CN101629145B - 一株富镁酿酒酵母及其培养方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株富镁酿酒酵母及其培养方法与应用。本发明所提供的富镁酿酒酵母是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099。该菌株具有生物量高和细胞有机镁含量高的优点，在其生长繁殖过程中能够将培养液中无机态的镁富集到细胞内转化成有机态的镁，发酵培养该酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099，每升培养液的细胞干重可达16g，每克干细胞含镁达14mg。本发明的培养方法实用性强、操作简便、成本低廉，对发酵设备及生产条件没有特殊要求，利用一般发酵厂的设备和生产条件即可生产，投资少、见效快、效益高，不但适合于大规模的生产还适合于小批量的生产，具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一株富镁酿酒酵母及其培养方法与应用。
背景技术
镁离子是人体中含量较多的阳离子，它参与很多重要的生理活动，影响着细胞的多种生理功能。人类对镁的摄入主要依靠饮用水和食物中的镁，然而食物的加工和烹调常常会导致食物中镁的大量流失，从而导致很多人的镁摄入量偏低。镁的过度缺乏会导致很多不良症状，如低血钙、低钾血和心脏以及神经方面的不正常。很多慢性病也和长期缺乏镁有关，如糖尿病、高血压、冠心病和骨质疏松症等。目前有人建议把镁作为治疗哮喘、心肌梗死和先兆子痫的一种药剂。尽管无机镁的存在形式很多，如硫酸镁、乳酸镁、氢氧化镁、氧化镁和氯化镁等，但是只有葡萄糖酸镁被推荐作为镁的补充剂，因为人体对葡萄糖酸镁的吸收要优于其他无机镁，其引起的腹泻要比其他无机镁轻一些。
目前，有关镁的研究主要集中于镁在人体中的分布、镁的代谢及生理功能、镁缺乏导致的各种疾病，如动脉粥样硬化、心律不齐、冠心病等慢性病的机理。关于镁的补充剂，目前临床上主要用葡萄糖酸镁作为镁的补充剂。而以富镁酵母的形式补充镁元素不但可以提高镁的生物利用率，而且酿酒酵母本身还可以提供较多的蛋白质及大量的B族维生素、消化酶类及其它的生物活性物质，能够调节生物消化道的微生态环境，促进生物体健康，提高机体免疫力，目前，还没有发现通过选育酵母菌进行富集镁的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616。
本发明所提供的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616是通过化学诱变、原生质体融合和基因组遗传重组技术获得的，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616已于2009年6月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC №.3099。
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099为椭圆形，菌落凸起、光滑、乳白色、边缘整齐。最适生长温度为30℃，最适生长pH值为6.0。
本发明的另一个目的是提供一种培养酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099的方法。
本发明所提供的培养酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC№.3099的方法，是将酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099接种于发酵培养基中，25-35℃条件下，180-250rpm培养30-40h；
所述发酵培养基每升的组成为：葡萄糖20-100g/L、可溶性镁盐4-10g/L、蛋白胨10-50g/L、酵母粉5-30g/L，其余为水。
上述方法中，所述发酵培养基每升的组成具体可为：葡萄糖40g/L、可溶性镁盐7g/L、蛋白胨20g/L、酵母粉10g/L，其余为水。
上述方法中，所述培养条件具体可为30℃、200rpm培养35h。
上述方法中，所述可溶性镁盐为氯化镁、硫酸镁或醋酸镁，具体可为醋酸镁。
上述方法中，所述发酵培养基的pH值为4.5-6.5，具体可为6.0。
本发明的第三个目的是提供一种利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099生产富镁酿酒酵母产品的方法。
本发明所提供的利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC№.3099生产富镁酿酒酵母产品的方法是发酵培养酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099，得到富镁酿酒酵母产品。
