CN101610784A - Pth制剂和使用方法 - Google Patents

Abstract

所阐述的为一种含PTH(I－34)和非离子表面活性剂的PTH含水药物制剂、一种含所述制剂的剂型、一种包括将粘膜细胞层暴露于所述制剂的递送PTH至人类的系统，和一种使用所述制剂治疗哺乳动物骨质疏松症的方法，优选其中PTH(I－34)施药之后达到最大血浆浓度的时间Tmax小于30分钟。还阐述了一种治疗哺乳动物骨质疏松症的方法，其包括鼻内施予PTH制剂，所述PTH制剂包含有效治疗量的PTH(I－34)以及一种或多种从由增溶剂、螯合剂和一种或多种多元醇组成的组中选择的赋形剂。包含PTH(1－34)和非离子表面活性剂。还阐述了PTH(1－34)在制备治疗哺乳动物骨质疏松症的药物中的用途，其中所述药物包含有效治疗量的PTH(I－34)以及一种或多种从由非离子表面活性剂、增溶剂、螯合剂和一种或多种多元醇组成的组中选择的赋形剂。

Description

PTH制剂和使用方法

发明背景

骨质疏松症可以被定义为全身性骨骼疾病，具有低骨量、骨组织微观结构退化以及增加的骨脆性和易于骨折的特征。它最常影响老年人群，主要为绝经后的妇女。

骨质疏松症的患病引起了严重的健康问题。据国际骨质疏松症基金会估计，有44,000,000人正受到骨质疏松或骨量减少的影响。至2010年，骨质疏松症将影响超过52,000,000人，至2020年，超过61,000,000人。白种人和亚洲人中骨质疏松症的患病率比非裔美国人高，可能由于非裔美国人具有更高的峰值骨量。因为男性具有更高的峰骨密度，所以妇女受影响的人数比男性多。另外，妇女随着年龄增长骨转换率增高，由于绝经后雌激素的缺乏而导致加速的骨丢失。

骨质疏松症药理治疗的目的是保持或增加骨强度，以防止在患者整个生命过程中的骨折并且通过安全地降低骨折风险使骨质疏松症相关的发病率和死亡率最小化。最常用于治疗骨质疏松症的药物包括钙和维生素D、雌激素(有或没有黄体酮)、二磷酸酐类(bisphonate)、选择性雌激素受体调节剂(SERM)以及降钙素。

最近，甲状旁腺激素(PTH)已经作为流行的骨质疏松症治疗物出现。不像其它减少骨吸收的治疗，PTH增加骨量，这引起更高的骨矿物质密度(BMD)。PTH对骨骼有多种作用，一些是直接的和一些是间接的。PTH增加钙从骨骼释放到血液的速率。PTH的慢性作用为增加骨细胞—成骨细胞和破骨细胞两者的数量，并且增加重建骨。这些效果在PTH施药后数小时内是明显的并且在PTH停药后持续数小时。给骨质疏松症患者施予PTH导致骨骼形成的净刺激(net stimulation)，尤其在脊柱和臀部的骨小梁内引起非常显著的骨折减少。认为由于成骨细胞具有PTH受体，因而骨骼形成是通过利用PTH的成骨细胞的刺激而发生的。

甲状旁腺激素(PTH)是分泌的、具有84个氨基酸残基的多肽，其氨基酸序列为：Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser GlnArg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu Lys Ser LeuGly Glu Ala Asp Lys Ala Asn Val Asp Val Leu Thr Lys Ala Lys Ser Gln(SEQID NO：1)。人类体内利用某些形式PTH的研究已经证明对骨骼的合成作用，并且引起对其用于骨质疏松症和相关骨骼疾患治疗的用途的显著关注。

例如，利用根据所有发表的报告认为在生物学上等价于全长激素的、牛和人类激素N-末端的34个氨基酸Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe(SEQ ID NO：2)，已经表明在人体内尤其当通过皮下途径以脉冲的方式施予时甲状旁腺激素促进骨骼生长。PTH的细微差别形式、人类PTH(1-38)已经显示相似的结果。

PTH(1-34)，也被称为特立帕肽，当前在市场上的商品名为FORTEO

、Eli Lilly、Indianapolis、Indiana，其用于绝经后患有骨质疏松症的骨折高危妇女的治疗。这种药通过一天一次皮下注射含醋酸盐缓冲剂、甘露醇和间甲酚的pH为4的20μg水溶液被施予。然而，许多人反对注射，这样就变得与所述PTH的处方给药不相依从。因此，需要开发甲状旁腺激素肽的鼻内制剂，其具有合适的生物利用度这样可以在血液中达到治疗水平以有效治疗骨质疏松症或骨量减少症。利用大肠杆菌(Escherichia coli)菌株通过DNA重组技术生产FORTEO

(Eli Lilly，U.S.)或FORSTEO(Eli Lilly，UK)。PTH(1-34)分子量为4117.87道尔顿。发表了关于PTH(1-34)以及其临床用途的评论，包括例如Brixen等，2004；Dobnig，2004；Eriksen和Robins，2004；Quattrocchi和Kourlas 2004，由此通过引用并入。FORTEO

目前在美国和欧洲被批准(即FORSTEO)。在短期试验中在2800名以上的患者体内以每天5到100μg的剂量范围对特立帕肽的安全性进行了评价。在长期试验中每天施药达40μg的剂量直至2年。FORSTEO相关的不良事件通常为轻微的并且通常不需要治疗的中断。最常报道的不良反应为头晕、腿痛性痉挛、恶心、呕吐和头痛。已经有报道关于FORSTEO的轻度的暂时血钙过多，其通常自我限定在6小时以内。

目前以每天皮下注射施予FORTEO

。以下阐述针对各种剂量的FORTEO的Cmax和AUC值(20ug为商业许可剂量)。

如果可以非注射途径施药，包括鼻、口腔、胃肠和皮肤，对患者的可接受性较好。先前在一项研究中已经给人类鼻内施予每天达500μg剂量的特立帕肽7天(Suntory新闻发布)。Suntory实施了大规模的重组人PTH_1-34生产并且1999年二月使用鼻制剂从1期临床试验获得了希望的结果。http://www.suntory.com/news/1999-02.html accessed 15 April 2004)和另一项研究中受治疗者每天接受达1,000μg持续3个月(Matsumoto等，Daily NasalSpray of hPTH_1-34 for 3 Months Increases Bone Mass in Osteoporotic Subjects(在骨质疏松受治疗者体内每天鼻喷雾hPTH_1-34持续3个月增加骨量)(ASBMR 2004 1171页介绍，2004年10月4日，Seattle WA)，注意到这种途径没有安全方面的担忧。

多数PTH制剂是根据新鲜的或低压冻干的激素重新溶解(reconstituted)配成的，并且引入各种载体、赋形剂和媒介物。PTH制剂多在基于水的媒介物中制备，如盐水或通常用醋酸酸化以增溶激素的水。许多报道的制剂也引入白蛋白作为稳定剂(参见，如Reeve等人，Br.Med.J.，1980，280：6228；Reeve等人，Lancet，1976，1：1035；Reeve等人，Calcif.Tissue Res.，1976，21：469；Hodsman等人，Bone Miner 1990，9(2)：137；Tsai等人，J.Clin.Endocrinol Metab.，1989，69(5)：1024；Isaac等人，Horm.Metab.Res.，1980，12(9)：487；Law等人，J.Clin Invest.，1983，72(3)：1106；以及Hulter，J.Clin Hypertens，1986，2(4)：360)。其它报道的制剂在低压冻干的激素或重新溶解配成的媒介物中引入赋形剂如甘露醇。用于人类研究的一些制剂包括人类PTH(1-34)制剂，其由甘露醇、热灭活的人血清白蛋白和作为吸收促进剂的己酸(一种蛋白酶抑制剂)组成(参见Reeve等人，1976，Calcif.Tissue Res.，21，副刊：469-477)；重新溶解到盐水媒介物的人PTH(1-38)制品(参见Hodsman等人，1991，14(1)，67-83)；以及在含白蛋白的pH用醋酸调节的含水媒介物中的牛PTH(1-34)制品。人PTH(1-84)的国际参考制品由100ng激素与同一安瓿中的250μg人血清白蛋白和1.25mg乳糖(1981)组成，牛PTH(1-84)的国际参考制品由0.01M醋酸中10μg低压冻干的激素和0.1％w/v的甘露醇组成(参见Martindale，The Extra Pharmacoepia，The PharmaceuticalPress，伦敦，第29版，1989，1338页)。在EP 619 119中报道了一种致力于提高h-PTH(1-34)的低压冻干制品稳定性的制剂，其利用了糖和氯化钠的组合。5,496,801号美国专利阐述了天然激素PTH(1-84)的冷冻干燥组合物，其包括作为赋形剂的甘露醇和作为非挥发性缓冲剂的柠檬酸源。

6,770,623号美国专利阐述稳定化的特立帕肽制剂。该′623制剂需要缓冲剂。该缓冲剂包括任何酸或盐组合，其为药学上可接受的且能够维持含水溶液在3至7，优选3-6的pH范围，例如醋酸盐、酒石酸盐或柠檬酸盐源。缓冲剂的浓度可以在约2mM至约500mM的范围内。

5,407,911号美国专利阐述了甘草酸二钾作为乳化剂用于PTH鼻施药的用途。当用于鼻内PTH制剂时认定聚山梨酯80为劣等的，因为它在制剂中引起沉淀和不稳定。

甲状旁腺激素的商业开发需要研制一种制剂，其在保存稳定性和易于制备的方面是可接受的。因为甲状旁腺激素是一种蛋白并且比传统小分子量药物要不稳定得多，所以甲状旁腺激素制剂呈现出制药业不常面临的挑战。此外，如其它已经成功配制的蛋白一样，PTH对氧化、脱酰胺作用和水解作用格外敏感，并且为了保持生物活性需要其N-末端和C-末端序列保持完整。

配制蛋白通常比配制小分子困难，因为蛋白更易降解(参见Arakawa等人，(2001)Adv.Drug Del.Rev.46：307-26，由此将其整个通过引用并入)。因此，纯化蛋白的稳定性是难以在此之前预测的，且一般而言必须根据各个情况评价。FORTEO

为特立帕肽的液体药物制剂，其稳定需要缓冲剂。需要一种不需要缓冲剂的，且适合鼻内施药的储存稳定的特立帕肽制剂。

PTH或其类似物鼻内递送的一个潜在问题是对鼻组织的局部作用。例如，Tanako和合伙者已经阐述了PTH局部施予对培养的鼻软骨细胞的效果(参见Takano T等人，J Dent Res.，1987年1月，66(1)：84-7；TakigawaM等人，J Dent Res.，1984年1月，63(1)：19-22；Takano T等人，NipponKyosei Shika Gakkai Zasshi，1983年9月，42(3)：314-21)。

因此，需要开发安全且有效的PTH或PTH类似物的鼻内制剂，其将适合系统递送，但不会引起鼻组织显著的局部作用(即不会对鼻产生毒性影响)。

发明内容

本发明的一个方面为用于PTH鼻内递送的含水药物制剂，其包含PTH(1-34)和非离子表面活性剂。在一个实施方案中，表面活性剂选自由非离子聚氧乙烯醚、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆F68、泊洛沙姆F127和羊毛脂醇组成的组。在另一个实施方案中，表面活性剂为聚山梨酯80。在另一个实施方案中，聚山梨酯80在制剂中存在少于约50mg/mL。在另一个实施方案中，聚山梨酯80在制剂中存在少于约10mg/mL。在另一个实施方案中，聚山梨酯80在制剂中存在少于约1mg/mL。在另一个实施方案中，多元醇选自由蔗糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤藓糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、海藻糖、D-半乳糖、乳果糖、纤维二糖、龙胆二糖(gentibiose)、丙三醇和聚乙二醇组成的组。在另一个实施方案中，多元醇为山梨醇。在另一个实施方案中，防腐剂选自由氯代丁醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲酸钠、山梨酸、苯酚和邻甲酚、间甲酚或对甲酚组成的组。在另一个实施方案中，制剂具有约3至约6的pH。在另一个实施方案中，制剂具有约5.0或更低的pH。在另一个实施方案中，制剂具有约4.0或更低的pH。在另一个实施方案中，含水溶液为液滴的形式。在另一个实施方案中，液滴具有约1微米到1000微米的平均体积中位颗粒尺寸(Dv，50)。在另一个实施方案中，液滴具有约5微米到500微米的平均体积中位颗粒尺寸(Dv，50)。在另一个实施方案中，液滴具有约10微米到100微米的平均体积中位颗粒尺寸(Dv，50)。在另一个实施方案中，对人受治疗者施药获取PTH在给药后的至少10pg/mL的最大血清浓度(Cmax)。

本发明的另一个方面为用于治疗哺乳动物骨质疏松症的方法，其包括给哺乳动物鼻内施予有效治疗量的PTH制剂，其中所述的制剂包含PTH(1-34)和非离子表面活性剂。在一个实施方案中，表面活性剂选自由非离子聚氧乙烯醚、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆F68、泊洛沙姆F127和羊毛脂醇组成的组。在另一个实施方案中，制剂具有约3-6的pH。在另一个实施方案中，含约1μg至约1000μg的PTH(1-34)的剂量被施予哺乳动物。在另一个实施方案中，含约20μg至约400μg的PTH(1-34)的剂量被施予哺乳动物。在另一个实施方案中，哺乳动物为人类。在另一个实施方案中，PTH制剂的施药引起钙血浆水平的增加。在另一个实施方案中，钙血浆水平的增加与PTH的合成作用相关联。在另一个实施方案中，钙血浆水平的增加不是骨分解代谢增加的结果。在另一个实施方案中，钙血浆水平的增加不是骨分解代谢增加的结果。在另一个实施方案中，PTH制剂的施药引起骨量增加。在另一个实施方案中，PTH制剂的施药引起骨强度增加。在另一个实施方案中，PTH制剂的施药引起骨折抗力的增加。在另一个实施方案中，PTH制剂的施药不会产生鼻组织的组织学改变。

本发明的另一个方面是用于治疗哺乳动物骨质疏松症的方法，其包括给哺乳动物鼻内施予有效治疗量的PTH制剂，其中所述的PTH制剂包含PTH(1-34)以及一种或多种从由增溶剂、螯合剂和一种或多种多元醇组成的组中选择的赋形剂。在一个实施方案中，制剂进一步包含表面活性剂。在另一个实施方案中，表面活性剂选自由非离子聚氧乙烯醚、胆汁盐类、甘胆酸钠、脱氧胆酸盐、梭链孢酸衍生物、牛磺二氢梭链孢酸钠、二癸酰基L-α-磷脂酰胆碱(L-α-phosphatidylcholine didecanoyl，DDPC)、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羊毛脂醇和脱水山梨糖醇单油酸酯组成的组。在另一个实施方案中，表面活性剂为DDPC。在另一个实施方案中，一种或多种多元醇选自由蔗糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤藓糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、海藻糖、D-半乳糖、乳果糖、纤维二糖、龙胆二糖、丙三醇和聚乙二醇组成的组。在另一个实施方案中，多元醇为山梨醇。在另一个实施方案中，螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)或乙二醇四乙酸(EGTA)。在另一个实施方案中，螯合剂为EDTA。在另一个实施方案中，增溶剂选自由环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精和甲基-β-环糊精组成的组。在另一个实施方案中，增溶剂为环糊精。

本发明的另一个方面是用于治疗哺乳动物骨质疏松症的方法，其包括给哺乳动物鼻内施予有效治疗量的PTH制剂，其中所述的PTH制剂包含PTH(1-34)和非离子表面活性剂，并且其中所述制剂施药于哺乳动物后达到PTH(1-34)的最大血浆浓度的时间T_max少于30分钟。在一个实施方案中，C_max大于约300pg/ml起因于所述制剂的单次施药。

