CN101632639B

CN101632639B - 替硝唑脂质体注射剂及其制备方法

Info

Publication number: CN101632639B
Application number: CN2009101439176A
Authority: CN
Inventors: 邓菊娟
Original assignee: 邓菊娟
Current assignee: Hainan Lingkang Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2009-06-03
Filing date: 2009-06-03
Publication date: 2011-01-19
Anticipated expiration: 2029-06-03
Also published as: CN101632639A

Abstract

本发明提供一种替硝唑脂质体注射剂及其制备方法。所述的替硝唑脂质体注射剂，其特征在于由如下重量份组分制成：替硝唑1份，磷脂2～10份，胆固醇0.5～3份，吐温80 2～5份，脱氧胆酸钠1～2份。本发明通过特定辅料和原辅料配比，采用逆相蒸发法制成本发明的替硝唑脂质体注射剂，取得了解决替硝唑注射剂的稳定性和析晶问题的令人意外的发明效果。

Description

替硝唑脂质体注射剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种脂质体制剂，具体涉及替硝唑脂质体注射剂及其制备方法，属于医药技术领域。

背景技术

替硝唑(tinidazole)，化学名称为：2-甲基-1-[2-(乙基磺酰基)乙基]-5-硝基-1H-咪唑，分子式：C₈H₁₃N₃O₄S，分子量：247.28，结构式为：

替硝唑为新一代硝基咪唑类抗厌氧菌药物，具有广谱的抗原虫和抗厌氧菌的作用，对脆弱拟杆菌等拟杆菌属、梭杆菌属、梭菌属、消化球菌、消化链球菌、韦容球菌属及加得纳菌等具抗菌活性，2～4mg/L的浓度可抑制大多数厌氧菌；微需氧菌、幽门螺杆菌对其敏感；对阴道滴虫的MIC与甲硝唑相仿，其代谢物对加得纳菌的活性较替硝唑为强。

替硝唑的作用机制尚未完全阐明，厌氧菌的硝基还原酶在敏感菌株的能量代谢中起重要作用，硝基被还原成一种细胞毒，从而作用于细菌的DNA代谢过程，促使细菌死亡。耐药菌往往缺乏硝基还原酶而对本品耐药。替硝唑抗阿米巴原虫的机制为抑制其氧化还原反应反应，使原虫的氮链发生断裂，从而杀死原虫。临床上适用于各种厌氧菌感染，如败血症、骨髓炎、腹腔感染、盆腔感染、肺支气管感染、肺炎、鼻窦炎、皮肤蜂窝组织炎、口腔感染及术后伤口感染；用于结肠直肠手术、妇产科手术及口腔手术等的术前预防用药。

目前，替硝唑已有注射液批准上市，但替硝唑微溶于水，制备输液时需要大量的有机溶媒和其他助溶剂，造成刺激性大，并且替硝唑在溶液中不稳定，低温下容易析晶，有效期短。

本发明人经过长期认真的研究，意想不到的发现将靶向给药系统的一种新剂型脂质体应用于替硝唑注射制剂中，不仅能取得靶向制剂的药剂效果，而且还解决了替硝唑注射剂的稳定性和析晶问题，从而完成了本发明。

脂质体(liposomes)最初是由英国学者Bangham和Standish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层泡囊，每层均为脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约4nm，后来将这种类似生物膜结构的双分子小囊成为脂质体。

脂质体研究是当前一个十分活跃的领域，脂质体最早是指天然脂类化合物悬浮在水中形成的具有双层封闭结构的泡囊，现在也可以由人工合成的磷脂化合物来制备。现有技术中通常将脂质体作为药物载体应用，脂质体适合体内降解、无毒性和无免疫原性，特别是大量试验数据证明脂质体作为药物载体可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用，并减少药物剂量等优点。

