CN101631792A

CN101631792A - 新的磷酸二酯酶抑制剂

Info

Publication number: CN101631792A
Application number: CN200880006334.2A
Authority: CN
Inventors: J·费尔丁; S·F·尼尔森; J·C·H·拉尔森; B·R·巴布
Original assignee: Leo Pharma AS
Current assignee: Combination therapy Co.
Priority date: 2007-02-28
Filing date: 2008-02-26
Publication date: 2010-01-20
Anticipated expiration: 2028-02-26
Also published as: UA98639C2; ZA200905371B; CN101631792B

Abstract

本发明涉及根据式I的化合物，其中X、A、G、E、R₁、R₂、R₃如本文所示；及其药学上可接受盐、水合物、N－氧化物或溶剂合物，所述化合物用作磷酸二酯酶抑制剂，特别是PDE4抑制剂。本发明进一步涉及所述化合物在治疗中的用途，涉及包含所述化合物的药物组合物，涉及用所述化合物治疗疾病例如皮肤疾病的方法，且涉及所述化合物在制备药剂中的用途。

Description

新的磷酸二酯酶抑制剂

发明领域

本发明涉及具有磷酸二酯酶抑制活性的新化合物，以及其作为治疗剂在治疗炎性疾病和病症中的用途。

发明背景

磷酸二酯酶是催化细胞中环AMP和/或环GMP分别水解为5-AMP和5-GMP的酶，就此，它们对于cAMP或cGMP水平的细胞调节至关重要。迄今为止已鉴别的11种磷酸二酯酶中，磷酸二酯酶(PDE)4、PDE7和PDE8对于cAMP具有选择性。PDE4是最重要的cAMP调节剂，其表达于免疫和炎症细胞如中性粒细胞、巨噬细胞和T-淋巴细胞中(Z.Huang和J.A.Mancini，Current Med.Chem.13，2006，3253-3262页)。由于cAMP是炎症应答调节中关键的第二信使，所以已发现PDE4通过调节促炎症细胞因子如TNFα、IL-2、IFN-γ、GM-CSF和LTB4来调节炎症细胞的炎症应答。因此，抑制PDE4已成为治疗如下炎性疾病的引人注意的靶点：哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、类风湿性关节炎、特应性皮炎、局限性回肠炎等(M.D.Houslay等人，Drug Discovery Today 10(22)，2005，1503-1519页)。由于特应性皮炎(AD)患者具有增强的PDE-活性，故PDE4-抑制似乎也是AD的可行治疗(Journal of Investigative Dermatology(1986)，87(3)，372-6)。

PDE4基因家族至少由四个基因组成：A、B、C和D，其具有较高程度的同源性(V.Boswell Smith和D.Spina，Curr.Opinion Investig.Drugs6(11)，2006，1136-1141页)。该4种PDE4亚型差异性地表达于不同的组织和细胞类型中。因此，PDE4B主要表达于单核细胞和中性粒细胞中，而不在皮质和上皮细胞中表述，而PDE4D表达于肺、皮质、小脑和T-细胞中(C.Kroegel和M.Foerster，Exp.Opinion Investig.Drugs 16(1)，2007，109-124页)。已推测，脑中PDE4D抑制与临床上施用PDE4抑制剂时发现的不良作用相关，主要是恶心和呕吐，而PDE4B抑制与抗炎效应相关(B.Lipworth，Lancet 365，2005，167-175页)。然而，并不认为迄今开发的PDE抑制剂对四种PDE4亚型的任意一种是特异性的。

已研究了PDE4抑制剂对炎性疾病的治疗效应，主要是哮喘、炎性肠病和COPD。其中第一个是茶碱，其是弱的非选择性磷酸二酯酶抑制剂，用于治疗呼吸系统疾病如哮喘和COPD。然而，用茶碱治疗可产生轻度和严重不良反应，例如心率失常和痉挛，限制了茶碱的临床应用(Kroegel和Foerster，如上)。由于磷酸二酯酶仍然是抗炎治疗引人注意的靶点，所以在临床环境中已开发并研究一些其它更有选择性的PDE4抑制剂。许多一代PDE4抑制剂如咯利普兰的开发由于剂量限制性副作用、主要是恶心和呕吐而终止。具有明显较少显著副作用的二代PDE4抑制剂目前正在进行临床试验(Houslay，如上)。

最近开发的PDE-4抑制剂例如公开于EP 0771794和EP 0943613中。WO 96/31476公开了结构上不同的4-取代-3，5-二氯吡啶类，其是环AMP磷酸二酯酶抑制剂。

继续需要开发新型PDE4抑制剂，其具有更有利的治疗窗，即较少副作用，而保留其抗炎治疗效应。选择性PDE4抑制剂、包括以治疗特应性皮炎和银屑病为目标的这类抑制剂的临床前和临床试验的综述最近在Inflammation & Allergy：Drug Targets，2007，6(1)，17-26中给出。

发明概述

发明人出人意料地发现：本发明的新化合物显示PDE4抑制活性，且可用作以下疾病的治疗剂：炎性变应性疾病如支气管哮喘、变应性鼻炎和肾炎；自身免疫性疾病如类风湿性关节炎、多发性硬化、局限性回肠炎和全身性红斑狼疮；中枢神经系统疾病如抑郁、健忘和痴呆；与由心力衰竭、休克和脑血管疾病等引起的局部缺血回流相关的器官病变；胰岛素抵抗性糖尿病；创伤；AIDS等。

本发明的化合物还可有益于预防、治疗或改善多种疾病，如皮肤疾病或病症，如增殖性和炎性皮肤疾病，且尤其是银屑病、表皮炎症、脱发病、皮肤萎缩、类固醇诱发的皮肤萎缩、皮肤老化、光皮肤老化(photo skinaging)、痤疮、皮炎、特应性皮炎、脂溢性皮炎、接触性皮炎、荨麻疹、搔痒症和湿疹。

相应地，本发明涉及根据式I的化合物，

其中m和n独立地表示0、1、2、3、4、5、6或7；

其中G和E独立地表示硫、氧、-N＝、-N(R₅)-或-N(R₅)C(O)-，且

R₁和R₂与其连接的碳原子一起形成不饱和碳环或包含一或两个选自氧、硫、-S(O)-、-S(O)₂-、-N(R₅)-的杂原子的杂环，在所述不饱和碳环或杂环中的一或多个碳原子任选被一或多个相同或不同的选自R₄的取代基取代；或者

其中G和E独立地表示硫、氧、-N＝、-N(R₅)-或-N(R₅)C(O)-，且

R₁和R₂与其连接的碳原子一起形成饱和碳环，所述饱和碳环中的一或多个碳原子任选被一或多个相同或不同的选自R₄的取代基取代，条件是当G是氧时，m和n不都是0，且进一步地条件是，当G和E都是氧时，m和n之和是6或大于6；

R₃是卤素、羟基、烷基、链烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷硫基、甲酰基、烷氧基羰基、烷基羰基或氨基羰基；

R₄是氢、氨基、硫代(thioxo)、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤素、氧代、硫杂或羟基；

R₅是氢、烷基、卤代烷基、烷基羰基、羟基烷基、烷氧羰基、烷基磺酰基、烷基氨基磺酰基或氨基磺酰基；

X是键、-CH₂-或-NH-；

A是芳基、环烷基、环烯基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环烷基或杂环烯基，任选被一或多个相同或不同的选自R₄的取代基取代；及其药学上可接受盐、水合物、N-氧化物或溶剂合物。

另一方面，本发明涉及药物组合物，其包含如上定义的通式I化合物以及药学上可接受的媒介物或赋形剂或一种或多种药学上可接受的载体，以及任选一或多种其它治疗活性化合物。

再另一方面，本发明涉及如上定义的式I化合物及其药学上可接受盐、水合物、N-氧化物或溶剂合物，其用于预防、治疗或改善皮肤疾病或病症，或者急性或慢性皮肤创伤疾患。

再另一方面，本发明涉及预防、治疗或改善皮肤疾病或病症或者急性或慢性皮肤创伤疾患的方法，所述方法包括对患有至少一种所述疾病的人施用有效量的一或多种如上定义的式I化合物及其药学上可接受盐、水合物、N-氧化物或溶剂合物；以及任选药学上可接受载体或者一或多种赋形剂，且任选与其它治疗活性化合物联合。

发明详述

术语“烃基”指仅包含氢和碳原子的基团，其可包含一或多个碳-碳双键和/或三键，且其可包含环状部分与分支或直直链部分的组合。所述烃包含1-20个碳原子，优选包含1-12，例如1-6、例如1-4、例如1-3、例如1-2个碳原子。此术语包括如下所示的烷基、链烯基、环烷基、环烯基、炔基和芳基、芳基烷基。

术语“芳基”指芳香族碳环基团，其包含6-20个碳原子，如6-14个碳原子，优选6-10个碳原子，尤其是5-或6-元环，任选与至少一个芳环稠合的碳环，如苯基、萘基、茚基和茚满基。

术语“杂芳基”指杂环芳环基团，其包含1-6个杂原子(选自O、S和N)及1-20个碳原子，如1-5个杂原子和1-10个碳原子，如1-5个杂原子和1-6个碳原子，如1-5个杂原子和1-3个碳原子，尤其是具有1-4个选自O、S和N的杂原子的5-或6-元环，或者具有1-4个杂原子的任选稠合的二环，且其中至少一个环是芳环，例如吡啶基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、四唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻吩基、吡嗪基、异噻唑基、苯并咪唑基和苯并呋喃基。

在本发明上下文中，术语“烷基”指当一个氢原子从烃除去时得到的基团。所述烷基包含1-20，优选1-12，如1-6，如1-4个碳原子。此术语包括亚类正烷基(n-烷基)、仲烷基和叔烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基和异己基。

术语“环烷基”指饱和环烷基团，包含3-20个碳原子，优选3-10个碳原子，特别是3-8个碳原子，如3-6个碳原子，包括稠合二环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。

术语“杂环烷基”指如上所述的环烷基，其中一或多个碳原子被杂原子替代，包含1-19个碳原子，例如2-4个碳原子，进一步包含1-6个杂原子，优选1、2或3个选自O、N或S的杂原子，其可任选被氧化一次或两次，例如[1，3]二氧杂环戊烯、氧杂环丁烷、[1，3]二氧杂环戊烷、[1，3]二噁烷、四氢噻喃、四氢噻喃-1，1-二氧化物、四氢噻喃-1-氧化物、哌啶、四氢噻吩、[1，3]-二噻烷、硫杂环丁烷、[1，3]-二噻烷-1，3-二氧化物或硫杂环丁烷-1-氧化物，或者包括具有1-4个杂原子的稠合二环，其中至少一个环包含杂原子，且其中另一个环可以是例如碳环，例如异吲哚基。

术语“链烯基”指单-、二-、三-、四-或五不饱和烃基，包含2-10个碳原子，尤其是2-6个碳原子，如2-4个碳原子，例如乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基。

术语“环烯基”指单-、二-、三-或四不饱和非芳族环烃基，包含3-20个碳原子，包括稠合的二环，通常包含3-10个碳原子，如3、4或6个碳原子，例如环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基。

术语“杂环烯基”指如上所述的环烯基，其中一或多个碳原子被杂原子替代，包含1-19个碳原子，例如2-4个碳原子，进一步包含1-6个杂原子，优选1、2或3个选自O、N或S的杂原子，包括具有1-4个杂原子的稠合二环，其中至少一个环包含杂原子，且其中另一个环可以是例如碳环，例如二氢呋喃基或2，5-二氢-1H-吡咯基。