本发明的另一个方面是PTH的剂型，其包含PTH和非离子去污剂的含水药物制剂，用于雾化的具有约5％或更多的生物利用度的PTH的鼻内递送，其中所述制剂包含有效治疗量的PTH(1-34)和聚山梨酯，并且其中在5℃下储存24周后有至少90％的所述PTH可以被回收。在一个实施方案中，PTH剂型在5℃下储存至少6个月后具有大于约90％的所述PTH的回收。在另一个实施方案中，PTH剂型在5℃下储存1年后具有大于约90％的所述PTH的回收。在另一个实施方案中，PTH剂型在5℃下储存2年后具有大于约90％的所述PTH的回收。在另一个实施方案中，PTH剂型在25℃下储存24周后具有大于约80％的所述PTH的回收。在另一个实施方案中，PTH剂型在25℃下储存至少6个月后具有大于约80％的所述PTH的回收。在另一个实施方案中，PTH剂型在25℃下储存1年后具有大于约80％的所述PTH的回收。在另一个实施方案中，PTH剂型在25℃下储存2年后具有大于约80％的所述PTH的回收。在另一个实施方案中，PTH剂型在40℃下储存至少4周后具有大于约65％的所述PTH可以被回收。在另一个实施方案中，PTH剂型在大于约5天的使用后具有大于约90％的所述PTH的回收。在另一个实施方案中，PTH剂型在所有喷雾剂处于30℃/65％的相对湿度下具有大于约90％的所述PTH的回收。在另一个实施方案中，pH为约5.0或更小。在另一个实施方案中，pH为约4.5或更小。在另一个实施方案中，pH为约4.0或更小。在另一个实施方案中，pH为约3.5或更小。在另一个实施方案中，PTH的浓度为至少约1mg/ml。在另一个实施方案中，PTH的浓度为至少约2mg/ml。在另一个实施方案中，PTH的浓度为至少约6mg/ml。在另一个实施方案中，PTH的浓度为至少约10mg/ml。在另一个实施方案中，该剂型适合鼻内施药以获取从约2μg到约1000μg的所述PTH的剂量。在另一个实施方案中，该剂型适合鼻内施药以获取从约100μg到约600μg的所述PTH的剂量。在另一个实施方案中，聚山梨酯在制剂中存在至少约1mg/mL。在另一个实施方案中，聚山梨酯在制剂中存在至少约10mg/mL。在另一个实施方案中，聚山梨酯在制剂中存在至少约50mg/mL。在另一个实施方案中，存在防腐剂。在另一个实施方案中，防腐剂为氯代丁醇。

本发明的另一个方面是PTH的剂型，其包含含水药物制剂，用于雾化的具有约10％或更多的生物利用度的PTH的鼻内递送，其中所述制剂包含有效治疗量的PTH(1-34)、甲基-β-环糊精、二癸酰基磷脂酰胆碱以及乙二胺四乙酸，并且其中在5℃储存24周后有至少90％的所述PTH可以被回收。在一个实施方案中，所述PTH剂型在5℃储存至少6个月后有大于约90％的PTH回收。在另一个实施方案中，所述PTH剂型在5℃储存1年后具有大于约90％的PTH回收。在另一个实施方案中，所述PTH剂型在5℃储存2年后具有大于约90％的PTH回收。在另一个实施方案中，所述PTH剂型在25℃储存24周后具有大于约80％的PTH回收。在另一个实施方案中，所述PTH剂型在25℃储存至少6个月后具有大于约80％的PTH回收。在另一个实施方案中，所述PTH剂型在25℃储存1年后具有大于约80％的PTH回收。在另一个实施方案中，所述PTH剂型在25℃储存2年后具有大于约80％的PTH回收。在另一个实施方案中，所述PTH剂型在40℃储存至少4周后具有大于约65％的PTH回收。在另一个实施方案中，所述PTH剂型使用大于约5天后具有大于约90％的PTH回收。在另一个实施方案中，所述PTH剂型在所有喷雾剂处于30℃/65％的相对湿度下具有大于约90％的PTH回收。在另一个实施方案中，所述pH为约5.0或更少。在另一个实施方案中，所述pH为约4.5或更少。在另一个实施方案中，所述pH为约4.0或更少。在另一个实施方案中，所述pH为约3.5或更少。在另一个实施方案中，PTH的浓度为至少约1mg/ml。在另一个实施方案中，PTH的浓度为至少约2mg/ml。在另一个实施方案中，PTH的浓度为至少约6mg/ml。在另一个实施方案中，PTH的浓度为至少约10mg/ml。在另一个实施方案中，所述剂型适合鼻内施药以获取从约2μg到约1000μg的所述PTH的剂量。在另一个实施方案中，所述剂型适合鼻内施药以获取从约100μg到约600μg的所述PTH的剂量。在另一个实施方案中，存在防腐剂。在另一个实施方案中，所述防腐剂为氯代丁醇。

本发明的另一方面为递送PTH给人类的方法，其包括将粘膜细胞层暴露于含PTH(1-34)和非离子表面活性剂的PTH溶液。在一个实施方案中，所述方法使用非肠胃施药。在另一个实施方案中，所述施药方法选自由鼻内、口腔、肠胃、阴道和经皮组成的组。在另一个实施方案中，所述方法为鼻内施药。在另一个实施方案中，所述鼻内施药包括递送含尺寸约1微米至约700微米的小滴的气溶胶。在另一个实施方案中，所述鼻内施药包括递送含约0.7μg至约25μg PTH每kg患者体重的气溶胶。在另一个实施方案中，所述鼻内施药包括递送含约50μg至约800μg PTH的气溶胶。在另一个实施方案中，所述方法为口服递送。在另一个实施方案中，所述口服递送为控制释放递送，其中Tmax距释放时间小于约40分钟。

本发明的另一个方面为通过鼻内施药递送PTH给人类的系统，其包括瓶子中的含PTH(1-34)和非离子表面活性剂的含水PTH溶液，和连接到所述瓶子的且与容器中所述PTH溶液流体相通的小滴产生致动器，其中当启动(engaged)所述致动器时所述致动器通过致动器顶端产生所述PTH溶液的喷雾，其中当自所述致动器顶端3.0cm高度测量时所述PTH喷雾具有从约1.0至约1.4的喷流型(spray pattern)椭圆率。在一个实施方案中，所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约5％的所述小滴尺寸小于10μm。在另一个实施方案中，所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约1％的所述小滴尺寸小于10μm。在另一个实施方案中，所述PTH喷雾具有分别为约25mm和约40mm的喷流型长轴和短轴。在另一个实施方案中，所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约90％的所述小滴尺寸为约250μm或更小。在另一个实施方案中，所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约90％的所述小滴尺寸为约120μm或更小。在另一个实施方案中，所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约50％的所述小滴尺寸为约75μm或更小。在另一个实施方案中，所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约50％的所述小滴尺寸为约50μm或更小。在另一个实施方案中，所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约10％的所述小滴尺寸为约30μm或更小。在另一个实施方案中，所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约10％的所述小滴尺寸为约20μm或更小。在另一个实施方案中，制剂用于骨质疏松症或骨量减少的治疗。

本发明的另一个方面为，PTH(1-34)在制备治疗哺乳动物骨质疏松症的药物中的用途，其中所述药物包含PTH(1-34)和非离子表面活性剂。在一个实施方案中，所述表面活性剂选自由非离子聚氧乙烯醚、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆F68、泊洛沙姆F127和羊毛脂醇组成的组。在另一个实施方案中，所述制剂具有约3-6的pH。在另一个实施方案中，含1μg至1000μg的PTH(1-34)的剂量被施予哺乳动物。在另一个实施方案中，含20μg至400μg的PTH(1-34)的剂量被施予哺乳动物。在另一个实施方案中，所述哺乳动物为人类。在另一个实施方案中，所述PTH制剂的施药引起钙血浆水平的增加。在另一个实施方案中，所述钙血浆水平的增加与PTH的合成作用相关联。在另一个实施方案中，所述钙血浆水平的增加不是骨分解代谢增加的结果。在另一个实施方案中，所述钙血浆水平的增加不是骨分解代谢增加的结果。在另一个实施方案中，所述PTH制剂的施药引起骨量增加。在另一个实施方案中，所述PTH制剂的施药引起骨强度的增加。在另一个实施方案中，所述PTH制剂的施药引起骨折抗力的增加。在另一个实施方案中，PTH制剂的施药不会产生鼻组织的组织学改变。

本发明的另一个方面为PTH(1-34)在制备治疗哺乳动物骨质疏松症的药物中的用途，其中所述药物包含有效治疗量的PTH(1-34)和一种或多种从由增溶剂、螯合剂和一种或多种多元醇组成的组中选择的赋形剂。在一个实施方案中，所述制剂进一步包含表面活性剂。在另一个实施方案中，所述表面活性剂选自由非离子聚氧乙烯醚、胆汁盐类、甘胆酸钠、脱氧胆酸盐、梭链孢酸衍生物、牛磺二氢梭链孢酸钠、二癸酰基L-α-磷脂酰胆碱(DDPC)、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羊毛脂醇和脱水山梨糖醇单油酸酯组成的组。在另一个实施方案中，所述表面活性剂为DDPC。在另一个实施方案中，一种或多种多元醇选自由蔗糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤藓糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、海藻糖、D-半乳糖、乳果糖、纤维二糖、龙胆二糖、丙三醇和乙二醇组成的组。在另一个实施方案中，所述多元醇为山梨醇。在另一个实施方案中，所述螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)或乙二醇四乙酸(EGTA)。在另一个实施方案中，所述螯合剂为EDTA。在另一个实施方案中，所述增溶剂选自由环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精和甲基-β-环糊精组成的组。在另一个实施方案中，所述增溶剂为环糊精。

本发明的另一个方面为PTH(1-34)在制备治疗哺乳动物骨质疏松症的药物中的用途，其中所述药物包含PTH(1-34)和非离子表面活性剂，并且其中所述制剂施药于哺乳动物后达到PTH(1-34)的最大血浆浓度的时间T_max小于30分钟。在一个实施方案中，C_max大于300pg/ml起因于所述制剂的单次施药。

附图说明

图1：1-5各个时期的时间对应的平均血浆浓度(线图)。

图2：C_max与平均值的比值，低剂量PTH制剂与FORTEO

相比较。

发明公开

优选激素为甲状旁腺激素并且哺乳动物为人类。在一个最优选的实施方案中，甲状旁腺激素肽为PTH(1-34)，又称为特立帕肽。Tregear的4,086,196号美国专利阐述了人类PTH类似物并声明在体外细胞试验中前27到34个氨基酸对腺苷酸环化酶刺激是最有效的。通过两个第二信使系统的激活，PTH操控激活G_s蛋白的腺苷酸环化酶(AC)和激活G_q蛋白的磷脂酶C_β。后一个系统引起对膜结合蛋白激酶C(PKC)活性的刺激。已经表明PKC的活性需要PTH的第29至32位残基(Jouishomme等人，(1994)J.Bone Mineral Res.9：1179-1189)。已经确定骨骼生长中的增加(即对骨质疏松症的治疗有用的作用)，与肽序列提高AC活性的能力偶联。已经表明天然的PTH序列，PTH(1-84)(SEQ ID NO：1)，具有所有这些活性。

这里通常使用的术语“甲状旁腺激素”或“PTH”或“PTH肽”包含以上阐述的甲状旁腺激素形式。甲状旁腺激素可以通过已知的重组或合成方法获得，如这里通过引用结合入本专利的4,086,196号美国专利所阐述的。

因此，本发明为用于治疗哺乳动物骨质疏松症或骨量减少的方法，其包括透粘膜施予含PTH肽的制剂，以便当50μg PTH被透粘膜施予哺乳动物时PTH肽在哺乳动物血浆中的浓度增加至少5pmol/l血浆，优选至少10pmol/l血浆。

增强PTH递送至或通过鼻粘膜表面的鼻内递送增强剂被应用。对于被动吸收的药物，细胞旁通路和跨细胞通路对药物转运的相对作用取决于药物的pKa、分配平衡常数、分子半径和电荷、递送药物的腔内环境的pH以及吸收表面的面积。本发明的鼻内递送增强剂可以为pH控制剂。本发明的药物制剂的pH是影响通过药物转运的细胞旁通路和跨细胞通路的PTH吸收的因素。在一个实施方案中，本发明的药物制剂pH被调整到约3.0至7.0之间。在另一个实施方案中，本发明的药物制剂pH被调整到约3.0至6.0之间。在另一个实施方案中，本发明的药物制剂pH被调整到约4.0至5.0之间。通常，所述pH为4.0±0.3。

如以上指出的，本发明提供改进的方法和组合物，用于PTH肽粘膜递送给哺乳动物受治疗者以治疗或预防骨质疏松症或骨量减少。根据本发明的方法用于治疗和预防的合适的哺乳动物受治疗者的实例包括，但不限于人类和非人类的灵长类，家畜类如马、牛、绵羊和山羊，以及包括狗、猫、小鼠、大鼠、豚鼠和兔在内的研究种类和家养种类。

为了提供对本发明的更好的理解，提供以下定义：

根据本发明，PTH肽还包括游离碱，酸加成盐或金属盐如肽的钾盐或钠盐，以及通过如酰胺化、糖基化、酰化、硫酸化、磷酸化、乙酰化、环化和其它公知的共价修饰方法的过程修饰的PTH肽。

鼻喷雾产品的生产过程通常包括用于PTH(1-34)鼻喷雾的稀释液的制备，所述稀释液含～85％的水加无PTH的鼻喷雾制剂组分。然后测量所述稀释液的pH，并且如果有必要时用氢氧化钠或盐酸调整pH至4.0±0.3。通过将～85％的终目标体积的稀释液非无菌地转移到螺旋盖瓶中制备PTH(1-34)鼻喷雾。加入适当量的PTH(1-34)并混合至完全溶解。测量pH，并且如果有必要时用氢氧化钠或盐酸调整pH至4.0±0.3。加入足够量的稀释液至达到终目标体积。螺旋盖瓶被装满并附上盖子。以上生产过程的阐述代表一种用于制备最初临床批次的药物产品的方法。可以在开发过程中改进这种方法以优化生产过程。

当前市场化的PTH需要无菌生产条件以顺应FDA的规则。肠胃外施药，包括用于注射或输注的PTH，需要无菌(抗菌)生产过程。用于无菌药物生产的现行药品生产管理规范(GMP)包括设计和建立特征的标准(21CFR§211.42(2005年4月1日))；试验和批准或组分排斥、药品容器以及闭合的标准(§211.84)；微生物污染控制的标准(§211.113)；和其它特殊试验要求(§211.167)。非肠胃外(非无菌)产品，如本发明的鼻内产品，不需要这些特殊的无菌生产条件。可以容易理解，与非无菌产品生产过程的那些要求相比，无菌生产过程的要求实质上更高并且相应地费用更大。这些费用包括用于设备的更多的资本成本费用，以及更昂贵的生产费用：用于无菌生产的包括另外房间和通风的额外设备；与无菌生产相关的包括更多人力、更广的质量控制和质量保证、以及管理的支持的额外费用。因此，鼻内PTH产品的生产费用，例如本发明的生产费用，远少于肠胃外施予的PTH产品的生产费用。本发明满足了PTH的非无菌生产过程的需要。

“粘膜递送增强剂”被定义为化学试剂和其它赋形剂，当它加入到含水PTH制剂时形成一种引起PTH肽穿过粘膜的转运显著增加的制剂，所述PTH肽穿过粘膜的转运通过最大血液、血清或脑脊髓液浓度(C_max)或者浓度相对于时间的曲线中曲线下的面积(AUC)来测量。粘膜包括鼻、口、肠、口腔、支气管肺、阴道和直肠的粘膜的表面，并且实际上包括内衬于所有体腔或与外界相通的通道中的所有分泌粘液的膜。粘膜递送增强剂有时称为载体。

正如这里所使用的，粘膜递送增强剂包括一些试剂，它们增强PTH肽或其它生物活性化合物的释放或溶解(如从制剂递送媒介物)、扩散速率、渗透能力和周期、摄取、停留时间、稳定性、有效半衰期、峰浓度水平或持续浓度水平、清除和其它期望的粘膜递送特征(如在递送位置测量，或在所选的目标活性位置测量如血液或中枢神经系统)。因此粘膜递送的增强可以通过多种机制的任何一种发生，如通过增加PTH肽的扩散、转运、持久性或稳定性，增加膜流动性，调整调节细胞内或细胞旁渗透的钙和其它离子的利用度或作用，增溶粘膜的膜组分(如脂质)，改变粘膜组织中非蛋白和蛋白巯基水平，增加穿过粘膜表面的水流量，调整上皮的结合生理学，减小粘膜上皮上的粘液的粘性，减小粘膜纤毛清除率，和其它机制。

