CN101631535A - 含有甘露醇的高蛋白质浓度调配物 - Google Patents

含有甘露醇的高蛋白质浓度调配物 Download PDF

Info

Publication number
CN101631535A
CN101631535A CN200780045479A CN200780045479A CN101631535A CN 101631535 A CN101631535 A CN 101631535A CN 200780045479 A CN200780045479 A CN 200780045479A CN 200780045479 A CN200780045479 A CN 200780045479A CN 101631535 A CN101631535 A CN 101631535A
Authority
CN
China
Prior art keywords
protein
mannitol
arbitrary
liquid formulation
described method
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN200780045479A
Other languages
English (en)
Inventor
戴维·克里斯托弗·塞克
金·何
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wyeth LLC
Original Assignee
Wyeth LLC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wyeth LLC filed Critical Wyeth LLC
Publication of CN101631535A publication Critical patent/CN101631535A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions

Abstract

本发明提供通过将蛋白质浓度提高至大于50mg/ml的量来抑制液体调配物中蛋白质发生甘露醇诱导聚集的方法。本发明也提供储存和制备含有甘露醇并且蛋白质浓度大于50mg/ml的液体调配物的方法。

Description

含有甘露醇的高蛋白质浓度调配物
相关申请案交叉参考
本申请案主张在2006年12月6日申请的美国临时专利申请案第60/873,526号的权益，其是全文以引用方式并入本文中。
技术领域
本发明涉及储存和制备含甘露醇蛋白质调配物的方法。
背景技术
甘露醇一般一直用于蛋白质调配物中以维持调配物的稳定性和等渗性。过去，一直使用液氮来快速冷冻蛋白质调配物以供储存。然而，几乎所有对液体调配物实施大规模不受控冷冻的方法都具有不受控凝固和融解的负面效应。人们已发现对相变控制不足可导致因聚集、沉淀、氧化和变性而引起产品损失。人们已引入最新技术来控制蛋白质调配物的冷冻和融化过程。这些技术通常以显著较低的速率进行冷冻和融化。因此，在含甘露醇蛋白质调配物中，缓慢冷冻-融化过程可使甘露醇结晶，继而诱导蛋白质发生聚集。为在缓慢冷冻-融化过程期间避免甘露醇诱导蛋白质聚集，现有方法需要自蛋白质调配物移除甘露醇并在融化后操作中将其添加回调配物中。
发明内容
本发明提供储存和制备含甘露醇蛋白质调配物的改良方法。具体来说，本发明方法容许冷冻储存含甘露醇蛋白质调配物而不首先移除甘露醇。因此，本发明可减少成本和处理步骤以及储存和制备含甘露醇蛋白质调配物所用时间。
在一方面中，本发明提供储存液体调配物的方法，其包括将所述液体调配物逐渐冷却至低于约-10℃的温度。液体调配物含有甘露醇和蛋白质，所述蛋白质浓度大于50mg/ml从而使得在冷却期间较大浓度可阻抑蛋白质聚集。
