搅拌过夜。在减压条件下蒸发溶剂，从而获得粗残余物302-11(0.30克，LCMS：499[M+1]+)，所述粗残余物无需进行进一步的纯化即可在下一步骤中直接使用。
步骤6c.(R)-N-羟基-2-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)乙酰胺(化合物11)
向羟胺的甲醇(4.0毫升，7.1毫摩)溶液中加入化合物302-11(0.30克，0.62毫摩)。将所述反应混合液在25℃下搅拌20分钟。利用薄层层析法(TLC)对上述反应进行监控。利用醋酸将所述混合液调节至中性并且在减压条件下浓缩。利用制备型高效液相色谱(HPLC)对得到的残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述标题化合物11(60毫克，21％)。LCMS：486[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜-d6)δ1.32(d，J＝6.9Hz，3H)，2.43(m，8H)，2.83(s，2H)，3.44(s，2H)，5.47(m，1H)，7.05(s，1H)，7.19(m，1H)，7.29(m，5H)，7.40(d，J＝7.2Hz，3H)，7.71(d，J＝8.1Hz，2H)，7.76(d，J＝8.1Hz，1H)，8.02(s，1H)，11.96(s，1H)。
实施例7：(R)-N-羟基-3-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基) -7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)丙酰胺 (化合物12)
步骤7a.(R)-3-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)丙酸甲酯(化合物302-12)
所述标题化合物302-12(0.31克)是由化合物301(0.44克，1.07毫摩)、3-溴丙酸甲酯(0.20克，1.17毫摩)以及三乙胺(0.43克，4.25毫摩)的二甲基甲酰胺(9毫升)溶液通过与化合物302-11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：499[M+1]+。
步骤7b.(R)-N-羟基-3-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)丙酰胺(化合物12)
制备出的所述标题化合物12是白色固体形式(80毫克，26％)，是由化合物302-12(0.31克，0.62毫摩)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的。LCMS：500[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.62(d，J＝7.2Hz，3H)，2.29(t，J＝7.2Hz，2H)，2.54(m，8H)，2.67(t，J＝7.2Hz，3H)，3.56(s，2H)，5.47(m，1H)，7.00(s，1H)，7.19(m，1H)，7.29(m，5H)，7.40(d，J＝7.2Hz，3H)，7.71(d，J＝8.1Hz，2H)，7.76(d，J＝8.1Hz，1H)，8.02(s，1H)，11.96(s，1H)。
实施例8：(R)-N-羟基-4-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基) -7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)丁酰胺 (化合物13)
步骤8a.(R)-4-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)丁酸乙酯(化合物302-13)
所述标题化合物302-13(0.39克)是由化合物301(0.30克，0.74毫摩)、4-溴丁酸乙酯(0.28克，0.82毫摩)以及三乙胺(0.29克，2.9毫摩)的二甲基甲酰胺(9.5毫升)溶液通过与化合物302-11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：527[M+1]+。
步骤8b.(R)-N-羟基-4-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)丁酰胺(化合物13)
制备出的所述标题化合物13是白色固体形式(20毫克，5％)，是由化合物302-13(0.39克，0.74毫摩)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的。LCMS：514[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)
Figure G2007800418082D03351
1.53(d，J＝7.2Hz，3H)，1.61(m，2H)，1.95(t，J＝7.2Hz，2H)，2.37(m，8H)，3.46(s，2H)，5.48(m，1H)，7.08(s，1H)，7.17(m，1H)，7.29(m，5H)，7.43(d，J＝6.9Hz，3H)，7.74(d，J＝8.4Hz，2H)，7.80(d，J＝8.4Hz，1H)，8.05(s，1H)，12.00(s，1H)。
实施例9：(R)-N-羟基-5-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基) -7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)戊酰胺 (化合物14)
步骤9a.(R)-5-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)戊酸甲酯(化合物302-14)
所述标题化合物302-14(0.40克)是由化合物301(0.31克，0.76毫摩)、5-溴戊酸甲酯(0.178克，0.91毫摩)、三乙胺(0.31克，3.1毫摩)以及二甲基甲酰胺(10毫升)通过与化合物302-11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：527[M+1]+。
步骤9b.(R)-N-羟基-5-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)戊酰胺(化合物14)
制备出的所述标题化合物14是白色固体形式(30毫克，7％)，是由化合物302-14(0.40克，0.76毫摩)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的。LCMS：528[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.29(m，2H)，1.38(m，2H)，1.46(d，J＝7.2Hz，3H)，1.86(t，J＝7.2Hz，2H)，2.16(t，J＝3.9Hz，2H)2.30(m，8H)，3.39(s，2H)，5.43(m，1H)，7.0(s，1H)，7.12(m，1H)，7.26(m，5H)，7.35(d，J＝7.5Hz，3H)，7.76(d，J＝8.4Hz，2H)，7.80(d，J＝8.4Hz，1H)，7.98(s，1H)。
实施例10：(R)-N-羟基-6-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基) -7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)己酰胺 (化合物15)
步骤10a.(R)-6-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)己酸乙酯(化合物302-15)
所述标题化合物302-15(0.41克)是由化合物301(0.30克，0.73毫摩)、6-溴己酸乙酯(0.21克，0.87毫摩)、三乙胺(0.29克，2.9毫摩)以及二甲基甲酰胺(8毫升)通过与化合物302-11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：555[M+1]+。
步骤10b.(R)-N-羟基-6-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)己酰胺(化合物15)
制备出的所述标题化合物15是白色固体形式(80毫克，20％)，是由化合物302-15(0.41克，0.74毫摩)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的。LCMS：542[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.15(m，2H)，1.34(m，2H)，1.41(m，2H)，1.51(d，J＝6.9Hz，3H)，1.91(t，J＝6.9Hz，2H)，2.20(t，J＝6.9Hz，2H)2.35(m，8H)，3.34(s，2H)，5.48(m，1H)，7.6(s，1H)，7.18(m，1H)，7.29(m，4H)，7.41(d，J＝7.2Hz，2H)，7.72(d，J＝8.1Hz，2H)，7.79(d，J＝8.4Hz，1H)，8.03(s，1H)，8.65(s，1H)，10.30(s，1H)，11.98(s，1H)。
实施例11：(R)-N-羟基-7-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基) -7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)庚酰胺 (化合物16)
步骤11a.(R)-7-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)庚酸乙酯(化合物302-16)
所述标题化合物302-16(0.13克，23％)是由化合物301(0.41克，1.0毫摩)、7-溴庚酸乙酯(0.237克，1毫摩)、三乙胺(0.40克，4.0毫摩)以及二甲基甲酰胺(6毫升)通过与化合物302-11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：569[M+1]+。
步骤11b.(R)-N-羟基-7-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)庚酰胺(化合物16)
制备出的所述标题化合物16是褐色固体形式(84毫克，66％)，是由化合物302-16(0.13克，0.23毫摩)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的。LCMS：556[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.23(m，4H)，1.46(m，4H)，1.51(d，J＝7.2Hz，3H)，1.92(t，J＝7.8Hz，2H)，2.50-2.80(m，8H)，3.56(s，2H)，5.48(m，1H)，7.09(s，1H)，7.18(m，1H)，7.26(m，2H)，7.40(m，5H)，7.74(d，J＝7.8Hz，2H)，7.81(d，J＝8.1Hz，1H)，8.66(s，1H)，10.34(s，1H)，12.00(s，1H)。
实施例12：(R)-N-羟基-4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7 氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)丙酰胺(化合物19)
步骤12a.(R)-4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)丁酸甲酯(化合物407-19)
向化合物406(250毫克，0.75毫摩)以及碳酸钾(160毫克，1.2毫摩)的N，N-二甲基甲酰胺(1.5毫升)溶液所组成的混合液中加入4-溴丁酸甲酯(130毫克，0.75毫摩)并且将得到的混合液在40℃下搅拌20小时。向其中加入水(5毫升)并且利用乙酸乙酯(25毫升x 4)对所述混合液进行提取，干燥并且浓缩。利用柱层析法对得到的残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述产物407-19(202毫克，63％产率)：LC-MS：431(M+1)；1HNMR(二甲基亚砜-d6)δ1.49(d，J＝6.6Hz，3H)，1.90-1.93(m，2H)，2.11(t，J＝7.2Hz，2H)，3.60(s，3H)，4.02(t，J＝6.0Hz，2H)，5.43-5.48(m，1H)，6.92-6.98(m，2H)，7.16-7.18(m，1H)，7.24-7.29(m，2H)，7.39(d，J＝8.4Hz，2H)，7.65-7.71(m，3H)，8.00(s，1H)，11.87(s，1H)。
步骤12b.(R)-N-羟基-4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)丙酰胺(化合物19)
向装有化合物407-19(180毫克，0.45毫摩)的长颈瓶中加入羟胺的甲醇(2.0毫升)溶液。将所述混合液在室温下搅拌1小时。利用浓盐酸将所述反应混合液调节至中性并且进行浓缩。利用柱层析法对得到的残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述产物19(60毫克，34％产率)。LC-MS：432(M+1)；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.49(d，J＝6.6Hz，3H)，1.89-1.93(m，2H)，2.10(t，J＝7.2Hz，2H)，3.97(t，J＝6.0Hz，2H)，5.43-5.48(m，1H)，6.92-6.98(m，2H)，7.16-7.18(m，1H)，7.24-7.29(m，2H)，7.38-7.41(d，J＝8.4Hz，2H)，7.65-7.71(m，3H)，7.99(s，1H)，8.70(s，1H)，10.41(s，1H)，11.88(s，1H)。
实施例13：(R)-N-羟基-5-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7 氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)戊酰胺(化合物20)
步骤13a.(R)-5-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)戊酸甲酯(化合物407-20)
制备出的所述标题化合物407-20是白色固体形式(150毫克，87％)，是由化合物406(130毫克，0.39毫摩)、碳酸钾(110毫克，0.8毫摩)以及5-溴戊酸甲酯(76毫克，0.39毫摩)通过与化合物407-19的制备方法(实施例12)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：445(M+1)；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.47-1.54(m，5H)，1.88-1.94(m，2H)，2.36(t，J＝7.5Hz，2H)，3.58(s，3H)，4.30-4.33(m，2H)，5.46-5.50(m，1H)，6.91-6.98(m，2H)，7.16-7.18(m，1H)，7.24-7.30(m，2H)，7.40(d，J＝7.5Hz，2H)，7.65-7.68(m，3H)，8.00(s，1H)，11.87(s，1H)。
步骤13b.(R)-N-羟基-5-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)戊酰胺(化合物20)
制备出的所述标题化合物20是白色固体形式(110毫克，73％)，是由化合物407-20(150毫克，0.35毫摩)通过与化合物19的制备方法(实施例12)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：446(M+1)；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.50(d，J＝7.2Hz，3H)，1.65-1.66(m，4H)，1.98-2.02(m，2H)，3.97(m，2H)，5.44-5.49(m，1H)，6.93-6.99(m，2H)，7.16-7.18(m，1H)，7.25-7.30(m，2H)，7.39-7.41(d，J＝8.4Hz，2H)，7.66-7.71(m，3H)，8.00(s，1H)，8.70(s，1H)，10.42(s，1H)，11.87(s，1H)。
实施例14：(R)-N 1 -羟基-N 4 -(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7 氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基)琥珀酰胺(化合物24)
步骤14a.2-氨基-5-(4-硝基苯基)-1氢-吡咯基-3-羧酸乙酯(化合物502)
在氮气环境中，在0-5℃下将化合物104(16.7克，100毫摩)加入到25毫升乙醇之中并且在此之后加入乙醇钠(6.8克，100毫摩)。将所述黄色悬浮液搅拌20分钟并且向其中加入化合物501(12.2克，50毫摩)。将得到的混合液在室温下搅拌24小时并且在减压条件下浓缩。将得到的残余物溶解于乙酸乙酯中并且利用水以及盐水进行洗涤。利用乙酸乙酯对得到的水相提取三次。将得到的合并有机层通过硫酸镁进行干燥并且蒸发，从而获得粗产物502(12.1克，79.5％)。LC-MS：276(M+1)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.26(t，J＝7.2Hz，3H)，4.17(q，J1＝7.2Hz，J2＝7.2Hz.2H)，5.98(s，1H)，6.91(s，1H)，7.68(d，J＝9.0Hz，2H)，8.13(d，J＝9.0Hz，2H)，11.10(s，1H)。
步骤14b.6-(4-硝基苯基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-4醇(化合物503)
将502(5.0克，18.2毫摩)、甲酰胺(36毫升)以及蚁酸(6毫升)的二甲基甲酰胺(10毫升)溶液所组成的混合液在150℃下搅拌22小时。将所述混合液冷却至室温并且用水进行稀释。将得到的沉淀过滤并且利用水、异丙醇以及乙醚进行洗涤，干燥，从而获得灰色固体503(3.24克，69.4％)。LC-MS：257(M+1)，1HNMR(二甲基亚砜-d6)δ7.28(s，1H)，7.95(s，1H)，8.11(d，J＝9.0Hz，2H)，8.26(d，J＝9.0Hz，2H)，11.98(s，1H)，12.67(s，1H)。
步骤14c.4-氯-6-(4-硝基苯基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶(化合物504)
将503(0.52克，2.03毫摩)以及三氯氧磷(10毫升)的混合液回流3小时。对得到的深褐色悬浮液进行浓缩以除去所述三氯氧磷。利用乙酸乙酯对得到的残余物进行稀释并且利用饱和的碳酸氢钠水溶液对有机层进行洗涤，通过硫酸镁进行干燥并且蒸发，从而获得黄色固体形式的所述产物504(0.13克，22.2％)。LC-MS：275(M+1)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ7.42(s，1H)，8.28～8.37(m，4H)，8.67(s，1H)，13.31(s，1H)。
步骤14d.(R)-6-(4-硝基苯基)-N-(1-苯乙基)-7氢--吡咯基[2，3-d]嘧啶基-4-胺(化合物505)
将化合物504(5.53克，20.1毫摩)悬浮于正丁醇(110毫升)中并且利用(R)-苯乙胺(4.9克，40.3毫摩)进行处理。将所述混合液在145℃下加热24小时。将所述反应混合液在冰浴中冷却并且过滤所述固体并且利用冷的正丁醇以及乙醚进行洗涤，从而获得黑色产物505(4.2克，58.2％)。LC-MS：360(M+1)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.52(d，J＝6.6Hz，3H)，5.52(m，1H)，7.21～7.49(m，6H)，8.00～8.32(m，6H)，13.36(s，1H)。
步骤14e.(R)-6-(4-氨基苯基)-N-(1-苯乙基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-4-胺(化合物506)
将化合物505(5.44克，15.14毫摩)、铁屑(8.48克，0.15摩)以及浓盐酸(1毫升)的乙醇(120毫升)溶液以及水(12毫升)组成的混合液回流2小时。利用氢氧化钠水溶液将所述混合液的pH调整至12并且通过过滤除去铁屑。对滤液进行浓缩从而得到残余物，利用柱层析法对所述残余物进行纯化，从而获得黄色固体形式的产物506(1.48克，29.7％)。LC-MS：330(M+1)，1HNMR(二甲基亚砜-d6)δ1.52(d，J＝6.6Hz，3H)，5.29(s，2H)，5.48(m，1H)，6.60～6.63(m，2H)，6.81(s，1H)，7.18～7.63(m，9H)，7.99(s，1H)，11.68(s，1H)。
步骤14f.(R)-4-氧代-4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基-氨基)丁酸甲酯(化合物507-24)
将琥珀酸单甲基酯(401.6毫克，3.04毫摩)的亚硫酰氯(20毫升)溶液在80℃下加热4小时。将所述混合液冷却并且通过蒸发除去溶剂。随后，在0℃下将所述混合液逐滴加入到化合物506(0.5克，1.52毫摩)的二氯甲烷(30毫升)以及三乙胺(0.86毫升，6.08毫摩)的悬浮液中。将所述混合液在0℃下搅拌2小时并且利用二氯甲烷(150毫升)进行稀释，利用水(100毫升x3)进行洗涤，通过硫酸镁进行干燥。除去所述有机溶剂，从而获得黄色固体形式的粗产物507-24(0.7克)，所述粗产物无需进行进一步的纯化即可在下一步骤中直接使用。LC-MS：444(M+1)。
步骤14g.(R)-N1-羟基-N4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基)琥珀酰胺(化合物24)
将507-24以及羟胺的甲醇饱和溶液(1.77摩/升，5.15毫升)组成的混合液在室温下搅拌2.5小时。利用醋酸将所述混合液的pH调整至7-8，并且通过蒸发除去溶剂。向所述混合液中加入水并且过滤所述沉淀并且进行纯化，从而获得黄色固体形式的产物24(0.12克，两个步骤中的产率17.8％)。LC-MS：445(M+1)，1HNMR(二甲基亚砜-d6)δ1.50(d，J＝6.6Hz，3H)，2.29(t，J＝7.5Hz，2H)，2.57(t，J＝7.2Hz，2H)，5.47(m，1H)，6.99(s，1H)，7.17～7.42(m，5H)，7.65～7.76(m，5H)，8.02(s，1H)，8.72(s，1H)，10.06(s，1H)，10.43(s，1H)，11.91(s，1H)。
实施例15：(R)-N 1 -羟基-N 5 -(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7 氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基)戊二酰胺(化合物25)
步骤15a.(R)-5-氧代-5-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基-氨基)戊酸甲酯(化合物507-25)
制备出的所述标题化合物507-25是红色粘性液体形式(0.8克)，是由化合物506(0.5克，1.52毫摩)以及戊二酸单甲基酯(222.1毫克，3.04毫摩)通过与化合物507-24的制备方法(实施例14)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：458(M+1)。
步骤15b.(R)-N1-羟基-N5-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基)戊二酰胺(化合物25)
制备出的所述标题化合物25是黄色固体形式(0.22克，在两个步骤中的产率为31.6％)，是由羟胺的甲醇溶液(1.77摩/升，3.44毫升)通过与化合物24的制备方法(实施例14)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：459(M+1)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.49(d，J＝6.9Hz，3H)，1.79(t，J＝7.5Hz，2H)，2.00(t，J＝7.2Hz，2H)，2.31(t，J＝7.2Hz，2H)，5.46(m，1H)，6.98(s，1H)，7.14～7.41(m，5H)，7.61～7.75(m，5H)，8.01(s，1H)，8.68(s，1H)，9.87(s，1H)，10.37(s，1H)，11.90(s，1H)。
实施例16：(R)-N 1 -羟基-N 6 -(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7 氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基)己二酰二胺(化合物26)
步骤16a.(R)-6-氧代-6-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基-氨基)己酸甲酯(化合物507-26)
制备出的所述标题化合物507-26是黄色固体形式(0.44克)，是由化合物506(0.25克，0.76毫摩)以及己二酸单甲基酯(243.5毫克，1.52毫摩)通过与化合物507-24的制备方法(实施例14)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：472(M+1)。
步骤16b.(R)-N1-羟基-N6-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基)己二酰二胺(化合物26)
制备出的所述标题化合物26是白色固体形式(0.15克，在两个步骤中的产率为41.8％)，是由507-26(0.31克，0.62毫摩)通过与化合物24的制备方法(实施例14)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：473(M+1)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.51(m，7H)，1.95(t，J＝6.9Hz，2H)，2.30(t，J＝6.6Hz，2H)，5.46(m，1H)，6.97(s，1H)，7.14～7.41(m，5H)，7.61～7.75(m，5H)，8.01(s，1H)，8.66(s，1H)，9.95(s，1H)，10.34(s，1H)，11.90(s，1H)。
实施例17：(R)-N 1 -羟基-N 8 -(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7 氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基)辛二酰胺(化合物27)
步骤17a.(R)-8-氧代-8-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基氨基)辛酸甲酯(化合物507-27)
制备出的所述标题化合物507-27是黄色固体形式(1.12克)，是由化合物506(0.5克，1.52毫摩)以及辛二酸单甲基酯(571.9毫克，3.04毫摩)通过与化合物507-24的制备方法(实施例14)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：500(M+1)。
步骤17b.(R)-N1-羟基-N8-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基)辛二酰胺(化合物27)
制备出的所述标题化合物27是白色固体形式(0.2克，在两个步骤中的产率为26.3％)，是由507-27通过与化合物24的制备方法(实施例14)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：501(M+1)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.26～1.58(m，11H)，1.89(t，J＝7.2Hz，2H)，2.28(t，J＝7.2Hz，2H)，5.46(m，1H)，6.98(s，1H)，7.13～7.41(m，5H)，7.61～7.75(m，5H)，8.01(s，1H)，8.63(s，1H)，9.94(s，1H)，10.30(s，1H)，11.90(s，1H)。
实施例18：(R)-N-(2-(2-(羟基氨基)-2-氧代乙基氨基) 乙基)-4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6- 基)苯甲酰胺(化合物28)
步骤18a.(R)-N-(2-氨基乙基)-4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲酰胺(化合物601)
将化合物110(2.0克，5.37毫摩)的乙基-1，2-二胺(120毫升)溶液在70℃下搅拌22小时。在减压条件下浓缩所述混合液。将所述残余物溶解于3毫升乙醇中并且利用乙醚进行稀释。过滤得到的沉淀，干燥，从而获得黄色固体形式的601(2.0克，93.0％)：LC-MS：401[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.54(d，3H)，2.53(t，J＝1.8Hz，1H)，2.72(t，J＝6.0Hz，2H)，3.30(m，J＝6.0Hz，2H)，5.51(m，J＝6.6Hz，J＝7.8Hz，2H)，7.22(s，1H)，7.24(d，J＝4.2Hz，1H)，7.31(t，J＝7.2Hz，2H)，7.44(d，J＝7.5Hz，2H)，7.8(s，1H)，7.89(d，J＝7.2Hz，2H)，7.93(s，2H)，7.96(s，1H)，8.09(s，1H)，8.49(t，J＝5.7Hz，1H)。
步骤18b.(R)-2-(2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲酰胺基)乙基氨基)乙酸乙酯(化合物602-28)
将601(1.0克，2.5毫摩)以及2-溴乙酸乙酯(0.42克，2.5毫摩)的N，N-二甲基甲酰胺(25毫升)溶液在室温下搅拌4小时。除去溶剂并且利用硅胶柱层析法对得到的残余物进行纯化，从而获得602-28(0.79克，43.2％)。LC-MS：487[M+1]+。
步骤18c.(R)-N-(2-(2-(羟基氨基)-2-氧代乙基氨基)乙基)-4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲酰胺(化合物28)
将602-28(0.423克，0.87毫摩)以及羟胺的甲醇溶液(1.77摩/升，4.91毫升)组成的混合液在室温下搅拌2.5小时。利用醋酸将所述混合液的pH调整至7-8并且除去溶剂。将得到的混合液用水稀释，过滤并且对得到的固体进行纯化，从而获得黄色固体形式的化合物28(0.09克，21.8％)：LC-MS：474[M+1]+，1HNMR(二甲基亚砜-d6+重水)：δ1.48(d，J＝6.9Hz，3H)，2.60(t，J＝6.0Hz，2H)，3.04(s，2H)，3.31(t，2H)，5.37(m，1H)，7.14～7.38(m，6H)，7.84(s，4H)，7.98(s，1H)。
实施例19：(R)-N-(2-(3-(羟基氨基)-3-氧代丙基氨基) 乙基)-4-(4-(1-苯基乙基-氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6- 基)苯甲酰胺(化合物29)
步骤19a.(R)-3-(2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲酰胺基)乙基氨基)丙酸甲酯(化合物602-29)
制备出的所述标题化合物602-29是固体形式(0.29克，23.4％)，是由化合物601(1.0克，2.5毫摩)以及3-溴丙酸甲酯(0.42克，2.5毫摩)的N，N-二甲基甲酰胺(25毫升)溶液通过与化合物602-28的制备方法(实施例18)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：487[M+1]+。
步骤19b.(R)-N-(2-(3-(羟基氨基)-3-氧代丙基氨基)乙基)-4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲酰胺(化合物29)
制备出的所述标题化合物29是黄色固体形式(0.04克，产率13.9％)，是由化合物602-29(0.29克，0.59毫摩)以及羟胺的甲醇溶液(1.77摩/升，6毫升)通过与化合物28的制备方法(实施例18)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：488[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6+重水)：δ1.50(d，J＝6.9Hz，3H)，2.15(t，J1＝6.3Hz，J2＝7.2Hz，2H)，2.76(m，4H)，3.35(m，2H)，5.44(m，1H)，7.16(d，J＝6.9Hz，2H)，7.27(t，J＝7.5Hz，2H)，7.39(d，J＝7.2Hz，2H)，7.86(m，4H)，8.03(s，1H)。
实施例20：(R)-N-(2-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基氨基) 乙基)-4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6- 基)苯甲酰胺(化合物30)
步骤20a.(R)-6-(2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲酰胺基)乙基氨基)己酸乙酯(化合物602-30)
所述标题化合物602-30(0.26克，24.0％)是由化合物601(0.8克，2.0毫摩)以及6-溴己酸乙酯(0.446克，2.0毫摩)的N，N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液通过与化合物602-28的制备方法(实施例18)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：543[M+1]+。
步骤20b.(R)-N-(2-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基氨基)乙基)-4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲酰胺(化合物30)
制备出的所述标题化合物30是黄色固体形式(0.07克，27.6％)，是由化合物602-30(0.260克，0.48毫摩)以及羟胺的甲醇溶液(1.77摩/升，6毫升)通过与化合物28的制备方法(实施例18)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：530[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6+重水)：δ1.23(m，2H)，1.48(s，7H)，1.94(s，2H)，2.83(s，2H)，3.03(s，2H)，3.52(s，2H)，5.38(s，1H)，7.00～7.40(m，6H)，7.70～8.10(m，5H)。
实施例21：(R)-N-(2-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚基氨基) 乙基)-4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6- 基)苯甲酰胺(化合物31)
步骤21a.(R)-7-(2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲酰胺基)乙基氨基)庚酸乙酯(化合物602-31)
所述标题化合物602-31(0.40克，19.0％)是由化合物601(1.5克，3.75毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(0.888克，3.75毫摩)的N，N-二甲基甲酰胺(50毫升)溶液通过与化合物602-28的制备方法(实施例18)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：557[M+1]+。
步骤21b.(R)-N-(2-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚基氨基)乙基)-4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲酰胺(化合物31)
制备出的所述标题化合物31是黄色固体形式(0.072克，18.7％)，是由化合物602-31(0.396克，0.71毫摩)以及羟胺的甲醇溶液(1.77摩/升，8毫升)通过与化合物28的制备方法(实施例18)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：544[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6+重水)：δ1.20(s，4H)，1.48(s，7H)，1.93(s，2H)，2.69(s，2H)，2.89(s，2H)，3.46(s，2H)，5.37(s，1H)，7.10～7.50(m，6H)，7.85(s，4H)，7.99(s，1H)。
实施例22：(R)-N-羟基-6-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7 氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)己酰胺(化合物32) 的制备方法
步骤22a.(R)-6-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)己酸甲酯(化合物113-32)
向二甲基甲酰胺(10毫升)以及甲醇(5毫升)的混合液中加入氢氧化钾(168.0毫克，3.0毫摩)以及盐酸6-氨基己酸甲酯(545.0毫克，3.0毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌10分钟并且通过降低压力在40℃下除去甲醇。向上述混合液中加入化合物112(363毫克，1毫摩)并且在室温下搅拌过夜。在减压条件下除去二甲基甲酰胺并且将得到的残余物悬浮于水中。收集得到的固体并且进行干燥，从而获得产物113-32(280毫克，59％)。LCMS：472[M+1]+。
步骤22b.(R)-N-羟基-6-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基-氨基)己酰胺(化合物32)
将化合物113-32(280.0毫克，0.59毫摩)以及羟胺/甲醇(2.7毫升，4.75毫摩)组成的混合液在室温下搅拌0.5小时。利用醋酸将所述反应混合液调节至中性并且进行浓缩。将得到的残余物悬浮于水中并且分离得到的沉淀并且进行干燥，从而获得粗产物，利用制备型高效液相色谱(HPLC)对所述粗产物进行纯化，从而获得灰黄色固体形式的产物32(48毫克，两个步骤中的产率为17％)。LCMS：473[M+1]；1H NMR(二甲基亚砜-d6.).δ1.27(m，2H)，1.46(m，4H)，1.52(d，J＝7.2Hz，3H)，1.94(t，J＝7.2Hz，2H)，2.59(t，J＝7.2Hz，2H)，3.81(s，2H)，5.47(m，1H)，7.09(s，1H)，7.19(t，J＝7.5Hz，1H)，7.30(t，J＝7.5Hz，2H)，7.41(d，J＝7.5Hz，4H)，7.76(m，3H)，8.05(s，1H)，10.32(s，1H)，12.00(s，1H)。
实施例23：(R)-N-羟基-7-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7 氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)庚酰胺(化合物33) 的制备方法
步骤23a.(R)-7-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)庚酸甲酯(化合物113-33)
所述标题化合物113-33(102毫克，25％)是由化合物112(300毫克，0.83毫摩)以及7-氨基-庚酸盐酸盐(487毫克，2.49毫摩)通过与化合物113-32的制备方法(实施例22)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：486[M+1]+。
步骤23b.(R)-N-羟基-7-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基-氨基)-庚酰胺(化合物33)
制备出的所述标题化合物33是灰黄色固体形式(28毫克，29％)，是由化合物113-33(97毫克，0.2毫摩)以及羟胺/甲醇(3毫升，5.31毫摩)通过与化合物32的制备方法(实施例22)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：487[M+1]+；1H NMR：(二甲基亚砜-d6.).δ1.24(m，2H)，1.43(m，6H)，1.52(d，J＝7.2Hz，3H)，1.93(t，J＝7.5Hz，2H)，1.95(m，2H)，3.71(s，2H)，5.50(m，1H)，7.06(s，1H)，7.19(t，J＝7.2Hz，1H)，7.30(t，J＝7.2Hz，2H)，7.40(d，J＝8.1Hz，2H)，7.42(d，J＝7.5Hz，2H)，7.71(t，J＝8.1Hz，3H)，8.05(s，1H)，8.62(s，1H)，10.29(s，1H)，11.95(s，1H)。
实施例24：(R)-N-羟基-8-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7 氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)-辛酰胺(化合物 34)的制备方法
步骤24a.(R)-8-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)辛酸甲酯(化合物113-34)
制备出的所述标题化合物113-34是固体形式(110毫克，55％)，是由化合物112(145毫克，0.4毫摩)以及8-氨基辛酸盐酸盐(250毫克，1.2毫摩)通过与化合物113-32的制备方法(实施例22)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：500[M+1]+。
步骤24b.(R)-N-羟基-8-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基-氨基)-辛酰胺(化合物34)
制备出的所述标题化合物34是灰黄色固体形式(41毫克，37％)，是由化合物113-34(110毫克，0.22毫摩)以及羟胺/甲醇(5毫升，8.85毫摩)通过与化合物32的制备方法(实施例22)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：501[M+1]+；1HNMR：(二甲基亚砜-d6.).δ1.24(s，8H)，1.46(m，4H)，1.53(d，J＝6.9Hz，3H)，1.94(t，J＝6.9Hz，2H)，3.70(s，2H)，5.50(m，1H)，7.07(s，1H)，7.20(t，J＝7.2Hz，1H)，7.30(t，J＝7.2Hz，2H)，7.40(d，J＝8.4Hz，2H)，7.43(d，J＝7.2Hz，2H)，7.71(d，J＝8.4Hz，2H)，7.77(d，J＝8.1Hz，1H)，8.06(s，1H)，8.67(s，1H)，10.33(s，1H)，11.98(s，1H)。
实施例25：(R)-2(4-(4-(1-(4-氟苯基)乙基氨基)-7 氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)-N-羟基乙酰胺(化合 物37)的制备方法
步骤25a.(R)-N-(1-(4-氟苯基)乙基)-6-(4-甲氧基苯基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-4-胺(化合物408)
将化合物404(2.59克，10.0毫摩)以及(R)-1-(4-氟苯基)乙胺(2.75克，20.0毫摩)的正丁醇(30毫升)溶液所组成的混合液在140℃下搅拌过夜。将所述混合液冷却，过滤，利用乙醚进行洗涤，从而获得黄色固体形式的所述产物408(2.3克，63％)。LCMS：363[M+1]+。
步骤25b.(R)-4-(4-(1-(4-氟苯基)乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯酚(化合物409)
在氮气环境中，在1小时的时间内于0℃下向化合物408(2.1克，5.6毫摩)的二氯甲烷(150毫升)溶液中逐滴加入三溴化硼(5.7毫升，15.5毫摩)的二氯甲烷(190毫升)溶液。当上述加入步骤完成之后，将所述混合液回暖至室温并且搅拌过夜。随后在-20℃下向其中加入20毫升水。将所述混合液回暖至室温，利用乙酸乙酯(150毫升x3)进行提取，利用盐水进行洗涤，过滤并且浓缩，从而获得黄色固体形式的所述产物409(1.6克，81％)。LCMS：349[M+1]+。
步骤25c.(R)-2-(4-(4-(1-(4-氟苯基)乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)乙酸乙酯(化合物410-37)
向化合物409(522毫克，1.5毫摩)以及碳酸钾(345毫克，2.5毫摩)的N，N-二甲基甲酰胺(5.0毫升)溶液组成的混合液中加入7-溴庚酸乙酯(356毫克，1.5毫摩)并且将所述混合液在70℃下搅拌20小时。通过降低压力在50℃下除去二甲基甲酰胺，并且随后向其中加入30毫升乙酸乙酯。用水洗涤得到的有机层，通过无水硫酸钠进行干燥，过滤，浓缩，从而获得化合物410-37(385毫克，51％)。LCMS：505[M+1]+。
步骤25d.(R)-2-(4-(4-(1-(4-氟苯基)乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)-N-羟基乙酰胺(化合物37)
向装有化合物410-37(170毫克，0.33毫摩)的长颈瓶中加入饱和的羟胺的甲醇溶液(5.0毫升)。将所述混合液在室温下搅拌30分钟。随后利用醋酸将其中和至pH等于7并且进行浓缩。将所述残余物用水进行洗涤，蒸发，从而获得粗产物，利用柱层析法对所述粗产物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述产物37(40毫克，25％)：LCMS：492[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.29～1.54(m，9H)，1.65～1.74(m，2H)，1.94(t，J＝7.5Hz，2H)，3.98(t，J＝6.3Hz，2H)，5.47(t，J＝8.1Hz，1H)，6.91(s，1H)，6.98(d，J＝9.3Hz，2H)，7.42～7.46(m，3H)，7.68(d，J＝8.7Hz，3H)，8.02(s，1H)，8.60(s，1H)，10.29(s，1H)，11.87(s，1H)。
实施例26：7-(4-(4-(苯甲基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d] 嘧啶基-6-基)苯氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物38)的制备方法
步骤26a.N-苯甲基-6-(4-甲氧基苯基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-4-胺(化合物411)
将化合物404(2.59克，10毫摩)以及苯甲胺(3.21克，30毫摩)的正丁醇(30毫升)溶液所组成的混合液在140℃下搅拌过夜。将所述混合液冷却，过滤，利用乙醚进行洗涤，从而获得黄色固体形式的所述产物411(3.0克，93％)。LCMS：331[M+1]+。
步骤26b.4-(4-(苯甲基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯酚(化合物412)
在氮气环境中，在1小时的时间内于0℃下向化合物411(2.5克，7.6毫摩)的二氯甲烷(202毫升)溶液中加入三溴化硼(7.6毫升，20.7毫摩)的二氯甲烷(253毫升)溶液。当上述加入步骤完成之后，将所述混合液回暖至室温并且搅拌过夜。随后在-20℃下向其中加入水(20毫升)。将所述混合液回暖至室温，利用乙酸乙酯(150毫升x3)进行提取。将得到的有机层利用盐水进行洗涤，干燥，过滤，浓缩，从而获得黄色固体形式的所述产物412(1.43克，59％)。LCMS：317[M+1]+。
步骤26c.7-(4-(4-(苯甲基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)庚酸乙酯(化合物413-38)
向化合物412(300毫克，0.9毫摩)以及碳酸钾(248毫克，1.8毫摩)的N，N-二甲基甲酰胺(4.0毫升)溶液组成的混合液中加入7-溴庚酸乙酯(213毫克，0.9毫摩)并且将所述混合液在70℃下搅拌20小时。通过降低压力在50℃下除去二甲基甲酰胺，并且利用30毫升乙酸乙酯进行稀释。用水洗涤得到的有机层，通过无水硫酸钠进行干燥，过滤并且浓缩，从而获得化合物413-38(150毫克，35％)。LCMS：473[M+1]+。
步骤26d.7-(4-(4-(苯甲基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物38)
向装有化合物413-38(100毫克，0.21毫摩)的长颈瓶中加入饱和的羟胺的甲醇溶液(4.0毫升)。将所述混合液在室温下搅拌30分钟。随后利用醋酸将其中和至pH等于7。将所述混合液在减压条件下浓缩，并且将所述残余物用水进行洗涤，蒸发。利用柱层析法对得到的残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述产物(40毫克，42％)。LCMS：460[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.30～1.54(.m，6H)，
Figure G2007800418082D03551
(t，J＝8.1Hz，2H)，1.96(t，J＝7.2Hz，2H)，4.00(t，J＝6.0Hz，2H)，4.81(d，J＝4.5Hz，2H)，7.04(d，J＝9.0Hz，2H)，7.12(s，1H)，7.32-(m，5H)，7.73(d，J＝8.4Hz，2H)，8.32(s，1H)，9.45(s，1H)，10.36(s，1H)，12.88(s，1H)。
实施例27：(R)-N-羟基-4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡 咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲酰胺(化合物39)的制备方法
将化合物110(149毫克，0.4毫摩)以及羟胺/甲醇(3毫升，5.31毫摩)的混合液在室温下搅拌0.5小时。利用醋酸将所述反应混合液调节至中性并且进行浓缩。将得到的残余物悬浮于水中并且分离得到的沉淀并且进行干燥，从而获得粗产物，利用制备型高效液相色谱(HPLC)对所述粗产物进行纯化，从而获得灰黄色固体形式的产物39(42毫克，28％)：LCMS：374[M+1]+；1HNMR：(二甲基亚砜-d6.)：.δ1.53(d，J＝7.2Hz，3H)，5.50(m，1H)，7.22(m，2H)，7.31(t，J＝7.5Hz，2H)，7.42(d，J＝7.5Hz，2H)，7.84(m，5H)，8.08(s，1H)，9.06(s，1H)，11.23(s，1H)，12.13(s，1H)。
实施例28：(R，E)-N-羟基-3-(4-((4-(4-(1-苯基乙基氨 基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基氨基)甲基)苯基) 丙烯酰胺(化合物42)
步骤28a.(R，E)-3-(4-((4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基-氨基)甲基)苯基)丙烯酸甲酯(化合物703-42)
将化合物506(200毫克，0.6毫摩)以及4-甲酰基肉桂酸(140毫克，0.8毫摩)的40毫升甲醇溶液组成的混合液回流1小时。随后向所述混合液中加入氰代硼氢化钠(50毫克，0.8毫摩)并且将所述混合液再搅拌2小时。向所述混合液中逐滴加入亚硫酰氯(0.5毫升)并且搅拌3小时。利用薄层层析法(TLC)对所述反应进行监控。随后在减压条件下将所述混合液浓缩。将得到的残余物用水进行洗涤并且过滤，从而获得黄色固体形式的化合物703-42(208毫克，68.8％)。LCMS：504[M+1]+。
步骤28b.(R，E)-N-羟基-3-(4-((4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基氨基)甲基)苯基)丙烯酰胺(化合物42)
将703-42(0.208克，0.41毫摩)以及饱和的羟胺的甲醇溶液(1.77摩/升，10毫升)组成的混合液在室温下搅拌6小时。利用醋酸将所述混合液的pH调整至7-8。除去溶剂并且将所述残余物悬浮于水中，过滤并且纯化，从而获得黄色固体形式的化合物42(0.060克，29.0％)。熔点265.1～294.1℃，LC-MS：505[M+1]+，1H NMR(300MHz，二甲基亚砜-d6)：δ1.49(d，J＝7.2Hz，3H)，4.32(d，J＝4.8Hz，2H)，5.45(m，1H)，6.30～6.50(m，1H)，6.60(d，J＝8.4Hz，2H)，6.75(s，1h)，7.16(t，J＝7.2Hz，J＝6.6Hz，1H)，7.27(t，J＝7.5Hz，2H)，7.30～7.60(m，10H)，7.96(s，1H)，8.95(s，1H)，10.68(s，1H)，11.64(s，1H)。
实施例29：(R)-N-羟基-4-((4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7 氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基氨基)甲基)苯甲酰胺(化 合物43)
步骤29a.(R)-4-((4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基氨基)甲基)苯甲酸甲酯(化合物706-43)
将化合物506(200毫克，0.6毫摩)以及4-甲酰基苯甲酸(120毫克，0.8毫摩)的甲醇(40毫升)悬浮液回流1小时。随后向所述混合液中加入氰基硼氢化钠(50毫克，0.8毫摩)并且再搅拌2小时。向所述混合液中逐滴加入亚硫酰氯(0.2毫升)并且搅拌3小时。利用薄层层析法(TLC)对所述反应进行监控。随后在减压条件下将所述混合液浓缩。将得到的残余物用水进行洗涤并且过滤，从而获得黄色固体形式的化合物706-43(267毫克，93.0％)。LCMS：478[M+1]+。
步骤29b.(R)-N-羟基-4-((4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基-氨基)甲基)苯甲酰胺(化合物43)
将706-43(0.267克，0.56毫摩)以及饱和的羟胺的甲醇溶液(1.77摩/升，8毫升)组成的混合液在室温下搅拌6小时。利用醋酸将所述混合液的pH调整至7-8并且除去溶剂。将所述残余物用水进行稀释，过滤并且纯化，从而获得黄色固体形式的化合物43(0.065克，24.3％)：熔点169.3～170.9℃，LC-MS：479[M+1]+，1H NMR(300MHz，二甲基亚砜-d6)：δ1.49(d，J＝7.2Hz，3H)，4.34(d，J＝5.4Hz，2H)，5.45(m，1H)，6.52(t，J＝6.0Hz，1H)，6.29(d，J＝8.7Hz，2H)，6.75(s，1H)，7.16(t，J＝7.5Hz，1H)，7.27(t，J＝7.2Hz，2H)，7.30～7.50(m，6H)，7.57(d，J＝7.8Hz，1H)，7.68(d，J＝8.1Hz，2H)，7.96(s，1H)，8.94(s，1H)，11.11(s，1H)，11.65s，1H)。
实施例30：(R)-N-羟基-4-((4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7 氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)甲基)苯甲酰胺(化 合物44)的制备方法
步骤30a.(R)-6-(4-(氨基甲基)苯基)-N-(1-苯基乙基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-4-胺(化合物801)
在一个密闭体系中将化合物112(500毫克，1.38毫摩)的氨水(60毫升)混合液搅拌并且加热至110℃保持24小时。将所述混合液冷却至室温并且分离得到的沉淀。将所述溶液用水进行稀释，调整pH至2。分离得到的沉淀并且干燥，从而获得灰色固体形式的标题化合物801(204毫克，43％)：LCMS：344[M+1]+。
步骤30b.(R)-4-((4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)甲基)苯甲酸甲酯(化合物802-44)
将化合物801(170毫克，0.5毫摩)、4-甲酰基苯甲酸(75毫克，0.5毫摩)以及甲醇(40毫升)所组成的混合液进行搅拌并且加热回流1小时。之后向所述混合液中加入氰基硼氢化钠(50毫克，0.75毫摩)并且将所述混合液搅拌回流2小时。在此之后，向所述混合液中加入亚硫酰二氯(90毫克，0.75毫摩)并且将所述混合液再搅拌回流5小时。在减压条件下除去溶剂并且将得到的残余物用水进行洗涤，从而获得粗产物，利用柱层析法对所述粗产物进行纯化，从而获得灰色固体形式的所述标题化合物802-44(220毫克，86％)。LCMS：492[M+1]+。
步骤30c.(R)-N-羟基-4-((4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)甲基)苯甲酰胺(化合物44)
向化合物802-44(150毫克，0.3毫摩)中添加新鲜制备的羟胺溶液(1.7毫升，3毫摩)。将所述反应混合液在20℃下搅拌30分钟并且随后回暖至室温。利用薄层层析法(TLC)对上述反应过程进行监控。利用醋酸将所述混合液调节至中性并且在减压条件下浓缩得到的混合液，从而获得残余物，利用制备型高效液相色谱(HPLC)对所述残余物进行纯化，从而获得灰色固体形式的所述标题化合物44(24毫克，18％)：LCMS：493[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜-d6.)
Figure G2007800418082D03592
(d，J＝6.9Hz，3H)，3.68(d，J＝12.9Hz，4H)，5.48(m，1H)，7.05(s，1H)，7.17(t，J＝7.8Hz，1H)，7.37(t，J＝7.2Hz，2H)，7.70(m，6H)，8.03(s，1H)，8.93(s，1H)，11.12(s，1H)，11.94(s，1H)。
实施例31：(R，E)-N-羟基-3-(4-((4-(4-(1-苯基乙基氨 基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)甲基)苯基) 丙烯酰胺(化合物45)的制备方法
步骤31a.(R，E)-3-(4-((4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)甲基)苯基)丙烯酸甲酯(化合物802-45)
所述标题化合物802-45(153毫克，48％产率)是由801(211毫克，0.62毫摩)以及(E)-3-(4-甲酰基苯基)丙烯酸甲酯(118毫克，0.62毫摩)通过与化合物802-44的制备方法(实施例30)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：517[M+1]+。
步骤31b.(R，E)-N-羟基-3-(4-((4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基氨基)甲基)苯基)丙烯酰胺(化合物45)
制备出的所述标题化合物45是灰色固体形式(40毫克，26％产率)，是由化合物802-45(154毫克，0.30毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.7毫升，3.0毫摩)通过与化合物44的制备方法(实施例30)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：518[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.)δ1.50(d，J＝7.2Hz，3H)，3.70(d，J＝6.9Hz，4H)，5.48(t，J＝9.6Hz，1H)，6.39(d，J＝15.9Hz，1H)，7.06(s，1H)，7.18(t，1H)，7.29(m，4H)，7.40(d，J＝7.5Hz，2H)，7.70(d，J＝8.1Hz，2H)，7.82(d，J＝8.4Hz，1H)，8.04(s，1H)，12.00(s，1H)。
实施例32：(R)-N-羟基-4-(2-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨 基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)乙 氧基)丁酰胺(化合物49)的制备方法
步骤32a.(R)-2-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)乙醇(化合物901)
将化合物112(1.37克，3.78毫摩)、2-(哌嗪基-1-基)乙醇(590毫克，4.54毫摩)以及碳酸钾(1.07克，7.56毫摩)的N，N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液所组成的混合液在50℃下搅拌过夜。随后将所述混合液冷却至室温并且在减压条件下除去溶剂。将所述残余物用水进行洗涤，并且干燥，从而获得褐色固体形式的所述标题化合物901(1.552克，90.2％)：LCMS：457[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜-d6)
Figure G2007800418082D03602
δ1.50(d，J＝7.2，3H)，2.34(m，8H)，3.44(s，4H)，4.36(s，1H)，5.48(m，1H)，7.06(s，1H)，7.15(t，J＝7.5，1H)，7.29(m，6H)，，7.73(d，J＝8.1，2H)，7.79(d，J＝8.4，1H)，8.04(s，1H)，12.00(s，1H)。
步骤32b.(R)-4-(2-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)乙氧基)丁酸甲酯(化合物902-49)
在冰浴温度下，向化合物901(456毫克，1毫摩)的二甲基甲酰胺(20毫升)溶液中加入氢化钠(24毫克，1毫摩)。在这一温度下将所述混合液搅拌30分钟，并且随后向其中加入4-溴丁酸甲酯(231毫克，1.2毫摩)并且将所述混合液在50℃下搅拌过夜。在减压条件下除去溶剂，从而获得所述粗产物，利用柱层析法对所述粗产物进行纯化，从而获得灰色固体形式的标题化合物902-49(225毫克，40％)：LCMS：481[M+1]+。
步骤32c.(R)-N-羟基-4-(2-(4-((4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)甲基)哌嗪基-1-基)乙氧基)丁酰胺(化合物49)
向化合物902-49(147毫克，0.377毫摩)中添加新鲜制备的羟胺溶液(4.3毫升，7.5毫摩)。将所述反应混合液在0℃下搅拌30分钟并且随后回暖至室温。利用薄层层析法(TLC)对上述反应过程进行监控。利用醋酸将所述混合液调节至中性并且在减压条件下浓缩得到的混合液，从而获得残余物，利用制备型高效液相色谱(HPLC)对所述残余物进行纯化，从而获得灰色固体形式的所述标题化合物49(70毫克，48％)：LCMS：482[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜-d6.)δ1.50(d，J＝6.3Hz，3H)，1.76(s，4H)，2.39(m，10H)，3.48(m，4H)，4.17(s，2H)，4.35(s，1H)，5.50(t，J＝7.5，1H)，6.76(s，1H)，7.24(m，1H)，7.32(m，2H)，7.32(m，2H)，7.42(m，6H)，7.82(d，J＝8.1，2H)，8.10(s，1H)，8.61(s，1H)，10.27(s，1H)。
实施例33：(R)-N-羟基-5-(2-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨 基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)乙 氧基)戊酰胺(化合物50)的制备方法
步骤33a.(R)-5-(2-(4-((4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)甲基)哌嗪基-1-基)乙氧基)戊酸甲酯(化合物902-50)
所述标题化合物902-50(131毫克，29％产率)是由901(361毫克，0.79毫摩)以及5-溴戊酸盐(183毫克，0.95毫摩)通过与化合物902-49的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：517[M+1]+。
步骤33b.(R)-N-羟基-5-(2-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)乙氧基)戊酰胺(化合物50)
制备出的所述标题化合物50是灰色固体形式(90毫克，69％产率)，是由化合物902-50(130毫克，0.23毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.3毫升，2.3毫摩)通过与化合物49的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：572[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.)δ1.23(s，2H)，1.50(d，J＝6.9Hz，3H)，1.78(t，J＝7.5Hz，2H)，2.41(s，8H)，3.30(s，2H)，3.48(m，3H)，4.17(s，2H)，4.35(s，1H)，5.50(t，J＝8.1Hz，1H)，6.75(s，1H)，7.18(t，J＝6.9Hz，1H)，7.29(t，J＝7.2Hz，1H)，7.42(m，5H)，7.81(d，J＝8.1Hz，1H)，8.09(s，1H)，8.60(s，1H)，10.21(s，1H)。
实施例34：(R)-N-羟基-6-(2-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨 基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)乙 氧基)己酰胺(化合物51)的制备方法
步骤34a.(R)-6-(2-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)乙氧基)己酸甲酯(化合物902-51)
制备出的所述标题化合物902-51(192毫克，40％产率)是由901(375毫克，0.82毫摩)以及6-溴己酸甲酯(204毫克，0.98毫摩)通过与化合物902-49的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：585[M+1]+。
步骤34b.(R)-N-羟基-6-(2-(4-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-1-基)乙氧基)己酰胺(化合物51)
制备出的所述标题化合物51是灰色固体形式(120毫克，63％产率)，是由化合物902-51(190毫克，0.33毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.9毫升，3.3毫摩)通过与化合物49的制备方法(实施例32)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：586[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.)δ1.00(t，J＝8.1Hz，2H)，1.31(t，J＝7.2Hz，2H)，1.50(d，J＝6.6Hz，3H)，1.78(t，J＝6.6Hz，2H)，2.37(s，8H)，3.48(m，3H)，4.17(s，2H)，4.35(s，1H)，5.50(t，J＝8.1Hz，1H)，6.75(s，1H)，7.18(t，J＝6.9Hz，1H)，7.29(t，J＝7.2Hz，1H)，7.42(m，5H)，7.81(d，J＝8.1Hz，1H)，8.04(s，1H)，8.60(s，1H)，10.22(s，1H)。
实施例35：(R)-N-羟基-6-(1-(4-(4-(1-苯基乙基氨基) -7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-4-氨基)己酰 胺(化合物55)的制备方法
步骤35a.{6-[4-(1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸-8-甲基)-苯基]-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-4-基}-(1-苯基-乙基)-胺(化合物1001)
向化合物112(1.1克，3.0毫摩)的二甲基甲酰胺(10毫升)溶液中加入1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸烷(1.0克，7.0毫摩)。将所述反应混合液在10℃下搅拌1小时。在减压条件下蒸发溶剂并且将得到的残余物用水洗涤，干燥，从而获得褐色固体形式的化合物1001(1.2克，93％产率)。LC-MS：469[M+1]+。
步骤35b.1-{4-[4-(1-苯基-乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基]-苯甲基}-哌啶基-4-酮(化合物1002)
将化合物1001(1.2克，2.6毫摩)的四氢呋喃(20毫升)溶液以及20％的硫酸(40毫升)在50℃下搅拌4小时。利用饱和的碳酸氢钠将所述混合液调节至中性。分离得到的沉淀并且进行过滤，干燥，从而获得1002(1.0克，92％产率)。LC-MS：426[M+1]+。
步骤35c.6-(1-{4-[4-(1-苯基-乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基]-苯甲基}-哌啶基-4-氨基)-己酸甲酯(化合物1003-55)
利用三乙酰氧基硼氢化钠(92毫克，1.2毫摩)对化合物1002(130毫克，0.31毫摩)、6-氨基-己酸甲酯(46毫克，0.31毫摩)以及醋酸(18.6毫克，0.31毫摩)的1，2-二氯乙烷(10毫升)溶液进行处理并且在25℃下搅拌过夜。向所述反应混合液中加入饱和的碳酸氢钠(10毫升)并且在减压条件下蒸发溶剂从而得到残余物。将所述残余物溶解于四氢呋喃中并进行过滤。浓缩滤液并且利用薄层层析法(TLC)对得到的粗产物进行纯化，从而获得褐色固体形式的化合物1003-55(120毫克，71％产率)：LC-MS：555[M+1]+。
步骤35d.6-(1-{4-[4-(1-苯基-乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基]-苯甲基}-哌啶基-4-氨基)-己酸羟胺(化合物55)
向化合物1003-55(60毫克，0.11毫摩)中加入新鲜制备的羟胺溶液(1.0毫升，1.8毫摩)。将所述反应混合液超声波降解40分钟。利用薄层层析法对所述反应过程进行监控。当所述反应完成之后，利用醋酸将所述混合液调节至中性。在减压条件下对所述混合液进行浓缩并且将得到的残余物用水进行洗涤并且干燥，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物55(42毫克，70％)：LCMS：556[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.