术语“芳基烷基”指与烷基基团共价连接的如上定义的芳基基团，例如苄基。

术语“杂芳基烷基”指与烷基基团共价连接的如上定义的杂芳基基团。

术语“炔基”指包含1-5个C-C三键和2-20个碳原子的烃基，通常包含2-10个碳原子，特别是2-6个碳原子，如2-4个碳原子，例如乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基或己炔基。

术语“卤素”指来自周期表中第七主族的取代基，如氟、氯、溴和碘。

术语“卤代烷基”指被一或多个如上定义的卤素原子取代的如上定义烷基基团，例如二氟甲基。

术语“羟基烷基”指被一或多个羟基取代的如上定义烷基基团，例如羟甲基、羟乙基、羟丙基。

术语“烷氧基”指式-OR′基团，其中R′是如上所示的烷基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、丁氧基等。

术语“烷氧羰基”指式-C(O)-O-R′基团，其中R′是如上所示的烷基，例如甲氧羰基、乙氧羰基、正丙氧羰基、异丙氧羰基等。

术语“烷基羰基”指式-C(O)-R′基团，其中R′是如上所示的烷基，例如乙烷酰基、乙酰基。

术语“氨基磺酰基”指式-S(O)₂-NR″，其中R′如上所示，例如-SO₂Me。

术语“杂环”包括如上定义的杂芳基、杂环烷基和杂环烯基的定义，进一步包括彼此或与环烃成环的环系统，例如2，5-二氢苯并(b)二氧杂环辛三烯(dioxocine)、2，3，5，8-四氢-[1，4]二氧杂环辛三烯、5，8-二氢-[1，4]二氧杂环辛三烯。

术语“药学上可接受盐”指式I化合物与适当的无机酸或有机酸反应制备的盐，如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲酸、乙酸、2，2-二氯乙酸、己二酸、抗坏血酸、L-门冬氨酸、L-谷氨酸、半乳糖二酸、乳酸、马来酸、L-苹果酸、酞酸、枸橼酸、丙酸、苯甲酸、戊二酸、葡萄糖酸、D-葡糖醛酸、甲磺酸、水杨酸、琥珀酸、丙二酸、酒石酸、苯磺酸、乙烷-1，2-二磺酸、2-羟基乙磺酸、甲苯磺酸、氨基磺酸或富马酸。式I化合物的药学上可接受盐也可通过与适当的碱反应制备，如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化镁、氢氧化钙、氢氧化银、氨水等，或者适当的无毒胺，如低级烷基胺例如三乙胺，羟基-低级烷基胺例如2-羟基乙胺、二-(2-羟乙基)-胺，环烷基胺例如二环己基胺，或苄基胺例如N，N′-二苄基乙二胺和二苄基胺，或者L-精氨酸或L-赖氨酸。通过与适当的碱反应得到的盐包括但不限于钠盐、胆碱盐、2-(二甲氨基)-乙醇盐、4-(2-羟乙基)-吗啉盐、L-赖氨酸盐、N-(2-羟乙基)-吡咯烷盐、乙醇胺盐、钾盐、四丁基铵盐、苄基三甲基铵盐、十六烷基三甲基铵盐、四甲基铵盐、四丙基铵盐、三(羟甲基)氨基甲烷盐、N-甲基-D-葡萄糖胺盐、银盐、苯索氯铵(benzethonium)盐和三乙醇胺盐。

术语“溶剂合物”指由化合物例如式I化合物和溶剂例如醇、甘油或水相互作用形成的物质，其中所述物质是固体形式。当水是溶剂时，所述物质是指水合物。

本发明的实施方案

在本发明的一个或多个实施方案中，E和G都是氧。

在本发明的一个或多个实施方案中，m和n都是1。

在本发明的一个或多个实施方案中，m和n都是0。

在本发明的一个或多个实施方案中，R₁和R₂与其连接的碳原子一起形成包含一或两个选自-O-、-S-、-S(O)-、-S(O₂)-、-N＝和-N(R₅)-的杂原子的杂环；杂环中的一或多个碳原子任选被一或多个相同或不同的选自R₄的取代基取代。

在本发明的一个或多个实施方案中，R₁和R₂与其连接的碳原子一起形成包含一或两个选自-O-、-S-、-S(O)-、-S(O₂)-和-N(R₅)-的杂原子的杂环烷基环；杂环烷基环中的一或多个碳原子任选被一或多个相同或不同的选自R₄的取代基取代。

在本发明的一个或多个实施方案中，R₁和R₂与其连接的碳原子一起形成4-、5-或6-元杂环，尤其是6-元杂环。

在本发明的一个或多个实施方案中，杂环是四氢吡喃、氧杂环丁烷、[1，3]二氧杂环戊烷、[1，3]二噁烷、四氢噻喃、四氢噻喃-1，1-二氧化物、四氢噻喃-1-氧化物、哌啶、四氢噻吩、[1，3]-二噻烷、硫杂环丁烷、[1，3]-二噻烷-1，3-二氧化物、硫杂环丁烷-1-氧化物或硫杂环丁烷-1，1-二氧化物。

在本发明的一个或多个实施方案中，由R₁和R₂与其连接的碳原子一起形成的杂环在所述环中包含一个杂原子或两个杂原子。

在本发明的一个或多个实施方案中，杂原子位于杂环的4位。杂原子可以是例如O。

在本发明的一个或多个实施方案中，一个或多个杂原子是氧、硫、-S(O)-或-S(O)₂-。

在本发明的一个或多个实施方案中，A表示杂芳基或杂芳基烷基。

在本发明的一个或多个实施方案中，A表示吡啶基、吡嗪基或喹啉基。

在其它实施方案中，A可以表示苯基。

在本发明的一个或多个实施方案中，A被卤素取代，尤其是被氯、氟、溴和碘取代。

在本发明的一个或多个实施方案中，R₃表示C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基或卤素。

在本发明的一个或多个实施方案中，R₃表示甲氧基或乙氧基。

在本发明的一个或多个实施方案中，X是-CH₂-或-NH-。

在本发明的一个或多个实施方案中，A是4-(3，5-二氯吡啶基)。

在本发明的一个或多个实施方案中，式I化合物由式Ia或Ib表示

其中X、A、G、E、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、m和n如上文定义。

在本发明具体的实施方案中，当R₃表示C_1-6烷氧基时，X＝-NH-。

本发明包括所有实施方案，其中X、A、G、E、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅以本文所述的任意方式组合。

特别地，式I化合物可选自以下化合物之一：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-基)乙酮(化合物101)，

N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-甲酰胺(化合物102)，

2-(3，5-二氯-1-氧化-吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-基)乙酮(化合物103)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-4′，5′-二氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，3′-(2H)-噻吩]-4-基)乙酮(化合物104)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-基)乙酮(化合物105)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-1′-[甲氧基羰基]-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-基)乙酮(化合物106)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-1′-[甲磺酰基]-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-基)乙酮(化合物107)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-1′-乙酰基-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-基)乙酮(化合物108)

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-1′-甲基-螺[1，5-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-基)乙酮(化合物109)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物110)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃-1′-氧化物]-4-基)乙酮(化合物111)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃-1′，1′-二氧化物]-4-基)乙酮(化合物112)，或者

2-(3，5-二氯-1-氧化-吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃-1′，1′-二氧化物]-4-基)乙酮(化合物113)；

2-(3-溴吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物114)；

2-(3-溴-吡嗪-2-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物115)；

2-(-吡嗪-2-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物116)；

2-(-吡啶-4-基-)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物117)；

2-(喹啉-4-基-)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物118)；

2-(2，6-二氯-苯基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物119)；

2-(2-氯-苯基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物120)；

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，3′-氧杂环丁烷]-6-基}乙酮(化合物121)；

2-(3，5-二氯-1-氧化-吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，3′-氧杂环丁烷]-6-基}乙酮(化合物122)；

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，3′-硫杂环丁烷]-6-基}乙酮(化合物123)；

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，3′-硫杂环丁烷-1′，1′-二氧化物]-6-基}乙酮(化合物124)；

2-(3，5-二氯吡啶-1-氧化-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，3′-硫杂环丁烷-1′，1′-二氧化物]-6-基}乙酮(化合物125)；

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，2′-(1，3-二氧杂环戊烷)]-6-基}乙酮(化合物126)；

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，4′-四氢吡喃]-6-基}乙酮(化合物127)；

-3(4H)，4′-四氢吡喃]-6-基)-乙酮(化合物128)；

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-2′，2′-二甲基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂-3(4H)，5′-[1，3]二噁烷]-6-基}乙酮(化合物129)；

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，5′-[1，3]二噁烷]-6-基}乙酮(化合物130)；

-3(4H)，5′-[1，3]二噁烷]-6-基}乙酮(化合物131)；和

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂-3(4H)，5′-[1，3]二噻烷]-6-基}乙酮(化合物132)，

及其药学上可接受盐、水合物、N-氧化物或溶剂合物。

在本发明的一个或多个实施方案中，通式I化合物具有的分子量低于800道尔顿，如低于750道尔顿，例如低于700道尔顿，或者低于650、600、550或500道尔顿。

在本发明的一个或多个实施方案中，如上文定义的式I化合物在治疗中是有用的。

式I化合物可直接通过从有机溶剂浓缩或者通过从有机溶剂或所述溶剂和有机或无机共溶剂如水的混合物结晶或重结晶以结晶形式获得。结晶可以以基本上无溶剂的形式或以溶剂合物如水合物被分离。本发明覆盖所有结晶变体和形式及其混合物。

式I化合物可包含或不包含不对称取代的(手性)碳原子，其引起异构形式的存在，例如对映体和可能的非对映体。本发明涉及所有这些异构体，其是纯净形式或其混合物(例如外消旋体)。本发明化合物和中间体的纯净立体异构形式可通过应用本领域已知操作获得。各种异构形式可通过如下物理分离法分离：选择性结晶和色谱技术，例如使用手性固定相的液相色谱法。对映体可通过其非对映体盐用旋光活性胺如l-麻黄素选择性结晶而彼此分离。或者，对映体可通过色谱技术、使用手性固定相分离。所述纯立体异构形式也可从适当的起始材料的相应纯立体异构形式得到，条件是反应立体选择性或立体特异性发生。优选地，如果希望特定的立体异构体，则所述化合物将通过立体选择性或立体特异性制备方法合成。这些方法将方便地使用手性纯起始材料。

本发明的化合物，任选与其它活性化合物组合，可用于治疗皮肤疾病或病症，或者急性或慢性皮肤创伤疾患，尤其是用于治疗增殖性和炎性皮肤疾病、银屑病、癌症、表皮炎症、脱发病、皮肤萎缩、类固醇诱发的皮肤萎缩、皮肤老化、光皮肤老化、痤疮、皮炎、特应性皮炎、脂溢性皮炎、接触性皮炎、荨麻疹、搔痒症和湿疹。

除可用于人类治疗外，本发明的化合物还可用于动物的兽医治疗，包括哺乳动物，如马、牛、羊、猪、狗和猫。

对于治疗使用，本发明的化合物通常以药物组合物形式。因此，本发明涉及包含式I化合物的药物组合物，以及任选一种或多种其它治疗活性化合物，以及药学上可接受的赋形剂或媒介物。赋形剂必须是“可接受的”，意思是与组合物的其它成分相容且对于其受者无毒。