在一实施例中，本发明方法包括将液体调配物逐渐冷却至低于约-20℃的温度。在另一实施例中，本发明方法包括将液体调配物逐渐冷却至约-40℃或更低的温度。在另一实施例中，本发明方法包括将液体调配物逐渐冷却至约-50℃或更低的温度。
在某些实施例中，本发明可用于储存以约0-15％的量含有甘露醇的液体调配物。具体来说，液体调配物可以约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％的量含有甘露醇。在提及固体时百分比为重量/重量，并且在提及液体时百分比为重量/体积。
在某些实施例中，本发明方法包括以约0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、或0.1℃/分钟的速率逐渐冷却液体调配物。
在某些实施例中，液体调配物以大于约75mg/ml、100mg/ml、125mg/ml、150mg/ml、或200mg/ml的浓度含有蛋白质。优选地，液体调配物以介于50mg/ml与200mg/ml之间的浓度含有蛋白质。
在某些实施例中，液体调配物含有抗体蛋白质。具体来说，抗体是单克隆抗体。在其它实施例中，液体调配物含有作为医药物质的蛋白质。
在某些实施例中，本发明储存液体调配物的方法是中间过程。
在另一方面中，本发明提供制备液体调配物的方法，其包括使所述液体调配物自冷冻状态逐渐升温至高于约0℃的温度。液体调配物含有甘露醇和浓度大于50mg/ml的蛋白质，从而使得在升温期间较高浓度可阻抑蛋白质聚集。
在某些实施例中，制备液体调配物的方法包括使所述液体调配物自冷冻状态逐渐升温至约10℃、20℃、25℃、30℃或更高温度。
在某些实施例中，本发明可用于制备以约0-15％的量含有甘露醇的液体调配物。具体来说，液体调配物以约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％的量含有甘露醇。在提及固体时百分比为重量/重量，并且在提及液体时百分比为重量/体积。
在某些实施例中，制备液体调配物的方法包括以约0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、或0.1℃/分钟的速率使所述液体调配物逐渐升温。
在某些实施例中，液体调配物以大于约75mg/ml、100mg/ml、125mg/ml、150mg/ml、或200mg/ml的浓度含有蛋白质。优选地，液体调配物以介于50mg/ml与200mg/ml之间的浓度含有蛋白质。
在某些实施例中，液体调配物含有抗体蛋白质。具体来说，抗体是单克隆抗体。在其它实施例中，液体调配物含有作为医药物质的蛋白质。
在某些实施例中，本发明制备液体调配物的方法是中间过程。
本发明液体调配物通常为水性调配物。
本发明另外提供组合物，其含有通过上文各实施例中所述本发明方法制备的液体调配物中的生物有效量的蛋白质。
在另一方面中，本发明提供通过将蛋白质浓度提高至大于50mg/ml的量来抑制液体调配物中蛋白质发生甘露醇诱导聚集的方法。在某些实施例中，本发明方法通过将蛋白质浓度提高至大于约75mg/ml、100mg/ml、125mg/ml、150mg/ml、或200mg/ml的量来抑制液体调配物中蛋白质发生甘露醇诱导聚集。蛋白质浓度通常介于50mg/ml与200mg/ml之间。
在本申请案中，除非另外说明，否则使用“或”意指“和/或”。本申请案所用词语“包含”和所述词语的变形并不意欲排除其它添加剂、组份、整数或步骤。本申请案中所用词语“约”和“大约”是作为等效词语使用。本申请案中所用的有或没有约/大约修饰的任何数字都意欲涵盖相关领域普通技术人员所了解的任何正常波动。