上述方法中，所述发酵培养的条件为：25-35℃条件下，180-250rpm培养30-40h；
所述发酵培养的培养基每升的组成为：葡萄糖20-100g/L、可溶性镁盐4-10g/L、蛋白胨10-50g/L、酵母粉5-30g/L，其余为水。
上述方法中，所述发酵培养的条件具体可为30℃、200rpm培养35h。
所述发酵培养的培养基每升的组成具体可为：葡萄糖40g/L、可溶性镁盐7g/L、蛋白胨20g/L、酵母粉10g/L，其余为水。
上述方法中，所述可溶性镁盐为氯化镁、硫酸镁或醋酸镁，具体可为醋酸镁。
上述方法中，所述发酵培养基的pH值为4.5-6.5，具体可为6.0。
本发明通过化学诱变、原生质体融合和基因组遗传重组技术获得了一株遗传性状稳定的高生物量酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC№.3099。该菌株具有生物量高和细胞有机镁含量高的优点，在其生长繁殖过程中能够将培养液中无机态的镁富集到细胞内转化成有机态的镁，发酵培养该酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC№.3099，每升培养液的细胞干重可达16g，每克干细胞含镁达14mg。本发明的培养方法实用性强、操作简便、成本低廉，对发酵设备及生产条件没有特殊要求，利用一般发酵厂的设备和生产条件即可生产，投资少、见效快、效益高，不但适合于大规模的生产还适合于小批量的生产，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为原子吸收测定镁离子浓度的标准曲线
图2为各重组菌的镁离子抗性比较
图3为各重组菌的镁产量的对比
图4为有机镁在细胞内的分布
具体实施方式
下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099的获得
1、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099的选育
1)根据酵母菌对镁离子的抗性测定结果进行初筛
取20株不同的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC№.2.2081、CGMCC№.2.1952、CGMCC№.2.1972、CGMCC№.2.1554、CGMCC№.2.1544、CGMCC№.2.1541、CGMCC№.2.1538、CGMCC№.2.1527、CGMCC№.2.1450、CGMCC№.2.1432、CGMCC№.2.1429、CGMCC№.2.1427、CGMCC№.2.1426、CGMCC№.2.1425、CGMCC№.2.1423、CGMCC№.2.1421、CGMCC№.2.1406、CGMCC№.2.1396、CGMCC№.2.1392、CGMCC№.2.1151(由中科院微生物研究所菌种保藏中心提供)，将它们分别培养在含有11mg/mL、13mg/mL、15mg/mL、17mg/mL、19mg/mL、21mg/mL、23mg/mL、25mg/mL、27mg/mL和29mg/mL镁离子浓度的YEPD固体培养基(YEPD固体培养基的组成为：酵母粉10g/L、蛋白胨20g/L、葡萄糖20g/L、琼脂粉10g/L)上，从中选出8株在含有23mg/mL镁离子浓度的YEPD固体培养基上能够生长的菌株。
2)测定步骤1)初筛得到的8株菌在含有11mg/mL镁离子浓度的YEPD液体培养基中的细胞生物量和细胞中镁的含量。通过筛选，获得5株细胞生物量较高的菌株(每升培养液的细胞干重在12g以上，但每克干细胞的含镁量在6mg以下)和3株细胞中镁含量较高的菌株(每克干细胞的含镁量在9mg以上，但每升培养液的细胞干重在9.5g以下)。细胞生物量和细胞中镁含量的测定方法如下：
细胞生物量的测定方法：将培养有酵母菌的培养液于8000rpm离心5min，收集菌体沉淀，用去离子水洗涤三次，将菌体沉淀放置在60℃烘箱中烘至恒重，称量菌体的重量。细胞生物量为每升培养液中的细胞干重。
镁标准曲线的制备：分别配制镁离子浓度为0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L和2.0mg/L的标准溶液，原子吸收测定285.2nm处的吸光度值，分别为0.0566、0.1058、0.1591、0.2117、0.2691和0.4827。根据镁离子浓度和吸光度值绘制标准曲线，如图1所示。根据绘制的标准曲线得到镁离子浓度的计算公式：OD285.2＝0.2371×镁离子浓度(mg/L)+0.0166，相关系数r＝0.9981。
