CN101617228A - 用于评估针对胰岛素样生长因子ⅰ受体的抗体的抑制活性的方法 - Google Patents

用于评估针对胰岛素样生长因子ⅰ受体的抗体的抑制活性的方法 Download PDF

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Abstract

用于评估抗体在用所述抗体处理的哺乳动物的溶胞PBL样品中抑制IGF－1和/或IGF－2与IGF－1R的结合的抑制活性的方法，所述方法的特征在于将所述PBL的IGF－1R蛋白水平测量为关于所述抗体抑制活性的测量标准。

Description

用于评估针对胰岛素样生长因子Ⅰ受体的抗体的抑制活性的方法
本发明涉及用于评估针对胰岛素样生长因子I受体(IGF-1R)的抗体的抑制活性的方法，用于预测所述抗体的药物动力学和药效学特性的方法和用于预测施用所述抗体的患者中的治疗过程的临床结果。
胰岛素样生长因子I受体(IGF-1R，EC 2.7.112，CD 221抗原)属于跨膜蛋白酪氨酸激酶的家族(LeRoith，D.，等，内分泌综述(Endocrin.Rev.)16(1995)143-163；和Adams，T.E.，等，细胞分子生命科学(Cell.Mol.Life Sci.)57(2000)1050-1093)。IGF-1R以高亲和力结合IGF-1并且在体内激发对该配体的生理响应。IGF-1R还结合IGF-2，但亲和性稍低。IGF-1R的过量表达促进了细胞的致瘤性转化，并且存在IGF-1R参与细胞的恶性转化的证据，因此其是开发用于治疗癌症的治疗剂的一个有用靶标(Adams，T.E.，等，细胞分子生命科学(Cell.Mol.Life Sci.)57(2000)1050-1093)。胰岛素样生长因子I(IGF I)是血管平滑肌细胞(VSMC)的重要促分裂原。IGF I受体是由2条交联的细胞外α-链和包含酪氨酸-激酶结构域的2条跨膜β-链组成的异源四聚体。其与胰岛素受体(IR)具有高度序列相似性，且已将推定的配体-特异性结合位点定位于所述α-链的半胱氨酸-富集区(CRR)(Adams，T.E.，等，细胞分子生命科学(Cell.Mol.Life Sci.)57(2000)1050-1093)。
针对IGF-1R的抗体在现有技术中是众所周知的，并且在体外和体内对它们的抗肿瘤效果进行了研究(Benini，S.，等，临床癌症研究(Clin.CancerRes.)7(2001)1790-1797；Scotlandi，K.，等，癌症基因治疗(Cancer GeneTher.)9(2002)296-307；Scotlandi，K.，等，国际癌症杂志(Int.J.Cancer)101(2002)11-16；Brunetti，A.，等，生物化学生物物理研究通讯(Biochem.Biophys.Res.Commun.)165(1989)212-218；Prigent，S.A.，等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)265(1990)9970-9977；Li，S.L.，等，癌症免疫学和免疫疗法(Cancer Immunol.Immunother.)49(2000)243-252；Pessino，A.，等，生物化学生物物理研究通讯(Biochem.Biophys.Res.Commun.)162(1989)1236-1243；Surinya，K.H.，等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)277(2002)16718-16725；Soos，M.A.，等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)，267(1992)12955-12963；Soos，M.A.，等，美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)86(1989)5217-5221；O′Brien，R.M.，等，EMBO J.6(1987)4003-4010；Taylor，R.，等，生物化学杂志(Biochem.J.)242(1987)123-129；Soos，M.A.，等，生物化学杂志(Biochem.J.)235(1986)199-208；Li，S.L.，等，生物化学生物物理研究通讯(Biochem.Biophys.Res.Commun.)196(1993)92-98；Delafontaine，P.，等，分子细胞学和心脏病学杂志(J.Mol.Cell.Cardiol.)26(1994)1659-1673；Kull，F.C.Jr.，等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)258(1983)6561-6566；Morgan，D.O.，和Roth，R.A.，生物化学(Biochemistry)25(1986)1364-1371；Forsayeth，J.R.，等，美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)84(1987)3448-3451；Schaefer，E.M.，等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)265(1990)13248-13253；Gustafson，T.A.，和Rutter，W.J.