本发明的其它特征、目标和优点明示于以下具体实施方式中。然而应了解，尽管所述具体实施方式阐释本发明各实施例，但仅具有说明性而非限制性。所属领域技术人员根据具体实施方式可了解本发明范围内的各种变化和修饰。
附图说明
各附图仅具有说明目的而不具有限制性。
图1绘示在每一实例性制程规模下用低温中试(CryoPilot)(CP)系统的样品产品温度轨迹。
图2展示在以始终0.5℃/分钟的速率冷却至-40℃随后升温至20℃后，冷冻抗体溶液的X射线衍射(XRD)图。
图3展示在将30mg/ml浓度的单克隆抗体冷却至-42℃时，经调整差示扫描量热法(mDSC)的样品热分析图。
图4绘示在缓慢冷冻和融化过程期间相对蛋白质浓度标绘的总焓。
图5绘示代表性抗体的尺寸排除色谱HPLC(SEC-HPLC)色谱图。
图6绘示相对于蛋白质浓度标绘的高分子量(HMW)物质的百分比变化。
图7绘示在相同混合速率下相同冷冻/融化曲线基于生产负荷产生的2组轨迹。
图8绘示，实验室系统中较快冷冻和融化的速率快于最小生产负荷下的速率。
图9绘示实验室系统中缓慢冷冻和融化的速率慢于最大生产规模下的速率。
图10绘示在缓慢冷冻和融化的实验室规模循环形成期间观察到的典型过冷现象。
图11绘示通过5次缓冲液试验实施的曲线校正，之后实施5次含有或不含有甘露醇的MabM试验(总共15次)，并且在10个热电偶轨迹的任一者中都未观察到过冷(0％发生率)。
图12绘示Mab和MabM的产品温度轨迹存在重叠，并且在进行5轮含有或不含有甘露醇的Mab实验后得到的10个热电偶轨迹的任一者中都未观察到过冷。
图13阐释，与较快速率相比，在以较慢速率实施多个冷冻和融化循环后，HMW物质百分比的增加更显著。
图14阐释，在Mab调配物浓度为100mg/mL并含有甘露醇时，未观察到HMW物质增加。
具体实施方式
本发明提供储存和制备含甘露醇蛋白质调配物的改良方法。具体来说，本发明提供在液体调配物中于缓慢冷冻和/或融化过程期间通过提高蛋白质浓度来阻抑或消除甘露醇诱导蛋白质聚集的方法。
以下小节中更详细地阐述本发明的各个方面。小节的使用并非意欲限制本发明。每个小节都适用于本发明的任何方面。
含甘露醇蛋白质调配物
蛋白质在水性状态下相对不稳定并且会发生化学和物理降格，从而在处理和储存期间导致生物活性损失。冷冻-融化和冷冻干燥是保存蛋白质以供储存的成熟方法。为保存蛋白质构象、活性和稳定性，蛋白质调配物通常含有有利于此目的的试剂，即所谓的冻干保护剂和冷冻保护剂。冷冻保护剂是向蛋白质提供针对冷冻诱导应力的稳定性的试剂；然而，所述术语也包括可在储存期间向(例如)散装药物调配物提供针对非冷冻诱导应力的稳定性的试剂。冻干保护剂是在除水期间向蛋白质提供针对干燥过程期间的系统的稳定性的试剂，其可能是通过以氢键维持蛋白质的固有构象来提供。冷冻保护剂也可具有冻干保护剂效应。常用填充剂的实例包括甘露醇、甘氨酸、蔗糖、乳糖等。所述试剂也有助于调配物的张力。
本文所用“蛋白质”包括任何重组体或纯化多肽，包括(但不限于)抗体，例如单克隆抗体、单链抗体、和其它抗体变体；各种生长激素；和任何医药物质。本申请案中所提及的蛋白质包括任何天然存在的、经修饰的或合成的多肽。
本文所用“蛋白质调配物”、“液体调配物”或语法等效形式包括任何含多肽液体组合物。通常，本发明液体调配物是水性调配物。含多肽液体组合物可另外含有“缓冲剂”，包括可将溶液pH维持在可接受范围内的那些试剂，并且可包括上述填充剂，并且也可包括组氨酸、磷酸盐、柠檬酸盐、三羟甲基氨基甲烷、二乙醇胺、和诸如此类。如果含多肽液体组合物是医药组合物，那么液体调配物可另外含有“赋形剂”。术语“赋形剂”包括医药上可接受的载剂，以及可在储存期间提供蛋白质固有构象以使得可基本保持生物活性和蛋白质稳定性的冻干保护剂和冷冻保护剂。