正如这里所使用的，“PTH肽的粘膜有效量”关注于PTH肽至受治疗者体内的药物活性目标位置的有效粘膜递送，所述有效粘膜递送可能包括多种递送或传送途径。例如给定的活性剂可以由粘膜细胞之间的清除找到它的通路并到达相邻的血管壁，然而通过另一个通路所述试剂可以，或者被动地或者主动地，被吸收到粘膜细胞内以在所述细胞中作用或者被卸载或转运出所述细胞以到达第二目标位置，如体循环。本发明的方法和组合物可以促进活性剂沿着一种或多种这些替代途径移位，或者可以直接作用于粘膜组织或邻近的血管组织以促进所述活性剂的吸收或渗透。在本文中所述的吸收或渗透的促进不限于这些机制。

如这里使用的“PTH肽的峰值血浆浓度(C_max)”，“PTH肽血浆浓度相对于时间的曲线下面积(AUC)”，“到达PTH肽最大血浆浓度的时间(t_max)”为所属领域内的技术人员已知的药物代谢动力学参数。Laursen等人，Eur.J.Endocrinology，135：309-315(1996)。所述“浓度相对于时间的曲线”在一个剂量的PTH肽通过鼻内、肌内、或皮下的施药途径施药给受治疗者后，测量受治疗者的血清中PTH肽相对于时间的浓度。“C_max”为单个剂量的PTH肽施药至受治疗者后PTH肽在受治疗者的血清中的最大浓度。“t_max”为单个剂量的PTH肽施药给受治疗者后达到PTH肽在受治疗者的血清中最大浓度的时间。

通常使用“缓冲剂”来维持溶液的pH在一个近似恒定的值。即使当少量的强酸或强碱加入到溶液时，缓冲剂通过阻止或中和氢离子或氢氧离子的浓度的巨大变化，来维持所述溶液的pH。缓冲剂通常由弱酸和它适当的盐(或弱碱和它适当的盐)组成。弱酸的适当的盐含有所述弱酸中存在的相同阴离子。(参见Lagowski，Macmillan Encyclopedia of Chemistry，第1册，Simon & Schuster，New York，1997年第273-4页)。Henderson-Hasselbach公式，pH＝pKa+log₁₀[A^-]/[HA]，用来描述缓冲剂，并且基于弱酸解离的标准方程HA≒H⁺+A^-。通常所用的缓冲剂源的实例包括以下：醋酸盐、酒石酸盐或柠檬酸盐。

“缓冲能力”表示在显著pH变化即将发生前可以加入到缓冲溶液的酸或碱的量。如果pH位于弱酸的pK-1和pK+1的范围内那么缓冲能力是可以评估的，但是如果在所述范围外缓冲能力就跌落至某种程度以至于起很小的作用。因此，一个给定的系统仅在弱酸(或弱碱)的pK任一侧的一个pH单位范围内具有有用的缓冲作用。(参见Dawson，Data for BiochemicalResearch，第三版，牛津科学出版，1986年第419页)。通常，选择合适的浓度以便溶液的pH在弱酸(或弱碱)的pKa的附近。(参见Lide，CRCHandbook of Chemistry and Physics，第86版，Taylor & Francis Group，2005-2006，第2-41页)。另外，强酸和强碱溶液通常不被归类为缓冲溶液，并且它们在pH值2.4到11.6之间不呈现缓冲能力。

“非输注施药”表示不包括直接注射入动脉或静脉的任何递送方法，所述注射为一种方法，该方法迫使或驱使(一般为流体)进入某物并且尤其通过针、注射器或其它侵入法方式引入身体部分。非输注施药包括皮下注射、肌内注射、腹腔内(intraparitoneal)注射和递送至粘膜的非注射方法。

骨质疏松症为系统性骨骼疾病，具有低骨量、骨组织微观结构退化、以及增加的骨脆性和易于骨折的特征。骨量减少为减少的骨钙化或骨密度，是一个适用于所有发现病情的骨骼系统的描述术语。

骨质疏松症或骨量减少的治疗和医学诊断包括施用临床有效剂量的PTH用于骨质疏松症或骨量减少的预防和/或治疗。如以上所指出的，本发明提供改进的和有用的方法和组合物，其用于PTH肽的鼻粘膜递送以预防和治疗哺乳动物受治疗者的骨质疏松症或骨量减少。如这里所使用的，骨质疏松症或骨量减少的预防和治疗表示通过在患者体内降低骨量的增加、减少骨骼吸收或降低骨折的发病率，从而抑制临床骨质疏松症的发病或降低临床骨质疏松症的发病率或严重程度。

PTH肽也可以与其它治疗剂如二磷酸酐类、钙、维生素D、雌激素或雌激素-受体结合复合物、选择性雌激素受体调节剂(SERM)、骨形态发生蛋白或降钙素结合施予。

用于PTH肽至哺乳动物受治疗者的粘膜施药的改进的方法和组合物优化了PTH肽给药方案。本发明提供与一种或多种粘膜递送增强剂如非离子表面活性剂一起配制的PTH肽的粘膜递送，其中PTH肽剂量释放在粘膜施药后被大体标准化和/或在PTH肽释放的一个有效递送时期内被维持，所述有效递送时期的范围从约0.1到2.0小时、0.4到1.5小时、0.7到1.5小时或0.8到1.0小时。可以利用本发明的方法和组合物通过外源PTH肽的重复施药促进PTH肽的持续释放。

用于PTH肽至哺乳动物受治疗者的粘膜施药的改进的组合物和方法优化了PTH肽给药方案。本发明提供制剂的改善的粘膜(如鼻的)递送，所述制剂包含与一种或多种粘膜递送增强剂和任选一种或多种持续释放增强剂结合的PTH肽。本发明的粘膜递送增强剂产生递送的有效增加，如最大血浆浓度的(C_max)的增加以增强粘膜施药PTH肽的治疗活性。第二个影响PTH肽在血浆中和CNS中的治疗作用的因素是停留时间(RT)。与鼻内递送增强剂结合的持续释放增强剂增加了PTH肽的C_max并且延长了停留时间(RT)。这里公开了本发明获得持续释放的增强制剂的方法和聚合物递送媒介物和其它试剂，例如聚乙二醇(PEG)。本发明提供了改进的PTH肽递送方法和剂型，用于哺乳动物受治疗者骨质疏松症或骨量减少的治疗或预防。

在本发明的粘膜递送组合物和方法中，应用各种增强PTH肽至或穿过粘膜表面的递送的递送增强剂。在这点上，PTH肽穿过粘膜上皮的递送可以“跨细胞地”或“细胞旁地”发生。这些通路对PTH肽整个流量和生物利用度的贡献程度取决于粘膜的环境、活性剂的理化性质和粘膜上皮的性质。细胞旁转运仅包括被动扩散，而跨细胞转运通过被动的、促进的或主动的过程发生。通常，亲水的、被动转运的、极性的溶质通过细胞旁路扩散，而更亲脂的溶质利用跨细胞通路。吸收和生物利用度(如，通过渗透系数或生理测定反映)，针对不同的主动或被动吸收的溶质，可以很容易得到评价，用于本发明中所选择的任何PTH肽的胞旁或跨细胞两种递送的组分。对于被动吸收药物，药物转运的细胞旁和跨细胞通路的相对贡献取决于药物的pKa、分配系数、分子半径和电荷，递送药物的腔内环境的pH，以及吸收表面的面积。细胞旁通路代表鼻粘膜上皮的可进入表面积的一个相对小的部分。概括地，已报道细胞膜占据的粘膜表面积比细胞旁空间占据的面积大一千倍。因此，较小的可进入面积以及与大分子渗透相反的基于尺寸和电荷的区分提示：与针对药物转运的跨细胞递送相比，细胞旁通路通常为作用较小的通路。令人惊讶的是，本发明的方法和组合物提供了生物治疗物质的经过细胞旁通路进入和穿过粘膜上皮的显著增强的转运。因此，本发明的方法和组合物可选择地，或在单个方法或组合物中，成功地靶向细胞旁和跨细胞两个通路。

尽管吸收促进的机制可以随着本发明的不同的粘膜递送增强剂变化，但是本文中有用的试剂将大体不会不利地影响粘膜组织，并且根据特定PTH肽或其它活性剂或递送增强剂的物理化学特性选择。在本文中，增加粘膜组织的穿透或渗透性的递送增强剂将常常引起粘膜的保护性渗透屏障的一些改变。针对本发明中这些有价值的递送增强剂，通常期望粘膜渗透性的任何显著变化在适合药物递送的期望期间的时限内为可逆的。另外，伴随长期使用，将没有实质的、累积毒性，粘膜的屏障性质中也没有任何诱导的持久的有害变化。

在本发明的某些方面中，用于协同施药或与本发明的PTH肽组合制剂的递送增强剂选自吸收促进性亲水小分子，包括但不限于：二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺、乙醇、丙二醇和2-吡咯烷酮。可选地，长链两亲性分子，例如脱酰甲基亚砜(deacylmethyl sulfoxide)、氮酮、月桂硫酸钠、油酸和胆汁盐类，可以用于增强PTH肽的粘膜渗透。另外，表面活性物质(例如，非离子表面活性剂如聚山梨酯)可以作为添加剂化合物、处理剂或制剂添加物被应用以增强PTH肽的鼻内递送。试剂如DMSO、聚乙二醇和乙醇，如果以足够高的浓度存在于递送环境中(如，通过预施药或在治疗制剂中掺合)，可以进入粘膜的水相并改变其溶解性质，由此增强从媒介物进入粘膜的PTH肽的分配。

另外在本发明的协同施药和加工方法以及组合制剂中有用的粘膜递送增强剂包括，但不限于：混合胶束、烯胺、一氧化氮供体(如S-亚硝基-N-乙酰基-DL-青霉胺、NOR1、NOR4-它优选与NO清除剂如羧基-PITO或双氯芬酸钠(doclofenac sodium)共同施予)、水杨酸钠、乙酰乙酸的甘油酯(如，甘油基-1，3-二乙酰乙酸酯或1，2-异亚丙基甘油-3-乙酰乙酸酯)，和其它生理上适合粘膜递送的释放-扩散渗透促进剂或者上皮内或跨上皮渗透促进剂。其它递送增强剂选自增强PTH肽的粘膜递送、稳定性、活性或跨上皮渗透的各种载体、基质和赋形剂。它们包括，尤其是环糊精和β-环糊精衍生物(如2-羟丙基-β-环糊精和七-(2，6-二-O-甲基-β-环糊精))。这些化合物任选地与一种或多种活性成分结合并进一步任选地配制于油脂性基质中，提高本发明的粘膜制剂的生物利用度。然而，另外的适合粘膜递送的递送增强剂包括中链脂肪酸，所述中链脂肪酸包括单-和甘油二酯(如，癸酸钠—椰子油的提取物，Capmul)和甘油三酯(如，淀粉糊精，Estaram 299，Miglyol 810)。

可以用任何合适的递送增强剂补充本发明的粘膜治疗的和预防的组合物，所述递送增强剂促进PTH肽穿过粘膜屏障的吸收、扩散或渗透。渗透促进剂可以为药学上可接受的任何促进剂。因此，在本发明的更详细的方面中，提供了掺入一种或多种促进渗透的递送增强剂的组合物，所述递送增强剂选自水杨酸钠和水杨酸衍生物(乙酰水杨酸盐、水杨酸胆碱、水杨酰胺)；氨基酸和其盐(例如，单氨基羧酸如甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸；羟氨基酸如丝氨酸；酸性氨基酸如门冬氨酸、谷氨酸；和碱性氨基酸如赖氨酸—包括其碱金属或碱土金属盐在内)；和N-乙酰氨基酸(N-乙酰丙氨酸、N-乙酰苯丙氨酸、N-乙酰丝氨酸、N-乙酰甘氨酸、N-乙酰赖氨酸、N-乙酰谷氨酸、N-乙酰脯氨酸、N-乙酰羟脯氨酸)和其盐(碱金属盐和碱土金属盐)。也提供了在本发明的方法和组合物中作为促进渗透的递送增强剂的物质，所述物质通常为乳化剂(如油烯基磷酸钠、月桂基磷酸钠、月桂基硫酸钠、十四烷基硫酸钠、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基酯)，己酸、乳酸、苹果酸、柠檬酸和其碱金属盐，吡咯烷酮羧酸，烷基吡咯烷酮羧酸酯，N-烷基吡咯烷酮，脯氨酸酰基酯，等等。

在本发明的各个方面中，提供改进的鼻粘膜递送制剂和方法，所述制剂和方法允许本发明中PTH肽和其它治疗剂穿过施药位置和所选目标位置之间的粘膜屏障的递送。某些制剂尤其适合所选的目标细胞、组织或器官，或甚至特定的疾病状况。

在其它方面，制剂和方法提供PTH肽的有效率的、选择性的细胞内作用或跨细胞作用，尤其是沿着一个确定的细胞内或细胞间通路。典型的，PTH肽以有效浓度水平被有效率地装载于载体或其它递送媒介物中，并且被递送和以稳定的形式保持在，如鼻粘膜处和/或在经过期间通过细胞内间隔和膜到达遥远的用于药物作用的目标位置(如，血流或确定的组织、器官或细胞外间隔)。可以在递送媒介物中或以其它方式修饰(如，以前药的形式)提供PTH肽，其中PTH肽的释放或激活通过生理学的刺激(如，pH变化、溶酶体酶类)被引发。常常，PTH肽为药理学无活性的直到它到达目标位置才有活性。在多数情况下，PTH肽和其它制剂组分都为无毒性的和非免疫原性的。本文中，通常选择在生理条件下具有迅速被降解和排泄的能力的载体和其它制剂组分。同时，制剂在剂型中是化学和物理稳定的以有效储存。

这里提供了各种另外的制备组分和方法以及特定的制剂添加剂，它们产生用于易聚集肽和蛋白的粘膜递送制剂，其中利用增溶剂以基本纯净的、未聚集的形式稳定所述的肽或蛋白。关注多种组分和添加剂以在这些方法和制剂中使用。这些增溶剂的示范例为环糊精(CD)，所述环糊精选择性地结合多肽的疏水侧链。已经发现这些CD以显著抑制聚集的方式结合到蛋白的疏水端。就CD和所包括的蛋白两者而论，这种抑制为选择性的。在本发明的鼻内递送方法和组合物中这种蛋白聚集的选择性抑制提供了另外的优势。本文中使用的另外的试剂包括具有不同几何形状的CD二聚体、三聚体和四聚体，所述几何形状通过特异性阻止肽和蛋白聚集的连接体(linker)被控制。然而本发明中的增溶剂和掺入方法包括肽和模拟肽选择性地阻止蛋白和蛋白相互作用的用途。一方面，通过使用同样地阻止蛋白聚集的肽和模拟肽，报道CD多聚体的疏水侧链的特异结合被扩大范围至蛋白。可以得到一个宽范围的合适的方法和抗聚集剂用于组合物的掺入和本发明的过程。

通过鼻内施药的生物治疗剂的有效递送除了要考虑由于结合到粘液层的糖蛋白的药物损失外，还必须考虑穿过鼻粘膜的保护粘液内层所减少的药物转运速率。正常的粘液为由水、电解质、粘蛋白、大分子和脱落的上皮细胞组成的粘弹性的、胶状物质。它主要作为细胞保护作用和润滑作用的覆盖物用于下面的粘膜组织。通过位于鼻上皮和其它粘膜上皮的随机分布的分泌细胞分泌粘液。粘液的结构单元为粘蛋白。糖蛋白主要负责粘液的粘弹性性质，虽然其它大分子可能也促成这种性质。在气道粘液中，这种大分子包括局部产生的分泌型IgA、IgM、IgE、溶菌酶和支气管转铁蛋白，它们在宿主防御机制中也起重要作用。

本发明的协同施药方法任选地掺入有效的粘液溶解剂或粘液清除剂，所述粘液溶解剂或粘液清除剂降解、变薄或清除来自鼻内粘膜表面的粘液以方便鼻内施予的生物治疗剂的吸收。在这些方法中，协同施予作为辅助化合物的粘液溶解剂或粘液清除剂以促进PTH的鼻内递送。可选择地，有效量的粘液溶解剂或粘液清除剂作为处理性试剂掺入到本发明的多重处理方法中，或者作为添加剂掺入到本发明的组合制剂中，以提供改进的制剂，所述改进的制剂通过减少鼻内粘液的屏障效应促进生物治疗化合物的鼻内递送。

