CN101573372B - 缩酚酸肽及其治疗用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及通式(VII)或(VIII)的化合物，包括其电子等排体和可药用盐，其中R₁、R₂(当X是-CONR₆-时)、R₃和R₇相同或不同，各自代表氨基酸侧链部分；R₂(当X是-CHZ-时)、R₄和R₆相同或不同，各自代表氢、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基；K代表含有1-10个原子的直链或支链碳原子链；L代表能与组蛋白去乙酰化酶(HDAC)的活性部位中的锌螯合的部分或能在体内(例如通过水解或还原)转变成该部分的部分；M是含有1-10个原子的直链或支链碳原子链或其它原子链，其能在体内断裂得到结构(VII)；Z是通过单键或双键与大环键合的杂原子，与Z键合的任何其它基团是H或保护基。

Description

缩酚酸肽及其治疗用途

技术领域

本发明涉及用作组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂的缩酚酸肽(depsipeptide)及其治疗用途。

背景技术

HDAC是催化乙酰化赖氨酸残基水解的锌金属酶。在组蛋白中，这使得赖氨酸返回其质子化状态并且是一种普遍的真核转录调控机制，导致核小体中DNA的紧密包装。此外，可逆的赖氨酸乙酰化是非组蛋白蛋白质的一种重要调节过程。因此，能调节HDAC的化合物具有重要的治疗潜能。

天然产物FK228(结构I)和SpiruchostatinA(结构II)是已报道具有作为HDAC抑制剂潜能的缩酚酸肽。术语缩酚酸肽描述了一组均具有酯和肽连接链的寡肽或多肽。

FK228是一种含有4个单体单元与跨环桥的环状缩酚酸肽。该化合物(商品名为)已在人试验中作为治疗剂进行测试并显示对多种疾病具有有价值的作用。

SpiruchostatinA是一种在结构上与FK228相关的环状缩酚酸肽：其是一种含有三肽、statine单元和跨环桥的环状缩酚酸肽。

结构I

结构II

然而，因为FK228和SpiruchostatinA均为天然产物，所以它们不可修改而优化以用作治疗剂。

这些化合物的类似物公开于WO2006/129105中(在所要求的优先权日之后公布)；其它这样的化合物公开于要求GB专利申请No.0623388.6的优先权的未公布PCT申请中。与FK228和SpiruchostatinA相比较而言，它们可能具有提高的HDAC抑制性能或使得其更有效用作药物的其它药物样性质。这些化合物具有结构III、IV、V和VI所示的通式结构，其中R₁、R₂、R₃和R₄相同或不同，代表氨基酸侧链部分，每个R₆相同或不同，代表氢或C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基，Pr¹和Pr²相同或不同，代表氢或硫醇保护基。

不受理论束缚，认为结构IV(其中R₁是＝CH-CH₃，R₂是-CH(CH₃)₂，R₃是-CH(CH₃)₂，R₄和R₆均为-H，Pr¹和Pr²均为-H)是在细胞内由结构I通过还原二硫键而形成的，并且由此形成的4-硫代-丁-1-烯是所述化合物作用机制至关重要的一部分。因此，之前已经提示缺少该基团的化合物作为治疗剂的功效将降低。

结构III

结构IV

结构V

结构VI

该设想得到以下观察结果的支持：FR-901375(一种含有颇不同的环结构的环状缩酚酸肽，HDAC抑制剂)具有与在FK228和SpiruchostatinA中所观察到的相同的含二硫化物的跨环桥。

发明内容

本发明提供了结构I至VI的类似物、以及对本领域技术人员来说显而易见地与结构I至VI相关的结构的类似物，其中所述“桥”结构与其它缩酚酸肽的不同，并且出乎意料地发现其为HDAC酶的有效抑制剂，还具有表明其可具有用于人疾病治疗剂的更大潜能的性质。在下文中，将这些化合物称为一类所谓桥变体缩酚酸肽(BridgeVariantDepsipeptide，BVD)化合物中的成员。

通过结构VII和VIII定义该类化合物：

结构VII

结构VIII

其中

或

R₁、R₂、R₃、R₄和R₆具有上文定义；

K代表含有1-10个原子的直链或支链碳原子链，其中一些碳原子可通过单键连接，一些可通过双键连接，一些可通过叁键连接，使得结构VII不形成结构IV(其中R₁是＝CH-CH₃，R₂是-CH(CH₃)₂，R₃是-CH(CH₃)₂，R₄、R₆、Pr¹和Pr²均为-H)或结构VI(其中R₁是-CH(CH₃)₂，R₂是-H，R₃是-CH₃，R₄、R₆、Pr¹和Pr²均为-H)，并且结构VIII不形成结构I或II；