在缓慢冷冻和融化期间的甘露醇诱导蛋白质聚集
如上所述，冷冻和融化是长期储存的成熟方法或可作为中间步骤。然而，几乎所有对液体调配物实施大规模冷冻的方法都具有不受控凝固和融解的负面效应。诸如在袋中或瓶中冷冻等方法已再三显示出可在容器内导致低温浓缩和不均一温度分布。人们已发现对相变控制不足可导致因聚集、沉淀、氧化和变性而引起产品损失。相反，受控冷冻和融化(也称作缓慢冷冻和融化)可避免不受控方法通常存在的产品变性并消除昂贵费时的清洗环节。此外，全部方法都可受益于受到良好控制并且可预测的操作。
受控冷冻(或缓慢冷冻)通常包括以既定速率使液体调配物逐渐冷却至适合储存的温度。通常，适合储存的温度包括(但不限于)等于或低于约-10℃、-20℃、-30℃、-40℃、-50℃的温度。逐步冷却可以约0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、或0.1℃/分钟的速率来实施。
类似地，受控融化(缓慢融化)通常包括以既定速率使液体调配物自冷冻状态逐渐升温至期望温度。通常，出于融化目的的期望温度包括(但不限于)等于或高于约0℃、10℃、20℃、或30℃的温度。逐步升温可以约0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、或0.1℃/分钟的速率来实施。
受控冷冻和融化可在容器中实施，例如小管、袋子、瓶子、或任何其它适宜容器。容器可为用后可弃式。受控冷冻和融化也可以大规模或小规模来实施。在典型大规模生产中，可以约1L至300L(例如3L)的批次来冷冻液体调配物。在典型小规模系统中，可以约1ml至500ml(例如30ml)的批次来冷冻液体调配物。
然而，在含甘露醇液体调配物中，缓慢冷冻和/或融化使得甘露醇可结晶，继而诱导蛋白质聚集。本文所用“蛋白质聚集”意指形成高分子量(HMW)物质，包括可通过浊度测量检测到的不溶性物质，以及可通过尺寸排除色谱HPLC(SEC-HPLC)、阳离子交换HPLC(CEX-HPLC)、X射线衍射(XRD)、经调整差示扫描量热法(mDSC)和所属领域技术人员已知的其它方式检测到的溶解性物质。
据观察，在多个冷冻和融化循环后，HMW物质在含甘露醇调配物中的百分比显著提高(参见实例部分)。提高调配物中的甘露醇含量也可导致形成更高百分比的HMW物质。与大规模处理(例如125L)相比，低处理体积似乎使所形成HMW物质的百分比维持不变。
在含甘露醇调配物的冷却期间观察到放热事件。所观察到由于甘露醇结晶以及未冷冻水所产生的焓随处理规模提高(冷冻和融化速率降低)或调配物中的甘露醇浓度升高而增加。在含甘露醇调配物中于融化后也观察到结晶事件。不期望受限于理论，冷冻溶液中的结晶事件表明，由于结晶所导致的相变在冷冻和融化后可诱导蛋白质聚集。甘露醇的结晶度随甘露醇含量升高而提高，此对应于较高％HMW形成。与较小规模相比，在较大制程规模模拟中观察到较高甘露醇结晶度，此同样与较高HMW形成速率有关。在冷冻和融化期间，调配物中甘露醇减少一般有利于降低液体调配物中的HMW物质形成。
高蛋白质浓度阻抑蛋白质聚集
本发明揭示，提高液体调配物中的蛋白质浓度可在缓慢冷冻和/或融化过程期间阻抑或抑制蛋白质聚集。如实例部分中所述，发现将蛋白质浓度提高到20-30mg/ml以上可导致所形成HMW物质的量减少。不期望受限于理论，预期在低蛋白质浓度(例如＜20mg/ml)下蛋白质聚集增加可能因冷冻和/或融化期间两个分子聚在一起的可能性增加而导致。通常，使用大于50mg/ml的蛋白质浓度来阻抑蛋白质聚集。优选地，使用大于约75mg/ml、100mg/ml、125mg/ml、或150mg/ml的蛋白质浓度来阻抑蛋白质聚集。更优选地，使用介于50mg/ml与200mg/ml之间的蛋白质浓度。本文所用术语“阻抑蛋白质聚集”或语法等效形式表示，与在所含蛋白质浓度小于20mg/ml的液体调配物中所形成HMW物质的百分比相比，类似液体调配物中HMW物质的百分比降低。术语“阻抑蛋白质聚集”也包括抑制或消除HMW物质的形成。