可得到多种粘液溶解剂或粘液清除剂用于掺入到本发明的方法和组合物中。根据它们的作用机制，粘液溶解剂和粘液清除剂常常可以被分类成以下几组：蛋白酶(如，链霉蛋白酶、木瓜酶)，它裂解粘蛋白糖蛋白的蛋白核心；巯基化合物，它裂解粘蛋白二硫键；和去污剂(如，TritonX-100、吐温20)，它打开粘液中的非共价键合。本文中另外的化合物包括，但不限于：胆汁盐类和表面活性物质，例如，脱氧胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠、甘氨胆酸钠和溶血磷脂酰胆碱。

胆汁盐类在引起粘液结构断裂中的效果的顺序为：脱氧胆酸盐＞牛磺胆酸盐＞甘氨胆酸盐。根据本发明的方法，其它减少粘液粘性或粘着力以促进鼻内递送的有效试剂包括，如短链脂肪酸，和通过螯合作用起作用的溶粘蛋白剂如N-酰基胶原肽、胆汁酸和皂甙(后者的功能部分通过螯合对保持粘液层结构起重要作用的Ca²⁺和/或Mg²⁺)。

在本发明的方法和组合物中使用的另外的溶粘蛋白剂包括N-乙酰基-L-半胱氨酸(ACS)，ACS为有效的溶粘蛋白剂，它减少支气管肺粘液的粘性和粘连并且报道它在被麻醉大鼠中适度地增加人生长激素的鼻生物利用度(从7.5到12.2％)。这些以及其它粘液溶解剂或粘液清除剂与鼻粘膜接触，典型的在约0.2到20mM的浓度范围内，与生物活性剂的施予协同，以减少鼻内粘液的极性粘性和/或弹性。

还可以从一些糖苷酶中选择其它粘液溶解剂或粘液清除剂，所述糖苷酶能够裂解粘液糖蛋白中的糖苷键。α-淀粉酶和β-淀粉酶为这一类酶的代表，虽然它们的粘液溶解效果可能有限。相反，允许这些微生物渗透到它们宿主粘液层的细菌糖苷酶可能具有更强的效果。

对于与本发明中多数生物活性剂(包括肽和蛋白治疗物)一起组合使用而言，非离子化去污剂作为粘液溶解剂或粘液清除剂通常也是有用的。典型地，这些试剂将不会改变或基本上不会削弱治疗多肽的活性。

因为某些粘膜组织(如，鼻粘膜组织)利用粘膜纤毛清除的自清能力(如，除去灰尘、变应原和细菌)作为保护功能是必需的，所以通常认为这种功能基本上不会被粘膜药物削弱。呼吸道中的粘膜纤毛转运是对抗感染的独特的重要防御机制。为了获得这种功能，鼻内和气道通道中的纤毛颤动沿着粘膜移动粘液层以除去吸入的颗粒和微生物。

本发明的方法和组合物中的纤毛抑制剂增加粘膜(如鼻内)施予的PTH的停留时间。特别地，在本发明的方法和组合物中，通过一种或多种纤毛抑制剂的协同施药或组合制剂，递送在某些方面被显著增强，所述纤毛抑制剂的功能可逆地抑制粘膜细胞纤毛的活动，提供暂时地、可逆地增加粘膜施予的活性剂的停留时间。为了在本发明的这些方面中的使用，上述纤毛抑制因子，无论它们的活性为特异性的或间接的，都是以合适的量(根据递送的浓度、持续时间和方式)作为纤毛抑制剂被成功应用的候选者，这样它们在施药的粘膜位置产生粘膜纤毛清除的暂时(即可逆的)减少或停止，以增强PTH肽、类似物和模拟物以及这里公开的其它生物活性剂的递送，而没有不可接受的不利副作用。

某些表面活性剂(表面活性物质)作为递送增强剂被容易地掺入到本发明的粘膜递送制剂和方法中。这些试剂可以与PTH和这里公开的其它递送增强剂协同施予或者组合配制，可以从一个宽集合的已知表面活性剂中选择。表面活性剂的实例为非离子聚氧乙烯醚、胆汁盐类、甘胆酸钠、脱氧胆酸盐、梭链孢酸衍生物、牛磺二氢梭链孢酸钠、二癸酰基L-α-磷脂酰胆碱(DDPC)、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羊毛脂醇和脱水山梨糖醇单油酸酯。这些不同类型的表面活性剂的作用机制典型地包括生物活性剂的增溶作用。对于常形成聚集体的蛋白和肽，这些递送增强剂的表面活性性质能够允许与蛋白相互作用，以使较小的单元，如被表面活性物质包被的单体，可以更容易地保持在溶液中。与聚集体相比这些单体大概为更可转运的单元。非离子表面活性剂在其头部没有电荷簇。非离子表面活性剂的实例为非离子聚氧乙烯醚、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆F68、泊洛沙姆F127和羊毛脂醇。

表面活性剂的另一个潜在的机制为保护蛋白或肽免受粘膜环境中蛋白酶的蛋白水解降解。据报道，通过浓度小于或等于增强蛋白吸收所需要的浓度的鼻组织匀浆，胆汁盐类和一些梭链孢酸衍生物两者抑制蛋白的蛋白水解降解。这种蛋白酶抑制对生物半衰期短的肽可能尤为重要。

本发明提供了药物组合物，其含有与这里所公开的递送增强剂组合的PTH，所述递送增强剂配制于粘膜递送药物制品中。

在本发明的某些方面，这里的组合制剂和/或协同施药方法掺入有效量的PTH，所述PTH可能附着到带电玻璃上从而减少容器中的有效浓度。硅烷化容器，例如硅烷化玻璃容器，用于储存成品以减少PTH至玻璃容器的吸收。

然而在本发明的另外一些方面，用于治疗哺乳动物受治疗者的试剂盒包括稳定的PTH药物组合物，所述药物组合物经配制用于哺乳动物受治疗者的粘膜递送，其中所述组合物对于治疗或预防骨质疏松症或骨量减少是有效的。所述试剂盒进一步包括容纳PTH的药物试剂瓶。所述药物试剂瓶由药物级的聚合物、玻璃或其它合适的材料组成。所述药物试剂瓶为，例如硅烷化玻璃瓶。试剂盒进一步包括用于组合物递送至受治疗者鼻粘膜表面的孔。递送孔由药物级的聚合物、玻璃或其它合适的材料组成。递送孔为，例如硅烷化玻璃。

硅烷化技术与特定的表面清洁技术组合用于在低压力下利用硅烷化过程对表面硅烷化。硅烷为气相并且其温度为要被硅烷化的表面的增强温度。本方法提供了具有稳定、同质和功能性硅烷层的可再制表面，所述硅烷层具有单层的特征。硅烷化表面防止本发明的多肽或粘膜递送增强剂结合至玻璃上。

本过程对制备用于容纳本发明的PTH肽组合物的硅烷化药物试剂瓶是有用的。在使用前用双蒸水(ddH₂O)冲洗而清洗玻璃盘。然后用95％乙醇清洗硅烷盘，并且用丙酮清洗丙酮盘。药物试剂瓶在丙酮中声波处理10分钟。丙酮声波处理之后，在ddH₂O盘中清洗试剂瓶至少两次。试剂瓶在0.1M NaOH中声波处理10分钟。在试剂瓶在NaOH中声波处理的同时，在防护罩下配制硅烷溶液。(硅烷溶液：800ml 95％的乙醇；96L冰醋酸；25ml缩水甘油醚丙基三甲氧基硅烷)。NaOH声波处理后，试剂瓶在ddH₂O盘中清洗至少两次。试剂瓶在硅烷溶液中声波处理3到5分钟。试剂瓶在100％的乙醇盘中清洗。在使用前试剂瓶用预纯化的N₂气吹干并储存在100℃烤箱中至少2小时。

在本发明的组合物和方法中，可以通过多种粘膜施药的方式给受治疗者施予PTH，包括口服、直肠、阴道、鼻内、肺内或经皮递送，或者通过局部递送至眼睛、耳朵、皮肤或其它粘膜表面。

根据本发明的组合物常在含水溶液中以鼻或肺喷雾施予并且可以通过所属领域技术人员已知的各种方法以喷雾的形式分配。用于分配鼻喷雾的液体的首选系统公开于4,511,069号美国专利中，由此通过引用并入。制剂可以存在于多剂量容器中，例如4,511,069号美国专利所公开的封闭的分配系统中。另外的气溶胶递送方式可以包括，例如压缩空气喷雾器、喷嘴喷雾器、超声喷雾器和压电喷雾器，它们递送药物溶剂如水、乙醇或其混合物中溶解的或悬浮的生物活性剂。

本发明的鼻和肺喷雾溶液典型地包含与表面活性剂如非离子表面活性物质(如聚山梨酯80)和水一起配制的PTH。本发明的另一个实施方案包含与甲基-β-环糊精、EDTA、二癸酰基磷脂酰胆碱(DDPC)和水一起配制的PTH。本发明的一些实施方案中，鼻喷雾溶液进一步包含推进剂。鼻喷雾溶液的pH任选的处于约3.0和6.0之间，优选4.0±0.3。可以加入其它组分以加强或维持化学稳定性，所述组分包括防腐剂、表面活性物质、分散剂或气体。合适的防腐剂包括，但不限于：苯酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸、间甲酚、硫柳汞、氯代丁醇、苯扎氯铵(benzylalkonimumchloride)等。合适的表面活性物质包括，但不限于：油酸、脱水山梨糖醇三油酸酯、聚山梨酯、卵磷脂、磷脂酰胆碱以及各种长链的甘油二酯和磷脂。合适的分散剂包括，但不限于：乙二胺四乙酸等等。合适的气体包括，但不限于：氮气、氦气、含氯氟烃(CFC)、氢氟烷(HFC)、二氧化碳、空气等等。

为了配制本发明中用于粘膜递送的组合物，生物活性剂可以结合各种药学上可接受的添加剂，以及基质或载体用于活性剂的分散。另外，可以包括局部麻醉药(如苯甲醇)，等渗剂(如氯化钠、甘露醇、山梨醇)，吸收抑制剂(如吐温80)，溶解增强剂(如环糊精和其衍生物)，稳定剂(如血清白蛋白)，和还原剂(如谷胱甘肽)。当用于粘膜递送的组合物为液体时，制剂的张力，参考0.9％(w/v)的生理盐水溶液的张力作为单位进行测量，所述张力被典型地调整至一个值，处于所述值时不会在鼻粘膜的施药位置诱导大量的、不可逆的组织损伤。通常，调整溶液的张力值至约1/3到3，更典型的1/2到2，和最经常的3/4到1.7。

为了进一步增强本发明中药剂的粘膜递送，PTH制剂也可以包含亲水性低分子量化合物作为基质或赋形剂。这种亲水性低分子量化合物提供了通道媒介，通过所述媒介水溶性活性剂，如PTH，可以穿过基质扩散至体表面，在此PTH被吸收。亲水性低分子量化合物任选地吸收来自粘膜或施药环境的水分并溶解水溶性活性肽。亲水性低分子量化合物的分子量通常不大于10000并优选不大于3000。示范的亲水性低分子量化合物包括多元醇化合物，例如寡糖、双糖和单糖如：蔗糖、甘露糖、山梨醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤藓糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、海藻糖、D-半乳糖、乳果糖、纤维二糖、龙胆二糖、丙三醇和聚乙二醇。在本发明中作为载体的其它有用的亲水性低分子量化合物的实例包括N-甲基吡咯烷酮和醇类(如寡乙烯醇、乙醇、乙二醇和丙二醇)。这些亲水性低分子量化合物可以单独或相互组合或与鼻内制剂的其他组分组合使用。

本发明的组合物可以根据需要可选地包含药学上可接受的载体物质以接近生理条件，如张力调整剂、湿润剂等等，例如乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、脱水山梨醇单月桂酸酯和三乙醇胺油酸酯。可以使用常规的无毒的药学上可接受的载体，其包括如，药物级别的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等等。

用于施予PTH的治疗组合物也可以配制为溶液、微乳剂或其它适合于高浓度活性成分的有序结构。所述载体可以为溶剂或分散介质，包含如水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)，和其合适的混合物。可以保持溶液的合适的流动性，例如，通过涂层如卵磷脂的使用，通过可分散制剂的期望颗粒尺寸的保持，和通过表面活性物质的使用。多数情况下，组合物中需要包括等渗剂，如糖，多元醇如甘露醇、山梨醇或氯化钠。通过在组合物中包括延迟吸收剂，如单硬脂酸盐和明胶，可以产生生物活性剂的延长的吸收。

根据本发明的粘膜施药允许患者进行有效的自施药治疗，前提是可获取足够的安全保护以控制和监测给药和副作用。粘膜施药也克服了其它施药形式的某些缺点，如注射，它疼痛且使患者暴露于可能的感染中并且可能有药物生物利用度的问题。对于鼻和肺递送而言，用于喷雾治疗液体的受控气溶胶分配的系统为所熟知的。在一个实施方案中，计量剂量的活性剂通过专门构建的机械泵阀递送，4,511,069号美国专利。

为了预防和治疗的目的，可以一天一次地给受治疗者鼻内施予PTH。在本文中，PTH的有效治疗剂量可以包括延长预防或治疗方案中的重复剂量，所述重复剂量将产生显著的临床结果以减轻或预防骨质疏松症或骨量减少。本文中有效剂量的确定典型地以人临床试验之前的动物模型研究为基础，并且由确定的有效剂量和显著减少受治疗者体内目标疾病症状或病症的发生或严重性的施药方案指导。这方面的适合模型包括，例如鼠类、大鼠、猪、猫、狗、非人灵长类和所属领域中已知的其它可接受的动物模型受治疗者。可选择地，利用体外模型(如免疫和组织病理试验)可以确定有效剂量。利用这些模型，典型地只需要普通计算和调整来确定施予有效治疗量的生物活性剂的适当浓度和剂量(例如，鼻内有效、经皮有效、静脉内有效或肌内有效引起期望的反应的剂量)。

当然，生物活性剂的实际剂量将根据一些影响因素变化，所述影响因素例如受治疗者的疾病症候和详细状况(如受治疗者年龄、尺寸、适合度、症状的程度和敏感因素)、施药的时间和途径、同时被施予的其它药物或治疗，和用于在受治疗者体内引起期望活性或生物效应的生物活性剂的特定药理。可以调整给药方案以提供最佳预防或治疗反应。在临床术语中，有效治疗量也是一个治疗有益作用胜过生物活性剂的任何有毒或有害副作用的术语。本发明的方法和制剂的PTH肽的有效治疗量的不受限范围为0.7μg/kg到约25μg/kg。为了治疗骨质疏松症或骨量减少，施予PTH肽的鼻内剂量足够高以促进骨量增加，但是也足够低以不引起任何不必要的副作用如恶心。PTH(1-34)的优选鼻内剂量为约1至约10μg/kg患者体重，最优选为约6μg/kg患者体重。在一个标准的剂量中，患者将接受约1至约1000μg，更优选约20至800μg之间，最优选100μg到约600μg，认为300μg为高效剂量。

可选择地，本发明的方法和制剂中生物活性剂的有效治疗量的不受限范围为每kg体重约0.001pmol至约100pmol之间，每kg体重约0.01pmol至约10pmol之间，每kg体重约0.1pmol至约5pmol之间，或每kg体重约0.5pmol至约1.0pmol之间。每次施药，需要施予平均人类受治疗者至少1微克的PTH，更典型为约10μg到5.0mg之间，并且在某些实施方案中，约100μg至1.0或2.0mg之间。为了某些口服应用，每kg体重0.5mg的剂量可能是必需的以获得足够的血浆水平。还需要进一步注意的是对于每一个特别的受治疗者，应该评估特定的剂量方案并根据个体需要和施予或指导渗透肽和其它生物活性剂的施药的人的专业判断随着时间调整。

甲状旁腺激素的鼻内剂量将在1μg至1000μg甲状旁腺激素之间的范围内变化，优选20μg至800μg，更优选100μg至600μg，认为300μg为高效剂量。利用本发明的制剂的重复鼻内给药，以剂量之间变化范围为约0.1到24小时，优选0.5至24小时的时间表，将保持PTH肽标准化的、持续的治疗水平以最大化临床效果同时最小化过量暴露和副作用的风险。目的是粘膜递送PTH肽的量足够提高个体的PTH肽的血浆浓度以促进骨量增加。