L代表能与HDAC活性部位中的锌螯合的部分或能在体内(例如通过水解或还原)变成能与HDAC活性部位中的锌螯合的部分的部分，包括S和SPr¹(其中Pr¹具有上文定义)，使得结构VIII不形成结构I(FK228)或结构II(SpiruchostatinA)或者结构VII不形成结构IV(FK228的还原形式，其中R₁是＝CH-CH₃，R₂是CH(CH₃)₂，R₃是CH(CH₃)₂，R₄和R₆是H，X是-C(O)NR₆-，K是-CH＝CHCH₂CH₂-，L是-SH，R₇是-CH₂SH)或者结构VII不形成结构VI(SpiruchostatinA的还原形式，其中R₁是-CH(CH₃)₂，R₂是H，R₃是CH₃，R₄和R₆是H，X是-CHZ-，Z是-OH，K是-CH＝CHCH₂CH₂-，L是-SH，R₇是-CH₂SH)；

R₇代表氨基酸侧链、基团-X或基团-W-X(其中W是含有1-10个原子的直链或支链碳原子链，其中一些碳原子可通过单键连接，一些可通过双键连接，一些可通过叁键连接，X是-H、-NH₂、N-R₆、N-(R₆)₂-OH、-O-R₆、-卤素、S-Pr²中之一，其中R₆、S和Pr²具有与上述相同的定义)，使得结构VII不形成结构IV(FK228的还原形式，其中R₁是＝CH-CH₃，R₂是CH(CH₃)₂，R₃是CH(CH₃)₂，R₄和R₆是H，X是-C(O)NR₆-，K是-CH＝CHCH₂CH₂-，L是-SH，R₇是-CH₂SH)或者结构VII不形成结构VI(SpiruchostatinA的还原形式，其中R₁是-CH(CH₃)₂，R₂是H，R₃是CH₃，R₄和R₆是H，X是-CHZ-，Z是-OH，K是-CH＝CHCH₂CH₂-，L是SH，R₇是-CH₂SH)，以及

M是含有1-10个原子的直链或支链碳原子链或其它原子链，其中一些原子可通过单键连接，一些可通过双键连接，一些可通过叁键连接，从而M内的任何键在体内断裂得到结构VII，使得结构VIII不形成结构I或II，以及通过体内断裂结构VIII而形成的结构VII不形成结构I(FK228)或结构II(SpiruchostatinA)。

Z是含有-Q-Pr³或-Q(Pr³)Pr⁴的物质，其中Q是杂原子，使得所述杂原子与缩酚酸肽的大环直接连接，例如＝O、-OPr³、-N(Pr³)Pr⁴、-SPr³，其中Pr³和Pr⁴相同或不同，代表硫醇保护基、氢或杂原子保护基，其实例可包括醚、酯、酰胺、硫醚或硫酯。

本发明还提供了上述BVD或其可药用盐在制备用作HDAC抑制剂的药物中的用途。

具体实施方式

通常利用其中-CO-CR-NH-构成所述大环部分并且R是侧链部分的氨基酸进行结构VII和VIII的化合物的合成。可以该方式引入R₁、R₂(在结构VII和VIII中，其中X＝-CONR₆-)、R₃和R₇。即使它们可能不是来自于这样的氨基酸，R₂(在结构VII和VIII中，其中X＝-CHZ-)和R₄也可以是这样的结构部分。

本文所用的术语“氨基酸侧链部分”指可存在于天然和非天然氨基酸中的任何侧链。来自非天然氨基酸的氨基酸侧链部分的实例(括号中表示的是其所来源的氨基酸)是-(CH₂)₂-C(O)-O-C(CH₃)₃(叔丁氧基-羰基甲基丙氨酸)、-(CH₂)₄-NH-C(O)-O-C(CH₃)₃(Nε-(叔丁氧基羰基)-赖氨酸)、-(CH₂)₃-NH-C(O)NH₂(瓜氨酸)、-CH₂-CH₂OH(高丝氨酸)以及-(CH₂)₂-CH₂NH₂(鸟氨酸)。

C₁-C₆烷基或结构部分可以是直链或支链的。通常，其为C₁-C₄烷基或结构部分，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基和叔丁基。优选的实例包括甲基、异丙基和叔丁基。

C₂-C₆烯基或结构部分可以是直链或支链的。通常，其为C₂-C₄烯基或结构部分。优选地，所述烯基是单不饱和或双不饱和的，更优选为单不饱和的。实例包括乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基和3-丁烯基。