发明内容

针对目前的替硝唑注射液不稳定，长期放置易析晶的问题，本发明的目的在于提供一种稳定的替硝唑注射剂，具体地说，通过特定辅料和原辅料配比，采用逆相蒸发法制成本发明的替硝唑脂质体注射剂，解决了替硝唑注射剂上述存在的问题。

本发明解决的技术方案如下：

本发明提供一种替硝唑脂质体注射剂，其特征在于由如下重量份组分制成：替硝唑1份，磷脂2～10份，胆固醇0.5～3份，吐温802～5份，脱氧胆酸钠1～2份。

作为优选实施方案，上述所述的替硝唑脂质体注射剂，其特征在于由如下重量份组分制成：替硝唑1份，磷脂4～7.5份，胆固醇0.5～2.5份，吐温802～5份，脱氧胆酸钠1～1.25份。

本发明上述所述的替硝唑脂质体注射剂，如果需要，其还可以包括4.5～37.5重量份的渗透压调节剂。等渗调节剂为调节药液和血浆具有相同渗透压的溶液，50ml以上输液制剂中的渗透压应为等渗或偏高渗，不会引起血象的任何异常变化。所述的渗透压调节剂，没有特别限制，可以是药学上常规的注射剂用的渗透压调节剂，常用的渗透压调节剂例如有氯化钠、葡萄糖、甘油、甘露醇、山梨醇、氯化钾、乳酸钠、氨基酸类、右旋糖酐、明胶、聚维酮类、淀粉衍生物等，本发明中的渗透压调节剂优选氯化钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、甘油、木糖醇等中的一种或几种。

进一步地，本发明上述所述的替硝唑脂质体注射剂，如果需要，其组分还可以包括使pH值调节至4.6～6.2的药学上可接受的缓冲盐溶液，例如缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种或几种。

本发明所述的替硝唑脂质体注射剂，其中所述的磷脂，可以选自天然磷脂或者合成磷脂，天然磷脂例如为蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、大豆磷脂、氢化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸或大豆磷脂酰肌醇中的一种或几种；合成磷脂例如为二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油或二月桂酰磷脂酰甘油中的一种或几种。

上述所述的替硝唑脂质体注射剂，其特征在于是通过包括如下步骤制成的：(1)将磷脂、胆固醇、脱氧胆酸钠和吐温80溶于有机溶剂中；(2)将替硝唑和渗透压调节剂溶于水或缓冲盐溶液中；(3)将上述油相和水相混合，搅拌形成水/油型(W/O型)乳剂，加热搅拌蒸发，当达到粘稠状态时，再加入适量的水或缓冲盐溶液，继续加热搅拌蒸发除去残留有机溶剂，超声，转移至高速匀质搅拌机中，搅拌匀质，即得替硝唑脂质体注射剂。

其中所述有机溶剂，例如可以选自氯仿、乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醚、苯甲醇、正己烷中的一种或几种。

作为本发明最优选的实施方案之一，提供一种替硝唑脂质体注射剂，其特征在于由如下组分制成100瓶替硝唑脂质体注射剂：替硝唑20g，氢化大豆卵磷脂200g，胆固醇10g，吐温8040g，脱氧胆酸钠20g，氯化钠90g，pH值5.0的磷酸-磷酸氢二钾缓冲液10L。

作为本发明最优选的实施方案之二，提供一种替硝唑脂质体注射剂，其特征在于由如下组分制成100瓶替硝唑脂质体注射剂：替硝唑40g，二油酰磷脂酰胆碱160g，胆固醇100g，吐温80200g，脱氧胆酸钠50g，甘露醇1000g，pH值4.6的醋酸-醋酸钠缓冲液20L。

作为本发明最优选的实施方案之三，提供一种替硝唑脂质体注射剂，其特征在于由如下组分制成100瓶替硝唑脂质体注射剂：替硝唑80g，大豆磷脂酰甘油600g，胆固醇60g，吐温80300g，脱氧胆酸钠100g，甘露醇3000g，pH值6.2的枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液20L。