Figure G2007800418082D03652
1.25(m，6H)，1.52(d，J＝6.6Hz，4H)，1.94(m，5H)，2.59(t，J＝7.5Hz，3H)，2.79(d，J＝11.1Hz 2H)，3.4(s，2H)，5.48(m，1H)，7.07(s，1H)，7.18(s，1H)，7.26(m，1H)，7.31(m，5H)，7.42(m，2H)，7.72(d，J＝8.1Hz，1H)，7.72(d，J＝8.1Hz，1H)，7.80(d，J＝8.7Hz，1H)，8.04(s，1H)，11.98(s，1H)。
实施例36：(R)-N-羟基-7-(1-(4-(4-(1-苯基乙基氨基) -7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-4-氨基)庚酰 胺(化合物56)
步骤36a.7-(1-{4-[4-(1-苯基-乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基]-苯甲基}-哌啶基-4-氨基)-庚酸甲酯(化合物1003-56)
制备出的所述标题化合物1003-56是黄色固体形式(60毫克，36％产率)，是由1002以及7-氨基庚酸甲酯(94毫克，0.588毫摩)通过与化合物1003-55的制备方法(实施例35)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：569[M+1]+。
步骤36b.7-(1-{4-[4-(1-苯基-乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基]-苯甲基}-哌啶基-4-氨基)-庚酸羟胺(化合物56)
制备出的所述标题化合物56是黄色固体形式(30毫克，50％产率)，是由化合物1003-56(60毫克，0.11毫摩)通过与化合物55的制备方法(实施例35)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：570[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.)δ.1.25(m，6H)，1.48(m，5H)，1.53(d，J＝7.5Hz，4H)，1.98(d，J＝8.1Hz，4H)，2.7(t，J＝6.9Hz，3H)，2.53(d，J＝11.1Hz 2H)，3.47(s，2H)，5.48(m，1H)，7.11(s，1H)，7.19(m，1H)，7.31(m，5H)，7.42(m，2H)，7.74(d，J＝8.4Hz，2H)，7.85(d，J＝8.1Hz，1H)，8.06(s，1H)，12.01(s，1H)。
实施例37：(R)-N-羟基-8-(1-(4-(4-(1-苯基乙基氨基) -7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯甲基)哌嗪基-4-氨基)辛酰 胺(化合物57)的制备方法
步骤37a.8-(1-{4-[4-(1-苯基-乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基]-苯甲基}-哌啶基-4-氨基)-辛酸甲酯(化合物1003-57)
制备出的所述标题化合物1003-57是黄色固体形式(70毫克，36％产率)，是由1002以及8-氨基-辛酸甲酯(102毫克，0.588毫摩)通过与化合物1003-55的制备方法(实施例35)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：583[M+1]+。
步骤37b.8-(1-{4-[4-(1-苯基-乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基]-苯甲基}-哌啶基-4-氨基)-辛酸羟胺(化合物57)
制备出的所述标题化合物57是黄色固体形式(40毫克，67％产率)，是由化合物1003-57(60毫克，0.10毫摩)通过与化合物55的制备方法(实施例35)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：584[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.)δ1.23(m，6H)，1.42(m，7H)，1.73(d，J＝6.9Hz，4H)，1.96(d，4H)，2.64(t，J＝6.9Hz，3H)，2.80(d，J＝11.7Hz，2H)，3.45(s，2H)，5.49(m，1H)，7.08(s，1H)，7.20(m，1H)，7.31(m，5H)，7.42(m，2H)，7.72(d，J＝8.4Hz，2H)，7.80(d，J＝7.8Hz，1H)，，8.04(s，1H)，11.99(s，1H)。
实施例38：(R)-N-羟基-6-(2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基) -7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)乙基氨基)己酰胺(化 合物59)的制备方法
步骤38a.(R)-2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)乙腈(化合物1101)
将406(4.0克，12.12毫摩)、碳酸钾(11.6克，90.60毫摩)以及2-氯乙腈(0.91克，12.12毫摩)的丙酮溶液所组成的混合液在55℃下搅拌过夜。随后对所述反应混合液进行过滤以除去碳酸钾。蒸发滤液至干燥并且对得到的固体进行过滤，利用甲醇进行洗涤，并且干燥，从而获得白色固体形式的1101(0.954克，21％)：LCMS：370[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.54(d，J＝7.2Hz，3H)，5.22(s，2H)，5.50(q，J＝7.2Hz，1H)，7.02(s，1H)，7.16-7.20(m，3H)，7.28-7.33(m，2H)，7.43(d，J＝7.2Hz，1H)，7.76-7.81(m，3H)，8.04(s，1H)，11.96(s，1H)。
步骤38b.(R)-6-(4-(2-氨基乙氧基)苯基)-N-(1-苯基乙基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-4-胺(化合物1102)
向0℃下的1101(0.954克，2.58毫摩)的四氢呋喃(120毫升)溶液中缓慢加入氢化铝锂(0.294克，7.74毫摩)。将所述混合液回暖至室温20分钟，随后将水：15％的氢氧化钠∶水以1∶1∶3的比例加入，过滤并且蒸发，从而获得白色固体形式的1102(0.788克，82.5％)：LCMS：374[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.53(d，J＝6.9Hz，3H)，2.88(t，J＝5.7Hz，2H)，3.96(t，J＝5.7Hz，2H)，5.50(q，J＝6.9Hz，1H)，6.96(s，1H)，7.02(d，J＝6.0Hz，2H)，7.17-7.22(m，1H)，7.30(t，J＝5.5Hz，2H)，7.43(d，J＝6.9Hz，2H)，7.71(d，J＝9.0Hz，3H)，8.04(s，1H)，11.93(s，1H)。
步骤38c.(R)-6-(2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)乙基氨基)己酸乙酯(化合物1103-59)
将6-溴己酸乙酯(477毫克，2.14毫摩)以及1102(400毫克，1.07毫摩)的二甲基甲酰胺(5毫升)溶液所组成的混合液在50℃下搅拌过夜。在反应过后，蒸发所述溶剂二甲基甲酰胺并且向其中加入20毫升二乙醚。将所述混合液过滤，利用二乙醚进行洗涤并且干燥，从而获得黄色固体形式的1103-59(100毫克)：LCMS：516[M+1]+。
步骤38d.(R)-N-羟基-6-(2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)乙基氨基)己酰胺(化合物59)
向装有化合物1103-59(100毫克，0.19毫摩)的长颈瓶中加入羟胺的甲醇溶液(4.0毫升)。将所述混合液在室温下搅拌30分钟。随后利用醋酸将其pH调整至7。将所述混合液浓缩，从而获得残余物，利用制备型高效液相色谱(HPLC)对所述残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的化合物59(64毫克，67％)。LCMS：503[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.26-1.31(m，2H)，1.53(d，J＝6Hz，2H)，1.96(t，J＝3Hz，2H)，2.79(t，J＝6Hz，2H)，3.15-3.21(m，2H)，4.20(s，2H)，5.50(q，J＝6.9Hz，1H)，6.98(s，1H)，7.02(d，J＝6.0Hz，2H)，7.17-7.20(m，1H)，7.30(t，J＝5.5Hz，2H)，7.43(d，J＝6.9Hz，2H)，7.71(d，J＝9.0Hz，3H)，8.04(s，1H)，10.36(s，1H)，11.93(s，1H)。
实施例39：(R)-N-羟基-7-(2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基) -7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)乙基氨基)庚酰胺(化 合物60)的制备方法
步骤39a.(R)-7-(3-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)丙基氨基)庚酸甲酯(化合物1103-60)
所述标题化合物1103-60(112毫克，19％产率)是由1102(400毫克，1.07毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(507毫克，2.14毫摩)通过与化合物1103-59的制备方法(实施例38)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：530[M+1]+。
步骤39b.(R)-N-羟基-7-(2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)乙基氨基)庚酰胺(化合物60)
所述标题化合物60(73毫克，69％产率)是由化合物1103-60(110毫克，0.20毫摩)通过与化合物59的制备方法(实施例38)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：517[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.28(s，4H)，1.49-1.54(m，7H)，1.94(t，J＝6Hz，2H)，2.77(t，J＝6Hz，2H)，3.15-3.21(m，2H)，4.16(s，2H)，5.52(q，J＝6.9Hz，1H)，6.98(s，1H)，7.02(d，J＝6.0Hz，2H)，7.17-7.20(m，1H)，7.30(t，J＝5.5Hz，2H)，7.43(d，J＝6.9Hz，2H)，7.71(d，J＝9.0Hz，3H)，8.04(s，1H)，10.33(s，1H)，11.92(s，1H)。
实施例40：(R)-N-羟基-8-(2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基) -7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)乙基氨基)辛酰胺(化 合物61)的制备方法
步骤40a.(R)-8-(3-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)丙基氨基)辛酸甲酯(化合物1103-61)
所述标题化合物1103-61(95毫克，16％产率)是由1102(400毫克，1.07毫摩)以及8-溴辛酸盐(507毫克，2.14毫摩)通过与化合物1103-59的制备方法(实施例38)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：530[M+1]+。
步骤40b.(R)-N-羟基-8-(2-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯氧基)乙基氨基)辛酰胺(化合物61)
所述标题化合物61(55毫克，59％产率)是由化合物1103-61(95毫克，0.17毫摩)通过与化合物59的制备方法(实施例38)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：531[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.26(s，6H)，1.42-1.53(m，7H)，1.90(t，J＝6Hz，2H)，2.81(t，J＝6Hz，2H)，3.14-3.18(m，2H)，4.17(s，2H)，5.50(q，J＝6.9Hz，1H)，6.95(s，1H)，7.04(d，J＝6.0Hz，2H)，7.15-7.20(m，1H)，7.30(t，J＝5.5Hz，2H)，7.43(d，J＝6.9Hz，2H)，7.71(d，J＝9.0Hz，3H)，8.04(s，1H)，10.32(s，1H)，11.92(s，1H)。
实施例41：(R)-N-羟基-6-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7 氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基氨基)己酰胺(化合物66) 的制备方法
步骤41a.(R)-6-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基氨基)己酸乙酯(化合物1201-66)
将化合物506(500毫克，1.52毫摩)、6-溴己酸乙酯(338.7毫克，1.52毫摩)以及二甲基甲酰胺(15毫升)组成的混合液在50℃下搅拌12小时。在高真空条件下除去所述溶剂并且利用制备型高效液相色谱(HPLC)对得到的粗产物进行纯化，从而获得黄色固体形式的目标化合物1201-66(80毫克，10％)。LCMS：472[M+1]+。
步骤41b.(R)-N-羟基-6-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基氨基)己酰胺(化合物66)
将化合物1201-66(80毫克，0.17毫摩)以及新鲜制备的羟胺溶液(1.77M，4毫升)组成的混合液在室温下搅拌15分钟。利用醋酸将所述混合液的pH调整至7.0并且除去溶剂。向所述固体中加入水，过滤并且干燥，从而获得黄色固体形式的化合物66(50毫克，60％)：熔点207～217℃，LCMS：473[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.36(m，2H)，，1.51～1.53(d，7H，J＝7.2Hz)，1.96(t，2H，J＝6.9Hz)，3.03(m，2H)，5.43～5.53(m，1H)，5.81(t，1H，J＝5.4Hz)，6.62(d，2H，J＝8.4Hz)，6.79(s，1H)，7.19(m，1H)，7.32(m，2H)，7.43(m.2H)，7.53(d，2H，J＝7.2Hz)，7.64(d，1H，J＝7.8Hz)，7.99(s，1H)，8.69(s，1H)，10.37(s，1H)，11.71(s，1H)。
实施例42：(R)-N-羟基-7-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7 氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基氨基)庚酰胺(化合物67) 的制备方法
步骤42a.(R)-7-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基氨基)庚酸乙酯(化合物1201-67)
制备出的所述标题化合物1201-67是黄色固体形式(105毫克，14％产率)，是由506(500毫克，1.52毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(360毫克，1.52毫摩)通过与化合物1201-66的制备方法(实施例41)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：486[M+1]+。
步骤42b.(R)-N-羟基-7-(4-(4-(1-苯基乙基氨基)-7氢-吡咯基[2，3-d]嘧啶基-6-基)苯基氨基)庚酰胺(化合物67)
制备出的所述标题化合物67是黄色固体形式(85毫克，86％产率)，是由化合物1201-67(103毫克，0.21毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.77M，5毫升)通过与化合物66的制备方法(实施例41)中所描述的类似方法制备得到的：熔点125～130℃，LCMS：473[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.29(m，4H)，，1.41～1.51(d，7H，J＝7.2Hz)，1.96(m，2H)，3.03(m，2H)，5.43～5.53(m，1H)，5.81(t，1H，J＝5.4Hz)，6.62(d，2H，J＝8.4Hz)，6.79(s，1H)，7.19(m，1H)，7.32(m，2H)，7.43(m.2H)，7.53(d，2H，J＝7.2Hz)，7.64(d，1H，J＝7.8Hz)，7.98(s，1H)，8.67(s，1H)，10.34(s，1H)，11.70(s，1H)。
生物学检测：
如前文中所指明的，本发明中定义的所述衍生物具有抗增殖的活性。这些特性可以通过例如下文中列出的一种或者一种以上方法进行评价：
(a)测定受试化合物抑制受体酪氨酸激酶的能力的体外检 测。
利用HTScanTM受体激酶检测试剂盒(Cell SignalingTechnologies，Danvers，MA)对化合物抑制受体激酶(表皮生长因子受体，人表皮生长因子受体2/ErbB2，以及血管内皮生长因子受体2)活性的能力进行检测。表皮生长因子受体酪氨酸激酶是来自于GST-激酶融合蛋白的部分纯化的形式，其是由来自于通过一个具有氨基末端的GST标记的表达人类表皮生长因子受体(His672-Ala1210)(GenBank Accession No.NM_005228)的构建体的杆状病毒表达系统制备得到的。人表皮生长因子受体2/ErbB2酪氨酸激酶是由来自于一个含有融合了GST标记的氨基末端的人类HER2/ErbB2 c-DNA(GenBank Accession No.NM_004448)片段(Lys676-Val1255)的构建体的杆状病毒表达系统制备得到的。血管内皮生长因子受体2(VEGR2)酪氨酸激酶是通过杆状病毒表达系统制备得到的，其来自于一个含有人类血管内皮生长因子受体2 cDNA激酶结构域(Asp805-Val1356)(GenBank accession No.AF035121)片段氨基末端融合有GST-HIS6-Thrombin切割位点的构建体。所述蛋白是通过利用谷胱甘肽-琼脂糖的一步亲合色谱法进行纯化的。一种抗磷酸化酪氨酸单克隆抗体P-Tyr-100被用来检测生物素(酰)化的底物肽(表皮生长因子受体，生物素-PTP1B(Tyr66)；人表皮生长因子受体2/ErbB2，生物素化-FLT3(Tyr589)；血管内皮生长因子受体2，生物素-胃泌激素前体(Tyr87))的磷酸化作用。酶活性是在下述试剂中检测的：60毫摩羟乙基呱嗪乙硫磺酸(HEPES)，5毫摩氯化镁，5毫摩氯化锰，200微摩三磷酸腺苷(ATP)，1.25毫摩二硫苏糖醇(DTT)，3微摩正矾酸钠(Na3VO4)，1.5毫摩肽，以及50纳克表皮生长因子受体激酶。结合抗体的检测是利用DELFIA系统(PerkinElmer，Wellesley，MA)，所述系统由DELFIA
Figure G2007800418082D03731
铕标记的抗小鼠IgG(免疫球蛋白)(PerkinElmer，#AD0124)、DELFIA强化溶液(PerkinElmer，#1244-105)、以及DELFIA
Figure G2007800418082D03733
链亲合素涂层的96孔培养板(PerkinElmer，AAAND-0005)构成。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。
将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以得到20毫摩的工作储备浓缩液。每项检测都是通过如下步骤建立的：向1.25毫升、6毫摩的底物肽中加入100微升10毫摩的三磷酸腺苷(ATP)。利用蒸馏水将所述混合液稀释至2.5毫升，从而制备出二倍的(2X)三磷酸腺苷/底物混合液([三磷酸腺苷]＝400毫摩，[底物]＝3毫摩)。将酶从-80℃下迅速转移至冰上。使酶在冰上解冻。在4℃下进行短暂的微离心，从而将液体带入所述试管的底部。立即重新置于冰上。向2.5毫升四倍的(4X)HTScanTM酪氨酸激酶缓冲液(240毫摩pH7.5的羟乙基呱嗪乙硫磺酸，20毫摩氯化镁，20毫摩氯化锰，12毫摩偏矾酸钠)中加入10微升二硫苏糖醇(1.25毫摩)，从而获得二硫苏糖醇/激酶缓冲液。将1.25毫升的二硫苏糖醇/激酶缓冲液转移至酶试管中，从而获得四倍的(4X)反应混合液(在四倍的反应混合液中[酶]＝4纳克/微升)。在室温下以12.5微升/孔的量利用预先稀释的目标化合物(通常在10微摩左右)对12.5微升四倍的(4X)反应混合液培养5分钟。以25微升/孔的量向预先培养的反应混合液/化合物中加入25微升的二倍(2X)三磷酸腺苷/底物混合液。将反应板在室温下培养30分钟。以50微升/孔的量加入终止缓冲液(50毫摩乙二胺四乙酸，pH8)以终止所述反应。将25微升的每种反应液以及75微升/孔的蒸馏水转移至链亲合素涂层的96孔培养板中并且在室温下培养60分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温(磷酸缓冲液，0.05％的吐温-20)洗涤三次。在磷酸缓冲液/吐温(PBS/T)中，以1∶1000的比例利用1％的牛血清白蛋白(BSA)稀释初级抗体磷酸-酪氨酸单克隆抗体(P-Tyr-100)。以100微升/孔的量加入初级抗体。在室温下培养60分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温洗涤三次。在磷酸缓冲液/吐温(PBS/T)中，以1∶500的比例利用1％的牛血清白蛋白(BSA)稀释铕标记的抗小鼠免疫球蛋白(IgG)。以100微升/孔的量加入稀释的抗体。在室温下培养30分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温洗涤五次。以100微升/孔的量加入DELFIA
Figure G2007800418082D03751
强化溶液。在室温下培养5分钟。利用适当的时间分辨培养板读数器(Time-Resolved Plate Reader)检测615纳米处发射出的荧光。
(b)测定受试化合物抑制表皮生长因子刺激型表皮生长因 子受体(EGFR)的磷酸化作用的能力的体外检测。
通过标准的组织培养方法使A431细胞生长于T75长颈瓶中，直至细胞达到接近融合(大约1.5x107)的细胞；D-MEM培养基，10％的细胞染色缓冲液(FBS)。在无菌条件下在96孔微板的每个孔中分散100微升所述细胞悬浮液(每个孔中培养x个细胞)。对细胞进行培养并且监控细胞密度直至融合度达到孔与孔之间的融合；培养大约3天。通过吸取或者人工转移的方式从培养板的孔中除去反应完的培养基。在每个孔中使用50微升预先升温的无血清培养基取代上述培养基并且培养4至16小时。通过预先升温的D-MEM培养基制备两倍的抑制剂的连续稀释液，使所述抑制剂的最终浓度在10微摩至90pM的范围之内。从A431细胞培养板中除去培养基。向细胞中添加100微升连续稀释的抑制剂并且培养1至2小时。通过吸取或者人工转移的方式从培养板的孔中除去抑制剂。通过加入无血清培养基或者含有100纳克/毫升表皮生长因子(EGF)的无血清培养基使细胞休眠(模拟)。允许其在37℃下培养7.5分钟。以人工或者吸取的方式除去活化的培养基或者被激活的培养基。立即利用存在于一倍(1X)磷酸缓冲液中的4％的甲醛对细胞进行固定化。允许其在不被晃动的情况下于室温(RT)下在工作台面上培养20分钟。利用含有0.1％的曲拉通X-100(Triton X-100)的一倍磷酸缓冲液洗涤五次，每次洗涤5分钟。除去固定化溶液。利用一个多通道的移液管加入200微升曲拉通洗涤溶液(一倍的磷酸缓冲液+0.1％曲拉通X-100)。于室温下在旋转器中振荡洗涤5分钟。在人工除去洗液之后重复洗涤步骤四次。利用一个多通道的移液管，通过向每个孔中加入100微升的LI-COR Odyssey封闭缓冲液来封闭细胞/孔。在旋转器的适度振荡下，于室温下封闭90分钟。将上述两种初级抗体加入到含有Odyssey封闭缓冲液的试管中。将所述初级抗体溶液充分混合之后加入到孔中(磷酸化表皮生长因子受体Tyr1045，兔；1∶100稀释；Cell Signaling Technology，2237；完整表皮生长因子受体，小鼠；1∶500稀释；BiosourceInternational，AHR5062)。从上述封闭步骤中除去封闭缓冲液并且加入40微升存在于Odyssey封闭缓冲液中的目标初级抗体，从而覆盖所述每个孔的底部。仅仅向对照孔中加入100微升的Odyssey封闭缓冲液。在室温下，在轻微振荡的条件下利用初级抗体进行培养过夜。在室温下，在轻微振荡的条件下利用一倍的磷酸缓冲液+0.1％的吐温-20对所述培养板进行五次洗涤，每次洗涤五分钟，所使用的缓冲液是大剂量的。利用一个多通道的移液管加入200微升的吐温洗涤溶液。在旋转器上于室温下振荡洗涤五分钟。重复洗涤步骤四次。在Odyssey封闭缓冲液中对荧光素标记的二级抗体(山羊抗小鼠IRDyeTM 680(1∶200稀释；LI-CORCat.#926-32220)山羊抗兔IRDyeTM 800CW(1∶800稀释；LI-CORCat.#926-32211)进行稀释。将所述抗体溶液充分混合并且向每个孔中加入40微升所述的二级抗体溶液。于室温下在轻微振荡的条件下培养60分钟。在培养过程中使培养板免受光照。在室温下，在轻微振荡的条件下利用一倍的磷酸缓冲液+0.1％的吐温-20对所述培养板进行五次洗涤，每次洗涤五分钟，所使用的缓冲液是大剂量的。利用一个多通道的移液管加入200微升的吐温洗涤溶液。在旋转器上于室温下振荡洗涤五分钟。重复洗涤步骤四次。在最后一次洗涤完成后，从孔中完全除去洗涤溶液。将所述培养板正面朝下并且轻敲或者利用纸巾轻轻沾取以除去痕量的洗涤缓冲液。利用Odyssey红外激光成像系统(Odyssey InfraredImaging System)在700以及800纳米的频率下扫描所述培养板以进行检测(700纳米的检测针对IRDyeTM 680抗体而800纳米的检测针对IRDyeTM 800CW抗体)。利用Odyssey软件确定完整蛋白与磷酸化蛋白的比例(700/800)并且利用Graphpad Prism(版本4.0a)绘制所述结果。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。
(c)测定受试化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)酶活 性的能力的体外检测。
利用组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)荧光计检测试剂盒(AK-500，Biomol，Plymouth Meeting，PA)对组蛋白脱乙酰基酶进行筛选。将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以形成20毫摩的工作储备浓缩液。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。每项检测都是通过如下步骤建立的：解冻所有的试剂盒成分并且将其保存于冰上直至使用。在检测缓冲液(50毫摩Tris/Cl，pH8.0，137毫摩氯化钠，2.7毫摩氯化钾，1毫摩氯化镁)中以1∶29的比例稀释HeLa核提取物。在检测缓冲液中制备曲古抑菌素A(TSA，阳性对照)以及受试化合物的稀释液(五倍于最终浓度)。在检测缓冲液中将Fluor de LysTM底物稀释至100微摩(50倍＝2倍的最终浓度)。在冷的检测缓冲液中将Fluor de LysTM显影剂浓缩物稀释20倍(例如，50微升的显影剂浓缩物加入950微升的检测缓冲液)。其次，在一倍的显影剂(Developer)中将0.2毫摩的曲古抑菌素A稀释100倍(例如，1毫升中的10微升；在一倍显影剂中的最终曲古抑菌素A的浓度＝2微摩；加入组蛋白脱乙酰基酶/底物反应液后的最终浓度＝1微摩)。加入检测缓冲液，在所述微量滴定板的适当孔中稀释曲古抑菌素A或者受试抑制剂。在除去阴性对照之外的其他所有孔中加入稀释的HeLa提取物或者其他组蛋白脱乙酰基酶样本。允许被稀释的Fluor deLysTM底物以及所述微量滴定板中的所述样本平衡至检测温度(例如，25℃或者37℃)。通过向每个孔中加入稀释的底物(25微升)并且充分混合来激发组蛋白脱乙酰基酶反应。允许组蛋白脱乙酰基酶反应进行1小时，之后通过加入Fluor de LysTM显影剂(50微升)终止反应。在室温下(25℃)对培养板培养10-15分钟。通过能够在350-380纳米范围内的波长下被激发的微量滴定板读数荧光计对样本进行读数，并且检测440-460纳米范围内的发射光。
下述表4-B列出了本发明代表性的化合物以及它们在组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)检测、人表皮生长因子2/ErbB2检测、血管内皮表皮生长因子受体2(VEGFR2)检测以及表皮生长因子受体(EGFR)检测中的活性。在这些检测中，使用到下述分级：对于IC50而言，I≥10微摩，10微摩＞II＞1微摩，1微摩＞III＞0.1微摩，以及IV≤0.1微摩。
表4-B
化合物编号   HDAC   EGFR   HER2/ErbB2   VEGFR2
  1   II   II   II   N/A
  2   I   IV   III   III
  11   I   IV   IV   IV
  12   I   IV   IV   III
  13   II   IV   IV   III
  14   II   IV   III   III
  15   III   IV   III   III
  16   III   IV   IV   III
  17   IV   IV   IV   II
  19   III   IV   III   III
  20   III   IV   III   III
  21   IV   IV   III   II
  22   IV   IV   III   IV
  24   I   IV   III   III
  25   III   IV   III   III
  26   IV   IV   III   III
  27   IV   IV   III   III
  28   I   III   III   III
  29   IV   IV   III   III
  30   III   IV   III   III
  31   IV   IV   III   III
  32   III   IV   III   III
  33   IV   IV   III   III
  34   III   III   III   III
  35   III   IV   III   III
  36   III   III   III   III
  37   IV   III   III   II
  38   IV   III   II   II
  39   III   IV   IV   III
  40   III   IV   III   II
  41   III   IV   III   III
  42   III   IV   II   II
  43   III   IV   III   II
  44   III   IV   III   III
  45   IV   I   I   I
  46   III
  47   II
  49   I
  50   II
  51   IV
  55   II
  56   II
  57   III   IV
  58   III   III   II
  59   III
  60   III   IV   IV   IV
  61   III   IV
  62   II
  63   III
  64   III
  65   IV
  66   IV   IV   IV   IV
  67   IV   IV   IV   III
第五部分：
Figure G2007800418082D03811
表5-A
Figure G2007800418082D03812
Figure G2007800418082D03821
Figure G2007800418082D03831
Figure G2007800418082D03841
方案1
方案2
Figure G2007800418082D03871
方案3
方案4
方案5
Figure G2007800418082D03891
实施例1：N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(2-(羟基氨 基)-2-氧代乙基)哌嗪基-1-基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基 -5-甲酰胺(化合物1)的制备方法
步骤1a.2-氯噻唑(化合物102)
将存在于饱和的氯化钠水溶液(20毫升)以及盐酸(60毫升)中的2-氨基噻唑(101)(20.0克，200.0毫摩)溶液保持在室温浴中。随后利用亚硝酸钠(250毫摩)的水(50毫升)溶液进行处理，并且同时逐滴加入浓盐酸(20毫升)。将所述反应混合液在室温下搅拌1小时，利用乙醚进行提取并且在1个大气压(atm)下进行浓缩。通过真空蒸馏，从而获得灰黄色液体形式的所述产物102(10.7克，45％)：1H NMR(氘代氯仿)δ7.24(d，J＝3.6Hz，1H)，7.57(d，J＝3.3Hz，1H)。
步骤1b.2-氯-N-(2-氯-6-甲基苯基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物103)
将2-氯噻唑(102)(480毫克，4.0毫摩)的四氢呋喃(10毫升)溶液冷却至-78℃并且在保持温度低于-75℃的条件下在20分钟时间内通过逐滴加入2.5M的正丁基锂的己烷溶液(1.68毫升，4.2毫摩)对其进行处理。当上述加入步骤完成之后，将所述混合液在-78℃下搅拌15分钟并且随后利用2-氯-6-甲苯基异氰酸酯(4.4毫摩)的四氢呋喃(5毫升)溶液对其进行处理。将所述混合液在-78℃下搅拌2小时，利用饱和的氯化铵水溶液进行抑制，回暖至室温并且利用乙酸乙酯以及水进行分离。分离所述乙酸乙酯相，利用盐水进行洗涤，干燥(硫酸钠)并且进行真空浓缩，从而获得黄色固体。利用柱层析法对上述粗产物进行纯化，从而获得灰黄色固体形式的化合物103(0.95克，83％)。LCMS：286[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.22(s，3H)，7.29(m，2H)，7.41(dd，J＝6.3，J＝3.0Hz，1H)，8.45(s，1H)，10.40(s，1H)。
步骤1c.2-氯-N-(2-氯-6-甲基苯基)-N-(4-甲氧基苯甲基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物104)
利用60％的氢化钠(2.4毫摩)对2-氯-N-(2-氯-6-甲基苯基)噻唑(103)(0.57克，2.0毫摩)的二甲基甲酰胺(5毫升)溶液进行处理并且在室温下搅拌30分钟。将所述混合液利用4-甲氧基苯甲氯(0.38克，2.4毫摩)以及四丁基碘化铵(0.15毫克，0.40毫摩)进行处理，并且随后在室温下搅拌16小时。将所述混合液利用水以及乙酸乙酯进行分离，并且随后分离所述乙酸乙酯相，利用盐水进行洗涤，干燥(硫酸钠)并且真空浓缩。利用柱层析法对上述粗产物进行纯化，从而获得黄色固体形式的化合物104(0.50克，62％)。LCMS：429[M+Na]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.73(s，3H)，3.60(s，3H)，4.48(d，J＝13.8Hz，1H)，5.09(d，J＝14.1Hz，1H)，6.79(d，J＝8.4Hz，2H)，7.11(d，J＝8.7Hz，2H)，7.29(d，J＝6.6Hz，1H)，7.44(m，3H)。
步骤1d.6-氯-2-甲基嘧啶基-4-胺(化合物106)
将4，6-二氯-2-甲基嘧啶(105)(20.0克，120毫摩)溶液放置于装有氢氧化铵(50毫升)的试管中。将所述试管密封并且在125-128℃下加热10小时。冷却之后，打开所述试管并且对所述反应混合液(粗粒，白色晶体)进行过滤，从而获得白色固体形式的所述产物化合物106(12.4克，70％)。LCMS：144[M+1]+ 1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.27(s，3H)，6.24(s，1H)，7.08(s，2H)。
步骤1e.2-((6-氯-2-甲基嘧啶基-4-基)甲基)-N-(2-氯-6-甲基苯基)-N-(4-甲氧基苯甲基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物107)
在0℃下，在30分钟的时间内分部分向氢化钠(60％悬浮率，0.30毫摩)的四氢呋喃(30毫升)悬浮液中加入4-氨基-6-氯-2-甲基嘧啶(106)(14.0毫克，0.10毫摩)，并且随后分部分利用化合物104(41.0毫克，0.10毫摩)进行处理。将得到的混合液回流4小时，冷却至室温并且用水(10毫升)进行稀释。利用1N的盐酸(5毫升)对所述混合液进行酸化并且利用乙酸乙酯(3x10毫升)进行提取。对得到的有机层进行干燥(硫酸钠)并且蒸发。利用柱层析法对所述粗产物进行纯化，从而获得灰黄色固体形式的化合物107(41毫克，80％)：1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.72(s，3H)，2.45(s，3H)，3.71(s，3H)，4.40(d，J＝14.1Hz，1H)5.19(d，J＝13.8Hz，1H)，6.81(m，3H)，7.14(d，J＝8.4Hz，2H)，7.29(d，J＝7.5Hz，1H)，7.43(t，J＝7.8，Hz，1H)，7.47(s，1H)，7.53(d，J＝6.9Hz，1H)，12.07(ds，1H)。
步骤1f.2-(6-氯-2-甲基嘧啶基-4-氨基)-N-(2-氯-6-甲基苯基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物108)
利用三氟甲磺酸(10.0克，67.5毫摩)对溶解于50％的三氟乙酸(TFA)中的化合物107(10.0克，19.5毫摩)的二氯甲烷(50毫升)溶液进行处理。将所述反应混合液在室温下搅拌24小时。将所述混合液倒入碎冰(150克)中。通过过滤收集得到的固体，从而获得黄色固体形式的化合物108(5.6克，87％)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.21(s，3H)，2.39(s，3H)，6.07(m，1H)，7.26(m，2H)，7.37(d，J＝6.6Hz，1H)，8.20(s，1H)，9.85(s，1H)，11.47(s，1H)。
步骤1g.N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2-甲基-6-(哌嗪基-1-基)嘧啶基-4-氨基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物109)
将化合物108(2.60克，6.6毫摩)、哌嗪(5.60克，66.0毫摩)、碳酸钾(1.82克，13.2毫摩)以及二甲基甲酰胺(15毫升)组成的混合液在135℃下搅拌12小时。在减压条件下蒸发溶剂并且将得到的残余物用水、丙酮以及乙酸乙酯依次进行洗涤，从而获得灰黄色固体形式的所述标题化合物109(1.8克，64％)：LCMS：444[M+1]+。
步骤1h.2-(4-(6-(5-(2-氯-6-甲基苯基氨基甲酰基)噻唑基-2-氨基)-2-甲基嘧啶基-4-基)哌嗪基-1-基)乙酸乙酯(化合物110-1)
将化合物109(0.31克，0.70毫摩)、2-溴乙酸乙酯(117毫克，0.70毫摩)、三乙胺(0.28克，0.70毫摩)以及二甲基甲酰胺(5毫升)组成的混合液在35℃下搅拌2分钟。在减压条件下蒸发溶剂，从而获得白色固体形式的所述标题化合物110-1(333毫克，90％)，所述化合物无需进行进一步的纯化即可在下一步骤中直接使用：LCMS：530[M+1]+。
步骤1i.N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(2-(羟基氨基)-2-氧代乙基)哌嗪基-1-基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物1)
在0℃下，向处于搅拌状态下的盐酸羟胺(4.67克，67.0毫摩)的甲醇(24毫升)溶液中加入氢氧化钾(5.61克，100.0毫摩)的甲醇(14毫升)溶液。在加入之后，将所述混合液在0℃下搅拌30分钟，并且将其在0℃下进行放置。分离得到的沉淀，并且将所述溶液制备成游离的羟胺。
将上述新鲜制备的羟胺溶液(0.5毫升，0.89毫摩)放置于5毫升的长颈瓶中。在超声波条件下在10分钟的时间内向所述溶液中加入化合物110-1(333毫克，0.63毫摩)。利用薄层层析法(TLC)对上述反应过程进行监控。利用醋酸将所述混合液调节至中性并且随后在减压条件下浓缩。利用制备型高效液相色谱(HPLC)对得到的残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述标题化合物1(50毫克，16％)：LCMS：517[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.)δ2.20(s，3H)，2.38(s，3H)，2.58(m，4H)，2.90(s，2H)，3.51(m，4H)，6.02(s，1H)，7.26(m，2H)，7.37(m，1H)，8.20(s，1H)，8.80(s，1H)，9.86(s，1H)，10.47(s，1H)，11.46(s，1H)。
实施例2：N-(2-氯-6-甲基苯基)-5-(6-(4-(3-(羟基氨 基)-3-氧代丙基)哌嗪基-1-基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)-4氢- 吡咯基-3-甲酰胺(化合物2)的制备方法
步骤2a.3-(4-(6-(5-(2-氯-6-甲基苯基氨基甲酰基)噻唑基-2-氨基)-2-甲基嘧啶基-4-基)哌嗪基-1-基)丙酸甲酯(化合物110-2)
制备出的所述标题化合物110-2是灰黄色固体形式(0.31克，74％)，是由化合物109(0.35克，0.79毫摩)、3-溴丙酸甲酯(0.13克，0.78毫摩)、二异丙基乙胺(DIEA)(0.21克，1.58毫摩)以及二甲基甲酰胺(5毫升)通过与化合物110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：530[M+1]+。
步骤2b.N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(3-(羟基氨基)-3-氧代丙基)哌嗪基-1-基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物2)
制备出的所述标题化合物2是白色固体形式(60毫克，19％)，是由化合物110-2(0.31克，0.59毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：531[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.)δ2.16(t，J＝6.9Hz，2H)，2.24(s，3H)，2.41(s，3H)，2.54(m，4H)，2.57(t，J＝6.6Hz，2H)，3.50(m，4H)，6.05(s，1H)，7.25(m，2H)，7.37(m，1H)，8.23(s，1H)，8.88(s，1H)，9.90(s，1H)，10.42(s，1H)，11.51(s，1H)。
实施例3：N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(4-(羟基氨 基)-4-氧代丁基)哌嗪基-1-基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基 -5-甲酰胺(化合物3)的制备方法
步骤3a.4-(4-(6-(5-(2-氯-6-甲基苯基氨基甲酰基)噻唑基-2-氨基)-2-甲基嘧啶基-4-基)哌嗪基-1-基)丁酸乙酯(化合物110-3)
制备出的所述标题化合物110-3是灰黄色固体形式(0.22克，71％)，是由化合物109(0.25克，0.56毫摩)、4-溴丁酸乙酯(0.12克，0.56毫摩)、二异丙基乙胺(DIEA)(0.15克，0.56毫摩)以及二甲基甲酰胺(5毫升)通过与化合物110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：558[M+1]+。
步骤3b.N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)哌嗪基-1-基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物3)
制备出的所述标题化合物3是白色固体形式(30毫克，14％)，是由化合物110-3(0.22克，0.40毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：545[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.) δ1.69(m，2H)，2.01(t，J＝6.6Hz，2H)，2.25(s，3H)，2.30(t，J＝6.9，2H)，2.41(m，4H)，2.55(s，3H)，3.52(m，4H)，6.06(s，1H)，7.25(m，2H)，7.36(m，1H)，8.23(s，1H)，8.70(s，1H)，9.90(s，1H)，10.37(s，1H)，11.50(s，1H)。
实施例4：N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(5-(羟基氨 基)-5-氧代戊基)哌嗪基-1-基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基 -5-甲酰胺(化合物4)的制备方法
步骤4a.5-(4-(6-(5-(2-氯-6-甲基苯基氨基甲酰基)噻唑基-2-氨基)-2-甲基嘧啶基-4-基)哌嗪基-1-基)戊酸甲酯(化合物110-4)
制备出的所述标题化合物110-4是灰黄色固体形式(120毫克，39％)，是由化合物109(0.24克，0.54毫摩)、5-溴戊酸甲酯(0.12克，0.60毫摩)、二异丙基乙胺(DIEA)(1.54克，1.20毫摩)以及二甲基甲酰胺(3毫升)通过与化合物110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：558[M+1]+。
步骤4b.N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)哌嗪基-1-基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物4)
制备出的所述标题化合物4是白色固体形式(30毫克，25％)，是由化合物110-4(120毫克，0.22毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：559[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.)δ1.44(m，4H)，1.95(t，J＝7.5Hz，2H)，2.22(s，3H)，2.26(t，J＝6.9Hz，2H)，2.37(m，7H)，3.47(m，4H)，6.07(s，1H)，7.25(m，2H)，7.37(dd，J＝2.1Hz，J＝7.2Hz，2H)，8.23(s，1H)，9.93(s，1H)。
实施例5：N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(6-(羟基氨 基)-6-氧代己基)哌嗪基-1-基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基 -5-甲酰胺(化合物5)的制备方法
步骤5a.6-(4-(6-(5-(2-氯-6-甲基苯基氨基甲酰基)噻唑基-2-氨基)-2-甲基嘧啶基-4-基)哌嗪基-1-基)己酸乙酯(化合物110-5)
制备出的所述标题化合物110-5是褐色固体形式(120毫克，41％)，是由化合物109(0.22克，0.495毫摩)、6-溴己酸乙酯(0.12克，0.495毫摩)、碳酸钾(0.22克，1.60毫摩)以及二甲基甲酰胺(5毫升)通过与化合物110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：586[M+1]+。
步骤5b.N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)哌嗪基-1-基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物5)
制备出的所述标题化合物5是白色固体形式(30毫克，26％)，是由化合物110-5(120毫克，0.20毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：573[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.)δ1.26(m，2H)，1.49(m，4H)，1.93(t，J＝7.2Hz，2H)，2.22(s，3H)，2.26(t，J＝7.2Hz，2H)，2.48(m，7H)，3.47(m，4H)，6.04(s，1H)，7.26(m，2H)，7.37(m，2H)，8.21(s，1H)，8.66(s，1H)，9.88(s，1H)，10.33(s，1H)，10.33(s，1H)。
实施例6：N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(2-(2-(羟基氨 基)-2-氧代乙基氨基)乙基氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑 基-5-甲酰胺(化合物7)的制备方法
步骤6a.2-(6-(2-氨基乙基氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)-N-(2-氯-6-甲基苯基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物201)
将化合物108(3.0克，7.6毫摩)的乙基-1，2-二胺(50毫升)溶液加热至80℃并且搅拌10小时。随后将所述反应混合液进行真空浓缩，并且利用水以及乙酸乙酯对得到的残余物进行分离。分离所述乙酸乙酯相，利用盐水进行洗涤，干燥(硫酸钠)并且真空浓缩，从而获得褐色固体形式的所述标题化合物201(1.3克，40％)。LC-MS：418[M+1]+，H-NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.86(s，2H)，2.22(s，3H)，2.36(s，3H)，2.48(t，J＝6.0Hz，2H)，2.76(t，J＝6.0Hz，2H)，3.15(s，1H)，5.88(s，1H)，7.26(m，2H)，7.37(dd，J＝2.4，J＝6.9Hz，1H)，8.19(s，1H)，9.83(s，1H)。
步骤6b.2-(2-(6-(5-(2-氯-6-甲基苯基氨基甲酰基)噻唑基-2-氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)乙基氨基)乙酸乙酯(化合物202-7)
向化合物201(0.50克，1.2毫摩)的二甲基甲酰胺(15毫升)溶液中加入2-溴乙酸乙酯(0.2克，1.2毫摩)以及碳酸钾(41毫克，0.3毫摩)。将所述反应混合液在30℃下搅拌2小时。对所述混合液进行真空浓缩并且利用柱层析法对得到的残余物进行纯化，从而获得灰黄色固体形式的所述标题化合物202-7(110毫克，22％)：LC-MS：504[M+1]+。
步骤6c.N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(2-(2-(羟基氨基)-2-氧代乙基氨基)乙基氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物7)
制备出的所述标题化合物7是灰黄色固体形式(42毫克，37％)，是由化合物202-7(110毫克，0.29毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：491[M+1]+，H-NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.21(s，3H)，2.34(s，3H)，2.60(t，J＝6Hz，2H)，3.03(s，2H)，3.11(t，J＝5.7Hz，2H)，5.86(s，1H)，7.22(m，2H)，7.36(dd，J＝2.1，J＝7.2Hz，1H)，8.18(s，1H)，9.83(s，1H)。
实施例7：N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(7-(羟基氨 基)-7-氧代庚基)哌嗪基-1基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基 -5-甲酰胺(化合物6)的制备方法
步骤7a.7-(4-(6-(5-(2-氯-6-甲基苯基氨基甲酰基)噻唑基-2-氨基)-2-甲基嘧啶基-4-基)哌嗪基-1-基)庚酸乙酯(化合物110-6)
制备出的所述标题化合物110-6是褐色固体形式(176毫克，59％)，是由化合物109(0.22克，0.50毫摩)、7-溴庚酸乙酯(0.12克，0.506毫摩)、二异丙基乙胺(0.13克，1.00毫摩)以及二甲基甲酰胺(5毫升)通过与化合物110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：600[M+1]+。
步骤7b.N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚基)哌嗪基-1-基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物6)
制备出的所述标题化合物6是白色固体形式(32毫克，82％)，是由化合物110-6(40毫克，0.067毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：587[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.)δ1.24(m，4H)，1.44(m，4H)，1.92(t，J＝7.2Hz，2H)，2.22(s，3H)，2.26(t，J＝6.3Hz，2H)，2.38(ds，7H)，3.48(m，4H)，6.03(s，1H)，7.26(m，2H)，7.37(m，1H)，8.19(s，1H)，8.63(ds，1H)，9.83(s，1H)，10.28(s，1H)，11.43(s，1H)。
实施例8：N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(2-(3-(羟基氨 基)-3-氧代丙基氨基)乙基氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑 基-5-甲酰胺(化合物8)的制备方法
步骤8a.3-(2-(6-(5-(2-氯-6-甲基苯基氨基甲酰基)噻唑基-2-氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)乙基氨基)丙酸甲酯(化合物202-8)
制备出的所述标题化合物202-8是白色固体形式(400毫克，31％)，是由化合物201(1.08克，2.6毫摩)、4-溴丁酸甲酯(0.44克，2.6毫摩)以及碳酸钾(0.44克，5.2毫摩)通过与化合物202-7的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS504[M+1]+.H-NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.22(s，3H)，2.38(s，3H)，2.64(t，J＝6.9Hz，2H)，2.93(t，J＝6.0Hz，2H)，3.03(t，J＝6.6Hz，2H)，3.61(s，3H)，7.26(m，3H)，7.39(m，1H)，8.22(s，1H)，9.88(s，1H)。
步骤8b.N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(2-(3-(羟基氨基)-3-氧代丙基氨基)乙基氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物8)
制备出的所述标题化合物8是灰白色固体形式(30毫克，60％)，是由化合物202-8(51毫克，0.10毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS505[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)，δ2.13(t，J＝6.9Hz 2H)，2.22(s，3H)，2.36(s，3H)，2.70(t，J＝6.6Hz，2H)，2.77(t，J＝6.9Hz，2H)，5.87(s，1H)，7.21(m，3H)，7.39(m，1H)，8.19(s，1H)，9.84(s，1H)。
实施例9：N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(2-(6-(羟基氨 基)-6-氧代己基氨基)乙基氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑 基-5-甲酰胺(化合物11)的制备方法
步骤9a.6-(2-(6-(5-(2-氯-6-甲基苯基氨基甲酰基)噻唑基-2-氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)乙基氨基)己酸乙酯(化合物202-11)
制备出的所述标题化合物202-11是灰黄色固体形式(100毫克，17％)，是由化合物201(0.50克，1.2毫摩)、6-溴己酸乙酯(0.27克，1.2毫摩)以及碳酸钾(41毫克，0.3毫摩)通过与化合物202-7的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：H-NMR(氘代氯仿)：δ1.24(m，5H)，1.41(m，2H)，1.57(m，2H)，2.23(t，J＝7.2Hz，2H)，2.34(s，3H)，2.50(s，3H)，2.57(t，J＝5.7Hz，2H)，2.84(t，J＝5.7Hz，2H)，3.37(m，2H)，4.11(q，J＝7.2Hz，2H)，5.46(ds，1H)，5.70(s，1H)，7.16(m，1H)，7.29(m，3H)，8.15(s，1H)。
步骤9b.N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(2-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基氨基)乙基氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物11)
制备出的所述标题化合物11是灰白色固体形式(34毫克，33％)，是由化合物202-11(100毫克，0.18毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS547[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)，δ1.25(m，2H)，1.47(m，4H)，1.95(t，J＝7.2Hz 2H)，2.21(s，3H)，2.37(s，3H)，2.75(t，J＝6.9Hz，2H)，2.91(t，J＝6.6Hz，2H)，3.42(ds，1H)，5.90(s，1H)，7.22(m，4H)，8.19(s，1H)，9.8(s，1H)，10.4(ds，1H)。
实施例10：N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(6-(羟基氨基) -6-氧代己基氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基-5-甲酰胺(化 合物23)的制备方法
步骤10a.6-(6-(5-(2-氯-6-甲基苯基氨基甲酰基)噻唑基-2-氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)己酸甲酯(化合物301-23)
将化合物108(240毫克，0.61毫摩)、二甲基乙酰胺(DMAC)(15毫升)、氢氧化钾(170毫克，3.05毫摩)以及6-氨基己酸甲酯(554毫克，3.05毫摩)的溶液在120℃下搅拌12小时。将所述反应混合液用水进行稀释，过滤并且干燥，从而获得灰黄色粉末形式的所述粗化合物301-23(88毫克，30％)，所述粗化合物无需进行进一步的纯化即可在下一步骤中直接使用。LCMS：503[M+1]+。
步骤10b.N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物23)
将化合物301-23(88毫克，0.18毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.77M，2.10毫升)组成的混合液在室温下搅拌30分钟。利用醋酸将所述混合液的pH调整至7.0，并且除去溶剂。利用柱层析法对得到的残余物进行纯化，从而获得白色粉末形式的所述标题化合物23(25毫克，29％)：LCMS：504[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜-d6)δ11.30(s，1H)，10.29(s，1H)，9.80(s，1H)，8.60(s，1H)，8.17(s，1H)，7.38(dd，1H，J＝2.1，J＝7.2Hz)，7.25(m，2H)，7.12(m，1H)，5.83(s，1H)，3.13(brs，2H)，2.34(s，3H)，2.22(s，3H)，1.93(m，2H)，1.50(m，1H)，1.26(m，2H)。
实施例11：N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(7-(羟基氨基) -7-氧代庚基氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基-5-甲酰胺(化 合物24)的制备方法
步骤11a.7-(6-(5-(2-氯-6-甲基苯基氨基甲酰基)噻唑基-2-氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)庚酸甲酯(化合物301-24)
制备出的所述标题化合物301-24是粗的灰黄色固体形式(120毫克，38％)，是由化合物108(240毫克，0.61毫摩)、二甲基乙酰胺(DMAC)(15毫升)、氢氧化钾(170毫克，3.05毫摩)以及7-氨基庚酸甲酯(596毫克，3.05毫摩)通过与化合物301-23的制备方法(实施例10)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：517[M+1]+。
步骤11b.N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚基氨基)-2-甲基嘧啶基-4-氨基)噻唑基-5-甲酰胺(化合物24)
制备出的所述标题化合物24是白色固体形式(35毫克，30％)，是由化合物301-24(120毫克，0.23毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.77M，3.28毫升)通过与化合物23的制备方法(实施例10)中所描述的类似方法制备得到的：熔点150.7℃(分解)，LCMS：518[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ11.37(s，1H)，10.33(s，1H)，9.85(s，1H)，8.66(s，1H)，8.18(s，1H)，7.39(dd，1H，J＝2.1，J＝7.2Hz)，7.26(m，2H)，7.19(m，1H)，5.82(s，1H)，3.14(brs，2H)，2.34(s，3H)，2.22(s，3H)，1.92(m，2H)，1.47(m，4H)，1.27(m，4H)。
生物学检测：
如前文中所指明的，本发明中定义的所述衍生物具有抗增殖的活性。这些特性可以通过例如下文中列出的一种或者一种以上方法进行评价：
(a)测定受试化合物抑制酪氨酸激酶的能力的体外检测。
利用HTScanTM受体激酶检测试剂盒(Cell SignalingTechnologies，Danvers，MA)对化合物抑制酪氨酸激酶(Abl1，Src，c-Kit以及血小板衍生生长因子受体-β)活性的能力进行检测。Abl1酪氨酸激酶是来自于GST-激酶融合蛋白的部分纯化的形式，其是由来自于通过一个具有氨基末端的GST标记的表达人类Abl1(Pro 118-Ser 553)(GenBank A ccessionNo.NM 005157)的构建体的杆状病毒表达系统制备得到的。Src酪氨酸激酶是来自于GST-激酶融合蛋白的部分纯化的形式，其是由来自于通过一个具有氨基末端的GST标记的表达完整长度的人类Src(Met 1-Leu 536)(GenBank AccessionNo.NM 005417)的构建体的杆状病毒表达系统制备得到的。c-Kit酪氨酸激酶是来自于GST-激酶融合蛋白的部分纯化的形式，其是由来自于通过一个具有氨基末端的GST标记的表达人类c-Kit(Thr 544-Val 976)的构建体的杆状病毒表达系统制备得到的。血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)酪氨酸激酶是通过杆状病毒表达系统制备得到的，其来自于一个含有人类血小板衍生生长因子受体-βcDNA(GenBank Accession No.NM 002609)片段(Arg 561-Leu 1106)氨基末端融合有GST-HIS6-Thrombin切割位点的构建体。所述蛋白是通过利用谷胱甘肽-琼脂糖的一步亲合色谱法进行纯化的。一种抗磷酸化酪氨酸单克隆抗体P-Tyr-100被用来检测生物素(酰)化的底物肽(Abl1以及Src，生物素-信号转导蛋白(Tyr160)；c-Kit，生物素化-KDR(Tyr 996)；血小板衍生生长因子受体-β，生物素化-FLT3(Tyr589))的磷酸化作用。酶活性是在下述试剂中检测的：60毫摩羟乙基呱嗪乙硫磺酸(HEPES)，5毫摩氯化镁，5毫摩氯化锰，200微摩三磷酸腺苷(ATP)，1.25毫摩二硫苏糖醇(DTT)，3微摩正矾酸钠(Na3VO4)，1.5毫摩肽，以及50纳克表皮生长因子受体激酶。结合抗体的检测是利用DELFIA系统(PerkinElmer，Wellesley，MA)，所述系统由DELFIA铕标记的抗小鼠IgG(免疫球蛋白)(PerkinElmer，#AD0124)、DELFIA
Figure G2007800418082D04042
强化溶液(PerkinElmer，#1244-105)、以及DELFIA链亲合素涂层的96孔培养板(PerkinElmer，AAAND-0005)构成。荧光性是由WALLAC Victor2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。