因此，通过提高含有甘露醇的液体调配物中的蛋白质浓度，本发明容许缓慢冷冻和/或融化所述液体调配物而不诱导显著蛋白质聚集。本发明尤其可用于储存含有药物物质的药物产品。举例来说，本发明容许在缓慢冷冻和/或融化过程期间所有包括甘露醇的赋形剂存于药物产品中，同时保持药物物质的稳定性和生物活性。因此，本发明消除了以下需要：在储存前自药物调配物移除甘露醇，并在药物产品填充操作期间将其添加回所述调配物中。
因此，含甘露醇并且蛋白质浓度高于50mg/ml的液体调配物可以所述形式直接储存以供后续应用、作为中间步骤以冷冻状态将其储存并在使用前融化、或随后将其制备为干燥形式(例如冷冻干燥、风干、或喷雾干燥形式)以供之后在使用前将其重构为液体形式或其它形式。此外，可根据本申请案以液体形式制备并直接储存含有生物活性量蛋白质的组合物以充分利用不经重构即投与的方便易操作性、和以预填充即用注射器或多剂量制剂形式提供调配物的能力(如果调配物与抑菌剂相容)。本申请案也提供以如上所述储存并制备的液体调配物含有生物活性量蛋白质的组合物的其它形式。
应理解，上述实施例和以下实例是出于说明性目的来阐述而非限制性目的。本发明液体调配物适用于一般蛋白质。举例来说，实例部分中所述液体调配物中所用抗体可为任何抗体。所属领域技术人员可根据本说明书了解属于本发明范围的各种变化和修饰。
实例
实例1.单克隆抗体调配物的缓慢冷冻和融化
使用低温中试(CP)系统(斯德蒂姆生物系统公司(Stedim Biosystems))使以各种浓度含有单克隆抗体(Mab)以及10mM组氨酸、10mM甲硫氨酸、0-4％甘露醇和0-0.02％聚山梨醇酯-80的调配物多次冷冻并融化。每一冷冻和融化曲线都包括逐渐冷却至-55℃并升温至32℃，同时混合溶液。
CP模拟全规模制造单元低温容器(CryoVessel)(斯德蒂姆生物系统公司)的运行。在此工作前已形成不同处理体积的CP设定点曲线以模拟低温容器的性能。图1阐释在每一制程规模下使用CP系统达成的产品样品温度轨迹。冷冻(或融化)速率定义为热电偶自0℃到达-42℃(或自-42℃到达0℃)除以所用时间。
主要通过SEC-HPLC和CEX-HPLC分析融化样品以评估高分子量物质的含量(％HMW)并追踪酸性和碱性物质的含量。也使用经调整差示扫描量热法(mDSC)和X射线衍射(XRD)来评价冷冻溶液中甘露醇的结晶度和多晶型。
实例2.在缓慢冷冻和融化期间甘露醇诱导蛋白质聚集
发现在与实例1中所述者类似的缓慢冷冻-融化过程期间，人类化单克隆抗体(在此实验中称作MAB-001)在甘露醇存在下聚集。图2展示在始终以0.5℃/分钟冷却至-40℃之后升温至20℃时冷冻MAB-001溶液的XRD图。在-42℃、-30℃和-10℃下扫描冷冻溶液。如图2中所示，结晶量随调配物中甘露醇的量而增加，并且较高蛋白质浓度阻抑甘露醇结晶。
除XRD外，也使用经调整差示扫描量热法(mDSC)来检验MAB-001样品中的甘露醇结晶。图3展示在将浓度为30mg/ml的MAB-001冷却至-42℃时mDSC的样品热分析图。所观察到的焓(图3中的褐色轨迹)是由于图2中所示甘露醇结晶所致。如果假设总焓等于冷却焓加升温焓，那么可相对于蛋白质浓度标绘总焓，如图4中所示。同样如图4中所示，高蛋白质浓度(例如＞30mg/ml)可阻抑甘露醇结晶。
实例3.较高蛋白质浓度阻抑甘露醇结晶