如果自施予非处方剂型，临床主治医生或患者可以改变PTH激动剂如甲状旁腺激素的剂量，以在目标位置维持期望的浓度。

在一个可选择的实施方案中，本发明提供用于PTH肽鼻内递送的组合物和方法，其中PTH肽通过鼻内有效剂量的施药方案被重复施予，所述施药方案包括在每天或每周的时间表中PTH肽至受治疗者的多次施药，以在延长的给药期间维持PTH肽的治疗有效的提高或降低的脉动水平。所述组合物和方法提供受治疗者自施予的鼻内制剂中的PTH肽，所述施予在每天一次至六次之间以在8小时至24小时的延长的给药期间维持PTH肽的治疗有效的提高或降低的脉动水平。

本发明还包括含以上所阐述的药物组合物、活性成分和/或用于哺乳动物受治疗者中疾病或其它疾患的预防和治疗的器具的试剂盒、包装和多容器单元。简要地，这些试剂盒包括含PTH的容器或制剂，所述PTH与这里公开的配制于粘膜递送药物制品中的粘膜递送增强剂组合。

可以利用任何喷雾瓶(即带致动器、喷雾泵的瓶)施予本发明的鼻内制剂。鼻喷雾瓶的一个实例为“鼻喷雾泵w/安全夹(Nasal Spray Pump w/Safety Clip)”，所述瓶每喷一次递送0.1mL剂量并且具有长36.05mm的汲取管(Pfeiffer of America，Princeton，NJ)。PTH肽如甲状旁腺激素的鼻内剂量可以在0.1μg/kg到约1500μg/kg范围内。当鼻内喷雾施予时，优选情况是，喷雾的颗粒尺寸在10-100μm(微米)大小，优选20-100μm大小。

我们已经发现可以利用鼻喷雾或气溶胶鼻内施予甲状旁腺激素肽。这令人惊奇，因为已经表明由于在产生喷雾或气溶胶的过程中致动器产生的机械力，很多蛋白和肽被剪切或变性。在这个领域以下定义为有用的。

1.气溶胶-在压力下包装并含治疗活性成分的产品，一旦启动适当的阀系统所述治疗活性成分就被释放。

2.计量气溶胶—含计量剂量阀的加压剂型，每次启动所述计量剂量阀允许均匀量的喷雾的递送。

3.粉末气溶胶—在压力下包装并含粉末形式的治疗活性成分的产品，一旦启动适当的阀系统就释放所述产品。

4.喷雾气溶胶—利用压缩气作为推进剂的气溶胶产品，所述推进剂提供以湿喷雾排出产品所必需的力，所述气溶胶产品通常适用于含水溶剂中药用试剂的溶液。

5.喷雾剂—通过空气喷射或蒸汽喷射被精密分开的液体。鼻喷雾药物产品含溶解或悬浮在溶液或不加压分配器中的赋形剂混合物中的治疗活性成分。

6.计量喷雾剂-不加压剂型，由每次一旦启动就允许指定量喷雾分配的阀组成。

7.悬浮喷雾剂—含固态颗粒的液体制品，所述固态颗粒分散在液态媒介物中并且理所当然的以小滴的形式或为精细分开的固体。

流体动力特征的气溶胶喷雾通过作为药物递送装置(“DDD”)的计量鼻喷雾泵发射。喷雾特征是法定申请文件的一个整体部分，对获得食品与药品监督管理局(“FDA”)批准研究和开发，和新的或正出现的鼻喷雾泵的质量保证和稳定性检测过程都是必要的。

已经发现喷雾几何形状的详细特征是鼻喷雾泵整体性能的最佳指标。特别地，当喷雾从装置喷出时喷雾的分散角(烟柱几何形状)的测量；喷雾的截面椭圆率，均匀度和颗粒/小滴分布(喷流型)；和产生喷雾的时间发展已经被发现是鼻喷雾泵的表征中最有代表性的性能值。在质量保证和稳定性检测的过程中，烟柱几何形状和喷流型测量值是用于验证鼻喷雾泵与被认可的数据标准一致和相符的关键标识。

定义

烟柱高度—从致动器顶端到由于线流中断烟柱角变为非线性的点的距离测量值。根据数字图像的目测，并且为了建立一个与喷流型的最远测量点一致宽度的测量点，为本研究界定的高度为30mm

长轴—能够从横跨基本单元的COMw的拟合的喷流型中拉出的最长弦(mm)

短轴—能够从横跨基本单元的COMw的拟合的喷流型中拉出的最短弦(mm)

椭圆率—长轴和短轴的比

D₁₀-小滴的直径，总液体体积10％的样品由较小直径(μm)的小滴组成

D₅₀-小滴的直径，总液体体积50％的样品由较小直径(μm)，也即质量中位直径的小滴组成

D₉₀-小滴的直径，总液体体积90％的样品由较小直径(μm)的小滴组成

跨度—分布宽度的测量值，值越小分布越窄，跨度计算为(D₉₀-D₁₀)/D₅₀。

％RSD-相对标准偏差百分比，标准偏差除各组平均值并乘以100，也即％CV。

可以根据行业中惯常的或卫生监管局可接受的选择鼻喷雾装置。合适的装置的一个实例在10/869,649号美国申请中阐述(S.Quay和G.Brandt：Compositions and methods for enhanced mucosal delivery of Y2 receptor-binding peptides and methods for treating and preventing obesity(用于Y2受体-结合肽的增强的粘膜递送的组合物和方法以及用于治疗和预防肥胖症的方法))。

为了治疗骨质疏松症或骨量减少，施予鼻内剂量的PTH肽甲状旁腺激素，其剂量足够高到促进骨量增加，但是足够低以不会引起任何不必要的副作用如恶心。PTH的优选鼻内剂量为约1μg-10μg/kg患者体重，最优选约6μg/kg患者体重。在标准剂量中患者将接受1μg至1000μg，更优选约20μg至800μg之间，最优选100μg至约600μg，认为300μg为高效剂量。优选每天一次施予PTH肽如甲状旁腺激素(1-34)。

以下实施例以示例而非限制的方式提供。

实施例

                         实施例1

                           试剂和细胞

在MatTek细胞模型(MatTek，Corp.Ashland，MA)中测量了各种渗透促进剂对PTH制剂的影响。单独地或相互组合地评价了三种渗透促进剂(EDTA、乙醇和聚山梨酯80(吐温80))。每当适用时利用山梨醇作为张力调节剂(tonicifier)调整制剂的克分子渗透压浓度至220mOsm/kg。调整制剂pH至～4.0。45mg/ml M-β-CD、1mg/ml DDPC和1mg/ml EDTA的渗透促进剂组合(pH为4.5)作为阳性对照。仅含山梨醇的制剂用作阴性对照。在有和没有防腐剂存在的情况下评价每一个制剂。对于所有被试验的起始制剂，利用苯甲酸钠作为防腐剂。

MatTek细胞系为正常的、人类来源的气管/支气管上皮细胞(EpiAirway^TM组织模型)。细胞在用于产生组织插入物之前培养24-48小时。

将每一个组织插入物放入含1ml培养基的单个孔中。在插入物的顶端表面，涂布100μl试验制剂，并且在37℃摇动样品1小时。在20、40和60分钟时取出下面的培养基样品并在4℃储存至48小时，用于乳酸脱氢酶(LDH，细胞毒性)和样品渗透(PTH HPLC评价)。第60分钟的样品用于乳酸脱氢酶(LDH，细胞毒性)。在1h的孵育之前和之后测量跨上皮电阻(TER)。孵育之后，通过线粒体脱氢酶(MDH)的测定分析细胞插入物的细胞活性。

利用反相高压液相色谱方法确定组织渗透测定中特立帕肽的浓度。

                         实施例2

                        跨上皮电阻

使用Endohm-12组织电阻测量室完成TER的测量，所述Endohm-12组织电阻测量室通过电极导线连接至EVOM上皮伏欧表(World PrecisionInstruments，Sarasota，FL)。在MatTek培养基中平衡电极和组织培养空白插入物至少20分钟，在核对校正前关闭电源。利用Endohm组织室中的1.5ml培养基和空白插入物中的300μl培养基测量背景电阻。调整顶部电极使其接近，但又不接触插入物膜的上表面。空白插入物的背景电阻为约5-20欧姆。对于每次TER测定，加入300μl的MatTek培养基至插入物中接着放入Endohm室。电阻以(测量的电阻-空白)×0.6cm²表示。

表1阐述了用于检测TER减少的制剂。

表1.含GRAS渗透促进剂的制剂的说明

结果表明所有制剂都观察到TER减少。涂布于顶侧的培养基没有减少TER，然而Triton X处理组显示预期的显著的TER减少。

                       实施例3

                 细胞活性和细胞毒性

利用MTT测定法(MTT-100，MatTek试剂盒)评价细胞活性。融化并稀释的MTT浓缩液(300μl)被移入到24孔板中。轻柔地干燥组织插入物，放置于平板孔中，并在37℃孵育3小时。孵育之后，从平板中移出每个插入物，轻柔地吸干，并且放置于24孔提取平板中。细胞培养插入物被浸入到每个孔中的2.0ml的提取液中(完全覆盖样品)。覆盖并密封提取平板以减少提取液的蒸发。在黑暗中室温孵育过夜后，每个插入物含的液体被倒回至取出孔中，并丢弃插入物。提取液(200μl至少两份)同提取空白被移至96孔微量板中。在平板读取仪上测量550nm处样品的吸光度。

利用CytoTox 96细胞毒性测定试剂盒(Promega Corp.，Madison，WI)通过测量细胞乳酸脱氢酶(LDH)的损失测定细胞死亡的数量。评价顶部培养基的LDH分析。在顶部表面加入适当量的培养基以达到总计250μL，将起始样品上样体积考虑在内。摇动插入物5分钟。移出150μL顶部培养基到微量离心管中并以10000rpm离心3分钟。移出2μL上清液并加入到96孔平板。使用48μL的培养基稀释上清液以制成25x稀释液。为了基底外侧培养基的LDH分析，所述50μL样品被上样到96-孔测定平板中。新鲜的无细胞的培养基作为空白。每孔中加入50微升底物溶液并黑暗中室温孵育平板30分钟。孵育后，每孔中加入50μL终止溶液并在490nm处在吸光度平板读取仪上读取平板。

MTT测定的结果显示当用所有制剂处理细胞时细胞活性无显著性减少。应用于顶面的培养基不显示对细胞活性的影响，然而同期望一样TritonX处理组显示细胞活性的显著减少。LDH测定的结果显示当用所有制剂处理细胞时，没有观察到显著的细胞毒性。应用于顶面的培养基对照不显示细胞毒性，然而同期望一样Triton X处理组显示显著的细胞毒性。

                         实施例4

                         渗透性

检测各种渗透促进剂提高PTH跨粘膜递送的能力。为此，7.5mg/mlPTH与各种渗透促进剂在pH～4.0组合且克分子渗透压浓度为220-280mOsm/kg。

在渗透促进剂存在下PTH渗透的测量结果显示，在45mg/ml M-β-CD、1mg/ml DDPC和1mg/ml EDTA存在下PTH渗透性显著增加。在渗透促进赋形剂存在下观察到各种程度的PTH渗透增强。防腐剂对PTH渗透性没有显著影响。

通过与45mg/ml M-β-CD、1mg/ml DDPC和1mg/ml EDTA组合举例说明含非GRAS促进剂的优选制剂。也优选含合适溶剂如水，防腐剂如苯甲酸钠、氯代丁醇或苯扎氯铵，和张力调节剂如蔗糖或多元醇如海藻糖或盐如氯化钠的制剂。可选地，制剂可以含其它的促进剂，包括选择的增溶剂、表面活性剂和螯合剂。

通过与1mg/mL吐温-80、100mg/mL乙醇和1mg/ml EDTA组合举例说明含GRAS促进剂的优选制剂。也优选含合适共溶剂如水，防腐剂如苯甲酸钠、氯代丁醇或苯扎氯铵，和张力调节剂如蔗糖或多元醇如海藻糖或盐如氯化钠的制剂。可选地，制剂可以含其它的GRAS促进剂，包括选择的表面活性剂、共溶剂和螯合剂。

然而通过包含1mg/mL吐温-80(聚山梨酯80)举例说明含GRAS促进剂的另一个优选制剂。也优选含合适共溶剂如水，防腐剂如苯甲酸钠、氯代丁醇或苯扎氯铵，和张力调节剂如蔗糖或多元醇如海藻糖或盐如氯化钠的制剂。可选地，制剂可以含其它GRAS促进剂，如选择的表面活性剂。

                         实施例5

                         稳定性

PTH制剂将以瓶装液体的形式被提供用于通过致动器的鼻内施药。检测pH处于4.0-4.5的含1-10mg/mL PTH的制剂的“售出”(“as-sold”)稳定性。“售出”稳定性研究被定义为包括以下的那些研究：将制剂储存于闭合的(即盖上的)瓶中，放置于特定储存条件或加温条件下达特定数量的时间。制剂赋形剂选自由PTH、甲基-β-环糊精(M-β-CD)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二癸酰基磷脂酰胆碱(DDPC)、氯代丁醇(CB)、苯甲酸钠(NaBZ)、聚山梨酯80和山梨醇组成的组。如果有必要，用氢氧化钠或盐酸调整制剂的起始pH至4.0或4.5。表2中显示被检测的制剂。

             表2.各种鼻内PTH制剂的组成

制剂#	组成
		1	1mg/mL PTH、5mg/mL防腐剂(CB)、45mg/mL M-β-CD、1mg/mLDDPC、1mg/mL EDTA、26mg/mL山梨醇，pH～4.0
2	1.5mg/mL PTH、5mg/mL防腐剂(CB)、45mg/mL M-β-CD、1mg/mLDDPC、1mg/mL EDTA、26mg/mL山梨醇，pH～4.0
		3	2mg/mL PTH、5mg/mL防腐剂(CB或NaBz)、45mg/mL M-β-CD、1mg/mL DDPC、1mg/mL EDTA、16.7mg/mL山梨醇，pH～4.0或4.5
4	3mg/mL PTH、5mg/mL防腐剂(CB)、1mg/mL聚山梨酯80、31mg/mL山梨醇，pH～4.0
		5	4mg/mL PTH、5mg/mL防腐剂(CB)、1mg/mL聚山梨酯80、31mg/mL山梨醇，pH～4.0
6	5mg/mL PTH、5mg/mL防腐剂(CB或NaBz)、1mg/mL聚山梨酯80、27.2mg/mL山梨醇，pH～4
		7	10mg/mL PTH、5mg/mL防腐剂(CB或NaBz)、1mg/mL聚山梨酯80、27.2mg/mL山梨醇，pH～4

据报道，可注射FORTEO

(成分：特立帕肽、冰醋酸、醋酸钠、甘露醇、间甲酚和水)的储存条件为2-8℃达28天(4周)。在固定的时间间隔通过利用HPLC测定所剩PTH相对于起始PTH的百分比，来监测PTH制剂#1、#3、#4和#7的储存稳定性。在稳定性研究中使用的所有四种制剂包括作为防腐剂的CB且pH为4.0。表3和表4的结果表明PTH鼻内制剂#1、#3、#4和#7可以安全地储存在5℃和25℃至少4周而没有稳定性的显著下降。制剂#1、#3、#4和#7在5℃储存时保持稳定至少24周。制剂#7为在5℃和25℃所检测的制剂中最稳定。PTH鼻内制剂在5℃至少24周的储存条件比可注射FORTEO的当前所推荐的储存条件长。

            表3.PTH制剂在5℃时的稳定性百分比

           表4.PTH制剂在25℃时的稳定性百分比

没有缓冲剂的PTH制剂的稳定性的另外表征在30℃(表5)、40℃(表6)和50℃(表7)下进行。在第1周、第2周、第3周和第4周时间点测定从开始到现在剩余PTH的百分比。没有缓冲剂的30℃的数据和来自6,770,623号美国专利的含缓冲剂的可注射制剂(′623制剂)的数据相比较。所述′623制剂含0.1mg/mL rhPTH(1-34)、50mg/mL甘露醇、2.5mg/mL间甲酚、0.52mg/mL醋酸和0.12mg/mL醋酸钠。没有缓冲剂的制剂#1和#4在30℃具有与没有缓冲剂的′623制剂30℃时相似的稳定性。处于50℃时，制剂#1、#3、#4和#7具有比′623制剂更强的稳定性。40℃和50℃下与其它测试的制剂相比制剂#7最稳定。