将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以得到20毫摩的工作储备浓缩液。每项检测都是通过如下步骤建立的：向1.25毫升、6毫摩的底物肽中加入100微升10毫摩的三磷酸腺苷(ATP)。利用蒸馏水将所述混合液稀释至2.5毫升，从而制备出二倍的(2X)三磷酸腺苷/底物混合液([三磷酸腺苷]＝400毫摩，[底物]＝3毫摩)。将酶从-80℃下迅速转移至冰上。使酶在冰上解冻。在4℃下进行短暂的微离心，从而将液体带入所述试管的底部。立即重新置于冰上。向2.5毫升四倍的(4X)HTScanTM酪氨酸激酶缓冲液(240毫摩pH7.5的羟乙基呱嗪乙硫磺酸，20毫摩氯化镁，20毫摩氯化锰，12毫摩偏矾酸钠)中加入10微升二硫苏糖醇(1.25毫摩)，从而获得二硫苏糖醇/激酶缓冲液。将1.25毫升的二硫苏糖醇/激酶缓冲液转移至酶试管中，从而获得四倍的(4X)反应混合液(在四倍的反应混合液中[酶]＝4纳克/微升)。在室温下以12.5微升/孔的量利用预先稀释的目标化合物(通常在10微摩左右)对12.5微升四倍的(4X)反应混合液培养5分钟。以25微升/孔的量向预先培养的反应混合液/化合物中加入25微升的二倍(2X)三磷酸腺苷/底物混合液。将反应板在室温下培养30分钟。以50微升/孔的量加入终止缓冲液(50毫摩乙二胺四乙酸，pH8)以终止所述反应。将25微升的每种反应液以及75微升/孔的蒸馏水转移至链亲合素涂层的96孔培养板中并且在室温下培养60分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温(磷酸缓冲液，0.05％的吐温-20)洗涤三次。在磷酸缓冲液/吐温(PBS/T)中，以1∶1000的比例利用1％的牛血清白蛋白(BSA)稀释初级抗体磷酸-酪氨酸单克隆抗体(P-Tyr-100)。以100微升/孔的量加入初级抗体。在室温下培养60分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温洗涤三次。在磷酸缓冲液/吐温(PBS/T)中，以1∶500的比例利用1％的牛血清白蛋白(BSA)稀释铕标记的抗小鼠免疫球蛋白(IgG)。以100微升/孔的量加入稀释的抗体。在室温下培养30分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温洗涤五次。以100微升/孔的量加入DELFIA强化溶液。在室温下培养5分钟。利用适当的时间分辨培养板读数器(Time-Resolved Plate Reader)检测615纳米处发射出的荧光。
(b)测定受试化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)酶活 性的能力的体外检测。
利用组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)荧光计检测试剂盒(AK-500，Biomol，Plymouth Meeting，PA)对组蛋白脱乙酰基酶进行筛选。将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以形成20毫摩的工作储备浓缩液。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。
每项检测都是通过如下步骤建立的：解冻所有的试剂盒成分并且将其保存于冰上直至使用。在检测缓冲液(50毫摩Tris/Cl，pH8.0，137毫摩氯化钠，2.7毫摩氯化钾，1毫摩氯化镁)中以1∶29的比例稀释HeLa核提取物。在检测缓冲液中制备曲古抑菌素A(TSA，阳性对照)以及受试化合物的稀释液(五倍于最终浓度)。在检测缓冲液中将Fluor de LysTM底物稀释至100微摩(50倍＝2倍的最终浓度)。在冷的检测缓冲液中将Fluor de LysTM显影剂浓缩物稀释20倍(例如，50微升的显影剂浓缩物加入950微升的检测缓冲液)。其次，在一倍的显影剂(Developer)中将0.2毫摩的曲古抑菌素A稀释100倍(例如，1毫升中的10微升；在一倍显影剂中的最终曲古抑菌素A的浓度＝2微摩；加入组蛋白脱乙酰基酶/底物反应液后的最终浓度＝1微摩)。加入检测缓冲液，在所述微量滴定板的适当孔中稀释曲古抑菌素A或者受试抑制剂。在除去阴性对照之外的其他所有孔中加入稀释的HeLa提取物或者其他组蛋白脱乙酰基酶样本。允许被稀释的Fluor deLysTM底物以及所述微量滴定板中的所述样本平衡至检测温度(例如，25℃或者37℃)。通过向每个孔中加入稀释的底物(25微升)并且充分混合来激发组蛋白脱乙酰基酶反应。允许组蛋白脱乙酰基酶反应进行1小时，之后通过加入Fluor de LysTM显影剂(50微升)终止反应。在室温下(25℃)对培养板培养10-15分钟。通过能够在350-380纳米范围内的波长下被激发的微量滴定板读数荧光计对样本进行读数，并且检测440-460纳米范围内的发射光。
下述表5-B列出了本发明代表性的化合物以及它们在组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)检测、SRC、c-Kit检测、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)检测以及ABL检测中的活性。在这些检测中，使用到下述分级：对于IC50而言，I≥10微摩，10微摩＞II＞1微摩，1微摩＞III＞0.1微摩，以及IV≤0.1微摩。
表5-B
  化合物编号   HDAC   ABL   SRC   C-Kit   PDGFb   Lyn   LCk
  1   II   IV   IV   IV
  2   II   IV   IV   IV
  3   II   IV   IV
  4   III   IV   IV   IV
  5   IV   IV   IV   IV   IV   IV
  6   III   IV   IV   IV   IV   IV
  7   I   IV   IV
  11   IV   IV   IV   IV   IV   IV   IV
  23   IV   IV   IV   IV   IV   IV   IV
  24   IV   IV   IV   IV   IV   IV   IV
  30   I   III   III
第六部分：
Figure G2007800418082D04081
表6-A
Figure G2007800418082D04091
Figure G2007800418082D04101
Figure G2007800418082D04111
方案1
Figure G2007800418082D04121
方案2
Figure G2007800418082D04131
方案3
Figure G2007800418082D04132
方案4
实施例1：(R)-4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰 脲基)苯氧基)-N-(1-(羟基氨基)-1-氧代丙基-2-基)吡啶酰 胺(化合物1)的制备方法
步骤1a.4-氯吡啶甲酸甲酯(化合物102)
在40-48℃下向亚硫酰氯(300毫升)中缓慢加入无水二甲基甲酰胺(10毫升)。将所述溶液在室温下搅拌10分钟，随后在30分钟的时间内向其中加入化合物101(100.0克，813.0毫摩)。将得到的溶液在72℃下加热(释放出大量的二氧化硫)16小时，从而生成黄色固体。将剩余溶液冷却至室温，利用甲苯(500毫升)进行稀释并且浓缩至200毫升。将上述加入甲苯/浓缩步骤重复两次。在冰浴下将得到的溶液以及固体加入200毫升的甲醇中并且保持其中心温度低于55℃。在室温下将上述物质搅拌45分钟，冷却至5℃并且逐滴加入乙醚(200毫升)进行处理。将得到的固体过滤，利用乙醚(200毫升)进行洗涤并且在35℃下进行干燥，从而获得白黄色的固体。将所述固体溶解于热水(500毫升，大约45℃)中之后，向其中加入碳酸氢钠将pH调整至8-9。利用乙酸乙酯对所述混合液进行提取并且浓缩得到的有机相，从而获得灰白色固体形式的目标化合物102(118.2克，85％)。LCMS：172[M+1]+。
步骤1b.4-氯-N-甲基吡啶酰胺(化合物103)
在低于5℃的温度下，向化合物102(10.0克，58.6毫摩)的甲醇溶液(4毫升)中加入甲胺(7.3克，234.4毫摩)的甲醇溶液。将所述混合液在0-5℃下搅拌2小时。在40-50℃下蒸发所述溶剂，从而获得黑黄色固体形式的所述标题化合物103(9.8克，98％)。LCMS：171[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.80(d，3H)，7.68(dd，J1＝5.4Hz，J2＝2.4Hz，1H)，7.97(d，J＝2.4Hz，1H)，8.56(d，1H)，8.82(s，1H)。
步骤1c.4-(4-氨基苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺(化合物105)
利用叔丁氧基钾(t-BuOK)(10.29克，91.7毫摩)对4-氨基苯酚(104)(9.6克，88.0毫摩)的无水二甲基甲酰胺(150毫升)溶液进行处理。将得到的略带红色的褐色混合液在室温下搅拌2小时并且随后加入碳酸钾(6.5克，47毫摩)以及化合物103(15.0克，87.9毫摩)。将所述反应混合液在72℃下搅拌过夜并且在50-60℃下蒸发溶剂从而得到反应混合液。将所述混合液冷却并且加入饱和的氯化钠溶液。利用乙酸乙酯对所述混合液进行提取。分离得到的有机层并且利用饱和的氯化钠溶液进行洗涤，通过硫酸钠进行干燥并且在减压条件下浓缩，从而获得淡褐色固体形式的化合物105(17.9克，84％)，所述化合物无需进行进一步的纯化即可在下一步骤中直接使用。LCMS：244[M+1]+。
步骤1d.4-(4-氨基苯氧基)吡啶甲酸(化合物106)
将化合物105(32.4克，130.0毫摩)加入2N的氢氧化钾(200毫升)溶液中。将所述混合液在100℃下搅拌2小时。当利用乙酸乙酯对所述混合液进行洗涤之后，将所述水层的pH调整至5。通过降低压力除去所述水相中的水，从而获得残余物。向所述残余物中加入少量的水并且进行过滤。利用少量的水对收集到的固体进行洗涤并且干燥，从而获得106(23.9克，80％)：LCMS：231[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ6.66(dd，J＝8.7Hz，2H)，6.88(dd，J＝8.7Hz，2H)，7.12(dd，J1＝5.4Hz，J2＝2.7Hz，1H)，7.37(d，J＝2.4Hz，1H)，8.52(d，J＝5.4Hz，1H)。
步骤1e.4-(4-氨基苯氧基)吡啶甲酸甲酯(化合物107)
在低于0℃的条件下向化合物106(4.0克，8.8毫摩)的甲醇(50毫升)溶液中逐滴加入亚硫酰氯(6毫升)。将所述混合液在70℃下搅拌过夜。蒸发所述溶剂并且向其中加入乙酸乙酯以及水。利用碳酸氢钠(碳酸钠)以及氢氧化钠将其pH值调整至8-9。利用乙酸乙酯对所述混合液提取三次。收集得到的有机相并且进行浓缩，从而获得粗产物，利用柱层析法对所述粗产物进行纯化，从而获得所述标题化合物107(2.1克，68％)：LCMS：245[M+1]+。
步骤1f.4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶甲酸甲酯(化合物109)
在0℃下，向化合物107(4.50克，20.0毫摩)的二氯甲烷(12毫升)悬浮液中逐滴加入4-氯-3-(三氟甲基)苯基异氰酸酯(108)(4.97克，20.0毫摩)的二氯甲烷(12毫升)溶液。将得到的混合液在室温下搅拌22小时。通过过滤收集得到的黄色固体并且利用二氯甲烷(2x10毫升)对其进行洗涤，从而获得灰白色固体形式的化合物109(7.90克，85％)：LCMS：466[M+1]+。
步骤1g.4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶甲酸(化合物110)
向化合物109(3.0克，6.4毫摩)的8毫升甲醇溶液中加入一水合氢氧化锂(1.08克，25.60毫摩)。立即向上述混合液中加入水(4毫升)。将所述反应混合液在室温下搅拌1小时。将上述混合液的pH值调整至5并且蒸发除去甲醇。将得到的固体进行过滤，从而获得灰色固体形式的化合物110(2.66克，92％)：LCMS：452[M+1]+。
步骤1h.(R)-2-(4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶酰胺基)丙酸甲酯(化合物111-1)
向盐酸3-氨基丙酸甲酯(130.0毫克，0.93毫摩)的6毫升二甲基甲酰胺溶液中加入三乙胺(336.0毫克，3.3毫摩)。随后向上述混合液中加入化合物110(300.0毫克，0.67毫摩)、1-羟基苯并三唑(HOBt)(135.0毫克，0.998毫摩)以及1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI)(191.0毫克，0.998毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌18小时。在50℃下蒸发溶剂二甲基甲酰胺并且向其中加入100毫升乙酸乙酯以及10毫升水。将所述有机相用水进行洗涤，通过硫酸钠进行干燥并且蒸发。利用柱层析法对所述标题化合物111-1进行纯化(242.0毫克，68％)：LCMS：537[M+1]+。
步骤1i.(R)-4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)-N-(1-(羟基氨基)-1-氧代丙基-2-基)吡啶酰胺(化合物1)
在0℃下，向处于搅拌状态下的盐酸羟胺(4.67克，67.0毫摩)的甲醇(24毫升)溶液中加入氢氧化钾(5.61克，100.0毫摩)的甲醇(14毫升)溶液。在加入之后，将所述混合液在0℃下搅拌30分钟，并且将其在低温下放置。分离得到的沉淀，并且从所述溶液中制备出游离的羟胺。
向装有化合物111-1(100.0毫克，0.19毫摩)的长颈瓶中加入饱和的羟胺的甲醇溶液(4.0毫升)。将所述混合液在室温下搅拌30分钟。随后利用醋酸将其pH调整至7。将所述混合液浓缩，从而获得残余物，用水对所述残余物进行洗涤，从而获得粗产物，利用柱层析法对所述粗产物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述产物1(40毫克，39％)。LCMS：538[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.28(d，J＝6.9Hz，3H)，4.36(t，J＝5.8Hz，1H)，7.15(m，3H)，7.36(s，1H)，7.57-7.67(m，4H)，8.11(s，1H)，8.45(d，J＝6.3Hz，1H)，8.56(d，J＝7.8Hz，1H)，9.33(s，1H)，9.56(s，1H)。
实施例2：4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基) 苯氧基)-N-(3-(羟基氨基)-3-氧代丙基)吡啶酰胺(化合物2) 的制备方法
步骤2a.3-(4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶酰胺基)丙酸甲酯(化合物111-2)
所述标题化合物111-2(110毫克，31％)是由化合物110(300.0毫克，0.66毫摩)通过与化合物111-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：537[M+1]+。
步骤2b.4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)-N-(3-(羟基氨基)-3-氧代丙基)吡啶酰胺(化合物2)
制备出的所述标题化合物2是固体形式(50毫克，47％)，是由化合物111-2(110.0毫克，0.20毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：468[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.25(t，J＝6.9Hz，2H)，3.47(m，2H)，7.16(m，3H)，7.38(d，J＝2.4，1H)，7.60-7.70(m，4H)，8.15(s，1H)，8.50(d，1H)，8.78(t，J＝6.3Hz，1H)，9.43(s，1H)，9.66(s，1H)，10.44(s，1H)。
实施例3：4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基) 苯氧基)-N-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)吡啶酰胺(化合物3) 的制备方法
步骤3a.4-(4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶酰胺基)丁酸甲酯(化合物111-3)
所述标题化合物111-3(95毫克，26％)是由化合物110(300.0毫克，0.66毫摩)通过与化合物111-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：551[M+1]+。
步骤3b.4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)-N-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)吡啶酰胺(化合物3)
制备出的所述标题化合物3是固体形式(45毫克，48％)，是由化合物111-3(95毫克，0.17毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：552[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.70-1.77(m，2H)，1.96(t，J＝7.2Hz，2H)，3.22-3.29(m，2H)，7.15-7.19(m，3H)，7.37(d，J＝2.7Hz，1H)，7.58-7.69(m，4H)，8.13(s，1H)，8.51(d，J＝6.0Hz，1H)，8.70(s，1H)，8.88(t，J＝6.0Hz，1H)，9.06(s，1H)，9.89(s，1H)，10.37(s，1H)。
实施例4：4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基) 苯氧基)-N-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)吡啶酰胺(化合物5) 的制备方法
步骤4a.6-(4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶酰胺基)己酸甲酯(化合物111-5)
所述标题化合物111-5(118毫克，31％)是由化合物110(300.0毫克，0.66毫摩)通过与化合物111-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：579[M+1]+。
步骤4b.4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)-N-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)吡啶酰胺(化合物5)
制备出的所述标题化合物5是固体形式(50毫克，62％)，是由化合物111-5(80.0毫克，0.14毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：580[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.18-1.26(m，2H)，1.43-1.52(m，4H)，1.91(t，J＝7.2Hz，2H)，3.19-3.23(m，2H)，7.11-7.16(m，3H)，7.36(d，J＝2.1Hz，1H)，7.55-7.66(m，4H)，8.09(d，J＝2.4Hz，1H)，8.48(d，J＝5.7Hz，1H)，8.58(s，1H)，8.71(t，J＝6.0Hz，1H)，8.10(s，1H)，9.23(s，1H)，10.26(s，1H)。
实施例5：4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基) 苯氧基)-N-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚基)吡啶酰胺(化合物6) 的制备方法
步骤5a.7-(4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶酰胺基)庚酸甲酯(化合物111-6)
所述标题化合物111-6(130毫克，33％)是由化合物110(300.0毫克，0.66毫摩)通过与化合物111-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：593[M+1]+。
步骤5b.4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)-N-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚基)吡啶酰胺(化合物6)
制备出的所述标题化合物6是固体形式(62毫克，75％)，是由化合物111-6(80.0毫克，0.14毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：594[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.16-1.23(m，4H)，1.45-1.49(m，4H)，1.89-1.94(m，2H)，3.20-3.33(m，2H)，7.11-7.16(m，3H)，7.36(d，J＝2.1Hz，1H)，7.55-7.66(m，4H)，8.15(d，J＝2.4Hz，1H)，8.50(d，J＝5.7Hz，1H)，8.66(s，1H)，8.78(t，J＝6.0Hz，1H)，9.54(s，1H)，9.79(s，1H)，10.32(s，1H)。
实施例6：4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基) 苯氧基)-N-(8-(羟基氨基)-8-氧代辛基)吡啶酰胺(化合物7) 的制备方法
步骤6a.8-(4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶酰胺基)辛酸甲酯(化合物111-7)
所述标题化合物111-7(140毫克，35％)是由化合物110(300.0毫克，0.66毫摩)通过与化合物111-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：607[M+1]+。
步骤6b.4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)-N-(8-(羟基氨基)-8-氧代辛基)吡啶酰胺(化合物7)
制备出的所述标题化合物7是固体形式(50毫克，63％)，是由化合物111-7(80.0毫克，0.13毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：608[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.23-1.25(m，6H)，1.46-1.51(m，4H)，1.89-1.94(m，2H)，3.21-3.34(m，2H)，7.14-7.19(m，3H)，7.36(d，J＝2.1Hz，1H)，7.55-7.66(m，4H)，8.15(d，J＝2.4Hz，1H)，8.50(d，J＝5.7Hz，1H)，8.66(s，1H)，8.78(t，J＝6.0Hz，1H)，9.54(s，1H)，9.79(s，1H)，10.32(s，1H)。
实施例7：4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基) 苯氧基)-N-羟基吡啶酰胺(化合物36)的制备方法
制备出的所述标题化合物36是白色固体形式(30毫克，29％)，是由化合物109(100.0毫克，0.22毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：467[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ7.10-7.18(m，3H)，7.31(d，J＝2.4，2H)，7.57-7.67(m，4H)，8.10(s，1H)，8.45(d，J＝3.3Hz，1H)，8.99(s，1H)，9.09(s，1H)，9.21(s，1H)，11.42(s，1H)。
实施例8：1-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3-(4-(2-(5- (羟基氨基)-5-氧代戊酰胺基)吡啶基-4-氧基)苯基)酰脲(化 合物9)的制备方法
步骤8a.1-(4-(2-氨基吡啶基-4-氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲(化合物201)
将化合物110(345毫克，0.8毫摩)、二甲基甲酰胺(7毫升)以及三乙胺(0.2毫升)组成的混合液在60℃下搅拌1小时。随后将所述混合液冷却至0℃并且向其中加入叠氮磷酸二苯酯(DPPA)(280毫克，1.0毫摩)。将所述混合液搅拌过夜。向所述混合液中加入过氧乙酸(3.5毫升)的水(3.5毫升)溶液。将所述混合液在90℃下加热1小时，随后将其倒入冰冷的氢氧化钠溶液中(在140毫升水中加入5.25克氢氧化钠)。利用乙酸乙酯对所述混合液进行提取并且用水进行洗涤。收集所述有机相并且在减压条件下除去溶剂。利用色谱在硅胶柱上(流动相：乙酸乙酯/甲醇＝4∶1)对所述残余物进行纯化，从而获得灰黄色固体形式的化合物201(123毫克，37.5％)。LC-MS：423[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.70(s，1H)，2.86(s，1H)，5.78(d，J＝2.4Hz，1H)，5.88(s，1H)，6.10(m，1H)，7.02～7.06(m，1H)，7.48～7.61(m，4H)，7.76(d，J＝5.6Hz，1H)，8.10(d，J＝2.0Hz，1H)，9.40(s，1H)，9.76(s，1H)。
步骤8b.5-(4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-氨基)-5-氧代戊酸甲酯(化合物202-9)
将化合物201(120毫克，0.3毫摩)、三乙胺(61毫克，0.6毫摩)、铜粉(38毫克，0.6毫摩)、锌粉(39毫克，0.6毫摩)以及二氯甲烷(2毫升)组成的混合液加热至40℃。向上述混合液中加入5-氯-5-氧代戊酸甲酯(47毫克，0.3毫摩)。利用薄层层析法(TLC)对上述反应进行监控。当所述反应完毕之后，在减压条件下除去溶剂。利用色谱在硅胶柱上(流动相：乙酸乙酯/甲醇＝4∶1)对所述残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述甲基化合物202-9(160毫克，96.6％)：LC-MS：551[M+1]+。
步骤8c.1-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3-(4-(2-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊酰胺基)吡啶基-4-氧基)苯基)酰脲(化合物9)
将化合物202-9(160毫克，0.3毫摩)溶解于新鲜制备的羟胺甲醇溶液(1.8毫摩)中。将所述混合液在室温下搅拌过夜。随后利用过氧乙酸对所述混合液进行中和。在真空条件下除去溶剂并且利用制备型液相色谱法对得到的残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的化合物9(20毫克，12.5％)。熔点：144-145℃。LC-MS：552[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.72(m，2H)，1.93(t，J＝7.0Hz，2H)，2.32(t，J＝7.0Hz，2H)，6.6(m，1H)，7.10(m，2H)，7.52～7.63(m，5H)，8.13(m，2H)，8.61(s，1H)，8.99(s，1H)，9.23(s，1H)，10.32(s，1H)，10.45(s，1H)。
实施例9：1-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3-(4-(2-(6- (羟基氨基)-6-氧代己酰胺基)吡啶基-4-氧基)苯基)酰脲(化 合物10)的制备方法
步骤9a.6-(4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-氨基)-6-氧代己酸甲酯(化合物202-10)
制备出的所述标题化合物202-10是白色固体形式(100毫克，97％)，是由化合物201(77.0毫克，0.18毫摩)、三乙胺(36毫克，0.36毫摩)、铜粉(12毫克，0.18毫摩)、锌粉(12毫克，0.18毫摩)以及二氯甲烷(2毫升)通过与化合物202-9的制备方法(实施例8)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：565[M+1]+。
步骤9b.1-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3-(4-(2-(6-(羟基氨基)-6-氧代己酰胺基)吡啶基-4-氧基)苯基)酰脲(化合物10)
制备出的所述标题化合物10是白色固体形式(13毫克，13％)，是由化合物202-10(100毫克，0.18毫摩)以及新鲜制备的羟胺甲醇溶液(1.8毫摩)通过与化合物9的制备方法(实施例8)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：566[M+1]+，1HNMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.45(m，4H)，1.96(m，2H)，2.31(m，2H)，6.63(m，1H)，7.10(m，2H)，7.53(m，2H)，7.63(m，3H)，8.13(m，2H)，8.65(s，1H)，9.19(s，1H)，9.51(s，1H)，10.32(s，1H)，10.41(s，1H)。
实施例10：1-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3-(4-(2-(8- (羟基氨基)-8-氧代辛酰胺基)吡啶基-4-氧基)苯基)酰脲(化 合物12)的制备方法
步骤10a.8-(4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-氨基)-8-氧代辛酸甲酯(化合物202-12)
制备出的所述标题化合物202-12是白色固体形式(166毫克，39.4％)，是由化合物201(300毫克，0.7毫摩)、三乙胺(141毫克，1.4毫摩)、铜粉(45毫克，0.7毫摩)、锌粉(45毫克，0.7毫摩)以及二氯甲烷(10毫升)通过与化合物202-9的制备方法(实施例8)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：593[M+1]+。
步骤10b.1-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3-(4-(2-(8-(羟基氨基)-8-氧代辛酰胺基)吡啶基-4-氧基)苯基)酰脲(化合物12)
制备出的所述标题化合物12是白色固体形式(25毫克，15.6％)，是由化合物202-12(160毫克，0.3毫摩)以及新鲜制备的羟胺甲醇溶液(1.8毫摩)通过与化合物9的制备方法(实施例8)中所描述的类似方法制备得到的：熔点：171～175℃.LC-MS：594[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.21(s，4H)，1.47(m，4H)，1.90(t，J＝7.5Hz，2H)，2.30(t，J＝7.5Hz，2H)，6.62(m，1H)，7.10(m，2H)，7.52(m，2H)，7.64(m，3H)，8.12(m，2H)，8.59(s，1H)，8.93(s，1H)，9.17(s，1H)，10.26(s，1H)，10.40(s，1H)。
实施例11：3-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰 脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)-N-羟基丙酰胺(化合 物13)的制备方法
步骤11a.1-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3-(4-(2-(羟基甲基)吡啶基-4-氧基)苯基)酰脲(化合物301)
在氮气环境中向化合物109(3.3克，7.1毫摩)的30毫升四氢呋喃溶液中加入氢化铝锂(0.323克，8.5毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌4小时。之后向所述混合液中加入水(0.3毫升)，15％的氢氧化钠溶液(0.3毫升)以及水(0.9毫升)。将所述混合液过滤并且浓缩，从而获得粗产物，利用柱层析法(乙酸乙酯∶甲醇＝9∶1)对所述粗产物进行纯化，从而获得白色固体形式的化合物301(1.75克，47％)：LCMS：438[M+1]+。
步骤11b.1-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3-(4-(2-(氯甲基)吡啶基-4-氧基)苯基)酰脲(化合物302)
将亚硫酰氯(25毫升，25毫摩)的甲苯(22毫升)溶液冷却至-10℃。在0.5小时的时间范围内向上述冷却混合液中加入化合物301(1.0克，2.3毫摩)。随后将所述温度缓慢升高至0℃，并且将所述混合液在0℃下搅拌2小时。将所述冷的反应混合液过滤，并且利用甲苯以及乙醚对得到的固体进行洗涤。将所述粗产物悬浮于水中并且利用碳酸钾进行中和。将所述混合液搅拌10分钟并且过滤。用水对所述固体进行彻底洗涤并且在减压条件下进行干燥，从而获得白黄色固体形式的所述标题化合物302(0.84克，80％)：LCMS：456[M+1]+。
步骤11c.3-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)丙酸乙酯(化合物303-13)
利用氢氧化钾(66毫克，1.76毫摩)对盐酸3-氨基丙酸乙酯(270毫克，1.76毫摩)的甲醇溶液进行中和。将所述混合液在室温下搅拌10分钟并且随后蒸发除去甲醇。向其中加入二甲基甲酰胺(4毫升)以及302(200毫克，0.44毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌8小时。通过降低压力蒸发除去二甲基甲酰胺，从而获得残余物，向所述残余物中加入30毫升醋酸。将所述混合液用水洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，过滤并且浓缩，从而获得303-13(143毫克，60.5％)，所述物质无需进行纯化即可在下一步骤中使用。LCMS：537[M+1]+。
步骤11d.3-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)-N-羟基丙酰胺(化合物13)
制备羟胺的甲醇溶液：将氯化氢(4.67克，67毫摩)溶解于甲醇(24毫升)中，从而形成溶液A。将氢氧化钾(5.61克，100毫摩)溶解于甲醇(14毫升)中，从而形成溶液B。将所述溶液A冷却至0℃，并且将所述溶液B逐滴加入到溶液A中。将所述混合液在0℃下搅拌30分钟，并且过滤所述沉淀，从而获得羟胺的甲醇溶液。
向装有化合物303-13(143毫克，0.27毫摩)的长颈瓶中加入上述新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(4.0毫升)。将所述混合液在室温下搅拌30分钟，并且利用醋酸将其pH调整至7。将所述混合液浓缩，从而获得残余物，将所述残余物用水洗涤并且利用制备型高效液相色谱(HPLC)对其进行纯化，从而获得白色固体形式的所述标题化合物13(64毫克，45.2％)：LCMS：524[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.12(t，J＝6Hz，2H)，2.71(t，J＝6Hz，2H)，3.72(s，2H)，6.73(d，J＝6Hz，1H)，6.95(s，1H)，7.10(d，J＝9Hz，2H)，7.55-7.68(m，4H)，8.12(s，1H)，8.34(d，J＝6Hz，1H)，9.10(s，1H)，9.36(s，1H)。
实施例12：6-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰 脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)-N-羟基己酰胺(化合 物16)的制备方法
步骤12a.6-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)己酸甲酯(化合物303-16)
所述标题化合物303-16(108毫克，43％)是由化合物302(200毫克，0.44毫摩)以及盐酸6-氨基己酸甲酯(318毫克，1.76毫摩)通过与化合物303-13的制备方法(实施例11)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：565[M+1]+。
步骤12b.6-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)-N-羟基己酰胺(化合物16)
制备出的所述标题化合物16是白色固体形式(48毫克，45％)，是由化合物303-16(108毫克，0.19毫摩)通过与化合物13的制备方法(实施例11)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：566[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.20-1.27(m，2H)，1.33-1.49(m，4H)，2.43-3.48(m，2H)，3.72(s，2H)，6.74(d，J＝6Hz，1H)，6.94(s，1H)，7.10(d，J＝9Hz，2H)，7.55-7.68(m，4H)，8.12(s，1H)，8.34(d，J＝6Hz，1H)，9.13(s，1H)，9.37(s，1H)，9.36(s，1H)。
实施例13：7-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰 脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)-N-羟基庚酰胺(化合 物17)的制备方法
步骤13a.7-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)庚酸甲酯(化合物303-17)
所述标题化合物303-17(87毫克，34％)是由化合物302(200毫克，0.44毫摩)以及盐酸7-氨基庚酸甲酯(343毫克，1.76毫摩)通过与化合物303-13的制备方法(实施例11)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：579[M+1]+。
步骤13b.7-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)-N-羟基庚酰胺(化合物17)
制备出的所述标题化合物17是白色固体形式(36毫克，41％)，是由化合物303-17(87毫克，0.15毫摩)通过与化合物13的制备方法(实施例11)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：580[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.22(s，4H)，1.34-1.37(m，2H)，1.49(t，J＝9Hz，2H)，1.94(t，J＝7.2Hz，2H)，2.43-2.48(m，2H)，3.72(s，2H)，6.75(d，J＝6Hz，1H)，6.94(s，1H)，7.10(d，J＝9Hz，3H)，7.55-7.69(m，4Hz)，8.12(s，1H)，8.34(d，J＝6Hz，1H)，9.04(s，1H)，9.27(s，1H)，10.35(s，1H)。
实施例14：8-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰 脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)-N-羟基辛酰胺(化合 物18)的制备方法
步骤14a.8-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)辛酸甲酯(化合物303-18)
所述标题化合物303-18(118毫克，42.9％)是由化合物302(200毫克，0.44毫摩)以及盐酸8-氨基辛酸甲酯(368毫克，1.76毫摩)通过与化合物303-13的制备方法(实施例11)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：593[M+1]+。
步骤14b.8-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)-N-羟基辛酰胺(化合物18)
制备出的所述标题化合物18是白色固体形式(73毫克，62％)，是由化合物303-18(118毫克，0.20毫摩)通过与化合物13的制备方法(实施例11)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：594[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.24(s，6H)，1.46-1.51(m，4H)，1.92(t，J＝9Hz，2H)，3.21-3.34(m，2H)，7.14-7.19(m，3H)，7.37(d，J＝3Hz，1H)，7.60-7.70(m，4Hz)，8.14(s，1H)，8.50(d，J＝6Hz，1H)，8.66(s，1H)，8.79(t，J＝6Hz，1H)，9.38(s，1H)，9.61(s，1H)，10.32(s，1H)。
实施例15：N 1 -((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基) 酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基)-N 4 -羟基琥珀酰胺(化合 物19)的制备方法
步骤15a.4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶酰胺(化合物401)
将化合物109(1.16克，2.5毫摩)、氨(0.25克，15.0毫摩)的甲醇(10毫升)溶液所组成的溶液在室温下搅拌6小时。在减压条件下除去所述溶剂并且将所述粗产物用水进行洗涤，从而获得淡黄色固体形式的所述化合物401(1.08克，96.2％)：LCMS：451[M+1]+。
步骤15b.1-(4-(2-(氨基甲基)吡啶基-4-氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲(化合物402)
在氮气环境中，将存在于密闭试管中的化合物401(1.0克，2.2毫摩)、氢化硼(6毫升，1摩/升)以及四氢呋喃(10毫升)组成的混合液在100℃(油浴)下搅拌6小时。将所述混合液冷却，利用甲醇(1.5毫升)以及浓盐酸(1.5毫升)进行处理，在100℃下搅拌2小时。将所述反应混合液冷却，利用碳酸钠(4摩/升)将其pH调整至10。在高真空状态下除去所述溶剂，从而获得褐色固体形式的粗产物402(0.6克，67.8％)：LCMS：437[M+1]+。
步骤15c.4-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)-4-氧代丁酸甲酯(化合物403-19)
将化合物402(100毫克，0.23毫摩)、4-甲氧基-4-氧代丁酸(36毫克，0.27毫摩)、1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI)(58毫克，0.30毫摩)、1-羟基苯并三唑(HOBt)(40毫克，0.30毫摩)、三甲胺(81毫克，0.80毫摩)以及无水二甲基甲酰胺(2毫升)组成的混合液在室温下搅拌16小时。在高真空状态下除去所述溶剂，并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝10∶1)对所述粗产物进行纯化，从而获得黄色固体形式的目标化合物403-19(78毫克，62％)。LCMS：551[M+1]+。
步骤15d.N1-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基)-N4-羟基琥珀酰胺(化合物19)
制备出的所述标题化合物19是淡黄色固体形式(63毫克，81％)，是由化合物403-19(78毫克，0.14毫摩)通过与化合物13的制备方法(实施例11)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：552[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.20(t，J＝6Hz，2H)，2.38(t，J＝6Hz，2H)，4.28(d，J＝6Hz，2H)，6.70(d，J＝3Hz，1H)，6.84(s，1H)，7.09(d，J＝9Hz，2H)，7.55-7.68(m，4H)，8.12(s，1H)，8.34(d，J＝6Hz，2H)，8.44(s，1H)，8.69(s，1H)，9.13(s，1H)，9.37(s，1H)，10.38(s，1H)。
实施例16：N 1 -((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基) 酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基)-N 5 -羟基戊二酰胺(化合 物20)的制备方法
步骤16a.4-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)-4-氧代丁酸甲酯(化合物403-20)
制备出的所述标题化合物403-20是黄色固体形式(50毫克，44.3％)，是由化合物402(85毫克，0.20毫摩)以及5-甲氧基-5-氧代戊酸(35毫克，0.24毫摩)通过与化合物403-19的制备方法(实施例15)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：565[M+1]+。
步骤16b.N1-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基)-N5-羟基戊二酰胺(化合物20)
制备出的所述标题化合物20是淡黄色固体形式(40毫克，88.5％)，是由化合物403-20(45毫克，0.08毫摩)通过与化合物13的制备方法(实施例11)中所描述的类似方法制备得到的：熔点161.8～164.9℃，LCMS：566[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.69(m，2H)，1.95(t，J＝7.2Hz，2H)，2.12(t，J＝7.5Hz，2H)，4.27(d，J＝5.1Hz，2H)，6.74(d，J＝3.6Hz，2H)，7.07(d，J＝9.0Hz，2H)，7.62(m，4H)，8.17(s，1H)，8.34(d，J＝7.2Hz，2H)，9.51(s，1H)，10.27(s，1H)，10.43(s，1H)，10.61(s，1H)。
实施例17：N 1 -((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基) 酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基)-N 6 -羟基己二酰二胺(化 合物21)的制备方法
步骤17a.6-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)-6-氧代过氧化己酸(化合物403-21)
制备出的所述标题化合物403-21是黄色固体形式(84毫克，63％)，是由化合物402(100毫克，0.23毫摩)以及6-甲氧基-6-氧代己酸(43毫克，0.27毫摩)通过与化合物403-19的制备方法(实施例15)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：581[M+1]+。
步骤17b.N1-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基)-N6-羟基己二酰二胺(化合物21)
制备出的所述标题化合物21是淡黄色固体形式(56毫克，69％)，是由化合物403-21(80毫克，0.14毫摩)通过与化合物13的制备方法(实施例11)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：582[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.45(s，4H)，1.94(t，J＝6Hz，2H)，2.11(t，J＝6Hz，2H)，4.27(d，J＝6Hz，2H)，6.74(s，2H)，7.10(d，J＝9Hz，2H)，7.56-7.69(m，4H)，8.12(s，1H)，8.34(d，J＝6Hz，2H)，8.69(s，1H)，9.18(s，1H)，9.42(s，1H)，10.35(s，1H)。
实施例18：N 1 -((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基) 酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基)-N 8 -羟基辛二酰胺(化合 物23)的制备方法
步骤18a.8-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基氨基)-8-氧代辛酸甲酯(化合物403-23)
制备出的所述标题化合物403-23是黄色固体形式(93毫克，67％)，是由化合物402(100毫克，0.23毫摩)以及8-甲氧基-8-氧代辛酸(51毫克，0.27毫摩)通过与化合物403-19的制备方法(实施例15)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：607[M+1]+。
步骤18b.N1-((4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)酰脲基)苯氧基)吡啶基-2-基)甲基)-N8-羟基辛二酰胺(化合物23)
制备出的所述标题化合物23是淡黄色固体形式(52毫克，61％)，是由化合物403-23(88毫克，0.14毫摩)通过与化合物13的制备方法(实施例11)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：608[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.20-1.23(m，4H)，1.14-1.45(s，4H)，1.93(t，J＝6Hz，2H)，2.10(t，J＝6Hz，2H)，4.26(d，J＝6Hz，2H)，6.72-6.77(m，2H)，7.06(d，J＝9Hz，2H)，7.56-7.71(m，4H)，8.19(s，1H)，8.34(d，J＝6Hz，2H)，8.69(s，1H)，10.44(s，1H)，10.76(s，1H)。
生物学检测：
如前文中所指明的，本发明中定义的所述衍生物具有抗增殖的活性。这些特性可以通过例如下文中列出的一种或者一种以上方法进行评价：
(a)测定受试化合物抑制激酶的能力的体外检测。
所述Raf激酶检测是通过遵循Raf激酶检测试剂盒(B-Raf，Upstate，catalog#17-359；C-Raf，Upstate，catalog#17-360)制定的方案并加以修饰来完成的。在96孔检测培养板中将检测缓冲液、三磷酸腺苷、底物以及Raf激酶进行短暂混合。最终的激酶检测混合液中含有20毫摩pH7.2的MOPS(培养基)，25毫摩β-磷酸甘油，5毫摩乙二醇二乙醚二氨四乙酸(EGTA)，1毫摩正矾酸钠，1毫摩二硫苏糖醇(DTT)，250微摩三磷酸腺苷(ATP)以及37.5毫摩氯化镁，0.1微克/孔的Raf激酶，以及1微克/孔的有丝分裂原活化蛋白激酶-1(MEK-1)底物蛋白。将检测样本在室温下培养30分钟。通过加入pH为8的乙二胺四乙酸(EDTA)达到25毫摩的最终浓度来终止所述激酶反应。将10微升的反应样本投斑(spot onto)至硝化纤维素过滤器中并且通过加入1微克/毫升抗磷酸化MEK-1抗体的封闭溶液(Licor Bioscience，catalog#927-40000)进行打点(dot blot)。随后利用次级IRDye800CW山羊抗兔抗体(Licor Bioscience，catalog#926-32211)对所述硝化纤维素过滤器进行培养，在此之后利用Odyssey成像器(Licor Bioscience)对所述信号进行读取。
利用HTScanTM血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)激酶检测试剂盒(Cell Signaling Technologies，Danvers，MA)对化合物抑制血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)激酶活性的能力进行检测。血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)酪氨酸激酶是通过杆状病毒表达系统制备得到的，其来自于一个含有人类血管内皮生长因子受体2cDNA激酶结构域(Asp 805-Val 1356)(GenBank accession No.AF035121)片段氨基末端融合有GST-HIS6-Thrombin切割位点的构建体。所述蛋白是通过利用谷胱甘肽-琼脂糖的一步亲合色谱法进行纯化的。一种抗磷酸化酪氨酸单克隆抗体P-Tyr-100被用来检测生物素(酰)化的底物肽(血管内皮生长因子受体2，生物素-胃泌激素前体(Tyr 87))的磷酸化作用。酶活性是在下述试剂中检测的：60毫摩羟乙基呱嗪乙硫磺酸(HEPES)，5毫摩氯化镁，5毫摩氯化锰，200微摩三磷酸腺苷(ATP)，1.25毫摩二硫苏糖醇(DTT)，3微摩正矾酸钠(Na3VO4)，1.5毫摩肽，以及50纳克表皮生长因子受体激酶。结合抗体的检测是利用DELFIA系统(PerkinElmer，Wellesley，MA)，所述系统由DELFIA
Figure G2007800418082D04361
铕标记的抗小鼠IgG(免疫球蛋白)(PerkinElmer，#AD0124)、DELFIA
Figure G2007800418082D04362
强化溶液(PerkinElmer，#1244-105)、以及DELFIA
Figure G2007800418082D04363
链亲合素涂层的96孔培养板(PerkinElmer，AAAND-0005)构成。荧光性是由WALLAC Victor2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。
将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以得到20毫摩的工作储备浓缩液。每项检测都是通过如下步骤建立的：向1.25毫升、6毫摩的底物肽中加入100微升10毫摩的三磷酸腺苷(ATP)。利用蒸馏水将所述混合液稀释至2.5毫升，从而制备出二倍的(2X)三磷酸腺苷/底物混合液([三磷酸腺苷]＝400毫摩，[底物]＝3毫摩)。将酶从-80℃下迅速转移至冰上。使酶在冰上解冻。在4℃下进行短暂的微离心，从而将液体带入所述试管的底部。立即重新置于冰上。向2.5毫升四倍的(4X)HTScanTM酪氨酸激酶缓冲液(240毫摩pH7.5的羟乙基呱嗪乙硫磺酸，20毫摩氯化镁，20毫摩氯化锰，12毫摩偏矾酸钠)中加入10微升二硫苏糖醇(1.25毫摩)，从而获得二硫苏糖醇/激酶缓冲液。将1.25毫升的二硫苏糖醇/激酶缓冲液转移至酶试管中，从而获得四倍的(4X)反应混合液(在四倍的反应混合液中[酶]＝4纳克/微升)。在室温下以12.5微升/孔的量利用预先稀释的目标化合物(通常在10微摩左右)对12.5微升四倍的(4X)反应混合液培养5分钟。以25微升/孔的量向预先培养的反应混合液/化合物中加入25微升的二倍(2X)三磷酸腺苷/底物混合液。将反应板在室温下培养30分钟。以50微升/孔的量加入终止缓冲液(50毫摩乙二胺四乙酸，pH8)以终止所述反应。将25微升的每种反应液以及75微升/孔的蒸馏水转移至链亲合素涂层的96孔培养板中并且在室温下培养60分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温(磷酸缓冲液，0.05％的吐温-20)洗涤三次。在磷酸缓冲液/吐温(PBS/T)中，以1∶1000的比例利用1％的牛血清白蛋白(BSA)稀释初级抗体磷酸-酪氨酸单克隆抗体(P-Tyr-100)。以100微升/孔的量加入初级抗体。在室温下培养60分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温洗涤三次。在磷酸缓冲液/吐温(PBS/T)中，以1∶500的比例利用1％的牛血清白蛋白(BSA)稀释铕标记的抗小鼠免疫球蛋白(IgG)。以100微升/孔的量加入稀释的抗体。在室温下培养30分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温洗涤五次。以100微升/孔的量加入DELFIA强化溶液。在室温下培养5分钟。利用适当的时间分辨培养板读数器(Time-Resolved Plate Reader)检测615纳米处发射出的荧光。
(b)测定受试化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)酶活 性的能力的体外检测。
利用组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)荧光计检测试剂盒(AK-500，Biomol，Plymouth Meeting，PA)对组蛋白脱乙酰基酶进行筛选。将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以形成20毫摩的工作储备浓缩液。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。
每项检测都是通过如下步骤建立的：解冻所有的试剂盒成分并且将其保存于冰上直至使用。在检测缓冲液(50毫摩Tris/Cl，pH8.0，137毫摩氯化钠，2.7毫摩氯化钾，1毫摩氯化镁)中以1∶29的比例稀释HeLa核提取物。在检测缓冲液中制备曲古抑菌素A(TSA，阳性对照)以及受试化合物的稀释液(五倍于最终浓度)。在检测缓冲液中将Fluor de LysTM底物稀释至100微摩(50倍＝2倍的最终浓度)。在冷的检测缓冲液中将Fluor de LysTM显影剂浓缩物稀释20倍(例如，50微升的显影剂浓缩物加入950微升的检测缓冲液)。其次，在一倍的显影剂(Developer)中将0.2毫摩的曲古抑菌素A稀释100倍(例如，1毫升中的10微升；在一倍显影剂中的最终曲古抑菌素A的浓度＝2微摩；加入组蛋白脱乙酰基酶/底物反应液后的最终浓度＝1微摩)。加入检测缓冲液，在所述微量滴定板的适当孔中稀释曲古抑菌素A或者受试抑制剂。在除去阴性对照之外的其他所有孔中加入稀释的HeLa提取物或者其他组蛋白脱乙酰基酶样本。允许被稀释的Fluor deLysTM底物以及所述微量滴定板中的所述样本平衡至检测温度(例如，25℃或者37℃)。通过向每个孔中加入稀释的底物(25微升)并且充分混合来激发组蛋白脱乙酰基酶反应。允许组蛋白脱乙酰基酶反应进行1小时，之后通过加入Fluor de LysTM显影剂(50微升)终止反应。在室温下(25℃)对培养板培养10-15分钟。通过能够在350-380纳米范围内的波长下被激发的微量滴定板读数荧光计对样本进行读数，并且检测440-460纳米范围内的发射光。
下述表6-B列出了本发明代表性的化合物以及它们在组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)检测、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)检测以及RAF检测中的活性。在这些检测中，使用到下述分级：对于IC50而言，I≥10微摩，10微摩＞II＞1微摩，1微摩＞III＞0.1微摩，以及IV≤0.1微摩。
表6-B
化合物编号   HDAC   B-Raf   C-Raf   VEGFR2   PDGFR   cKit
  1   II
  2   II
  3   II
  5   III   II   II   IV   III   IV
  6   III
  7   II   III   III   IV
  9   III   IV
  10   II
  12   III   IV   IV   IV   IV
  16   III
  17   III   III
  18   III   III
  19   III
  20   III   IV
  21   III   IV   III   IV
  23   III   IV   III   IV
  25   II
  26   II
  27   III
  28   III
  31   II
  32   III   IV
  33   II
  34   III
  36   I   II
Figure G2007800418082D04401
第七部分：
表7-A
Figure G2007800418082D04402
Figure G2007800418082D04411
Figure G2007800418082D04421
Figure G2007800418082D04431
Figure G2007800418082D04461
Figure G2007800418082D04471
方案1
Figure G2007800418082D04481
方案2
Figure G2007800418082D04491
方案3
Figure G2007800418082D04492
方案4
Figure G2007800418082D04493
方案5
Figure G2007800418082D04501
方案6
Figure G2007800418082D04502
实施例1：2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫 基)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基乙酰胺(化合物1)的制备方法
步骤1a.5-溴-6-碘苯并[1，3]二氧戊烷(化合物102)
将化合物101(10.0克，50.0毫摩)、无水乙腈(150毫升)、三氟乙酸(11.4克，100.0毫摩)以及硫酸镍(NIS)(33.7克，150.0毫摩)组成的溶液在室温下搅拌24小时。在减压条件下除去所述溶剂并且利用柱层析法在硅胶柱上(石油)对得到的粗产物进行纯化，从而获得白色固体形式的化合物102(18.5克，91％)：1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ5.99(s，2H)，7.10(s，1H)，7.26(s，1H)。
步骤1b.6-氨基-7氢-嘌呤-8(9氢)-硫酮(化合物104)
将4，5，6-三氨基嘧啶硫酸盐(50.0克，223.0毫摩)、氢氧化钠(19.7克，493.0毫摩)以及水(500毫升)组成的混合液加热至80℃直至所有的固体溶解。将所述溶液冷却至0-5℃并且利用1N的盐酸将其pH调整至7.0，由此所述的游离碱以白色针状物的形式发生结晶(27.6克，99％)。将4，5，6-三氨基嘧啶103(10.0克，80.0毫摩)以及硫脲(18.3克，240.0毫摩)的1，2-二氯苯(60毫升)溶液所组成的混合液在160℃下搅拌14小时。冷却至室温并且将所述混合液凝固。将其中透明的液体倒出，将所述固体捣碎并且利用盐水进行稀释。将所述混合液在室温下搅拌2小时并且过滤，从而获得粗产物。利用盐水以及乙醚对所述粗产物进行洗涤，干燥，从而获得淡黄色固体形式的标题化合物104(7.35克，54.9％)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ6.77(s，2H)，8.08(s，1H)，12.06(s，1H)，13.05(s，1H)。
步骤1c.8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-6-胺(化合物105)
在氮气环境中，将化合物104(5.0克，30.0毫摩)、化合物102(14.7克，45.0毫摩)、一水合新铜试剂(0.625克，3.0毫摩)、碘化亚铜(0.571克，3.0毫摩)以及NaO-t-Bu(3.5克，36.0毫摩)的无水二甲基甲酰胺(100毫升)溶液所组成的混合液在110℃(油浴)下搅拌24小时。在高真空状态下除去所述的溶剂并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇：30/1)对得到的粗产物进行纯化，从而获得黄色固体形式的目标化合物105(5.3克，48.2％)：LCMS：366[M]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ6.09(s，2H)，7.02(s，1H)，7.11(s，2H)，7.35(s，1H)，8.06(s，1H)。
步骤1d.2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙酸乙酯(化合物106-1)
将化合物105(1.0克，2.73毫摩)、碳酸铯(1.5克，4.64毫摩)、2-溴乙酸乙酯(0.685克，4.1毫摩)以及无水二甲基甲酰胺(40毫升)组成的混合液在室温下搅拌6小时。在高真空状态下除去所述的溶剂并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇：100/1)对得到的粗产物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述标题化合物106-1(0.65克，52.6％)：LCMS：452[M+1]+。
步骤1e.2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基乙酰胺(化合物1)
在0℃下向处于搅拌状态中的盐酸羟胺(4.67克，67.0毫摩)的甲醇(24毫升)溶液中加入氢氧化钾(5.61克，100.0毫摩)的甲醇(14毫升)溶液。在加入之后，将所述混合液在0℃下搅拌30分钟，并且将其在低温下进行放置。分离得到的沉淀，并且从所述溶液中制备得到游离的羟胺。
将化合物106-1(300毫克，0.66毫摩)以及饱和的羟胺溶液(1.77M，5毫升)组成的混合液在室温下搅拌30分钟。利用醋酸将所述混合液的pH调整至7.0并且除去所述溶剂。将得到的固体用水进行稀释并且过滤，从而获得白色固体形式的化合物1(85毫克，29.2％)：熔点230℃(分解)，LCMS：439[M]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ4.84(s，2H)，6.04(s，2H)，7.00(s，1H)，7.26(s，1H)，8.04(s，2H)，8.24(s，1H)，9.11(s，1H)，10.98(s，1H)。
实施例2：4-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫 基)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基丁酰胺(化合物3)的制备方法
步骤2a.4-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)丁酸乙酯(化合物106-3)
制备出的所述标题化合物106-3是白色固体形式(280毫克，21.4％)，是由化合物105(1.0克，2.73毫摩)、碳酸铯(1.5克，4.64毫摩)、4-溴丁酸乙酯(800毫克，4.1毫摩)通过与化合物106-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：480.34[M+1]+。
步骤2b.4-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基丁酰胺(化合物3)
制备出的所述标题化合物3是白色固体形式(207毫克，76％)，是由化合物106-3(280毫克，0.58毫摩)以及羟胺溶液(1.77M，5毫升)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点164.7～181.0℃，LCMS：468[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.93(s，4H)，4.14(t，2H，J＝6.3Hz)，6.07(s，2H)，6.84(s，1H)，7.34(s，1H)，7.35(s，2H)，8.12(s，1H)，8.70(s，1H)，10.35(s，1H)。
实施例3：5-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫 基)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基戊酰胺(化合物4)的制备方法
步骤3a.5-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)戊酸甲酯(化合物106-4)
制备出的所述标题化合物106-4是灰黄色固体形式(463毫克，35.3％)，是由化合物105(1.0克，2.73毫摩)、碳酸铯(1.5克，4.64毫摩)、5-溴戊酸乙酯(800毫克，4.1毫摩)通过与化合物106-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：480[M]+。
步骤3b.5-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基戊酰胺(化合物4)