方便地，活性成分包含制剂重量的0.05-99.9％。

在剂量单位形式中，化合物可以以适当的间隔每日施用一次或多次，然而这通常取决于患者状况并按照执业医生的处方。方便地，制剂的剂量单位包含0.1mg～1000mg，优选1mg～100mg，如5-50mg的式I化合物。

本发明化合物的适当剂量将特别取决于患者的年龄和状态、所治疗疾病的严重度和执业医生公知的其它因素。根据不同的给药方案，例如每日或每周间隔，化合物可经口、胃肠外或局部施用。一般而言，单次剂量将在0.01～400mg/kg体重范围内。化合物可以一次施用(即每日的全部剂量一次施用)，或者分为一天两次或更多次施用。

就局部治疗而言，更适合采用“使用单位”，其代表能够施用于患者的单一剂量，且其可容易地处理与包装，保持为物理及化学稳定的单位剂量，包含这类活性物质或其与固态或液态药物稀释剂或载体的混合物。

与局部使用相关的术语“使用单位”表示一个单元，即能够对患者以每平方厘米受感染面积0.1mg～10mg、优选0.2mg～1mg所讨论的活性成分局部施用的单次剂量。

同时还考虑：在某些治疗方案中，以较长间隔例如每隔一天、每周甚或更长间隔施用可能是有益的。

如果治疗涉及施用另一种治疗活性化合物，则所述化合物的有用剂量建议查阅Goodman & Gilman′s The Pharmacological Basis of Therapeutics，第9版，J.G.Hardman和L.E.Limbird(编辑)，McGraw-Hill 1995。

本发明化合物与一种或多种其它活性化合物可同时施用或连续施用。

制剂包括例如适于口服(包括缓释或定时释放)、直肠、胃肠外(包括皮下、腹膜内、肌内、关节内及静脉内)、经皮、眼部、局部、皮肤、经鼻或口腔施用的形式。所要求的制剂的局部施用是特别适宜的。

制剂可方便地以剂量单位形式呈现，且可通过药学领域公知的任何方法制备，例如如Remington，The Science and Practice of Pharmacy，第20版，2000中所公开。所有方法包括将活性成分与载体结合的步骤，载体构成一或多种辅助成分。一般而言，制剂通过将活性成分与液体载体或细分固体载体或二者均匀紧密混合制备，然后如果需要，将产物制成所需制剂。

适于口服施用的本发明制剂可以是分离的单位形式，如胶囊、小囊剂、片剂或锭剂，各包含预定量的活性成分；可以是散剂或颗粒剂形式；在水性液体或非水性液体如乙醇或甘油中的溶液或混悬液形式；或者是水包油乳剂或油包水乳剂的形式。这类油可以是食用油，如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油。用于水性混悬液的适当分散剂或悬浮剂包括合成或天然树胶，如西黄蓍胶、藻酸盐、阿拉伯胶、葡聚糖、羧甲基纤维素钠、明胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、卡波姆和聚乙烯吡咯酮。活性成分还可以以大丸、药糖剂或糊剂形式施用。

片剂可通过压制或模制活性成分和任选一或多种辅助成分来制备。压制片剂可通过在适宜的机器中压制自由流动形式如粉剂或颗粒的活性成分来制备，任选与以下物质混合：粘合剂如乳糖、葡萄糖、淀粉、明胶、阿拉伯胶、西黄蓍胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等；润滑剂如油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等；崩解剂如淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、交联羧甲基纤维素钠、淀粉羟乙酸钠、交聚维酮等；或者分散剂如聚山梨酯80。模制片剂可通过在适宜机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉状活性成分和适当载体的混合物来制备。

用于直肠施用的制剂可以是栓剂形式，其中本发明化合物与低熔点水溶性或不溶性固体混合，所述固体如可可脂、氢化植物油、聚乙二醇或聚乙二醇脂肪酸酯，而酏剂可使用棕榈酸十四烷基酯制备。

适于胃肠外施用的制剂方便地包含活性成分的无菌油性或水性制剂，其优选与受者的血液等渗，例如等渗盐水、等渗葡萄糖溶液或缓冲溶液。制剂可方便地通过例如以下方法灭菌：细菌截留滤器过滤、向制剂中添加灭菌剂、放射照射制剂或加热制剂。例如Encyclopedia of PharmaceuticalTechnology，第9卷，1994中公开的脂质体制剂也适于经胃肠外施用。

或者，式I化合物可以是无菌固体制剂，例如冷冻干燥粉末，其可于使用之前容易地立即溶解于无菌溶剂中。

经皮制剂可以是硬膏剂或贴剂形式。

适于眼部施用的制剂可以是活性成分的无菌水性制剂形式，其可以是微晶形式，例如水性微晶混悬液的形式。脂质体制剂或生物可降解聚合物系统，例如Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，第2卷，1989中所公开，也可用于呈现眼部施用的活性成分。

适于局部或眼部施用的制剂包括液体或半液体制剂，如搽剂、洗剂、凝胶剂、喷雾剂、泡沫剂、水包油或油包水乳剂如乳膏、软膏或糊剂；或者溶液或混悬液如滴剂。用于眼部治疗的组合物可优选另外包含环糊精。

对于局部施用，式I化合物可以以0.01～20％组合物重量的量存在，如0.1％～约10％，但是也可以以至多约50％组合物的量存在。

适于经鼻或口腔施用的制剂包括粉剂、自动推进和喷雾制剂，如气溶胶和喷雾器。这类制剂更详尽地公开于例如以下文献中：ModernPharmaceutics，第2版，G.S.Banker和CT.Rhodes(Eds.)，427-432页，Marcel Dekker，纽约；Modern Pharmaceutics，第3版，G.S.Banker和CT.Rhodes(Eds.)，618-619和718-721页，Marcel Dekker，纽约以及.Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，第10卷，J.Swarbrick和J.C Boylan(Eds)，191-221页，Marcel Dekker，纽约。

除上述成分外，式I化合物的制剂可包括一或多种另外的成分，如稀释剂、缓冲剂、矫味剂、着色剂、表面活性剂、增稠剂、防腐剂例如羟基苯甲酸甲酯(包括抗氧剂)、乳化剂等。

当活性成分以与药学上可接受的无毒酸或碱的盐形式施用时，优选的盐例如易溶于水或微溶于水，以便得到特定且适宜的吸收速率。

药物组合物可另外包含一或多种通常用于治疗皮肤疾病或病症的其它活性成分，例如选自糖皮质激素、维生素D和维生素D类似物、抗组胺剂、血小板活化因子(PAF)拮抗剂、抗胆碱能药物、甲基黄嘌呤类、β-肾上腺素能药物、COX-2抑制剂、水杨酸盐、吲哚美辛、氟芬那酸(flufenamate)、萘普生、替美该定、金盐(gold salt)、青霉胺、降血清胆固醇药物、类视黄醇、锌盐、水杨酸偶氮磺胺吡啶和钙调磷酸酶抑制剂。

本发明更详细地描述于以下实施例中，所述实施例不以任何方式限制如权利要求所要求的本发明范围。

制备方法

本发明的化合物可以以合成领域技术人员公知的许多方法制备。例如，式I化合物可使用下文概述的反应和技术以及合成有机化学领域已知的方法或者其由本领域技术人员所理解的变体制备。优选的方法包括但不限于以下描述的方法。反应在适于所使用的试剂和材料及适于所进行转化的溶剂中进行。并且，在以下描述的合成方法中，应当理解：所有提出的反应条件，包括溶剂的选择、反应气氛、反应温度、实验期限和后处理操作，被选择为该反应的标准条件，其易于由本领域技术人员识别。并非指定种类中的所有化合物都与一些所述方法中要求的一些反应条件相容。与反应条件相容的取代基的限制对于本领域技术人员显而易见，且可使用替代方法。

起始材料是可市售购得的已知化合物，或者它们可通过本领域技术人员公知的常规合成方法制备。

如果需要，本发明的化合物或任意中间体可使用合成有机化学家公知的标准方法纯化，例如在“Purification of Laboratory Chemicals”，第5版2003中描述的方法。起始材料是已知化合物、可市售购得或者它们可通过本领域技术人员公知的常规合成方法制备。

一般操作、制备和实施例

¹H核磁共振(NMR)光谱于300MHz记录，且¹³C NMR光谱于75.6MHz记录。相对于内标四甲基硅烷(δ＝0.00)或氯仿(δ＝7.25)或氚氯仿(δ＝76.81，¹³C NMR)，引证在指定溶剂中的化学位移值(δ，以ppm表示)。给出接近中点的多重态的数值，确定的(双峰(d)、三重峰(t)、四重峰(q))或不确定的(m)，除非引述范围。(bs)表示宽单峰。所用的有机溶剂通常是无水的。

色谱法在Merck硅胶60(0.040-0-063mm)上进行。除非另外指出，溶剂比率指的是v∶v。

以下缩写用于全文：

DCM 二氯甲烷

DMF N，N′-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲基亚砜

Et 乙基

EtOAc 乙酸乙酯

h 小时

L 升

LDA 二异丙氨基锂

LiHMDS 六甲基二硅氨基锂

m 毫

Me 甲基

MeOH 甲醇

NMR 核磁共振

Ppt 沉淀物

Rt 室温

TsCl 对甲苯磺酰氯

THF 氢呋喃

V 体积

制备型HPLC/MS

制备型HPLC/MS在配有两个Shimadzu PP150制备泵和ThermoMSQ Plus质谱仪的Dionex APS-系统中进行。柱：Waters XTerra C-18，150mm×19mm，5μm；溶剂系统：A＝水(0.1％甲酸)和B＝乙腈(0.1％甲酸)；流速＝18mL/min；方法(10min)：线性梯度法，6分钟内从10％B到100％B，于100％B再停留2分钟。根据相关离子的离子微量和PDA信号(240-400nm)，收集馏份。

分析型HPLC/MS

方法A：分析型HPLC/MS在配有P680A分析泵和Thermo MSQ Plus质谱仪的Dionex APS-系统中进行。柱：Waters XTerra C-18，150mm×4.6mm，5μm；溶剂系统：A＝水(0.1％甲酸)和B＝乙腈(0.1％甲酸)；流速＝1.0mL/min；方法(10min)：线性梯度法，6.6分钟内从10％B到100％B，于100％B再停留1.5分钟。

方法B：分析型HPLC/MS在由Waters 2795HPLC、Micromass ZQ质谱仪、Waters 996PDA组成的系统中进行。柱：Waters XTerra C-18，50mm×3.0mm，5μm；溶剂系统：A＝水∶乙腈95∶5(0.05％甲酸)和B＝乙腈(0.05％甲酸)；流速＝1.0mL/min；方法(8min)：线性梯度法，6.0分钟内从10％B到100％B，于100％B停留1分钟。

制备的一般操作：

例如，本发明的化合物可通过以下一般方法制备：

通式Ia化合物，其中R₁、R₂和R₃如上文定义，可如下制备：

式1a起始材料根据本领域熟练化学家已知的标准操作制备。根据Kaisalo等人，Synth.Commun，(1986)，16，645-48，使用BCl₃将2，3，4-三甲氧基苯甲酸在2-和3-位选择性二-脱甲基化。

随后的反应，脱保护化合物在洁净的酮、烯醇醚、缩酮或其混合物中，添加或不添加另外的催化剂如对甲苯磺酸或路易斯酸，使用微波或常规加热在室温～180℃的温度，产生化合物2a。