表5.有和没有缓冲剂在30℃时的稳定性百分比

表6.PTH制剂在40℃时的稳定性百分比

起始	100±1.6	100±23	100±0.4	100±2.2
					1	90.2±1.3	92.9±1.5	939±0.8	965±1.6
2	80.7±2.8	86.1±1.1	83.9±0.8	88.0±1.3
					4	66.9±1.8	70.9±16	70.3±2.1	71.7±2.2

表7.有和没有缓冲剂在50℃时的稳定性百分比

还检测了5℃和30℃的储存温度下储存29天时PTH制剂#1和#4的使用中(in-use)和喷射稳定性。结果包括肽回收百分数和总肽杂质百分数。“使用中”研究中存在致动器且最初瓶子被预启动(primed)5次，然后在经受储存温度后每天用手致动一次。所有瓶子在室温下暴露30分钟后被送回5℃和30℃稳定室。每天致动所有瓶子，收集驱出的样品并保存在-20℃直至被安排用于HPLC测量。在第0、8、15、22、29天为使用中(即有致动器的瓶中)和喷射(即测量通过致动器从瓶中产生的喷雾)样品安排HPLC测量。稳定性的HPLC测量值在表8(肽回收百分数)和表9(总杂质百分数)显示。

表8.5℃和30℃时使用中的和喷射的肽回收百分数

时间点(天)	制剂#1	制剂#4	制剂#1	制剂#4
					0	100.0	100.0	100.0	100.0
8	103.3	107.0	109.7	110.6
					15	84.7	99.3	130.8	103.8
22	98.8	103.0	99.6	101.9
					29	94.3	97.8	34.7	102.3

表9.5℃和30℃时使用中的和喷射的总肽杂质

售出、使用中和喷射稳定性研究表明制剂#4(含聚山梨酯80)比制剂#1(含EDTA)更稳定。进一步研究确认EDTA独自或与聚山梨酯80组合劣于无EDTA的PTH制剂。仅有EDTA的制剂引起沉淀和胶凝。当EDTA与其它赋形剂组合加入时，观察到稳定性的提高。稳定性研究表明聚山梨酯80独自以及与其它赋形剂组合增强稳定性。PTH制剂中乙醇的加入不增强稳定性。NaBz促使PTH制剂混浊，同时结果表明CB是稳定PTH制剂的优选防腐剂。

                     实施例6

                     pH稳定性

检测以下制剂的pH稳定性(表10)。

                表10.pH稳定性制剂

首先利用pH滴定检测无PTH的溶液。在pH滴定前所有三个稀释液的pH值都为4.0。pH波动起因于含1-4mg/mL PTH的FORTEO

、MBCD和吐温制剂中碱的加入，并且所储存的无缓冲剂的所述FORTEO

、MBCD和吐温制剂在5℃和25℃储存至少8周(表11)后保持PH 4.0至4.2。这些数据表明没有缓冲剂时的PTH制剂组合物稳定保持pH。

表11.MBCD和吐温制剂在5℃和25℃的pH稳定性

^*CB为2.5mg/mL

                     实施例7

           人受治疗者中的药代动力学(PK)

在两个剂量水平评价本发明的PTH鼻喷雾制剂(参见实施例5，表2)的吸收和安全性。在两个剂量水平比较皮下给药的FORSTEO(Eli Lilly UK)与本发明的两个PTH鼻喷雾制剂的生物利用度。PTH鼻喷雾将以经过致动器的鼻内施药的瓶装液体提供给临床。含NaBz作为防腐剂的制剂#3、#6和#7用于PK研究。制剂#3pH为4.5，而其它所有制剂pH为4.0。

PTH溶液提供在多单元剂量容器中以每次致动递送0.1mL计量剂量的药物产品。加入盐酸用于pH调整以达到适当的4.0±0.2或4.5±0.2的目标pH。在固定的时间间隔处监测制剂的稳定性。

本研究为单一场所的、标签公开的、活性受控制的、5期交叉的、剂量变化的研究，所述研究含6名健康男性志愿者和6名健康女性志愿者。商业可得到的制剂特立帕肽、FORSTEO为活性对照。5个研究时期如下：

第1期：所有受治疗者皮下接受20μg FORSTEO(注射)。

第2期：所有受治疗者接受500μg鼻内剂量的特立帕肽，100微升如实施例5的表2中描述的制剂#6的鼻内制剂的喷雾。

第3期：所有受治疗者接受200μg鼻内剂量的特立帕肽，100微升如实施例5的表2中描述的制剂#3的鼻内制剂的喷雾。

第4期：所有受治疗者接受1000μg鼻内剂量的特立帕肽，100微升如实施例5的表2中描述的制剂#7的鼻内制剂的喷雾。

第5期：所有受治疗者接受400μg鼻内剂量的特立帕肽，100微升如实施例5的表2中描述的制剂#3的鼻内制剂的喷雾两次。

在给药后0(即给药前)、5、10、15、30、45、60、90分钟和2、3和4小时收集用于PK的血液样品并利用有效的方法分析。由于生物测定与内源性PTH(1-84)完全交叉的反应性，所有数据用给药前的值进行校正。当所述校正引起负的给药后值时，设定所有这些负值为“缺失”。为了评价PK和从基线的变化，以＜LLOQ报道的值被设定至二分之一LLOQ。利用WinNonlin计算标准药物代谢动力学参数，包括AUC_last、AUC_inf、C_max、t_1/2、t_max和K_e。利用方差分析的方法评价受治疗者之间的药物代谢性能的差异，用于检测物和参照物的比较。在2期设计以及为所考虑的两个产品的每一个引入主效应期的基础上，进行方差分析(ANOVA)(Snedecor GW和Cochran WG，单向分类---方差分析，在统计方法中(One-WayClassifications～Analysis of Variance.In：Statistical Methods)第6版，IowaState University Press，Ames，IA，(1967)第258-98页)。(在模型中固定其它，受治疗者(顺序)为随机结果)。为每一个剂量的特立帕肽鼻喷雾与参照的比较创建一个单独的模型。就C_max、AUC_last和AUC_inf而言，试验剂量/参照的比产生90％的置信区间。这些值在分析前转化为自然对数log(ln)。通过取所述90％的置信区间的反对数获得这些几何平均比相应的90％的置信区间，以得到对数尺度上所述平均值的差异。进行这些分析不是为了证明生物等效性而是仅为信息的目的。因此，为了说明多因素分析，不调整每一个配对比较的置信水平。本研究为仅产生假设性的。对于t_max，利用Wilcoxon符号秩检验(Steinijans VW和Diletti E(1983)Eur JClin Pharmacol，24：127-36)进行分析以确定在给定的试验组和参照组之间是否有差异存在。

可能时，根据每一个检品特立帕肽的血浆浓度，依照模型独立方法，针对每一名受治疗者，计算以下PK参数：

C_max：最大观察浓度

t_max：达到最大浓度的时间

AUC_last：浓度—时间曲线下面积，所述时间从0开始至最后可测量浓度的时间，所述面积根据线性梯形法则计算。

当数据允许这些参数的精确的估算时，计算以下参数：

AUC_inf：外推浓度—时间曲线下面积至无限大，利用以下公式计算：

AUC_inf＝AUC_last+C_t/K_e，其中C_t为最后可测量浓度，K_e为表观末端相速率常数。

K_e：表观末端相速率常数，其中K_e为末端相中浓度的自然对数与时间的曲线的线性回归的斜率大小。

t_1/2：表观末端相半衰期(可能存在时)，其中t_1/2＝(ln2)/K_e。

所有数据用施药前的值进行校正。当所述校正引起负的施药后值时，设定所有这些负值为“缺失”。为了评价pK和从基线的变化，以＜LLOQ报道的值被设定至二分之一LLOQ。在所有PK参数的计算中使用实际的(而非名义上的)取样次数。

图1和图2分别显示1-5期平均血浆浓度相对时间的曲线，和C_max与平均值的比，低剂量制剂对Forsteo的曲线。

表12显示了每一种制剂和特立帕肽剂量的算术平均药物代谢动力学参数的总括。FORSTEO、制剂#6和#3的低剂量鼻制剂的平均t_max分别为0.68、0.57和0.17小时。每个低剂量制剂的C_max分别比FORSTEO的C_max高1.6和2.4倍。每个低剂量制剂的AUC_last分别比FORSTEO的AUC_last高1.23和1.45倍。

表12.制剂和剂量的算术平均药物代谢动力学参数

制剂	剂量(μg)	Tmax(hr)	Cmax(pg/mL)	AUClast(hr*pg/mL)	AUCinf(hr*pg/mL)	t1/2(hr)	Ke(l/hr)
								FORSTEO(注射)	20	0.68	70.80	85.92	132.12	1.57	0.638
制剂#6	500	0.57	112.72	106.08	195.69	1.38	0.610
								制剂#7	1000	0.46	405.57	335.20	412.47	1.03	0.782
制剂#3	200	0.17	172.72	125.07	269.60	3.10	0.720
								制剂#3	400	0.18	349.62	206.02	238.26	1.12	1.097

另外，利用单Wilcoxon符号秩检验对每种制剂的t_max结果与FORSTEO对照进行比较。结果(即p值)如表13所示。

表13.FORSTEO和鼻制剂的T_max比较

Tmax比较	来自Wilcoxon符号秩检验的p值
		FORSTEO与制剂#6，500μg	0.75
FORSTEO与制剂#7，1000μg	0.53
		FORSTEO与制剂#3，200μg	0.10
FORSTEO与制剂#3，400μg	0.24

因此，相对于FORSTEO而论制剂之间的t_max值没有差异。

为了比较所述给定制剂和FORSTEO对照，计算了C_max、AUC_last和AUC_inf的比值的90％的置信区间。在配对的基础上进行每种产品和FORSTEO的比较，但是因为本研究的性质，多个检验不包括校正。

表14显示利用非房室模型的清除率概要：

                  表14.清除率概要

制剂	剂量(μg)	平均值(mL/hr)	SD
				制剂#3	200	1366234.334	988398.4
制剂#3	400	2527292.583	1701658
				FORSTEO	20	267446.6298	263855.3
制剂#6	500	4793716.136	4380229
				制剂#7	1000	3359436.634	1665618

表15显示每种制剂和特立帕肽剂量的变异系数百分比的概要。根据C_max和AUC_last，制剂#3的％CV比制剂#6、制剂#7或FORSTEO的％CV低。

表15.制剂和剂量的变异系数百分比

制剂	剂量(μg)	Tmax(hr)	Cmax(pg/mL)	AUClast(hr*pg/mL)	AUCinf(hr*pg/mL)
						FORSTEO	20	165.29	51.76	66.46	62.30
制剂#6	500	142.48	78.71	92.76	83.41
						制剂#7	1000	176.56	67.06	75.55	71.56
制剂#3	200	24.72	38.78	61.55	82.28
						制剂#3	400	21.20	48.78	55.98	68.04

表16显示基于AUC_last的每种制剂与FORSTEO产品比较的相对生物利用度百分比的概要。制剂#3(低和高剂量)的生物利用度为12-15％，而制剂#6和制剂#7为约5-8％。

表16.与FORSTEO相比较，制剂和剂量的相对生物利用度

制剂	剂量(μg)	生物利用度％
			制剂#6	500	4.9
制剂#7	1000	7.8

制剂#3	200	14.6
			制剂#3	400	12.0

利用WinNonLin 5.0进行试探的隔室分析以比较每种制剂的吸收系数和清除系数。进行Ka和Ke数据的混合模型方差分析，其中包括作为随机变量的受治疗者，并且利用Tukey-Kramer多重比较过程对这些结果进行进一步分析。表17显示单个Ka和Ke数据。与FORSTEO相比鼻吸收率没有显著差异(p＝0.50)，然而高剂量鼻制剂#3的清除率显著快于FORSTEO(p＝0.02)。当看每个单一时间点每低剂量制剂的平均C_max的比值时，也能观察到上述情况。

表17.每个制剂的吸收系数和消除系数

系数	制剂	剂量(μg)	N	平均值(l/hr)	SD	CV％
							Ka	FORSTEO	20	11	11.99	7.00	58.34
Ka	制剂#6	500	8	6.95	4.83	69.46
							Ka	制剂#7	1000	7	10.43	7.49	71.81
Ka	制剂#3	200	6	11.02	5.29	48.05
							Ka	制剂#3	400	7	8.81	3.19	36.27
Ke	FORSTEO	20	11	1.04	0.86	83.50
							Ke	制剂#6	500	8	1.40	1.70	121.57
Ke	制剂#7	1000	7	1.83	2.50	136.49
							Ke	制剂#3	200	6	2.74	2.24	81.85
Ke	制剂#3	400	7	4.08	2.35	57.69

根据药物动力学参数，与FORSTEO相比两个鼻制剂都有较大的C_max和AUC。鼻制剂给药后不久就出现t_max，尤其是制剂#3。吸收率在鼻和皮下制剂之间没有显著性差异(p＝0.5)，但是消除速率较快尤其是低剂量的制剂#3(p＝0.02)。然而与FORSTEO相比，除了低剂量的制剂#3外，鼻制剂之间约为1小时的t_1/2非常相似，其中编号1和5的受治疗者可能具有表观溢出值。如果除去这两名受治疗者，t_1/2为1.5小时，与FORSTEO相同。清除率的明显差异可能反映与制剂#3相比皮下产品以及制剂#6和#7较慢的洗入(wash-in)。

与FORSTEO相比，两个鼻制剂具有极其相似的t_1/2。根据清除率和回归分析，制剂#3从200μg至400μg剂量也显示良好的剂量线性。另外，根据变异系数百分比，制剂#3的变化比制剂#6和#7以及FORSTEO少。因此，本发明的鼻内制剂的C_max和AUC值超过了当前市场化的皮下产品。这表明市场化产品的水平可以被鼻施予产品超越，并且如果需要更接近当前所批准的产品的血浆浓度时，也可以降低鼻制剂中PTH的浓度。

                       实施例8

                   小滴尺寸和喷雾特征

利用带有36mm汲取管的Pfeiffer 0.1ml鼻喷雾泵65550评价两种特立帕肽鼻内制剂(参见实施例5，表2)的小滴尺寸和喷雾特征。通过激光衍射利用Malvern MasterSizer S组件颗粒尺寸分析仪和MightyRunt自动启动台表征小滴尺寸分布。单个喷雾小滴分布为容重测量。利用喷雾VIEWNSP高速光学喷雾鉴定系统(Spray VIEW NSP High Speed Optical SprayCharacterization System)和喷雾VIEW NSx自动启动系统表征喷流型。数据在表18中显示。制剂#5和#2的样品50％的总液体体积的小滴的直径分别由30微米和294微米的小滴组成。制剂#5和#2分别有3％和1％的总液体体积，其中小滴尺寸小于10微米。制剂#5和#2的椭圆率分别为1.3和1.4。

表18.特立帕肽鼻内制剂的小滴尺寸和椭圆率

	D(v，0.1)	D(v，0.5)	D(v，0.9)	％＜10微米	椭圆率
						制剂#5	14	30	65	3	1.3
制剂#2	25	294	676	1	1.4

PTH制剂从两个由两家生产商生产的鼻泵模型[Pfeiffer(SAP#65550)与Valois(Model Equadel^TM 100)比较]驱出时，比较了PTH的喷雾特征和药物纯度。本研究中试验了两种制剂，制剂#5和#2(实施例5，表2)。在所有喷雾试验中引入一组安慰剂(不含药)作为对照。为每组提供6个瓶子用于喷雾表征试验。准备这些瓶子并放置在5℃直至用于试验。针对小滴尺寸分布和泵递送参数，同时检测每组六个瓶子中的三个并进行评价。

表19和20显示比较的结果。

             表19.不同致动器小滴尺寸的比较

^*致动产生了干扰测量的泡沫

             表20.不同致动器的椭圆率比较

椭圆率	Pfeffier	Valois
			制剂#5	1.3	1.1
制剂#5w/o PTH(0mg/ml PTH)	1.1	1.1
			制剂#2	1.4	1.1
制剂#2w/o PTH(0mg/ml PTH)	1.4	1.1