制备出的所述标题化合物4是白色固体形式(130毫克，28％)，是由化合物106-4(463毫克，0.96毫摩)以及羟胺溶液(1.77M，5毫升)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点191.8～195.7℃，LCMS：481[M]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.43(q，2H，J1＝6.9Hz，J2＝14.7Hz)，1.68(m，2H)，1.94(t，2H，J＝7.5Hz)，4.14(t，2H，J＝6.9Hz))，6.10(s，2H)，6.86(s，1H)，7.37(s，1H)，7.39(s，2H)，8.15(s，1H)，8.67(s，1H)，10.33(s，1H)。
实施例4：6-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫 基)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基己酰胺(化合物5)的制备方法
步骤4a.6-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)己酸乙酯(化合物106-5)
制备出的所述标题化合物106-5是黄色固体形式(0.35克，25.2％)，是由化合物105(1.0克，2.73毫摩)、碳酸铯(1.5克，4.64毫摩)、6-溴己酸乙酯(914毫克，4.1毫摩)通过与化合物106-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：508[M+1]+。
步骤4b.6-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基己酰胺(化合物5)
制备出的所述标题化合物5是灰黄色固体形式(200毫克，57.6％)，是由化合物106-5(350毫克，0.7毫摩)以及羟胺溶液(1.77M，5毫升)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点159.6～169℃，LCMS：496[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.18(q，2H，J1＝6.3Hz，J2＝14.7Hz)1.48(m，2H)，1.65(m，2H)，1.90(t，2H，J＝7.5Hz)，4.14(t，2H，J＝6.9Hz)，6.11(s，2H)，6.86(s，1H)，7.39(s，1H)，7.41(s，2H)，8.17(s，1H)，8.68(s，1H)，10.33(s，1H)。
实施例5：7-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫 基)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基庚酰胺(化合物6)的制备方法
步骤5a.7-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)庚酸乙酯(化合物106-6)
制备出的所述标题化合物106-6是黄色固体形式(542毫克，43.7％)，是由化合物105(1.0克，2.73毫摩)、碳酸铯(1.5克，4.64毫摩)、7-溴庚酸乙酯(972毫克，4.1毫摩)通过与化合物106-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：522[M+1]+。
步骤5b.7-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基庚酰胺(化合物6)
制备出的所述标题化合物6是白色固体形式(130毫克，24.8％)，是由化合物106-6(542毫克，0.66毫摩)以及羟胺溶液(1.77M，5毫升)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点193.9～193.9℃，LCMS：511[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.20(m，4H)，1.43(m，2H)，1.62(m，2H)，1.90(t，2H，J＝7.5Hz)，4.13(t，2H，J＝6.9Hz)，6.10(s，2H)，7.00(s，1H)，6.83(s，1H)，7.37(s，1H)，7.42(s，2H)，8.16(s，1H)，8.65(s，1H)，10.32(s，1H)。
实施例6：6-(6-氨基-8-(2-碘-5-甲氧基苯基硫)-9氢-嘌呤 基-1-基)-N-羟基己酰胺(化合物11)的制备方法
步骤6a.8-(3-甲氧基苯基硫)-9氢-嘌呤基-6-胺(化合物201)
在氮气环境中，将化合物104(2.0克，12毫摩)、1-碘-3-甲氧基苯(4.21克，18毫摩)、1，10-二氮杂菲的一水合物(0.24克，1.2毫摩)、碘化亚铜(0.23克，1.2毫摩)以及NaO-t-Bu(1.38克，14.4毫摩)的无水二甲基甲酰胺(20毫升)溶液所组成的混合液在110℃(油浴)下搅拌24小时。在高真空状态下除去所述的溶剂并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝30/1)对得到的粗产物进行纯化，从而获得黄色固体形式的目标化合物201(0.86克，26％)：LCMS：274[M+1]+。
步骤6b.8-(2-碘-5-甲氧基苯基硫)-9氢-嘌呤基-6-胺(化合物202)
将化合物201(0.69克，2.52毫摩)、硫酸镍(3.4克，15.12毫摩)、三氟乙酸(1.44克，12.6毫摩)以及乙腈(150毫升)组成的混合液在室温下搅拌4小时。除去所述溶剂并且将得到的残余物悬浮于饱和的碳酸氢钠水溶液中，收集得到的固体并且进行干燥，从而获得灰黄色固体形式的化合物202(810毫克，80％)：LCMS：400[M+1]+。
步骤6c.6-(6-氨基-8-(2-碘-5-甲氧基苯基硫)-9氢-嘌呤基-9-基)己酸乙酯(化合物203-11)
将化合物202(102毫克，0.25毫摩)、碳酸铯(98毫克，0.3毫摩)、6-溴己酸乙酯(56毫克，0.25毫摩)以及无水二甲基甲酰胺(5毫升)组成的混合液在60℃下搅拌2小时。在高真空条件下除去所述溶剂并且利用柱层析法在硅胶柱上(乙酸乙酯/石油醚＝1/2)对得到的粗产物进行纯化，从而获得黄色固体形式的化合物203-11(52毫克，38％)：LCMS：542[M+1]+。
步骤6d.6-(6-氨基-8-(2-碘-5-甲氧基苯基硫)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基己酰胺(化合物11)
在0℃下向处于搅拌状态中的盐酸羟胺(4.67克，67.0毫摩)的甲醇(24毫升)溶液中加入氢氧化钾(5.61克，100.0毫摩)的甲醇(14毫升)溶液。在加入之后，将所述混合液在0℃下搅拌30分钟，并且将其在低温下进行放置。分离得到的沉淀，并且从所述溶液中制备得到游离的羟胺。
将化合物203-11(50毫克，0.09毫摩)以及新鲜制备的羟胺/甲醇溶液(1.77M，3毫升，5.3毫摩)组成的混合液在室温下搅拌15分钟。利用醋酸将所述反应混合液调节至中性，并且除去所述溶剂，从而获得粗产物。利用制备型高效液相色谱(HPLC)对得到的粗产物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述标题化合物11(15毫克，31％)：LCMS：529[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6.)：δ1.18(m，2H)，1.42(m，2H)，1.64(m，2H)，1.86(t，J＝6.9Hz，2H)，3.62(s，3H)，4.12(t，J＝7.2Hz，2H)，6.49(d，J＝2.7Hz，1H)，6.70(dd，J1＝3.0Hz，J2＝8.4Hz，1H)，7.51(s，2H)，7.78(d，J＝8.1Hz，1H)，8.19(s，1H)，8.65(s，1H)，10.29(s，1H)。
实施例7：7-(6-氨基-8-(2-碘-5-甲氧基苯基硫)-9氢-嘌呤 基-1-基)-N-羟基庚酰胺(化合物12)的制备方法
步骤7a.7-(6-氨基-8-(2-碘-5-甲氧基苯基硫)-9氢-嘌呤基-9-基)庚酸乙酯(化合物203-12)
制备出的所述标题化合物203-12是黄色固体形式(72毫克，22％)，是由化合物202(239毫克，0.6毫摩)，碳酸铯(391毫克，1.2毫摩)，7-溴庚酸乙酯(156毫克，0.66毫摩)以及无水二甲基甲酰胺(5毫升)通过与化合物203-11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到：LCMS：556[M+1]+。
步骤7b.7-(6-氨基-8-(2-碘-5-甲氧基苯基硫)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基庚酰胺(化合物12)
制备出的所述标题化合物12是灰白色固体形式(11毫克，16％)，是由化合物203-12(71毫克，0.13毫摩)以及羟胺/甲醇(1.77M，3毫升，5.3毫摩)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：543[M+1]+，1HNMR(二甲基亚砜-δ1.16(m，4H)，1.37(m，2H)，1.61(m，2H)，1.87(t，J＝7.8Hz，2H)，3.61(s，3H)，4.12(t，J＝6.9Hz，2H)，6.49(d，J＝3.0Hz，1H)，6.70(dd，J1＝2.7Hz，J2＝8.7Hz，1H)，7.51(s，2H)，7.78(d，J＝8.7Hz，1H)，8.19(s，1H)，8.64(s，1H)，10.30(s，1H)。
实施例8：2-(3-(6-氨基-9-(戊-4-炔基)-9氢-嘌呤基-8- 硫基)苯氧基)-N-羟基乙酰胺(化合物14)的制备方法
步骤8a.8-溴-9氢-嘌呤基-6-胺(化合物302)
在搅拌状态下向水(25毫升)中加入溴(9.36克，58.5毫摩)，随后向所述溶液中加入所述化合物301(1.1克，8.1毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌过夜。除去过量的溴并且蒸发所述溶剂，从而获得淡黄色固体形式的化合物302(1.28克，74％)。所述粗产物无需进行进一步的纯化即可使用：LC-MS：214[M+1]+。
步骤8b.8-溴-9-(戊-4-炔基)-9氢-嘌呤基-6-胺(化合物303-14)
将化合物302(1.7克，8.1毫摩)、5-氯戊-1-炔(1.7克，16.2毫摩)、碳酸铯(5.8克，17.8毫摩)以及25毫升二甲基甲酰胺组成的混合液加热至85℃并且搅拌过夜。随后在真空状态下除去二甲基甲酰胺。利用柱层析法(二氯甲烷∶甲醇＝40∶1)对所述残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的化合物303-14(512毫克，23％)：LC-MS：280[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.91(m，2H)，2.22(m，2H)，2.79(t，J＝2.4Hz，1H)，4.18(t，J＝7.2Hz，2H)，7.36(s，2H)，8.11(s，1H)。
步骤8c.3-(6-氨基-9-(戊-4-炔基)-9氢-嘌呤基-8-硫基)苯酚(化合物304-14)
将3-巯基苯酚(134毫克，1.1毫摩)以及氨水(60毫克，3.5毫摩)溶解于2毫升甲醇中，将所述混合液在70℃下搅拌0.5小时。随后，向所述混合液中加入化合物303-14(200毫克，0.7毫摩)的3毫升甲醇溶液中。将所述混合液在60℃下搅拌过夜。在真空状态下除去所述溶剂，并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷∶甲醇＝40∶1)对得到的残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的化合物304-14(170毫克，74％)。LC-MS：326[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)；δ1.80(m，2H)，2.22(m，2H)，2.76(t，J＝2.4Hz，1H)，4.18(t，J＝7.2Hz，2H)，6.59～6.75(m，3H)，7.14(t，J＝7.5Hz，1H)，7.44(b，2H)，8.15(s，1H)，9.66(s，1H)。
步骤8d.2-(3-(6-氨基-9-(戊-4-炔基)-9氢-嘌呤基-8-硫基)苯氧基)乙酸甲酯(化合物305-14)
将化合物304-14(120毫克，0.37毫摩)、碳酸钾(153毫克，1.1毫摩)以及2-溴乙酸乙酯(92毫克，0.55毫摩)的混合物溶解于5毫升二甲基甲酰胺中。将所述混合液加热至70℃并且搅拌4小时。在真空条件下除去所述溶剂并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)对得到的残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的化合物305-14(86毫克，59％)：LC-MS：398[M+1]+。
步骤8e.2-(3-(6-氨基-9-(戊-4-炔基)-9氢-嘌呤基-8-硫基)苯氧基)-N-羟基乙酰胺(化合物14)
制备出的所述标题化合物14是白色固体形式(50毫克，57％)，是由化合物305-14(86毫克，0.22毫摩)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点165～166℃，LC-MS：399[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.84(m，2H)，2.15(m，2H)，2.78(t，J＝2.4Hz，1H)，4.19(t，J＝7.2Hz，2H)，4.44(s，2H)，6.84～6.96(m，3H)，7.26(m，1H)，7.43(b，2H)，8.15(s，1H)，8.96(s，1H)，10.81(s，1H)。
实施例9：4-(3-(6-氨基-9-(戊-4-炔基)-9氢-嘌呤基-8- 硫基)苯氧基)-N-羟基丁酰胺(化合物16)的制备方法
步骤9a.4-(3-(6-氨基-9-(戊-4-炔基)-9氢-嘌呤基-8-硫基)苯氧基)丁酸乙酯(化合物305-16)
制备出的所述标题化合物305-16是白色固体形式(120毫克，64％)，是由化合物304(135毫克，0.42毫摩)、碳酸钾(165毫克，1.2毫摩)以及4-溴丁酸乙酯(123毫克，0.63毫摩)通过与化合物305-14的制备方法(实施例8)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：440[M+1]+。
步骤9b.4-(3-(6-氨基-9-(戊-4-炔基)-9氢-嘌呤基-8-硫基)苯氧基)-N-羟基丁酰胺(化合物16)
制备出的所述标题化合物16是白色固体形式(50毫克，48％)，是由化合物305-16(110毫克，0.25毫摩)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点159～162℃，LC-MS：427[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.83(m，4H)，2.04～2.18(m，4H)，2.77(t，J＝2.4Hz，1H)，3.90(t，J＝6.0Hz，2H)，4.20(t，J＝8.1Hz，2H)，6.80～6.90(m，3H)，7.24(m，1H)，7.42(b，2H)，8.14(s，1H)，8.68(s，1H)，10.37(s，1H)。
实施例10：6-(3-(6-氨基-9-(戊-4-炔基)-9氢-嘌呤基-8- 硫基)苯氧基)-N-羟基己酰胺(化合物18)的制备方法
步骤10a.6-(3-(6-氨基-9-(戊-4-炔基)-9氢-嘌呤基-8-硫基)苯氧基)己酸乙酯(化合物305-18)
制备出的所述标题化合物305-18是白色固体形式(238毫克，85.4％)，是由化合物304(194毫克，0.60毫摩)、碳酸钾(247毫克，1.8毫摩)以及6-溴己酸乙酯(143毫克，0.89毫摩)通过与化合物305-14的制备方法(实施例8)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：468[M+1]+。
步骤10b.6-(3-(6-氨基-9-(戊-4-炔基)-9氢-嘌呤基-8-硫基)苯氧基)-N-羟基己酰胺(化合物18)
制备出的所述标题化合物18是白色固体形式(50毫克，45.8％)，是由化合物305-18(110毫克，0.24毫摩)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点169.1～172.1℃，LC-MS：455[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.33(m，2H)，1.49(m，2H)，1.63(m，2H)，1.81(m，2H)，1.95(t，J＝7.2Hz，2H)，2.17(m，2H)，2.81(t，J＝2.4Hz，1H)，3.89(t，J＝6.0Hz，2H)，4.22(t，J＝7.5Hz，2H)，6.82～6.89(m，3H)，7.24(m，1H)，7.48(b，2H)，8.16(s，1H)，8.69(s，1H)，10.35(s，1H)。
实施例11：3-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯 -5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)-N-羟基丙酰胺(化合物 20)的制备方法
步骤11a.2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙酸乙酯(化合物401-20)
将化合物105-1(8.66克，23.65毫摩)、碳酸铯(11.53克，35.47毫摩)、2-溴乙酸乙酯(5.92克，35.47毫摩)以及无水二甲基甲酰胺(150毫升)组成的混合液在50℃下搅拌2小时。在高真空条件下除去所述溶剂并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝60/1)对得到的粗产物进行纯化，从而获得灰黄色固体形式的化合物401-20(7.0克，65.4％)：LCMS：452[M+1]+。
步骤11b.2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙醇(化合物402-20)
在50℃下，利用碳酸钾(3.67克，26.53毫摩)对化合物401-20(4.0克，8.84毫摩)的甲醇(80毫升)悬浮液进行1小时的处理。将所述反应混合液过滤并且浓缩，从而获得灰白色固体形式的所述标题化合物402-20(1.3克，35.7％)：LCMS：410[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ3.72(t，2H，J＝5.4Hz)，4.28(t，2H，J＝5.4Hz)，5.02(t，1H，J＝5.4Hz)，6.10(s，2H)，6.90(s，1H)，7.35(s，3H)，8.16(s，1H)。
步骤11c.2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)甲基磺酸乙酯(化合物403-20)
将化合物402-20(0.6克，1.46毫摩)溶解于热的无水二氧杂环乙烷(35毫升)中。将所述溶液冷却至45℃并且利用三乙胺(0.61毫升，4.39毫摩)以及甲烷磺酰氯(MsCl)(251.2毫克，2.2毫摩)对所述溶液处理20分钟。将所述混合液浓缩并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝60/1)进行纯化，从而获得灰黄色固体形式的化合物403-20(0.68克，95.5％)：LCMS：487[M+1]+。
步骤11d.3-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)丙酸甲酯(化合物404-20)
将盐酸3-氨基丙酸甲酯(494.5毫克，3.54毫摩)溶解于二甲基甲酰胺(4.8毫升)中并且随后向上述溶液中加入三乙胺(0.74毫升，5.31毫摩)。将所述混合液在0℃下搅拌0.5小时并且随后向其中加入化合物403-20(173毫克，0.35毫摩)。将所述反应混合液在80℃下搅拌12小时。在高真空条件下除去二甲基甲酰胺并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝50/1)对得到的粗产物进行纯化，从而获得粘性黄色固体形式的目标化合物404-20(121毫克，69％)：LCMS：495[M+1]+。
步骤11e.3-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)-N-羟基丙酰胺(化合物20)
制备出的所述标题化合物20是灰白色固体形式(33毫克，16.5％)，是由化合物404-20(200毫克，0.40毫摩)以及新鲜制备的羟胺甲醇溶液(1.77M，10毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：496[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.05(t，2H，J＝6.9Hz)，2.69(t，2H，J＝6.9Hz)，2.83(t，2H，J＝6.3Hz)，4.22(t，2H，J＝6.3Hz)，6.10(s，2H)，6.88(s，1H)，7.36(s，1H)，7.37(s，2H)，8.16(s，1H)。
实施例12：6-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯 -5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)-N-羟基己酰胺(化合物 23)的制备方法
步骤12a.6-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)己酸甲酯(化合物404-23)
制备出的所述标题化合物404-23是粘性黄色固体形式(117毫克，23.6％)，是由化合物403-20(450毫克，0.92毫摩)、盐酸6-氨基己酸甲酯(1.67克，9.21毫摩)以及氢氧化钾(0.52克，9.21毫摩)的甲醇(1.5毫升)溶液通过与化合物404-20的制备方法(实施例11)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：537[M+1]+。
步骤12b.6-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)-N-羟基己酰胺(化合物23)
制备出的所述标题化合物23是灰白色固体形式(22毫克，18.8％)，是由化合物404-23(117毫克，0.22毫摩)以及新鲜制备的羟胺甲醇溶液(1.77M，4毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：538[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.26(m，4H)，1.43(m，2H)，1.70(s，1H)，1.90(t，2H，J＝7.2Hz)，2.44(t，2H，J＝7.2Hz)，2.81(t，2H，J＝6.0Hz)，4.22(t，2H，J＝6.0Hz)，6.08(s，2H)，6.84(s，1H)，7.34(s，1H)，7.35(s，2H)，8.15(s，1H)，8.65(s，1H)，10.31(s，1H)。
实施例13：7-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯 -5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)-N-羟基庚酰胺(化合物 24)的制备方法
步骤13a.7-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)庚酸乙酯(化合物404-24)
制备出的所述标题化合物404-24是粘性黄色固体形式(118毫克，27％)，是由化合物403-20(373毫克，0.76毫摩)、盐酸7-氨基庚酸乙酯(1.6克，7.6毫摩)以及氢氧化钾(0.43克，7.6毫摩)的甲醇(1.0毫升)溶液通过与化合物404-20的制备方法(实施例11)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：565[M+1]+。
步骤13b.7-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)-N-羟基庚酰胺(化合物24)
制备出的所述标题化合物24是灰白色固体形式(47毫克，40.5％)，是由化合物404-24(118毫克，0.21毫摩)以及新鲜制备的羟胺甲醇溶液(1.77M，4毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点193～197℃.LCMS：552[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.17(m，6H)，1.44(m，2H)，1.91(t，2H，J＝7.2Hz)，2.43(t，2H，J＝7.2Hz)，2.82(t，2H，J＝6.0Hz)，4.22(t，2H，J＝6.0Hz)，6.08(s，2H)，6.83(s，1H)，7.34(s，1H)，7.36(s，2H)，8.15(s，1H)，8.65(s，1H)，10.31(s，1H)。
实施例14：6-(2-(6-氨基-8-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯 -5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)-N-羟基己酰胺(化合物 38)的制备方法
步骤14a.8-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-6-胺(化合物105-38)
在氮气环境中，将化合物104(0.8克，4.78毫摩)、5，6-二碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯(2.68克，7.18毫摩)、一水合新铜试剂(0.10克，0.48毫摩)、碘化亚铜(0.091克，0.48毫摩)以及NaO-t-Bu(0.55克，5.74毫摩)的无水二甲基甲酰胺(40毫升)溶液所组成的混合液在110℃(油浴)下搅拌24小时。在高真空条件下除去溶剂并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝30/1)对得到的粗产物进行纯化，从而获得黄色固体形式的目标化合物105-38(0.35克，17.6％)：LCMS：414[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ6.09(s，2H)，7.01(s，1H)，7.22(s，2H)，7.51(s，1H)，8.08(s，1H)，13.20(s，1H)。
步骤14b.2-(6-氨基-8-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙酸乙酯(化合物401-38)
将化合物105-38(3.89克，9.41毫摩)、碳酸铯(3.68克，11.3毫摩)、2-溴乙酸乙酯(1.89克，11.3毫摩)以及无水二甲基甲酰胺(50毫升)组成的混合液在50℃下搅拌2小时。在高真空条件下除去所述溶剂并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝60/1)对得到的残余物进行纯化，从而获得灰黄色固体形式的目标化合物401-38(2.95克，62.8％)：LCMS：500[M+1]+。
步骤14c.2-(6-氨基-8-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙醇(化合物402-38)
在50℃下利用碳酸钾(0.98克，7.1毫摩)对化合物401-38(2.95克，5.91毫摩)的甲醇(70毫升)悬浮液进行1小时的处理。将所述反应混合液过滤并且浓缩，从而获得灰白色固体形式的所述标题化合物402-38(1.33克，49.3％)：LCMS：458[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ3.72(t，2H，J＝5.4Hz)，4.27(t，2H，J＝5.4Hz)，5.02(t，1H，J＝5.4Hz)，6.07(s，2H)，6.88(s，1H)，7.34(s，2H)，7.47(s，1H)，8.15(s，1H)。
步骤14d.2-(6-氨基-8-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)甲基磺酸乙酯(化合物403-38)
将化合物402-38(0.52克，1.13毫摩)溶解于热的无水二氧杂环乙烷(25毫升)中。将所述溶液冷却至45℃并且利用三乙胺(0.47毫升，3.39毫摩)以及甲烷磺酰氯(MsCl)(194毫克，1.70毫摩)对所述溶液处理20分钟。将所述混合液浓缩并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝60/1)进行纯化，从而获得灰黄色固体形式的化合物403-38(585毫克，96.7％)：LCMS：536[M+1]+。
步骤14e.6-(2-(6-氨基-8-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)己酸甲酯(化合物404-38)
在0℃下，将氢氧化钾(785毫克，14毫摩)的甲醇(4毫升)溶液逐滴加入到盐酸6-氨基己酸甲酯(2543毫克，14毫摩)的甲醇(4毫升)溶液中。将所述混合液在0℃下搅拌0.5小时，过滤并且所述滤液可以直接在下一步骤中进行使用。向上述滤液中加入化合物403-38(500毫克，0.934毫摩)以及三乙胺(472毫克，4.67毫摩)。将得到的混合液在65℃下搅拌过夜。将所述溶液浓缩并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝150/1)进行纯化，从而获得灰白色固体形式的化合物404-38(77毫克，14％)：LCMS：585[M+1]+。
步骤14f.6-(2-(6-氨基-8-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)-N-羟基己酰胺(化合物38)
制备出的所述标题化合物38是灰白色固体形式(17毫克，22％)，是由化合物404-38(77毫克，0.13毫摩)以及新鲜制备的羟胺甲醇溶液(1.77M，3毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点154～160℃，LCMS：586[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.23(m，4H)1.44(m，2H)，1.91(t，2H，J＝7.4Hz)，2.45(t，2H)，2.81(t，2H，J＝6.3Hz)，4.21(t，2H，J＝6.8Hz)，6.06(s，2H)，6.82(s，1H)，7.35(s，2H)，7.47(s，1H)，8.15(s，1H)，8.64(s，1H)。
实施例15：7-(2-(6-氨基-8-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯 -5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)-N-羟基庚酰胺(化合物 39)的制备方法
步骤15a.7-(2-(6-氨基-8-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)庚酸乙酯(化合物404-39)
制备出的所述标题化合物404-39是灰白色固体形式(100毫克，17％)，是由化合物403-14(500毫克，0.93毫摩)、盐酸7-氨基庚酸乙酯(2936毫克，14毫摩)以及氢氧化钾(785毫克，14毫摩)的甲醇(8.0毫升)溶液通过与化合物404-38的制备方法(实施例14)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：613[M+1]+。
步骤15b.7-(2-(6-氨基-8-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)-N-羟基庚酰胺(化合物39)
制备出的所述标题化合物39是灰白色固体形式(30毫克，31％)，是由化合物404-39(100毫克，0.16毫摩)以及新鲜制备的羟胺甲醇溶液(1.77M，3毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点106～115℃LCMS：600[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.26(m，6H)1.47(m，2H)，1.69(s，1H)，1.91(t，2H，J＝7.4Hz)，2.44(t，2H)，2.81(t，2H，J＝6.6Hz)，4.21(t，2H，J＝6.3Hz)，6.06(s，2H)，6.82(s，1H)，7.36(s，2H)，7.47(s，1H)，8.15(s，1H)，8.65(s，1H)，10.30(s，1H)。
实施例16：8-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯 -5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)-N-羟基辛酰胺(化合物 41)的制备方法
步骤16a.8-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)辛酸甲酯(化合物404-41)
制备出的所述标题化合物404-41是粘性灰黄色固体形式(210毫克，44％)，是由化合物403-20(410毫克，0.84毫摩)、盐酸8-氨基辛酸甲酯(760毫克，3.63毫摩)以及氢氧化钾(203毫克，3.63毫摩)的甲醇(6.0毫升)溶液通过与化合物404-20的制备方法(实施例11)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：566.8[M+1]+。
步骤16b.8-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙基氨基)-N-羟基辛酰胺(化合物41)
制备出的所述标题化合物41是灰白色固体形式(50毫克，24％)，是由化合物404-41(210毫克，0.37毫摩)以及新鲜制备的羟胺甲醇溶液(1.77M，3.5毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点173～175℃，LC-MS：567.8[M+1]+；1H NMR(300MHz，二甲基亚砜-d6)：δ1.18(m，6H)，1.26(m，2H)，1.45(m，2H)，1.69(s，1H)，1.91(t，2H，J＝7.2Hz)，2.44(t，2H，J＝6.3Hz)，2.82(t，2H，J＝6.3Hz)，4.22(t，2H，J＝6.3Hz)，6.08(s，2H)，6.83(s，1H)，7.34(s，1H)，7.35(s，2H)，8.15(s，1H)，8.64(s，1H)，10.30(s，1H)。
实施例17：4-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯 -5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙氧基)-N-羟基丁酰胺(化合物 27)的制备方法
步骤17a.4-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙氧基)丁酸乙酯(化合物501-27)
向化合物402-20(82毫克，0.2毫摩)的二甲基亚砜(1.2毫升)溶液中加入氢氧化钾(13毫克，0.22毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌1小时并且随后向其中加入4-溴丁酸乙酯(39毫克，0.2毫摩)以及四丁基胺(Bu4NI)(3毫克)。将所述混合液加热至55℃并且搅拌过夜。将所述溶液冷却至室温并且利用二氯甲烷(10毫升)进行稀释，用水(3毫升x5)进行洗涤。分离所述有机层并且通过硫酸钠进行干燥，过滤，并且浓缩，从而留下残余物，利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝180/1，带有0.5％的三乙胺)对所述残余物进行纯化，从而获得灰黄色固体形式的501-27(64毫克，61％)。LC-MS：525.7[M+1]+.1HNMR(300MHz，二甲基亚砜-d6)：δ1.14(t，3H，J＝7.2Hz)，1.81(m，2H)，2.35(t，2H，J＝7.2Hz)，3.29(m，2H)，4.00(m，6H)，6.08(s，2H)，6.61(s，2H)，7.16(s，1H)，7.19(s，1H)，8.01(s，1H)。
步骤17b.4-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙氧基)-N-羟基丁酰胺(化合物27)
制备出的所述标题化合物37是白色固体形式(34毫克，35％)，是由化合物501-27(98毫克，0.19毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.77M，4毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点209～211℃，LC-MS：512.8[M+1]+；1H NMR(300MHz，二甲基亚砜-d6)：δ1.77(m，2H)，2.06(t，2H，J＝7.2Hz)，3.29(m，2H)，3.89(t，2H，J＝7.2Hz)，3.98(t，2H，J＝6.9Hz)，6.08(s，2H)，6.77(s，2H)，7.16(s，1H)，7.20(s，1H)，8.01(s，1H)，8.78(s，1H)，10.46(s，1H)。
实施例18：5-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯 -5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙氧基)-N-羟基戊酰胺(化合物 28)的制备方法
步骤18a.5-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙氧基)戊酸甲酯(化合物501-28)
制备出的所述标题化合物501-28是灰黄色固体形式(180毫克，56％)，是由化合物402-20(250毫克，0.61毫摩)、氢氧化钾(38毫克，0.67毫摩)、5-溴戊酸甲酯(119毫克，0.61毫摩)以及四丁基胺(10毫克)通过与化合物27的制备方法(实施例17)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：525.8[M+1]+。
步骤18b.5-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙氧基)-N-羟基戊酰胺(化合物28)
制备出的所述标题化合物28是白色固体形式(120毫克，66％)，是由化合物501-28(180毫克，0.19毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.77M，6毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点181～183℃，LC-MS：526.8[M+1]+；1H NMR(300MHz，二甲基亚砜-d6)：δ1.49(m，4H)，1.94(t，2H，J＝6.9Hz)，3.29(m，2H)，3.96(m，4H)，6.08(s，2H)，6.59(s，2H)，7.17(s，1H)，7.19(s，1H)，8.01(s，1H)，8.67(s，1H)，10.32(s，1H)。
实施例19：6-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯 -5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙氧基)-N-羟基己酰胺(化合物 29)的制备方法
步骤19a.6-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙氧基)己酸乙酯(化合物501-29)
制备出的所述标题化合物501-29是灰白色固体形式(200毫克，59％)，是由化合物402-20(250毫克，0.61毫摩)、氢氧化钾(38毫克，0.67毫摩)、6-溴己酸乙酯(136毫克，0.61毫摩)以及四丁基胺(10毫克)通过与化合物27的制备方法(实施例17)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：552[M+1]+。
步骤19b.6-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙氧基)-N-羟基己酰胺(化合物29)
制备出的所述标题化合物29是灰白色固体形式(45毫克，23％)，是由化合物501-29(200毫克，0.36毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.77M，5毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点168～177℃，LCMS：539[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.21(m，2H)1.50(m，4H)，1.90(t，2H，J＝7.3Hz)，3.96(m，4H)，6.08(s，2H)，6.57(s，2H)，7.17(s，1H)，7.21(s，1H)，8.01(s，1H)，8.64(s，1H)，10.31(s，1H)。
实施例20：7-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯 -5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物 30)的制备方法
步骤20a.7-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙氧基)庚酸乙酯(化合物501-30)
制备出的所述标题化合物501-30是灰白色固体形式(200毫克，58％)，是由化合物402-20(250毫克，0.61毫摩)、氢氧化钾(38毫克，0.67毫摩)、7-溴庚酸乙酯(145毫克，0.61毫摩)以及四丁基胺(10毫克，0.027毫摩)通过与化合物27的制备方法(实施例17)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：566[M+1]+。
步骤20b.7-(2-(6-氨基-8-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)乙氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物30)
制备出的所述标题化合物30是灰白色固体形式(45毫克，23％)，是由化合物501-30(200毫克，0.35毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.77M，5毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点107～111℃，LCMS：553[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.22(m，4H)1.46(m，4H)，1.90(t，2H，J＝7.4Hz)，3.92(m，4H)，6.08(s，2H)，6.57(s，2H)，7.16(s，1H)，7.20(s，1H)，8.01(s，1H)；1H NMR(DMSO-d6+D2O)：δ1.20(m，4H)1.45(m，4H)，1.88(t，2H，J＝7.4Hz)，3.30(t，2H)3.92(m，4H)，6.06(s，2H)，7.13(s，1H)，7.18(s，1H)，8.02(s，1H)。
实施例21：7-(6-氨基-8-(6-氯苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫 基)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基庚酰胺(化合物31)的制备方法
步骤21a.8-(6-氯苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-6-胺(化合物105-31)
在氮气环境中，将化合物104(0.5克，3.64毫摩)、5-氯-6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯(1.27克，5.47毫摩)、一水合新铜试剂(62.3毫克，0.36毫摩)、碘化亚铜(57毫克，0.36毫摩)以及NaO-t-Bu(345毫克，4.37毫摩)的无水二甲基甲酰胺(25毫升)溶液所组成的混合液在110℃(油浴)下搅拌24小时。在高真空状态下除去所述的溶剂并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇：30/1)对得到的粗产物进行纯化，从而获得黄色固体形式的目标化合物105-31(281毫克，24％)：LCMS：322[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ6.12(s，2H)，7.05(s，1H)，7.22(s，2H)，7.27(s，1H)，8.07(s，1H)，13.23(s，1H)。
步骤21b.7-(6-氨基-8-(6-氯苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)庚酸乙酯(化合物106-31)
将化合物105-31(403毫克，1.25毫摩)、碳酸铯(692.2毫克，2.13毫摩)、7-溴庚酸乙酯(446毫克，1.88毫摩)以及无水二甲基甲酰胺(25毫升)组成的混合液在85℃下搅拌6小时。在高真空状态下除去所述的溶剂并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝100/1)对得到的粗产物进行纯化，从而获得黄色粘性固体形式的目标化合物106-31(230毫克，38.5％)：LCMS：478[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.16(m，7H)，1.44(m，2H)，1.65(m，2H)，2.24(t，2H，J＝7.2Hz)，4.02(q，2H，J1＝6.9Hz，J2＝14.1Hz)，4.14(t，2H，J＝6.9Hz)，6.11(s，2H)，6.88(s，1H)，7.27(s，1H)，7.40(s，2H)，8.15(s，1H)。
步骤21c.7-(6-氨基-8-(6-氯苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基庚酰胺(化合物31)
制备出的所述标题化合物31是灰白色固体形式(75毫克，55.5％)，是由化合物106-31(140毫克，0.29毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.77M，4毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点128～134℃，LCMS：465[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.20(m，4H)，1.40(m，2H)，1.65(m，2H)，1.90(t，2H，J＝7.5Hz)，4.13(t，2H，J＝6.9Hz)，6.11(s，2H)，6.89(s，1H)，7.28(s，1H)，7.40(s，2H)，8.15(s，1H)，8.66(s，1H)，10.33(s，1H)。
实施例22：7-(6-氨基-8-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫 基)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基庚酰胺(化合物32)的制备方法
步骤22a.8-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-6-胺(化合物105-32)
在氮气环境中，将化合物104(0.8克，4.78毫摩)、5，6-二碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯(2.68克，7.18毫摩)、一水合新铜试剂(100毫克，0.48毫摩)、碘化亚铜(91.1毫克，0.48毫摩)以及NaO-t-Bu(0.55克，5.74毫摩)的无水二甲基甲酰胺(40毫升)溶液所组成的混合液在110℃(油浴)下搅拌24小时。在高真空状态下除去所述的溶剂并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝30/1)对得到的粗产物进行纯化，从而获得黄色固体形式的目标化合物105-32(348毫克，17.6％)：LCMS：414[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ6.09(s，2H)，7.01(s，1H)，7.22(s，2H)，7.51(s，1H)，8.08(s，1H)，13.20(s，1H)。
步骤22b.7-(6-氨基-8-(6-氯苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)庚酸乙酯(化合物106-32)
制备出的所述标题化合物106-32是黄色粘性固体形式(250毫克，53.5％)，是由化合物105-32(300毫克，0.82毫摩)、碳酸铯(454.7毫克，1.40毫摩)、7-溴庚酸乙酯(292.7毫克，1.23毫摩)以及无水二甲基甲酰胺(15毫升)通过与化合物106-31的制备方法(实施例21)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：570[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.20(m，7H)，1.44(m，2H)，1.65(m，2H)，2.23(t，2H，J＝7.2Hz)，4.02(q，2H，J1＝6.9Hz，J2＝14.1Hz)，4.13(t，2H，J＝6.9Hz)，6.08(s，2H)，6.82(s，1H)，7.44(s，2H)，7.50(s，1H)，8.16(s，1H)。
步骤22c.7-(6-氨基-8-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-9氢-嘌呤基-9-基)-N-羟基庚酰胺(化合物32)
制备出的所述标题化合物32是灰白色固体形式(135毫克，36.8％)，是由化合物106-32(244毫克，0.43毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.77M，6毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点200～203℃，LCMS：557[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.20(m，4H)，1.43(m，2H)，1.62(m，2H)，1.90(t，2H，J＝7.5Hz)，4.11(t，2H，J＝6.9Hz)，6.07(s，2H)，7.00(s，1H)，6.82(s，1H)，7.42(s，2H)，7.50(s，1H)，8.15(s，1H)，8.66(s，1H)，10.32(s，1H)。
实施例23：7-(4-氨基-2-(6-氯苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫 基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-1-基)-N-羟基庚酰胺(化合物34) 的制备方法
步骤23a.2-氯-N-(4-甲氧基苯甲基)-3-硝基吡啶基-4-胺(化合物602)
向处于搅拌状态下的化合物601(1克，5.18毫摩)的二甲基甲酰胺(8.6毫升)溶液中加入(4-甲氧基苯基)甲胺(0.71克，5.18毫摩)以及三乙胺(0.644毫升)。将所述反应混合液在室温下搅拌2小时。将所述混合液蒸发从而除去二甲基甲酰胺并且利用柱层析法在硅胶柱上(乙酸乙酯/石油为10∶1)进行纯化，从而获得黄色固体形式的602(1.32克，87％)：LCMS：294[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ3.72(s，3H)，4.40(d，2H，J＝6.3Hz)，6.81(d，1H，J＝5.7Hz)，6.91(d，2H，J＝9.0Hz)，7.25(d，2H，J＝8.4Hz)，7.95(d，1H，J＝5.4Hz)，8.02(t，1H，J＝5.7Hz)。
步骤23b.2-氯-N4-(4-甲氧基苯甲基)吡啶基-3，4-二胺(603)
向处于搅拌状态下的化合物602(1.32克，4.49毫摩)的甲醇(66毫升)溶液中加入水(6.6毫升)、铁粉(2.51克，44.9毫摩)以及浓盐酸溶液(1毫升)。将所述反应混合液在室温下搅拌30分钟，并且随后加热回流过夜。利用6N的氢氧化钠将所述混合液的pH调整至11。将得到的固体进行过滤并且利用甲醇(10毫升)进行洗涤。将合并的滤液进行浓缩，从而留出残余物，利用柱层析法在硅胶柱上(乙酸乙酯/石油以2∶1的比例)对所述残余物进行纯化，从而获得淡绿色固体形式的603(712毫克，60％)：LCMS：264[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ3.73(s，3H)，4.31(d，2H，J＝5.7Hz)，4.81(s，2H)，6.33(m，2H)，6.90(d，2H，J＝8.7Hz)，7.26(d，2H，J＝9.0Hz)，7.34(d，1H，J＝5.1Hz)。
步骤23c.4-氯-1-(4-甲氧基苯甲基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-2(3氢)-硫酮(化合物604)
将化合物603(2克，7.6毫摩)、二硫化碳(2.88克，37.9毫摩)、氢氧化钾(2.12克，37.9毫摩)的乙醇(11.5毫升)溶液以及水(1.5毫升)组成的混合液加热回流过夜。将所述反应混合液冷却至室温并且向其中加入100毫升水。利用醋酸将所述混合液的pH调整至7并且随后利用两部分二氯甲烷进行提取。在减压条件下对提取液进行浓缩，并且利用柱层析法在硅胶柱上(乙酸乙酯/石油以5∶1的比例)进行纯化，从而获得白色固体形式的化合物604(2克，86％)：LCMS：306[M]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ3.68(s，3H)，6.41(s，2H)，6.86(d，2H，J＝8.7Hz)，7.36(m，3H)，8.07(d，1H，J＝5.4Hz)，13.74(s，1H)。
步骤23d.4-氨基-1-(4-甲氧基苯甲基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-2(3氢)-硫酮(化合物605)
将化合物604(1克，3.25毫摩)以及氨基钠(3克，77毫摩)的25毫升液态氨溶液组成的混合液装入没有空气的密闭试管中，并且在室温下搅拌30小时。将所述混合液冷却至-40℃并且将所述试管打开。向所述反应体系中小心的加入乙醇，直至没有气体产生。加入200毫升的水并且利用醋酸将所述混合液的pH调整至7。对得到的混合液进行过滤，从而获得粗产物，利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇以50∶1的比例)对所述粗产物进行纯化，从而获得白色固体形式的化合物605(718毫克，77％)：LCMS：287[M]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ3.68(s，3H)，5.31(s，2H)，6.06(s，2H)，6.59(d，1H，J＝6.3Hz)，6.85(d，2H，J＝9.0Hz)，7.33(d，2H，J＝8.4Hz)，7.64(d，1H，J＝5.7Hz)，12.53(s，1H)。
步骤23e.2-(6-氯苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-1-(4-甲氧基苯甲基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-4-胺(化合物606-34)
在氮气环境中，将化合物605(543毫克，1.9毫摩)、5-氯-6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯(1.07克，3.79毫摩)、一水合新铜试剂(40毫克，0.19毫摩)、碘化亚铜(36毫克，0.19毫摩)以及NaO-t-Bu(273毫克，2.84毫摩)的无水二甲基甲酰胺(24毫升)溶液所组成的混合液在110℃(油浴)下搅拌24小时。在高真空状态下除去所述的溶剂并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇以100/1的比例)对得到的粗产物进行纯化，从而获得褐色固体形式的目标化合物606-34(506毫克，61％)：LCMS：441[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ3.69(s，3H)，5.37(s，2H)，6.04(s，2H)，6.41(s，2H)，6.55(s，1H)，6.80(d，2H，J＝8.7Hz)，7.04(d，2H，J＝9.3Hz)，7.17(s，1H)，7.73(s，1H)。
步骤23f.2-(6-氯苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-4-胺(化合物607-34)
将化合物606-34(506毫克，1.14毫摩)溶解于三氟乙酸(4毫升)中并且在80℃下搅拌2小时。将所述溶液蒸发并且利用饱和的碳酸氢钠将所述残余物的pH调整至7并且进行过滤。利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇以30/1的比例)对得到的沉淀进行纯化，从而获得黄色固体形式的目标化合物607-34(300毫克，82％)：LCMS：321[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ6.11(s，2H)，6.56(m，3H)，7.04(s，1H)，7.26(s，1H)，7.49(s，2H)，12.25(s，1H)。
步骤23g.7-(4-氨基-2-(6-氯苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-1-基)庚酸乙酯(化合物608-34)
将化合物607-34(300毫克，0.935毫摩)、7-溴庚酸乙酯(333毫克，1.403毫摩)、碳酸铯(517毫克，1.59毫摩)的二甲基甲酰胺(12毫升)溶液所组成的混合液在85℃下搅拌2小时。在真空条件下蒸发除去二甲基甲酰胺，并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇以100∶1的比例)对得到的残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的化合物608-34(300毫克，67％)：LCMS：477[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.15(m，7H)，1.42(m，2H)，1.58(m，2H)，2.21(t，2H，J＝7.2Hz)，4.02(q，2H，J＝7.5Hz)，4.16(t，2H，J＝7.2Hz)，6.08(s，2H)，6.37(s，2H)，6.73(s，1H)，6.80(d，1H，J＝5.1Hz)，7.25(s，1H)，7.70(d，1H，J＝6.0Hz)。
步骤23h.7-(4-氨基-2-(6-氯苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-1-基)-N-羟基庚酰胺(化合物34)
制备出的所述标题化合物34是白色固体形式(98毫克，34％)，是由化合物608-34(300毫克，0.63毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.77M，3毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点144～148℃，LCMS：464[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.22(m，4H)，1.42(m，2H)，1.65(m，2H)，1.90(t，2H，J＝7.2Hz)，4.29(t，2H，J＝6.9Hz)，6.14(s，2H)，7.07(s，1H)，7.31(m，2H)，7.73(d，1H，J＝6.9Hz)，8.51(s，2H)，10.32(s，1H)，13.04(s，1H)。
实施例24：7-(4-氨基-2-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫 基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-1-基)-N-羟基庚酰胺(化合物35) 的制备方法
步骤24a.2-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-1-(4-甲氧基苯甲基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-4-胺(化合物606-35)
制备出的所述标题化合物606-35是褐色固体形式(584毫克，49％)，是由化合物605(700毫克，2.44毫摩)、5-溴-6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯(1.20克，3.66毫摩)、一水合新铜试剂(51毫克，0.244毫摩)、碘化亚铜(46毫克，0.244毫摩)以及NaO-t-Bu(234毫克，2.44毫摩)的无水二甲基甲酰胺(31毫升)溶液通过与化合物606-34的制备方法(实施例23)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：485[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ3.29(s，3H)，5.39(s，2H)，6.04(s，2H)，6.54(s，1H)，6.81(m，3H)，6.91(d，1H，J＝5.4Hz)，7.06(d，2H，J＝8.6Hz)，7.29(s，1H)，7.71(d，1H，J＝6.0Hz)。
步骤24b.2-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-4-胺(化合物607-35)
将化合物606-35(557毫克，1.15毫摩)溶解于三氟乙酸(4毫升)中并且在80℃下搅拌2小时。将所述溶液蒸发并且利用饱和的碳酸氢钠将所述残余物的pH调整至7并且进行过滤。利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇以30/1的比例)对得到的沉淀进行纯化，从而获得白色固体形式的目标化合物607-35(308毫克，74％)：LCMS：365[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ6.07(s，2H)，6.58(s，2H)，6.69(d，1H，J＝6.0Hz)，6.98(s，1H)，7.34(s，1H)，7.47(d，1H，J＝5.7Hz)。
步骤24c.7-(4-氨基-2-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-1-基)庚酸乙酯(化合物608-35)
制备出的所述标题化合物608-35是白色固体形式(240毫克，56％)，是由化合物607-35(302毫克，0.827毫摩)、7-溴庚酸乙酯(294毫克，1.24毫摩)以及碳酸铯(457毫克，1.406毫摩)的二甲基甲酰胺(12毫升)溶液通过与化合物608-34的制备方法(实施例23)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：521[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.16(m，7H)，1.41(m，2H)，1.58(m，2H)，2.21(t，2H，J＝7.5Hz)，4.02(q，2H，J＝6.9Hz)，4.16(t，2H，J＝6.9Hz)，6.07(s，2H)，6.40(s，2H)，6.67(s，1H)，6.80(d，1H，J＝5.7Hz)，7.36(s，1H)，7.71(d，1H，J＝5.7Hz)。
步骤24d.7-(4-氨基-2-(6-溴苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-1-基)-N-羟基庚酰胺(化合物35)
制备出的所述标题化合物35是白色固体形式(182毫克，79％)，是由化合物608-35(236毫克，0.453毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.77M，3毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点179～181℃，LCMS：508[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.17(m，4H)，1.36(m，2H)，1.57(m，2H)，1.88(t，2H，J＝6.9Hz)，4.15(t，2H，J＝7.2Hz)，6.08(s，2H)，6.43(s，2H)，6.67(s，1H)，6.81(d，1H，J＝5.4Hz)，7.36(s，1H)，7.71(d，1H，J＝5.7Hz)，8.66(s，1H)，10.32(s，1H)。
实施例25：7-(4-氨基-2-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫 基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-1-基)-N-羟基庚酰胺(化合物36) 的制备方法
步骤25a.2-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-1-(4-甲氧基苯甲基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-4-胺(化合物606-36)
制备出的所述标题化合物606-36是褐色固体形式(734毫克，55％)，是由化合物605(725毫克，2.53毫摩)、5，6-二碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯(1.89克，5.06毫摩)、一水合新铜试剂(53毫克，0.253毫摩)、碘化亚铜(48毫克，0.253毫摩)以及NaO-t-Bu(365毫克，3.80毫摩)的无水二甲基甲酰胺(32毫升)溶液通过与化合物606-34的制备方法(实施例23)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：533[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ3.69(s，3H)，5.35(s，2H)，6.01(s，2H)，6.47(s，1H)，6.80(d，2H，J＝9.0Hz)，7.06(d，2H，J＝8.6Hz)，7.41(s，1H)。
步骤25b.2-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-4-胺(化合物607-36)
将化合物606-36(730毫克，1.37毫摩)溶解于三氟乙酸(4.8毫升)中并且在80℃下搅拌2小时。将所述溶液蒸发并且利用饱和的碳酸氢钠将所述残余物的pH调整至7并且进行过滤。利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇以30/1的比例)对得到的沉淀进行纯化，从而获得黄色固体形式的目标化合物607-36(526毫克，93％)：LCMS：413[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ6.09(s，2H)，6.73(m，3H)，7.03(s，1H)，7.52(m，2H)，12.45(s，1H)。
步骤25c.7-(4-氨基-2-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-1-基)庚酸乙酯(化合物608-36)