，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)265(1990)18663-18667；Hoyne，P.A.，等，FEBSLett.469(2000)57-60；Tulloch，P.A.，等，结构生物学杂志(J.Struct.Biol.)125(1999)11-18；Rohlik，Q.T.，等，生物化学生物物理研究通讯(Biochem.Biophys.Res.Comm.)149(1987)276-281；和Kalebic，T.，等，癌症研究(Cancer Res.)54(1994)5531-5534；Adams，T.E.，等，细胞分子生命科学(Cell.Mol.Life Sci.)57(2000)1050-1093；Dricu，A.，等，糖生物学(Glycobiology)9(1999)571-579；Kanter-Lewensohn，L.，等，黑素瘤研究(Melanoma Res.)8(1998)389-397；Li，S.L.，等，癌症免疫学和免疫疗法(Cancer Immunol.Immunother.)49(2000)243-252)。针对IGF-1R的抗体还描述于许多其它出版物中，例如Arteaga，C.L.，等，乳腺癌研究和治疗(BreastCancer Res.Treatment)22(1992)101-106；和Hailey，J.，等，分子癌症治疗(Mol.Cancer Ther).1(2002)1349-1353。
特别地，将称为αIR3的针对IGF-1R的单克隆抗体广泛应用于研究IGF-1R介导的过程和IGF-1介导的疾病诸如癌症的研究中。α-IR-3在Kull，F.C.，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)258(1983)6561-6566中有所描述。同时，已经公开了约百篇涉及αIR3的研究及其治疗应用的出版物，涉及αIR3单独和与细胞生长抑制剂诸如多柔比星和长春新碱一起的抗肿瘤效果。αIR3是一种鼠单克隆抗体，已知其抑制IGF-1与IGF受体的结合，但是不抑制IGF-2与IGF-1R的结合。高浓度的αIR3刺激肿瘤细胞增殖和IGF-1R的磷酸化(Bergmann，U.，等，癌症研究(Cancer Res.)55(1995)2007-2011；Kato，H.，等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)268(1993)2655-2661)。存在其它抗体(例如，1H7，Li，S.L.，等，癌症免疫学和免疫疗法(Cancer Immunol.Immunother.)49(2000)243-252)，与抑制IGF-1的结合比较，其更有效抑制IGF-2与IGF-1R的结合。抗体以及它们的特性和性状的现有技术的概述在Adams，T.E.，等.，细胞分子生命科学(Cell.Mol.Life Sci.)57(2000)1050-1093中有所描述。
在现有技术中所述的大多数抗体起源自小鼠。如在现有技术中众所周知的，在没有经过进一步的改变诸如嵌合化或人源化的情况下，这些抗体对于治疗人患者是没有作用的。基于这些缺陷，在治疗人患者中，明显优选将人抗体作为治疗剂。在现有技术中，人抗体是众所周知的(van Dijk，M.A.，和van de Winkel，J.G.，当代化学生物学观点(Curr.Opin.Chem.Biol.)5(2001)368-374)。基于所述技术，可以制备针对许多种类靶目标的人抗体。针对IGF-1R的嵌合的、人源化的和人治疗性抗体在WO 02/053596、WO 2004/071529、WO 2005/016967、WO 2006/008639、US 2005/0249730、US 2005/0084906、WO 2005/058967、WO 2006/013472、US 2003/0165502、WO 2005/082415、WO 2005/016970、WO 03/106621、WO 04/083248、WO 2003/100008、WO 2004/087756、WO 2005/005635和WO 2005/094376中有所提及。
使用单克隆抗体的标准固相免疫测定包括在吸附于固相上的抗体(捕捉抗体)、抗原、和针对与酶缀合的抗原的另一表位的抗体(示踪抗体)之间形成复合物。因此，形成夹心物：固相-捕捉抗体-抗原-示踪抗体。在由该夹心物催化的反应中，抗体-缀合的酶的活性与培养基中的抗原浓度成比例。该标准夹心式方法也称为双抗原桥连免疫测定，因为捕捉和示踪抗体结合于抗原的不同表位。
本发明涉及用于评估针对胰岛素样生长因子I受体(IGF-1R)的抗体的抑制活性的方法，用于预测所述抗体的药物动力学和药效学特性的方法和用于预测施用所述抗体的患者中的治疗过程的临床结果。用于确定IGF-1R的测定是现有技术中众所周知的(例如，WO 02/053596，WO 2004/087756和WO 2005/005635)，然而存在作为样品使用的IGF-1R过表达细胞(3T3细胞)或通过流式细胞计数法进行的测量(Cohen，B.D.，临床癌症研究(Clin.Cancer Res.)11(2005)2063-2073)。