式2a化合物与MeI(或硫酸二甲酯)在适当的碱如K₂CO₃、KHCO₃或Et₃N存在下、在适当的溶剂如DMF、丙酮、THF或DCM中、在室温～100℃的温度反应，得到式3a化合物。

酯3a也可通过经典的酯化方法、使用醇和适当的酸例如H₂SO₄来制备。

式Ia化合物(X＝CH₂)如下获得：在适当的溶剂如THF中，在-78℃～室温的温度，用由其中A如上文所述定义的A-甲基和适当的碱如LDA或LiHMDS生成的锂碳负离子(lithio carbanions)缩合所生成的甲酯。可使用格氏试剂代替锂碳负离子。

式Ia化合物(X＝NH)如下获得：式2a化合物与(COCl)₂、SOCl₂或PCl₅在适当的溶剂如DCM或甲苯中、添加或不添加催化量的DMF、在0℃～70℃的温度反应，以提供相应的酰氯。真空蒸发溶剂后，随后进行所生成的酰氯与氮-阴离子的缩合，所述氮阴离子通过在-78℃～室温的温度添加适当的溶剂如THF中的适当的碱如NaH、LDA或LiHMDS于A-NH₂中生成，其中A如上文所述定义。

通式Ib化合物，其中R₁、R₂和R₃如上文定义，可如下制备：

使用标准操作酯化1b，例如MeOH和H₂SO₄，得到酯2b。

使用3b(X＝Br、I、OTs)、在适当的碱如K₂CO₃存在下、在适当的溶剂如DMSO中、在室温～120℃的温度，将2b烷化，得到式4b化合物。

式Ib化合物(X＝CH₂)如下获得：在适当的溶剂如THF中，在-78℃～室温的温度，用由其中A如上文所述定义的A-甲基和适当的碱如LDA或LiHMDS生成的锂碳负离子缩合所生成的甲酯。可使用格氏试剂代替锂碳负离子。

使用标准条件(酸性或碱性)水解酯，有望得到羧酸7b，其可被转化为甲酰氯，随后如合成Ia(X＝NH)所述，与氮-阴离子(由A-NH₂生成)反应。

制备1：

7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-甲酸(化合物501)

将2，3-二羟基-4-甲氧基苯甲酸(6.04g，32.8mmol)在5，6-二氢-4-甲氧基-2H-吡喃(20mL，152mmol)中的混悬液于140℃维持三天。在室温添加乙酸乙酯(200mL)，将有机相用饱和NaHCO₃水溶液萃取(2×50mL)。水相用Et₂O洗涤(2×40mL)，用浓HCl酸化至pH＝1，用二氯甲烷萃取(2×50mL)。有机相经MgSO₄干燥。减压下蒸发，得到痕量的2，3-二羟基-4-甲氧基苯甲酸以及7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-甲酸(1.23g，14％)。

¹³C NMR(DMSO)δ164.9，148.2，146.6，134.5，123.7，117.0，107.1，106.8，64.4，56.0，35.3.

制备2：

7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-甲酸甲酯(化合物502)

将粗品7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-甲酸(2.17g，8.15mmol)、KHCO₃(2.58g，26.0mmol)和硫酸二甲酯(1.58mL，16.7mmol)在丙酮(62mL)中的混悬液于室温搅拌两天，之后将其在减压下蒸发至干燥。添加乙酸乙酯(100mL)。有机相用0.5M NaOH水溶液(6×30mL)洗涤，在减压下蒸发至干燥。将粗产物再溶解于二氯甲烷(75mL)中，经MgSO₄干燥，并在减压下蒸发至干燥。进行标准硅胶柱色谱法，得到7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-甲酸甲酯(1.87g，79％)。

¹³C NMR(CDCl₃)δ164.9，149.1，147.2，135.2，124.0，117.5，107.1，106.5，65.2，56.4，51.8，35.9.

标准操作A：

实施例1：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-基)乙酮(化合物101)

将7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-甲酸甲酯(1.80g，6.42mmol)和3，5-二氯-4-甲基吡啶(1.46g，8.99mmol)在四氢呋喃(33mL)中的溶液冷却至0℃。添加1.0M双(三甲基硅烷基)氨基锂在四氢呋喃(19.3mL，19.3mmol)中的溶液，允许反应混合物达到室温过夜。添加饱和NH₄Cl水溶液(70mL)。水相用二氯甲烷萃取(3×100mL)。合并的有机相用水(50mL)洗涤，经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准硅胶柱色谱法，随后从异丙醇重结晶，得到2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-基)乙酮(1.90g，71％)。

¹³C NMR(DMSO)δ189.1，148.2，147.7，147.0，141.2，134.5，132.8，122.0，118.0，113.0，107.8，64.4，56.3，43.5，35.2.

实施例2：

N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-甲酰胺(化合物102)

将草酰氯(92μL，1.1mmol)和催化量的N，N-二甲基甲酰胺添加到7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-甲酸(48mg，0.18mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混悬液中。室温搅拌1小时后，在减压下除去溶剂，将粗酰氯再溶解于四氢呋喃(2mL)中。将3，5-二氯吡啶-4-胺(67mg，0.40mmol)和NaH(60％分散于矿物油中，16mg，0.40mmol)在四氢呋喃(1mL)中的混悬液在室温搅拌3小时，随后将其于室温逐滴添加到含有粗酰氯的四氢呋喃溶液中。在室温已搅拌过夜后，将反应混合物用乙醚(30mL)稀释，将有机相用0.5M NaOH水溶液洗涤(3×10mL)。有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-甲酰胺(14mg，19％)。

¹³C NMR(DMSO)δ160.8，148.0，146.5，146.2，141.1，134.1，130.5，122.5，118.2，108.3，107.6，64.2，56.2，35.2.

实施例3：

2-(3，5-二氯-1-氧化-吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-基)乙酮(化合物103)

向2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-吡喃]-4-基)乙酮(41mg，0.99mmol)的二氯甲烷(0.5mL)溶液中添加30％H₂O₂(25μL)和甲基三氧铼(methyltrioxorhenium)(VII)(3mg)。将混合物于室温搅拌过夜，添加MnO₂(3mg)，再搅拌1小时。添加水(10mL)，将水相用二氯甲烷萃取(3×10mL)。合并的有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到化合物103(8mg，19％)。LC/MS(方法B)：(m/z)426.1；428.1(MH+)；RT＝2.98min；纯度(UV)＝100％。

制备3：

四氢-3，3-二甲基噻吩(化合物503)

将四氢噻吩-3-酮(10.0g，97.9mmol)、原甲酸甲酯(21.4mL，196mmol)和对甲苯磺酸一水合物(50mg，0.29mmol)在干甲醇(25mL)中的溶液回流1小时。然后，添加1.0M NaOMe的甲醇溶液(0.30mL，0.30mmol)，通过蒸馏(大气压)除去过量的甲醇和原甲酸三甲酯。减压下进一步蒸馏，得到四氢噻吩-3-酮(～0.67g，7％)和四氢-3，3-二甲氧基噻吩(～9.8g，67％)的混合物。

¹³C NMR(MeOH)δ113.01，50.11，36.90，36.11，27.72.

制备4：

7-甲氧基-4′，5′-二氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，3′-(2H)-噻吩]-4-甲酸(化合物504)

将对甲苯磺酸(54mg，0.28mmol)添加到四氢-3，3-二甲基噻吩(～9.8g，66mmol)和四氢噻吩-3-酮(～0.67g，6.6mmol)的混合物中。将油浴加热至145℃，馏出大约1当量的甲醇(2.7mL，67mmol)。将温度降低，在减压下蒸馏，得到7.04g油状物，向其中添加2，3-二羟基-4-甲氧基苯甲酸(1.00g，5.43mmol)。将混悬液在密封的反应器中暴露于微波加热(180℃，1小时)。过滤，随后经标准HPLC纯化，得到化合物504(164mg，11％)。LC/MS(方法B)：(m/z)267.2(M-1)；RT＝2.79min；纯度(UV)＝100％。

制备5：

7-甲氧基-4′，5′-二氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，3′-(2H)-噻吩]-4-甲酸甲酯(化合物505)

将7-甲氧基-4′，5′-二氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，3′-(2H)-噻吩]-4-甲酸(161mg，0.600mmol)、K₂CO₃(166g，1.20mmol)和硫酸二甲酯(74μL，0.78mmol)在丙酮(1mL)中的混悬液于50℃维持过夜。在室温添加水(15mL)，将水相用乙酸乙酯萃取(2×20mL)。有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到化合物505(24mg，14％)。

¹H NMR(CDCl₃)δ7.44(d，1H)，6.56(d，1H)，3.94(s，3H)，3.88(s，3H)，3.32(d，1H)，3.24(d，1H)，3.05(t，2H)，2.49(td，2H).

实施例4：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-4′，5′-二氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，3′-(2H)-噻吩]-4-基)乙酮(化合物104)

将7-甲氧基-4′，5′-二氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，3′-(2H)-噻吩]-4-甲酸甲酯(24mg，85μmol)和3，5-二氯-4-甲基吡啶(21mg，0.13mmol)在四氢呋喃(1mL)中的溶液冷却至0℃。添加1.0M双(三甲基硅烷基)氨基锂在四氢呋喃中的溶液(0.26mL，0.26mmol)，允许反应混合物达到室温过夜。添加饱和NH₄Cl水溶液(10mL)。水相用二氯甲烷萃取(3×10mL)。合并的有机相用水(20mL)洗涤，经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到标题化合物(12mg，34％)。

¹³C NMR(DMSO)δ189.02，148.09，147.51，147.05，140.98，134.48，132.69，127.57，122.31，112.81，107.81，56.35，43.26，37.54，36.54，25.70.

制备6：

1-乙酰基-4，4-二甲氧基-哌啶(化合物506)

将1-乙酰基-4-哌啶酮(17.0g，121mmol)、原甲酸三甲酯(26.4mL，241mmol)和对甲苯磺酸一水合物(80mg，0.42mmol)在干甲醇(34mL)中的溶液回流1小时。然后，添加1.0M NaOMe的甲醇溶液(0.42mL，0.42mmol)，通过蒸馏(大气压)除去过量的甲醇和原甲酸三甲酯。减压下进一步蒸馏，得到1-乙酰基-4，4-二甲氧基-哌啶(20.2g，89％)。

¹H NMR(DMSO)δ3.45-3.32(m，4H)，3.10(s，6H)，1.99(s，3H)，1.72-1.62(m，2H)，1.61-1.52(m，2H).

制备7：

1-乙酰基-1，2，3，6-四氢-4-甲氧基-吡啶(化合物507)

向1-乙酰基-4，4-二甲氧基-哌啶(20.2g，108mmol)中添加对甲苯磺酸一水合物(80mg，0.42mmol)。将混合物加热至160℃，馏出大约1当量的甲醇(4.38mL，108mmol)。将温度降低，在减压下蒸馏，得到1-乙酰基-4，4-二甲氧基-哌啶(1.4g，7％)和1-乙酰基-1，2，3，6-四氢-4-甲氧基-吡啶(14.2g，85％)的混合物。

¹H NMR(DMSO)δ4.68-4.62(m，1H)，4.00-3.88(m，2H)，3.59-3.49(m，2H)，3.49-3.45(m，3H)，2.19-2.12(m，1H)，2.09-2.03(m，1H)，2.03-1.96(m，3H).