制备出的所述标题化合物608-36是白色固体形式(149毫克，61％)，是由化合物607-36(178毫克，0.432毫摩)、7-溴庚酸乙酯(154毫克，0.648毫摩)以及碳酸铯(239毫克，0.734毫摩)的二甲基甲酰胺(6.3毫升)溶液通过与化合物608-34的制备方法(实施例23)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：569[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.16(m，7H)，1.42(m，2H)，1.57(m，2H)，2.22(t，2H，J＝7.2Hz)，4.03(q，2H，J＝7.5Hz)，4.15(t，2H，J＝7.2Hz)，6.04(s，2H)，6.39(s，2H)，6.65(s，1H)，6.80(d，1H，J＝6.0Hz)，7.48(s，1H)，7.71(d，1H，J＝5.7Hz)。
步骤25d.7-(4-氨基-2-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-1-基)-N-羟基庚酰胺(化合物36)
制备出的所述标题化合物36是白色固体形式(45毫克，33％)，是由化合物608-36(140毫克，0.246毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.77M，3毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点191～193℃，LCMS：556[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.18(m，4H)，1.37(m，2H)，1.57(m，2H)，1.89(t，2H，J＝6.9Hz)，4.14(t，2H，J＝7.2Hz)，6.04(s，2H)，6.42(s，2H)，6.66(s，1H)，6.80(d，1H，J＝5.7Hz)，7.49(s，1H)，7.71(d，1H，J＝5.7Hz)，8.66(s，1H)，10.31(s，1H)。
实施例26：6-(4-氨基-2-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫 基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-1-基)-N-羟基己酰胺(化合物42) 的制备方法
步骤26a.6-(4-氨基-2-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-1-基)己酸乙酯(化合物608-42)
制备出的所述标题化合物608-42是白色固体形式(260毫克，64％)，是由化合物607-36(300毫克，0.73毫摩)、6-溴己酸乙酯(243毫克，1.09毫摩)以及碳酸铯(404毫克，1.24毫摩)的二甲基甲酰胺(4.0毫升)溶液通过与化合物608-34的制备方法(实施例23)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：555[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.14(t，2H，J＝7.2Hz)，1.19(m，2H)，1.47(m，2H)，1.57(m，2H)，2.19(t，2H，J＝7.2Hz)，4.01(q，2H，J＝7.2Hz)，4.16(t，2H，J＝6.9Hz)，6.05(s，2H)，6.55(s，2H)，6.68(s，1H)，6.83(d，1H，J＝6.0Hz)，7.48(s，1H)，7.70(d，1H，J＝6.0Hz)。
步骤26b.6-(4-氨基-2-(6-碘苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-硫基)-1氢-咪唑基[4，5-c]吡啶基-1-基)-N-羟基己酰胺(化合物42)
制备出的所述标题化合物42是白色固体形式(107毫克，42％)，是由化合物608-42(260毫克，0.47毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(1.77M，6毫升)通过与化合物11的制备方法(实施例6)中所描述的类似方法制备得到的：熔点189～193℃，LCMS：542[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.20(m，2H)，1.44(m，2H)，1.56(m，2H)，1.87(t，2H，J＝7.2Hz)，4.13(t，2H，J＝7.2Hz)，6.05(s，2H)，6.36(s，2H)，6.67(s，1H)，6.78(d，1H，J＝6.0Hz)，7.48(s，1H)，7.70(d，1H，J＝5.7Hz)。
生物学检测：
如前文中所指明的，本发明中定义的所述衍生物具有抗增殖的活性。这些特性可以通过例如下文中列出的一种或者一种以上方法进行评价：
(a)测定受试化合物抑制热休克蛋白90(Hsp90)的分子伴 侣活性的能力的体外检测。
所述热休克蛋白90(Hsp90)的分子伴侣检测是通过测量热休克蛋白90(HSP90)重新折叠所述热变性荧光素酶蛋白的能力来完成的。首先在变性缓冲液中(25毫摩pH7.5的Tris，8毫摩硫酸镁，0.01％的牛γ球蛋白以及10％的甘油)利用不同浓度的受试化合物在室温下对热休克蛋白90培养30分钟。向上述变性混合物中加入荧光素酶蛋白并且在50℃下培养8分钟。在变性混合液中，热休克蛋白90以及荧光素酶的最终浓度分别为0.375微摩以及0.125微摩。将上述变性混合液的5微升的样本放入25微升的复性缓冲液(25毫摩pH7.5的Tris，8毫摩硫酸镁，0.01％的牛γ球蛋白以及10％的甘油，0.5毫摩三磷酸腺苷，2毫摩二硫苏糖醇，5毫摩氯化钾，0.3微摩热休克蛋白70以及0.15微摩热休克蛋白40)中进行稀释。将上述复性反应物在室温下培养150分钟，随后利用90微升荧光素试剂(Luclite，PerkinElmer LifeScience)对10微升所述复性样本进行稀释。将所述混合液在黑暗状态下培养5分钟，此后利用TopCount培养板读数器(PerkinElmer Life Science)对所述发光信号进行读取。
(b)测定受试化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)酶活 性的能力的体外检测。
利用组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)荧光计检测试剂盒(AK-500，Biomol，Plymouth Meeting，PA)对组蛋白脱乙酰基酶进行筛选。将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以形成20毫摩的工作储备浓缩液。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。
每项检测都是通过如下步骤建立的：解冻所有的试剂盒成分并且将其保存于冰上直至使用。在检测缓冲液(50毫摩Tris/Cl，pH8.0，137毫摩氯化钠，2.7毫摩氯化钾，1毫摩氯化镁)中以1∶29的比例稀释HeLa核提取物。在检测缓冲液中制备曲古抑菌素A(TSA，阳性对照)以及受试化合物的稀释液(五倍于最终浓度)。在检测缓冲液中将Fluor de LysTM底物稀释至100微摩(50倍＝2倍的最终浓度)。在冷的检测缓冲液中将Fluor de LysTM显影剂浓缩物稀释20倍(例如，50微升的显影剂浓缩物加入950微升的检测缓冲液)。其次，在一倍的显影剂(Developer)中将0.2毫摩的曲古抑菌素A稀释100倍(例如，1毫升中的10微升；在一倍显影剂中的最终曲古抑菌素A的浓度＝2微摩；加入组蛋白脱乙酰基酶/底物反应液后的最终浓度＝1微摩)。加入检测缓冲液，在所述微量滴定板的适当孔中稀释曲古抑菌素A或者受试抑制剂。在除去阴性对照之外的其他所有孔中加入稀释的HeLa提取物或者其他组蛋白脱乙酰基酶样本。允许被稀释的Fluor deLysTM底物以及所述微量滴定板中的所述样本平衡至检测温度(例如，25℃或者37℃)。通过向每个孔中加入稀释的底物(25微升)并且充分混合来激发组蛋白脱乙酰基酶反应。允许组蛋白脱乙酰基酶反应进行1小时，之后通过加入Fluor de LysTM显影剂(50微升)终止反应。在室温下(25℃)对培养板培养10-15分钟。通过能够在350-380纳米范围内的波长下被激发的微量滴定板读数荧光计对样本进行读数，并且检测440-460纳米范围内的发射光。
下述表7-B列出了本发明代表性的化合物以及它们在组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)检测以及热休克蛋白90(HSP90)检测中的活性。在这些检测中，使用到下述分级：对于IC50而言，I≥10微摩，10微摩＞II＞1微摩，1微摩＞III＞0.1微摩，以及IV≤0.1微摩。
表7-B
  化合物编号   HDAC   HSP90
  5   III   III
  6   IV   III
  12   IV
  13   I   I
  14   III
  16   IV   I
  18   IV   I
  20   I   III
  23   IV   III
  24   IV   III
  27   I   I
  28   II   I
  29   II   I
  30   IV   I
  31   IV   II
  32   IV   IV
  33   I   III
  34   IV   II
  35   IV   II
  36   IV   III
  37   I   III
  38   III   III
  39   IV   III
  40   I   I
  41   IV
Figure G2007800418082D04881
第八部分：
表8-A
Figure G2007800418082D04882
Figure G2007800418082D04891
Figure G2007800418082D04901
方案1
Figure G2007800418082D04902
方案2
实施例1：5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-乙基-4-(4-(4-(羟 基氨基)-4-氧代丁氧基)苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合物1) 的制备方法
步骤1a.(4-溴苯氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(化合物0101)
在室温下向化合物4-溴苯酚(10.0克，57.8毫摩)以及叔丁基二甲基氯化硅(TBSCl)(11.3克，75.14毫摩)的甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵(DMC)(100毫升)的溶液中逐滴加入三乙胺(16.7克，115.6毫摩)并且将所述混合液搅拌2小时。在除去所述溶剂之后，向其中加入200毫升石油醚。将得到的有机层用水以及盐水进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，经由短硅胶柱进行过滤并且蒸发，从而获得无色油形式的0101(16.6克，100％)：1H NMR(氘代氯仿)：δ0.18(s，6H)，2.71(t，J＝6Hz，2H)，0.98(s，9H)，6.70-6.73(m，2H)，7.30-7.33(m，2H)。
步骤1b.4-(叔丁基二甲基硅氧基)苯基硼酸(化合物0102)
在氮气环境中，于-78℃的温度下在15分钟的时间内向化合物0101(1.548克，5.389毫摩)的无水四氢呋喃(20毫升)溶液中逐滴加入2.5M的正丁基锂的己烷溶液(2.5毫升，6.326毫摩)。将所述混合液在-78℃下搅拌0.5小时之后，在15分钟的时间内向所述混合液中逐滴加入三甲基硼酸酯(730毫克，7.029毫摩)。将所述混合液在-78℃下再搅拌1小时并且回暖至室温。利用盐酸水溶液对所述反应混合液进行抑制(至pH为5-7)。除去所述溶剂并且利用二氯甲烷对得到的残余物进行提取。利用盐水对得到的有机层进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，浓缩，从而获得残余物，利用石油(2毫升)对所述残余物进行洗涤，从而获得白色固体形式的所述产物0102(1.102克，81％)：LCMS：253[M+1]+。
步骤1c.1-(5-氯-2，4-二羟基苯基)乙酮(化合物0103)
在氮气环境下向4-氯间苯二酚(21.25克，0.147摩)的三氟化硼-乙醚(100毫升)悬浮液中逐滴加入醋酸(8.75毫升)。将所述反应混合液在80℃下搅拌过夜并且随后将其冷却至室温。将所述混合液倒入350毫升10％重量/体积的醋酸钠水溶液中并且剧烈搅拌2.5小时。沉淀出淡褐色的固体，对所述固体进行过滤，利用水以及石油醚进行洗涤，干燥，从而获得白褐色固体形式的0103(18.49克，67.4％)：LCMS：187[M+1]+。
步骤1d.1-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)乙酮(化合物0104)
向化合物0103(17.49克，0.094摩)以及碳酸钾(32.33克，0.234摩)的乙腈(320毫升)溶液所组成的混合液中加入苯甲氯(23.72克，0.187摩)。将所述混合液加热回流48小时并且将其冷却至室温。将所述混合液蒸发至接近干燥后，对其进行过滤并且将得到的固体用水进行洗涤以除去碳酸钾，并且进行真空干燥。利用石油(350毫升)以及乙酸乙酯(15毫升)对所述固体进行洗涤，从而获得褐色固体形式的所述产物0104(37克，100％)：LCMS：367[M+1]+.1H NMR(氘代氯仿)：δ2.45(s，3H)，5.30(s，2H)，5.35(s，2H)，7.16(s，1H)，7.37-7.54(m，10H)，7.70(s，1H)。
步骤1e.4-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-2，4-二氧代-丁酸乙酯(化合物0105)
向化合物0104(5.0克，13.63毫摩)的无水四氢呋喃(30毫升)溶液中缓慢加入60％的氢化钠(1.64克，40.89毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌30分钟之后，向其中加入草酸二乙酯(3.98克，27.26毫摩)并且将所述混合液在60℃下搅拌40分钟。随后将其冷却至室温并且向其中加入醋酸(2.7克，44.98毫摩)。将其蒸发至接近干燥，并且向其中加入100毫升乙酸乙酯，利用水以及盐水进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥。蒸发所述有机相并且利用10-20毫升的乙醇对得到的残余物进行洗涤，过滤，从而获得淡黄色固体形式的化合物0105(5.0克，79％)：LCMS：467[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.16(t，J＝6Hz，3H)，4.20(q，J＝6Hz，2H)，5.36(s，2H)，5.39(s，2H)，7.23(s，1H)，7.29(s，1H)，7.38-7.55(m，10H)，7.89(s，1H)。
步骤1f.5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)异恶唑基-3-甲酸乙酯(化合物0106)
向化合物0105(5.00克，10.7毫摩)的纯乙醇(100毫升)悬浮液中加入盐酸羟胺(0.89克，12.8毫摩)。将所述反应混合液加热回流4小时并且将其冷却至室温。将所述混合液过滤并且利用乙醇对得到的固体进行洗涤并且在45℃下真空干燥，从而获得灰黄色固体形式的化合物0106(4.8克，97％)：LCMS：464[M+1]+.1H NMR(氘代氯仿)：δ1.40(t，J＝6Hz，3H)，4.42(q，J＝6Hz，2H)，5.12(s，2H)，5.15(s，2H)，6.61(s，1H)，7.01(s，1H)，7.35-7.40(m，10H)，8.01(s，1H)。
步骤1g.5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-N-乙基异恶唑基-3-甲酰胺(化合物0107)
向装有0106(4.40克，9.51毫摩)的长颈瓶中加入乙胺的乙醇溶液(2.0M，40毫升，80毫摩)。将所述混合液加热至80℃并且搅拌5小时。将所述混合液冷却至冰浴温度，过滤并且利用冷的乙醇对得到的固体进行洗涤，真空干燥，从而获得白色固体形式的0107(4.10克，93％)：LCMS：463[M+1]+.1H NMR(氘代氯仿)：δ1.28(t，J＝6Hz，3H)，3.44-3.53(m，2H)，5.10(s，2H)，5.16(s，2H)，6.59(s，1H)，6.81(t，J＝6Hz，1H)，7.08(s，1H)，7.25-7.40(m，10H)，7.97(s，1H)。
步骤1h.5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-4-溴-N-乙基-异恶唑基-3-甲酰胺(化合物0108)
在室温下，将溴的醋酸溶液(0.6M，306.0毫升，183.6毫摩)加入到处于搅拌状态下的0107(8.50克，18.36毫摩)以及醋酸钾(3.97克，40.50毫摩)的醋酸(127毫升)悬浮液中。将所述混合液在室温下搅拌5分钟。向所述溶液中加入饱和的亚硫酸钠溶液。将所述混合液浓缩至接近干燥后，向其中加入水(50毫升)并且对所述混合液进行过滤，利用水以及冰冷的乙醇(20毫升)对得到的固体进行洗涤并且干燥，从而获得白色固体形式的化合物0108(8.50克，85.4％)：LCMS：543[M+1]+.1H NMR(氘代氯仿)：δ1.26(t，J＝6Hz，3H)，3.45-3.54(m，2H)，5.06(s，2H)，5.11(s，2H)，6.61(s，1H)，6.73(t，J＝6Hz，1H)，7.25-7.39(m，10H)，7.52(s，1H)。
步骤1i.5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-N-乙基-4-(4-羟基-苯基)-异恶唑基-3-甲酰胺(化合物0109)
向0102(1.40克，5.53毫摩)以及0108(2.50克，4.61毫摩)在二甲基甲酰胺(25毫升)以及水(5毫升)的混合溶剂所组成的混合液中加入碳酸氢钠(1.61克，13.83毫摩)。向上述混合液中加入二氯双(三苯基膦)钯(388毫克，0.553毫摩)并且将所述混合液加热至90℃并且搅拌过夜。在真空条件下除去所述溶剂并且利用乙酸乙酯以及水对得到的残余物进行分离。利用水以及盐水对所述有机层进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发。利用柱层析法在硅胶柱上(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)对得到的残余物进行纯化，从而获得产物0109(2.00克，78％)：LCMS：555[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.07(t，J＝6Hz，3H)，3.18-3.25(m，2H)，5.05(s，2H)，5.26(s，2H)，6.66(d，J＝3Hz，2H)，6.98(d，J＝3Hz，2H)，7.07-7.10(m，3H)，7.29-7.31(m，3H)，7.38-7.48(m，6H)，8.88(t，J＝3Hz，1H)，7.56(s，1H)。
步骤1j.4-(4-(5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-3-(乙基-氨基甲酰基)异恶唑基-4-基)苯氧基)丁酸乙酯(化合物0110-1)
将0109(500毫克，0.901毫摩)、4-溴丁酸乙酯(193毫克，0.991毫摩)以及碳酸钾(374毫克，2.703毫摩)的乙腈(20毫升)溶液所组成的混合液在80℃下搅拌过夜。浓缩之后，利用乙酸乙酯对得到的残余物进行提取。将所述有机层用水以及盐水进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，过滤，蒸发。利用冰冷的乙醇对所述固体进行洗涤，从而获得白色固体形式的化合物0110-1(480毫克，80％)：LCMS：669[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.14-1.20(m，6H)，1.94(t，J＝6Hz，2H)，2.45(t，J＝6Hz，2H)，3.20-3.27(m，2H)，3.97(t，J＝6Hz，2H)，5.03(s，2H)，5.26(s，2H)，6.84(d，J＝9Hz，2H)，7.05-7.11(m，5H)，7.28-7.30(m，3H)，7.36-7.47(m，6H)，8.89(t，J＝6Hz，1H)。
步骤1k.4-(4-(5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-3-(乙基-氨基甲酰基)异恶唑基-4-基)苯氧基)丁酸乙酯(化合物0111-1)
在氮气环境中，向利用冰浴冷却的化合物0110-1(850毫克，1.27毫摩)的二氯甲烷(16毫升)溶液中加入1.0M的二氯甲基硼的二氯甲烷溶液(5.08毫升，5.08毫摩)。将所述反应混合液在0℃下搅拌15分钟随后回暖至室温并且再搅拌35分钟。将所述反应混合液冷却至0℃并且通过加入饱和的碳酸氢钠水溶液(16毫升)终止所述反应。搅拌5分钟之后，在真空条件下除去二氯甲烷并且利用乙酸乙酯(120毫升)以及水(60毫升)对得到的残余物进行分离。将得到的有机相利用水以及盐水进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，蒸发，并且利用柱层析法在硅胶柱上(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)对得到的残余物进行纯化，从而获得0111-1(205毫克，33％)：LCMS：489[M+1]+。
步骤1l.5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-乙基-4-(4-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁氧基)苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合物1)
制备羟胺的甲醇溶液：将盐酸羟胺(4.67克，67毫摩)溶解于甲醇(24毫升)中，从而形成溶液A。将氢氧化钾(5.61克，100毫摩)溶解于甲醇(14毫升)中，从而形成溶液B。将所述溶液A冷却至0℃，并且将所述溶液B逐滴加入到溶液A中。将所述混合液在0℃下搅拌30分钟，并且过滤除去所述沉淀，所述滤液即为获得的羟胺的甲醇溶液。
向装有化合物0111-1(200毫克，0.41毫摩)的长颈瓶中加入羟胺的甲醇溶液(4.0毫升)。将所述混合液在室温下搅拌30分钟。随后利用1.2M的盐酸将其pH调整至4。将所述混合液浓缩并且利用乙酸乙酯(200毫升)对得到的残余物进行溶解。将所述有机层用水进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，浓缩。利用柱层析法在硅胶柱上(乙酸乙酯)对得到的残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述化合物1(96毫克，49％)：LCMS：476[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.06(t，J＝6Hz，3H)，1.87-1.96(m，2H)，2.12(t，J＝6Hz，2H)，3.19-3.28(m，2H)，3.92(t，J＝6Hz，2H)，6.57(s，1H)，6.84(d，J＝9Hz，2H)，7.10-7.15(m，3H)，8.68(s，1H)，8.85(t，J＝6Hz，1H)，10.07(s，1H)，10.40(s，1H)，10.60(s，1H)。
实施例2：5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-乙基-4-(4-(5- (羟基氨基)-5-氧代戊氧基)苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合 物2)的制备方法
步骤2a.5-(4-(5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-3-(乙基氨基甲酰基)异恶唑基-4-基)苯氧基)戊酸乙酯(化合物0110-2)
所述标题化合物0110-2(320毫克，52％)是由0109(500毫克，0.90毫摩)以及5-溴戊酸乙酯(226毫克，1.08毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：683[M+1]+。
步骤2b.5-(4-(5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-3-(乙基-氨基甲酰基)异恶唑基-4-基)苯氧基)戊酸乙酯(化合物0111-2)
制备出的所述标题化合物0111-2(81毫克，37％)是由0110-2(296毫克，0.44毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：503[M+1]+。
步骤2c.5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-乙基-4-(4-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊氧基)苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合物2)
所述标题化合物2(50毫克，64％)是由化合物0111-2(81毫克，0.16毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：490[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.08(t，J＝6Hz，3H)，1.66(s，4H)，2.00(t，J＝6Hz，2H)，3.19-3.28(m，2H)，3.93(t，J＝6Hz，2H)，6.59(s，1H)，6.86(d，J＝9Hz，2H)，7.12-7.16(m，3H)，8.68(s，1H)，8.85(t，J＝6Hz，1H)，10.08(s，1H)，10.40(s，1H)，10.60(s，1H)。
实施例3：5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-乙基-4-(4-(6- (羟基氨基)-6-氧代己氧基)苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合 物3)的制备方法
步骤3a.6-(4-(5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-3-(乙基氨基甲酰基)异恶唑基-4-基)苯氧基)己酸乙酯(化合物0110-3)
所述标题化合物0110-3(800毫克，66％)是由0109(1.00克，1.80毫摩)以及6-溴己酸乙酯(0.44克，1.97毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：697[M+1]+。
步骤3b.6-(4-(5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-3-(乙基-氨基甲酰基)异恶唑基-4-基)苯氧基)己酸乙酯(化合物0111-3)
制备出的所述标题化合物0111-3(300毫克，58％)是由0110-3(700毫克，1.0毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：517[M+1]+。
步骤3c.5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-乙基-4-(4-(6-(羟基氨基)-6-氧代己氧基)苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合物3)
所述标题化合物3(80毫克，32％)是由化合物0111-3(260毫克，0.5毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：504[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.08(t，J＝6Hz，3H)，1.32-1.39(m，2H)，1.47-1.55(m，2H)，1.64-1.69(m，2H)，1.94(t，J＝6Hz，2H)，3.18-3.26(m，2H)，3.90(t，J＝6Hz，2H)，6.54(s，1H)，6.84(d，J＝9Hz，2H)，7.07-7.14(m，3H)，8.67(s，1H)，8.85(t，J＝6Hz，1H)，10.07(s，1H)，10.34(s，1H)，10.61(s，1H)。
实施例4：5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-乙基-4-(4-(7- (羟基氨基)-7-氧代庚氧基)苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合 物4)的制备方法
步骤4a.7-(4-(5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-3-(乙基-氨基甲酰基)异恶唑基-4-基)苯氧基)庚酸乙酯(化合物0110-4)
所述标题化合物0110-4(1.0克，78％)是由0109(1.0克，1.8毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(510毫克，2.15毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：710[M+1]+。
步骤4b.7-(4-(5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-3-(乙基-氨基甲酰基)异恶唑基-4-基)苯氧基)庚酸乙酯(化合物0111-4)
制备出的所述标题化合物0111-4(0.82克，91.6％)是由0110-4(1.0克，1.4毫摩)通过与化合物0110-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：531[M+1]+。
步骤4c.5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-乙基-4-(4-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚氧基)苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合物4)
所述标题化合物4(120毫克，15％)是由化合物0111-4(800毫克，1.5毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：518[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.08(t，J＝6Hz，3H)，1.23-1.31(m，2H)，1.32-1.39(m，2H)，1.47-1.55(m，2H)，1.64-1.69(m，2H)，1.93(t，J＝6Hz，2H)，3.21-3.27(m，2H)，3.92(t，J＝6Hz，2H)，6.59(s，1H)，6.86(d，J＝9Hz，2H)，7.10-7.16(m，3H)，8.65(s，1H)，8.85(t，J＝6Hz，1H)，10.07(s，1H)，10.34(s，1H)，10.61(s，1H)。
实施例5：5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-(3-(羟基-氨基) -3-氧代丙基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合物5) 的制备方法
步骤5a.5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-4-溴-异恶唑基-3-甲酸乙酯(化合物0201)
在室温下，向化合物0106(6.26克，13.49毫摩)以及醋酸钾(2.80克，29.76毫摩)的醋酸(93毫升)悬浮液中加入溴的醋酸溶液(0.6M，225毫升，134.9毫摩)并且搅拌5分钟。向所述混合液中加入饱和的亚硫酸钠水溶液。浓缩之后，向其中加入水(50毫升)，过滤。利用水以及冰冷的乙醇(20毫升)对得到的固体进行洗涤并且真空干燥，从而获得白色固体形式的化合物0201(5.8克，79％)：LCMS：544[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.34(t，J＝6Hz，3H)，4.37-4.45(m，2H)，5.27(s，2H)，5.35(s，2H)，7.26(s，1H)，7.35-7.51(m，10H)，7.65(s，1H)。
步骤5b.5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-甲酸乙酯(化合物0202)
向4-甲氧基苯基硼酸(4.03克，26.51毫摩)、0201(12.1克，22.36毫摩)、碳酸氢钠(5.64克，67.14毫摩)的二甲基甲酰胺(25毫升)以及水(5毫升)的混合溶剂组成的混合液中加入二氯双(三苯基膦)钯(1.94毫克，2.76毫摩)。将所述混合液加热至90℃并且搅拌过夜。在真空条件下除去所述溶剂并且利用乙酸乙酯以及水对得到的残余物进行分离。利用水以及盐水对所述有机层进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得粗产物，利用柱层析法在硅胶柱上(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)对所述粗产物进行纯化，从而获得产物0202(8.4克，66％)。LCMS：570[M+1]+。
步骤5c.5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-4-(4-甲氧基-苯基)异恶唑基-3-甲酸(化合物0203)
向存在于混合溶剂四氢呋喃(80毫升)、水(80毫升)以及甲醇(80毫升)中的0202(4.21克，7.40毫摩)溶液中加入一水合氢氧化锂(621毫克，14.80毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌30分钟，随后利用1.2M的盐酸将其pH调整至4。将有机溶剂蒸发除去之后，利用乙酸乙酯(100毫升x 3)对得到的残余物进行提取。将有机层通过无水硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得黄色固体形式的化合物0203(3.98克，99％)：LCMS：542[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ3.75(s，3H)，5.06(s，2H)，5.25(s，2H)，6.85(d，J＝9Hz，2H)，7.08-7.14(m，4H)，7.37-7.45(m，10H)，11.64(s，1H)。
步骤5d.3-(5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-氨基甲酰基)丙酸乙酯(化合物0204-5)
将邻苯二甲酰丁辛酯(BOP)(980毫克，2.21毫摩)、化合物0203(1.00克，1.84毫摩)以及二异丙基乙胺(DIEA)(953毫克，7.38毫摩)的二甲基甲酰胺(5毫升)溶液组成的混合液在室温下搅拌30分钟。向所述混合液中加入盐酸3-氨基丙酸乙酯(370毫克，2.4毫摩)。将得到的混合液在室温下搅拌过夜并且将所述混合液进行真空浓缩。将所述残余物溶解于乙酸乙酯(240毫升)中并且用水(15毫升x3)进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发。利用柱层析法在硅胶柱上(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)对得到的残余物进行纯化，从而获得所述目标产物0204-5(700毫克，29％)：LCMS：641[M+1]+。
步骤5e.3-(5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-4-(4-甲氧基-苯基)异恶唑基-3-氨基甲酰基)丙酸乙酯(化合物0205-5)
在氮气环境中，向利用冰浴冷却的化合物0204-5(690毫克，1.08毫摩)的二氯甲烷(14毫升)溶液中加入1.0M的二氯甲基硼的二氯甲烷溶液(3.3毫升，3.3毫摩)。将所述反应混合液在0℃下搅拌15分钟随后在室温下搅拌35分钟。将所述反应混合液冷却至0℃并且通过加入饱和的碳酸氢钠水溶液(14毫升)终止所述反应。搅拌5分钟之后，在真空条件下除去所述溶剂并且利用乙酸乙酯(120毫升)以及水(60毫升)对得到的残余物进行分离。将得到的有机相利用水以及盐水进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，过滤并且蒸发。利用柱层析法在硅胶柱上(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)对得到的残余物进行纯化，从而获得产物0205-5(350毫克，70％)：LCMS：461[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.20(t，J＝6Hz，3H)，2.56(t，J＝6Hz，2H)，3.46-3.50(m，2H)，3.75(s，3H)，4.06(q，J＝6Hz，3H)，6.61(s，1H)，6.88(d，J＝9Hz，2H)，7.14-7.19(m，3H)，8.93(t，J＝6Hz，1H)，10.08(s，1H)，10.61(s，1H)。
步骤5f.5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-(3-(羟基氨基)-3-氧代丙基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合物5)
制备出的所述标题化合物5是褐色固体形式(80毫克，24％)，是由化合物0205-5(340毫克，0.74毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：448[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.28(t，J＝6Hz，2H)，3.44(t，J＝6Hz，2H)，3.78(s，3H)，6.57(s，1H)，6.88-6.92(m，2H)，7.11-7.18(m，3H)，8.88(t，J＝6Hz，1H)，10.44(s，1H)。
实施例6：5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-(4-(羟基氨基) -4-氧代丁基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合物6) 的制备方法
步骤6a.4-(5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-氨基甲酰基)丁酸甲酯(化合物0204-6)
所述标题化合物0204-6(442毫克，37％)是由0203(1.00毫克，1.84毫摩)以及盐酸4-氨基丁酸甲酯(368毫克，2.40毫摩)通过与化合物0204-5的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：641[M+1]+。
步骤6b.4-(5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-氨基甲酰基)丁酸甲酯(化合物0205-6)
所述标题化合物0205-6(233毫克，73％)是由0204-6(442毫克，0.69毫摩)通过与化合物0205-5的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：461[M+1]+。
步骤6c.5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合物6)
所述标题化合物6(100毫克，42％)是由化合物0205-6(233毫克，0.51毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：462[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.65-1.75(m，2H)，1.97(t，J＝6Hz，2H)，3.15-3.22(m，2H)，3.73(s，3H)，6.59(s，1H)，6.87(d，J＝9Hz，2H)，7.12-7.17(m，3H)，8.71(s，1H)，8.90(t，J＝6Hz，1H)，10.08(s，1H)，10.37(s，1H)，10.60(s，1H)。
实施例7：5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-(6-(羟基氨基) -6-氧代己基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合物8) 的制备方法
步骤7a.6-(5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-氨基甲酰基)己酸甲酯(化合物0204-8)
所述标题化合物0204-8(500毫克，41％)是由0203(1.00毫克，1.84毫摩)以及盐酸6-氨基己酸甲酯(503毫克，2.40毫摩)通过与化合物0204-5的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：669[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.43-1.56(m，4H)，2.27(t，J＝6Hz，2H)，3.15-3.22(m，2H)，3.58(s，3H)，3.74(s，3H)，5.04(s，2H)，5.26(s，2H)，6.59(s，1H)，6.84(d，J＝9Hz，2H)，7.06-7.10(m，4H)，7.29(t，J＝3Hz，3H)，7.38-7.47(m，7H)，8.88(t，J＝6Hz，1H)。
步骤7b.6-(5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-4-(4-甲氧基-苯基)异恶唑基-3-氨基甲酰基)己酸甲酯(化合物0205-8)
所述标题化合物0205-8(216毫克，59％)是由0204-8(500毫克，0.75毫摩)通过与化合物0205-5的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：489[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.43-1.56(m，4H)，2.25(t，J＝6Hz，2H)，3.15-3.22(m，2H)，3.58(s，3H)，3.73(s，3H)，6.59(s，1H)，6.87(d，J＝9Hz，2H)，7.12-7.17(m，3H)，8.84(t，J＝6Hz，1H)，10.08(s，1H)，10.60(s，1H)。
步骤7c.5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-(6-(羟基-氨基)-6-氧代己基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合物8)
所述标题化合物8(100毫克，50％)是由化合物0205-8(200毫克，0.41毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：490[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.43-1.53(m，4H)，1.93(t，J＝6Hz，2H)，3.15-3.22(m，2H)，3.73(s，3H)，6.59(s，1H)，6.87(d，J＝9Hz，2H)，7.12-7.17(m，3H)，8.66(s，1H)，8.84(t，J＝6Hz，1H)，10.08(s，1H)，10.33(s，1H)，10.60(s，1H)。
实施例8：5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-(7-(羟基氨基) -7-氧代庚基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合物9) 的制备方法
步骤8a.7-(5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-氨基甲酰基)庚酸乙酯(化合物0204-9)
所述标题化合物0204-9(640毫克，52％)是由0203(1.00毫克，1.84毫摩)以及盐酸7-氨基庚酸甲酯(503毫克，2.40毫摩)通过与化合物0204-5的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：697[M+1]+。
步骤8b.7-(5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-氨基甲酰基)庚酸乙酯(化合物0205-9)
所述标题化合物0205-9(274毫克，62％)是由0204-9(600毫克，0.86毫摩)通过与化合物0205-5的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：517[M+1]+。
步骤8c.5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-(7-(羟基-氨基)-7-氧代庚基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合物9)
所述标题化合物9(90毫克，34％)是由化合物0205-9(90毫克，34％)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：504[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.22(s，4H)，1.43-1.49(m，4H)，1.92(t，J＝6Hz，2H)，3.13-3.20(m，2H)，3.71(s，3H)，6.57(s，1H)，6.87(d，J＝9Hz，2H)，7.10-7.15(m，3H)，8.84(t，J＝6Hz，1H)，10.06(s，1H)，10.30(s，1H)，10.58(s，1H)。
实施例9：5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-(8-(羟基氨基) -8-氧代辛基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合物 10)的制备方法
步骤9a.8-(5-(2，4-双(苯甲氧基)-5-氯苯基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-氨基甲酰基)辛酸甲酯(化合物0204-10)
所述标题化合物0204-10(450毫克，44％)是由0203(800毫克，1.48毫摩)以及盐酸8-氨基辛酸甲酯(400毫克，1.91毫摩)通过与化合物0204-5的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：697[M+1]+。
步骤9b.8-(5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-氨基甲酰基)辛酸甲酯(化合物0205-10)
所述标题化合物0205-10(274毫克，62％)是由0204-10(450毫克，0.65毫摩)通过与化合物0205-5的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：517[M+1]+。
步骤9c.5-(5-氯-2，4-二羟基苯基)-N-(8-(羟基-氨基)-8-氧代辛基)-4-(4-甲氧基苯基)异恶唑基-3-甲酰胺(化合物10)
所述标题化合物10(70毫克，71％)是由化合物0205-10(100毫克，0.19毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：518[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.23(s，6H)，1.43-1.49(m，4H)，1.93(t，J＝6Hz，2H)，3.15-3.20(m，2H)，3.73(s，3H)，6.59(s，1H)，6.87(d，J＝9Hz，2H)，7.12-7.17(m，3H)，8.64(s，1H)，8.84(t，J＝6Hz，1H)，10.08(s，1H)，10.33(s，1H)，10.60(s，1H)。
生物学检测：
如前文中所指明的，本发明中定义的所述衍生物具有抗增殖的活性。这些特性可以通过例如下文中列出的一种或者一种以上方法进行评价：
(a)测定受试化合物抑制热休克蛋白90(Hsp90)的分子伴 侣活性的能力的体外检测。
所述热休克蛋白90(Hsp90)的分子伴侣检测是通过测量热休克蛋白90(HSP90)重新折叠所述热变性荧光素酶蛋白的能力来完成的。首先在变性缓冲液中(25毫摩pH7.5的Tris，8毫摩硫酸镁，0.01％的牛γ球蛋白以及10％的甘油)利用不同浓度的受试化合物在室温下对热休克蛋白90培养30分钟。向上述变性混合物中加入荧光素酶蛋白并且在50℃下培养8分钟。在变性混合液中，热休克蛋白90以及荧光素酶的最终浓度分别为0.375微摩以及0.125微摩。将上述变性混合液的5微升的样本放入25微升的复性缓冲液(25毫摩pH7.5的Tris，8毫摩硫酸镁，0.01％的牛γ球蛋白以及10％的甘油，0.5毫摩三磷酸腺苷，2毫摩二硫苏糖醇，5毫摩氯化钾，0.3微摩热休克蛋白70以及0.15微摩热休克蛋白40)中进行稀释。将上述复性反应物在室温下培养150分钟，随后利用90微升荧光素试剂(Luclite，PerkinElmer LifeScience)对10微升所述复性样本进行稀释。将所述混合液在黑暗状态下培养5分钟，此后利用TopCount培养板读数器(PerkinElmer Life Science)对所述发光信号进行读取。
(b)热休克蛋白90(HSP90)竞争性结合(荧光偏振)检 测。
异硫氰酸荧光素(FITC)标记的GM是从InvivoGen(antfg1-1)处购买的。热休克蛋白90(HSP90)与被标记的GM之间的相互作用构成了所述荧光偏振检测的基础。一个游离的并且快速翻转(fast-tumbling)的异硫氰酸荧光素(FITC)标记的GM发射出的随机光与激发光的偏振面的平面有关，形成了一个较低的偏振度(mP)的值。当GM与热休克蛋白90结合时，所述的复合翻转减慢并且发射出的光发生偏振，形成了一个较高的偏振度(mP)的值。这种竞争性结合检测是在96孔培养板中进行的，并且每个检测分别含有10纳摩以及50纳摩被标记的GM以及纯化的热休克蛋白90(HSP90)(Assay Design，SPP-776F)。所述检测缓冲液中含有20毫摩羟乙基呱嗪乙硫磺酸(HEPES)(pH7.3)，50毫摩氯化钾，1毫摩二硫苏糖醇，50毫摩氯化镁，20毫摩钼酸钠(Na2MoO4)，含有0.1毫克/毫升牛γ球蛋白的0.01％NP40(乙基苯基聚乙二醇)。将化合物在二甲基亚砜中进行稀释并且先于被标记的GM被加入到最终的检测中，加入的浓度在20微摩至2纳摩的范围之内。在4℃下培养24小时之后，利用Bio Tek Synergy II以及背景减除确定偏振度(mP)的值。
(c)测定受试化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)酶活 性的能力的体外检测。
利用组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)荧光计检测试剂盒(AK-500，Biomol，Plymouth Meeting，PA)对组蛋白脱乙酰基酶进行筛选。将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以形成20毫摩的工作储备浓缩液。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。
每项检测都是通过如下步骤建立的：解冻所有的试剂盒成分并且将其保存于冰上直至使用。在检测缓冲液(50毫摩Tris/C1，pH8.0，137毫摩氯化钠，2.7毫摩氯化钾，1毫摩氯化镁)中以1∶29的比例稀释HeLa核提取物。在检测缓冲液中制备曲古抑菌素A(TSA，阳性对照)以及受试化合物的稀释液(五倍于最终浓度)。在检测缓冲液中将Fluor de LysTM底物稀释至100微摩(50倍＝2倍的最终浓度)。在冷的检测缓冲液中将Fluor de LysTM显影剂浓缩物稀释20倍(例如，50微升的显影剂浓缩物加入950微升的检测缓冲液)。其次，在一倍的显影剂(Developer)中将0.2毫摩的曲古抑菌素A稀释100倍(例如，1毫升中的10微升；在一倍显影剂中的最终曲古抑菌素A的浓度＝2微摩；加入组蛋白脱乙酰基酶/底物反应液后的最终浓度＝1微摩)。加入检测缓冲液，在所述微量滴定板的适当孔中稀释曲古抑菌素A或者受试抑制剂。在除去阴性对照之外的其他所有孔中加入稀释的HeLa提取物或者其他组蛋白脱乙酰基酶样本。允许被稀释的Fluor deLysTM底物以及所述微量滴定板中的所述样本平衡至检测温度(例如，25℃或者37℃)。通过向每个孔中加入稀释的底物(25微升)并且充分混合来激发组蛋白脱乙酰基酶反应。允许组蛋白脱乙酰基酶反应进行1小时，之后通过加入Fluor de LysTM显影剂(50微升)终止反应。在室温下(25℃)对培养板培养10-15分钟。通过能够在350-380纳米范围内的波长下被激发的微量滴定板读数荧光计对样本进行读数，并且检测440-460纳米范围内的发射光。
下述表8-B列出了本发明代表性的化合物以及它们在组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)检测以及热休克蛋白90(HSP90)检测中的活性。在这些检测中，使用到下述分级：对于IC50而言，I≥10微摩，10微摩＞II＞1微摩，1微摩＞III＞0.1微摩，以及IV≤0.1微摩。
表8-B
  化合物编号   HDAC   HSP90
  1   II   IV
  2   III
  3   III
  4   III
  5   III
Figure G2007800418082D05111
第九部分：
表9-A
Figure G2007800418082D05112
Figure G2007800418082D05121
方案1
Figure G2007800418082D05131
方案2
Figure G2007800418082D05132
实施例1：N-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑 基-2-基)-1-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)哌啶基-4-甲酰胺(化 合物1)的制备方法
步骤1a.α-叠氮频哪酮(化合物0102)
向带有磁力搅拌器的1升的圆底烧瓶中加入α-氯频哪酮0101(33.5克，0.25摩)、丙酮(400毫升)以及叠氮钠(21.2克，0.325摩)。将所述反应混合液在25℃下搅拌过夜并且随后过滤，并且利用丙酮对得到的固体进行洗涤。将所述滤液真空浓缩，从而获得油形式的所述标题化合物0102(34.3克，100％)。所述粗物质无需进行进一步的纯化即可在下一步骤中被使用。1HNMR(氘代氯仿)：δ1.17(s，9H)，4.07(s，2H)。
步骤1b.盐酸α-氨基频哪酮(化合物0103)
向带有磁力搅拌器的2升的圆底烧瓶中加入化合物0102(34.3克，245毫摩)、甲醇(1100毫升)、浓盐酸(24毫升)以及10％的钯炭(Pd/C)(4.2克，含水，大约40％的水分)。在氢气环境下将所述反应混合液搅拌过夜。将所述混合液经过硅藻土垫(pad)进行过滤，并且利用甲醇进行漂洗。在低于40℃的温度下，在减压条件下浓缩滤液。将得到的含水固体与异丙醇(2x100毫升)进行共沸，并且随后向其中加入无水乙醚(100毫升)。将所述混合液搅拌5分钟。通过过滤收集得到的固体产物，并且利用二乙醚对所述固体饼进行洗涤并且真空干燥，从而获得化合物0103(28.0克，91％)，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.13(s，9H)，4.06(s，2H)，8.34(s，3H)。
步骤1c.α-N-2(氯乙酰氨基)频哪酮(化合物0104)
向化合物0103的二氯甲烷(350毫升)冰冷溶液(-5℃)中加入三乙胺(35毫升，250毫摩)。将所述反应混合液冷却至-10℃，并且在15分钟时间内在保持所述反应温度低于-5℃的条件下向其中逐滴加入α-氯乙酰氯(8.8毫升，110毫摩)的二氯甲烷(20毫升)溶液。将所述反应混合液搅拌1小时并且利用1N的盐酸(200毫升)进行抑制。分离所述有机相并且利用1N的盐酸(200毫升)以及水(50毫升)进行洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并且蒸发，从而获得白色固体形式的化合物0104(18.9克，98％)：1H NMR(氘代氯仿)：δ1.21(s，9H)，4.09(s，2H)，4.30(s，2H)，7.35(s，1H)。
步骤1d.5-叔丁基-2-氯甲基恶唑(化合物0105)
向带有磁力搅拌器的100毫升圆底烧瓶中加入化合物0104(9.534克，49.9毫摩)以及三氯氧磷(30毫升)。将所述反应混合液加热至105℃并且搅拌1小时。将其冷却至室温后，将所述反应混合液小心的倒入冰中。利用乙醚对所述混合液提取六次。将得到的有机提取物合并并且利用饱和的碳酸氢钠将其中和至pH为7-8。分离所述有机相并且连续利用饱和的碳酸氢钠、水、以及盐水进行洗涤，干燥(硫酸镁)，并且真空浓缩。在减压条件下将所述粗产物蒸馏，从而获得无色油形式的所述标题化合物0105(7.756克，70％)：初馏点(bp.)49℃/0.25mmHg.1H NMR(氘代氯仿)：δ1.32(s，9H)，4.60(s，2H)，6.70(s，1H)。
步骤1e.5-硫氰酸噻唑基-2-胺(化合物0107)
将氢溴酸2-氨基-5-溴噻唑0106(53.0克，0.204摩)以及硫氰酸钾(78.5克，0.808摩)的甲醇(1.4升)溶液所组成的混合液在室温下搅拌20小时。蒸发除去甲醇。向所述残余物中加水(180毫升)并且利用10％的氢氧化钠将所述溶液的pH调整至12。将得到的固体进行过滤，从而获得褐色固体形式的所述标题产物0107(14.0克，44％)：LCMS：157[M+1]+。
步骤1f.5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-胺(化合物0108)
在室温下，向化合物0107(3.14克，20毫摩)的纯乙醇(200毫升)溶液中分部分加入硼氢化钠(1.6克，40毫摩)。将所述混合液搅拌1小时，并且随后向其中缓慢的加入丙酮(100毫升)。1小时之后，向其中加入化合物0105(3.5克，20毫摩)的乙醇(30毫升)溶液，并且将得到的深色反应混合液加热回流1小时。将得到的混合液冷却，真空浓缩，并且随后利用乙酸乙酯以及盐水进行分离。分离得到的有机相，干燥(硫酸镁)，并且进行真空浓缩，从而获得粗固体。将所述粗物质与二乙醚/己烷一同进行粉碎，从而获得灰红褐色固体形式的化合物0108(3.1克，57％)：LCMS：270[M+1]+。
步骤1g.4-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-基-氨基甲酰基)哌啶基-1-甲酸叔丁基酯(化合物0109)
向化合物0108(750毫克，2.79毫摩)、1-(叔丁氧羰基)哌啶基-4-甲酸(960毫克，4.18毫摩)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)(510毫克，4.18毫摩)的二甲基甲酰胺溶液中加入碳二亚胺(EDAC)(802毫克，4.18毫摩)以及1-羟基苯并三唑(HOBt)(560毫克，4.18毫摩)。将所述混合液加热至50℃并且搅拌过夜。利用乙酸乙酯对所述混合液进行稀释并且利用盐水、盐酸水溶液、饱和的碳酸氢钠以及盐水进行洗涤。将所述有机相通过硫酸钠进行干燥，并且利用柱层析法在硅胶柱上(乙酸乙酯/石油醚＝1∶2至纯净的乙酸乙酯)进行纯化，从而获得所述标题化合物0109(1.0克，74.6％)：LCMS：481[M+1]+。
步骤1h.N-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-基)哌啶基-4-甲酰胺(化合物0110)
向化合物0109(1.0克，2毫摩)的二氯甲烷(20毫升)混合液中加入三氟乙酸(2毫升)。将所述反应混合液在30℃下搅拌3小时。反应过后利用饱和的碳酸氢钠将所述混合液的pH调整至7-8并且利用乙酸乙酯进行提取。将所述有机相通过硫酸钠进行干燥，浓缩，从而获得所述标题化合物0110(620毫克，82％)：熔点178.5-180℃，LCMS：381[M+1]+，1H NMR(氘代氯仿)：δ1.164(s，9H)，1.720-1.795(m，2H)，1.923-1.969(m，2H)，2.714-2.777(m，1H)，2.889(t，J＝12Hz，2H)，3.281(s，1H)，4.046(s，1H)，6.708(s，1H)，7.393(s，1H)，8.844(m，1H)。
步骤1i.4-(4-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-氨基甲酰基)哌啶基-1-基)丁酸乙酯(化合物0111-1)
向0110(300毫克，0.789毫摩)的二甲基甲酰胺(10毫升)溶液中加入4-溴丁酸乙酯(153毫克，0.789毫摩)。将所述反应混合液在室温下搅拌30分钟。向所述混合液中加入碳酸钾(108毫克，0.789毫摩)并且将得到的混合液在室温下搅拌过夜。将所述混合液利用水进行洗涤并且利用二氯甲烷进行提取。将所述有机相通过硫酸钠进行干燥，浓缩，从而获得粗产物。利用柱层析法在硅胶柱上(乙酸乙酯/石油醚＝1∶1至100％的乙酸乙酯)对所述粗产物进行纯化，从而获得所述标题化合物0111(180毫克，46％)，LCMS：496[M+1]+。
步骤1j.N-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-基)-1-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)哌啶基-4-甲酰胺(化合物1)
将新鲜制备的羟胺溶液(2.1毫升，3.6毫摩)放置于10毫升的长颈瓶中。向所述溶液中加入化合物0111(180毫克，0.36毫摩)并且在25℃下搅拌4小时。利用醋酸对所述混合液进行中和，并且除去所述甲醇。利用制备型高效液相色谱(HPLC)对所述残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的所述标题化合物1(25毫克，14％)：熔点176-180℃，LCMS：482[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.149(s，9H)，1.352(m，2H)，1.720-2.320(m，10H)，2.403(m，1H)，2.570(m，2H)，4.032(s，2H)，6.696(s，1H)，7.350(s，1H)，8.747(s，1H)，10.440(s，1H)，12.326(s，1H)。
实施例2：N-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑 基-2-基)-1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)哌啶基-4-甲酰胺(化 合物2)的制备方法
步骤2a.5-(4-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-氨基甲酰基)哌啶基-1-基)戊酸甲酯(化合物0111-2)
制备出的所述标题化合物0111-2是黄色固体形式(126毫克，38.7％)，是由化合物0110(250毫克，0.658毫摩)、5-溴戊酸甲酯(128毫克，0.658毫摩)、碳酸钾(90.8毫克，0.658毫摩)以及二甲基甲酰胺(5毫升)通过与化合物0111-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：495[M+1]+。
步骤2b.N-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-基)-1-(5-(羟基-氨基)-5-氧代戊基)哌啶基-4-甲酰胺(化合物2)
制备出的所述标题化合物2是黄色固体形式(20毫克，15.8％)，是由化合物0111-2(126毫克，0.255毫摩)以及新鲜制备的羟胺溶液(1.5毫升，2.55毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点：93-97℃；LCMS：496[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.148(s，9H)，1.353-1.949(m，10H)，2.187-2.227(m，2H)，2.408(m，1H)，2.837(d，J＝11.1，2H)，4.026(s，2H)，6.696(s，1H)，7.355(s，1H)，8.647(s，1H)，10.314(s，1H)，12.190(s，1H)。
实施例3：N-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑 基-2-基)-1-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)哌啶基-4-甲酰胺(化 合物3)的制备方法
步骤3a.6-(4-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-氨基甲酰基)哌啶基-1-基)己酸乙酯(化合物0111-3)
制备出的所述标题化合物0111-3是黄色固体形式(210毫克，51％)，是由化合物0110(300毫克，0.789毫摩)、6-溴己酸乙酯(176毫克，0.789毫摩)、碳酸钾(108毫克，0.789毫摩)以及二甲基甲酰胺(5毫升)通过与化合物0111-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：523[M+1]+。
步骤3b.N-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-基)-1-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)哌啶基-4-甲酰胺(化合物3)
制备出的所述标题化合物3是黄色固体形式(30毫克，15.8％)，是由化合物0111-3(210毫克，0.40毫摩)以及新鲜制备的羟胺溶液(2.5毫升，4.0毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点：127-130℃；LCMS：510[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.158(s，9H)，1.218-1.927(m，14H)，2.204-2.254(m，2H)，2.402(m，1H)，2.619(m，2H)，4.033(s，2H)，6.698(s，1H)，7.377(s，1H)，8.669(s，1H)，10.345(s，1H)，12.354(s，1H)。
实施例4：N-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑 基-2-基)-1-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚基)哌啶基-4-甲酰胺(化 合物4)的制备方法
步骤4a.7-(4-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-氨基甲酰基)哌啶基-1-基)庚酸乙酯(化合物0111-4)
制备出的所述标题化合物0111-4是黄色固体形式(370毫克，62％)，是由化合物0110(423毫克，1.113毫摩)、7-溴庚酸乙酯(260毫克，1.113毫摩)、碳酸钾(154毫克，1.113毫摩)以及二甲基甲酰胺(5毫升)通过与化合物0111-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：537[M+1]+。
步骤4b.N-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-基)-1-(7-(羟基-氨基)-7-氧代庚基)哌啶基-4-甲酰胺(化合物4)
制备出的所述标题化合物4是黄色固体形式(20毫克，6％)，是由化合物0111-4(370毫克，0.69毫摩)以及新鲜制备的羟胺溶液(4.0毫升，6.9毫摩)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点：113-115℃；LCMS：524[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.153(s，9H)，1.215-1.483(m，4H)，1.545-1.628(m，4H)，1.708-1.892(m，6H)，1.917-2.224(m，4H)，2.425(m，1H)，2.844-2.882(m，2H)，4.031(s，2H)，6.701(s，1H)，7.361(s，1H)，8.655(s，1H)，10.361(s，1H)，12.216(s，1H)。