存在对测量和监测用针对IGF-1R的抗体治疗患者的药物动力学和药效学结果的需要。例如，所述测量和监测可以通过在肿瘤活组织切片检查中测量IGF-1R表达水平(Kornprat，P.，临床病理学杂志(J.Clin.Path.)59(2006)202-206)或IGF-1R磷酸化状态(Chen，J.W.，美国生理学和内分泌学代谢杂志(Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab.)284(2003)e1149-e1155)进行。还提议测量患者中IGF-1R的消耗(Cohen，B.D.，临床癌症研究(Clin.CancerRes.)11(2005)2063-2073)。如通过流式细胞计数法监测地，用针对IGF-1R的抗体离体处理血液导致人外周血单核细胞上IGF-1R的下调。
发明概述
本发明包括用于通过固相免疫测定确定样品中IGF-1R的方法，其特征在于所述样品是溶胞哺乳动物外周血淋巴细胞(PBL)的制备物。所述样品也表示为“溶胞的PBL样品”或“溶胞的PBL”。哺乳动物优选是人或猿。
意外地发现，尽管PBL上IGF-1R表达的范围是250-2,300个分子(Cohen，B.D.，临床癌症研究(Clin.Cancer Res.)11(2005)2063-2073)，但是可能通过按照本发明的固相免疫测定确定溶胞的PBL上的IGF-1R。
本发明包括按照本发明的方法，其特征在于将IGF-1R蛋白水平确定为关于施用给所述哺乳动物的针对IGF-1R的抗体的体内活性的测量标准。
本发明包括按照本发明的方法，其用于评估用所述抗体处理的哺乳动物中针对IGF-1R的抗体的体内活性，所述方法的特征在于在所述哺乳动物的溶胞PBL样品中，将IGF-1R蛋白水平确定为关于所述抗体体内活性的测量标准。
本发明包括按照本发明的方法，其用于预测在用所述抗体处理的哺乳动物中针对IGF-1R的抗体的药效学或药物动力学特性，所述方法的特征在于在所述哺乳动物的溶胞PBL样品中，将IGF-1R蛋白水平确定为关于所述预测的测量标准。
本发明包括按照本发明的方法，其用于在施用针对IGF-1R的抗体的患者中预测临床结果或确定治疗过程，所述方法的特征在于包括下列步骤：在第一时间确定所述患者的溶胞PBL样品中的IGF-1R蛋白水平，比较所述蛋白水平和在第二时间确定的所述水平。
本发明包括按照本发明的方法，其特征在于取样的时间是施用之前和过程中和/或之后。
本发明包括按照本发明的方法，其特征在于通过ELISA测量IGF-1R蛋白水平。
本发明包括按照本发明的方法，其特征在于ELISA中使用的第一和第二抗体是针对IGF-1R的结合不同表位的两种单克隆抗体、或单克隆抗体和多克隆抗体。
按照本发明，本发明包括针对IGF-1R的第一和第二抗体用于制造免疫学测定从而评估针对IGF-1R的第三抗体的体内活性的用途，其中所述哺乳动物是已用所述第三抗体处理的，所述用途的特征在于在所述哺乳动物的溶胞PBL样品中，将IGF-1R蛋白水平确定为关于所述第三抗体的体内活性的测量标准。
按照本发明，本发明包括针对IGF-1R的第一和第二抗体用于制造免疫学测定从而预测针对IGF-1R的第三抗体在用所述第三抗体处理的哺乳动物中的药效学或药物动力学特性的用途，所述用途的特征在于在所述哺乳动物的溶胞PBL样品中，将IGF-1R蛋白水平确定为关于所述预测的测量标准。
按照本发明，本发明包括针对IGF-1R的第一和第二抗体用于制造免疫学测定从而在向患者施用第三抗体的哺乳动物中预测临床结果或确定治疗过程的用途，所述用途的特征在于包括下列步骤：在第一时间确定所述哺乳动物的溶胞PBL样品中的IGF-1R蛋白水平和比较所述蛋白水平和在第二时间确定的所述水平。
按照本发明，本发明包括所述用途，其特征在于取样的时间是施用所述第三抗体之前、过程中和/或之后。
按照本发明，本发明包括所述用途，其特征在于免疫学测定，优选ELISA中使用的抗体是针对IGF-1R的结合不同表位的两种单克隆抗体、或单克隆抗体和多克隆抗体。
本发明包括用于确定哺乳动物的溶胞PBL样品中IGF-1R的方法，其特征在于确定所述PBL中的IGF-1R蛋白水平，优选地确定为关于向所述哺乳动物施用的针对IGF-1R的抗体的体内活性的测量标准。
本发明包括用于评估哺乳动物的溶胞PBL样品中针对IGF-1R的抗体的体内活性的方法，所述哺乳动物是已用所述抗体处理的，所述方法的特征在于将所述PBL中的IGF-1R水平确定为关于所述抗体的体内活性的测量标准。
本发明包括用于评估在用所述抗体处理的哺乳动物中针对IGF-1R的抗体的体内活性的方法，所述方法的特征在于在所述处理的哺乳动物的溶胞PBL样品中，将IGF-1R蛋白水平确定为关于所述抗体的体内活性的测量标准。
本发明还包括预测用所述抗体处理的哺乳动物中针对IGF-1R的抗体的药效学或药物动力学特性的方法，所述方法的特征在于在所述哺乳动物的溶胞PBL样品中，将IGF-1R蛋白水平确定为关于所述预测的测量标准。
本发明还包括在施用针对IGF-1R的抗体的患者中预测临床结果或确定治疗过程的方法，所述方法的特征在于包括下列步骤：在第一时间确定所述患者的溶胞PBL样品中的IGF-1R蛋白水平，比较所述蛋白水平和在第二时间确定的所述水平。取样的时间是施用之前、过程中和/或之后。
所有这些方法在哺乳动物外进行，并且在体外确定IGF-1R蛋白水平。
优选地，在执行确定方法前，从样品，优选从暗黄覆盖层(buffy coat)，——通常通过使用Ficoll梯度的离心——分离PBL。作为用于按照本发明的方法的样品，优选使用106-108PBL细胞/250μl的制备物。在(例如PBS缓冲的)水溶液中溶胞和溶解PBL。溶胞例如通过使用烷基芳基多醚醇如辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(X-100)或CHAPS(例如1％(v/v))进行。