C₂-C₆炔基或结构部分可以是直链或支链的。通常，其为C₂-C₄炔基或结构部分。

硫醇保护基通常是：

(a)形成硫醚以保护硫醇基的保护基，例如任选地被以下取代基取代的苄基：C₁-C₆烷氧基(例如甲氧基)、C₁-C₆酰氧基(例如乙酰氧基)、羟基和硝基；吡啶甲基、吡啶甲基-N-氧化物、蒽基甲基、二苯基甲基、苯基、叔丁基、金刚烷基(adamanthyl)、C₁-C₆酰氧基甲基(例如新戊酰氧基甲基、叔丁氧基羰基氧基甲基)；

(b)形成单硫缩醛、二硫缩醛或氨基硫缩醛以保护硫醇基的保护基，例如C₁-C₆烷氧基甲基(例如甲氧基甲基、异丁氧基甲基)、四氢吡喃基、苄基硫甲基、苯基硫甲基、噻唑烷、乙酰胺基甲基、苯甲酰胺基甲基；

(c)形成硫酯以保护硫醇基的保护基，例如叔丁氧基羰基(BOC)、乙酰基及其衍生物、苯甲酰基及其衍生物；或者

(d)形成氨基甲酸硫酯以保护硫醇基的保护基，例如氨基甲酰基、苯基氨基甲酰基、C₁-C₆烷基氨基甲酰基(例如甲基氨基甲酰基和乙基氨基甲酰基)。

通常，Pr¹和Pr²相同或不同，各自代表氢或形成硫醚、单硫缩醛、二硫缩醛或氨基硫缩醛、硫酯或氨基甲酸硫酯以保护硫醇基的保护基。

通常，Pr³和Pr⁴相同或不同，各自代表氢或形成硫醚、单硫缩醛、二硫缩醛或氨基硫缩醛、硫酯或氨基甲酸硫酯以保护硫醇基的保护基，或者形成醚、酯、缩醛、磷酸酯或硫酸酯以保护羟基的保护基，或者形成氨基或酰胺基以保护胺基的保护基。

基团L的特定性质并非至关重要的，只要其具有特定的官能团即可，多种合适的基团对本领域一般技术人员而言是显而易见的。它们不仅包括S或SPr¹(其中Pr¹是H或硫醇保护基)，而且还包括例如-C(O)OH、-C(O)OPr⁵(其中Pr⁵是能形成酯的保护基)、-C(O)NHOH、-C(O)NHOPr⁶(其中Pr⁶是异羟肟酸保护基)、-C(O)NH₂、-C(O)NHR₈(其中R₈是烷基、烯基、芳基或杂芳基)或-C(O)N(R₈)R₉(其中R₈和R₉相同或不同，是烷基、烯基、芳基或杂芳基)；

在一个实施方案中，所述氨基酸侧链部分是来自天然氨基酸的那些。来自天然氨基酸的氨基酸侧链部分的实例(括号中表示的是其所来源的氨基酸)是-H(甘氨酸)、-CH₃(丙氨酸)、-CH(CH₃)₂(缬氨酸)、-CH₂CH(CH₃)₂(亮氨酸)、-CH(CH₃)CH₂CH₃(异亮氨酸)、-(CH₂)₄NH₂(赖氨酸)、-(CH₂)₃NHC(＝NH)NH₂(精氨酸)、-CH₂-(5-1H-咪唑基)(组氨酸)、-CH₂CONH₂(天冬酰胺)、-CH₂CH₂CONH₂(谷氨酰胺)、-CH₂COOH(天冬氨酸)、-CH₂CH₂COOH(谷氨酸)、-CH₂-苯基(苯丙氨酸)、-CH₂(4-OH-苯基)(酪氨酸)、-CH₂-(3-1H-吲哚基)(色氨酸)、-CH₂SH(半胱氨酸)、-CH₂CH₂SCH₃(蛋氨酸)、-CH₂OH(丝氨酸)以及-CH(OH)CH₃(苏氨酸)。

在一个实施方案中，各氨基酸侧链是存在于天然氨基酸中的氨基酸侧链部分或者是-(CH₂)₂-C(O)-O-C(CH₃)₃(叔丁氧基羰基甲基丙氨酸)、-(CH₂)₄-NH-C(O)-O-C(CH₃)₃(Nε-(叔丁氧基羰基)-赖氨酸)、-(CH₂)₃-NH-C(O)NH₂(瓜氨酸)、-CH₂-CH₂OH(高丝氨酸)或-(CH₂)₂-CH₂NH₂(鸟氨酸)。