细胞中镁含量的测定：在装有1.0g上述筛选得到的酵母湿菌体的100mL磨口圆底烧瓶中加入20mL消化液(硝酸：高氯酸的体积比为4∶1)，烧瓶口放置小漏斗，以防止消化液自圆底烧瓶口进溅出来，并将产生的气体导流出圆底烧瓶，静置处理2h后，将烧瓶置于电炉上加热消化，直至烧瓶中的液体变为无色透明为止；在烧瓶中加5mL水，加热以除去多余的硝酸；待烧瓶中的液体接近2-3mL时，取下冷却，用蒸馏水稀释至合适的浓度，原子吸收法测定细胞中镁的含量，即每克干细胞中镁离子的毫克数。
3)通过生孢实验，从上述步骤2)筛选的菌株中挑选出一株生物量较高、生孢好的二倍体酿酒酵母菌ZB-29和一株细胞含镁量较高、生孢好的二倍体酿酒酵母菌ZB-104，按常规方法对这两株菌进行生孢培养和单倍体分离。分别测定单倍体菌株的细胞生物量和细胞含镁量，从中选出生物量较高的单倍体ZB-29-33(a)和细胞含镁量较高的单倍体ZB-104-51(a)。
4)用硫酸二乙酯分别对上述步骤3)获得的单倍体ZB-29-33(a)和ZB-104-51(a)进行诱变，获得营养缺陷突变株；从获得的营养缺陷突变株中筛选出带有组氨酸营养缺陷标记的突变株ZB-29-33-3(a，his-)和带有甲硫氨酸营养缺陷标记的突变株ZB-104-51-6(a，met-)作为融合亲株。
5)将ZB-29-33-3(a，his-)和ZB-104-51-6(a，met-)进行原生质体融合，在酵母菌基本培养基上筛选融合子。酵母菌基本培养基的组成为：10g/L葡萄糖、10g/L琼脂、6.7g/L无氨基酵母氮源YNB(无氨基酵母氮源YNB的组成为：硫酸铵5g、磷酸二氢钾0.85g、磷酸氢二钾0.15g、硫酸镁0.5g、氯化钠0.1g、氯化钙0.1g、硼酸500μg、硫酸铜40μg、碘化钾100μg、氯化铁200μg、硫酸锰400μg、钼酸钠200μg、硫酸锌400μg、生长素2μg、泛酸钙400μg、肌醇2000μg、烟酸400μg、对氨基苯甲酸200μg、硫胺素400μg、核黄素200μg、吡哆醇400μg)。
6)测定步骤5)获得的融合子在含有11mg/mL镁离子浓度的YEPD培养基中培养的细胞生物量和细胞中镁含量，从中筛选出细胞生物量和细胞镁含量均较高的融合菌株3株。
7)测定步骤6)获得的3株融合菌株对镁离子的抗性，结果表明，三株融合菌均能够在含有23mg/mL镁离子浓度的YEPD固体培养基上生长，而在含有23.5mg/mL镁离子浓度的YEPD固体培养基上不能生长。
8)以步骤6)获得的三株融合菌株为出发菌株，进行亚硝基胍诱变，使用镁离子梯度平板进行筛选，得到12株能够在含有23.5mg/mL镁离子浓度的YEPD固体培养基上生长的突变菌株，分别测定这些突变菌株在含有11mg/mL镁离子浓度的YEPD培养基中培养的细胞生物量和细胞镁含量，得到5株细胞生物量和细胞镁含量均不低于3株出发菌株的突变株。
9)制备步骤8)得到的5株突变株的原生质体，将其进行原生质体融合，再将融合子涂布到镁离子浓度梯度平板上，得到11株能够在含有24mg/mL镁离子浓度的YEPD固体培养基上生长的融合菌，分别测定这些融合菌在含有11mg/mL镁离子浓度的YEPD培养基中培养的细胞生物量和细胞含镁量，得到7株细胞生物量和细胞含镁量均不低于5株出发菌株的融合菌株。
10)再以步骤9)获得的7株融合菌株作为出发菌株，按步骤9)的方法进行两轮原生质体融合，最终得到4株能够在含有25mg/mL镁离子浓度的YEPD固体培养基上生长，并且在含有11mg/mL镁离子浓度的YEPD培养基中培养的细胞生物量和细胞含镁量均高于出发菌株的融合菌株F3-1、F3-2、F3-3和F3-4。
11)比较步骤10)中得到的四株融合菌株在含有11mg/mL镁离子浓度的YEPD培养基中培养的细胞生物量和细胞镁含量。其中融合菌株F3-3每升培养液的细胞干重在13g以上，每克干细胞的含镁量在10mg以上，是一株优良的富镁酵母，将其命名为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616，并于2009年6月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC№.3099。
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099为椭圆形，菌落凸起、光滑、乳白色、边缘整齐。最适生长温度为30℃，最适生长pH值为6.0。
上述筛选过程中，各重组菌的镁离子抗性的比较结果如图2所示。结果表明，经过每一轮筛选过程得到的重组菌其镁离子抗性都比上一轮的菌株有所提高。