实施例5：4-(4-(2-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫 基)噻唑基-2-氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)-N-羟基丁酰胺(化 合物9)的制备方法
步骤5a.2-(4-(4-甲氧基-4-氧代丁氧基)苯基)乙酸(化合物0202-9)
在0℃下于氮气环境中向甲醇钠(1.08克，20毫摩)的甲醇(20毫升)溶液中加入化合物0201(1.52克，10毫摩)。将所述混合液搅拌10分钟并且向其中加入4-溴丁酸乙酯(1.94克，10毫摩)。在50℃下搅拌过夜之后，利用醋酸将所述混合液的pH调整至6-7，并且进行浓缩。利用乙酸乙酯对所述残余物进行提取，利用水、盐水进行洗涤，干燥并且浓缩，从而获得残余物，利用柱层析法(洗脱液：乙酸乙酯/石油醚为1/5)对所述残余物进行纯化，从而获得固体形式的所述产物0202-9(841毫克，33％)：1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ12.24(s，1H)，7.15(d，J＝8.7Hz，2H)，6.85(d，J＝8.7Hz，2H)，3.95(t，J＝6.3Hz，2H)，3.59(s，3H)，3.47(s，2H)，2.49(m，2H)，1.95(m，2H)。
步骤5b.4-(4-(2-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸甲酯(化合物0203-9)
将化合物0202-9(0.189克，0.75毫摩)、0108(0.135克，0.5毫摩)、1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI)(0.143克，0.75毫摩)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)(0.092克，0.75毫摩)以及1-羟基苯并三唑(HOBt)(0.101克，0.75毫摩)的二甲基甲酰胺(5毫升)溶液在40℃下搅拌4小时。在此之后，将所述混合液倒入乙酸乙酯(50毫升)中，并且利用水以及盐水进行洗涤，干燥并且浓缩，从而获得残余物，利用柱层析法(洗脱液：乙酸乙酯/石油醚＝1/3)对所述残余物进行纯化，从而获得固体形式的所述产物0203-9(40毫克，16％)：1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ12.43(s，1H)，7.39(s，1H)，7.19(d，J＝8.7Hz，2H)，6.86(d，J＝8.7Hz，2H)，6.69(s，1H)，4.04(s，2H)，3.95(t，J＝6.3Hz，2H)，3.65(s，2H)，3.59(s，3H)，2.50(t，J＝3.3Hz，2H)，1.95(m，2H)，1.13(s，9H)。
步骤5c.4-(4-(2-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-基-氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)-N-羟基丁酰胺(化合物9)
制备羟胺的甲醇溶液：将盐酸羟胺(4.67克，67毫摩)溶解于甲醇(24毫升)中以制成溶液A。将氢氧化钾(5.61克，100毫摩)溶解于甲醇(14毫升)中以制成溶液B。在0℃下将溶液B逐滴加入到溶液A中。将所述混合液在0℃下搅拌30分钟，并且对所述固体进行过滤，从而获得羟胺的甲醇溶液。
向装有化合物0203-9(40毫克，0.080毫摩)的长颈瓶中加入上述羟胺的甲醇溶液(6.0毫升)。将所述混合液在室温下搅拌1小时。随后利用浓盐酸将其pH调整至7。将所述混合液浓缩，从而获得残余物，利用水对所述残余物进行洗涤，从而获得固体形式的所述产物9(18毫克，44％产率)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ12.43(s，1H)，10.391(s，1H)，8.68(s，1H)，7.36(s，1H)，7.18(d，J＝8.7Hz，2H)，6.84(d，J＝8.7Hz，2H)，6.67(s，1H)，4.01(s，2H)，3.90(t，J＝6Hz，2H)，3.63(s，2H)，2.11(t，J＝7.2Hz，2H)，1.19(m，2H)，1.12(s，9H)。
实施例6：5-(4-(2-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫 基)噻唑基-2-氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)-N-羟基戊酰胺(化 合物10)的制备方法
步骤6a.2-(4-(5-甲氧基-5-氧代戊氧基)苯基)乙酸(化合物0202-10)
制备出的所述标题化合物0202-10是黄色固体形式(322毫克，24％)，是由化合物0201(0.76克，5毫摩)以及5-溴戊酸甲酯(0.98克，5毫摩)通过与化合物0202-9的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ12.24(s，1H)，7.15(d，J＝8.7Hz，2H)，6.91(d，J＝8.7Hz，2H)，3.94(t，J＝6.0Hz，2H)，3.59(s，3H)，3.48(s，2H)，2.38(t，J＝7.2Hz，2H)，1.69(m，4H)。
步骤6b.5-(4-(2-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)戊酸甲酯(化合物0203-10)
将化合物0202-10(0.193克，0.75毫摩)、0108(0.135克，0.5毫摩)、1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI)(0.143克，0.75毫摩)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)(0.092克，0.75毫摩)以及1-羟基苯并三唑(HOBt)(0.101克，0.75毫摩)的二甲基甲酰胺(5毫升)溶液在40℃下搅拌4小时。在此之后，将所述混合液倒入乙酸乙酯(50毫升)中，并且利用水以及盐水进行洗涤，干燥并且浓缩，从而获得残余物，利用柱层析法(洗脱液：乙酸乙酯/石油醚＝1/3)对所述残余物进行纯化，从而获得固体形式的所述产物0203-10(45毫克，12％)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ12.45(s，1H)，7.39(s，2H)，7.20(d，J＝9.0Hz，2H)，6.87(d，J＝9.0Hz，2H)，6.70(s，1H)，4.04(s，2H)，3.93(t，J＝6.3Hz，2H)，3.65(s，2H)，3.58(s，3H)，2.37(t，J＝6.0Hz，2H)，1.69(m，4H)，1.137(s，9H)。
步骤6c.5-(4-(2-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-基-氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)-N-羟基戊酰胺(化合物10)
制备出的所述标题化合物10是黄色固体形式(17毫克，38％产率)，是由化合物0203-10(45毫克，0.087毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(6.0毫升)通过与化合物9的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ12.43(s，1H)，10.36(s，1H)，8.69(s，1H)，7.38(s，1H)，7.20(d，J＝9.0Hz，2H)，6.86(d，J＝9.0Hz，2H)，6.69(s，2H)，4.04(s，2H)，3.92(t，J＝6.0Hz，2H)，1.99(t，J＝6.0Hz，2H)，1.64(m，4H)，1.14(s，9H)。
实施例7：6-(4-(2-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫 基)噻唑基-2-氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)己酸甲酯(化合物 11)的制备方法
步骤7a.2-(4-(6-甲氧基-6-氧代己氧基)苯基)乙酸(化合物0202-11)
制备出的所述标题化合物0202-11是黄色固体形式(950毫克，34％)，是由化合物0201(0.76克，5毫摩)以及5-溴戊酸甲酯(2.22克，10毫摩)通过与化合物0202-9的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ12.22(s，1H)，7.14(d，J＝8.4Hz，2H)，6.85(d，J＝8.4Hz，2H)，3.92(t，J＝6.3Hz，2H)，3.58(s，3H)，3.47(s，2H)，2.32(t，J＝7.5Hz，2H)，1.69(m，2H)，1.55(m，2H)，1.40(m，2H)。
步骤7b.6-(4-(2-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)噻唑基-2-氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)己酸甲酯(化合物0203-11)
制备出的所述标题化合物0203-11是黄色固体形式(63毫克，16％)，是由化合物0202-9通过与化合物0203-9的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ12.43(s，1H)，7.37(s，1H)，7.18(d，J＝8.7Hz，2H)，6.83(d，J＝8.7Hz，2H)，6.67(s，1H)，4.02(s，2H)，3.89(t，J＝6.3Hz，2H)，3.63(s，2H)，3.55(s，3H)，2.30(t，J＝7.2Hz，2H)，1.67(m，2H)，1.55(m，2H)，1.37(m，2H)，1.11(s，9H)。
步骤7c.6-(4-(2-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)-噻唑基-2-基-氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)己酸甲酯(化合物11)
制备出的所述标题化合物11是黄色固体形式(82毫克，42％产率)，是由化合物0203-11(193毫克，0.363毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(6.0毫升)通过与化合物9的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ12.46(s，1H)，10.35(s，1H)，8.68(s，1H)，7.39(s，1H)，7.18(d，J＝8.4Hz，2H)，6.85(d，J＝8.4Hz，2H)，6.70(s，1H)，4.04(s，2H)，3.92(t，J＝6.3Hz，2H)，3.65(s，3H)，1.96(t，J＝6.3Hz，2H)，1.69(m，2H)，1.54(m，2H)，1.37(m，2H)，1.143(s，9H)。
实施例8：N-羟基-7-(4-(2-(5-((5-异丙基恶唑基-2-基) 甲基硫基)噻唑基-2-氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)庚酰胺(化 合物12)的制备方法
步骤8a.2-(4-(7-甲氧基-7-氧代庚氧基)苯基)乙酸(化合物0202-12)
制备出的所述标题化合物0202-12是黄色固体形式(219毫克，15％)，是由化合物0201通过与化合物0202-9的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ12.22(s，1H)，7.14(d，J＝8.1Hz，2H)，6.84(d，J＝8.1Hz，2H)，3.89(t，J＝6.3Hz，2H)，3.55(s，3H)，3.44(s，2H)，2.30(t，J＝7.2Hz，2H)，1.68(m，2H)，1.54(m，2H)，1.35(m，4H)。
步骤8b.7(4-(2-(5-((5-叔丁基恶唑基-2-基)甲基硫基)-噻唑基-2-氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)庚酸甲酯(化合物0203-12)
制备出的所述标题化合物0203-12是黄色固体形式(100毫克，26％)，是由化合物0202-12通过与化合物0203-9的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ12.45(s，1H)，7.39(s，1H)，7.20(d，J＝8.4Hz，2H)，6.86(d，J＝8.4Hz，2H)，6.69(s，1H)，4.04(s，2H)，3.91(t，J＝6.3Hz，2H)，3.65(s，2H)，3.57(s，3H)，2.30(t，J＝7.2Hz，2H)，1.65(m，2H)，1.51(m，2H)，1.34(m，4H)，1.13(s，9H)。
步骤8c.N-羟基-7-(4-(2-(5-((5-异丙基恶唑基-2-基)甲基硫基)-噻唑基-2-基-氨基)-2-氧代-乙基)苯氧基)庚酰胺(化合物12)
制备出的所述标题化合物12是固体形式(65毫克，68％产率)，是由化合物0203-12(95毫克，0.174毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(10.0毫升)通过与化合物9的制备方法(实施例5)中所描述的类似方法制备得到的：1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ12.45(s，1H)，10.33(s，1H)，8.66(s，1H)，7.39(s，1H)，7.20(d，J＝8.4Hz，2H)，6.87(d，J＝8.4Hz，2H)，6.69(s，1H)，4.04(s，2H)，3.91(t，J＝6.3Hz，2H)，3.65(s，2H)，3.57(s，3H)，2.30(t，J＝7.2Hz，2H)，1.65(m，2H)，1.53(m，2H)，1.34(m，4H)，1.13(s，9H)。
生物学检测：
如前文中所指明的，本发明中定义的所述衍生物具有抗增殖的活性。这些特性可以通过例如下文中列出的一种或者一种以上方法进行评价：
(a)测定受试化合物抑制细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK) 活性的能力的体外检测。
材料：
细胞周期依赖性蛋白激酶2(CDK2)/周期素E(细胞周期依赖性蛋白激酶2的Accession number为EMBL M68520，周期素E1的Accession number为GenBank NM_001238)：将C-末端具有6个组氨酸(His)标记的重组完整长度的细胞周期依赖性蛋白激酶2(CDK2)与N-末端具有GST标记的重组完整长度的周期素E1进行配合。上述两者都是由Sf 21细胞中的杆状病毒所表达的。利用镍离子/次氨基三乙酸(Ni2+/NTA)琼脂糖进行纯化。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)以及考马斯亮蓝染色得到的复合纯度为76％。细胞周期依赖性蛋白激酶2(CDK2)的分子量(MW)＝34kDa，周期素E1的分子量(MW)＝74kDa。比活度(Specific Activity)为1336U/毫克，其中一个细胞周期依赖性蛋白激酶2/周期素E1的活度单位被定义为在30℃下，每分钟内将1纳摩磷酸转化至0.1毫克/毫升组蛋白H1中直至三磷酸腺苷最终浓度达到100微摩的酶的量。所述酶是在50毫摩0.1毫克/毫升的Tris/HCl、pH7.5，150毫摩氯化钠，0.03％的聚氧乙烯月桂醚(Brij-35)，0.1毫摩乙二醇二乙醚二氨四乙酸(EGTA)，0.2毫摩苯甲基磺酰氯(PMSF)，1毫摩苯甲脒，0.1％的2-巯基乙醇，以及270毫摩蔗糖中。
细胞周期依赖性蛋白激酶6(CDK6)/周期素D3(细胞周期依赖性蛋白激酶6的Accession number为GenBank X66365，周期素D3的Accession number为EMBL M90814)：将N-末端具有6个组氨酸(His)标记的完整长度的人类细胞周期依赖性蛋白激酶6(CDK6)与N-末端具有GST标记的完整长度的人类周期素D3进行配合，在Sf 21细胞中进行表达。利用谷胱甘肽-琼脂糖进行纯化，利用细胞周期依赖性蛋白激酶活化激酶(CAK)进行激活，并且利用镍离子/次氨基三乙酸(Ni2+/NTA)琼脂糖进行再次纯化。纯度68％。分子量＝38kDa(细胞周期依赖性蛋白激酶6)以及59kDa(周期素D3)。比活度(Specific Activity)为39U/毫克，其中一个细胞周期依赖性蛋白激酶6/周期素D3的活度单位被定义为在30℃下，每分钟内将1纳摩磷酸转化至0.1毫克/毫升组蛋白H1中直至三磷酸腺苷最终浓度达到100微摩的酶的量。所述酶是在50毫摩0.1毫克/毫升的Tris-HCl、pH7.5，270毫摩蔗糖，150毫摩氯化钠，1毫摩苯甲脒，0.2毫摩苯甲基磺酰氯(PMSF)，0.1％的2-巯基乙醇，0.1毫摩乙二醇二乙醚二氨四乙酸(EGTA)，以及0.03％的聚氧乙烯月桂醚(Brij-35)。
组蛋白H1(细胞周期依赖性蛋白激酶2&6的底物)：Sigmacat#H4524，作为一个富含赖氨酸的片段从小牛胸腺中分离得到，纯度93％，分子量＝21.5kDa，以20毫克/毫升、即930微摩的量储备于DW中。
反应缓冲液：20毫摩羟乙基呱嗪乙硫磺酸(HEPES)(pH7.5)，10毫摩氯化镁，1毫摩乙二醇二乙醚二氨四乙酸(EGTA)，0.02％的聚氧乙烯月桂醚(Brij-35)，0.02毫克/毫升的牛血清白蛋白(BSA)，0.1毫摩正矾酸钠，2毫摩二硫苏糖醇。
[γ-33P]-三磷酸腺苷：Perkin Elmer cat#NEG602H1MC(EasyTides)，10毫居里(mCi)/毫升＝10微居里/微升，100微升于试管中，比活度＝3000居里(Ci)/毫摩，3.3-5微摩存在于50毫摩三羟甲基甲基甘氨酸(Tricine)(pH 7.6)中，琥珀金染色。
检测条件：
细胞周期依赖性蛋白激酶2/周期素E：在所述反应缓冲液中含有0.5纳摩细胞周期依赖性蛋白激酶2/周期素E以及5微摩组蛋白H1，最后加入1微摩三磷酸腺苷以及1％的二甲基亚砜。在室温下培养2小时。
三磷酸腺苷转化率：4.5％。
细胞周期依赖性蛋白激酶6/周期素D3：在所述反应缓冲液中含有50纳摩细胞周期依赖性蛋白激酶6/周期素D3以及5微摩组蛋白H1，最后加入1微摩三磷酸腺苷以及1％的二甲基亚砜。在室温下培养2小时。
三磷酸腺苷转化率：13％。
(b)测定受试化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)酶活 性的能力的体外检测。
利用组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)荧光计检测试剂盒(AK-500，Biomol，Plymouth Meeting，PA)对组蛋白脱乙酰基酶进行筛选。将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以形成20毫摩的工作储备浓缩液。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。
每项检测都是通过如下步骤建立的：解冻所有的试剂盒成分并且将其保存于冰上直至使用。在检测缓冲液(50毫摩Tris/Cl，pH8.0，137毫摩氯化钠，2.7毫摩氯化钾，1毫摩氯化镁)中以1∶29的比例稀释HeLa核提取物。在检测缓冲液中制备曲古抑菌素A(TSA，阳性对照)以及受试化合物的稀释液(五倍于最终浓度)。在检测缓冲液中将Fluor de LysTM底物稀释至100微摩(50倍＝2倍的最终浓度)。在冷的检测缓冲液中将Fluor de LysTM显影剂浓缩物稀释20倍(例如，50微升的显影剂浓缩物加入950微升的检测缓冲液)。其次，在一倍的显影剂(Developer)中将0.2毫摩的曲古抑菌素A稀释100倍(例如，1毫升中的10微升；在一倍显影剂中的最终曲古抑菌素A的浓度＝2微摩；加入组蛋白脱乙酰基酶/底物反应液后的最终浓度＝1微摩)。加入检测缓冲液，在所述微量滴定板的适当孔中稀释曲古抑菌素A或者受试抑制剂。在除去阴性对照之外的其他所有孔中加入稀释的HeLa提取物或者其他组蛋白脱乙酰基酶样本。允许被稀释的Fluor deLysTM底物以及所述微量滴定板中的所述样本平衡至检测温度(例如，25℃或者37℃)。通过向每个孔中加入稀释的底物(25微升)并且充分混合来激发组蛋白脱乙酰基酶反应。允许组蛋白脱乙酰基酶反应进行1小时，之后通过加入Fluor de LysTM显影剂(50微升)终止反应。在室温下(25℃)对培养板培养10-15分钟。通过能够在350-380纳米范围内的波长下被激发的微量滴定板读数荧光计对样本进行读数，并且检测440-460纳米范围内的发射光。
下述表9-B列出了本发明代表性的化合物以及它们在组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)检测以及细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)检测中的活性。在这些检测中，使用到下述分级：对于IC50而言，I≥10微摩，10微摩＞II＞1微摩，1微摩＞III＞0.1微摩，以及IV≤0.1微摩。
表9-B
化合物编号   HDAC   CDK2/cyclinE   CDK6/cyclinD
  1   I
  2   II
  3   II
  4   III
  5   III   IV   III
  6   III   IV   III
  7   IV   IV   III
  8   III   IV
  9   III   IV
  10   III   IV
Figure G2007800418082D05311
第十部分：
表10-A
Figure G2007800418082D05312
Figure G2007800418082D05321
Figure G2007800418082D05331
方案1
方案2
Figure G2007800418082D05351
实施例1：(R)-4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基 -1-基)-N-(4-(4-((2-(羟基氨基)-2-氧代乙基)(甲基)氨基) -1-(苯基硫基)-丁基-2-氨基)-3-硝基苯基磺酰基)苯甲酰胺 (化合物1)的制备方法
步骤1a.(R)-5-氧代-四氢呋喃基-3-氨基甲酸苯甲酯(化合物0101)
在0℃下，于3小时的时间内向处于搅拌状态中的硼氢化钠(8.38克，0.223摩)的四氢呋喃(290毫升)浆液中加入0100(46克，0.185摩)的四氢呋喃(290毫升)溶液。在室温下搅拌1小时之后，利用6N的盐酸小心的将所述反应混合液酸化至pH达到2并且随后在减压条件下浓缩至大约四分之一的体积。将得到的溶液用水进行稀释并且利用四部分的乙醚进行提取，并且随后在减压条件下将合并的有机提取物浓缩直至获得不均匀的残余物。利用甲苯(200毫升)对所述黄色残余物进行提取，其中含有对甲苯磺酸(p-TsOH)(200毫克)，并且随后通过使用Dean-Stark装置以恒沸形式除去水。将所述混合液回流5小时之后，在减压条件下除去所述的甲苯，从而获得粘性残余物，将所述粘性残余物与乙醚一同进行粉碎，从而获得白色晶体形式的0101(37克，85％)。LCMS：236[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.39(dd，1H，J1＝3.6Hz，J2＝18.0Hz)，2.86(dd，1H，J1＝8.1Hz，J2＝17.7Hz)，4.11(dd，1H，J1＝3.6Hz，J2＝9.3Hz)，4.319(m，1H)，4.43(dd，1H，J1＝6.0Hz，J2＝9.0Hz)，5.05(s，2H)，7.365(m，5H)，7.88(d，1H，J＝4.5Hz)。
步骤1b.(R)-1-羟基-4-(甲基氨基)-4-氧代丁基-2-氨基甲酸苯甲酯(化合物0102)
将0101(5.04克，21.4毫摩)加入到甲胺(31.06克，1摩)的乙醇(100毫升)溶液中并且搅拌15分钟，在这段时间内0101逐渐溶解并且随后出现新的固体。在减压条件下蒸发所述溶剂，从而获得白色固体形式的0102(5.016克，88％)，所述白色固体无需进行进一步的纯化即可在下一步骤的反应中进行使用。LCMS：267[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.18(dd，1H，J1＝8.4Hz，J2＝14.1Hz)，2.31(dd，1H，J1＝6.3Hz，J2＝14.4Hz)，2.54(d，3H，J＝5.1Hz)，3.33(m，1H)，3.82(m，1H)，4.703(m，1H)，5.00(s，2H)，6.98(d，1H，J＝8.4Hz)，7.35(m，5H)，7.68(m，1H)。
步骤1c.(R)-4-(甲基氨基)-4-氧代-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基甲酸苯甲酯(化合物0103)
将0102(5.02克，18.85毫摩)、二苯基硫((PhS)2)(8.23克，37.70毫摩)以及三丁基磷(9.44克，40.98毫摩)的甲苯(100毫升)溶液所组成的混合液加热至80℃并且搅拌18小时。将所述混合液冷却并且向其中加入石油醚(500毫升)。过滤得到的沉淀并且利用石油醚进行洗涤，从而获得白色固体形式的0103(5.45克，80.7％)，所述白色固体无需进行进一步的纯化即可在下一步骤的反应中进行使用。LCMS：359[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.39(m，1H)，2.55(d，3H，J＝3.9Hz)，3.068(m，2H)，3.33(m，1H)，3.98(m，1H)，5.00(s，2H)，7.18(m，1H)，7.35(m，10H)，7.78(m，1H)。
步骤1d.(R)-3-氨基-N-甲基-4-(苯基硫基)丁酰胺(化合物0104)
将0103(5.4克，15.06毫摩)溶解于醋酸(100毫升)以及40％的氢溴酸水溶液(9.1克)组成的混合液中并且在80℃下搅拌4小时。将所述混合液冷却，之后向其中加入水(100毫升)，利用二氯甲烷(50毫升x2)进行提取。利用6N的氢氧化钾将所述溶液的pH调整至12，利用二氯甲烷(100毫升x3)进行提取，并且利用无水硫酸钠对得到的提取物进行干燥，在减压条件下蒸发，从而获得无色油形式的0104(2.5克，74％)，所述的无色油无需进行进一步的纯化即可在下一步骤的反应中进行使用。LCMS：225[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.11(dd，1H，J1＝7.8Hz，J2＝14.4Hz)，2.31(dd，1H，J1＝5.1Hz，J2＝15.0Hz)，2.56(d，3H，J＝4.5Hz)，2.86(dd，1H，J1＝6.6Hz，J2＝12.6Hz)，3.03(dd，1H，J1＝5.1Hz，J2＝12.6Hz)，3.12(m，1H)，7.17(m，1H)，7.33(m，4H)，7.86(m，1H)。
步骤1e.(R)-N-甲基-3-(2-硝基-4-磺酰基苯基氨基)-4-(苯基硫基)丁酰胺(化合物0105)
向0104(2.5克，11.14毫摩)的二甲基甲酰胺(36毫升)溶液中加入4-氟-3-硝基苯磺酰胺(2.7克，12.26毫摩)以及N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(1.9毫升)。将所述混合液搅拌4小时。在真空条件下蒸发除去所述溶剂并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝50：1)对所述残余物进行纯化，从而获得黄色固体形式的0105(2.6克，55％)。LCMS：425[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.55(d，3H，J＝5.2Hz)，2.63(m，2H)，3.34(d，2H，J＝11.4Hz)，4.38(m，1H)，7.07(d，1H，J＝9.0Hz)，7.23(m，7H)，7.72(dd，1H，J1＝2.1Hz，J2＝9.0Hz)，8.00(d，1H，J＝4.5Hz)，8.39(d，1H，J＝2.1Hz)，8.68(d，1H，J＝9.6Hz)。
步骤1f.(R)-4-(4-(甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基苯磺酰胺(化合物0106)
将0105(2克，4.7毫摩)以及1M的氢化硼的四氢呋喃(17毫升)溶液组成的混合液搅拌16小时，并且利用甲醇(5毫升)以及浓盐酸(2毫升)对其进行处理。将得到的混合液在80℃下搅拌2小时，冷却至室温，利用4M的碳酸钠将其pH调整至10。利用水(100毫升)对所述溶液进行稀释，利用二氯甲烷(100毫升x 2)进行提取。将所述提取物浓缩并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝30∶1)进行纯化，从而获得黄色固体形式的0106(1.2克，62％)。LCMS：411[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.90(m，2H)，2.28(s，3H)，2.61(t，2H，J＝6.6Hz)，3.36(m，2H)，4.19(m，1H)，7.22(m，7H)，7.73(dd，1H，J1＝2.7Hz，J2＝9.3Hz)，8.39(d，1H，J＝2.7Hz)，8.52(m，1H)。
步骤1g.(R)-2-(甲基(3-(2-硝基-4-磺酰基苯基氨基)-4-(苯基硫基)丁基)氨基)乙酸乙酯(化合物0107-1)
将0106(313毫克，0.762毫摩)、2-溴乙酸乙酯(127毫克，0.762毫摩)、碳酸钠(323毫克，3.05毫摩)的二甲基甲酰胺(11毫升)溶液所组成的混合液在50℃下搅拌16小时。在真空条件下除去二甲基甲酰胺，并且利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝30∶1)对得到的残余物进行纯化，从而获得黄色固体形式的0107-1(323毫克，85％)。LCMS：497[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.15(t，3H，J＝7.5Hz)，1.83(m，1H)，1.95(m，1H)，2.24(s，3H)，2.54(m，2H)，3.21(s，2H)，3.38(m，2H)，4.04(q，2H，J＝7.2Hz)，4.16(m，1H)，7.22(m，8H)，7.70(dd，1H，J1＝2.7Hz，J2＝9.3Hz)，8.40(d，1H，J＝2.7Hz)，8.52(d，1H，J＝8.7Hz)。
步骤1h.(R)-2-((3-(4-(N-(4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-苯甲酰基)磺酰基)-2-硝基苯基氨基)-4-(苯基硫基)丁基)(甲基)氨基)乙酸乙酯(化合物0108-1)
将0107(323毫克，0.651毫摩)、0109(291毫克，0.716毫摩)、1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI)(155毫克，0.814毫摩)以及4-二甲氨基吡啶(DMAP)(40毫克，0.326毫摩)的无水二氯甲烷(4毫升)溶液所组成的混合液在室温下搅拌16小时。将所述混合液利用二氯甲烷(50毫升)进行稀释，利用盐水(50毫升)进行洗涤，通过硫酸钠进行干燥，过滤并且浓缩。利用柱层析法在硅胶柱上(二氯甲烷/甲醇＝100∶1)对得到的残余物进行纯化，从而获得黄色固体形式的0108-1(107毫克，18.6％)。LCMS：443[M/2+1]+。
步骤1i.(R)-4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-N-(4-(4-((2-(羟基氨基)-2-氧代乙基)(甲基)氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基-苯基磺酰基)苯甲酰胺(化合物1)
在0℃下，向处于搅拌状态中的盐酸羟胺(4.67克，67毫摩)的甲醇(24毫升)溶液中加入氢氧化钾(5.61克，100毫摩)的甲醇(14毫升)溶液。在加入之后，将所述混合液在0℃下搅拌30分钟，并且将其在低温下进行放置。分离得到的沉淀，从而获得游离的羟胺的甲醇溶液。
将0108-1(107毫克，0.121毫摩)以及所述羟胺溶液(1.77M，3毫升)组成的混合液在室温下搅拌15分钟。利用醋酸将所述混合液的pH调整至7.0。将所述溶液浓缩至小体积并且向其中加入水。过滤所述沉淀，并且利用制备型高效液相色谱(HPLC)对收集到的固体进行纯化，从而获得黄色固体形式的化合物1(47毫克，44.6％)。熔点：179～201℃，LCMS：872[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.97(m，2H)，2.34(s，3H)，2.41(m，4H)，2.66(m，2H)，3.12(m，2H)，3.22(m，4H)，3.35(m，2H)，3.41(s，2H)，4.20(s，1H)，6.87(d，2H，J＝8.4Hz)，7.19(m，7H)，7.49(m，7H)，7.75(d，2H，J＝8.1Hz)，7.83(d，1H，J＝8.7Hz)，8.42(d，1H，J＝9.9Hz)，8.50(s，1H)，8.95(s，1H)，10.61(s，1H)。
步骤1j.4-(哌嗪基-1-基)苯甲酸乙酯(化合物0110)
将哌嗪(12.80克，0.15摩)、4-氟苯甲酸乙酯(8.4克，0.05摩)以及碳酸钾(13.80克，0.10摩)的二甲基亚砜(20毫升)溶液所组成的混合液在120℃下搅拌6小时。将所述混合液倒入水中。利用乙酸乙酯对所述混合液进行提取并且利用水以及盐水对所述有机层进行洗涤，通过硫酸钠进行干燥，浓缩，从而获得白色固体形式的化合物0110(12.40克，83％)。LCMS：235[M+1]+。
步骤1k.4-(4-(2-溴苯甲基)哌嗪基-1-基)苯甲酸乙酯(化合物0111)
将化合物0110(3.778克，16.10毫摩)、2-溴苯甲溴(4.000克，16.10毫摩)、以及二异丙基乙胺(DIEA)(3.4毫升)的乙腈(32毫升)溶液所组成的混合液在室温下搅拌2小时。过滤所述沉淀，从而获得白色固体形式的化合物0111(5.20克，80％)。LCMS：403[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.29(t，J＝7.2Hz，3H)，2.55-2.59(m，4H)，3.29-3.34(m，4H)，3.60(s，2H)，4.25(q，J＝7.2Hz，2H)，6.97(d，J＝9Hz，2H)，7.19-7.25(m，1H)，7.38(t，J＝7.2Hz，1H)，7.52(d，J＝7.2Hz，1H)，7.61(d，J＝7.8Hz，1H)，7.77(d，J＝9Hz，2H)。
步骤1l.4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)苯甲酸乙酯(化合物0112)
将化合物0111(6.915克，0.017摩)、4-氯苯基硼酸(3.520克，0.023摩)、双(三苯基膦)合二氯化钯(240毫克，0.340毫摩)以及2M的碳酸钠(11.25毫升)的7∶3∶2的二甲醚(DME)/水/乙醇(100毫升)溶液所组成的混合液在90℃下搅拌5小时。将所述混合液冷却至室温并且利用乙酸乙酯进行提取。将所述提取物通过无水硫酸钠进行干燥，过滤，并且浓缩。利用柱层析法在硅胶柱上(乙酸乙酯/石油醚＝2/5)对所述残余物进行纯化，从而获得产物(6.40克，86.7％)。LCMS：435[M+1]+。
步骤1m.4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)苯甲酸(化合物0109)
将化合物0112(2.40克，5.53毫摩)以及一水合氢氧化锂(0.70克，16.68毫摩)在混合溶剂二氧杂环乙烷(46毫升)以及水(18毫升)所组成的混合液在95℃下搅拌过夜。在减压条件下除去所述溶剂并且利用1M的盐酸(15毫升)对得到的残余物进行处理，过滤，从而获得白色固体形式的化合物0109(2.10克，93％)。LCMS：407[M+1]+。
实施例2：(R)-4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基 -1-基)-N-(4-(4-((3-(羟基氨基)-3-氧代丙基)(甲基)氨基) -1-(苯基硫基)-丁基-2-氨基)-3-硝基苯基磺酰基)苯甲酰胺 (化合物2)的制备方法
步骤2a：(R)-3-(甲基(3-(2-硝基-4-磺酰基苯基氨基)-4-(苯基硫基)丁基)氨基)丙酸甲酯(化合物0107-2)
制备出的所述标题化合物0107-2是黄色固体形式(247毫克，45.0％)，是由化合物0106(454毫克，1.11毫摩)、3-溴丙酸甲酯(185毫克，1.11毫摩)以及碳酸钠(469毫克，4.44毫摩)的二甲基甲酰胺(15毫升)溶液通过与化合物0107-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：497[M+1]+。
步骤2b：(R)-3-((3-(4-(N-(4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-苯甲酰基)磺酰基)-2-硝基苯基氨基)-4-(苯基硫基)丁基)(甲基)氨基)丙酸甲酯(化合物0108-2)
制备出的所述标题化合物0108-2是黄色固体形式(231毫克，52.5％)，是由化合物0107-2(247毫克，0.497毫摩)、0109(222毫克，0.547毫摩)、1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI)(119毫克，0.621毫摩)以及4-二甲氨基吡啶(DMAP)(31毫克，0.249毫摩)通过与化合物0107-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：443[M/2+1]+。
步骤2c：(R)-4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-N-(4-(4-((3-(羟基氨基)-3-氧代丙基)(甲基)氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基-苯基磺酰基)苯甲酰胺(化合物2)
制备出的所述标题化合物2是黄色固体形式(53毫克，38.4％)，是通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点：130～138℃.LCMS：886[M+1]+.1HNMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.05(m，2H)，2.29(s，3H)，2.40(m，6H)，2.98(m，4H)，3.17(m，6H)，3.39(s，2H)，4.20(s，1H)，6.83(d，2H，J＝8.4Hz)，6.99(d，1H，J＝9.3Hz)，7.41(m，13H)，7.73(d，2H，J＝9.0Hz)，7.82(d，1H，J＝9Hz)，8.28(d，1H，J＝8.1Hz)，8.47(s，1H)，8.88(s，1H)，10.56(s，1H)。
实施例3：(R)-4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基 -1-基)-N-(4-(4-((4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)(甲基)氨基) -1-(苯基硫基)-丁基-2-氨基)-3-硝基苯基磺酰基)苯甲酰胺 (化合物3)的制备方法
步骤3a：(R)-4-(甲基(3-(2-硝基-4-磺酰基苯基氨基)-4-(苯基硫基)丁基)氨基)丁酸乙酯(化合物0107-3)
制备出的所述标题化合物0107-3是黄色固体形式(198毫克，52％)，是由化合物0106(300毫克，0.731毫摩)、4-溴丁酸乙酯(143毫克，0.731毫摩)以及碳酸钠(310毫克，2.924毫摩)的二甲基甲酰胺(10毫升)溶液通过与化合物0107-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：525[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.15(t，3H，J＝6.9Hz)，1.60(m，2H)，1.83(m，1H)，1.95(m，1H)，2.09(s，3H)，2.22(m，5H)，3.36(m，2H)，4.01(q，2H，J＝6.9Hz)，4.12(m，1H)，7.06(d，1H，J＝9.0Hz)，7.27(m，7H)，7.72(dd，1H，J1＝2.1，J2＝9.0)，8.40(d，1H，J＝2.1Hz)，8.50(d，1H，J＝9.3Hz)。
步骤3b：(R)-4-((3-(4-(N-(4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-苯甲酰基)磺酰基)-2-硝基苯基氨基)-4-(苯基硫基)丁基)(甲基)氨基)丁酸乙酯(化合物0108-3)
制备出的所述标题化合物0108-3是黄色固体形式(150毫克，43.6％)，是由化合物0107-3(198毫克，0.377毫摩)、0109(230毫克，0.566毫摩)、1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI)(108毫克，0.566毫摩)以及4-二甲氨基吡啶(DMAP)(23毫克，0.189毫摩)通过与化合物0108-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：457[M/2+1]+.1HNMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.16(t，3H，J＝7.2Hz)，1.76(m，2H)，2.06(m，2H)，2.32(t，2H，J＝7.5Hz)，2.40(m，4H)，2.55(m，3H)，2.80(m，4H)，3.16(m，4H)，3.24(m，2H)，3.39(s，2H)，4.04(q，2H，J＝6.9Hz)，4.12(m，1H)，6.82(d，2H，J＝9.0Hz)，6.97(d，1H，J＝9.6Hz)，7.47(m，14H)，7.73(d，2H，J＝8.7Hz)，7.82(d，1H，J＝9.6Hz)，8.24(d，1H，J＝8.4Hz)，8.48(s，1H)。
步骤3c：(R)-4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-N-(4-(4-((4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)(甲基)氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基-苯基磺酰基)苯甲酰胺(化合物3)
制备出的所述标题化合物3是黄色固体形式(19毫克，12.8％)，是通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：900[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.64(m，2H)，1.93(m，4H)，2.67(m，2H)，2.40(m，6H)，3.13(m，4H)，3.38(s，2H)，4.06(s，1H)，6.79(d，2H，J＝9.3Hz)，6.86(d，1H，J＝9.6Hz)，7.32(m，14H)，7.73(m，3H)，8.32(m，1H)，8.43(s，1H)，8.70(m，1H)，10.42(m，1H)。
实施例4：(R)-4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基 -1-基)-N-(4-(4-((5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)(甲基)氨基) -1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基苯基磺酰基)苯甲酰胺(化 合物4)的制备方法
步骤4a：(R)-5-(甲基(3-(2-硝基-4-磺酰基苯基氨基)-4-(苯基硫基)丁基)氨基)戊酸甲酯(化合物0107-4)
制备出的所述标题化合物0107-4是黄色固体形式(194毫克，51％)，是由化合物0106(300毫克，0.731毫摩)、5-溴戊酸甲酯(143毫克，0.731毫摩)以及碳酸钠(310毫克，2.924毫摩)的二甲基甲酰胺(10毫升)溶液通过与化合物0107-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：525[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.36(m，2H)，1.44(m，2H)，1.83(m，1H)，1.95(m，1H)，2.08(s，3H)，2.24(m，5H)，2.44(m，1H)，3.35(m，2H)，3.56(s，3H)，4.12(m，1H)，7.06(d，1H，J＝9.3Hz)，7.32(m，8H)，7.71(dd，1H，J1＝2.4，J2＝9.0)，8.41(d，1H，J＝1.5Hz)，8.51(d，1H，J＝8.4Hz)。
步骤4b：(R)-5-((3-(4-(N-(4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)苯甲酰基)磺酰基)-2-硝基苯基氨基)-4-(苯基硫基)丁基)(甲基)氨基)戊酸甲酯(化合物0108-4)
制备出的所述标题化合物0108-4是黄色固体形式(167毫克，49.4％)，是由化合物0107-4(194毫克，0.370毫摩)、0109(225毫克，0.555毫摩)、1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI)(106毫克，0.555毫摩)以及4-二甲氨基吡啶(DMAP)(230毫克，0.189毫摩)通过与化合物0108-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：457[M/2+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.45(m，3H)，2.32(m，3H)，2.40(m，4H)，2.60(m，2H)，2.72(m，2H)，3.07(m，3H)，3.14(m，4H)，3.25(m，2H)，3.56(s，2H)，4.06(m，1H)，6.79(d，2H，J＝7.5Hz)，6.90(m，1H)，7.26(m，6H)，7.49(m，5H)，7.75(m，2H)，8.16(d，1H，J＝7.2Hz)，8.28(d，1H，J＝8.6Hz)，8.44(d，1H，J＝2.1Hz)。
步骤4c：(R)-4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-N-(4-(4-((5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)(甲基)氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基-苯基磺酰基)苯甲酰胺(化合物4)
制备出的所述标题化合物4是黄色固体形式(50毫克，30％)，是通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点：126～130℃，LCMS：914[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)δ1.47(m，4H)，1.95(m，2H)，2.10(m，2H)，2.40(m，4H)，2.64(m，3H)，3.15(m，4H)，3.39(s，2H)，4.10(m，1H)，6.80(d，2H，J＝8.7Hz)，6.93(d，1H，J＝9.0Hz)，7.24(m，7H)，7.48(m，6H)，7.72(d，2H，J＝8.7Hz)，7.81(d，1H，J＝9.6Hz)，8.21(m，1H)，8.46(d，1H，J＝2.1Hz)，8.70(s，1H)，10.38(s，1H)。
实施例5：(R)-4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基 -1-基)-N-(4-(4-((6-(羟基氨基)-6-氧代己基)(甲基)氨基) -1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基苯基磺酰基)苯甲酰胺(化 合物5)的制备方法
步骤5a：(R)-6-(甲基(3-(2-硝基-4-磺酰基苯基氨基)-4-(苯基硫基)丁基)氨基)己酸乙酯(化合物0107-5)
制备出的所述标题化合物0107-5是黄色固体形式(220毫克，54.5％)，是由化合物0106(300毫克，0.731毫摩)、6-溴己酸乙酯(163毫克，0.731毫摩)以及碳酸钠(310毫克，2.924毫摩)的二甲基甲酰胺(10毫升)溶液通过与化合物0107-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：553[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.17(m，5H)，1.31(m，2H)，1.45(m，2H)，1.81(m，1H)，1.96(m，1H)，2.08(s，3H)，2.20(m，4H)，2.43(m，2H)，3.33(m，2H)，4.03(q，2H，J＝6.9Hz)，4.12(m，1H)，7.04(d，1H，J＝9.6Hz)，7.30(m，7H)，7.69(dd，1H，J1＝2.1，J2＝9.0)，8.39(d，1H，J＝2.1Hz)，8.51(d，1H，J＝8.7Hz)。
步骤5b：(R)-6-((3-(4-(N-(4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)苯甲酰基)磺酰基)-2-硝基苯基氨基)-4-(苯基硫基)丁基)(甲基)氨基)己酸乙酯(化合物0108-5)
制备出的所述标题化合物0108-5是黄色固体形式(165毫克，48％)，是由化合物0107-5(202毫克，0.365毫摩)、0109(163毫克，0.402毫摩)、1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI)(87毫克，0.457毫摩)以及4-二甲氨基吡啶(DMAP)(190毫克，0.152毫摩)的无水二氯甲烷(2.6毫升)溶液通过与化合物0108-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：471[M/2+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.21(m，5H)，1.51(m，4H)，2.09(m，2H)，2.26(t，2H，J＝6.6Hz)，2.28(m，4H)，2.60(m，3H)，3.15(m，4H)，3.39(s，2H)，4.06(m，3H)，6.80(d，2H，J＝9.3Hz)，6.93(d，1H，J＝9.6Hz)，7.48(m，13H)，7.72(d，2H，J＝9.3Hz)，7.82(d，1H，J＝9.6Hz)，8.18(m，1H)，8.47(s，1H)。
步骤5c：(R)-4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-N-(4-(4-((6-(羟基氨基)-6-氧代己基)(甲基)氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基-苯基磺酰基)苯甲酰胺(化合物5)
制备出的所述标题化合物5是黄色固体形式(18毫克，28％)，是通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：928[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.20(m，2H)，1.48(m，4H)，1.93(t，2H，J＝7.5Hz)，2.09(m，2H)，2.40(m，4H)，2.66(s，3H)，2.91(m，2H)，3.13(m，6H)，3.41(m，4H)，4.13(m，1H)，6.80(d，2H，J＝9.3Hz)，6.93(d，1H，J＝9.3Hz)，7.26(m，8H)，7.48(m，6H)，7.72(d，2H，J＝8.7Hz)，7.82(dd，1H，J1＝1.8Hz，J2＝9.0Hz)，8.19(m，1H)，8.46(d，1H，J＝2.4Hz)，8.68(s，1H)，10.35(s，1H)。
实施例6：(R)-4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)-哌嗪基 -1-基)-N-(4-(4-((7-(羟基氨基)-7-氧代戊基)(甲基)氨基) -1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基苯基磺酰基)苯甲酰胺(化 合物6)的制备方法
步骤6a：(R)-7-(甲基(3-(2-硝基-4-磺酰基苯基氨基)-4-(苯基硫基)丁基)氨基)戊酸乙酯(化合物0107-6)
制备出的所述标题化合物0107-6是黄色固体形式(224毫克，54％)，是由化合物0106(300毫克，0.731毫摩)、7-溴庚酸乙酯(173毫克，0.731毫摩)以及碳酸钠(310毫克，2.924毫摩)的二甲基甲酰胺(10毫升)溶液通过与化合物0107-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：567[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.16(m，7H)，1.30(m，2H)，1.45(m，2H)，1.81(m，1H)，1.96(m，1H)，2.09(s，3H)，2.22(m，4H)，2.46(m，2H)，3.33(m，2H)，4.03(q，2H，J＝6.9Hz)，4.12(m，1H)，7.05(d，1H，J＝9.6Hz)，7.33(m，7H)，7.70(m，1H)，8.40(s，1H)，8.54(d，1H，J＝8.1Hz)。
步骤6b：(R)-7-((3-(4-(N-(4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)苯甲酰基)磺酰基)-2-硝基苯基氨基)-4-(苯基硫基)丁基)(甲基)氨基)庚酸乙酯(化合物0108-6)
制备出的所述标题化合物0108-6是黄色固体形式(190毫克，41％)，是由化合物0107-6(220毫克，0.395毫摩)、0109(241毫克，0.593毫摩)、1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI)(94毫克，0.494毫摩)以及4-二甲氨基吡啶(DMAP)(240毫克，0.196毫摩)通过与化合物0108-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：478[M/2+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.16(t，3H，J＝7.5Hz)，1.25(m，5H)，1.49(m，3H)，2.10(m，2H)，2.25(t，2H，J＝7.2Hz)，2.40(m，4H)，2.60(m，3H)，2.85(m，2H)，3.15(m，4H)，3.24(m，2H)，3.39(s，2H)，4.03(q，2H，J＝7.2Hz)，4.08(m，1H)，6.80(d，1H，J＝9.3Hz)，6.93(m，1H)，7.38(m，13H)，7.76(m，4H)，8.19(d，1H，J＝7.5Hz)，8.46(d，1H，J＝1.5Hz)。
步骤6c：(R)-4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-N-(4-(4-((7-(羟基氨基)-7-氧代庚基)(甲基)氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基-苯基磺酰基)苯甲酰胺(化合物6)
制备出的所述标题化合物6是黄色固体形式(60毫克，33％)，是通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点：125～130℃.LCMS：942[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.21(m，4H)，1.46(m，4H)，1.92(t，2H，J＝5.2Hz)，2.10(m，2H)，2.40(m，4H)，2.58(s，3H)，2.85(m，4H)，3.14(m，4H)，3.35(m，2H)，3.39(s，2H)，4.09(m，1H)，6.80(d，2H，J＝8.7Hz)，6.93(d，1H，J＝9.3Hz)，7.26(m，7H)，7.48(m，6H)，7.73(d，2H，J＝9.0Hz)，7.81(dd，1H，J1＝1.8Hz，J2＝9.0Hz)，8.21(m，1H)，8.46(d，1H，J＝1.8Hz)，8.67(s，1H)，10.34(s，1H)。
实施例7：(R)-N 1 -(2-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)- 哌嗪基-1-基)-5-(4-(4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2- 氨基)-3-硝基苯基磺酰基氨基甲酰基)苯基)-N 5 -羟基戊二酰胺 (化合物7)的制备方法
步骤7a：4-氟-3-硝基苯甲酸叔丁基酯(化合物0201)
向4-氟-3-硝基苯甲酸(370毫克，2毫摩)的10毫升叔丁醇溶液中加入叔丁氧羰基碳酸酐((Boc)2O)(872毫克，4毫摩)以及4-二甲氨基吡啶(DMAP)(24毫克，0.2毫摩)。将所述溶液搅拌24小时。蒸发除去所述溶剂。将得到的残余物溶解于乙酸乙酯中并且利用1N的盐酸进行洗涤。将分离得到的有机相进行蒸发。将所述残余物投入到快速柱色谱法的硅胶柱中，利用12.5％的乙酸乙酯/石油醚进行洗脱，从而获得化合物0201(240毫克，49.8％)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.55(s，9H)，7.69(m，1H)，8.26(m，1H)，8.48(m，1H)。
步骤7b：3-硝基-4-(哌嗪基-1-基)苯甲酸叔丁基酯(化合物0202)
将哌嗪(451毫克，5.2毫摩)、4-氟-3-硝基-苯甲酸叔丁基酯(211毫克，0.9毫摩)以及碳酸钾(234毫克，1.7毫摩)的二甲基甲酰胺(10毫升)溶液所组成的混合液在120℃下搅拌6小时。将所述混合液倒入水中，并且利用乙酸乙酯进行提取。将所述有机相用水(100毫升)进行洗涤，真空浓缩。利用快速柱层析法对所述残余物进行纯化，在硅胶柱上利用25％的乙酸乙酯/石油醚进行洗脱，从而获得0202(190毫克，70.7％)。LC-MS：308[M+1]+.1H NMR(氘代氯仿)：δ1.58(s，9H)，1.84(s，1H)，3.01(m，4H)，3.12(m，4H)，7.03(d，J＝6.0Hz，1H)，8.02(dd，J＝2.1，6.0Hz，1H)，8.33(d，J＝2.1Hz，1H)。
步骤7c：4-(4-(2-溴苯甲基)哌嗪基-1-基)-3-硝基苯甲酸叔丁基酯(化合物0203)
将化合物0202(262毫克，0.85毫摩)、2-溴苯甲溴(161毫克，0.65毫摩)、以及二异丙基乙胺(DIEA)(149毫克，1.3毫摩)的乙腈(6毫升)溶液所组成的混合液在25℃下搅拌2小时并且进行过滤。将所述固体投入到柱层析法的硅胶柱中，利用乙酸乙酯进行洗脱，从而获得0203(320毫克，78.7％)。LC-MS：476[M+1]+.1H NMR(氘代氯仿)：δ1.57(s，9H)，2.67(t，J＝4.8Hz，4H)，3.18(t，J＝4.8Hz，4H)，3.66(s，2H)，7.03(d，J＝8.4Hz，1H)，7.12(m，1H)，7.28(m，1H)，7.45(m，1H)，7.56(m，1H)，8.00(dd，J＝2.1，6.0Hz，1H)，8.33(d，J＝2.1Hz，1H)。
步骤7d：4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-3-硝基苯甲酸叔丁基酯(化合物0204)
将0203(160毫克，0.3毫摩)、4-氯苯基硼酸(51毫克，0.3毫摩)、双(三苯基膦)合二氯化钯(7毫克，0.01毫摩)以及2M的碳酸钠(0.15毫升)的混合溶剂二甲醚(DME)/水/乙醇(7∶3∶2，5毫升)溶液所组成的混合液在90℃下搅拌过夜并且利用乙酸乙酯进行提取。将所述提取物干燥(硫酸镁)，过滤，并且浓缩。将所述残余物利用快速柱层析法进行纯化，在硅胶柱上利用5％-40％的乙酸乙酯/石油醚进行洗脱，从而获得0204(90毫克，52.7％)。LC-MS：508[M+1]+.1H NMR(氘代氯仿)：δ1.57(s，9H)，2.50(t，J＝4.8Hz，4H)，3.10(t，J＝4.8Hz，4H)，3.43(s，2H)，7.00(d，J＝8.7Hz，1H)，7.25(m，1H)，7.32(m，2H)，7.35(m，4H)，7.49(m，1H)，8.00(m，1H)，8.32(d，J＝2.1Hz，1H)。
步骤7e：3-氨基-4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)-哌嗪基-1-基)苯甲酸叔丁基酯(化合物0205)
将化合物4705(13.4克，26毫摩)溶解于甲醇(300毫升)中，并且将所述溶液加热至60℃。向所述溶液中加入铁粉(14.6克，260毫摩)以及稀盐酸(2.3克，存在于10毫升甲醇中)。将所述混合液搅拌4小时，并且随后在真空条件下除去所述溶剂。将所述残余物利用快速柱层析法进行纯化，在硅胶柱上利用10％的甲醇/二氯甲烷进行洗脱，从而获得0205(6.0克，50.3％)。LC-MS：478[M+1]+.1H NMR(氘代氯仿)：δ1.55(s，9H)，2.52(br，4H)，2.91(br，4H)，3.39(s，2H)，3.91(s，2H)，6.95(m，1H)，7.24(m，1H)，7.33(m，4H)，7.38(m，4H)，7.52(m，1H)。
步骤7f：4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-3-(5-甲氧基-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸叔丁基酯(化合物0206-7)
在0℃下，向0205(1克，2毫摩)以及二异丙基乙胺(DIEA)(516毫克，4毫摩)的二氯甲烷(20毫升)溶液所组成的混合液中加入5-氯-5-氧代戊酸甲酯(343毫克，2毫摩)。随后将所述混合液回暖至室温并且搅拌1小时。在真空条件下除去所述溶剂，并且将所述残余物投入到柱层析法的硅胶柱中，利用25％的乙酸乙酯/石油醚进行洗脱，从而获得0206-7(1.03克，81.1％)。LC-MS：606[M+1]+.1H NMR(氘代氯仿)：δ1.57(s，9H)，2.04(m，2H)，2.45(m，4H)，2.54(br，4H)，2.84(t，J＝4.5Hz，4H)，3.46(S，2H)，3.66(s，3H)，7.11(m，1H)，7.23(m，1H)，7.38(m，6H)，7.57(m，1H)，7.71(m，1H)，8.23(s，1H)，8.87(s，1H)。
步骤7g：4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-3-(5-甲氧基-5-氧代戊酰胺基)苯甲酸(化合物0207-7)
向0206-7(900毫克，1.5毫摩)的二氯甲烷(10毫升)溶液中加入三氟乙酸(1毫升)。将得到的混合液在室温下搅拌过夜。在真空条件下除去所述溶剂，从而获得0207-7(760毫克，93.2％)。所述化合物无需进行进一步的纯化即可在下一步骤的反应中进行使用。LC-MS：550[M+1]+。
步骤7h：(R)-4-(二甲基氨基)-4-氧代-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基甲酸苯甲基酯(化合物0208)
向二甲胺(Me2NH)(45克，1摩)的二氯甲烷(500毫升)溶液中加入化合物0101(24克，0.1摩)。将所述混合液搅拌过夜。通过过滤收集所述固体。向其中加入甲苯(500毫升)以溶解所述固体，在此之后加入二苯基硫(32.7克，0.15摩)以及三丁基磷(40克，0.2摩)。将所述混合液加热至80℃并且搅拌18小时。在真空条件下除去所述溶剂。将所述残余物投入到快速柱层析法的硅胶柱中，利用50％的乙酸乙酯/石油醚进行洗脱，从而获得0208(13.4克，35.3％)。LC-MS：373[M+1]+.1H NMR(氘代氯仿)：δ2.46(m，1H)，2.82(s，3H)，2.84(s，3H)，2.88(m，1H)，3.20(m，1H)，3.33(m，1H)，4.13(m，1H)，5.07(s，2H)，6.30(d，J＝9.0Hz，1H)，7.15(m，1H)，7.32(m，9H)。
步骤7i：(R)-3-氨基-N，N-二甲基-4-(苯基硫基)丁酰胺(化合物0209)
在室温下，向0208(664毫克，1.8毫摩)的12毫升过氧乙酸溶液中加入氢溴酸(432毫克，40％的水溶液)。将所述混合液加热至80℃并且搅拌2小时。利用氢氧化钾将所述混合液的pH调整至大于12，利用乙酸乙酯进行提取。将所述提取物用水进行洗涤并且干燥。在真空条件下除去所述溶剂，从而获得0209(305毫克，71.8％)。所述产物无需进行进一步的纯化即可在下一步骤的反应中进行使用。
步骤7j：(R)-N，N-二甲基-3-(2-硝基-4-磺酰基苯基氨基)-4-(苯基硫基)丁酰胺(化合物0210)
将0209(424毫克，1.8毫摩)、4-氟-3-硝基-苯磺酰胺(396毫克，1.8毫摩)、以及N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(232毫克，1.8毫摩)的二甲基甲酰胺(10毫升)溶液搅拌4小时。将所述混合液倒入水中并且利用乙酸乙酯(50毫升)进行提取。将所述提取物利用水进行洗涤，干燥(硫酸钠)，浓缩。将所述残余物投入到快速柱层析法的硅胶柱中，利用5％的甲醇/二氯甲烷进行洗脱，从而获得0210(680毫克，87.2％)。LC-MS：439[M+1]+.1HNMR(二甲基亚砜-d6)：δ2.77(s，3H)，2.89(s，3H)，3.00(m，1H)，3.40(d，J＝6.5Hz，2H)，4.40(b，1H)，7.06(d，J＝10.0Hz，1H)，7.19(m，1H)，7.25(m，2H)，7.32(m，4H)，7.72(m，1H)，8.38(d，J＝2.3Hz，1H)，8.75(d，J＝10.0Hz，1H)。
步骤7k：(R)-4-(4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基苯磺酰胺(化合物0211)
将化合物0210(6.7克，15毫摩)以及1M的氢化硼的四氢呋喃(30毫升)溶液所组成的混合液搅拌16小时。向得到的混合液中加入甲醇(8毫升)以及浓盐酸(3毫升)并且将所述混合液在80℃下搅拌3小时。将所述混合液冷却至室温，利用4M的碳酸钠将pH调整至10。向所述混合液中加入乙酸乙酯(300毫升)。将分离得到的有机层利用水(70毫升)进行洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤并且浓缩。将所述残余物投入到快速柱层析法的硅胶柱中，利用20％的甲醇/二氯甲烷进行洗脱，从而获得0211(3.0克，46.3％)。LC-MS：425[M+1]+.1H NMR(氘代氯仿)：δ1.86(m，1H)，2.04(m，1H)，2.21(s，6H)，2.30(m，1H)，2.50(m，1H)，3.13(d，J＝5.7Hz，2H)，4.00(m，1H)，5.22(br，2H)，6.74(d，J＝9.3Hz，1H)，7.23(m，3H)，7.34(m，2H)，7.72(d，J＝9.3Hz，1H)，8.63(s，1H)，8.97(d，J＝8.1Hz，1H)。
步骤7l：(R)-5-(2-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-5-(4-(4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基苯基磺酰基氨基甲酰基)苯基氨基)-5-氧代戊酸甲酯(化合物0212-7)