制备8：

7-甲氧基-1′-乙酰基-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-甲酸(化合物508)

将2，3-二羟基-4-甲氧基苯甲酸(1.23g，6.67mmol)、1-乙酰基-4，4-二甲氧基-哌啶(1.4g，7.6mmol)和1-乙酰基-1，2，3，6-四氢-4-甲氧基-吡啶(14.2g，91.5mmol)的混合物在密封的反应器中暴露于微波加热(180℃，1小时)。过滤，随后经标准HPLC纯化，得到化合物508(0.54g，26％)。LC/MS(方法B)：(m/z)308.2(MH+)；RT＝2.27min；纯度(UV)＝95％。

制备9：

7-甲氧基-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-甲酸甲酯(化合物509)

将7-甲氧基-1′-乙酰基-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-甲酸(143mg，0.467mmol)和LiOH(224mg，9.34mmol)在水(3mL)和MeOH(3mL)中的溶液加热至75℃达5小时。在室温，将混合物用2M HCl中和，在减压下蒸发至干燥。将粗品7-甲氧基-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-甲酸[LC/MS(方法B)：(m/z)266.2(MH+)；RT＝1.57min；纯度(UV)＝82％]在1.7M HCl甲醇溶液(5mL)中回流过夜。在室温添加水(20mL)。水相用Et₂O(10mL)洗涤，添加Na₂CO₃制成碱性，用二氯甲烷萃取(3×10mL)。有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发，得到7-甲氧基-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-甲酸甲酯(75mg，57％)。

¹H NMR(DMSO)δ7.31(d，1H)，6.72(d，1H)，3.87(s，3H)，3.78(s，3H)，2.96-2.77(m，4H)，1.94-1.83(m，4H).

实施例5：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-基)乙酮(化合物105)

将7-甲氧基-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-甲酸甲酯(75mg，0.268mol)和3，5-二氯-4-甲基吡啶(65mg，0.40mmol)在四氢呋喃(2.5mL)中的溶液冷却至0℃。添加1.0M双(三甲基硅烷基)氨基锂的四氢呋喃溶液(0.80mL，0.80mmol)，允许反应混合物达到室温过夜。添加饱和NH₄Cl水溶液(10mL)。水相用二氯甲烷萃取(3×10mL)。合并的有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到化合物105(58mg，53％)。

¹H NMR(DMSO)δ8.66(s，2H)，7.38-7.36(m，1H)，6.83-6.80(m，1H)，4.62(s，2H)，3.91(s，3H)，3.02-2.91(m，4H)，2.12-1.93(m，4H).

实施例6：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-1′-[甲氧基羰基]-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-基)乙酮(化合物106)

将2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-基)乙酮(10mg，24μmol)、三乙胺(24μL，171μmol)和氯甲酸甲酯(10μL，122μmol)在二氯甲烷(200μL)中的溶液维持于室温过夜。添加水(500μL)，水相用二氯甲烷萃取(3×500μL)。有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到化合物106(2.5mg，22％)。

¹H NMR(DMSO)δ8.65(s，2H)，7.39(d，1H)，6.84(d，1H)，4.62(s，2H)，3.91(s，3H)，3.80-3.66(m，2H)，3.62(s，3H)，3.58-3.46(m，2H)，2.18-1.97(m，4H).

实施例7：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-1′-[甲磺酰基]-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-基)乙酮(化合物107)

将2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-基)乙酮(10mg，24μmol)、三乙胺(24μL，171μmol)和甲磺酰氯(10μL，122μmol)在二氯甲烷(200μL)中的溶液维持于室温过夜。添加水(500μL)，将水相用二氯甲烷萃取(3×500μL)。有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到化合物107(1.8mg，15％)。

¹H NMR(DMSO)δ8.66(s，2H)，7.45-7.38(m，1H)，6.88-6.81(m，1H)，4.62(s，2H)，3.92(s，3H)，3.50-3.36(m，4H)，2.98(s，3H)，2.29-2.11(m，4H).

实施例8：

将2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-基)乙酮(10mg，24μmol)、三乙胺(24μL，171μmol)和乙酸酐(12μL，122μmol)在二氯甲烷(200μL)中的溶液维持于室温过夜。添加水(500μL)，水相用二氯甲烷萃取(3×500μL)。有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到化合物108(7.2mg，65％)。

¹H NMR(DMSO)δ8.66(s，2H)，7.40(d，1H)，6.84(d，1H)，4.63(s，2H)，3.92(s，3H)，3.90-3.84(m，1H)，3.75-3.68(m，1H)，3.64-3.58(m，1H)，3.55-3.49(m，1H)，2.21-2.15(m，1H)，2.15-2.05(m，5H)，2.01-1.94(m，1H).

制备10：

4，4-二甲氧基四氢-(4H)-噻喃(化合物510)

将四氢-(4H)-噻喃-4-酮(15.0g，129mmol)、原甲酸三甲酯(28.3mL，258mmol)和对甲苯磺酸一水合物(67mg，0.35mmol)在甲醇(40mL)中的混合物回流1小时。将反应混合物冷却至室温，添加1M NaOMe(0.35mL，0.35mmol)，通过蒸馏(大气压)除去过量的甲醇和原甲酸三甲酯。减压下进一步蒸馏，得到4，4-二甲氧基四氢-(4H)-噻喃(20.7g，99％)。

¹H NMR(DMSO)δ3.07(s，6H)，2.56(m，4H)，1.84(m，4H).

制备11：

7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-甲酸(化合物511)

将对甲苯磺酸(97mg，0.51mmol)添加到4，4-二甲氧基四氢-(4H)-噻喃(20.7g，128mmol)中，将混合物加热至145℃，维持于此温度直至馏出大约1当量的甲醇(5.17mL，128mmol)。然后，将混合物冷却至130℃，在减压下蒸馏，得到10.1g 5，6-二氢-4-甲氧基-(2H)-噻喃[¹H NMR(DMSO)δ4.87(m，1H)，3.44(s，3H)，3.15(dt，2H)，2.72(t，2H)，2.22(m，2H)]和4，4-二甲氧基四氢-(4H)-噻喃的5∶3混合物。无需进一步纯化，将混合物添加到2，3-二羟基-4-甲氧基苯甲酸(2.00g，10.9mmol)中，将混悬液在密封的反应器中暴露于微波加热(180℃，1小时)。添加乙酸乙酯(100mL)，将有机相首先用0.5M HCl(40mL)洗涤，然后用饱和NaHCO₃水溶液萃取(2×30mL)。水相用Et₂O洗涤(2×40mL)，用浓HCl酸化至pH＝1，用二氯甲烷萃取(2×30mL)。有机相经MgSO₄干燥。减压下蒸发，得到7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-甲酸(1.86g，61％)。

¹³C NMR(DMSO)δ164.9，148.2，146.6，134.5，123.8，118.0，107.2，106.9，56.1，35.9，25.4.

制备12：

7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-甲酸甲酯(化合物512)

将7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-甲酸(570mg，2.02mmol)、K₂CO₃(558mg，4.04mmol)和硫酸二甲酯(0.25mL，2.62mmol)在丙酮(14mL)中的混悬液于50℃搅拌过夜。在室温添加水(30mL)。水相用二氯甲烷萃取(3×15mL)。合并的有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准硅胶柱色谱法，得到7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-甲酸甲酯(407mg，68％)。

¹³C NMR(DMSO)δ163.8，148.1，146.9，134.6，123.4，118.3，107.1，105.9，56.1，51.6，35.9，25.4.

实施例9：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物110)

将7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-甲酸甲酯(40mg，0.14mmol)和3，5-二氯-4-甲基吡啶(33mg，0.20mmol)在四氢呋喃(1.1mL)中的溶液冷却至0℃。添加1.0M双(三甲基硅烷基)氨基锂的四氢呋喃溶液(0.41mL，0.41mmol)，允许反应混合物达到室温过夜。添加饱和NH₄Cl水溶液(20mL)。水相用二氯甲烷萃取(3×15mL)。合并的有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(38mg，67％)。

¹³C NMR(DMSO)δ189.1，148.2，147.7，147.0，141.3，134.5，132.8，122.0，119.1，113.0，107.9，56.3，43.6，35.9，25.5.

实施例10：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃-1′-氧化物]-4-基)乙酮(化合物111)

向2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(17mg，40μmol)在二氯甲烷(0.5mL)中的溶液中，首先添加0.25M H₂O₂/乙醇(128μL，32μmol)，其次添加甲基三氧铼(VII)(1mg，4μmol)。将混合物于室温搅拌2天，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃-1′-氧化物]-4-基)乙酮(7mg，40％)。

¹H NMR(DMSO)δ8.66(s，2H)，7.42(d，1H)，6.85(d，1H)，4.63(s，2H)，3.93(s，3H)，3.17-2.94(m，4H)，2.69-2.55(m，2H)，2.36-2.24(m，2H).

实施例11：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃-1′，1′-二氧化物]-4-基)乙酮(化合物112)

向2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(11mg，26μmol)在二氯甲烷(0.25mL)中的溶液中添加间氯过苯甲酸(10mg，58μmol)，将反应于室温搅拌过夜。添加饱和NaHCO₃水溶液(1mL)，将水相用二氯甲烷萃取(2×2mL)。合并的有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃-1′，1′-二氧化物]-4-基)乙酮(5mg，42％)。

¹H NMR(CDCl₃)δ8.52(s，2H)，7.55(d，1H)，6.68(d，1H)，4.55(s，2H)，3.99(s，3H)，3.45-3.37(m，2H)，3.33-3.25(m，2H)，2.79-2.66(m，4H).

实施例12：

2-(3，5-二氯-1-氧化-吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃-1′，1′-二氧化物]-4-基)乙酮(化合物113)

向2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(10mg，23μmol)在无水乙醇(2mL)中的溶液首先添加H₂O₂(100μL，0.97mmol)，其次添加甲基三氧铼(VII)(2mg，8μmol)。将混合物于40℃搅拌过夜，随后添加5％W/V NaHSO₃水溶液(10mL)。

水相用二氯甲烷萃取(3×20mL)。合并的有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到2-(3，5-二氯-1-氧化-吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃-1′，1′-二氧化物]-4-基)乙酮(2.5mg，23％)。

¹H NMR(DMSO)δ8.64(s，2H)，7.42(d，1H)，6.85(d，1H)，4.59(s，2H)，3.92(s，3H)，3.51(m，2H)，3.31(m，2H)，2.59(m，4H).