本发明还包括针对IGF-1R的第一和第二抗体制造免疫学测定从而评估针对IGF-1R的第三抗体的体内活性的用途，其中所述哺乳动物已用所述第三抗体抗体处理，所述用途的特征在于在所述哺乳动物的溶胞PBL样品中，将IGF-1R蛋白水平确定为关于所述第三抗体的体内活性的测量标准。
本发明还包括针对IGF-1R的第一和第二抗体用于制造免疫学测定从而预测针对IGF-1R的第三抗体在用所述第三抗体处理的哺乳动物中的药效学或药物动力学特性的用途，所述用途的特征在于在所述哺乳动物的溶胞PBL样品中，将IGF-1R蛋白水平确定为关于所述预测的测量标准。
本发明还包括针对IGF-1R的第一和第二抗体用于制造免疫学测定从而在向患者施用第三抗体的哺乳动物中预测临床结果或确定治疗过程的用途，所述用途包括下列步骤：在第一时间确定所述哺乳动物的溶胞PBL样品中的IGF-1R蛋白水平和比较所述蛋白水平和在第二时间确定的所述水平。取样的时间是施用之前和过程中和/或之后。
可以用于本发明的确定方法中的抗体优选是结合不同表位的两种单克隆抗体、或是单克隆抗体和多克隆抗体。所述第一抗体是固定的，且所述第二抗体是检测抗体并包含可检测的标记。
可以用于本发明的抗体结合于人IGF-1R(EC2.7.1.112，SwissProtP08069)，且优选地结合于所述受体的α-链。按照本发明使用的所述单克隆抗体例如记述在WO 2004/087756和WO 2005/005635中。所述抗体也有效作为第三(治疗性)抗体。
将产生有效的单克隆抗体的杂交瘤细胞保藏在德国的德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH)(DSMZ)。
  细胞系   保藏号   保藏日期
  <IGF-1R>HUMAB-克隆22   DSM ACC 2594   2003年5月9日
  <IGF-1R>HUMAB-克隆18   DSM ACC 2587   2003年4月10日
  <IGF-1R>HUMAB克隆1a   DSM ACC 2586   2003年4月10日
  <IGF-1R>HUMAB克隆23   DSM ACC 2588   2003年4月10日
  <IGF-1R>HUMAB-克隆8   DSM ACC 2589   2003年4月24日
可以用于本发明的抗体的特征还在于与IGF-1R的亲和力为10-8M(KD)或更低，优选10-9M且更优选约10-10-10-13M。
IGF-1R蛋白水平通过免疫学测定，更优选地通过ELISA确定，由此固定一种抗体。固定优选通过生物学结合对进行，所述生物学结合对优选为半抗原-抗半抗原(如针对洋地黄毒苷的洋地黄毒苷-抗体)或生物素-(链霉)抗生物素蛋白。在本发明的优选实施方案中，第一抗体是生物素化的且固定在链霉抗生物素蛋白(或其他抗生物素蛋白类似物)基质上。生物素化或半抗原-偶联以这样的方式进行，即所述方式是所述抗体仍与IGF-1R保持10-9M(KD)或更低，优选约10-10-10-13M的亲和力。
优选地，所述哺乳动物是需要肿瘤治疗的人患者或为了体内动物试验处理的非-人哺乳动物。
发明详述
术语“抗体”涵盖各种形式的抗体，其包括但不限于整个抗体、抗体片段、人抗体、人源化抗体以及遗传工程化的抗体。优选地，所述第一和第二抗体之一是来自于非-人动物如兔或山羊的单克隆抗体且另一种是来自于非-人动物如兔或山羊的多克隆抗体。
“抗体片段”包括全长抗体的一部分，通常至少是足以和有效用于按照本发明测定的抗原结合部分或其可变区。抗体片段的实例包括Fab和F(ab)2片段。
术语“针对IGF-1R的抗体”或“IGF-1R抗体”用于本文中时，指特异性结合于人IGF-1R并因此优选与其他人蛋白不表现出可检测的交叉反应性的抗体。
术语“与IGF-1R结合”用于本文中时，意指在体外测定中，优选在结合测定中抗体与IGF-1R的结合，其中抗体结合于表面，且IGF-1R的结合通过表面等离振子共振(SPR)测量。结合意味着结合亲和力(KD)为10-8M或更低，优选10-9M或更低和更优选10-13-10-10M。
术语“针对IGF-1R的抗体的体内活性”用于本文中时，指关于所述抗体已知的结合IGF-1R和抑制配体结合的公知活性。抗体-介导的阻断配体结合于IGF-1R抑制两种主要胰岛素样生长因子(IGF)途径，即促分裂原-活化的蛋白激酶和磷脂酰肌醇3’-激酶/Akt的下游信号传导。结果，IGF-1和IGF2的促分裂原性和增殖潜力显著降低。另外，抗体诱导IGF-1R内在化和与肿瘤细胞特异性结合的降解，由此导致细胞表面呈递的受体分子的显著减少(至少80％)。(见例如Mitsiades，C.S.，癌细胞(Cancer Cell)5(2004)221-230；Grimberg，A.，癌症生物学和治疗(Cancer Biology&Therapy)2(2003)630-635)。
按照现有技术，见例如Rees，G.和Gough R.，医学实验室技术杂志(J.Med.Lab.Tech.)25(1968)117-118和Figdor，C.，等，免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)55(1982)221-229，从暗黄覆盖层分离外周血单核细胞/淋巴细胞。