本发明还提供一种制备上述替硝唑脂质体注射剂的方法，其特征在于制备步骤为：

(1)将磷脂、胆固醇、脱氧胆酸钠和吐温80溶于有机溶剂中；

(2)将替硝唑和渗透压调节剂溶于水或缓冲盐溶液中；

(3)将上述油相和水相混合，搅拌形成水/油型(W/O型)乳剂，加热搅拌蒸发，当达到粘稠状态时，再加入适量的水或缓冲盐溶液，继续加热搅拌蒸发除去残留有机溶剂，超声，转移至高速匀质搅拌机中，搅拌匀质，即得替硝唑脂质体注射剂。

上述所述的制备方法，其中所述有机溶剂，例如可以选自氯仿、乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醚、苯甲醇、正己烷中的一种或几种。

本发明提供的替硝唑脂质体注射剂，进行稳定性试验考察，在高温60℃、光照4500Lx条件下放置10天，各项检测指标均无明显变化；在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下加速试验6个月，各项检测指标没有明显变化；在高温25℃、相对湿度60％±10％条件下长期试验18个月，各项检测指标没有明显变化。

本发明提供的替硝唑脂质体制剂，进行急性毒性试验、异常毒性试验和热源检查，均符合规定，安全性得到证明。

本发明提供的替硝唑脂质体注射剂，与现有技术相比，具有意想不到的效果，主要优点如下：

(1)替硝唑被包裹于脂质体内，避免了长期放置的析晶，大大提高了水溶液中的稳定性，保证了产品质量；

(2)药物载体脂质体体内降解、无毒性和无免疫原性，而且可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用；

(3)采用常规的工艺设备，可工业规模、高效率生产，产品质量稳定，是一种独特和普遍适用的，低成本的工业化制备方法。

具体实施方式

以下通过实施例进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。

实施例1 替硝唑脂质体的制备

处方(100瓶)：替硝唑 20g

氢化大豆卵磷脂 200g

胆固醇 10g

聚山梨酯80 40g

脱氧胆酸钠 20g

氯化钠 90g

制备工艺

(1)将200g氢化大豆卵磷脂、10g胆固醇、20g脱氧胆酸钠和40g聚山梨酯80溶于1000ml的乙醇中；

(2)将替硝唑20g和氯化钠90g溶于8000mlpH值5.0的磷酸-磷酸氢二钠缓冲溶液中；

(3)将二者混合，搅拌，形成W/O型乳剂，加热搅拌蒸发，当混合物达到粘稠状态时，再加入2000mlpH值5.0的磷酸盐缓冲液，继续加热搅拌蒸发除去残留乙醇，超声30min，转移至高速匀质搅拌机中，搅拌匀质30min，得替硝唑脂质体注射液。

对比例1 替硝唑脂质体的制备

处方(100瓶)：替硝唑 20g

氢化大豆卵磷脂 220g

胆固醇 8g

聚山梨酯80 35g

脱氧胆酸钠 18g

氯化钠 90g

制备工艺

(1)将220g氢化大豆卵磷脂、8g胆固醇、18g脱氧胆酸钠和35g聚山梨酯80溶于1000ml的乙醇中；

(2)将替硝唑20g和氯化钠90g溶于8000mlpH值5.0的磷酸-磷酸氢二钾缓冲溶液中；

实施例2 替硝唑脂质体的制备

处方(100瓶)：替硝唑 40g

二油酰磷脂酰胆碱 160g

胆固醇 100g

聚山梨酯80 200g

脱氧胆酸钠 50g

甘露醇 1000g

制备工艺

(1)将160g二油酰磷脂酰胆碱、100g胆固醇、50g脱氧胆酸钠和200g聚山梨酯80溶于2000ml的叔丁醇中；

(2)将替硝唑40g和甘露醇1000g溶于16LpH值4.6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中；