各重组菌的镁产量的对比结果如图3所示。其中，ZBF-23、ZBF-65和ZBF-90分别为单倍体原生质体融合得到的融合菌株；F0-1、F0-2、F0-3、F0-4和F0-5分别为融合菌进行NTG诱变得到的突变株；F1-1、F1-2、F1-3、F1-4、F1-5、F1-6和F1-7分别为第一轮遗传重组得到的融合子；F2-1、F2-2、F2-3、F2-4和F2-5分别为第二轮遗传重组得到的融合子；F3-1、F3-2、F3-3和F3-4分别为第三轮遗传重组得到的融合子。结果表明，经过每一轮筛选过程得到的重组菌其富集的镁离子浓度都比上一轮的菌株富集镁离子的浓度有所提高。
2、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616CGMCC№.3099的遗传稳定性分析
将上述步骤1获得的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC№.3099在YEPD固体培养基上传代培养30次，随机挑取100个单菌落接种于无菌水中，室温条件下饥饿培养4-6小时。取饥饿培养后的菌液分别接种于含有25mg/mL镁离子的YEPD培养基中，培养结果证明，挑取的100个单菌落在含有25mg/mL镁离子的YEPD培养基上均能够生长。随机挑取其中的10个单菌落接种在含有11mg/mL镁离子的YEPD培养基中培养，测定细胞生物量和细胞镁含量，结果表明，细胞生物量和细胞镁含量均无明显变化。上述结果证明，酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099具有良好的遗传稳定性。
实施例2、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616CGMCC№.3099培养条件的优化
采用单因子发酵实验进行酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616CGMCC№.3099的培养条件优化(包括培养基组分、糖浓度、镁盐种类、镁盐浓度、培养基的pH值、通气量及发酵时间等)，确定了最优的培养条件：发酵培养基的组成为：葡萄糖40g/L、醋酸镁7g/L、蛋白胨20g/L、酵母粉10g/L。发酵培养基的pH值为6.0，发酵培养条件为30℃、200rpm培养35h。装液量为20ml/250ml，接种量为10％。在上述优化的培养条件下，每升发酵液的细胞干重可以达16g以上，每克干细胞的含镁量达14mg以上，具体结果如表1所示。
表1优化条件与初始条件下酿酒酵母的生物量和细胞镁含量的比较
| 生物量(g/L) | 细胞镁含量(mg/g) | 镁产量(mg/L) | |
| 初始条件 | 11.67 | 11.32 | 132 |
| 优化条件 | 16.16 | 14.26 | 230 |
| 提高百分比(％) | 38.47 | 25.97 | 74.24 |
实施例3、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099产品的制备及细胞内镁离子的分布
1、富镁酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099产品的制备
富镁酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099产品的生产工艺包括以下步骤：斜面菌种→液体菌种→一级液体种子培养→二级液体种子培养→三级液体种子培养→发酵罐发酵培养→收集酵母细胞及干燥→粉碎→得到富镁酿酒酵母产品。下面对生产工艺中的各个步骤做进一步的说明：
(1)斜面菌种：将上述实施例1筛选得到的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099接种于YEPD固体斜面培养基上，30℃培养48小时后，放入4℃冰箱保存。
(2)液体菌种：将上述步骤(1)保存的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099活化后，接一环细胞于装有150毫升YEPD培养基的三角瓶中，30℃振荡培养36小时，得到液体菌种。
(3)一级液体种子培养：按10％的接种量将上述步骤(2)的液体菌种接入装有1.5升YEPD培养基的三角瓶中，30℃振荡培养28小时，得到一级液体种子培养物。
(4)二级液体种子培养：按10％的接种量将上述步骤(3)的一级种子培养物接入装有45升YEPD培养基的小卡氏发酵罐中，在25-35℃的条件下，搅拌培养28小时，得到二级液体种子培养物。
(5)三级液体种子培养：按10％的接种量将上述步骤(4)的二级种子培养物接入装有450升YEPD培养基的大卡氏发酵罐种，30℃搅拌培养28小时，得到三级液体种子培养物。
(6)发酵罐发酵培养：按20％的接种量将上述步骤(5)的三级种子培养物接入装有2250升发酵培养基(发酵培养基的组成为：葡萄糖40g/L、醋酸镁7g/L、蛋白胨20g/L、酵母粉10g/L，pH为6.0的发酵罐中，30℃、200rpm搅拌培养35小时。