针对IGF-1R的抗体的免疫学确定是通过包括捕捉抗体(第一抗体)和与可检测的标记缀合的示踪抗体(第二抗体)的双抗原桥连免疫测定发生的。夹心式ELISA法的特征在于利用识别抗原不同表位的两种单克隆IGF-1R抗体类型(第一和第二抗体)，备选地，用一种单克隆IGF-1R抗体类型和一种多克隆IGF-1R抗体类型，来测量抗原浓度。该夹心式ELISA程序通常由三个阶段组成。例如，在第一阶段中，将包含抗原的样品倒在其上吸附了第一单克隆/多克隆抗体的测量板上；该样品中的IGF-1R结合于所述第一抗体。在第二阶段中，用洗涤试剂洗去所述样品中除所述抗原外的物质。然后，在第三阶段中，将用报道分子，诸如酶或放射性同位素标记的第二抗原溶液倒在所述板上；标记的抗体结合于与所述第一抗体结合的IGF-1R，并检测所述标记。ELISA法是现有技术中公知的，且例如通过Hildebrand R.L.，传染病的快速诊断(Rapid diagnosis in infectious disease)，Rytel，M.W.(ed.)，Boca Raton(1979)第71-88页综述。
优选地，抗体与其缀合配偶体的缀合通过经由N-端和/或ε-氨基基团(赖氨酸)、不同赖氨酸的ε-氨基基团、抗体氨基酸主链的羧基-、巯基-、羟基-和/或苯酚官能团和/或抗体碳水化合物结构的糖醇基团的化学结合进行。
优选地，所述第一抗体通过特异性结合对固定。所述结合对(第一成分/第二成分)是，例如，链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白/生物素，抗体/抗原(见，例如，Hermanson，G.T.，生物缀合技术(BioconjugateTechniques)，学术出版社公司(Academic Press，Inc.)(1996))，凝集素/多糖，类固醇/类固醇结合蛋白，激素/激素受体，酶/底物，IgG/蛋白质A和/或G，等。优选地，所述第一抗体与生物素缀合，且固定通过固定的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白进行。
备选地，所述第一抗体通过被动吸附与固相缀合。被动吸附例如，记述在Butler，J.E.，免疫测定中的固相(Solid Phases in Immunoassay)，在：免疫测定(Immunoassay)中，Diamandis，E.P.，和Christopoulos，T.K.(版本)，学术出版社公司(Academic Press，Inc.)，圣地亚哥，加利福尼亚(1996)，第205-225页。
在本发明的优选实施方案中，所述第二抗体与可检测的标记缀合，优选通过特异性结合对缀合。所述结合对(第一成分/第二成分)是，例如，链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白/生物素，抗体/抗原(见，例如，Hermanson，G.T.，生物缀合技术(Bioconjugate Techniques)，学术出版社公司(Academic Press，Inc.)，圣地亚哥，加利福尼亚(1996))，凝集素/多糖，类固醇/类固醇结合蛋白，激素/激素受体，酶/底物，IgG/蛋白质A和/或G，等。优选地，所述第二抗体通过洋地黄毒苷和针对洋地黄毒苷的抗体与可检测的标记缀合。备选地，所述第二抗体与电化学发光标记，如二吡啶基钌复合物缀合。
单克隆抗体作为蛋白质包含许多反应性侧链。抗体的所述反应性化学基团是，例如，氨基基团(赖氨酸、α-氨基基团)、硫醇基团(胱氨酸、半胱氨酸、和甲硫氨酸)、羧酸基团(天冬氨酸、谷氨酸)和糖-醇基团。
用于按照本发明的免疫测定的固体支持物广泛记述在现有技术中(见，例如，Butler，J.E.，方法(Methods)22(2000)4-23)
不同免疫测定的原理，例如，由Hage，D.S.记述在分析化学(Anal.Chem.)71(1999)294R-304R中。Lu，B.，等，在分析学(Analyst.)121(1996)29R-32R中，报告了用于免疫测定中的抗体定向固定。例如，由Wilchek，M.，和Bayer，E.A.在酶学方法(Methods Enzymol.)184(1990)467-469中报告了抗生物素蛋白-生物素-介导的免疫测定。
单克隆抗体和其恒定结构域作为蛋白质包含许多用于偶联结合配偶体如表面、蛋白、聚合物、诸如PEG、纤维素或聚苯乙烯、酶或结合对成员的反应性侧链。抗体化学反应性基团是，例如，氨基基团(赖氨酸、α-氨基基团)、硫醇基团(胱氨酸、半胱氨酸、和甲硫氨酸)、羧酸基团(天冬氨酸、谷氨酸)和糖-醇基团。所述方法例如，由Aslam，M.和Dent，A.记述在生物缀合(Bioconjuation)，MacMillan参考文献公司(MacMillanReference Ltd.)(1999)，第50-100页中。
术语“固相”意指非-流体物质，且包括由材料诸如聚合物、金属(顺磁性、铁磁性颗粒)、玻璃和陶瓷制成的颗粒(包括微颗粒和珠)；凝胶物质诸如硅石、矾土、和聚合物凝胶；可由聚合物、金属、玻璃、和/或陶瓷制成的毛细管；沸石和其他多孔物质；电极；微量滴定板；固体条带；和杯，试管或其他光谱仪样品容器。测定的固相元件(component)与该测定可以接触的惰性固体表面不同，因为“固相”在其表面上包含至少一个部分，所述部分意欲与第二抗体相互作用。固相可以是静止的元件，诸如试管、条带、杯或微量滴定板，或可以是非-静止的元件，诸如珠和微颗粒。微颗粒还可以用作均匀测定形式的固相。可以使用多种容许蛋白质和其他物质非-共价或共价附着的微颗粒。所述颗粒包括聚合物颗粒诸如聚苯乙烯和聚(异丁烯酸甲酯)；金颗粒诸如金纳米颗粒和金胶体；和陶瓷颗粒诸如硅石、玻璃、和金属氧化物颗粒。见例如Martin，C.R.，等，分析化学(Anal.Chem.)70(1998)322A-327A，将其引入本文作为参考。