                         实施例9

         合成和重组PTH _1-34 在大鼠中的施药增加骨量

在雄性大鼠中研究合成的人类PTH_1-34和重组的PTH_1-34(Forteo

，EliLilly U.S.)的合成作用。将普通的媒介物(由冰醋酸、间甲酚、无菌水、醋酸钠和甘露醇组成)用于每一个治疗组和媒介物对照。

首次用于试验的5周龄实验性雄性Sprague Dawley大鼠通过皮下(SQ)施药接受媒介物或两个剂量水平(16μg/kg/d或80μg/kg/d)中的一个剂量的合成或重组PTH_1-34。动物根据体重被随机分入治疗组(10只大鼠/组)。一天一次地给每只动物皮下注射媒介物或施予试验PTH_1-34处理，从第1天开始并连续持续21天。研究过程中，一天进行两次笼侧观察，一周进行一次体重测量。动物被施予总共两个剂量的钙黄绿素，一个剂量在预定解剖前6天，一个剂量在预定解剖前2天。在第21天，在选择的处理组中收集来自动物的血液样品用于药代动力学分析。在治疗期结尾和血液收集后第21天，动物被处安乐死并收集骨骼标本。表21显示处理组。

                         表21.用于骨量研究的处理组

组	处理	剂量水平(μg/kg/d)	给药途径和天数	组的大小
					1	媒介物	0	SQ，1X/d，第1-21天	10
2	合成PTH1-34	16	SQ，1X/d，第1-21天	10
					3	重组PTH1-34	16	SQ，1X/d，第1-21天	10
4	合成PTH1-34	80	SQ，1X/d，第1-21天	10
					5	重组PTH1-34	80	SQ，1X/d，第1-21天	10

利用外周定量计算体层摄影术(pQCT)分析右股骨远侧和干体中间区域中的骨骼，并且通过在骨股中段和骨股远端的骨髓腔处的三点弯曲(three-point bending)确定骨强度。整个左胫骨经受双重X-射线吸收扫描(DXA)。

在研究过程中所有动物的体重都增加。治疗组之间的体重没有统计学上的显著性差异。利用DXA单独分析胫骨的四个区域(整个胫骨和远端、中间、近端胫骨)的骨矿物质含量、面积和密度。

与媒介物对照相比，两种形式的人类PTH_1-34的施药在所观察的每个位置引起骨矿物质含量和密度的显著增加。骨矿物质密度的增加伴随着在股骨干和股骨远端的骨髓腔中骨小梁处骨强度的增加。骨量和强度的增加是剂量依赖的。在合成和重组型PTH_1-34之间，在两个所试验的剂量16和80μg/kg/d处骨骼应答没有显著差异。

这些研究证实合成和重组型人类PTH_1-34对骨骼显示可比较的合成作用。

                         实施例10

         在大鼠中PTH _1-34 鼻内给药的合成作用和毒性结果

在雄性和雌性Crl:CD(SD)大鼠中评价PTH_1-34制剂的毒性和毒物代谢动力学。通过鼻内滴注每天一次地施予大鼠PTH_1-34(合成型)，持续至少13周。为了比较，一组通过皮下注射接受商业可得的重组PTH_1-34。毒性的评估基于死亡率、临床观察、眼科检查(ophthalmic examination)、体重、食物消耗、临床和解剖病理学，以及毒物代谢动力学评价进行。本研究中使用两种合成的PTH_1-34制剂，低浓度和高浓度的PTH-072-1和PTH-074(如表22所示制剂)。

表22.PTH-072-1和PTH-074的鼻内制剂

制剂ID	PTH(1-34)(mg/mL)	M-β-CD(mg/mL)	DDPC(mg/mL)	EDTA(mg/mL)	山梨醇(mg/mL)	聚山梨酯80(mg/mL)	CB(mg/mL)
								低-PTH-072-1	2.0	45	1	1	26	0	5
高-PTH-072-1	4.0	45	1	1	26	0	5
								低-PTH-074-1	4.0	0	0	0	31	1	5
高-PTH-074-1	10.0	0	0	0	31	1	5

根据体重、体表面积和鼻表面区域确定大鼠中的剂量。用于临床研究的PTH_1-34的代表浓度被认为是1.5mg/mL和3.0mg/mL(且剂量体积为100μL)。对于较低浓度，70kg的人根据体重将接受2.1μg/kg的剂量。较高浓度时，人根据体重将接受4.3μg/kg的剂量。大鼠研究组如表23所示。

表23.大鼠毒性和毒物代谢动力学研究研究组

安慰剂为0.9％氯化钠，USP(无菌盐水)。

在第86和第90天第7和第8组的四只动物/性别以及第9组中的四只雌性接受钙黄绿素(经腹腔内注射10mg/kg)。

当在雄性和雌性大鼠中施予PTH-072-1制剂时，PTH_1-34的t_1/2范围为14至21分钟；雄性和雌性两者的T_max范围为5至15分钟。雄性大鼠C_max范围为5,041pg/mL至12,911pg/mL，在雌性大鼠中范围为3,044pg/mL至5106pg/mL。AUC_last在雄性中范围为100,038pg·min/mL至457,644pg·-min/mL，在雌性中范围为58,890pg·-min/mL至73,444pg·-min/mL。与PTH-072-1制剂的临床研究相比，雄性和雌性大鼠的AUQ_last值分别超过人AUC_last值80倍和13倍。

当施予PTH-074-1制剂时，PTH_1-34的t_1/2范围为12至24分钟；雄性和雌性两者的T_max范围为5至30分钟。雄性大鼠C_max范围为12,251pg/mL至35,964pg/mL，在雌性大鼠范围中为3,679pg/mL至17,175pg/mL。AUC_last在雄性中范围为252,790pg·-mim/mL至1,010,348pg·-min/mL，在雌性中范围为78,059pg·-min/mL至377,278pg·-min/mL。与PTH-074-1制剂的临床研究相比，雄性和雌性大鼠的AUC_last值分别超过人AUC_last值71倍和27倍。

当通过注射施予时，PTH_1-34的t_1/2范围为15至23分钟；雌性大鼠的T_max为5分钟。C_max和AUC_last范围分别为7,721pg/mL至12,200pg/mL，和140,945pg·-min/mL至296,908pg·-min/mL。

鼻内组和皮下给药组中PTH_1-34的t_1/2和T_max相似。雄性大鼠C_max和AUC_last比雌性大鼠高，这是PTH_1-34的期望的结果。PTH-072-1制剂的生物利用度显示稍高。每个制剂的最高剂量超过在人中通过鼻内施药PTH_1-34进行临床评价所期望的剂量。对于鼻表面区域，大鼠中剂量倍数为约5倍或更高。根据体表面积或体重，大鼠中剂量倍数分别约为17倍或95倍或更高。这些药代动力学结果证实所选择的剂量足以评价通过鼻内滴注施予时PTH_1-34的鼻毒性和全身毒性。

不考虑施药途径、剂量水平或制剂，没有发现PTH_1-34相关的临床体征、眼科检查、体重变化或食物消耗变化。研究中的任何动物的鼻甲组织中没有发现被认为是归因于PTH_1-34的鼻内施药的变化。切开鼻腔以使鼻腔的有意义的区域呈现出来，检查鼻腔的软组织(粘膜上皮)或硬组织(基于骨和软骨的结构)。

胸骨和股骨中骨小梁的评价没有显示任何被认为是不利的影响。相反地，骨小梁的变化显示观察与PTH_1-34的合成作用相一致。针对鼻内给药25μg/kg/天SQ和200μg/kg/天PTH-072-1或500μg/kg/天PTH-074-1的雌性，注意观察胸骨和股骨中增厚的骨小梁。低剂量鼻内PTH_1-34组中的雌性，100和200μg/kg/天PTH-072-1和PTH-074-1与对照雌性相似。在鼻内施予任一PTH_1-34制剂的雄性动物中，胸骨和股骨中的骨小梁增厚。在PTH-074-1制剂中被施予500μg/kg/天和200μg/kg/天PTH_1-34的雄性，以及PTH-072-1制剂中施予200μg/kg/天的雄性中观察到所述增厚。PTH-072-1的低剂量(100μg/kg/天)雄性与对照相似。在相应的鼻内施予剂量，雄性中的合成作用比雌性中大。

总结

发现没有观察到动物健康、临床病理学或组织/器官形态，这些表明鼻内滴注PTH_1-34没有预见的毒性结果。与通过皮下注射给药的动物相比，通过鼻内滴注接受PTH_1-34的动物之间没有观察到差异。检查多个代表整个鼻腔和代表组织类型的切片表明每天一次鼻内高剂量(和浓度)PTH_1-34的施药被很好的耐受。另外，鼻内PTH_1-34施药后骨小梁的变化显示观察与PTH_1-34的合成作用一致。

                        实施例11

        狗中鼻内施药PTH _1-34 的合成作用和毒性结果

通过对狗每天一次鼻内滴注PTH_1-34的施药，持续至少13周后，研究PTH_1-34毒性和毒物代谢动力学。为了比较，另外一个组通过皮下注射接受重组PTH_1-34。

雄性和雌性比格犬被分成6个研究组。分到第1至第5组的动物分别接受鼻内滴注阴性对照(0.9％注射用氯化钠，USP)、PTH-072制剂(实施例10，表22)中40或80μg/kg体重/天(μg/kg/天)的PTH_1-34(合成型)、或PTH-074-1制剂(实施例10，表22)中80或200μg/kg/天的PTH_1-34(合成型)。表24显示了狗研究组。

表24.用于狗毒性和毒物代谢动力学研究的研究组

组	雄性/雌性动物数	剂量水平(μg/kg/天)	施药方式
				1对照(安慰剂)	4/4	0	鼻内0.02mL/kg/剂量
2低-PTH-072-1	4/4	40	鼻内0.02mL/kg/剂量
				3高PTH-072-1	4/4	80	鼻内0.02mL/kg/剂量
4低-PTH-074-1	4/4	80	鼻内0.02mL/kg/剂量
				5高PTH-074-1	4/4	200	鼻内0.02mL/kg/剂量
6PTH1-34注射	4/4	6	皮下0.081mL/kg(第1-40天)或0.075mL/kg(第41-92天)

对于PTH-072-1制剂，PTH_1-34的T_max范围为8到26分钟。C_max和AUC_last呈现剂量依赖性。对于PTH-074-1制剂，PTH_1-34的T_max范围为8到24分钟。皮下注射PTH_1-34后，PTH_1-34的T_max范围为13到26分钟。鼻内施药之后，由C_max、AUC_last和AUC_inf确定的皮下注射的全身暴露处于PTH_1-34的低剂量和高剂量中间。

两种鼻内制剂处于较高浓度剂量时PTH_1-34的相对生物利用度较高。PTH-072-1制剂中PTH_1-34的生物利用度更高。每种制剂中PTH_1-34的T_max、C_max和AUC_last与峰水平相一致，所述峰水平在给药后不久获得并在给药后几个小时内返回至基线；这种一般的特性对于诱导PTH_1-34的合成作用是期望的。

与临床剂量相比较，对于低剂量鼻内制剂，鼻表面剂量第一天约为0.9倍和研究结束时至少为1.5倍。对于高剂量鼻内制剂，鼻表面区域剂量第1天至少为1.0倍和研究结束时至少为3.8倍或更高。以代表性剂量，PTH_1-34的C_max和AUC_last分别为至少7倍和10倍，狗中比人中所发现的值高。

收集死亡率、临床体征、大体上的鼻道观察、肉眼所见、心电图测量、血压和心率差异、体重、食物消耗、临床和解剖病理学，和毒物代谢动力学评价的结果。研究中的所有动物都存活至预定解剖时。没有注意到PTH_1-34相关临床体征、肉眼所见、心电图差异、血压和心率差异、体重或食物消耗的变化。切开鼻腔以使鼻腔有意义的区域呈现出来，检查鼻腔的软组织(如粘膜上皮)或硬组织(如基于骨和软骨的结构)。鼻组织没有组织学变化，认为这归因于PTH_1-34的鼻内施药。

在鼻内或皮下施予PTH_1-34的狗中报道了被认为与PTH_1-34的施药相关的合成作用。雄性和雌性的平均总血清钙在表25中显示。PTH-072-1制剂、PTH-074-1制剂中PTH_1-34的鼻内施药和皮下注射引起血清钙最小至适度的增加(＞12mg/dL)，所述增加是所期望的PTH_1-34的生理作用。在给药后2、4和6小时注意到血清钙的增加，在第2或第4小时时间点达到峰水平。在给药时间点前注射PTH_1-34，而不是鼻内制剂，产生提高的血清钙水平。注射组和两个高剂量鼻内制剂组的组平均血清钙的绝对水平和具有统计学显著性提高的频率是相似的，但注射组稍高。鼻内制剂的变化大小为剂量依赖的。血离子钙同总钙一样遵循同样的一般模式。

所观察的结果的时间和强度排除了分解代谢作用的可能性。相反，生物动力学作用是合成代谢药物作用之一。动物中的这种合成作用可预测人类骨折抗力并被FDA用作预测器。

短暂提高的血清钙是PTH_1-34的预期作用，并且没有注意到与血清钙的短暂提高相关的不利的临床观察。

表25.平均总血清钙                        *P＜或＝0.05

(大体上的)鼻道检查表明，与安慰剂对照相比，在PTH_1-34治疗的动物中(皮下和鼻内施药两者)均呈现红斑发生率增加。已知PTH_1-34对血管紧张度有作用，并且红斑可能是PTH_1-34药理的反映。

正常的与年龄相关的血清碱性磷酸酶活性的减弱是PTH_1-34的另一个作用。在第93天安慰剂对照的雄性和雌性狗平均血清碱性磷酸酶活性分别下降约47％和48％。PTH_1-34治疗组(皮下和鼻内施药两者)都不显示碱性磷酸酶活性大于30％的下降。高剂量鼻内组中雄性和注射组中雄性狗血清碱性磷酸酶活性的减弱具有统计学显著意义。

胸骨和股骨中骨小梁的评价没有显示任何被认为是不利的影响。相反地，骨小梁的变化显示观察与PTH_1-34的合成作用相一致。以高剂量PTH-072-1和PTH-074-1皮下或鼻内给药的狗中，观察到胸骨和股骨中与PTH_1-34相关的最小程度的增厚的骨小梁的变化。

总结

利用制剂PTH-072-1或PTH-074-1的PTH_1-34的鼻内滴注没有观察到动物健康、临床病理或组织/器官形态指征的毒性结果。

利用PTH_1-34的鼻内剂量观察到血清钙浓度的提高。提高的血清钙浓度是PTH的合成代谢的结果。鼻内和皮下PTH_1-34治疗的动物中更高的碱性磷酸酶活性暗示成骨细胞的活性。在PTH_1-34治疗的动物的股骨和胸骨中注意到最小程度增厚的骨小梁的更高的发生率。

在大鼠和狗中的合成作用和毒性研究表明鼻内施用途径为一种有效施用PTH_1-34的方式。这些结果表明所述PTH_1-34制剂的安全性和有效性。另外，血清钙的瞬间增加、更高的碱性磷酸酶活性以及骨小梁的增厚预示在鼻内PTH增加人的骨量、增加骨强度和降低骨折发病率的能力。

虽然为了达到清楚理解的目的，本发明前述已经通过实施例进行了详细地描述，但是对专业人员来说显然通过所公开的内容能够理解某些变化和修饰，并且在附加的权利要求的范围内不需要过度的试验即可实践，所述实施例以例证而非限制的方式呈现。

Claims (138)

1.一种用于PTH鼻内递送的含水药物制剂，其包含PTH(1-34)和非离子表面活性剂。

2.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述表面活性剂选自由非离子聚氧乙烯醚、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆F68、泊洛沙姆F127和羊毛脂醇组成的组。

3.如权利要求2所述的药物制剂，其中所述表面活性剂为聚山梨酯80。

4.如权利要求3所述的药物制剂，其中聚山梨酯80在所述制剂中存在少于约50mg/mL。

5.如权利要求3所述的药物制剂，其中聚山梨酯80在所述制剂中存在少于约10mg/mL。

6.如权利要求3所述的药物制剂，其中聚山梨酯80在所述制剂中存在少于约1mg/mL。

7.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述的多元醇选自由蔗糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤藓糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、海藻糖、D-半乳糖、乳果糖、纤维二糖、龙胆二糖、丙三醇和聚乙二醇组成的组。

8.如权利要求7所述的药物制剂，其中所述多元醇为山梨醇。

9.如权利要求1所述的药物制剂，其进一步包含从由氯代丁醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲酸钠、山梨酸、苯酚和邻甲酚、间甲酚或对甲酚组成的组中选择的防腐剂。