(3)将二者混合，搅拌，形成W/O型乳剂，加热搅拌蒸发，当混合物达到粘稠状态时，再加入4000mlpH值4.6的醋酸盐缓冲液，继续加热搅拌蒸发除去残留叔丁醇，超声30min，转移至高速匀质搅拌机中，搅拌匀质30min，得替硝唑脂质体注射液。

对比例2 替硝唑脂质体的制备

处方(100瓶)：替硝唑 40g

二油酰磷脂酰胆碱 75g

胆固醇 130g

聚山梨酯80 210g

脱氧胆酸钠 90g

甘露醇 1600g

制备工艺

(1)将75g二油酰磷脂酰胆碱、130g胆固醇、90g脱氧胆酸钠和210g聚山梨酯80溶于2000ml的叔丁醇中；

(2)将替硝唑40g和甘露醇1600g溶于16LpH值4.6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中；

实施例3 替硝唑脂质体的制备

处方(100瓶)：替硝唑 80g

大豆磷脂酰甘油 600g

胆固醇 60g

聚山梨酯80 300g

脱氧胆酸钠 100g

甘油 3000g

制备工艺

(1)将600g大豆磷脂酰甘油、60g胆固醇、100g脱氧胆酸钠和300g聚山梨酯80溶于4000ml的异丙醇中；

(2)将替硝唑80g和甘油3000g溶于18LpH值6.2的枸橼酸-枸橼酸钠缓冲溶液中；

(3)将二者混合，搅拌，形成W/O型乳剂，加热搅拌蒸发，当混合物达到粘稠状态时，再加入2000mlpH值6.2的枸橼酸盐缓冲液，继续加热搅拌蒸发除去残留异丙醇，超声30min，转移至高速匀质搅拌机中，搅拌匀质30min，得替硝唑脂质体注射液。

试验例1 包封率的测定

取实施例制备的脂质体制剂，高效液相色谱法检测替硝唑的总含量为M，选用柱色谱法分离脂质体。

取1.5g葡聚糖凝胶G-50，用pH6.8磷酸盐缓冲液浸泡溶胀12h以上，装入层析柱内(200×10mm)，用上述磷酸盐缓冲液冲洗平衡，分别取实施例1-2和对比例1-2得到的替硝唑脂质体制剂1.2ml，加入层析住顶部，用磷酸盐缓冲液50ml洗脱，流速1.0ml/min，收集的洗脱液加入破膜剂(乙醇∶苯甲醇＝6∶1)50ml，混匀，高效液相色谱法检测替硝唑的含量M₁。

包封率％＝M₁/M×100％.

表1包封率测定结果

由以上结果可知，本发明范围内的实施例处方配比制得的脂质体包封率很高，基本符合实际生产要求；而本发明范围外的对比例处方配比制得的脂质体包封率很低，和实施例相比有明显的差距，不适合生产要求。

试验例2 粒径的检测

取实施例1-3和对比例1-2制备的脂质体制剂，采用显微图像分析仪测定脂质体的粒径分布，结果如表2：

表2粒径检测结果

由以上结果可知，实施例1-3制得的脂质体显球状，粒径均匀，范围为60-200nm；对比例1-2制得的脂质体形状不定，杂乱无章，大小不一，粒径不均匀，范围为300-900nm。

稳定性考察

将以上各实施例制备的样品与上市的替硝唑注射液(山东齐都药业有限公司生产，批号20090108)在高温60℃、光照4500Lx条件下放置10天进行影响因素试验考察，结果见表1；在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下6个月，进行加速试验考察，结果见表2；在高温25℃、相对湿度60％±10％条件下18个月，进行长期试验考察，检测各项质量指标的变化，结果见表3。