发色团(荧光或发光基团和染料)、酶、NMR-活性基团或金属颗粒、半抗原、洋地黄毒苷是可检测标记的实例。可检测的标记还可以是可光活化的交联基团，例如叠氮基或azirine基团。可以通过电化学发光检测的金属螯合物也优选地是信号-发射基团，特别优选地是钌螯合物，例如钌(二吡啶基)3 2+螯合物。合适的钌标记基团记述在，例如，EP 0 580 979，WO90/05301，WO 90/11511和WO 92/14138中。
提供下列实例和附图帮助理解本发明，其真正的范围在所附的权利要求中阐述。应该理解，可以在不偏离本发明精神的条件下对所述程序进行修改。
附图描述
图1在标记为1-5的5个独立实验中测量的相同样品的水平。相同的颜色表示相同样品。标准偏差在11-14％范围内。
图2测试由食蟹猴(Cynomolgus)(起始群体)新鲜分离的外周白细胞，以获得它们的IGF-1R浓度，并与细胞(未处理的)的过夜培养物和用抗体18处理的细胞(处理的)的过夜培养物相比较。在左图上，绘制相对单位(arbitrary units)/mg蛋白。
实施例1
PBL分离和溶胞
a)分离人PBL
将200μl Liquemine(罗什诊断学股份有限公司(Roche DiagnosticsGmbH)，德国)加入到160ml RPMI/Hepes(在RPMI中的10mM Hepes缓冲液)中。将来自0.5l血液的外周血细胞(“暗黄覆盖层”)重新混悬在该溶液中。血细胞类型的分离在50ml GREINER Leucosep试管(商品号7.227.290)中进行。使用6个试管从一种暗黄覆盖层中分离PBL。为了准备所述试管，将15ml淋巴细胞选择培养基(Lymphocyte Selection Medium)(LSM，ICNNo.50494)转移到每个试管中，并在1000xg离心所述试管30秒。39ml血液混悬液在LSM溶液上部形成层，并在1000xg，18℃，离心10分钟。PBL呈现为直接位于隔膜上的白色条带，并用10ml移液管回收并转移到4个50ml的试管中。然后用RPMI/Hepes将所述试管中充满至50ml并在250xg，18℃，离心10分钟。弃去上清液，并将细胞重新混悬在小体积RPMI/Hepes中。将所有细胞合并在单一的50ml试管中，并在RPMI/Hepes中再次洗涤。弃去上清液，并将细胞重新混悬在10ml预暖的ALT中，从而裂解污染的红细胞。ALT是通过组合300ml溶液A(0.16M NH4Cl)和100ml溶液B(0.18MTris-HCl，pH7.65)，调节pH为7.2并通过过滤(0.22μm)灭菌溶液制备的。在ALT中在37℃温育所述细胞混悬液3分钟后，用RPMI/Hepes将所述试管充满至50ml并在250xg离心细胞5分钟。最后，在RPMI/Hepes中再次洗涤细胞两次，并重新混悬在50ml RPMI/Hepes中。最后，对细胞进行计数。对新鲜制备的细胞备选地，在一些情形中还可以使用冷冻的PBL。为了冷冻，将细胞以1千万细胞/ml的密度重新混悬在冷冻培养基(处于热-灭活的人血清中的10％DMSO)中。使混悬液缓慢变凉至-80℃。为了解冻，快速解冻细胞，并然后在不搅动的条件下，通过逐步加入培养基对其进行缓慢稀释。
b)分离食蟹猴PBL
将血液(24ml，从8只不同的猴各获得3ml)收集在包含肝素的vacutainer中。加入56ml PBS，且混悬液在LSM(ICN No.50494)垫层上形成层。在1000xg离心所述试管10分钟。移出PBL，在PBS中洗涤2次并计数。
c)PBL处理
在6-孔细胞培养板中的2ml培养基(具有10％FCS的RPMI)中接种2百万-1千万细胞/孔。保持对照不进行处理。对一半的孔，加入针对IGF-1R的抗体(2.0mg/ml)直到最终浓度100nM。在37℃，5％CO2，温育细胞过夜。作为对照，在细胞培养步骤前，离心并冷冻细胞等分试样，以进行进一步的分析。
d)PBL溶胞
通过离心收获细胞，并在PBS中洗涤2次。冷冻沉淀。在分析之前不久，解冻细胞沉淀并重新混悬在200μl溶胞缓冲液(50mM Tris-HCl，pH7.5，1mM EDTA，1mM EGTA，100mM NaF，1％Triton-X-100，20％甘油)中，涡旋，将其置于超声波水浴中2分钟并离心。
实施例2
ELISA测定
外周血淋巴细胞中的IGF-1受体通过针对链霉抗生物素蛋白包被的微量板(SA-MTP)上的受体α-链的生物素化抗体(抗体18)捕获。结合的IGF-1R通过兔多克隆IGF-1R抗体和抗-兔-HRP偶联抗体检测。
将IGF-1R水平测量为相对于细胞总蛋白量的IGF-1R蛋白量。生成细胞溶胞产物，调节到相同蛋白质浓度，并在ELISA测定中测量。在测定的线性范围内，在450nm处的吸光度信号对应于IGF-1R水平的相对量。
材料：
-96-孔链霉抗生物素蛋白包被的聚苯乙烯板(Nunc)
-PBST：用H2O 1∶10稀释的10xPBS-缓冲溶液+0,2％吐温20
-BSA
-PAK<IGF-1Rβ>Ra-C20-IgG(Santa Cruz生物技术(Santa CruzBiotechnology)，#sc-713)
-PAK<兔>G-IgG-HRP(细胞信号传导(Cell Signaling)#7074)
-3，3’-5，5’-四甲联苯胺
-1M H2SO4