一般操作A：

将LiHMDS(1M，在THF中，3.0eq)逐滴添加到酯512(1eq)和A-甲基(1.3eq)在无水THF中的冰冷溶液中。将反应混合物于室温搅拌12小时，添加H₂O(10mL)和饱和NH₄Cl水溶液(20mL)，然后用EtOAc萃取(3×50mL)。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤，在减压下浓缩。得到的残余物经快速柱色谱法纯化，得到酮。

实施例13：

2-(3-溴吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物114)

根据一般操作A，使用18mg 4-溴-3-甲基吡啶制备(收率：40％)

LC/MS(方法B)：(m/z)436.2(MH+)；RT＝4.17min；纯度(UV)＝100％。

实施例14：

2-(3-溴-吡嗪-2-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物115)

根据一般操作A，使用17mg 2-溴-3-甲基吡嗪制备(收率：9％)。

LC/MS(方法B)：(m/z)437.2；439.22(MH+)；RT＝4.22min；纯度(UV)＝100％。

实施例15：

2-(-吡嗪-2-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物116)

根据一般操作A，使用16mg 2-甲基吡嗪制备(收率：52％)。

LC/MS(方法B)：(m/z)359.3(MH+)；RT＝3.33min；纯度(UV)＝100％。

实施例16：

2-(-吡啶-4-基-)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物117)

根据一般操作A，使用18mg 4-甲基-吡啶制备(收率：13％)。

LC/MS(方法B)：(m/z)358.3(MH+)；RT＝2.50min；纯度(UV)＝100％。

实施例17：

2-(喹啉-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物118)

根据一般操作A，使用16mg 4-甲基喹啉制备(收率：12％)。

LC/MS(方法B)：(m/z)408.3(MH+)；RT＝3.33min；纯度(UV)＝100％。

实施例18：

2-(2，6-二氯-苯基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物119)

根据一般操作A，使用15mg 2，6-二氯甲苯制备(收率：8％)。

LC/MS(方法B)：(m/z)425.24(MH+)；RT＝5.28min；纯度(UV)＝100％。

实施例19：

2-(2-氯-苯基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物120)

将7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-甲酸甲酯(14mg)在干THF(500mL)中的溶液在Ar下冷却至0℃。添加2-氯苄基氯化镁的乙醚溶液(0.25M溶液，189μL)，除去冷却。在室温2小时后，添加另一份2-氯苄基氯化镁的乙醚溶液(0.25M溶液，189μL)。将混合物搅拌18小时，添加水，用乙酸乙酯萃取。合并的有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到化合物120(9.2％)。LC/MS(方法B)：(m/z)391.22(MH+)；RT＝4.90min；纯度(UV)＝100％。

制备13：

2，3-二羟基-4-甲氧基苯甲酸甲酯(化合物513)

将市售购得的2，3-二羟基-4-甲氧基苯甲酸(11.6g，63mmol)在无水MeOH(150mL)中的溶液在冰浴中冷却，逐滴添加浓H₂SO₄(8mL)。将反应混合物回流12小时，然后冷却至室温，在减压下除去溶剂。添加H₂O(100mL)和饱和NaHCO₃水溶液(50mL)，用EtOAc萃取(3×100mL)。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤并真空浓缩，得到化合物513，为浅黄色固体，其无需进一步纯化即用于下一步骤中。

LC-MS：R_T＝2.31min.；m/z 197.3(M-H)^-.¹H NMR(CDCl₃)：δ10.83(1H，s)，7.41(1H，d，J 9.0)，6.50(1H，d，J 8.9)，5.45(1H，s)，3.94(3H，s)，3.93(3H，s).

一般操作B：

向搅拌的化合物513和3b(1.1eq)在无水DMSO中的溶液中添加K₂CO₃(2.5eq)，将混合物在惰性气氛下于100℃搅拌4-12小时。冷却至室温后，添加冰水混合物，搅拌15分钟，然后用EtOAc萃取(3×50mL)。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤并在减压下浓缩。得到的残余物经快速柱色谱法纯化。

使用一般操作B，得到以下化合物：

制备14：

9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，3′-氧杂环丁烷]-6-甲酸甲酯(化合物514)

根据一般操作，用市售3，3-二(碘甲基)氧杂环丁烷(372mg，1.1mmol)、在DMSO(5mL)中、在K₂CO₃(345mg，2.5mmol)存在下二烷基化513(198mg，1mmol)，经柱色谱法(50-65％EtOAc/石油醚)纯化后，得到化合物514，为白色固体物质。

LC-MS：R_T＝2.40min.；m/z 281.26(M+H)⁺.¹H NMR(CDCl₃)：δ7.49(1H，d，J 8.8)，6.62(1H，d，J 8.8)，4.61(2H，d，J 6.8)，4.58(2H，d，J6.8)，4.48(4H，s)，3.90(3H，s)，3.87(3H，s).

制备15：

9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，3′-硫杂环丁烷]-6-甲酸甲酯(化合物516)

步骤A：

根据文献方法(Petrukhina，M.A.；Henck，C；Li，B.；Block，E.；Jin，J.；Zhang，S-Z.；Clerac，R.Inorg.Chem.2005，44，77-84)，3，3-二(溴甲基)硫杂环丁烷515由1，3-二溴-2，2-二(溴甲基)丙烷经两步操作获得。因此，将1，3-二溴-2，2-二(溴甲基)丙烷(7.76g，20mmol)和KSAc(2.28g，20mmol)在无水THF(30mL)中的混合物回流30小时。滤出ppt，将滤液浓缩，得到的残余物经快速柱色谱法纯化(10-25％EtOAc/石油醚)，得到硫代乙酸(2，2-(双溴甲基)-3-溴丙基)酯，为浅黄色固体物质。将硫代乙酸(2，2-(二溴甲基)-3-溴丙基)酯(1.53g，4mmol)和NaOMe(324mg，6mmol)在无水MeOH(10mL)中的混合物于0℃搅拌2小时。在真空中除去MeOH，与甲苯(2×2mL)共蒸发，得到的残余物经硅胶短垫过滤，得到3，3-二(溴甲基)硫杂环丁烷515，为浓稠油，其无需进一步纯化即使用。

步骤B：

根据一般操作，用515(962mg，3.7mmol)、在DMSO(15mL)中、在K₂CO₃(1.16g，8.4mmol)存在下二烷基化513(665mg，3.36mmol)，经柱色谱法(40-60％EtOAc/石油醚)纯化后，得到516，为白色固体物质。

LC-MS：R_T＝3.17min.；m/z 297.19(M+H)⁺.¹H NMR(CDCl₃)：δ7.49(1H，d，J 8.8)，6.63(1H，d，J 8.8)，4.30(2H，s)，4.28(2H，s)，3.90(3H，s)，3.87(3H，s)，3.11(4H，s).

制备16：

9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，2′-(1，3-二氧杂环戊烷)]-6-甲酸甲酯(化合物518)

步骤A：

根据文献方法(Valentin，M-L.；Bolte，J.Bull.Soc.Chim.Fr.1995，132，1167-71)，2，2-二(溴甲基)-1，3-二氧杂环戊烷517由二溴丙酮得到。因此，将二溴丙酮(4.04g，18.7mmol)、乙二醇(2.32g，37.4mmol)和p-TsOH(25mg)在苯(70mL)中的溶液回流12小时，同时共沸除去水。将反应混合物在减压下浓缩，添加Et₂O(50mL)，有机层用H₂O(2×50mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在减压下浓缩。得到的残余物经快速柱色谱法纯化(7-10％EtOAc/石油醚)，得到2，2-二(溴甲基)-1，3-二氧杂环戊烷(517)，为无色液体。

步骤B：

根据一般操作，用517(572mg，2.2mmol)在DMSO(10mL)中、在K₂CO₃(690mg，5mmol)存在下二烷基化513(396mg，2mmol)，经柱色谱法(45-60％EtOAc/石油醚)纯化后，得到518，为白色固体物质。

LC-MS：R_T＝2.70min.；m/z 297.18(M+H)⁺，319.16(M+Na)⁺.¹H NMR(DMSO-d₆)：δ7.34(1H，d，J 8.8)，6.76(1H，d，J 8.8)，4.11(2H，s)，4.09(2H，s)，3.94(4H，s)，3.80(3H，s)，3.75(3H，s).

制备17：

9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂-3(4H)，4′-四氢吡喃]-6-甲酸甲酯(化合物520)

步骤A：

4，4-二(对甲苯磺酰氧基甲基)四氢吡喃(519)由市售四氢吡喃-4，4-二甲酸二甲酯经两步操作获得。因此，向二酯(3.03g，15mmol)在无水甲苯(45mL)中的冰冷溶液中逐滴添加synhydride(70％，在甲苯中，19.5mL，66mmol)，将混合物于120℃搅拌3小时。将混合物冷却至室温，缓慢添加H₂O(50mL)，经硅胶(35g)浓缩。用MeOH/CH₂Cl₂的线性梯度，经快速柱色谱法，得到4，4-(二羟甲基)四氢吡喃，为白色固体物质。将二醇(1.46g，10mmol)和TsCl(4.77g，25mmol)在无水吡啶(25mL)中的混合物于室温搅拌48小时。真空除去溶剂，与甲苯共蒸发(3×10mL)。添加CH₂Cl₂(100mL)和饱和NaHCO₃水溶液(100mL)，分离各相，将有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤并在减压下浓缩。得到的残余物经快速色谱法(35-45％EtOAc/石油醚)，得到4，4-二(对甲苯磺酰氧基甲基)四氢吡喃(519)，为白色固体物质。

步骤B：

根据一般操作，用化合物519(240mg，0.53mmol)、在DMSO(3mL)中、在K₂CO₃(166mg，1.2mmol)存在下二烷基化化合物513(95mg，0.48mmol)，经柱色谱法纯化(45-65％EtOAc/石油醚)后，得到化合物520，为白色固体物质。

LC-MS：RT＝2.40min.；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ7.34(1H，d，J 8.8)，6.78(1H，d，J 8.8)，3.99(4H，s)，3.80(3H，s)，3.76(3H，s)，3.61(4H，t，J 5.5)，1.54(4H，t，J 5.5).

制备18：

9-甲氧基-2′，2′-二甲基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，5′-[1，3]二噁烷]-6-甲酸甲酯(化合物522)

步骤A：

将2，2-二(溴甲基)-1，3-丙二醇(5.0g，19.1mmol)、无水丙酮(20mL)和p-TsOH(100mg)在苯(75mL)中的溶液回流12小时，同时共沸除去水。将反应混合物在减压下浓缩，添加EtOAc(100mL)，有机层用H₂O(3×30mL)和盐水(30mL)连续洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并减压下浓缩。得到的白色固体用正戊烷(20mL)研磨，得到5，5-二(溴甲基)-2，2-二甲基-[1，3]二噁烷(521)，为无色结晶。

步骤B：

根据一般操作，用化合物521(2.0g，6.62mmol)、在DMSO(30mL)中、在K₂CO₃(2.07g，15mmol)存在下二烷基化化合物513(1.19g，6mmol)，经柱色谱法(30-40％EtOAc/石油醚)纯化后，得到化合物522，为白色固体物质。

LC-MS：R_T＝2.99min.；m/z 339.31(M+H)⁺，361.25(M+Na)⁺.¹HNMR(CDCl₃)：δ7.45(1H，d，J 8.8)，6.59(1H，d，J 8.8)，4.22(2H，s)，4.18(2H，s)，3.89(3H，s)，3.86(7H，s)，1.43(6H，s).

制备19：

9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，5′-[1，3]二噁烷]-6-甲酸甲酯(化合物524)

步骤A：

根据文献方法(Bitha，P.；Carvajal，S.G.；Citarella，R.V.；Delos Santos，E.F.；Durr，F.E.；Hlavka，J.J.；Lang，S.A.，Jr.；Lindsay，H.L.；Thomas，J.P.；Wallace，R.E.；Yang-I，L.J.Med.Chem.1989，32(9)，2063-7和Mitkin，O.D.；Wan，Y.；Kurchan，A.N.；Kutateladze，A.G.Synthesis，2001，(8)，1133-42)，由2，2-二(溴甲基)-1，3-丙二醇获得5，5-二(溴甲基)-[1，3]二噁烷(523)。因此，将2，2-二(溴甲基)-1，3-丙二醇(2.5g，9.55mmol)、甲醛(37％水溶液，3.5mL)和浓HCl(2.0mL)的溶液回流12小时。冷却至室温后，向反应混合物中添加H₂O(25mL)，用CH₂Cl₂(2×25mL)萃取。合并的有机层用饱和Na₂CO₃水溶液(25mL)和H₂O(25mL)连续洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并减压下浓缩。得到的无色液体通过¹H NMR实测为＞95％的纯度，且无需进一步纯化即使用。

步骤B：

根据一般操作，用化合物523(301mg，1.1mmol)、在DMSO(5mL)中、在K₂CO₃(345mg，2.5mmol)存在下二烷基化化合物513(198mg，1mmol)，经柱色谱法(50-65％EtOAc/石油醚)纯化后，得到化合物524，为白色固体物质。

LC-MS：R_T＝2.65min.；m/z 311.23(M+H)⁺.¹H NMR(DMSO-d₆)：δ7.37(1H，d，J 8.8)，6.81(1H，d，J 8.8)，4.80(1H，d，J 6.4)，4.78(1H，d，J 6.4)，4.07(2H，s)，4.01(2H，s)，3.81(7H，s)，3.76(3H，s).