将0207-7(549毫克，1毫摩)、0211(297毫克，0.7毫摩)、碳二亚胺(EDAC)(390毫克，2毫摩)、以及4-二甲氨基吡啶(DMAP)(244毫克，2毫摩)的二氯甲烷(20毫升)溶液所组成的混合液在25℃下搅拌过夜。将所述混合液利用饱和的氯化铵(100毫升)进行洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤，并且浓缩。将所述残余物投入到快速柱层析法的硅胶柱中，利用15％的甲醇/二氯甲烷进行洗脱，从而获得0212-7(324毫克，48.4％)。LC-MS：956[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6+重水)：δ1.79(m，2H)，2.07(m，2H)，2.31(m，4H)，2.48(m，4H)，2.67(s，6H)，2.74(m，4H)，3.03(m，2H)，3.31(m，2H)，3.40(s，2H)，3.52(s，3H)，4.05(m，1H)，6.90(m，1H)，7.25(m，5H)，7.35(m，2H)，7.50(m，5H)，7.59(m，1H)，7.79(m，1H)，8.10(d，J＝9.0Hz，1H)，8.19(s，1H)，8.42(d，J＝1.8Hz，1H)，8.73(br，1H)。
步骤7m：(R)-N1-(2-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-5-(4-(4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基苯基磺酰基氨基甲酰基)苯基)-N5-羟基戊二酰胺(化合物7)
向饱和的羟胺的甲醇溶液(0.56毫升，1.76摩/升)中加入化合物0212-7(100毫克，0.1毫摩)。将所述混合液在超声波下反应5分钟。随后利用稀释的过氧乙酸将所述混合液调节至中性。在真空条件下除去所述溶剂。将所述残余物利用制备型液相色谱法进行纯化，从而获得黄色固体形式的7(20毫克，20.9％)。熔点：146℃.1H NMR(二甲基亚砜-d6+重水)：δ1.76(m，2H)，2.00(br，4H)，2.26(m，2H)，2.36(m，4H)，2.64(m，10H)，3.01(m，2H)，3.15(m，1H)，3.29(m，1H)，3.41(m，2H)，4.05(m，1H)，6.91(m，1H)，7.04(m，6H)，7.31(m，8H)，7.55(m，1H)，7.72(m，1H)，8.04(s，1H)，8.31(s，1H)。
实施例8：(R)-N 1 -(2-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)- 哌嗪基-1-基)-5-(4-(4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2- 氨基)-3-硝基苯基磺酰基氨基甲酰基)苯基)-N 6 -羟基己二酰二 胺(化合物8)的制备方法
步骤8a：4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-3-(6-乙氧基-6-氧代己酰胺基)苯甲酸叔丁基酯(化合物0216-8)
所述标题化合物0216-8(500毫克，75.4％)是由化合物0205(500毫克，1毫摩)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(250毫克，2毫摩)、以及6-氯-6-氧代己酸乙酯(192毫克，1毫摩)通过与化合物206-7的制备方法(实施例7)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：634[M+1]+.1H NMR(氘代氯仿)：δ1.25(t，J＝7.4Hz，3H)，1.57(s，9H)，1.69(m，4H)，2.34(m，4H)，2.55(br，4H)，2.84(br，4H)，3.47(s，2H)，4.12(q，J＝7.4Hz，2H)，7.14(q，J＝2.1Hz，1H)，7.26(m，2H)，7.40(m，6H)，7.52(m，1H)，7.31(dd，J＝2.1，8.1Hz，1H)，8.19(br，1H)。
步骤8b：4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-3-(6-乙氧基-6-氧代己酰胺基)苯甲酸(化合物0207-8)
向0206-8(500毫克，0.79毫摩)的二氯甲烷(10毫升)溶液中加入三氟乙酸(1毫升)。将所述溶液在室温下搅拌过夜。在真空条件下除去所述溶剂，从而获得0207-8(380毫克，83.2％)。所述产物无需进行进一步的纯化即可在下一步骤的反应中直接使用。LC-MS：578[M+1]+.1H NMR(氘代氯仿)：δ1.22(t，J＝7.2Hz，3H)，1.62(br，4H)，2.30(br，4H)，2.93(br，4H)，3.19(s，2H)，3.54(s，2H)，4.03(q，J＝7.2Hz，2H)，4.47(s，2H)，6.98(m，1H)，7.24(m，3H)，7.30(m，1H)，7.45(m，4H)，7.57(m，1H)，7.74(m，1H)，8.20(s，1H)，8.58(s，1H)。
步骤8c：(R)-6-(2-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-5-(4-(4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基苯基磺酰基氨基甲酰基)苯基氨基)-6-氧代己酸乙酯(化合物0212-8)
将0207-8(480毫克，0.8毫摩)、0211(293毫克，0.7毫摩)、碳二亚胺(EDAC)(191毫克，1毫摩)、以及4-二甲氨基吡啶(DMAP)(122毫克，1毫摩)的二氯甲烷(20毫升)溶液所组成的混合液在25℃下搅拌过夜。将所述混合液利用饱和的氯化铵(100毫升)进行洗涤，并且进行干燥(硫酸镁)，过滤，并且浓缩。将所述残余物投入到快速柱层析法的硅胶柱中，利用15％的甲醇/二氯甲烷进行洗脱，从而获得0212-8(420毫克，60.0％)。1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.13(t，J＝7.4Hz，3H)，1.52(br，4H)，2.10(m，2H)，2.30(m，4H)，2.55(m，4H)，2.72(s，6H)，2.84(m，4H)，3.09(m，2H)，3.28(m，2H)，3.42(m，2H)，3.97(q，J＝7.4Hz，2H)，4.12(s，1H)，6.96(m，1H)，7.00(m，1H)，7.15(m，3H)，7.18(m，1H)，7.26(m，3H)，7.30(m，2H)，7.39(m，1H)，7.48(m，4H)，7.60(m，1H)，7.80(m，1H)，8.20(m，1H)，8.48(m，1H)，8.80(s，1H)，9.5(br，1H)。
步骤8d：(R)-N1-(2-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-5-(4-(4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基苯基磺酰基氨基甲酰基)苯基)-N6-羟基己二酰二胺(化合物8)
向饱和的羟胺的甲醇溶液(0.56毫升，1.76摩/升)中加入化合物0212-8(100毫克，0.1毫摩)。将所述混合液在超声波下反应5分钟。随后利用醋酸将所述混合液调节至中性。在真空条件下除去所述溶剂。将所述残余物利用制备型高效液相色谱法(HPLC)进行纯化，从而获得黄色固体形式的化合物8(20毫克，20.6％)。熔点：150℃.LC-MS：971[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6+重水)：δ1.50(br，4H)，1.95(m，2H)，2.05(m，2H)，2.29(m，2H)，2.49(br，4H)，2.66(s，6H)，2.72(br，4H)，3.04(m，2H)，3.30(m，2H)，3.40(m，2H)，4.05(m，1H)，6.86(d，J＝9.6Hz，1H)，6.94(d，J＝8.1Hz，1H)，7.18(m，6H)，7.31(m，2H)，7.47(m，5H)，7.55(d，J＝8.1Hz，1H)，7.78(d，J＝9.0Hz，1H)，8.17(br，1H)，8.39(s，1H)。
实施例9：(R)-N 1 -(2-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌 嗪基-1-基)-5-(4-(4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2- 氨基)-3-硝基苯基磺酰基氨基甲酰基)苯基)-N 8 -羟基辛二酰胺 (化合物9)的制备方法
步骤9a：4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-3-(8-甲氧基-8-氧代辛酰胺基)苯甲酸叔丁基酯(化合物0206-9)
将化合物0205(500毫克，1毫摩)以及N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(193毫克，1.5毫摩)的20毫升二氯甲烷溶液所组成的混合液冷却至0℃。向所述混合液中加入8-氯-8-氧代辛酸甲酯(216毫克，1毫摩)。将所述混合液回暖至室温并且搅拌1小时。在真空条件下除去所述溶剂，并且将得到的残余物投入到柱层析法的硅胶柱中，利用25％的乙酸乙酯/石油醚进行洗脱，从而获得0206-9)630毫克，92.7％)。LC-MS：648[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.39(m，2H)，1.53(s，9H)，1.64(m，4H)，1.75(m，2H)，2.30(m，2H)，2.38(m，2H)，2.50(b，4H)，2.84(t，J＝5.7Hz，4H)，3.46(s，2H)，3.66(s，3H)，7.14(m，1H)，7.26(m，1H)，7.39(m，5H)，7.51(m，1H)，7.73(m，1H)，8.19(s，1H)，8.88(m，1H)。
步骤9b：4-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-3-(8-甲氧基-8-氧代辛酰胺基)苯甲酸(化合物0207-9)
向化合物0206-9(720毫克，1.1毫摩)的10毫升二氯甲烷溶液中加入1毫升三氟乙酸。将所述溶液在室温下搅拌过夜。在真空条件下除去所述溶剂，从而获得产物0207-9(550毫克，83.6％)，所述产物无需进行进一步的纯化即可在下一步骤的反应中直接使用。LC-MS：592[M+1]+。
步骤9c：(R)-8-(2-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-5-(4-(4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基苯基磺酰基氨基甲酰基)苯基氨基)-8-氧代辛酸甲酯(化合物0212-9)
将化合物0207-9(540毫克，0.9毫摩)、0211(387毫克，0.9毫摩)、碳二亚胺(EDAC)(382毫克，2毫摩)、以及4-二甲氨基吡啶(DMAP)(244毫克，2毫摩)的二氯甲烷(20毫升)溶液所组成的混合液在25℃下搅拌过夜。将所述混合液利用饱和的氯化铵(100毫升)进行洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤，并且浓缩。将所述残余物投入到快速柱层析法的硅胶柱中，利用15％的甲醇/二氯甲烷进行洗脱，从而获得0212-9(423毫克，46.7％)。LC-MS：998[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.26(m，4H)，1.50(m，4H)，2.07(m，2H)，2.22(m，4H)，2.46(m，4H)，2.67(s，6H)，2.76(b，4H)，3.04(m，2H)，3.40(m，2H)，3.54(s，3H)，4.05(m，1H)，6.89(d，J＝10.0Hz，1H)，6.98(d，J＝10.0Hz，1H)，7.18(m，1H)，7.25(m，3H)，7.29(m，2H)，7.37(m，2H)，7.47(m，5H)，7.58(m，1H)，7.81(m，1H)，8.12(d，J＝10.0Hz，1H)，8.22(s，1H)，8.44(m，1H)，8.67(s，1H)。
步骤9d：(R)-N1-(2-(4-((4’-氯二苯基-2-基)甲基)哌嗪基-1-基)-5-(4-(4-(二甲基氨基)-1-(苯基硫基)丁基-2-氨基)-3-硝基苯基磺酰基氨基甲酰基)苯基)-N8-羟基辛二酰胺(化合物9)
向饱和的羟胺的甲醇溶液(1.7毫升，1.76摩/升)中加入化合物0212-9(300毫克，0.3毫摩)。将所述混合液在超声波下反应5分钟。随后利用醋酸将所述混合液调节至中性。在真空条件下除去所述溶剂。将所述残余物利用制备型高效液相色谱法(HPLC)进行纯化，从而获得化合物9(17毫克，5.7％)。1H NMR(氘代甲醇)：δ1.32(m，6H)，1.59(m，4H)，2.06(m，2H)，2.19(m，2H)，2.35(m，2H)，2.88(s，6H)，2.94(b，4H)，3.26(m，2H)，3.31(m，6H)，4.04(s，1H)，6.80(m，1H)，7.07(m，3H)，7.21(m，2H)，7.32(m，1H)，7.39(m，2H)，7.45(m，5H)，7.68(m，2H)，7.80(m，1H)，8.31(s，1H)，8.58(m，1H)。
生物学检测：
如前文中所指明的，本发明中定义的所述衍生物具有抗增殖的活性。这些特性可以通过例如下文中列出的一种或者一种以上方法进行评价：
(a)B细胞白血病-2(Bcl-2)以及B细胞白血病-xL(Bcl-xL) 的竞争性结合(荧光偏振)检测。
背景：
B细胞白血病-2(Bcl-2)以及B细胞白血病-xL(Bcl-xL)蛋白是抗凋亡蛋白质，它们的生物学功能可以被促凋亡蛋白质例如Bak，Bad以及Bax通过蛋白间的相互作用被抑制。所述的抗凋亡蛋白质与促凋亡蛋白质间的相互作用主要是由结合于Bcl-2以及Bcl-xL的疏水凹槽上的Bak、Bad以及Bax的Bcl-2同源结构域(BH)3介导的。BH3(Bcl-2同源结构域3)肽单独诱导细胞凋亡的结论的被证实，使得设计或者识别出一种模拟所述BH3肽的功能的化学化合物的可能性增加，其中所述模拟BH3肽功能的化学化合物通过阻断B细胞白血病-2或者B细胞白血病-xL与其下游的结合伙伴之间的相互作用来达到目的。这些化合物被预期能够以高度的亲和性与B细胞白血病-xL或者B细胞白血病-2蛋白的疏水凹槽发生结合。一种被标记的BH3(Bcl-2同源结构域3)可以被用来进行竞争性结合并且用以监控所述化合物与B细胞白血病-2以及B细胞白血病-xL蛋白间的相互作用。
推理以及方法：
具有26-mer荧光素标记的BH3肽(NLWAAQRYGRELRRMSDKFVD)购买自CalBiochem(197216)。B细胞白血病-xL或者B细胞白血病-2与肽之间的相互作用构成了所述荧光偏振检测的基础。一个游离的并且快速翻转(fast-tumbling)的荧光素标记的BH3肽发射出的随机光与激发光的偏振面的平面有关，形成了一个较低的偏振度(mP)的值。当所述肽与B细胞白血病-xL或者B细胞白血病-2发生结合时，所述的复合翻转减慢并且发射出的光发生偏振，形成了一个较高的偏振度(mP)的值。这种结合检测是在96孔培养板中进行的，并且每个检测分别含有1纳摩以及100纳摩被标记的肽以及纯化的B细胞白血病-xL蛋白(R&D System，894-BX-050)或者B细胞白血病-2蛋白(R&D System，827-BC-050)。所述检测缓冲液中含有120毫摩磷酸钠(pH7.55)，0.01％的牛血清白蛋白(BSA)以及0.1％的叠氮钠。将化合物在二甲基亚砜中进行稀释并且以20微摩至2纳摩的浓度范围加入到所述最终的检测中。在室温下培养3小时之后，利用Bio Tek Synergy II以及背景减除确定偏振度(mP)的值。
(b)测定受试化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)酶活 性的能力的体外检测。
利用组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)荧光计检测试剂盒(AK-500，Biomol，Plymouth Meeting，PA)对组蛋白脱乙酰基酶进行筛选。将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以形成20毫摩的工作储备浓缩液。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。每项检测都是通过如下步骤建立的：解冻所有的试剂盒成分并且将其保存于冰上直至使用。在检测缓冲液(50毫摩Tris/Cl，pH8.0，137毫摩氯化钠，2.7毫摩氯化钾，1毫摩氯化镁)中以1∶29的比例稀释HeLa核提取物。在检测缓冲液中制备曲古抑菌素A(TSA，阳性对照)以及受试化合物的稀释液(五倍于最终浓度)。在检测缓冲液中将Fluor de LysTM底物稀释至100微摩(50倍＝2倍的最终浓度)。在冷的检测缓冲液中将Fluor de LysTM显影剂浓缩物稀释20倍(例如，50微升的显影剂浓缩物加入950微升的检测缓冲液)。其次，在一倍的显影剂(Developer)中将0.2毫摩的曲古抑菌素A稀释100倍(例如，1毫升中的10微升；在一倍显影剂中的最终曲古抑菌素A的浓度＝2微摩；加入组蛋白脱乙酰基酶/底物反应液后的最终浓度＝1微摩)。加入检测缓冲液，在所述微量滴定板的适当孔中稀释曲古抑菌素A或者受试抑制剂。在除去阴性对照之外的其他所有孔中加入稀释的HeLa提取物或者其他组蛋白脱乙酰基酶样本。允许被稀释的Fluor deLysTM底物以及所述微量滴定板中的所述样本平衡至检测温度(例如，25℃或者37℃)。通过向每个孔中加入稀释的底物(25微升)并且充分混合来激发组蛋白脱乙酰基酶反应。允许组蛋白脱乙酰基酶反应进行1小时，之后通过加入Fluor de LysTM显影剂(50微升)终止反应。在室温下(25℃)对培养板培养10-15分钟。通过能够在350-380纳米范围内的波长下被激发的微量滴定板读数荧光计对样本进行读数，并且检测440-460纳米范围内的发射光。
下述表10-B列出了本发明代表性的化合物以及它们在组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)检测以及B细胞白血病-2(Bcl-2)检测中的活性。在这些检测中，使用到下述分级：对于IC50而言，I≥10微摩，10微摩＞II＞1微摩，1微摩＞III＞0.1微摩，以及IV≤0.1微摩。
表10-B
  化合物编号   HDAC   BCl-2
  1   II   IV
  2   III
  3   III
  4   III
  5   III
Figure G2007800418082D05641
第十一部分：
表11-A
Figure G2007800418082D05642
Figure G2007800418082D05651
Figure G2007800418082D05661
Figure G2007800418082D05671
方案1
Figure G2007800418082D05672
方案2
实施例1：N-羟基-6-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑 啉基-2-氨基)己酰胺(化合物4)的制备方法
步骤1a.2-氯-N-(4-甲氧基苯基)喹唑啉基-4-胺(化合物102)
将化合物2，4-二氯喹唑啉101(9.9克，50毫摩)以及化合物4-甲氧基苯胺(6.15克，50毫摩)的甲醇混合液在室温下搅拌2小时。将所述反应混合液蒸发并且将所述残余物利用柱层析法通过乙酸乙酯/石油醚(5/1)作为洗脱剂进行纯化，从而获得化合物102(8.1克，55％)：LC-MS：286[M+1]+。
步骤1b.2-氯-N-(4-甲氧基苯基)-N-甲基喹唑啉基-4-胺(化合物103)
向化合物102(8.1克，28.4毫摩)的二甲基甲酰胺(150毫升)溶液中加入氢化钠(1.25克，31.3毫摩)。将所述反应混合液搅拌几分钟并且随后向其中加入碘甲烷(6.05克，42.6毫摩)。在加入之后，将所述混合液在室温下搅拌18小时。利用乙酸乙酯对所述反应混合液进行稀释并且利用水以及盐水进行洗涤，干燥并且浓缩，从而获得所述粗产物，利用柱层析法通过乙酸乙酯/石油醚(5/1)作为洗脱剂对所述粗产物进行纯化，从而获得黄色固体形式的化合物103(7.2克，51％产率)：LC-MS：300[M+1]+。
步骤1c.6-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氨基)己酸甲酯(化合物104-4)
向盐酸6-氨基己酸甲酯(0.806克，4.44毫摩)的甲醇(10毫升)溶液中加入氢氧化钾(248.6毫克，4.44毫摩)，并且将所述混合液在室温下搅拌10分钟。随后蒸发除去所述溶剂并且向其中加入己二酸二甲酯(DMA)(10毫升)以及化合物103(0.19克，0.635毫摩)。将所述混合液在120℃下搅拌3小时。在减压条件下蒸发除去己二酸二甲酯(DMA)并且向其中加入50毫升乙酸乙酯。将所述混合液用水进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，并且进行浓缩，从而获得白色固体形式的化合物104-4(170毫克，65％)：LC-MS：409[M+1]+。
步骤1d.N-羟基-6-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氨基)己酰胺(化合物4)
制备羟胺的甲醇溶液：将盐酸羟胺(4.67克，67毫摩)溶解于甲醇(24毫升)中，从而形成溶液A。将氢氧化钾(5.61克，100毫摩)溶解于甲醇(14毫升)中，从而形成溶液B。将所述溶液A冷却至0℃，并且将所述溶液B逐滴加入到溶液A中。将所述混合液在0℃下搅拌30分钟。过滤除去所述沉淀，而所述滤液则形成羟胺的甲醇溶液。
向装有化合物104-4(340毫克，0.831毫摩)的长颈瓶中加入上述羟胺的甲醇溶液(5.0毫升)。将所述混合液在室温下搅拌1小时并且随后通过加入醋酸将其pH调整至7。将所述混合液浓缩，从而获得残余物，将所述残余物过滤并且用水进行洗涤，从而获得白色固体形式的所述产物4(150毫克，44％)：LC-MS：410[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ10.35(s，1H)，7.31(m，2H)，7.15(d，J＝9.0Hz，2H)，6.96(d，J＝9.0Hz，2H)，6.76(m，2H)，6.61(m，1H)，3.77(s，3H)，3.42(s，3H)，1.97(t，J＝7.2Hz，2H)，1.58(m，4H)，1.35(m，2H)；1H NMR(DMSO-d6+D2O)：δ7.30(m，2H)，7.22(d，J＝9.0Hz，2H)，6.93(d，J＝9.0Hz，2H)，6.80(m，1H)，6.77(m，1H)，3.73(s，3H)，3.38(s，3H)，3.31(t，J＝7.2Hz，2H)，1.94(t，J＝7.2Hz，2H)，1.52(m，4H)，1.32(m，2H)。
实施例2：N-羟基-7-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基) 喹唑啉基-2-氨基)庚酰胺(化合物5)的制备方法
步骤2a.7-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氨基)庚酸甲酯(化合物104-5)
所述标题化合物104-5(400毫克，89％)是由化合物103(306毫克，1.022毫摩)、盐酸7-氨基庚酸乙酯(1.5克，7.156毫摩)以及氢氧化钾(400毫克，7.156毫摩)通过与化合物104-4的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：437[M+1]+。
步骤2b.N-羟基-7-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氨基)庚酰胺(化合物5)
所述标题化合物5(90毫克，23％)是由化合物104-5(400毫克，0.197毫摩)以及新鲜制备的羟胺甲醇溶液(5毫升)通过与化合物4的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：424[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ10.37(s，1H)，8.72(s 1H)，7.32(m，2H)，7.15(d，J＝8.7Hz，2H)，6.97(d，J＝8.7Hz，2H)，6.81(m，2H)，6.65(m，1H)，3.78(s，3H)，3.43(s，4H)，1.97(t，J＝7.2Hz，2H)，1.55(m，4H)，1.33(m，4H)；1H NMR(DMSO-d6+D20)：δ7.31(m，2H)，7.14(d，J＝8.4Hz，2H)，6.96(d，J＝8.4Hz，2H)，6.81(m，1H)，6.63(m，1H)，3.77(s，3H)，3.41(s，3H)，3.34(m，2H)，1.96(t，J＝7.2Hz 2H)，1.56(m，4H)，1.33(m，4H)。
实施例3：N-羟基-8-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基) 喹唑啉基-2-氨基)辛酰胺(化合物6)的制备方法
步骤3a.8-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氨基)辛酸甲酯(化合物104-6)
所述标题化合物104-6(114毫克，26％)是由化合物103(0.299克，1毫摩)、盐酸8-氨基辛酸甲酯(6.51克，31.05毫摩)以及氢氧化钾(1.739克，31.05毫摩)通过与化合物104-4的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：437[M+1]+。
步骤3b.N-羟基-8-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氨基)辛酰胺(化合物6)
所述标题化合物6(21毫克，18％)是由化合物104-6(114毫克，0.261毫摩)以及新鲜制备的羟胺甲醇溶液(2毫升)通过与化合物4的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：438[M+1]+.1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ10.32(s，1H)，8.66(s，1H)，7.05(m，2H)，7.22(m，2H)，7.00(m，2H)，6.76(m，2H)，3.78(s，3H)，3.47(s，3H)，3.38(m，2H)，1.94(t，J＝7.5Hz，2H)，1.62(m，2H)，1.49(m，2H)，1.32(m，6H)。
实施例4：N-羟基-5-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基) 喹唑啉基-2-氧基)戊酰胺(化合物9)的制备方法
步骤4a.5-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氧基)戊-1-醇(化合物201-9)
在70℃下，在搅拌状态下向戊-1，5-二醇(10.4克，0.1摩)中加入氢化钠(0.6克，0.015摩)。向其中加入化合物103并且将所述混合液在70℃下搅拌3小时。反应过后，利用乙酸乙酯对所述混合液进行稀释，并且利用水以及盐水对其进行洗涤，干燥并且浓缩，从而获得化合物201-9(1.768克，48％)：LC-MS：368[M+1]+。
步骤4b.5-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氧基)戊酸(化合物202-9)
在0℃下，向化合物201-9(1.768克，48毫摩)的丙酮(150毫升)溶液中逐滴加入琼斯试剂(Jone’s reagent)(10毫升)。在加入之后，将所述混合液在室温下搅拌1小时。向其中加入异丙醇(10毫升)并且搅拌。通过过滤除去得到的固体并且将所述滤液进行蒸发，从而获得残余物，利用乙酸乙酯对所述残余物进行提取。将所述乙酸乙酯提取物用水以及盐水进行洗涤，干燥并且浓缩，从而获得化合物202-9(1.44克，79％)。LC-MS：382[M+1]+。
步骤4c.5-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氧基)戊酸甲酯(化合物203-9)
在0℃下，向化合物202-9(1.437克，3.8毫摩)的甲醇(25毫升)溶液中逐滴加入亚硫酰氯(2毫升)。在加入之后，将所述混合液在室温下搅拌16小时。将所述反应混合液进行蒸发，从而获得化合物203-9(1.4克，94％)：LC-MS：396[M+1]+。
步骤4d.N-羟基-5-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氧基)戊酰胺(化合物9)
所述标题化合物9(98毫克，50％)是由化合物203-9(197.5毫克，0.5毫摩)以及新鲜制备的羟胺甲醇溶液(5毫升)通过与化合物4的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：397.1[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ10.39(s，1H)，8.71(s，1H)，7.51(m，2H)，7.23(d，J＝9.0Hz，2H)，7.00(d，J＝9.0Hz，2H)，6.89(m，2H)，4.35(t，J＝6.0Hz，2H)，3.79(s，3H)，3.46(s，3H)，2.05(t，J＝6.9Hz，2H)，1.72(m，4H)。
实施例5：N-羟基-6-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基) 喹唑啉基-2-氧基)己酰胺(化合物10)的制备方法
步骤5a.6-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氧基)己-1-醇(化合物201-10)
所述标题化合物201-10(2.204克，51％)是由化合物103(2.99克，0.01摩)、氢化钠(0.6克，0.015摩)以及己-1，6-二醇(11.8克，0.1摩)通过与化合物201-9的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：382[M+1]+。
步骤5b.6-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氧基)己酸(化合物202-10)
所述标题化合物202-10(2.204克，96％)是由化合物201-10(2.204克，5.8毫摩)以及琼斯试剂(10毫升)通过与化合物202-9的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：396[M+1]+。
步骤5c.6-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氧基)己酸甲酯(化合物203-10)
制备出的所述标题化合物203-10(1.995克，88％)是由化合物202-10(2.2克，5.54毫摩)、亚硫酰氯(3毫升)以及甲醇(35毫升)通过与化合物203-9的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：410[M+1]+。
步骤5d.N-羟基-6-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氧基)己酰胺(化合物10)
所述标题化合物10(35毫克，17％)是由化合物203-10(204.5毫克，0.5毫摩)以及新鲜制备的羟胺甲醇溶液(5毫升)通过与化合物4的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：411[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ10.37(s，1H)，8.69(s，1H)，7.52(m，2H)，7.23(d，J＝9.0Hz，2H)，7.00(d，J＝9.0Hz，2H)，6.89(m，2H)，4.34(t，J＝6.3Hz，2H)，3.79(s，3H)，3.46(s，3H)，2.00(m，2H)，1.76(m，2H)，1.59(m，2H)，1.43(m，2H)。
实施例6：N-羟基-7-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基) 喹唑啉基-2-氧基)庚酰胺(化合物11)的制备方法
步骤6a.7-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氧基)庚-1-醇(化合物201-11)
所述标题化合物201-11(652毫克，17％)是由化合物103(2.873克，9.6毫摩)、氢化钠(0.585克，14.6毫摩)以及庚-1，7-二醇(7.622克，57.7毫摩)通过与化合物201-9的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：396[M+1]+。
步骤6b.7-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氧基)庚酸(化合物202-11)
所述标题化合物202-11(657毫克，97％)是由化合物201-11(652毫克，1.65毫摩)以及琼斯试剂(5毫升)通过与化合物202-9的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：410[M+1]+。
步骤6c.7-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氧基)庚酸甲酯(化合物203-11)
制备出的所述标题化合物203-11(600毫克，88％)是由化合物202-11(657毫克，1.6毫摩)以及亚硫酰氯(1毫升)通过与化合物203-9的制备方法(实施例4)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：424[M+1]+。
步骤6d.N-羟基-7-(4-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹唑啉基-2-氧基)庚酰胺(化合物11)
所述标题化合物11(200毫克，33％)是由化合物203-11(600毫克，1.42毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(10.0毫升)通过与化合物4的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：438[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ10.34(s，1H)，8.66(s，1H)，7.52(m，2H)，7.23(d，J＝9.0Hz，2H)，7.00(d，J＝9.0Hz，2H)，6.89(m，2H)，4.34(t，J＝6.0Hz，2H)，3.79(s，3H)，3.46(s，3H)，1.97(t，J＝7.2Hz，2H)，1.76(m，2H)，1.54(m，2H)，1.43(m，2H)，1.35(m，2H)。
生物学检测：
如前文中所指明的，本发明中定义的所述衍生物具有抗增殖的活性。这些特性可以通过例如下文中列出的一种或者一种以上方法进行评价：
(a)测定受试化合物抑制受体酪氨酸激酶的能力的体外检 测。
利用HTScanTM受体激酶检测试剂盒(Cell SignalingTechnologies，Danvers，MA)对化合物抑制受体激酶(血管内皮生长因子受体2以及血小板衍生生长因子受体-β)活性的能力进行检测。血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)酪氨酸激酶是通过杆状病毒表达系统制备得到的，其来自于一个含有人类血管内皮生长因子受体2cDNA激酶结构域(Asp805-Val1356)(GenBank accession No.AF035121)片段氨基末端融合有GST-HIS6-Thrombin切割位点的构建体。血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)酪氨酸激酶是通过杆状病毒表达系统制备得到的，其来自于一个含有人类血小板衍生生长因子受体-βcDNA(GenBank Accession No.NM_002609)片段(Arg561-Leu1106)氨基末端融合有GST-HIS6-Thrombin切割位点的构建体。所述蛋白是通过利用谷胱甘肽-琼脂糖的一步亲合色谱法进行纯化的。一种抗磷酸化酪氨酸单克隆抗体P-Tyr-100被用来检测生物素(酰)化的底物肽(血管内皮生长因子受体2，生物素-胃泌激素前体(Tyr87)；血小板衍生生长因子受体-β，生物素化-FLT3(Tyr589))的磷酸化作用。酶活性是在下述试剂中检测的：60毫摩羟乙基呱嗪乙硫磺酸(HEPES)，5毫摩氯化镁，5毫摩氯化锰，200微摩三磷酸腺苷(ATP)，1.25毫摩二硫苏糖醇(DTT)，3微摩正矾酸钠(Na3VO4)，1.5毫摩肽，以及50纳克表皮生长因子受体激酶。结合抗体的检测是利用DELFIA系统(PerkinElmer，Wellesley，MA)，所述系统由DELFIA
Figure G2007800418082D05761
铕标记的抗小鼠IgG(免疫球蛋白)(PerkinElmer，#AD0124)、DELFIA
Figure G2007800418082D05771
强化溶液(PerkinElmer，#1244-105)、以及DELFIA
Figure G2007800418082D05772
链亲合素涂层的96孔培养板(PerkinElmer，AAAND-0005)构成。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。
将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以得到20毫摩的工作储备浓缩液。每项检测都是通过如下步骤建立的：向1.25毫升、6毫摩的底物肽中加入100微升10毫摩的三磷酸腺苷(ATP)。利用蒸馏水将所述混合液稀释至2.5毫升，从而制备出二倍的(2X)三磷酸腺苷/底物混合液([三磷酸腺苷]＝400毫摩，[底物]＝3毫摩)。将酶从-80℃下迅速转移至冰上。使酶在冰上解冻。在4℃下进行短暂的微离心，从而将液体带入所述试管的底部。立即重新置于冰上。向2.5毫升四倍的(4X)HTScanTM酪氨酸激酶缓冲液(240毫摩pH7.5的羟乙基呱嗪乙硫磺酸，20毫摩氯化镁，20毫摩氯化锰，12毫摩偏矾酸钠)中加入10微升二硫苏糖醇(1.25毫摩)，从而获得二硫苏糖醇/激酶缓冲液。将1.25毫升的二硫苏糖醇/激酶缓冲液转移至酶试管中，从而获得四倍的(4X)反应混合液(在四倍的反应混合液中[酶]＝4纳克/微升)。在室温下以12.5微升/孔的量利用预先稀释的目标化合物(通常在10微摩左右)对12.5微升四倍的(4X)反应混合液培养5分钟。以25微升/孔的量向预先培养的反应混合液/化合物中加入25微升的二倍(2X)三磷酸腺苷/底物混合液。将反应板在室温下培养30分钟。以50微升/孔的量加入终止缓冲液(50毫摩乙二胺四乙酸，pH8)以终止所述反应。将25微升的每种反应液以及75微升/孔的蒸馏水转移至链亲合素涂层的96孔培养板中并且在室温下培养60分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温(磷酸缓冲液，0.05％的吐温-20)洗涤三次。在磷酸缓冲液/吐温(PBS/T)中，以1∶1000的比例利用1％的牛血清白蛋白(BSA)稀释初级抗体磷酸-酪氨酸单克隆抗体(P-Tyr-100)。以100微升/孔的量加入初级抗体。在室温下培养60分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温洗涤三次。在磷酸缓冲液/吐温(PBS/T)中，以1∶500的比例利用1％的牛血清白蛋白(BSA)稀释铕标记的抗小鼠免疫球蛋白(IgG)。以100微升/孔的量加入稀释的抗体。在室温下培养30分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温洗涤五次。以100微升/孔的量加入DELFIA强化溶液。在室温下培养5分钟。利用适当的时间分辨培养板读数器(Time-Resolved Plate Reader)检测615纳米处发射出的荧光。
(b)测定受试化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)酶活 性的能力的体外检测。
利用组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)荧光计检测试剂盒(AK-500，Biomol，Plymouth Meeting，PA)对组蛋白脱乙酰基酶进行筛选。将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以形成20毫摩的工作储备浓缩液。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。每项检测都是通过如下步骤建立的：解冻所有的试剂盒成分并且将其保存于冰上直至使用。在检测缓冲液(50毫摩Tris/Cl，pH8.0，137毫摩氯化钠，2.7毫摩氯化钾，1毫摩氯化镁)中以1∶29的比例稀释HeLa核提取物。在检测缓冲液中制备曲古抑菌素A(TSA，阳性对照)以及受试化合物的稀释液(五倍于最终浓度)。在检测缓冲液中将Fluor de LysTM底物稀释至100微摩(50倍＝2倍的最终浓度)。在冷的检测缓冲液中将Fluor de LysTM显影剂浓缩物稀释20倍(例如，50微升的显影剂浓缩物加入950微升的检测缓冲液)。其次，在一倍的显影剂(Developer)中将0.2毫摩的曲古抑菌素A稀释100倍(例如，1毫升中的10微升；在一倍显影剂中的最终曲古抑菌素A的浓度＝2微摩；加入组蛋白脱乙酰基酶/底物反应液后的最终浓度＝1微摩)。加入检测缓冲液，在所述微量滴定板的适当孔中稀释曲古抑菌素A或者受试抑制剂。在除去阴性对照之外的其他所有孔中加入稀释的HeLa提取物或者其他组蛋白脱乙酰基酶样本。允许被稀释的Fluor deLysTM底物以及所述微量滴定板中的所述样本平衡至检测温度(例如，25℃或者37℃)。通过向每个孔中加入稀释的底物(25微升)并且充分混合来激发组蛋白脱乙酰基酶反应。允许组蛋白脱乙酰基酶反应进行1小时，之后通过加入Fluor de LysTM显影剂(50微升)终止反应。在室温下(25℃)对培养板培养10-15分钟。通过能够在350-380纳米范围内的波长下被激发的微量滴定板读数荧光计对样本进行读数，并且检测440-460纳米范围内的发射光。
(c)通过荧光染料测定的抗肿瘤脉管系统活性。
下述试验证明了所述化合物破坏肿瘤脉管系统的能力。
依照Smith等人提出的方法(参见Brit J Cancer 57，247-253，1988年)，利用荧光染料Hoechst 33342测定CaNT肿瘤小鼠的肿瘤官能性脉管容积。将所述荧光染料以6.25毫克/毫升的剂量溶解于生理盐水中并且在进行了腹膜内药物治疗的6小时或者24小时之后，以10毫克/千克的剂量进行静脉内输注。一分钟过后，动物死亡并且切离所述肿瘤并进行冷冻；以三种不同的水平切割10微米的切片并且利用装配有落射荧光的奥林巴斯(Olympus)显微镜在紫外(UV)照明下进行观察。通过荧光轮廓对血管进行识别，并且利用point scoring系统对脉管容积进行量化，其中所述的point scoring系统是基于Chalkley的描述(参见J NatICancer Inst，4，47-53，1943年)。所有的评估都是基于以三种不同的水平切割的切片的100field的最小值进行计算而得到的。其结果是以与对照组相比的脉管容积的减小的百分数表示的。
Figure G2007800418082D05801
第十二部分：
表12-A
Figure G2007800418082D05802
Figure G2007800418082D05811
Figure G2007800418082D05821
方案1
Figure G2007800418082D05822
方案2
Figure G2007800418082D05831
实施例1：7-(4-(苯并呋喃基-5-氨基)-7-甲氧基喹唑啉基 -6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物2)的制备方法
步骤1a.2-溴-1-氟-4-硝基苯(化合物102)
向化合物101(8.75克，500毫摩)的硫磺酸(50毫升)溶液中加入68％的硝酸(4毫升)，所述加入的方式使得所述反应的温度保持在低于40℃。在加入之后，将所述混合液在20℃下搅拌1小时。利用300毫升的冰水对所述混合液进行稀释并且过滤。利用石油酯将所述收集到的固体进行重结晶，从而获得白色固体形式的所述标题化合物102(8.06克，73.3％)：1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ8.6(dd，1H)，8.3(m，1H)，7.7(t，1H)。
步骤1b.((2-氟-5-硝基苯基)乙炔基)三甲基硅烷(化合物103)
将化合物102(2.5克，11.4毫摩)、三苯基膦(0.114克，0.44毫摩)、氯化钯(II)(0.045克，0.26毫摩)以及三乙胺(28毫升)所组成的混合液进行搅拌，并且在氮气环境下加热至100℃保持16小时。将所述混合液冷却至室温并且过滤出所述沉淀。利用三乙胺对所述固体进行洗涤，并且将合并的滤液进行蒸发，从而获得深褐色的油，在减压条件下于120℃下对所述深褐色的油进行蒸馏，从而获得黄褐色固体形式的化合物103(1.708克，63％)：LCMS：238[M+1]+。
步骤1c.5-硝基苯并呋喃(化合物104)
将化合物103(7.30克，30.8毫摩)、醋酸钠(10.1克，123毫摩)以及N，N-二甲基甲酰胺(70毫升)所组成的混合液进行搅拌并且加热至100℃保持16小时。过滤所述沉淀并且利用N，N-二甲基甲酰胺对其进行洗涤。将所述合并的滤液蒸发从而获得残余物，利用短硅胶柱(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/10)对所述残余物进行纯化，从而获得褐色固体形式的所述标题化合物104(3.0克，60％)。
步骤1d.苯并呋喃基-5-胺(化合物105)
将化合物104(1.89克，11.63毫摩)、铁粉(6.5克，116毫摩)、36.5％的盐酸(1毫升)、乙醇(30毫升)以及水(6毫升)所组成的混合液进行搅拌并且加热至100℃保持3小时。将所述沉淀进行过滤并且利用乙醇进行洗涤。将所述合并的滤液进行蒸发，从而获得残余物，并将所述残余物溶解于二氯甲烷(50毫升)中。利用碳酸氢钠水溶液(20毫升x2)以及盐水(20毫升x1)对所述有机层进行洗涤并且通过硫酸镁进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得褐色固体形式的所述标题化合物105(0.8克，51％)：LC-MS：134[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ4.8(s，2H)，6.57(m，1H)，6.67(m，1H)，6.69(m，1H)，7.21(d，J＝9.3Hz，1H)，7.74(d，J＝2.4Hz，1H)。
步骤1e.6，7-二甲氧基喹唑啉基-4(3氢)-酮(化合物107)
将化合物106(2.1克，10毫摩)、甲酸铵(0.63克，10毫摩)以及甲酰胺(7毫升)组成的混合液进行搅拌并且加热至190-200℃保持2小时。将所述混合液冷却至室温并且分离得到的沉淀，用水进行洗涤并且干燥，从而获得褐色固体形式的所述标题化合物107(1.8克，84.7％)：LCMS：207[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)
Figure G2007800418082D05851
δ3.87(s，3H)，3.89(s，3H)，7.12(s，1H)，7.43(s，1H)，7.97(s，1H)，12.08(bs，1H)。
步骤1f.6-羟基-7-甲氧基喹唑啉基-4(3氢)-酮甲基磺酸酯(化合物108)
将化合物107(10.3克，50毫摩)分部分的加入到处于搅拌状态中的甲基磺酸(68毫升)中。随后向其中加入L-甲硫氨酸(8.6克，57.5毫摩)并且将所述混合液加热至150-160℃保持5小时。将所述混合液冷却至室温并且将其倒入冰水混合液(250毫升)中。通过加入氢氧化钠水溶液(40％)将所述混合液调节至中性。分离得到的沉淀，用水进行洗涤并且干燥，从而获得灰色固体形式的所述标题化合物108(10克，粗产物)：LCMS：193[M+1]+，1H NMR(二甲基亚砜-d6)
Figure G2007800418082D05852
δ2.99(s，3H)，3.88(s，3H)，7.08(s，1H)，7.36(s，1H)，7.89(s，1H)，9.83(bs，1H)，11.86(bs，1H)。
步骤1g.7-甲氧基-4-氧代-3，4-二氢喹唑啉基-6-基乙酸(化合物109)
将化合物108(10克，粗产物)、无水醋酸(100毫升)以及吡啶(8毫升)组成的混合液进行搅拌并且加热回流3小时。将所述混合液冷却至室温并且将其倒入冰水混合液(250毫升)中。分离得到的沉淀并且进行干燥，从而获得灰色固体形式的所述标题产物109(5.8克，两个步骤的总产率为50％)：LCMS：235[M+1]+；1H NMR(氘代氯仿).：2.27(s，3H)，3.89(s，3H)，7.28(s，1H)，7.72(s，1H)，8.08(d，J＝6.0Hz，1H)，12.20(bs，1H)。
步骤1h.4-氯-7-甲氧基喹唑啉基-6-基乙酸(化合物110)
将化合物109(2.0克，8.5毫摩)以及三氯氧磷(20毫升)组成的混合液进行搅拌并且加热回流3小时。当得到透明溶液时，在减压条件下除去过量的三氯氧磷。将得到的残余物溶解于二氯甲烷(50毫升)中并且利用碳酸氢钠水溶液(20毫升x2)以及盐水(20毫升x1)对得到的有机层进行洗涤，并且通过硫酸镁进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得黄色固体形式的所述标题产物110(1.4克，65％)：LCMS：253[M+1]+。
步骤1i.4-(苯并呋喃基-5-氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-醇(化合物111)
将化合物110(0.151克，0.6毫摩)以及105(0.20克，1.504毫摩)的异丙醇(2毫升)溶液组成的混合液进行搅拌并且加热回流过夜。将所述混合液冷却至室温并且进行过滤，从而获得白色固体形式的所述标题化合物111(0.169克，92％)：LCMS：308[M+1]+。
步骤1j.7-(4-(苯并呋喃基-5-氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)庚酸乙酯(化合物112-2)
将化合物111(0.169克，0.55毫摩)、7-溴庚酸乙酯(0.13克，0.55毫摩)以及碳酸钾(0.38克，2.75毫摩)的N，N-二甲基甲酰胺(5毫升)溶液所组成的混合液在60℃下搅拌3小时。过滤得到的沉淀并且将所述滤液倒入水中。过滤得到的沉淀，利用乙酸乙酯进行洗涤并且干燥，从而获得灰色固体形式的所述标题化合物112-2(0.207克，81％)。
步骤1k.7-(4-(苯并呋喃基-5-氨基)-7-甲氧基喹唑啉基-6-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物2)
在0℃下，向处于搅拌状态中的盐酸羟胺(4.67克，67毫摩)的甲醇(24毫升)溶液中加入氢氧化钾(5.61克，100毫摩)的甲醇(14毫升)溶液。在加入之后，将所述混合液在0℃下搅拌30分钟，并且将其在低温下进行放置。分离得到的沉淀，并且将所述溶液制备成游离的羟胺。
将上述新鲜制备的羟胺溶液(2.5毫升)放置于10毫升的长颈瓶中。向所述溶液中加入化合物112-2(207毫克，0.45毫摩)并且在25℃下搅拌0.5小时。利用醋酸将所述混合液调节至中性，并且分离得到的沉淀，用水进行洗涤，并且干燥，从而获得白色固体形式的所述标题化合物2(97毫克，48％)：熔点191～195℃，LCMS：451[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.33(m，2H)，1.43(m，2H)，1.51(m，2H)，1.82(m，2H)，1.94(m，2H)，3.90(s，3H)，4.15(m，2H)，7.03(m，1H)，7.22(s，1H，7.50(m，1H，7.70(d，J＝2.7Hz，1H，7.90(d，J＝2.1Hz，1H，8.03(s，1H)，8.06(d，J＝2.4Hz，1H)，8.65(s，1H)，8.71(s，1H)，10.33(s，1H)，10.84(s，1H)。
实施例2：7-(4-(苯并呋喃基-5-氨基)-6-甲氧基喹唑啉基 -7-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物6)的制备方法
步骤2a.4-(苯甲氧基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯(化合物202)
向化合物201(18.2克，0.1摩)以及碳酸钾(34.55克，0.25摩)的N，N-二甲基甲酰胺混合液中逐滴加入苯甲溴(14.5毫升，0.105摩)。随后将所述反应混合液加热至60℃并且搅拌2小时。将所述混合液冷却至室温并且进行过滤。浓缩滤液，并且将得到的残余物溶解于500毫升乙酸乙酯中。利用水以及盐水(100毫升)对所述有机层进行洗涤，通过硫酸镁进行干燥，过滤并且浓缩，从而获得白色固体形式的所述标题化合物202(26克，95％)：LCMS：273[M+1]+。
步骤2b.4-(苯甲氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酸甲酯(化合物203)
将硝酸(45毫升，0.963摩)以及过氧乙酸(45毫升)的混合液放置于冰浴中并且进行搅拌。向其中逐滴加入化合物202(10.3克，50毫摩)的200毫升过氧乙酸溶液。在加入之后，将所述反应混合液在-10℃下搅拌20分钟。将所述混合液倒入冰水混合液(250毫升)中并且通过加入氢氧化钠水溶液(40％)将其调节至中性。通过过滤分离得到的沉淀，用水进行洗涤并且干燥，从而获得灰色固体形式的所述标题化合物203(30克，98％)：LCMS：318[M+1]+。
步骤2c.2-氨基-4-(苯甲氧基)-5-甲氧基苯甲酸甲酯(化合物204)
将化合物203(10克，粗产物)、铁粉(54克，0.96摩)、乙醇(100毫升)以及水(20毫升)组成的混合液进行搅拌并且加热回流3小时。将所述混合液冷却至室温并且利用氢氧化钠水溶液(10％)将其调节至中性。将所述反应混合液过滤并且将滤液进行浓缩，从而获得残余物，利用二氯甲烷(200毫升x2)对所述残余物进行提取。将合并的有机层利用盐水进行洗涤并且通过硫酸镁进行干燥，过滤并且浓缩，从而获得灰色固体形式的所述标题化合物204(14.5克，85％)：LCMS：288[M+1]+。
步骤2d.7-(苯甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉基-4(3氢)-酮(化合物205)
将化合物204(7.5克，25毫摩)、甲酸铵(1.1克，22.4毫摩)以及甲酰胺(60毫升)组成的混合液进行搅拌并且在180-190℃(油浴温度)下加热2小时。随后将所述混合液冷却至室温并且分离得到的沉淀，用水进行洗涤并且干燥，从而获得褐色固体形式的所述标题化合物205(6.5克，95％)：LCMS：283[M+1]+。
步骤2e.7-(苯甲氧基)-4-氯-6-甲氧基喹唑啉(化合物206)
将化合物205(6.5克，8.5毫摩)以及三氯氧磷(40毫升)组成的混合液进行搅拌并且加热回流3小时。当得到透明溶液时，在减压条件下除去过量的三氯氧磷。将得到的残余物溶解于二氯甲烷(200毫升)中并且利用碳酸氢钠水溶液(100毫升x3)以及盐水(100毫升x1)对得到的有机层进行洗涤，并且通过硫酸镁进行干燥，过滤并且蒸发，从而获得黄色固体形式的所述标题化合物206(1.4克，65％)：LCMS：301[M+1]+。
步骤2f.N-(苯并呋喃基-5-基)-7-(苯甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉基-4-胺(化合物207)
将化合物206(0.5克，1.5毫摩)以及化合物105(0.2克，1.5毫摩)的异丙醇(5毫升)溶液组成的混合液进行搅拌并且加热回流3小时。将所述混合液冷却至室温并且进行过滤，从而获得白色固体形式的所述标题产物207(0.546克，91％)：LCMS：398[M+1]+。
步骤2g.4-(苯并呋喃基-5-氨基)-6-甲氧基喹唑啉基-7-醇(化合物208)
将化合物207(0.51克，1.3毫摩)以及炭化钯(0.2克)的甲醇(6毫升)溶液组成的混合液在室温下搅拌4小时。分离得到的沉淀并且进行干燥，从而获得灰色固体形式的所述标题化合物208(0.4克，100％)：LCMS：308[M+1]+。
步骤2h.7-(4-(苯并呋喃基-5-氨基)-6-甲氧基喹唑啉基-7-氧基)庚酸乙酯(化合物209-6)
将化合物208(0.4克，1.3毫摩)、7-溴庚酸乙酯(0.31克，1.3毫摩)以及碳酸钾(0.89克)的N，N-二甲基甲酰胺(15毫升)溶液所组成的混合液在60℃下搅拌3小时。通过过滤分离得到的沉淀并且将所述滤液倒入水中。过滤得到的固体，利用乙酸乙酯进行洗涤并且干燥，从而获得灰色固体形式的所述标题化合物209-6(0.6克，100％)：LC-MS：464[M+1]+。
步骤2i.7-(4-(苯并呋喃基-5-氨基)-6-甲氧基喹唑啉基-7-氧基)-N-羟基庚酰胺(化合物6)
制备出的所述标题化合物6是白色固体形式(96毫克，16％)，是由化合物209-6(600毫克，1.3毫摩)以及新鲜制备的羟胺/甲醇(7.3毫升，13毫摩)通过与化合物2的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：熔点214～217℃，LC-MS：451[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.34(m，2H)，1.45(m，2H)，1.53(m，2H)，1.79(m，2H)，1.97(m，2H)，3.97(s，3H，4.97(m，2H)，7.00(m，1H，7.16(s，1H)，7.58(m，1H，7.62(d，J＝9.0Hz，1H)，7.90(s，1H)，8.00(d，J＝2.1Hz，1H)，8.07(d，J＝1.2Hz，1H)，8.41(s，1H)，8.67(s，1H)，9.53(s，1H)，10.34(s，1H)。
生物学检测：
如前文中所指明的，本发明中定义的所述衍生物具有抗增殖的活性。这些特性可以通过例如下文中列出的一种或者一种以上方法进行评价：
(a)测定受试化合物抑制受体酪氨酸激酶的能力的体外检 测。
利用HTScanTM受体激酶检测试剂盒(Cell SignalingTechnologies，Danvers，MA)对化合物抑制受体激酶(血管内皮生长因子受体2以及血小板衍生生长因子受体-β)活性的能力进行检测。血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)酪氨酸激酶是通过杆状病毒表达系统制备得到的，其来自于一个含有人类血管内皮生长因子受体2cDNA激酶结构域(Asp805-Val1356)(GenBank accession No.AF035121)片段氨基末端融合有GST-HIS6-Thrombin切割位点的构建体。血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)酪氨酸激酶是通过杆状病毒表达系统制备得到的，其来自于一个含有人类血小板衍生生长因子受体-βcDNA(GenBank Accession No.NM_002609)片段(Arg561-Leu1106)氨基末端融合有GST-HIS6-Thrombin切割位点的构建体。所述蛋白是通过利用谷胱甘肽-琼脂糖的一步亲合色谱法进行纯化的。一种抗磷酸化酪氨酸单克隆抗体P-Tyr-100被用来检测生物素(酰)化的底物肽(血管内皮生长因子受体2，生物素-胃泌激素前体(Tyr87)；血小板衍生生长因子受体-β，生物素化-FLT3(Tyr589))的磷酸化作用。酶活性是在下述试剂中检测的：60毫摩羟乙基呱嗪乙硫磺酸(HEPES)，5毫摩氯化镁，5毫摩氯化锰，200微摩三磷酸腺苷(ATP)，1.25毫摩二硫苏糖醇(DTT)，3微摩正矾酸钠(Na3VO4)，1.5毫摩肽，以及50纳克表皮生长因子受体激酶。结合抗体的检测是利用DELFIA系统(PerkinElmer，Wellesley，MA)，所述系统由DELFIA
Figure G2007800418082D05921
铕标记的抗小鼠IgG(免疫球蛋白)(PerkinElmer，#AD0124)、DELFIA
Figure G2007800418082D05922
强化溶液(PerkinElmer，#1244-105)、以及DELFIA
Figure G2007800418082D05923
链亲合素涂层的96孔培养板(PerkinElmer，AAAND-0005)构成。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。
将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以得到20毫摩的工作储备浓缩液。每项检测都是通过如下步骤建立的：向1.25毫升、6毫摩的底物肽中加入100微升10毫摩的三磷酸腺苷(ATP)。利用蒸馏水将所述混合液稀释至2.5毫升，从而制备出二倍的(2X)三磷酸腺苷/底物混合液([三磷酸腺苷]＝400毫摩，[底物]＝3毫摩)。将酶从-80℃下迅速转移至冰上。使酶在冰上解冻。在4℃下进行短暂的微离心，从而将液体带入所述试管的底部。立即重新置于冰上。向2.5毫升四倍的(4X)HTScanTM酪氨酸激酶缓冲液(240毫摩pH7.5的羟乙基呱嗪乙硫磺酸，20毫摩氯化镁，20毫摩氯化锰，12毫摩偏矾酸钠)中加入10微升二硫苏糖醇(1.25毫摩)，从而获得二硫苏糖醇/激酶缓冲液。将1.25毫升的二硫苏糖醇/激酶缓冲液转移至酶试管中，从而获得四倍的(4X)反应混合液(在四倍的反应混合液中[酶]＝4纳克/微升)。在室温下以12.5微升/孔的量利用预先稀释的目标化合物(通常在10微摩左右)对12.5微升四倍的(4X)反应混合液培养5分钟。以25微升/孔的量向预先培养的反应混合液/化合物中加入25微升的二倍(2X)三磷酸腺苷/底物混合液。将反应板在室温下培养30分钟。以50微升/孔的量加入终止缓冲液(50毫摩乙二胺四乙酸，pH8)以终止所述反应。将25微升的每种反应液以及75微升/孔的蒸馏水转移至链亲合素涂层的96孔培养板中并且在室温下培养60分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温(磷酸缓冲液，0.05％的吐温-20)洗涤三次。在磷酸缓冲液/吐温(PBS/T)中，以1∶1000的比例利用1％的牛血清白蛋白(BSA)稀释初级抗体磷酸-酪氨酸单克隆抗体(P-Tyr-100)。以100微升/孔的量加入初级抗体。在室温下培养60分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温洗涤三次。在磷酸缓冲液/吐温(PBS/T)中，以1∶500的比例利用1％的牛血清白蛋白(BSA)稀释铕标记的抗小鼠免疫球蛋白(IgG)。以100微升/孔的量加入稀释的抗体。在室温下培养30分钟。以200微升/孔的量利用磷酸缓冲液/吐温洗涤五次。以100微升/孔的量加入DELFIA
Figure G2007800418082D05931
强化溶液。在室温下培养5分钟。利用适当的时间分辨培养板读数器(Time-Resolved Plate Reader)检测615纳米处发射出的荧光。
(b)测定受试化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)酶活 性的能力的体外检测。
利用组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)荧光计检测试剂盒(AK-500，Biomol，Plymouth Meeting，PA)对组蛋白脱乙酰基酶进行筛选。将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以形成20毫摩的工作储备浓缩液。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。每项检测都是通过如下步骤建立的：解冻所有的试剂盒成分并且将其保存于冰上直至使用。在检测缓冲液(50毫摩Tris/Cl，pH8.0，137毫摩氯化钠，2.7毫摩氯化钾，1毫摩氯化镁)中以1∶29的比例稀释HeLa核提取物。在检测缓冲液中制备曲古抑菌素A(TSA，阳性对照)以及受试化合物的稀释液(五倍于最终浓度)。在检测缓冲液中将Fluor de LysTM底物稀释至100微摩(50倍＝2倍的最终浓度)。在冷的检测缓冲液中将Fluor de LysTM显影剂浓缩物稀释20倍(例如，50微升的显影剂浓缩物加入950微升的检测缓冲液)。其次，在一倍的显影剂(Developer)中将0.2毫摩的曲古抑菌素A稀释100倍(例如，1毫升中的10微升；在一倍显影剂中的最终曲古抑菌素A的浓度＝2微摩；加入组蛋白脱乙酰基酶/底物反应液后的最终浓度＝1微摩)。加入检测缓冲液，在所述微量滴定板的适当孔中稀释曲古抑菌素A或者受试抑制剂。在除去阴性对照之外的其他所有孔中加入稀释的HeLa提取物或者其他组蛋白脱乙酰基酶样本。允许被稀释的Fluor deLysTM底物以及所述微量滴定板中的所述样本平衡至检测温度(例如，25℃或者37℃)。通过向每个孔中加入稀释的底物(25微升)并且充分混合来激发组蛋白脱乙酰基酶反应。允许组蛋白脱乙酰基酶反应进行1小时，之后通过加入Fluor de LysTM显影剂(50微升)终止反应。在室温下(25℃)对培养板培养10-15分钟。通过能够在350-380纳米范围内的波长下被激发的微量滴定板读数荧光计对样本进行读数，并且检测440-460纳米范围内的发射光。
下述表12-B列出了本发明代表性的化合物以及它们在组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)检测、血管内皮表皮生长因子受体2(VEGFR2)检测以及血小板衍生生长因子受体(PDGFR)检测中的活性。在这些检测中，使用到下述分级：对于IC50而言，I≥10微摩，10微摩＞II＞1微摩，1微摩＞III＞0.1微摩，以及IV≤0.1微摩。
表12-B
  化合物编号   HDAC   EGFR   HER2/ErbB   VEGFR2
  2   IV   IV   IV   II
  6   IV   II
  9   III
  10   IV
  11   IV
Figure G2007800418082D05951
第十三部分：
表13-A
Figure G2007800418082D05952
Figure G2007800418082D05971
方案1
实施例1：N-(5-(羟基氨基甲酰基)戊基)-2-(3-((E)-2-(吡 啶基-2-基)乙烯基)-1氢-吲唑基-6-硫基)苯甲酰胺(化合物15) 的制备方法
步骤1a.3-碘-6-硝基-1氢-吲唑(化合物102)
向6-硝基吲唑(23克，141毫摩)的二甲基甲酰胺(100毫升)溶液中加入碳酸钾(39克，282毫摩)，同时保持反应温度≤30℃。在2小时的时间内，向上述溶液中加入将碘(62克，244毫摩)预先溶解于二甲基甲酰胺(50毫升)中所形成的溶液，同时保持反应温度≤35℃。将所述反应混合液在25℃进行搅拌。当反应完毕之后，向所述混合液中加入硫代硫酸钠(34克，215毫摩)溶液以及将碳酸钾(0.23克)预先溶解于水(228毫升)中所形成的溶液，同时保持溶液温度≤30℃。将所述混合液在室温下搅拌20分钟。向其中加入水(340毫升)用以沉淀固体并且将所述浆液在室温下搅拌20分钟。对所述固体进行过滤，用水(2x 50毫升)进行洗涤，并且在真空炉中进行干燥12小时(50℃，25毫米汞柱)，从而获得黄色固体形式的所述化合物102(39克，95％产率)：LCMS：289[M+1]；1H NMR(二甲基亚砜-d6.)：δ14.21(s，1H)，8.47(s，1H)，7.97-8.01(m，1H)，7.67-7.70(d，J＝8.7Hz，1H)。
步骤1b.3-碘-6-硝基-1-(四氢-2氢-吡喃基-2-基)-1氢-吲唑(化合物103)
向化合物102(22克，76.2毫摩)的二氯甲烷(90克)以及四氢呋喃(60克)溶液中小心的加入甲基硫酸(1.0克，10.4毫摩)。随后在1小时的时间内向所述混合液中加入二氢吡喃(DHP)(17克，202毫摩)的二氯甲烷(30克)溶液，同时保持所述反应温度＜25℃。将所述混合液在25℃下搅拌5小时(直至通过高效液相色谱观察到所述反应完成)。随后将所述混合液小心的加入到10％的碳酸氢钠水溶液中(11.1克碳酸氢钠溶解于111克水中)，同时将所述溶液的温度保持在室温水平。将所述混合液在25℃下搅拌1小时并且分离得到的层。利用10％的氯化钠水溶液(120克)对得到的有机层进行洗涤并且分离得到的层。在50℃下对得到的有机层进行减压浓缩，从而除去剩余的溶剂。利用乙腈(50克)对得到的浆液进行稀释，并且在-5℃下搅拌2小时。过滤所述浆液，并且将得到的固体利用冰冷的乙腈(20克)进行漂洗。在减压条件下在室温下对所述固体进行干燥，从而获得化合物103(24克，85％产率)：1H NMR(二甲基亚砜-d6).