将三种称作MAB-001、MAB-002和MAB-003的抗体透析至10mM组氨酸、250mM甘露醇(pH 6.0)中，然后对其实施五轮冷冻-融化，并监测HMW物质的形成。SEC-HPLC色谱图展示于图5中。如图5中所示，对于三种蛋白质MAB-001、MAB-002和MAB-003中的每一种来说，调配物中的高蛋白质浓度都可阻抑HMW物质形成。在图6中相对于蛋白质浓度标绘HMW物质百分比的变化。如图6中所示，对于三种蛋白质中的每一种来说，将蛋白质浓度提高20-30mg/ml以上可降低通过SEC-HPLC检测的HMW的形成量。此结果与mDSC数据一致。
实例4.实验室规模对生产规模
在实验室系统S3赛希尔斯(Celsius)(斯德蒂姆生物系统公司)中形成快速和缓慢冷冻/融化循环以匹配生产规模的产品轨迹并指明最小和最大生产负荷。在不同生产负荷下使用FT-100赛希尔斯(斯德蒂姆生物系统公司)。对于最小生产负荷，使用4.2L(1袋)。对于最大生产负荷，使用100L(6袋，每袋16.6L)。在相同混合速率下自FT-100获得的相同冷冻/融化设定点曲线基于生产负荷产生2组产品温度轨迹，如图7中所示。
使用实验室规模的S3系统来实施冷冻和融化循环的形成。如图8所示，实验室系统中较快冷冻和融化的速率快于在最小生产负荷下的速率。如图9中所示，实验室系统中缓慢冷冻和融化的速率慢于最大生产规模下的速率。
在缓慢冷冻和融化的实验室规模循环形成期间观察到过冷。典型过冷现象展示于图10中。在出现过冷时可降低冷冻温度。在3个缓慢冷冻/融化循环的2个中观察到过冷现象(67％发生率)。过冷可在各轮蛋白质和缓冲液实验中随机发生，或可由不固定的袋位置而引起。过冷影响正常冷冻时间(NFT)(自5℃至-5℃)计算。过冷可能与蛋白质浓度水平有关。
为避免过冷，使用单克隆抗体作为模型蛋白质(MabM)来形成实验室系统中的缓慢冷冻和融化循环。浓缩MabM并将其透析至Mab调配物缓冲溶液中，之后稀释为以下浓度：50mg/ml、100mg/ml和150mg/ml。制备不含甘露醇的调配物，之后使用实验室系统将其冷冻并融化5次。然后将固体甘露醇添加至无甘露醇调配物中。用实验室系统将这些溶液再冷冻并融化5次。通过延长初始深度冷冻时间并降低初始冷冻温度以促进成核来校正缓慢冷冻/融化曲线。如图11中所示，通过5次缓冲液试验实施曲线校正，之后实施5次含有或不含有甘露醇的MabM试验(总共15次)并且在10个热电偶轨迹中的任一者中都未观察到过冷(0％发生率)。对于所有蛋白质浓度水平来说，在融化后都需要手动混合。
使用上文中所形成的快速和缓慢冷冻和融化曲线来评价冷冻和融化单克隆抗体(Mab)药物物质的可行性。在此实验中使用实验室规模S3摄氏。分析评价包括目测观察低温浓缩、HMW和低分子量(LMW)物质的SEC HPLC、pH、通过A400测量的浊度、浓度和CEX HPLC。如图12中所示，Mab和MabM的产品温度轨迹出现重叠。在进行5轮含有或不含有甘露醇的Mab实验后得到的10个热电偶轨迹的任一者中都未观察到过冷。对于所有浓度水平来说，在融化后都需要手动混合。
实例5.HMW的形成与冷冻和融化速率有关
如图13中所示，与较快速率相比，在以较慢速率实施多次冷冻和融化循环后HMW物质百分比的增加更显著。未观察到LMW物质、pH、浊度、浓度以及酸性和碱性物质的量发生变化。同样如图13中所示，HMW物质的增加仅见于蛋白质浓度为50mg/ml并含有甘露醇的调配物中。如图14中所示，在浓度为100mg/mL并含有甘露醇的Mab调配物中未观察到HMW物质增加。此外，在浓度为50和150mg/mL的Stedim袋中，观察到不含甘露醇的Mab可在多达5次冷冻和融化循环中保持稳定。
以引用方式并入
本申请案中所引用的所有出版物和专利文献都是全文以引用方式并入以达成所有目的，其并入程度如同将每一单独出版物或专利文献的内容并入本文中。