制备20：

9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，5′-[1，3]二噻烷]-6-甲酸甲酯(化合物526)

步骤A：

根据文献方法(Mitkin，O.D.；Wan，Y.；Kurchan，A.N.；Kutateladze，A.G.Synthesis，2001，(8)，1133-42)，由化合物523经两步操作获得4，4-二(羟甲基)-[1，3]二噻烷。因此，将化合物523(1.36g，5mmol)和KSAc(1.71g，15mmol)在无水DMF(10mL)中的混合物于室温搅拌30小时。减压下除去溶剂，与甲苯共蒸发(3×5mL)。添加冰水混合物，然后用二异丙醚(2×25mL)进行萃取。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩，得到5，5-二(乙酰基硫甲基)-[1，3]二噁烷(1.32g，定量的)，为浅黄色粘稠油。其通过¹H NMR实测为＞95％的纯度，且其无需进一步纯化即使用。

将5，5-二(乙酰基硫甲基)-[1，3]二噁烷(1.32g，5mmol)在HCl水溶液(2N，25mL)中的溶液回流16小时，然后冷却至室温。逐滴添加Na₂CO₃水溶液(2M)将混合物碱化，然后用CH₂Cl₂萃取(3×40mL)。将合并的有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并减压下浓缩，得到白色固体物质，将其用热的正己烷-二异丙醚(2∶1，15mL)研磨。将白色固体过滤，得到4，4-二(羟甲基)-[1，3]二噻烷，其无需进一步纯化即使用。

将4，4-二(羟甲基)-[1，3]二噻烷(405mg，2.25mmol)和TsCI(1.29g，6.75mmol)在无水吡啶(4mL)中的混合物于室温搅拌48小时。真空中除去溶剂，与甲苯共蒸发(3×3mL)。添加CH₂Cl₂(40mL)和饱和NaHCO₃水溶液(40mL)，分离各相，将有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤并减压下浓缩。得到的残余物经快速色谱法(35-55％EtOAc/石油醚)，得到4，4-二(对甲苯磺酰氧基甲基)-[1，3]二噻烷(525)，为白色固体物质。

步骤B：

根据一般操作，用化合物525(806mg，1.65mmol)、在DMSO(7.5mL)中、在K₂CO₃(518mg，3.75mmol)存在下二烷基化化合物513(297mg，1.5mmol)，经柱色谱法(40-50％EtOAc/石油醚)纯化后，得到化合物526，为白色固体物质。

LC-MS：R_T＝3.53min.；m/z 343.14(M+H)⁺，365.12(M+Na)⁺，327.28(M-CH₃)^-.¹H NMR(DMSO-d₆)：δ7.36(1H，d，J 8.8)，6.81(1H，d，J 8.8)，4.20(2H，s)，4.14(2H，s)，3.83(2H，s)，3.81(3H，s)，3.77(3H，s)，2.85(4H，s).

一般操作C：

将LiHMDS(1M，在THF中，3.0eq)逐滴添加到酯4b和市售可得的3，5-二氯-4-甲基吡啶(1.3eq)在无水THF中的冰冷溶液中。将反应混合物于室温搅拌12小时，添加H₂O(10mL)和饱和NH₄Cl水溶液(20mL)，将混合物用EtOAc萃取(3×50mL)。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤并减压下浓缩。得到的残余物经快速柱色谱法纯化，得到酮Ib。

使用一般操作C，得到以下化合物：

实施例20：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，3′-氧杂环丁烷]-6-基}乙酮(化合物121)

根据一般操作，在THF(4mL)中、在LiHMDS(2.4mL，2.4mmol)存在下缩合3，5-二氯-4-甲基吡啶(169mg，1.04mmol)和化合物514(224mg，0.8mmol)，经柱色谱法(65-80％EtOAc/石油醚)纯化后，得到化合物121，为白色固体物质。

LC-MS：R_T＝3.24min.；m/z 410.07(M+H)⁺，408.19，410.22(M-H)^-.¹H NMR(DMSO-d₆)：δ8.66(2H，s)，7.45(1H，d，J 8.9)，6.91(1H，d，J9.0)，4.66(2H，s)，4.57(2H，s)，4.50(2H，d，J 6.5)，4.46(2H，d，J 6.5)，4.36(2H，s)，3.85(3H，s).

实施例21：

-3(4H)，3′-氧杂环丁烷]-6-基}乙酮(化合物122)

向2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，3′-氧杂环丁烷]-6-基}乙酮[121](20.5mg，50μmol)在CH₂Cl₂(1mL)中的溶液中添加30％H₂O₂(15μL)和甲基三氧铼(VII)(5mg)。将混合物搅拌18小时，添加MnO₂(5mg)，再搅拌1小时。添加CH₂Cl₂(1OmL)，将有机相用水洗涤。合并的有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到14mg产物。

LC/MS(方法B)：(m/z)426.18；428.20(MH+)；RT＝2.42min；纯度(UV)＝100％。

实施例22：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，3′-硫杂环丁烷]-6-基}乙酮(化合物123)

根据一般操作，在THF(10mL)中、在LiHMDS(5.2mL，5.2mmol)存在下缩合3，5-二氯-4-甲基吡啶(366mg，2.26mmol)和化合物516(516mg，1.74mmol)，经柱色谱法(55-65％EtOAc/石油醚)纯化后，得到化合物123，为白色固体物质。

LC-MS：R_T＝4.23min.；m/z 426.24，428.25(M+H)⁺，424.23(M-H)^-.¹H NMR(CDCl₃)：δ8.51(2H，s)，7.57(1H，d，J 9.2)，6.71(1H，d，J 9.2)，4.64(2H，s)，4.46(2H，s)，4.33(2H，s)，3.93(3H，s)，3.20(2H，d，J 9.9)，3.12(2H，d，J 9.9).

实施例23：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂-3(4H)，3′-硫杂环丁烷-1′，1′-二氧化物]-6-基}乙酮(化合物124)

向2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂-3(4H)，3′-硫杂环丁烷]-6-基}乙酮[123](42.6mg)在CH₂Cl₂(1mL)中的溶液中添加30％H₂O₂(38μL)和甲基三氧铼(VII)(5mg)。将混合物搅拌18小时，随后用水洗涤。有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到6mg产物。

LC/MS(方法B)：(m/z)458.13，460.10，462.14(MH+)；RT＝3.30min；纯度(UV)＝100％。

实施例24：

3(4H)，3′-硫杂环丁烷-1′，1′-二氧化物]-6-基}乙酮(化合物125)

向2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，3′-硫杂环丁烷]-6-基}乙酮[123](39.6mg)在CH₂Cl₂(1mL)中的溶液中添加30％H₂O₂(76μL)和甲基三氧铼(VII)(5mg)。将混合物搅拌18小时，随后添加水。有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到8.4mg产物。

LC/MS(方法B)：(m/z)474.17，476.16，478.18(MH+)；RT＝2.39min；纯度(UV)＝100％。

实施例25：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

3(4H)，2′-(1，3-二氧杂环戊烷)]-6-基}乙酮(化合物126)

根据一般操作，在THF(1.5mL)中、在LiHMDS(0.75mL，0.75mmol)存在下缩合3，5-二氯-4-甲基吡啶(53mg，0.33mmol)和化合物518(74mg，0.25mmol)，经柱色谱法(60-80％EtOAc/石油醚)纯化后，得到化合物126，为白色固体物质。

LC-MS：R_T＝3.63min.；m/z 426.18，428.16(M+H)⁺.¹HNMR(DMSO-d₆)：δ8.64(2H，s)，7.39(1H，d，J 8.8)，6.86(1H，d，J 8.9)，4.60(2H，s)，4.34(2H，s)，4.17(2H，s)，3.97(4H，s)，3.84(3H，s).

实施例26：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，4′-四氢吡喃]-6-基}乙酮(化合物127)

根据一般操作，在THF(1.5mL)中、在LiHMDS(0.85mL，0.85mmol)存在下缩合3，5-二氯-4-甲基吡啶(59mg，0.36mmol)和化合物520(85mg，0.28mmol)，经柱色谱法(60-70％EtOAc/石油醚)纯化后，得到化合物127，为白色固体物质。

LC-MS：R_T＝3.70min.；m/z 438.21，440.21(M+H)⁺，436.30，438.27(M-H)^-.¹H NMR(DMSO-d₆)：δ8.65(2H，s)，7.42(1H，d，J 8.9)，6.87(1H，d，J 9.0)，4.63(2H，s)，4.25(2H，s)，4.07(2H，s)，3.84(3H，s)，3.64(4H，t，J 5.3)，1.60(4H，t，J 5.3).

实施例27：

2-(3，5-二氯-1-氧化-吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂-3(4H)，4′-四氢吡喃]-6-基)-乙酮(化合物128)

向2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，4′-四氢吡喃]-6-基}乙酮[127](66mg，150μmol)在CH₂Cl₂(2mL)中的溶液中添加30％H₂O₂(45μL)和甲基三氧铼(VII)(10mg)。将混合物搅拌18小时，添加MnO₂(10mg)，再搅拌1小时。添加CH₂Cl₂(10mL)，有机相用水洗涤。合并的有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到5.6mg产物。

LC/MS(方法B)：(m/z)454.32；456.32(MH+)；RT＝2.80min；纯度(UV)＝100％。

实施例28：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-2′，2′-二甲基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂-3(4H)，5′-[1，3]二噁烷]-6-基}乙酮(化合物129)

根据一般操作，在THF(2mL)中、在LiHMDS(1.3mL，1.3mmol)存在下缩合3，5-二氯-4-甲基吡啶(93mg，0.58mmol)和化合物522(150mg，0.44mmol)，经柱色谱法(55-60％EtOAc/石油醚)纯化后，得到化合物129，为白色固体物质。

LC-MS：R_T＝3.95min.；m/z 468.19，470.23(M+H)⁺，466.36，468.33(M-H)^-.¹H NMR(DMSO-d₆)：δ8.65(2H，s)，7.42(1H，d，J 8.8)，6.89(1H，d，J 9.1)，4.63(2H，s)，4.33(2H，s)，4.08(2H，s)，3.84(3H，s)，3.82(4H，s)，1.39(3H，s)，1.37(3H，s).

实施例29：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

3(4H)，5′-[1，3]二噁烷]-6-基}乙酮(化合物130)

根据一般操作，在THF(6mL)中、在LiHMDS(3mL，3.0mmol)存在下缩合3，5-二氯-4-甲基吡啶(211mg，1.3mmol)和化合物524(310mg，1.0mmol)，经柱色谱法(60-80％EtOAc/石油醚)纯化后，得到化合物130，为白色固体物质。

LC-MS：R_T＝3.64min.；m/z 440.16，442.17(M+H)⁺，438.27，440.29(M-H)^-.¹H NMR(DMSO-d₆)：δ8.65(2H，s)，7.43(1H，d，J 8.9)，6.89(1H，d，J 8.9)，4.84(1H，d，J 6.1)，4.79(1H，d，J 6.1)，4.64(2H，s)，4.34(2H，s)，4.08(2H，s)，3.90(2H，d，J 11.4)，3.85(3H，s)，3.82(2H，d，J 11.2).