Figure G2007800418082D06001
8.79(s，1H)，8.03-8.07(m，1H)，7.69-7.72(d，J＝54Hz，1H)，6.11-6.15(m，1H)，3.82-3.88(m，2H)，2.34-2.38(m，1H)，2.01-2.08(m，2H)，1.56-1.76(m，3H)。
步骤1c.(E)-6-硝基-3-(2-(吡啶基-2-基)乙烯基)-1-(四氢-2氢-吡喃基-2-基)-1氢-吲唑(化合物104)
向2-乙烯基吡啶(9.82克，93.4毫摩)、N，N-二异丙基乙胺(16.2克，125毫摩)以及三邻甲苯基膦(1.72克，5.65毫摩)的二甲基甲酰胺(163克)溶液中加入化合物103(24.4克，65.4毫摩)。向其中加入二氯化钯(0.38克，2.1毫摩)并且将所述混合液在100℃下搅拌12小时(直至通过高效液相色谱观察到所述反应完成)。随后将所述混合液冷却至45℃并且向其中加入异丙醇(80克)。将所述混合液在45℃下搅拌30分钟，用水(400毫升)进行稀释，并且将所述混合液在25℃下搅拌1小时。过滤得到的浆液，用水(25毫升)进行漂洗，并且将所述固体与异丙醇(100克)进行混合。将所述混合液在55℃下搅拌30分钟，随后在10℃下搅拌30分钟，过滤，并且利用冰冷的异丙醇(2x10毫升)对所述固体进行洗涤。在真空炉中对所述固体进行12小时的干燥(50℃，25毫米汞柱)，从而获得化合物104(22克，96％产率)：LCMS：351[M+1]+。
步骤1d.(E)-3-(2-(吡啶基-2-基)乙烯基)-1-(四氢-2氢-吡喃基-2-基)-1氢-吲唑基-6-胺(化合物105)
将化合物104(22.0克，62.9毫摩)溶解于氯化铵的水溶液(25.5克氯化铵溶解于80克的水中)以及乙醇(120毫升)中。向其中加入铁粉(14.1克，252毫摩)并且将所述混合液在50℃下搅拌2小时(直至通过高效液相色谱观察到所述反应完成)。随后将所述混合液冷却至22℃并且向其中加入四氢呋喃(300毫升)。将所述混合液在室温下搅拌1小时，并且经由硅藻土进行过滤。利用四氢呋喃(60毫升)对所述滤饼进行漂洗，并且在50℃下将滤液进行减压浓缩直至达到大约50毫升的体积。将所述浓缩物冷却至室温，用水(200毫升)进行稀释，并且在室温下搅拌1小时。将所述混合液过滤，利用己烷(20毫升)进行漂洗，在真空炉中干燥12小时(50℃，25毫米汞柱)，从而获得化合物105(15克，75％产率)：LCMS：321[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6.)：δ8.57-8.59(m，1H)，7.76-7.81(m，3H)，7.63-7.66(d，J＝7.8Hz，1H)，7.42-7.48(d，J＝16.5Hz，1H)，7.23-7.28(m，1H)，6.63-6.66(m，2H)，5.56-5.60(m，1H)，5.47(s，2H)，3.88-3.92(d，J＝10.8Hz，1H)，3.64-3.72(m，1H)，2.30-2.50(m，1H).1.91-2.07(m，2H)，1.53-1.59(m，3H)。
步骤1e.(E)-6-碘-3-(2-(吡啶基-2-基)乙烯基)-1-(四氢-2氢-吡喃基-2-基)-1氢-吲唑(化合物106)
在0℃下，在1小时的时间内向亚硝酸钠(3.5克，50.7毫摩)溶解于水(30毫升)所形成的溶液中加入化合物105(10.0克，31.3毫摩)溶解于醋酸(65毫升)中所形成的溶液。将所述混合液在0℃下搅拌1小时，并且在0℃下在10分钟的时间内向其中加入盐酸溶液(5.6毫升的盐酸稀释于10毫升水中)。将所述混合液在0℃下搅拌1小时。利用高效液相色谱法(HPLC)对所述重氮盐的形成进行监控。在0℃下在5分钟的时间内向上述重氮盐溶液中加入0℃的二氯甲烷(40毫升)，并且在1小时的时间内向其中加入0℃的碘化钾(10.62克，63.9毫摩)溶液以及碘酒(3.96克，15.6毫摩)溶解于水(30毫升)中所形成的溶液。将所述反应混合液在0℃下搅拌2小时(直至通过高效液相色谱观察到反应的完成)。随后在0℃下将所述混合液倒入20％的硫氢化钠水溶液(20克硫代硫酸钠溶解于100毫升水中)以及二氯甲烷(40毫升)中，搅拌，并且分离得到的层。在0℃下利用二氯甲烷(2x40毫升)对得到的水层进行提取并且合并。在0℃下，在10分钟的时间内向所述合并的有机层中加入3M的氢氧化钠水溶液(170毫升)，直至所述水相呈碱性(pH＝9-12)。由于乳状液的形成，所述的相分离并不彻底。加入28％的氢氧化铵水溶液(10毫升)以及水(20毫升)，并且将所述混合液在10℃下搅拌30分钟，并且将其放置12小时，从而获得彻底的相分离。分离得到的层并且利用二氯甲烷(2x60毫升)对得到的水层进行提取。将得到的合并有机层进行浓缩并且利用二氯甲烷在含有硅胶的烧结玻璃柱中进行分离，从而获得化合物106(8.8克，65％产率)：LCMS：432[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：
Figure G2007800418082D06021
8.60-8.62(d，J＝4.8Hz，1H)，8.26(s，1H)，8.01-8.03(d，J＝8.4Hz，1H)，7.88-7.93(d，J＝16.5Hz，1H)，7.79-7.82(m，1H)，7.68-7.71(d，J＝7.8Hz，2H)，7.55-7.61(m，2H)，7.29-7.31(m，1H)，5.91-5.93(m，1H)，3.90-4.00(m，2H)，2.49-2.59(m，1H)，2.08-2.20(m，2H)，1.70-1.86(m，3H)。
步骤1f.2，2-二氯二硫代二苯甲酸(化合物108)
将2，2’-二硫代二苯甲酸107(3.22克，10.5毫摩)溶解于甲苯(30毫升)中，并且向其中加入亚硫酰氯(2毫升)以及二甲基甲酰胺(0.2毫升)。将所述混合液在80℃下搅拌过夜。蒸发除去所述溶剂，从而获得黄色固体形式的化合物108(3.2克，89％产率)。
步骤1g.2，2’-二硫基-N-(己酸乙酯)-基-苯甲酰胺(化合物109-15)
向盐酸5-氨基己酸甲酯的甲醇(5毫升)溶液中加入氢氧化钾(878毫克，15.66毫摩)。将所述混合液在室温下搅拌10分钟，并且随后将所述混合液浓缩。在0℃下向其中加入化合物108(1.41克，4.12毫摩)溶解于四氢呋喃(5毫升)中所形成的溶液。将所述混合液搅拌1小时。蒸发除去所述溶剂四氢呋喃之后，向其中加入乙酸乙酯(200毫升)。利用水以及盐水对得到的有机层进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，并且蒸发，从而获得白色固体形式的109-15(1.23克，53％产率)：LCMS：561[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.30-1.38(m，4H)，1.48-1.60(m，8H)，2.29(t，J＝7.5Hz，4H)，3.20-3.26(m，4H)，3.30(s，6H)，7.24-7.27(m，2H)，7.29-7.44(m，2H)，7.57-7.62(m，4H)，8.57(t，J＝6Hz，2H)。
步骤1h.6-(2-巯基苯甲酰胺基)己酸甲酯(化合物110-15)
将化合物109-15(831毫克，1.48毫摩)溶解于乙醇(10毫升)中并且冷却至0℃。向其中分部分加入硼氢化钠(130毫克，2.96毫摩)，并且将所述混合液搅拌1小时。向所述混合液中加入盐酸(3M，10毫升)并且利用乙酸乙酯(80毫升x3)对所述混合液进行提取。利用盐水对得到的有机层进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥并且蒸发，从而获得化合物110-15(0.49克，59％产率)，所述化合物无需进行纯化即可在下一步骤中进行使用：LCMS：282[M+1]+。
步骤1i.6-(2-(1-(四氢-2氢-吡喃基-2-基)-3-((E)-2-(吡啶基-2-基)乙烯基)-1氢-吲唑基-6-硫基)苯甲酰胺基)己酸甲酯(化合物111-15)
向[1，1’-双(二苯基-膦)二茂铁]二氯化钯(II)复合物与二氯甲烷(50毫克)以及碳酸铯(680毫克)的二氯甲烷(50毫克)溶液组成的混合液中加入化合物106(600毫克，1.40毫摩)的二甲基甲酰胺(6毫升)溶液。向其中加入化合物110-15(490毫克，1.74毫摩)并且将所述混合液在80℃下搅拌过夜。将所述混合液冷却至室温并且向其中加入乙酸乙酯(10毫升)并且搅拌20分钟。随后向其中加入水(14毫升)并且将所述混合液再搅拌40分钟。将所述混合液过滤并且利用水以及乙酸乙酯对得到的固体进行洗涤，干燥，从而获得白色固体形式的化合物111-15(500毫克，61％产率)：LCMS：585[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.30-1.38(m，2H)，1.48-1.60(m，6H)，1.72-1.80(m，1H)，1.97-2.06(m，2H)，2.28(t，J＝7.5Hz，2H)，2.34-2.44(m，1H)，3.20-3.26(m，2H)，3.33(s，3H)，3.56-3.80(m，1H)，3.88-3.92(m，1H)，5.90-5.94(m，1H)，7.00-7.03(m，1H)，7.19-7.23(m，1H)，7.28-7.34(m，3H)，7.50-7.57(m，1H)，7.65(m，2H)，7.69(d，J＝7.8Hz，1H)，7.79-7.83(m，1H)，7.90-7.95(m，2H)，8.21(d，J＝8.1Hz，1H)，8.44(t，J＝5.4Hz，1H)，8.60-8.63(m，1H)。
步骤1j.6-(2-(3-((E)-2-(吡啶基-2-基)乙烯基)-1氢-吲唑基-6-硫基)苯甲酰胺基)己酸甲酯(化合物112-15)
将化合物111-15(386毫克，0.66毫摩)、对甲苯磺酸(630毫克)、甲醇(6毫升)以及水(1毫升)进行混合并且在60℃下搅拌1小时。在减压条件下将所述混合液进行浓缩。将这一过程重复进行三次。随后利用乙酸乙酯(60毫升)对所述混合液提取三次。利用水以及盐水对得到的有机层进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，蒸发，从而获得残余物，利用柱层析法对所述残余物进行纯化，从而获得白色固体形式的化合物112-15(150毫克，45％产率)：LCMS：501[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.30-1.38(m，2H)，1.47-1.56(m，4H)，1.95(t，J＝6.9Hz，2H)，3.18-3.25(m，2H)，3.56(s，3H)，7.06-7.10(m，1H)，7.15-7.19(m，1H)，7.20-7.34(m，3H)，7.45-7.48(m，1H)，7.54-7.59(m，2H)，7.65-7.68(m，1H)，7.78-7.84(m，1H)，7.91-7.18(m，1H)，8.19(d，J＝8.1Hz，1H)，8.42(t，J＝5.4Hz，1H)，8.60-8.63(m，1H)，13.32(s，1H)。
步骤1k.N-(5-(羟基氨基甲酰基)戊基)-2-(3-((E)-2-(吡啶基-2-基)乙烯基)-1氢-吲唑基-6-硫基)苯甲酰胺(化合物15)
制备羟胺的甲醇溶液：将盐酸羟胺(4.67克，67毫摩)溶解于甲醇(24毫升)中，从而形成溶液A。将氢氧化钾(5.61克，100毫摩)溶解于甲醇(14毫升)中，从而形成溶液B。将所述溶液A冷却至0℃，并且将所述溶液B逐滴加入到溶液A中。将所述混合液在0℃下搅拌30分钟，并且过滤所述沉淀，从而获得羟胺的甲醇溶液。
向装有化合物112-15(150毫克，0.28毫摩)的长颈瓶中加入上述羟胺的甲醇溶液(4.0毫升)。将所述混合液在室温下搅拌30分钟，并且利用醋酸将其pH调整至6-7。将所述混合液浓缩，从而获得残余物，利用乙酸乙酯(200毫升)对所述残余物进行提取，并且用水进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，并且浓缩，从而获得白色固体形式的化合物15(110毫克，49％产率)：LCMS：502[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.28-1.29(m，2H)，1.31-1.34(m，4H)，2.29(t，J＝7.5Hz，2H)，3.21-3.25(m，2H)，7.06-7.08(m，1H)，7.17-7.20(m，1H)，7.26-7.33(m，3H)，7.46-7.49(m，1H)，7.54-7.68(m，3H)，7.78-7.84(m，1H)，7.94(d，J＝16.2Hz，1H)，8.19(d，J＝8.7Hz，1H)，8.43(t，J＝5.4Hz，1H)，8.60-8.62(m，1H)。
实施例2：N-(6-(羟基氨基甲酰基)己基)-2-(3-((E) -2-(吡啶基-2-基)乙烯基)-1氢-吲唑基-6-硫基)苯甲酰胺(化 合物16)的制备方法
步骤2a.2，2’-二硫基-N-(庚酸乙酯)-基-苯甲酰胺(化合物109-16)
所述标题化合物109-16(3.42克，67％)是由化合物108(2.83克，8.24毫摩)以及盐酸7-氨基庚酸乙酯(6.90克，32.96毫摩)通过与化合物109-15的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：617[M+1]+。
步骤2b.7-(2-巯基苯甲酰胺基)庚酸乙酯(化合物110-16)
所述标题化合物110-16(400毫克，100％)是由化合物109-16(400毫克，0.649毫摩)通过与化合物110-15的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：310[M+1]+。
步骤2c.7-(2-(1-(四氢-2氢-吡喃基-2-基)-3-((E)-2-(吡啶基-2-基)乙烯基)-1氢-吲唑基-6-硫基)苯甲酰胺基)庚酸乙酯(化合物111-16)
所述标题化合物111-16(620毫克，94％)是由化合物110-16(400毫克，1.29毫摩)以及106(460毫克，1.08毫摩)通过与化合物111-15的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：613[M+1]+。
步骤2d.7-(2-(3-((E)-2-(吡啶基-2-基)乙烯基)-1氢-吲唑基-6-硫基)苯甲酰胺基)庚酸乙酯(化合物112-16)
制备出的所述标题化合物112-16(360毫克，69％)是由化合物111-16(600毫克，0.98毫摩)通过与化合物112-15的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：529[M+1]+。
步骤2e.N-(6-(羟基氨基甲酰基)己基)-2-(3-((E)-2-(吡啶基-2-基)乙烯基)-1氢-吲唑基-6-硫基)苯甲酰胺(化合物16)
所述标题化合物16(306毫克，59％)是由化合物112-16(352毫克，0.67毫摩)通过与化合物15的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：516[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ1.23-1.30(m，4H)，1.32-1.36(m，4H)，1.94(t，J＝7.2Hz，2H)，3.21-3.25(m，2H)，7.06-7.08(m，1H)，7.16-7.20(m，1H)，7.26-7.33(m，3H)，7.46-7.49(m，1H)，7.54-7.65(m，3H)，7.78-7.84(m，1H)，7.94(d，J＝16.2Hz，1H)，8.19(d，J＝8.7Hz，1H)，8.43(t，J＝5.4Hz，1H)，8.60-8.62(m，1H)。
Figure G2007800418082D06071
第十四部分：
表14-A
Figure G2007800418082D06072
Figure G2007800418082D06081
Figure G2007800418082D06091
方案1
Figure G2007800418082D06092
实施例1：3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-N-(4-(羟基氨 基)-4-氧代丁氧基)苯甲酰胺(化合物1)的制备方法
步骤1a.苯甲酸甲酯(化合物102)
在0℃下，向化合物苯甲酰氯101(140克，1摩)中加入甲醇(100毫升)。将所述混合液在0℃下搅拌5分钟，并且对其进行浓缩，从而获得黄色油形式的所述化合物苯甲酸甲酯(135克，99％)：LC-MS：137[M+1]+。
步骤1b.N-羟基苯甲酰胺(化合物103-1)
制备羟胺的甲醇溶液：将盐酸羟胺(107.41克，1.56摩)溶解于甲醇(552毫升)中，从而形成溶液A。将氢氧化钾(129.03克，2.30摩)溶解于甲醇(322毫升)中，从而形成溶液B。将所述溶液A冷却至0℃，并且将所述溶液B逐滴加入到溶液A中。将所述混合液在0℃下搅拌30分钟。过滤除去所述沉淀，而所述滤液则形成了羟胺的甲醇溶液。
将苯甲酸甲酯102(27.2克，0.2摩)溶解于上述羟胺的甲醇溶液(874毫升)中。将所述混合液在室温下搅拌30分钟，并且随后利用醋酸将其pH调整至7。将所述混合液浓缩，从而获得残余物，利用水对所述残余物进行洗涤，从而获得白色固体形式的化合物103(25克，91％)。LC-MS：138[M+1]+。
步骤1c.4-(苯甲酰胺氧基)丁酸乙酯(化合物104-1)
将化合物103(6.9克，50毫摩)溶解于二甲基甲酰胺(100毫升)中，并且在0℃下向其中加入氢化钠(2.4克，60毫摩)。将所述混合液在0℃下搅拌几分钟并且向其中加入4-溴丁酸乙酯(9.7克，50毫摩)并且将所述混合液在室温下搅拌3小时。通过蒸发除去二甲基甲酰胺，并且将得到的残余物溶解于二氯甲烷中，利用水以及盐水进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥，浓缩，从而获得黄色油形式的化合物104-1(2.3克，18％)：LCMS：252[M+1]+。
步骤1d.4-(氨基氧基)丁酸硫酸甲酯(化合物105-1)
向化合物104-1(2.3克，9毫摩)的甲醇(30毫升)溶液中加入浓硫酸(0.898克，9毫摩)。将所述混合液在40℃下搅拌过夜。除去所述甲醇并且利用乙酸乙酯对得到的残余物进行稀释，利用水以及盐水对其进行洗涤，干燥并且浓缩，从而获得化合物105-1(0.693克，33％)。LCMS：134[M+1]+。
步骤1e.3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)苯甲酸(化合物107)
制备2-氟-4-碘苯胺(10克，0.057摩)以及2，3，4-三氟苯甲酸106(13.5克，0.057摩)的溶液，并且在50-55℃下，将所述溶液的一部分(大约5％)加入到处于搅拌状态中的氨基锂(4.35克，0.182摩)的40毫升四氢呋喃浆液中。大约15-30分钟之后，观察到一个伴随气体释放以及颜色变化的放热曲线。将上述溶液的剩余部分在1-2小时的时间内缓慢加入到其中。随后，将温度保持在45-55℃之内。对所述混合液进行搅拌直至所述反应确实完成(通过液质联用色谱判断)。随后将所述最终的混合液冷却至20-25℃并且将其转移至另外一个含有6N的盐酸(47毫升)的反应器中，随后加入25毫升乙腈，搅拌，利用40毫升50％的氢氧化钠溶液进行处理之后，除去底部的水相。在减压条件下对所述有机相进行浓缩，并且利用柱层析法通过二氯甲烷/甲醇(15/1)作为洗脱剂进行纯化，从而获得褐色固体形式的化合物107(15.9克，71％产率)：LCMS：394[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ13.735(s，1H)，9.144(s，1H)，7.794(m，1H)，7.617(m，1H)，7.412(m，1H)，7.096(m，1H)，6.827(m，1H)。
步骤1f.4-(3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)苯甲酰胺氧基)丁酸甲酯(化合物108-1)
将化合物107(1.179克，3毫摩)、盐酸1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI·HCl)(0.86克，4.5毫摩)、1-羟基苯并三唑(HOBt)(0.61克，4.5毫摩)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(1.55克，12毫摩)以及4-(氨基氧基)丁酸硫酸甲酯105(0.693克，3毫摩)组成的混合液在50℃下搅拌16小时。利用乙酸乙酯对所述混合液进行稀释，利用水以及盐水对其进行洗涤，通过无水硫酸钠进行干燥并且浓缩，从而获得油形式的化合物108-1(367毫克，24％)。LCMS：509[M+1]+。
步骤1g.3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-N-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酰胺(化合物1)
制备羟胺的甲醇溶液：将盐酸羟胺(4.67克，67毫摩)溶解于甲醇(24毫升)中，从而形成溶液A。将氢氧化钾(5.61克，100毫摩)溶解于甲醇(14毫升)中，从而形成溶液B。将所述溶液A冷却至0℃，并且将所述溶液B逐滴加入到溶液A中。将所述混合液在0℃下搅拌30分钟并且过滤除去所述沉淀。而所述滤液则形成了羟胺的甲醇溶液。
向装有化合物108-1(367毫克，0.722毫摩)的长颈瓶中加入上述羟胺的甲醇溶液(5.0毫升)。将所述混合液在室温下搅拌1小时，并且利用醋酸将其pH调整至7。将所述混合液浓缩，从而获得残余物，利用水对所述残余物进行洗涤，从而获得固体形式的所述产物1(107毫克，29％产率)：LC-MS：510[M+1]+；1HNMR(二甲基亚砜-d6)：δ10.350(s，1H)，8.681(s，1H)，7.558(d，J＝9.0Hz，1H)，7.364(m，2H)，7.148(m，1H)，6.641(m，1H)，3.676(t，J＝6.1Hz，2H)，2.043(m，2H)，1.763(m，2H)。
实施例2：3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-N-(5-(羟 基氨基)-5-氧代戊氧基)苯甲酰胺(化合物2)的制备方法
步骤2a.5-(苯甲酰胺氧基)戊酸甲酯(化合物104-2)
所述标题化合物104-2(2.74克，22％)是由化合物103(4.691克，34毫摩)、氢化钠(1.632克，40.8毫摩)以及5-溴戊酸甲酯(6.63克，34毫摩)通过与化合物104-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：252[M+1]+。
步骤2b.5-(氨基氧基)戊酸甲酯(化合物105-2)
所述标题化合物105-2(1.015克，63％)是由化合物104-2(2.74克，11毫摩)以及浓硫酸(1.126克，11毫摩)通过与化合物105-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：148[M+1]+。
步骤2c.5-(3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)苯甲酰胺氧基)戊酸甲酯(化合物108-2)
所述标题化合物108-2(988毫克，55％)是由化合物107(1.357克，3.45毫摩)、盐酸1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI·HCl)(0.99克，5.18毫摩)、1-羟基苯并三唑(HOBt)(0.699克，5.18毫摩)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(1.337克，10.35毫摩)以及5-(氨基氧基)戊酸甲酯105-2(0.508克，3.45毫摩)通过与化合物108-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：522[M+1]+。
步骤2d.3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-N-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊氧基)苯甲酰胺(化合物2)
所述标题化合物2(119毫克，45％)是由化合物108-2(261毫克，0.5毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(5.0毫升)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：524[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ11.733(s，1H)，10.390(s，1H)，8.841(s，1H)，8.654(s，1H)，7.581(m，1H)，7.384(m，2H)，7.186(m，1H)，6.664(m，1H)，3.778(m，2H)，1.972(t，J＝6.0Hz，2H)，1.550(m，4H)。
实施例3：3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-N-(6-(羟 基氨基)-6-氧代己氧基)苯甲酰胺(化合物3)的制备方法
步骤3a.6-(苯甲酰胺氧基)己酸乙酯(化合物104-3)
所述标题化合物104-3(0.761克，12％)是由化合物103(3.179克，23毫摩)、氢化钠(1.38克，34.5毫摩)以及6-溴己酸乙酯(5.114克，23毫摩)通过与化合物104-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：279[M+1]+。
步骤3b.6-(氨基氧基)己酸甲酯(化合物105-3)
所述标题化合物105-3(0.362克，62％)是由化合物104-3(958毫克，3.43毫摩)以及浓硫酸(354克，3.43毫摩)通过与化合物105-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：162[M+1]+。
步骤3c.6-(3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)苯甲酰胺氧基)己酸甲酯(化合物108-3)
所述标题化合物108-3(250毫克，17％)是由化合物107(1.056克，2.69毫摩)、盐酸1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI·HCl)(0.77克，40.035毫摩)、1-羟基苯并三唑(HOBt)(0.545克，4.035毫摩)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(2.085克，16.014毫摩)以及6-(氨基氧基)己酸甲酯105-3(0.696克，2.69毫摩)通过与化合物108-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：537[M+1]+。
步骤3d.3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-N-(6-(羟基氨基)-6-氧代己氧基)苯甲酰胺(化合物3)
所述标题化合物3(50毫克，20％产率)是由化合物108-3(250毫克，0.47毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(8.0毫升)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LC-MS：538[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ11.750(s，1H)，10.352(s，1H)，8.742(s，1H)，8.673(s，1H)，7.580(m，1H)，7.374(m，2H)，7.199(m，1H)，7.660(m，1H)，3.764(m，2H)，1.942(m，2H)，1.521(m，4H)，1.297(m，2H)。
实施例4：3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-N-(7-(羟 基氨基)-7-氧代庚氧基)苯甲酰胺(化合物4)的制备方法
步骤4a.7-(苯甲酰胺氧基)庚酸乙酯(化合物104-4)
所述标题化合物104-4(0.635克，22％)是由化合物103(1.38克，10毫摩)、氢化钠(0.48克，12毫摩)以及7-溴庚酸乙酯(2.37克，10毫摩)通过与化合物104-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：294[M+1]+。
步骤4b.7-(氨基氧基)庚酸甲酯(化合物105-4)
所述标题化合物105-4(227毫克，60％)是由化合物104-4(635毫克，2.17毫摩)以及浓硫酸(223.6克，2.17毫摩)通过与化合物105-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：176[M+1]+。
步骤4c.7-(3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)苯甲酰胺氧基)庚酸甲酯(化合物108-4)
所述标题化合物108-4(178毫克，25％)是由化合物107(501毫克，1.27毫摩)、盐酸1-(3-二甲酰氨基丙基)-3-乙基羰二亚胺(EDCI·HCl)(364毫克，1.905毫摩)、1-羟基苯并三唑(HOBt)(257毫克，1.905毫摩)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(656毫克，5.08毫摩)以及7-(氨基氧基)庚酸甲酯105-4(223毫克，1.27毫摩)通过与化合物108-1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：551[M+1]+。
步骤4d.3，4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-N-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚氧基)苯甲酰胺(化合物4)
所述标题化合物4(89毫克，54％产率)是由化合物108-4(178毫克，0.3毫摩)以及新鲜制备的羟胺的甲醇溶液(3.0毫升)通过与化合物1的制备方法(实施例1)中所描述的类似方法制备得到的：LCMS：552[M+1]+；1H NMR(二甲基亚砜-d6)：δ11.699(s，1H)，10.329(s，1H)，8.881(s，1H)，8.645(s，1H)，7.575(m，1H)，7.381(m，2H)，7.191(m，1H)，6.657(m，1H)，3.752(t，J＝6.3Hz，2H)，1.934(t，J＝7.2Hz，2H)，1.482(m，4H)，1.263(m，4H)。
生物学检测：
如前文中所指明的，本发明中定义的所述衍生物具有抗增殖的活性。这些特性可以通过例如下文中列出的一种或者一种以上方法进行评价：
(a)有丝分裂原活化蛋白激酶(MEK)酶学检测。
根据本发明所述的化合物的活性可以通过下述方法进行测定。N-末端具有6个组氨酸(His)标记的有丝分裂原活化蛋白激酶-1(MEK-1)(2-393)是由大肠杆菌表达的，所述蛋白通过常规方法(参见Ahn等人于1994年在Science《科学》265，966-970中发表的文章)进行纯化并且由Raf-1进行激活。对于有丝分裂原活化蛋白激酶-1(MEK-1)活性的评价是通过测量来自于γ-33P-三磷酸腺苷中的γ-33P磷酸根对于N-末端组氨酸标记的、激酶变异的(K52R)细胞外信号调节蛋白激酶(ERK2)进行的结合来实现，其中所述的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK2)是由大肠杆菌表达的，并且是通过传统方法进行纯化的。所述的检测是在96孔聚丙烯培养板中进行的。所述的培养混合液(100微升)中包括20毫摩pH7.4的羟乙基呱嗪乙硫磺酸(Hepes)，10毫摩氯化镁，1毫摩乙二醇二乙醚二氨四乙酸(EGTA)，0.02％的聚氧乙烯月桂醚，0.02毫克/毫升的牛血清白蛋白，100微摩正矾酸钠，2毫摩二硫苏糖醇，0.5纳摩有丝分裂原活化蛋白激酶-1(MEK1)，以及1微摩细胞外信号调节蛋白激酶(ERK2)。将抑制剂悬浮于二甲基亚砜之中，并且所有的反应，包括对照反应都是在1％的二甲基亚砜的最终浓度下进行的。反应是在1微摩的三磷酸腺苷(每孔含有0.5微居里γ-33P-三磷酸腺苷)的存在下进行的，并且在环境温度下培养120分钟。通过加入相同体积的25％的三氯乙酸(TCA)终止所述反应并且沉淀所述蛋白。将沉淀出的蛋白截留于玻璃纤维B滤波板上，并且利用Tomtec MACH III收集器洗掉过量的被标记的三磷酸腺苷。将所述板进行气流干燥，之后以30微升/孔的量加入Packard Microscint 20，并且利用PerkinElmer TopCount对所述板进行计数。在这项检测中，本发明所述化合物表现出了小于50微摩的IC50值。
(b)细胞的细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的磷酸 化检测。
本发明所述化合物的有丝分裂原活化蛋白激1/2(MEK 1/2)抑制特性可以通过下述体外细胞检测来测定。对于碱性细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK 1/2)的磷酸化作用的抑制通过下述方法进行测定：利用化合物对细胞进行1小时的培养，对固定化细胞上的pERK信号进行量化并且将其与全部ERK信号进行正态化处理(normalizing)。材料以及方法：Malme-3M(恶性黑素瘤)细胞是从ATCC(美国国家菌种保藏中心)处获得并且生长于补充了10％的胎牛血清的RPMI-1640培养基中。将细胞以15000个细胞/孔的量培养基96孔培养板中，并且允许其贴合(attach)1-2小时。随后将稀释过的化合物以1％二甲基亚砜的最终浓度加入其中。1小时之后，利用磷酸缓冲液(PBS)对细胞进行洗涤并且利用3.7％的多聚甲醛的磷酸缓冲液固定化15分钟。随后在磷酸缓冲液/0.1％的曲拉通X-100(Triton X-100)中进行洗涤。将细胞封闭于Odyssey封闭缓冲液(LI-CORBiosciences)至少1小时。将用以对细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK 1/2)(Cell Signaling#9106，单克隆)进行磷酸化的抗体以及全部细胞外信号调节蛋白激酶12(ERK 12)(Santa CruzBiotechnology#sc-94，多克隆)加入到所述细胞中并且培养至少1小时。利用磷酸缓冲液/0.1％的曲拉通X-100(Triton X-100)进行洗涤之后，将上述细胞在荧光素标记过的二级抗体中(山羊抗兔免疫球蛋白-IRDye800，Rockland以及山羊抗小鼠免疫球蛋白-Alexa Fluor 680，Molecular Probes)再培养1小时。之后对上述细胞进行洗涤，并且利用Odyssey红外激光成像系统(OdysseyInfrared Imaging System)(LI-COR Biosciences)在上述两个波长处对其荧光性进行分析。将磷酸化的ERK信号与全部ERK信号进行正态化(normalized)处理。
(c)测定受试化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)酶活 性的能力的体外检测。
利用组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)荧光计检测试剂盒(AK-500，Biomol，Plymouth Meeting，PA)对组蛋白脱乙酰基酶进行筛选。将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中以形成20毫摩的工作储备浓缩液。荧光性是由WALLAC Victor 2培养板读数器(plate reader)测量到的，并且表示出的是相对荧光值(RFU)。利用GraphPad Prism(4.0a版本)绘制数据，并且通过S形剂量响应曲线匹配的运算法则计算IC50值。每项检测都是通过如下步骤建立的：解冻所有的试剂盒成分并且将其保存于冰上直至使用。在检测缓冲液(50毫摩Tris/Cl，pH8.0，137毫摩氯化钠，2.7毫摩氯化钾，1毫摩氯化镁)中以1∶29的比例稀释HeLa核提取物。在检测缓冲液中制备曲古抑菌素A(TSA，阳性对照)以及受试化合物的稀释液(五倍于最终浓度)。在检测缓冲液中将Fluor de LysTM底物稀释至100微摩(50倍＝2倍的最终浓度)。在冷的检测缓冲液中将Fluor de LysTM显影剂浓缩物稀释20倍(例如，50微升的显影剂浓缩物加入950微升的检测缓冲液)。其次，在一倍的显影剂(Developer)中将0.2毫摩的曲古抑菌素A稀释100倍(例如，1毫升中的10微升；在一倍显影剂中的最终曲古抑菌素A的浓度＝2微摩；加入组蛋白脱乙酰基酶/底物反应液后的最终浓度＝1微摩)。加入检测缓冲液，在所述微量滴定板的适当孔中稀释曲古抑菌素A或者受试抑制剂。在除去阴性对照之外的其他所有孔中加入稀释的HeLa提取物或者其他组蛋白脱乙酰基酶样本。允许被稀释的Fluor deLysTM底物以及所述微量滴定板中的所述样本平衡至检测温度(例如，25℃或者37℃)。通过向每个孔中加入稀释的底物(25微升)并且充分混合来激发组蛋白脱乙酰基酶反应。允许组蛋白脱乙酰基酶反应进行1小时，之后通过加入Fluor de LysTM显影剂(50微升)终止反应。在室温下(25℃)对培养板培养10-15分钟。通过能够在350-380纳米范围内的波长下被激发的微量滴定板读数荧光计对样本进行读数，并且检测440-460纳米范围内的发射光。
下述表14-B列出了本发明代表性的化合物以及它们在组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)检测以及有丝分裂原活化蛋白激酶(MEK)检测中的活性。在这些检测中，使用到下述分级：对于IC50而言，I≥10微摩，10微摩＞II＞1微摩，1微摩＞III＞0.1微摩，以及IV≤0.1微摩。
表14-B
  化合物编号   HDAC   MEK-1
  1   II   III
  2   III
  3   IV   III
  4   IV
本发明所涉及的专利以及科技文献提供了本领域技术人员可以获知的知识。本发明所引用的全部美国专利以及公开的或者未公开的美国专利申请在此引入作为参考。本发明所引用的所有公开的外国专利以及专利申请在此引入作为参考。本发明所引用的全部其他公开参考文献、论文、手稿以及科技文献在此引入作为参考。
尽管本发明通过其优选的实施方式进行了特别具体的表示以及描述，但本领域技术人员能够理解，在不背离由后附的权利要求所包含的范围的前提下，在形式上以及细节上所做的各种改变也被包含在本发明的范围之内。

Claims (20)

1.一种多功能的小分子化合物，所述小分子化合物的功能之一在于能够抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)，并且它的其他功能在于能够抑制在异常细胞增殖、分化或者存活中所涉及到的至少一种其他的细胞途径或者分子途径。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述的肿瘤的细胞途径或者分子途径选自酪氨酸激酶，丝氨酸/苏氨酸激酶，DNA甲基转移酶，蛋白体，基质金属蛋白酶，法尼基转移酶，热休克蛋白，以及细胞凋亡。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中所述的肿瘤的细胞途径或者分子途径是表皮生长因子受体，ErbB2，ErbB3，ErbB4，人表皮生长因子受体-2，血管内皮生长因子受体-1，血管内皮生长因子受体-2，血管内皮生长因子受体-3，Flt-3，c-kit，Abl，JAK，血小板衍生生长因子受体-a，血小板衍生生长因子受体-b，胰岛素样生长因子I受体，c-Met，成纤维生长因子受体1，成纤维生长因子受体3，成纤维生长因子受体4，c-Ret，Src，Lyn，Yes，PKC，细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶，细胞外信号调节蛋白激酶，Merk，PI3K-Akt，哺乳动物雷帕霉素标靶，Raf，细胞周期检测点激酶，极光激酶，热休克蛋白质90，TRAILR，凋亡蛋白酶，免疫抑制酸性蛋白，B细胞白血病-2，凋亡抑制基因，麦迪霉素2，麦迪霉素4。
4.由式(I)表示的一种化合物，
A-B-C(I)
或者是其几何异构体，对映异构体，非对映异构体，外消旋体，药物可接受性盐，前体药物或者溶剂化物，其中A是抗肿瘤制剂的药效团，其能够抑制异常细胞增殖、分化或者存活中所涉及的至少一种细胞途径或者分子途径；B是连接体而C是锌结合半族。
5.根据权利要求4所述的化合物，其中所述的抗肿瘤制剂选自表皮生长因子受体，ErbB2，ErbB3，ErbB4，人表皮生长因子受体-2，血管内皮生长因子受体-1，血管内皮生长因子受体-2，血管内皮生长因子受体-3，Flt-3，c-kit，Abl，JAK，血小板衍生生长因子受体-a，血小板衍生生长因子受体-b，胰岛素样生长因子I受体，c-Met，成纤维生长因子受体1，成纤维生长因子受体3，成纤维生长因子受体4，c-Ret，Src，Lyn，Yes，PKC，细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶，细胞外信号调节蛋白激酶，Merk，PI3K-Akt，哺乳动物雷帕霉素标靶，Raf，细胞周期检测点激酶，极光激酶，热休克蛋白质90，TRAILR，凋亡蛋白酶，免疫抑制酸性蛋白，B细胞白血病-2，凋亡抑制基因，麦迪霉素2，麦迪霉素4的抑制剂。
6.根据权利要求4所述的化合物，其中C是锌结合半族，其选自由下述基团所组成的组：
(a)
Figure A2007800418080003C1
其中W是O或者S；Y是缺失，N或者CH；Z是N或者CH；R7以及R9各自独立的表示氢，OR’，脂肪族或者取代的脂肪族，其中R’是氢，酰基，脂肪族或者取代的脂肪族；假定如果R7与R9同时存在，则R7与R9中的一个必须是OR’，而如果Y是缺失，R9必须是OR；并且R8是氢，酰基，脂肪族，取代的脂肪族；
(b)
Figure A2007800418080004C1
其中W是O或者S；J是O，NH，或者NCH3；并且R10是氢或者是低级烷基；
(c)
Figure A2007800418080004C2
其中W是O或者S；并且Y1以及Z1各自独立的选自N，C或者CH；以及
(d)
Figure A2007800418080004C3
其中Z、Y以及W如前述所定义；R11以及R12各自独立的表示氢或者脂肪族；R1、R2以及R3各自独立的选自氢，羟基，氨基，卤素，烷氧基，取代的烷氧基，烷氨基，取代的烷氨基，二烷氨基，取代的二烷氨基，取代的或者未被取代的烷硫基，取代的或者未被取代的烷基磺酰基，CF3，CN，NO2，N3，磺酰基，酰基，脂肪族，取代的脂肪族，芳基，取代的芳基，异芳基，取代的异芳基，杂环以及取代的杂环。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中C是锌结合半族，其选自由下述基团所组成的组：
(a)
Figure A2007800418080004C4
其中R8选自氢或者低级烷基；并且
(b)
Figure A2007800418080004C5
其中R1、R2以及R3各自独立的选自氢，羟基，CF3，NO2，N3，卤素，低级烷基，低级烷氧基，低级烷氨基，烷氧烷氧基，烷基氨基烷氧基苯基，硫苯基，呋喃基，吡嗪基，被取代的吡嗪基，以及吗啉基；并且R12选自氢或者低级烷基。
8.根据权利要求4所述的化合物，其中B是一个直接的键，或者是直链的或者支链的、取代的或者未被取代的烷基，取代的或者未被取代的烯基，取代的或者未被取代的炔基，芳基烷基，芳基烯基，芳基炔基，异芳基烷基，异芳基烯基，异芳基炔基，杂环烷基，杂环烯基，杂环炔基，芳基，异芳基，杂环，环烷基，环烯基，烷基芳基烷基，烷基芳基烯基，烷基芳基炔基，烯基芳基烷基，烯基芳基烯基，烯基芳基炔基，炔基芳基烷基，炔基芳基烯基，炔基芳基炔基，烷基异芳基烷基，烷基异芳基烯基，烷基异芳基炔基，烯基异芳基烷基，烯基异芳基烯基，烯基异芳基炔基，炔基异芳基烷基，炔基异芳基烯基，炔基异芳基炔基，烷基杂环烷基，烷基杂环烯基，烷基杂环炔基，烯基杂环烷基，烯基杂环烯基，烯基杂环炔基，炔基杂环烷基，炔基杂环烯基，炔基杂环炔基，烷基芳基，烯基芳基，炔基芳基，烷基异芳基，烯基异芳基，或者炔基异芳基，其中一个或者多个亚甲基可以被O、S、S(O)、SO2、N(R8)、C(O)、取代的或者未被取代的芳基、取代的或者未被取代的异芳基、取代的或者未被取代的杂环中断或者终止，其中R8如权利要求6中所定义。
9.根据权利要求4所述的化合物，其中B是一个直链烷基，烯基，炔基，芳基烷基，芳基烯基，芳基炔基，异芳基烷基，异芳基烯基，异芳基炔基，杂环烷基，杂环烯基，杂环炔基，芳基，异芳基，杂环，环烷基，环烯基，烷基芳基烷基，烷基芳基烯基，烷基芳基炔基，烯基芳基烷基，烯基芳基烯基，烯基芳基炔基，炔基芳基烷基，炔基芳基烯基，炔基芳基炔基，烷基异芳基烷基，烷基异芳基烯基，烷基异芳基炔基，烯基异芳基烷基，烯基异芳基烯基，烯基异芳基炔基，炔基异芳基烷基，炔基异芳基烯基，炔基异芳基炔基，烷基杂环烷基，烷基杂环烯基，烷基杂环炔基，烯基杂环烷基，烯基杂环烯基，烯基杂环炔基，炔基杂环烷基，炔基杂环烯基，炔基杂环炔基，烷基芳基，烯基芳基，炔基芳基，烷基异芳基，烯基异芳基，或者炔基异芳基，其中一个或者多个亚甲基可以被-O-、-N(R8)-、-C(O)-、C(O)N(R8)-、或者-C(O)O-所中断或者终止，其中R8如权利要求6中所定义。
10.根据权利要求4所述的化合物，其中B具有1-24个原子，优选具有4-24个原子，优选具有4-18个原子，更加优选具有4-12个原子，并且最优选具有大约4-10个原子。
11.根据权利要求4所述的化合物，其中B选自直链C1-C10烷基，C1-C10烯基，C1-C10炔基，C1-C10烷氧基，烷氧基C1-C10烷氧基，C1-C10烷氨基，烷氧基C1-C10烷氨基，C1-C10烷基羰基氨基，C1-C10烷氨基羰基，芳氧基C1-C10烷氧基，芳氧基C1-C10烷氨基，芳氧基C1-C10烷氨基羰基，C1-C10-烷氨基烷氨基羰基，C1-C10烷基(N-烷基)氨基烷基-氨基羰基，烷氨基烷基氨基，烷基羰基氨基烷氨基，烷基(N-烷基)氨基烷氨基，(N-烷基)烷基羰基氨基烷氨基，烷氨基烷基，烷氨基烷氨基烷基，烷基哌嗪基烷基，哌嗪基烷基，烷基哌嗪基，烯基芳氧基C1-C10烷氧基，烯基芳氨基C1-C10烷氧基，烯基芳基烷氨基C1-C10烷氧基，烯基芳氧基C1-C10烷氨基，烯基芳氧基C1-C10烷氨基羰基，哌嗪基烷基芳基，异芳基C1-C10烷基，异芳基C2-C10烯基，异芳基C2-C10炔基，异芳基C1-C10烷氨基，异芳基C1-C10烷氧基，异芳氧基C1-C10烷基，异芳氧基C2-C10烯基，异芳氧基C2-C10炔基，异芳氧基C1-C10烷氨基，异芳氧基C1-C10烷氧基。
12.根据权利要求4所述的化合物，其中C是一个锌结合半族，
其选自由下述截团所组成的组：
(a)
Figure A2007800418080007C1
其中W是O或者S；Y是缺失，N，或者CH；Z是N或者CH；R7以及R9各自独立的选自氢，羟基，脂肪族，假定如果R7与R9同时存在，则R7与R9其中之一必须是羟基，并且如果Y是缺失，则R9一定是羟基；并且R8是氢或者是脂肪族基团；
(b)
Figure A2007800418080007C2
其中W是O或者S；J是O，NH或者NCH3；并且R10是氢或者是低级烷基；
(c)
Figure A2007800418080007C3
其中W是O或者S；Y1以及Z1各自独立的选自N，C或者CH；并且
(d)
Figure A2007800418080007C4
其中Z，Y以及W如前述所定义；R11以及R12各自独立的表示氢或者脂肪族；R1、R2以及R3各自独立的选自氢，羟基，氨基，卤素，烷氧基，烷氨基，二烷氨基，CF3，CN，NO2，磺酰基，酰基，脂肪族，取代的脂肪族，芳基，取代的芳基，异芳基，取代的异芳基，杂环以及取代的杂环。
13.根据权利要求4所述的化合物，其中C是锌结合半族，其选自由下述基团所组成的组：
(a)其中R8选自氢或者低级烷基；并且
(b)
Figure A2007800418080008C2
其中R1、R2以及R3各自独立的选自氢，羟基，CF3，NO2，卤素，低级烷基，低级烷氧基，低级烷氨基，烷氧烷氧基，烷基氨基烷氧基，苯基，硫苯基，呋喃基，吡嗪基，被取代的吡嗪基，以及吗啉基；并且R12选自氢或者低级烷基。
14.根据权利要求4所述的化合物，其中B是直接的键，或者是直链的或者支链的、取代的或者未被取代的烷基，取代的或者未被取代的烯基，取代的或者未被取代的炔基，芳基烷基，芳基烯基，芳基炔基，异芳基烷基，异芳基烯基，异芳基炔基，杂环烷基，杂环烯基，杂环炔基，芳基，异芳基，杂环，烷基芳基烷基，烷基芳基烯基，烷基芳基炔基，烯基芳基烷基，烯基芳基烯基，烯基芳基炔基，炔基芳基烷基，炔基芳基烯基，炔基芳基炔基，烷基异芳基烷基，烷基异芳基烯基，烷基异芳基炔基，烯基异芳基烷基，烯基异芳基烯基，烯基异芳基炔基，炔基异芳基烷基，炔基异芳基烯基，炔基异芳基炔基，烷基杂环烷基，烷基杂环烯基，烷基杂环炔基，烯基杂环烷基，烯基杂环烯基，烯基杂环炔基，炔基杂环烷基，炔基杂环烯基，或者炔基杂环炔基，其中一个或者多个亚甲基可以被O、S、S(O)、SO2、N(R8)、C(O)、取代的或者未被取代的芳基、取代的或者未被取代的异芳基、取代的或者未被取代的杂环中断或者终止；其中R8如权利要求12中所定义。
15.根据权利要求4所述的化合物，其中B是一个直链烷基，烯基，炔基，芳基烷基，芳基烯基，芳基炔基，异芳基烷基，异芳基烯基，异芳基炔基，杂环烷基，杂环烯基，杂环炔基，芳基，异芳基，杂环，烷基芳基烷基，烷基芳基烯基，烷基芳基炔基，烯基芳基烷基，烯基芳基烯基，烯基芳基炔基，炔基芳基烷基，炔基芳基烯基，炔基芳基炔基，烷基异芳基烷基，烷基异芳基烯基，烷基异芳基炔基，烯基异芳基烷基，烯基异芳基烯基，烯基异芳基炔基，炔基异芳基烷基，炔基异芳基烯基，炔基异芳基炔基，烷基杂环烷基，烷基杂环烯基，烷基杂环炔基，烯基杂环烷基，烯基杂环烯基，烯基杂环炔基，炔基杂环烷基，炔基杂环烯基，或者炔基杂环炔基，其中一个或者多个亚甲基可以被-O-、-N(R8)-、-C(O)-、C(O)N(R8)-、或者-C(O)O-所中断或者终止，其中R8如权利要求12中所定义。
16.根据权利要求4所述的化合物，其中B选自直链C1-C10烷基，C1-C10烯基，C1-C10炔基，C1-C10烷氧基，烷氧基C1-C10烷氧基，C1-C10烷氨基，烷氧基C1-C10烷氨基，C1-C10烷基羰基氨基，C1-C10烷氨基羰基，芳氧基C1-C10烷氧基，芳氧基C1-C10烷氨基，芳氧基C1-C10烷氨基羰基，C1-C10-烷氨基烷氨基羰基，C1-C10烷基(N-烷基)氨基烷基-氨基羰基，烷氨基烷基氨基，烷基羰基氨基烷氨基，烷基(N-烷基)氨基烷氨基，(N-烷基)烷基羰基氨基烷氨基，烷氨基烷基，烷氨基烷氨基烷基，烷基哌嗪基烷基，哌嗪基烷基，烷基哌嗪基，烯基芳氧基C1-C10烷氧基，烯基芳氨基C1-C10烷氧基，烯基芳基烷氨基C1-C10烷氧基，烯基芳氧基C1-C10烷氨基，烯基芳氧基C1-C10烷氨基羰基以及哌嗪基烷基芳基。
17.一种药物组合物，其包括作为活性成分的权利要求1或4所述的化合物以及药物可接受性载体。
18.为需要接受治疗的宿主治疗细胞增殖性疾病的方法，所述方法包括向所述宿主施用治疗有效剂量的权利要求17所述的药物组合物。
19.为需要接受治疗的宿主治疗和/或预防免疫应答或者免疫介导的应答以及疾病的方法，所述方法包括向所述宿主施用治疗有效剂量的权利要求17所述的药物组合物。
20.为需要接受治疗的宿主治疗神经退变性疾病的方法，所述方法包括向所述宿主施用治疗有效剂量的权利要求17所述的药物组合物。
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