10.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述制剂具有约3至约6的pH。

11.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述制剂具有约5.0或更低的pH。

12.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述制剂具有约4.0或更低的pH。

13.如权利要求1所述的药物制剂，其中所述含水溶液为液滴的形式。

14.如权利要求13所述的药物制剂，其中所述液滴具有约1微米到1000微米的平均体积中位颗粒尺寸(Dv，50)。

15.如权利要求13所述的药物制剂，其中所述液滴具有约5微米到500微米的平均体积中位颗粒尺寸(Dv，50)。

16.如权利要求13所述的药物制剂，其中所述液滴具有约10微米到100微米的平均体积中位颗粒尺寸(Dv，50)。

17.如权利要求1所述的药物制剂，其中对人受治疗者施药获取PTH在给药后的至少10pg/mL的最大血清浓度(Cmax)。

18.一种用于治疗哺乳动物骨质疏松症的方法，其包括给所述哺乳动物鼻内施予有效治疗量的PTH制剂，其中所述制剂包含PTH(1-34)和非离子表面活性剂。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述表面活性剂选自由非离子聚氧乙烯醚、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆F68、泊洛沙姆F127和羊毛脂醇组成的组。

20.如权利要求18所述的方法，其中所述制剂具有约3至约6的pH。

21.如权利要求18所述的方法，其中给所述哺乳动物施予含约1μg至约1000μg的PTH(1-34)的剂量。

22.如权利要求18所述的方法，其中给所述哺乳动物施予含约20μg至约400μg的PTH(1-34)的剂量。

23.如权利要求18所述的方法，其中所述哺乳动物为人类。

24.如权利要求18所述的方法，其中所述PTH制剂的施药引起钙血浆水平的增加。

25.如权利要求24所述的方法，其中所述钙血浆水平的增加与PTH的合成作用相关联。

26.如权利要求24所述的方法，其中所述钙血浆水平的增加不是骨分解代谢增加的结果。

27.如权利要求24所述的方法，其中所述钙血浆水平的增加不是骨分解代谢增加的结果。

28.如权利要求18所述的方法，其中所述PTH制剂的施药引起骨量增加。

29.如权利要求18所述的方法，其中所述PTH制剂的施药引起骨强度的增加。

30.如权利要求18所述的方法，其中所述PTH制剂的施药引起骨折抗力的增加。

31.如权利要求18所述的方法，其中所述PTH制剂的施药不会产生鼻组织的组织学改变。

32.一种用于治疗哺乳动物骨质疏松症的方法，其包括给所述哺乳动物鼻内施予有效治疗量的PTH制剂，其中所述PTH制剂包含PTH(1-34)以及一种或多种从由增溶剂、螯合剂和一种或多种多元醇组成的组中选择的赋形剂。

33.如权利要求32所述的方法，其中所述制剂进一步包含表面活性剂。

34.如权利要求32所述的方法，其中所述表面活性剂选自由非离子聚氧乙烯醚、胆汁盐类、甘胆酸钠、脱氧胆酸盐、梭链孢酸衍生物、牛磺二氢梭链孢酸钠、二癸酰基L-α-磷脂酰胆碱(DDPC)、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羊毛脂醇和脱水山梨糖醇单油酸酯组成的组。

35.如权利要求34所述的方法，其中所述表面活性剂为DDPC。

36.如权利要求34所述的方法，其中一种或多种多元醇选自由蔗糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤藓糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、海藻糖、D-半乳糖、乳果糖、纤维二糖、龙胆二糖、丙三醇和聚乙二醇组成的组。

37.如权利要求36所述的方法，其中所述多元醇为山梨醇。

38.如权利要求32所述的方法，其中所述螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)或乙二醇四乙酸(EGTA)。

39.如权利要求38所述的方法，其中所述螯合剂为EDTA。

40.如权利要求32所述的方法，其中所述增溶剂选自由环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精和甲基-β-环糊精组成的组。

41.如权利要求40所述的方法，其中所述增溶剂为环糊精。

42.一种用于治疗哺乳动物骨质疏松症的方法，其包括给所述哺乳动物鼻内施予有效治疗量的PTH制剂，其中所述PTH制剂包含PTH(1-34)和非离子表面活性剂，并且其中所述制剂施药于所述哺乳动物后达到PTH(1-34)的最大血浆浓度的时间T_max小于30分钟。

43.如权利要求42所述的方法，其中C_max大于约300pg/ml起因于所述制剂的单次施药。

44.一种PTH剂型，其包含PTH和非离子去污剂的含水药物制剂，用于雾化的具有约5％或更多的生物利用度的PTH的鼻内递送，其中所述制剂包含有效治疗量的PTH(1-34)和聚山梨酯，并且其中在5℃储存24周后有至少90％的PTH被回收。

45.如权利要求44所述的PTH剂型，其在5℃储存至少6个月后具有大于约90％的PTH回收。

46.如权利要求44所述的PTH剂型，其在5℃储存1年后具有大于约90％的PTH回收。

47.如权利要求44所述的PTH剂型，其在5℃储存2年后具有大于约90％的PTH回收。

48.如权利要求44所述的PTH剂型，其在25℃储存24周后具有大于约80％的PTH回收。

49.如权利要求44所述的PTH剂型，其在25℃储存至少6个月后具有大于约80％的PTH回收。

50.如权利要求44所述的PTH剂型，其在25℃储存1年后具有大于约80％的PTH回收。

51.如权利要求44所述的PTH剂型，其在25℃储存2年后具有大于约80％的PTH回收。

52.如权利要求44所述的PTH剂型，其在40℃储存至少4周后具有大于约65％的可以被回收的PTH回收。

53.如权利要求44所述的PTH剂型，其在使用大于约5天后具有大于约90％的PTH回收。

54.如权利要求53所述的PTH剂型，其在所有喷雾剂处于30℃/65％的相对湿度下具有大于约90％的PTH回收。

55.如权利要求44所述的PTH剂型，其中所述pH为约5.0或更小。

56.如权利要求44所述的PTH剂型，其中所述pH为约4.5或更小。

57.如权利要求44所述的PTH剂型，其中所述pH为约4.0或更小。

58.如权利要求44所述的PTH剂型，其中所述pH为约3.5或更小。

59.如权利要求44所述的PTH剂型，其中PTH的浓度为至少约1mg/ml。

60.如权利要求44所述的PTH剂型，其中PTH的浓度为至少约2mg/ml。

61.如权利要求44所述的PTH剂型，其中PTH的浓度为至少约6mg/ml。

62.如权利要求44所述的PTH剂型，其中PTH的浓度为至少约10mg/ml。

63.如权利要求44所述的PTH剂型，其中所述剂型适合鼻内施药以获取从约2μg到约1000μg的所述PTH的剂量。

64.如权利要求44所述的PTH剂型，其中所述剂型适合鼻内施药以获取从约100μg到约600μg的所述PTH的剂量。

65.如权利要求44所述的PTH剂型，其中所述聚山梨酯在所述制剂中存在至少约1mg/mL。

66.如权利要求44所述的PTH剂型，其中所述聚山梨酯在所述制剂中存在至少约10mg/mL。

67.如权利要求44所述的PTH剂型，其中所述聚山梨酯在所述制剂中存在至少约50mg/mL。

68.如权利要求44所述的PTH剂型，其进一步包含防腐剂。

69.如权利要求68所述的PTH剂型，其中所述防腐剂为氯代丁醇。

70.一种PTH剂型，其包含含水药物制剂，用于雾化的具有约10％或更多的生物利用度的PTH的鼻内递送，其中所述制剂包含有效治疗量的PTH(1-34)、甲基-β-环糊精、二癸酰基磷脂酰胆碱以及乙二胺四乙酸，并且其中在5℃储存24周后有至少90％的PTH被回收。

71.如权利要求70所述的PTH剂型，其在5℃储存至少6个月后具有大于约90％的PTH回收。

72.如权利要求70所述的PTH剂型，其在5℃储存1年后具有大于约90％的PTH回收。

73.如权利要求70所述的PTH剂型，其在5℃储存2年后具有大于约90％的PTH回收。

74.如权利要求70所述的PTH剂型，其在25℃储存24周后具有大于约80％的PTH回收。

75.如权利要求70所述的PTH剂型，其在25℃储存至少6个月后具有大于约80％的PTH回收。

76.如权利要求70所述的PTH剂型，其在25℃储存1年后具有大于约80％的PTH回收。

77.如权利要求70所述的PTH剂型，其在25℃储存2年后具有大于约80％的PTH回收。

78.如权利要求70所述的PTH剂型，其在40℃储存至少4周后具有大于约65％的PTH回收。

79.如权利要求70所述的PTH剂型，其使用大于约5天后具有大于约90％的PTH回收。

80.如权利要求79所述的PTH剂型，其在所有喷雾剂处于30℃/65％的相对湿度下具有大于约90％的PTH回收。

81.如权利要求70所述的PTH剂型，其中所述pH为约5.0或更少。

82.如权利要求70所述的PTH剂型，其中所述pH为约4.5或更少。

83.如权利要求70所述的PTH剂型，其中所述pH为约4.0或更少。

84.如权利要求70所述的PTH剂型，其中所述pH为约3.5或更少。

85.如权利要求70所述的PTH剂型，其中PTH的浓度为至少约1mg/ml。

86.如权利要求70所述的PTH剂型，其中PTH的浓度为至少约2mg/ml。

87.如权利要求70所述的PTH剂型，其中PTH的浓度为至少约6mg/ml。

88.如权利要求70所述的PTH剂型，其中PTH的浓度为至少约10mg/ml。

89.如权利要求70所述的PTH剂型，其中所述剂型适合鼻内施药以获取从约2μg到约1000μg的所述PTH的剂量。

90.如权利要求70所述的PTH剂型，其中所述剂型适合鼻内施药以获取从约100μg到约600μg的所述PTH的剂量。

91.如权利要求70所述的PTH剂型，其进一步包含防腐剂。

92.如权利要求91所述的PTH剂型，其中所述防腐剂为氯代丁醇。

93.一种对人类递送PTH的方法，其包括将粘膜细胞层暴露于含PTH(1-34)和非离子表面活性剂的PTH溶液。

94.如权利要求93所述的递送PTH的方法，其中所述方法使用非肠胃施药。

95.如权利要求94所述的递送PTH的方法，其中所述施药方法选自由鼻内、口腔、肠胃、阴道和经皮组成的组。

96.如权利要求95所述的递送PTH的方法，其中所述方法为鼻内施药。

97.如权利要求96所述的递送PTH的方法，其中所述鼻内施药包括递送含尺寸约1微米至约700微米的小滴的气溶胶。

98.如权利要求96所述的递送PTH的方法，其中所述鼻内施药包括递送含约0.7μg至约25μg PTH每kg患者体重的气溶胶。

99.如权利要求96所述的递送PTH的方法，其中所述鼻内施药包括递送含约50μg至约800μg PTH的气溶胶。

100.如权利要求94所述的递送PTH的方法，其中所述方法为口服递送。

101.如权利要求100所述的递送PTH的方法，其中所述口服递送为控制释放递送，其中Tmax距释放时间小于约40分钟。

102.一种通过鼻内施药递送PTH给人类的系统，其包括瓶子中的含PTH(1-34)和非离子表面活性剂的含水PTH溶液，和连接到所述瓶子的且与容器中所述PTH溶液流体相通的小滴产生致动器，其中当启动所述致动器时所述致动器通过致动器顶端产生所述PTH溶液的喷雾，其中当自所述致动器顶端3.0cm高度测量时所述PTH喷雾具有从约1.0至约1.4的喷流型椭圆率。

103.如权利要求102所述的系统，其中所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约5％的所述小滴尺寸小于10μm。

104.如权利要求102所述的系统，其中所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约1％的所述小滴尺寸小于10μm。

105.如权利要求102所述的系统，其中所述PTH喷雾具有分别为约25mm和约40mm的喷流型长轴和短轴。

106.如权利要求102所述的系统，其中所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约90％的所述小滴尺寸为约250μm或更小。

107.如权利要求102所述的系统，其中所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约90％的所述小滴尺寸为约120μm或更小。

108.如权利要求102所述的系统，其中所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约50％的所述小滴尺寸为约75μm或更小。

109.如权利要求102所述的系统，其中所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约50％的所述小滴尺寸为约50μm或更小。

110.如权利要求102所述的系统，其中所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约10％的所述小滴尺寸为约30μm或更小。

111.如权利要求102所述的系统，其中所述PTH喷雾包含所述PTH溶液的小滴，其中少于约10％的所述小滴尺寸为约20μm或更小。

112.如权利要求1所述的制剂用于骨质疏松症或骨量减少的治疗。

113.PTH(1-34)在制备治疗哺乳动物骨质疏松症的药物中的用途，其中所述药物包含PTH(1-34)和非离子表面活性剂。

114.如权利要求113所述的PTH的用途，其中所述表面活性剂选自由非离子聚氧乙烯醚、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆F68、泊洛沙姆F127和羊毛脂醇组成的组。

115.如权利要求113所述的PTH的用途，其中所述制剂具有约3-6的pH。

116.如权利要求113所述的PTH的用途，其中含1μg至1000μg的PTH(1-34)的剂量被施予所述哺乳动物。

117.如权利要求113所述的PTH的用途，其中含20μg至400μg的PTH(1-34)的剂量被施予所述哺乳动物。

118.如权利要求113所述的PTH的用途，其中所述哺乳动物为人类。

119.如权利要求113所述的PTH的用途，其中所述PTH制剂的施药引起钙血浆水平的增加。

120.如权利要求119所述的PTH的用途，其中所述钙血浆水平的增加与PTH的合成作用相关联。

121.如权利要求120所述的PTH的用途，其中所述钙血浆水平的增加不是骨分解代谢增加的结果。

122.如权利要求120所述的PTH的用途，其中所述钙血浆水平的增加不是骨分解代谢增加的结果。

123.如权利要求113所述的PTH的用途，其中所述PTH制剂的施药引起骨量增加。

124.如权利要求113所述的PTH的用途，其中所述PTH制剂的施药引起骨强度的增加。

125.如权利要求113所述的PTH的用途，其中所述PTH制剂的施药引起骨折抗力的增加。

126.如权利要求113所述的PTH的用途，其中所述PTH制剂的施药不会产生鼻组织的组织学改变。

127.PTH(1-34)在制备治疗哺乳动物骨质疏松症的药物中的用途，其中所述药物包含有效治疗量的PTH(1-34)和一种或多种从由增溶剂、螯合剂和一种或多种多元醇组成的组中选择的赋形剂。

128.如权利要求127所述的PTH制剂的用途，其中所述制剂进一步包含表面活性剂。

129.如权利要求128所述的PTH制剂的用途，其中所述表面活性剂选自由非离子聚氧乙烯醚、胆汁盐类、甘胆酸钠、脱氧胆酸盐、梭链孢酸衍生物、牛磺二氢梭链孢酸钠、二癸酰基L-α-磷脂酰胆碱(DDPC)、聚山梨酯80、聚山梨酯20、聚乙二醇、十六醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羊毛脂醇和脱水山梨糖醇单油酸酯组成的组。

130.如权利要求129所述的PTH制剂的用途，其中所述表面活性剂为DDPC。

131.如权利要求127所述的PTH制剂的用途，其中一种或多种多元醇选自由蔗糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、L-阿拉伯糖、D-赤藓糖、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、海藻糖、D-半乳糖、乳果糖、纤维二糖、龙胆二糖、丙三醇和乙二醇组成的组。

132.如权利要求131所述的PTH制剂的用途，其中所述多元醇为山梨醇。

133.如权利要求127所述的PTH制剂的用途，其中所述螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)或乙二醇四乙酸(EGTA)。

134.如权利要求133所述的PTH制剂的用途，其中所述螯合剂为EDTA。

135.如权利要求127所述的PTH制剂的用途，其中所述增溶剂选自由环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精和甲基-β-环糊精组成的组。

136.如权利要求135所述的PTH制剂的用途，其中所述增溶剂为环糊精。

137.PTH(1-34)在制备治疗哺乳动物骨质疏松症的药物中的用途，其中所述药物包含PTH(1-34)和非离子表面活性剂，并且其中所述制剂施药于所述哺乳动物后达到PTH(1-34)的最大血浆浓度的时间T_max小于30分钟。

138.如权利要求137所述的PTH制剂的用途，其中C_max大于300pg/ml起因于所述制剂的单次施药。

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