实施例30：

-3(4H)，5′-[1，3]二噁烷]-6-基}乙酮(化合物131)

向2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，5′-[1，3]二噁烷]-6-基}乙酮[130](100mg)在CH₂Cl₂(2mL)中的溶液中添加30％H₂O₂(120μL)和甲基三氧铼(VII)(5mg)。将混合物搅拌18小时，随后用水洗涤。有机相经MgSO₄干燥，在减压下蒸发至干燥。进行标准HPLC纯化，得到85mg产物。

LC/MS(方法B)：(m/z)456.23(MH+)；RT＝2.55min；纯度(UV)＝95％。

实施例31：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，5′-[1，3]二噻烷]-6-基}乙酮(化合物132)

根据一般操作，在THF(4mL)中、在LiHMDS(2.2mL，2.2mmol)存在下缩合3，5-二氯-4-甲基吡啶(154mg，0.95mmol)和化合物526(250mg，0.73mmol)，经柱色谱法(45-55％EtOAc/石油醚)纯化后，得到化合物132，为白色固体物质。

LC-MS：R_T＝4.39min.；/m/z 472.15，474.14(M+H)⁺.¹HNMR(DMSO-d₆)：δ8.65(2H，s)，7.42(1H，d，J 8.9)，6.88(1H，d，J 8.9)，4.64(2H，s)，4.43(2H，s)，4.24(2H，s)，3.85(3H，s)，3.84(2H，s)，2.91(4H，s).

实施例32：

PDE4测定法

将人重组PDE4(Genbank数据库编号为NM_006203)与浓度至多为10μM的实验化合物、cAMP(1×10-5M)和少量(0.021MBq)放射性标记的cAMP孵育1小时。孵育结束时，底物裂解通过AMP产物与SPA珠的结合来评估，当其与放射性示踪剂结合时产生化学发光。AMP产物抑制放射性示踪剂与珠的结合，且竞争发光信号。结果以与对照样品相比导致50％底物裂解抑制的摩尔浓度计算，并以IC₅₀(M)表示。

结果显示于下表1中。

表1

化合物 IC₅₀(PDE4)-

101 26nM

102 41nM

103 26nM

104 10nM

105 310nM

106 127nM

107 590nM

108 220nM

110 11nM

111 18nM

112 29nM

113 53nM

114 45nM

115 1410nM

116 1290nM

117 207nM

118 1800nM

119 71nM

120 310nM

121 52nM

122 50nM

123 17nM

124 104nM

125 200nM

126 67nM

127 22nM

128 11nM

129

130 40nM

131 43nM

132 26nM

实施例33：

TNF-α释放

人外周血单核细胞(PBMC)从血沉棕黄层(buffy coats)分离。将血液与盐水以1∶1的比率混合，使用Lymphoprep试管TM(Nycomed，挪威)分离PBMC。将PBMC以浓度5×105c/ml混悬于含2％胎牛血清(FCS)、青霉素/链霉素和2mm L-谷氨酰胺的RPMI1640中。将细胞与实验化合物在96孔组织培养板中预孵育30分钟，用脂多糖1mg/ml(Sigma)刺激18小时。培养基上清液中TNF-α的水平使用来自R&D系统的初级和二级生物素化抗体通过酶免疫测定法测定。结果以IC₅₀值表示，该值使用作为阳性对照的LPS刺激孔中的分泌和作为阴性对照的未刺激细胞中的分泌、由抑制曲线计算。

结果显示于下表2中。

表2

化合物 IC₅₀(PDE4)-

101 28nM

102 88nM

103 23nM

104 44nM

105 800nM

106 158nM

107 910nM

108 167nM

110 17nM

111 19nM

112 34nM

113 82nM

114 95nM

115 471nM

116 2940nM

117 286nM

118 5520nM

119 508nM

120 1250nM

121 64nM

122 20nM

123 35nM

124 135nM

125 135nM

126 111nM

127 27nM

128 9nM

130 50nM

131 16nM

132 29nM

Claims

1.通式I化合物

其中m和n独立地表示0、1、2、3、4、5、6或7；

且其中G和E独立地表示硫、氧、-N(R₅)-或-N(R₅)C(O)-，且

R₁和R₂与其连接的碳原子一起形成不饱和碳环或包含一或两个选自氧、硫、-S(O)-、-S(O)₂-、-N＝、-N(R₅)-的杂原子的杂环，所述不饱和碳环或杂环中的一或多个碳原子任选被一或多个相同或不同的选自R₄的取代基取代；或者

其中G和E独立地表示硫、氧、-N(R₅)-或-N(R₅)C(O)-，

且R₁和R₂与其连接的碳原子一起形成饱和碳环，所述饱和碳环中的一或多个碳原子任选被一或多个相同或不同的选自R₄的取代基取代，条件是当G是氧时，m和n不都是0，且进一步地条件是当G和E都是氧时，m和n之和是6或大于6；

R₄是氢、氨基、硫代、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤素、氧代、硫杂或羟基；

X是键、-CH₂-或-NH-；

2.权利要求1的化合物，其中E和G都是氧。

3.权利要求1或2的化合物，其中m和n都是1。

4.权利要求1或2的化合物，其中m和n都是0。

5.前述任一项权利要求的化合物，其中R₁和R₂与其连接的碳原子一起形成包含一或两个选自-O-、-S-、-S(O)-、-S(O₂)-、-N＝和-N(R₅)-的杂原子的杂环；所述杂环中的一或多个碳原子任选被一或多个相同或不同的选自R₄的取代基取代。

6.前述任一项权利要求的化合物，其中R₁和R₂与其连接的碳原子一起形成4-、5-或6-元杂环。

7.权利要求5或6的化合物，其中所述杂环是四氢吡喃、氧杂环丁烷、[1，3]二氧杂环戊烷、[1，3]二噁烷、四氢噻喃、四氢噻喃-1，1-二氧化物、四氢噻喃-1-氧化物、哌啶、四氢噻吩、[1，3]-二噻烷、硫杂环丁烷、[1，3]-二噻烷-1，3-二氧化物、硫杂环丁烷-1-氧化物或硫杂环丁烷-1，1-二氧化物。

8.权利要求5或6的化合物，其中所述杂环包含一个杂原子。

9.权利要求5或6的化合物，其中所述杂环包含两个杂原子。

10.权利要求8或9的化合物，其中所述一个或多个杂原子是氧。

11.权利要求8或9的化合物，其中所述一个或多个杂原子是硫、-S(O)-或-S(O)₂-。

12.前述任一项权利要求的化合物，其中A是杂芳基或杂芳基烷基。

13.权利要求12的化合物，其中A是吡啶基、吡嗪基或喹啉基。

14.权利要求1-11任一项的化合物，其中A是苯基。

15.前述任一项权利要求的化合物，其中A被卤素取代。

16.前述任一项权利要求的化合物，其中R₃是C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基或卤素。

17.权利要求16的化合物，其中R₃是甲氧基或乙氧基。

18.前述任一项权利要求的化合物，其中X是-CH₂-。

19.权利要求1-17任一项的化合物，其中X是-NH-。

20.权利要求13的化合物，其中A是4-(3，5-二氯吡啶基)。

21.前述任一项权利要求的化合物，其中R₄是氢。

22.前述任一项权利要求的化合物，选自：

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-1′-乙酰基-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-哌啶]-4-基)乙酮(化合物108)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物110)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃1′-氧化物]-4-基)乙酮(化合物111)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃-1′，1′-二氧化物]-4-基)乙酮(化合物112)，

2-(3，5-二氯-1-氧化-吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃-1′，1′-二氧化物]-4-基)乙酮(化合物113)，

2-(3-溴吡啶-4-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物114)，

2-(3-溴-吡嗪-2-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物115)，

2-(-吡嗪-2-基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物116)，

2-(-吡啶-4-基-)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物117)，

2-(喹啉-4-基-)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物118)，

2-(2，6-二氯-苯基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物119)，

2-(2-氯-苯基)-1-(7-甲氧基-2′，3′，5′，6′-四氢-螺[1，3-苯并二氧杂环戊烯-2，4′-(4H)-噻喃]-4-基)乙酮(化合物120)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，3′-氧杂环丁烷]-6-基}乙酮(化合物121)，

-3(4H)，3′-氧杂环丁烷]-6-基}乙酮(化合物122)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，3′-硫杂环丁烷]-6-基}乙酮(化合物123)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，3′-硫杂环丁烷-1′，1′-二氧化物]-6-基}乙酮(化合物124)，

-3(4H)，3′-硫杂环丁烷-1′，1′-二氧化物]-6-基}乙酮(化合物125)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，2′-(1，3-二氧杂环戊烷)]-6-基}乙酮(化合物126)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，4′-四氢吡喃]-6-基}乙酮(化合物127)，

-3(4H)，4′-四氢吡喃]-6-基}乙酮(化合物128)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-2′，2′-二甲基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，5′-[1，3]二噁烷]-6-基}乙酮(化合物129)，

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，5′-[1，3]二噁烷]-6-基}乙酮(化合物130)，

-3(4H)，5′-[1，3]二噁烷]-6-基}乙酮(化合物131)，以及

2-(3，5-二氯吡啶-4-基)-1-{9-甲氧基-螺[2H-1，5-苯并二氧杂

-3(4H)，5′-[1，3]二噻烷]-6-基}乙酮(化合物132)，及其药学上可接受盐、水合物、N-氧化物或溶剂合物。

23.前述任一项权利要求的化合物，具有的分子量低于800道尔顿。

24.权利要求1-22任一项的化合物，用于治疗。

25.药物组合物，其包含权利要求1-22任一项的化合物与药学上可接受赋形剂或媒介物或者一种或多种药学上可接受载体。

26.权利要求25的药物组合物，包含一或多种其它治疗活性化合物。

27.权利要求1-22任一项的化合物，用于预防、治疗或改善皮肤疾病或病症或者急性或慢性皮肤创伤疾患。

28.权利要求27的化合物，用于预防、治疗或改善选自以下的皮肤疾病或病症：增殖性和炎性皮肤疾病、银屑病、癌症、表皮炎症、脱发病、皮肤萎缩、类固醇诱发的皮肤萎缩、皮肤老化、光皮肤老化、痤疮、皮炎、特应性皮炎、脂溢性皮炎、接触性皮炎、荨麻疹、搔痒症和湿疹。

29.预防、治疗或改善皮肤疾病或病症或者急性或慢性皮肤创伤疾患的方法，所述方法包括对患有至少一种所述疾病的患者施用有效量的一或多种权利要求1-22任一项的化合物，以及任选药学上可接受载体或者一或多种赋形剂，任选与其它治疗活性化合物联合。

30.权利要求29的方法，其中所述皮肤疾病或病症选自增殖性和炎性皮肤疾病、银屑病、癌症、表皮炎症、脱发病、皮肤萎缩、类固醇诱发的皮肤萎缩、皮肤老化、光皮肤老化、痤疮、皮炎、特应性皮炎、脂溢性皮炎、接触性皮炎、荨麻疹、搔痒症和湿疹。