(7)收集酵母细胞及干燥：采用板框压榨法或离心收集上述步骤(6)获得的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099细胞，将收获的菌体细胞在45～85℃的条件下风干，使酵母细胞的含水量小于5％。结果表明，在上述培养条件下，每升发酵培养基获得的细胞干重为16g，每克干细胞的含镁量为14mg。
(8)粉碎及包装：用粉碎机将上述步骤(7)干燥后的酿酒酵母细胞粉碎。然后用不透气的包装袋包装，得到成品。
2、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099细胞内镁离子的有机转化率及分布
1)酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099细胞内镁离子的有机转化率。
分别测定酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099细胞中总镁的含量和无机镁的含量，总镁含量测定方法见实施例1中步骤1的2)中细胞中镁含量的测定方法；无机镁的测定即取适量菌体，超声波破碎细胞，8000rpm离心5min，取上清液不消化直接稀释至合适浓度，原子吸收测无机镁含量。
实验设三次重复，结果表明，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616CGMCC №.3099细胞中总镁的平均含量为14.78mg/g，无机镁的平均含量为0.63mg/g，二者的差值14.15mg/g即为细胞中有机镁的平均含量，细胞中镁离子的有机转化率为95.7％。以上结果说明，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616CGMCC №.3099对镁的有机转化能力比较强。
2)酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC№.3099细胞内镁离子的分布。
a)提取酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC№.3099的细胞器，包括细胞膜、液泡、线粒体和细胞壁，测量各细胞器中镁离子的含量。
细胞膜、液泡和线粒体的处理方法：离心收集适量菌体，用10mmol/L的TE(pH8.0)洗涤一次，以2ml/g的比例悬于TE溶液中，加入终浓度为2％的β-巯基乙醇，28℃摇床培养20min；然后5000rpm离心5min，取沉淀，用蒸馏水洗涤一次，SCE(含有16.4g山梨醇、100ml TE(10mmol Tris-Cl(pH8.0))和终浓度为1mmol的EDTA，pH8.0)再洗涤一次，再加入终浓度为1％蜗牛酶，30℃摇床培养1.5-2h；4000rpm离心10min，取沉淀，得到原生质体，将原生质体用SCE洗涤三次，Buffer A1(1M山梨醇、0.5mM EDTA、10mM咪唑，pH6.4)洗涤三次；8000rmp离心5min，取沉淀，重悬于Buffer A2(0.3M山梨醇、0.5mM EDTA、10mM咪唑，pH6.4)中，搅拌2min，匀浆器匀浆5次，5min后，将匀浆用Buffer A1稀释一倍，50×g，5min离心三次，取上清，3000×g离心30min，分别收集上清液和沉淀。
b)将上步骤a)获得的上清液17000×g离心15min，分别收集上清液和沉淀。
c)取上述步骤b)获得的上清液100000×g离心30min，上清液即为细胞质，沉淀即为细胞膜。
d)将上述步骤b)获得的沉淀重悬于buffer B(0.7M山梨醇、10mM Mops-Tris，pH7)中，1100×g离心10min；取上清，17000×g离心10min，所得沉淀即为线粒体。
e)将上述步骤a)获得的沉淀重悬于buffer B中，然后再用由buffer C(0.7M蔗糖、10mM mops-Tris，pH7)，buffer C+2.5％聚蔗糖400，buffer C+5％聚蔗糖400组成的梯度离心液10,000×g梯度离心10min，液泡沉淀于buffer C层，将液泡用buffer B稀释，3000×g离心30min，沉淀再悬于buffer B中，再进行聚蔗糖梯度离心，即得到纯液泡。