-生物素化的MAK<IGF-1Rα>Hu-AK1a-IgG(DSM ACC 2586)板包被：
-在3％BSA/PBST中1∶200稀释生物素化的抗体
-向SA-MTP加入100μl/孔
-在摇动器上室温温育1小时
-用200μl PBST/孔洗涤
样品制备：
-用PBS洗涤后，外周血淋巴细胞(PBLs，1×107细胞)通过离心再分离，并将细胞沉淀溶解在250μl溶胞缓冲液中。为了确保溶胞产物的IGF-1R浓度处于ELISA测定的线性范围内，进行连续稀释。
测定程序：
-向测定板中加入100μl/孔样品
-室温温育1小时
-用200μl PBST/孔清洗
-向该板中加入以1∶1000处于3％BSA/PBST中的PAK<IGF-1Rβ>Ra-C20-IgG(Santa Cruz生物技术(Santa CruzBiotechnology)，#sc-713)，100μl/孔
-室温下温育1小时
-用200μl PBST/孔洗涤
-向该板中加入以1∶5000处于3％BSA/PBST中的PAK<兔>G-IgG-HRP，100μl/孔
-室温下温育1小时
-用200μl PBST/孔洗涤
-向测定板中加入100μl/孔3，3’-5，5’-四甲联苯胺
-室温下温育0,5小时
-用25μl/孔1M H2SO4终止反应
-测量450nm处的吸光度
在缺乏纯重组蛋白的条件下，将用阳性对照的1∶100稀释物获得的ELISA信号定义为相对单位“U”。测量不同的样品稀释物并计算至少两个值的平均值。
确定用针对IGF-1R的抗体处理的PBL培养物中IGF-1R水平的改变
来自20名捐献者的PBL在存在和缺乏抗体18的条件下培养。样品中的9份来自冷冻储液，11份由新鲜制备的细胞确定。在用针对IGF-1R的抗体处理24小时后确定IGF-1R水平的下调。在所有细胞培养物中，与未处理的细胞相比，IGF-1R水平在抗体处理中降低。处理后IGF-1R水平是在对照培养物中检测的水平的0％-62％范围内。因此，受体的下调呈现出由治疗性抗体引起的信号级联放大下调后的一般现象。受体表达的基线水平在捐献者之间强烈变化，因此似乎不可能确定“阈值”水平，且水平的时间过程必须对每名患者贯穿治疗期间确定，包括治疗前作为基线对照的数值。对于19/20捐献者，细胞培养前的水平低于细胞培养后的水平(不处理的条件下)。然而，对于17/20捐献者，这些水平仍然高于在用所述治疗性抗体处理后的细胞培养物中测量的那些。
对于2种细胞制备物，用不同浓度的huMab IGF-1R检测IGF-1R水平的降低。在较低浓度时检测的甚至更低的IGF-1R水平(图1和2)。
为了证实所述测定可以在预-临床实验中应用于食蟹猴，在存在和不存在所述治疗性抗体的条件下进行猴PBL的温育。如在人样品中地，在食蟹猴淋巴细胞中检测到IGF-1R浓度的下调。受体水平下调率与也用人材料检测的那些相似。
  申请人或代理机构文件参考24155WO-SR   国际申请号PCT/EP2008/001457
涉及保藏的微生物或其他生物材料的指示
(PCR细则Rule 13bis)
Figure A20088000537100191
表PCT/RO/134(1998年7月，2004年1月重新印刷)
PCT/R0/134表
PCT/RO/134表的中文译文(共3页)
  申请人或代理机构文件参考24155WO-SR   国际申请号PCT/EP2008/001457
涉及保藏的微生物或其他生物材料的指示
(PCR细则Rule 13bis)
表PCT/RO/134(1998年7月，2004年1月重新印刷)
B.保藏的鉴定(附页)
申请人：霍夫曼-拉罗奇有限公司，等
申请人文件参考：24155WO-SR
国际申请号：PCT/EP2008/001457
另外的保藏
所有下列的细胞系保藏在
德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und ZellkulturenGmbH)(DSMZ)
Mascheroder Weg 1B
D-38124Braunschweig
保藏日            保藏号
10.04.2003        DSM ACC2587
10.04.2003        DSM ACC2586
10.04.2003        DSM ACC2588
24.04.2003        DSM ACC2589
C.附加指示(附页)
申请人：霍夫曼-拉罗奇有限公司，等
申请人文件参考号：24155WO-SR
国际申请号：PCT/EP2008/001457
关于说明书引用的保藏生物材料的专家解决方案相关的指示
涉及保藏的生物材料的指示全部包含在说明书中。下列另外的指示不要求是说明书的一部分，并且应当作为“分开的指示”对待。它们仅涉及专家解决方案。
以下作出的另外的指示涉及在说明书第8页表格(注：中文说明书第7页表格)中称为：
<IGF-1R>HUMAB-克隆22    DSM ACC2594
<IGF-1R>HUMAB-克隆18    DSM ACC2587
<IGF-1R>HUMAB-克隆1a    DSM ACC2586
<IGF-1R>HUMAB-克隆23    DSM ACC2588
<IGF-1R>HUMAB-克隆8     DSM ACC2589
的保藏的生物材料。
另外的指示是：
对于CA(加拿大)指定：
对于加拿大的指定，按照加拿大专利法案专利细则第107和108条规定，只有通过将样品签发给局长提名的独立专家(细则10(4))，直到授予加拿大专利，或直到申请被驳回或被放弃且不再要求恢复、或被撤回的日期，才可以提供保藏的生物材料的样品。