Claims (23)

1、一种储存液体调配物的方法，所述方法包含将所述液体调配物逐渐冷却至低于-10℃的温度，其中所述液体调配物包含甘露醇和蛋白质，所述蛋白质的浓度大于50mg/ml以使所述较大浓度可在冷却期间阻抑蛋白质聚集。
2、如权利要求1所述的方法，其中所述温度为约-20℃、-40℃或-50℃。
3、如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述甘露醇的量为约0-15％。
4、如权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中所述冷却的速率为约0.5℃/分钟、0.3℃/分钟或0.1℃/分钟。
5、如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其中所述蛋白质的浓度介于50mg/ml与200mg/ml之间。
6、如权利要求1至5中任一权利要求所述的方法，其中所述蛋白质的浓度大于75mg/ml、100mg/ml、125mg/ml或150mg/ml。
7、如权利要求1至6中任一权利要求所述的方法，其中所述蛋白质为抗体。
8、如权利要求7所述的方法，其中所述抗体为单克隆抗体。
9、如权利要求1至6中任一权利要求所述的方法，其中所述蛋白质为医药物质。
10、如权利要求1至6中任一权利要求所述的方法，其中所述方法为中间过程。
11、一种制备液体调配物的方法，所述方法包含将所述液体调配物自冷冻状态逐渐升温至高于0℃的温度，其中所述液体调配物包含甘露醇和蛋白质，所述蛋白质的浓度大于50mg/ml以使所述较大浓度可在升温期间阻抑蛋白质聚集。
12、如权利要求11所述的方法，其中所述温度为约20℃或30℃。
13、如权利要求11或权利要求12所述的方法，其中所述甘露醇的量为约0-15％。
14、如权利要求11至13中任一权利要求所述的方法，其中所述升温的速率为约0.5℃/分钟、0.3℃/分钟或0.1℃/分钟。
15、如权利要求11至14中任一权利要求所述的方法，其中所述蛋白质的浓度介于50mg/ml与200mg/ml之间。
16、如权利要求11至15中任一权利要求所述的方法，其中所述蛋白质的浓度大于75mg/ml、100mg/ml、125mg/ml或150mg/ml。
17、如权利要求11至16中任一权利要求所述的方法，其中所述蛋白质为抗体。
18、如权利要求17所述的方法，其中所述抗体为单克隆抗体。
19、如权利要求11至16中任一权利要求所述的方法，其中所述蛋白质为医药物质。
20、如权利要求11至16中任一权利要求所述的方法，其中所述方法为中间过程。
21、一种组合物，其包含生物有效量的蛋白质，所述蛋白质存于通过如权利要求11至20中任一权利要求所述的方法制备的液体调配物中。
22、一种抑制液体调配物中蛋白质发生甘露醇诱导聚集的方法，所述方法包含将所述蛋白质浓度提高至大于50mg/ml的量。
23、如权利要求22所述的方法，其中所述蛋白质的浓度大于75mg/ml、100mg/ml、125mg/ml或150mg/ml。
CN200780045479A 2006-12-06 2007-12-05 含有甘露醇的高蛋白质浓度调配物 Pending CN101631535A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US87352606P 2006-12-06 2006-12-06
US60/873,526 2006-12-06