细胞壁的制备方法：按照每克细胞(湿重)加5ml ddH2O的量，用超声波细胞粉碎机将酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC№.3099细胞破壁，超声时间15s，间隙时间5s，工作次数99次，即超声时间为25s，超声功率600W；然后2000rpm离心10min，取上清11000rpm离心30min；取沉淀即为细胞壁的粗体液。按照每0.1g-0.2g细胞壁粗体液加5ml pH 7.0Tris-HCl(0.05M)，搅拌混旋，再加50μl 10mg/ml脱氧核糖核酸酶(DNA酶)，37℃慢摇1h；再加入50μl胰蛋白酶(10mg/ml)慢摇1-2h；2000rpm离心10min；取上清11000rpm离心30min，取沉淀即为经进一步纯化的细胞壁。将进一步纯化的细胞壁用含有0.85％NaCl的pH7.0Tris-cl缓冲液及ddH2O各洗涤一次，11000rpm离心15-20min，取沉淀即为纯的细胞壁。
分别对上述提取的不同的细胞器中的镁的含量进行分析，结果如图4所示。结果表明，细胞内40％的有机镁存在于液泡中，32％的有机镁存在于线粒体中，少部分有机镁存在于细胞壁、细胞膜和细胞内的其他部位。
3)提取酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099的核酸和蛋白质，分别测量与核酸和蛋白质结合的镁离子含量。
利用原子吸收法分别测定与核酸和蛋白质结合的镁的含量，实验设三次重复，结果如表2所示。从表2中可以看出，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616CGMCC №.3099通过生物转化过程将培养基中的无机镁转化为细胞内的有机镁后，一部分有机镁以核酸镁和蛋白质镁的形式存在。
表2 酿酒酵母细胞中与核酸和蛋白质结合的镁
生物大分子镁含量 (mg/g)
核酸 2.59
蛋白质 2.91
Claims (10)
1.酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616，其保藏号为CGMCC №.3099。
2.一种培养酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099的方法，是将酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099接种于发酵培养基中，25-35℃条件下，180-250rpm培养30-40h；
所述发酵培养基每升的组成为：葡萄糖20-100g/L、可溶性镁盐4-10g/L、蛋白胨10-50g/L、酵母粉5-30g/L，其余为水。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述发酵培养基每升的组成为：葡萄糖40g/L、可溶性镁盐7g/L、蛋白胨20g/L、酵母粉10g/L，其余为水。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述可溶性镁盐为氯化镁、硫酸镁或醋酸镁。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述可溶性镁盐为醋酸镁。
6.根据权利要求2-5中任一所述的方法，其特征在于：所述发酵培养基的pH值为4.5-6.5。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述发酵培养基的pH值为6.0。
8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述发酵培养的条件为30℃条件下，200rpm培养35h。
9.一种利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099生产富镁酿酒酵母产品的方法，是发酵培养酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC №.3099，收集酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)HG-616 CGMCC№.3099细胞，干燥、粉碎，得到富镁酿酒酵母产品；
所述发酵培养的条件为：25-35℃条件下，180-250rpm培养30-40h；
所述发酵培养的培养基每升的组成为：葡萄糖20-100g/L、可溶性镁盐4-10g/L、蛋白胨10-50g/L、酵母粉5-30g/L，其余为水；
所述发酵培养基的pH值为4.5-6.5；
所述可溶性镁盐为氯化镁、硫酸镁或醋酸镁。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述发酵培养的条件为：30℃条件下，200rpm培养35h；
所述发酵培养的培养基每升的组成为：葡萄糖40g/L、可溶性镁盐7g/L、蛋白胨20g/L、酵母粉10g/L，其余为水；
所述发酵培养基的pH值为6.0；
所述可溶性镁盐为醋酸镁。
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