对于EP(欧洲专利局)指定：
关于EPO的指定，按照EPC实施细则的细则28(3)的规定，只有通过将样品签发给请求人提名的专家(EPC细则28(4))，直到欧洲专利授权通知公开，或者如果申请被驳回或撤回或视撤，直至从申请日起20年，才可以提供保藏的生物材料的样品。
对于SG(新加坡)指定：
申请人由此提请注意，我们意欲根据1995年专利法则目录四的第3段，上述培养物仅可提供给专家。

Claims (14)

1.用于通过固相免疫测定确定样品中IGF-1R的方法，所述方法的特征在于所述样品是溶胞哺乳动物外周血淋巴细胞制备物(溶胞PBL样品)。
2.按照权利要求1的方法，所述方法的特征在于所述哺乳动物是人或猿。
3.按照权利要求1或2的方法，所述方法的特征在于将所述IGF-1R蛋白水平确定为向所述哺乳动物施用的针对IGF-1R的抗体的体内活性的测量标准。
4.用于评估针对IGF-1R的抗体在用所述抗体处理的哺乳动物中的体内活性的方法，所述方法的特征在于在所述哺乳动物的溶胞PBL样品中，将IGF-1R蛋白水平确定为所述抗体的体内活性的测量标准。
5.用于预测针对IGF-1R的抗体在用所述抗体处理的哺乳动物中的药效学或药物动力学特性的方法，所述方法的特征在于在所述哺乳动物的溶胞PBL样品中，将IGF-1R蛋白水平确定为所述预测的测量标准。
6.用于在施用针对IGF-1R的抗体的患者中预测临床结果或确定治疗过程的方法，所述方法的特征在于包括下列步骤：在第一时间确定所述患者的溶胞PBL样品中的IGF-1R蛋白水平，比较所述蛋白水平和在第二时间确定的所述水平。
7.按照权利要求6的方法，所述方法的特征在于取样的时间是施用之前、过程中和/或之后。
8.按照权利要求1-7的方法，所述方法的特征在于通过ELISA测量IGF-1R蛋白水平。
9.按照权利要求1-8的方法，所述方法的特征在于使用的第一和第二抗体是针对IGF-1R的结合不同表位的两种单克隆抗体、或单克隆抗体和多克隆抗体。
10.针对IGF-1R的第一和第二抗体用于制造免疫学测定从而评估针对IGF-1R的第三抗体的体内活性的用途，其中所述哺乳动物是已用所述第三抗体抗体处理的，所述用途的特征在于在所述哺乳动物的溶胞PBL样品中，将IGF-1R蛋白水平确定为关于所述第三抗体的体内活性的测量标准。
11.针对IGF-1R的第一和第二抗体用于制造免疫学测定从而预测针对IGF-1R的第三抗体在用所述第三抗体处理的哺乳动物中的药效学或药物动力学特性的用途，所述用途的特征在于在所述哺乳动物的溶胞PBL样品中，将IGF-1R蛋白水平确定为关于所述预测的测量标准。
12.针对IGF-1R的第一和第二抗体用于制造免疫学测定从而在向患者施用第三抗体的哺乳动物中预测临床结果或确定治疗过程的用途，所述用途的特征在于包括下列步骤：在第一时间确定所述哺乳动物的溶胞PBL样品中的IGF-1R蛋白水平，并且比较所述蛋白水平和在第二时间确定的所述水平。
13.按照权利要求12的用途，所述用途的特征在于取样的时间是施用所述第三抗体之前、过程中和/或之后。
14.按照权利要求10-13的用途，所述用途的特征在于免疫学测定中使用的所述抗体是针对IGF-1R的结合不同表位的两种单克隆抗体、或单克隆抗体和多克隆抗体。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5238808A (en) 1984-10-31 1993-08-24 Igen, Inc. Luminescent metal chelate labels and means for detection
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US5068088A (en) 1988-11-03 1991-11-26 Igen, Inc. Method and apparatus for conducting electrochemiluminescent measurements
IL100866A (en) 1991-02-06 1995-10-31 Igen Inc Luminescence test method and device based on magnetic tiny particles, containing many magnets
EE05724B1 (et) * 2001-01-05 2014-10-15 Pfizer Inc. Antikehad insuliinitaolise kasvufaktori I retseptorile
ATE549359T1 (de) 2003-04-02 2012-03-15 Hoffmann La Roche Antikörper gegen den insulinähnlichen wachstumsfaktor i-rezeptor und deren verwendungen
AR046071A1 (es) 2003-07-10 2005-11-23 Hoffmann La Roche Anticuerpos contra el receptor i del factor de crecimiento de tipo insulinico y los usos de los mismos

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