表1影响因素结果

表2加速试验结果

表3长期试验结果

由以上结果发现加速3月、6月，长期12月、18月时上市的替硝唑注射液澄明度不符合规定，pH值下降较大，含量降低明显，有关物质升高；而本发明制备的样品外观性状没有明显变化，为无色澄明液体，澄明度、pH值、含量和有关物质也没有明显的变化。说明本发明制备的样品长期贮存质量稳定性更好。

已经根据优选实施例对本发明作了描述。应当理解的是前面的描述和实施例仅仅为了举例说明本发明而已。在不偏离本发明的精神和范围的前提下，本领域技术人员可以设计出本发明的多种替换方案和改进方案，其均应被理解为在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种替硝唑脂质体注射剂，其特征在于由如下重量份组分制成：替硝唑1份，磷脂2～10份，胆固醇0.5～3份，吐温80 2～5份，脱氧胆酸钠1～2份，渗透压调节剂4.5～37.5份，使pH值调节至4.6～6.2的药学上可接受的缓冲盐溶液。

2.根据权利要求1所述的替硝唑脂质体注射剂，其特征在于由如下重量份组分制成：替硝唑1份，磷脂4～7.5份，胆固醇0.5～2.5份，吐温80 2～5份，脱氧胆酸钠1～1.25份，渗透压调节剂4.5～37.5份，使pH值调节至4.6～6.2的药学上可接受的缓冲盐溶液。

3.根据权利要求1-2任一项所述的替硝唑脂质体注射剂，其特征在于所述的渗透压调节剂选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、甘油、木糖醇中的一种或几种。

4.根据权利要求1-2任一项所述的替硝唑脂质体注射剂，其特征在于所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种或几种。

5.根据权利要求1-2任一项所述的替硝唑脂质体注射剂，其特征在于磷脂选自天然磷脂或者合成磷脂。

6.根据权利要求5所述的替硝唑脂质体注射剂，其中所述的天然磷脂为蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、大豆磷脂、氢化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸或大豆磷脂酰肌醇中的一种或几种；所述的合成磷脂为二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油或二月桂酰磷脂酰甘油中的一种或几种。

7.根据权利要求1-2任一项所述的替硝唑脂质体注射剂，其特征在于是通过包括如下步骤制成的：(1)将磷脂、胆固醇、脱氧胆酸钠和吐温80溶于有机溶剂中成油相；(2)将替硝唑和渗透压调节剂溶于水或缓冲盐溶液中成水相；(3)将上述油相和水相混合，搅拌形成水/油型(W/O型)乳剂，加热搅拌蒸发，当达到粘稠状态时，再加入缓冲盐溶液，继续加热搅拌蒸发除去残留有机溶剂，超声，转移至高速匀质搅拌机中，搅拌匀质，即得替硝唑脂质体注射剂。

8.根据权利要求7所述的替硝唑脂质体注射剂，其中所述有机溶剂选自氯仿、乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醚、苯甲醇、正己烷中的一种或几种。

9.根据权利要求1或7所述的替硝唑脂质体注射剂，其特征在于由如下组分制成100瓶替硝唑脂质体注射剂：替硝唑20g，氢化大豆卵磷脂200g，胆固醇10g，吐温80 40g，脱氧胆酸钠20g，氯化钠90g，pH值5.0的磷酸-磷酸氢二钾缓冲液10L。

10.根据权利要求1或7所述的替硝唑脂质体注射剂，其特征在于由如下组分制成100瓶替硝唑脂质体注射剂：替硝唑40g，二油酰磷脂酰胆碱160g，胆固醇100g，吐温80 200g，脱氧胆酸钠50g，甘露醇1000g，pH值4.6的醋酸-醋酸钠缓冲液20L。

11.根据权利要求1或7所述的替硝唑脂质体注射剂，其特征在于由如下组分制成100瓶替硝唑脂质体注射剂：替硝唑80g，大豆磷脂酰甘油600g，胆固醇60g，吐温80 300g，脱氧胆酸钠100g，甘露醇3000g，pH值6.2的枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液20L。