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101631535A true CN101631535A (zh) 2010-01-20

Family

ID=39493053

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200780045479A Pending CN101631535A (zh) 2006-12-06 2007-12-05 含有甘露醇的高蛋白质浓度调配物

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20080139792A1 (zh)
EP (1) EP2089001A2 (zh)
JP (1) JP2010512336A (zh)
KR (1) KR20090086632A (zh)
CN (1) CN101631535A (zh)
AU (1) AU2007329333A1 (zh)
BR (1) BRPI0720125A2 (zh)
CA (1) CA2671571A1 (zh)
IL (1) IL198977A0 (zh)
MX (1) MX2009005984A (zh)
RU (1) RU2009120200A (zh)
WO (1) WO2008070721A2 (zh)
ZA (1) ZA200903953B (zh)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2476442C2 (ru) * 2007-03-29 2013-02-27 Эббот Лэборетриз Кристаллические антитела против il-12 человека
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
KR20190045414A (ko) * 2007-11-30 2019-05-02 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 단백질 제형 및 이의 제조방법
US8183233B2 (en) 2008-05-15 2012-05-22 Baxter International Inc. Stable pharmaceutical formulations
CN102301235B (zh) * 2008-11-28 2014-11-19 Abbvie公司 稳定的抗体组合物和用于稳定其的方法
US10005830B2 (en) 2009-03-05 2018-06-26 Ablynx N.V. Antigen binding dimer-complexes, methods of making/avoiding and uses thereof
US9265834B2 (en) 2009-03-05 2016-02-23 Ablynx N.V. Stable formulations of polypeptides and uses thereof
JP2012526121A (ja) * 2009-05-04 2012-10-25 アボツト・バイオテクノロジー・リミテツド ヒト抗ｔｎｆアルファ抗体の安定した高蛋白質濃度製剤
US9884117B2 (en) 2009-09-03 2018-02-06 Ablynx N.V. Stable formulations of polypeptides and uses thereof
WO2016202713A1 (en) * 2015-06-15 2016-12-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Method of freezing protein solutions

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ZA902663B (en) * 1989-04-07 1991-12-24 Syntex Inc Interleukin-1 formulation
US6685940B2 (en) * 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
MXPA04000747A (es) * 2001-07-25 2004-07-08 Protein Desing Labs Inc Formulacion farmaceutica liofilizada estable de anticuerpos igg.
WO2004055164A2 (en) * 2002-12-13 2004-07-01 Abgenix, Inc. System and method for stabilizing antibodies with histidine
WO2006014965A2 (en) * 2004-07-27 2006-02-09 Human Genome Sciences, Inc. Pharmaceutical formulation and process

Also Published As

Publication number Publication date
CA2671571A1 (en) 2008-06-12
WO2008070721A3 (en) 2008-09-18
ZA200903953B (en) 2010-03-31
EP2089001A2 (en) 2009-08-19
JP2010512336A (ja) 2010-04-22
US20080139792A1 (en) 2008-06-12
RU2009120200A (ru) 2011-01-20
IL198977A0 (en) 2010-02-17
KR20090086632A (ko) 2009-08-13
AU2007329333A1 (en) 2008-06-12
MX2009005984A (es) 2009-06-16
WO2008070721A2 (en) 2008-06-12
BRPI0720125A2 (pt) 2014-01-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101631535A (zh) 含有甘露醇的高蛋白质浓度调配物
Bjelošević et al. Excipients in freeze-dried biopharmaceuticals: Contributions toward formulation stability and lyophilisation cycle optimisation
JP6078217B2 (ja) 粉末化されたタンパク質組成物及びその作製方法
JP5405122B2 (ja) 低粘度のタンパク質製剤およびその用途
Thakral et al. Stabilizers and their interaction with formulation components in frozen and freeze-dried protein formulations
JP6421031B2 (ja) 単一ドメイン抗原結合分子の製剤
US20080200655A1 (en) Protein Formulations Containing Sorbitol
PT2275119E (pt) Formulação de proteína liofilizada isotónica estável
PT1771208E (pt) Utilização de derivados de tioflavina radiorotulados em imagiologia amiloide para avaliar terapias anti-amiloide
KR20120027031A (ko) 소형 모듈 면역제약용 동결건조 제제
CN106999591A (zh) 一种抗pd‑1抗体制剂及其在医药上的应用
MXPA98000684A (en) Formulation of isotonic protocols isotonic s
US20080200656A1 (en) Use Of Sucrose To Suppress Mannitol-Induced Protein Aggregation
AU2013202856A1 (en) Formulations of single domain antigen binding molecules
AU2016202780A1 (en) Powdered protein compositions and methods of making same
AU2013202845A1 (en) Powdered protein compositions and methods of making same

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Open date: 20100120