在本发明的一个优选实施方案中，R₁是-CH(CH₃)₂，R₂是-H，R₃是-CH(CH₃)₂，R₄是-H，R₆是-H，R₇是-CH₃，X是-CH(Z)-，Z是-OH，K是-CH＝CHCH₂CH₂-，L是-S-C(O)CH₃，作为化合物10显示在实施例中。

在本发明的另一个优选实施方案中，R₁是-CH(CH₃)₂，R₂是-H，R₃是-CH(CH₃)₂，R₄是-H，R₆是-H，R₇是-CH₃，X是-CH(Z)-，Z是-OH，K是-CH＝CHCH₂CH₂-，L是-SH，作为化合物9显示在实施例中。

在本发明的另一个优选实施方案中，R₁是-CH(CH₃)₂，R₂是-H，R₃是-CH₃，R₄是-H，R₆是-H，R₇是-CH₂Ph，X是-CONR₆-，K是-CH＝CHCH₂CH₂-，L是-S-C(O)CH₃，作为化合物17显示在实施例中。

在本发明的另一个优选实施方案中，R₁是-CH(CH₃)₂，R₂是-H，R₃是-CH₃，R₄是-H，R₆是-H，R₇是-CH₂Ph，X是-CONR₆-，K是-CH＝CHCH₂CH₂-，L是-SH，作为化合物16显示在实施例中。

本文中所用的可药用盐是与可药用酸或碱所形成的盐。可药用酸包括无机酸和有机酸，所述无机酸例如盐酸、硫酸、磷酸、二磷酸、氢溴酸或硝酸；所述有机酸例如柠檬酸、富马酸、马来酸、苹果酸、抗坏血酸、琥珀酸、酒石酸、苯甲酸、乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸或对甲苯磺酸。可药用碱包括碱金属(例如钠或钾)氢氧化物以及碱土金属(例如钙或镁)氢氧化物以及有机碱(例如烷基胺、芳烷基胺或杂环胺)。

本文中所用的术语“电子等排体”指一种原子或一组原子与其它十分相似的一种原子或一组原子交换而得到的化合物。在结构VII或VIII的化合物中，包含电子等排基团的结构部分优选是-NR₆-CHR₁-CO-(或-NR₆-CHR₁-CH(OR₈)-)、-NR₆-CHR₂-CO-O-(或-CHR₂-CO-O-)以及-NR₆-CO-CHR₃-NR₆-CO-。在结构VII或VIII的化合物中，包含电子等排基团的结构部分更优选是-NR₆-CHR₁-CO-(或-NR₆-CHR₁-CH(OR₈)-)、-NR₆-CHR₂-CO-O-(或-CHR₂-CO-O-)和-NR₆-CO-CHR₃-NR₆-CO-。这些电子等排体的实例是结构VII或VIII的化合物，其中-NH-部分被-CH₂-、-O-或-S-替代，-CO-部分被-S-或-(＝NH)-替代，-O-部分被-S-、CH₂-或-NH-替代。

为了避免疑惑，本发明还包括在体内反应得到本发明化合物或其电子等排体或可药用盐的前药。

可通过常规的途径制备BVD，例如利用下述方案来制备，其中R₁至R₇、L、K、M和Z如上文定义：

方案1

在方案1步骤(a)中，使带有侧链R₁的氨基酸与带有侧链R₂的烯醇酯缩合，然后还原得到statine单元。在步骤(b)中，使所述statine与带有侧链R₇的氨基酸缩合而得到三肽电子等排体。在步骤(c)中，使所述三肽电子等排体与带有侧链R₃的氨基酸偶联而得到四肽电子等排体。在步骤(d)中，对所述肽的N-末端进行脱保护，并将游离胺与β-羟基酸衍生物(其中R₅是可被除去以产生R₅是H的化合物的临时封闭基团，LG是例如手性辅助剂形式的离去基团(如Yurek-George，A.；Habens，F.；Brimmell，M.；Packham，G.；Ganesan，A.J.Am.Chem.Soc.2004，126，1030-1031中所报道的)或者LG是醇)偶联，从而得到能进行标准酰胺偶联反应的游离酸。在步骤(e)中，所述酯基被水解，然后在步骤(f)中环化。可对结合锌的基团L进行其它化学转化以保护所述结合锌的基团，例如-SH向SPr²的转化。

方案2

在方案2步骤(a)中，使带有侧链R₂的氨基酸酯与带有侧链R₁的第二氨基酸缩合而得到二肽。在步骤(b)中，将所述二肽与带有侧链R₇的第三氨基酸偶联而得到三肽。在步骤(c)中，将所述三肽与氨基酸偶联而得到被保护的四肽。在步骤(d)中，对所述肽的N-末端进行脱保护，将游离胺与β-羟基酸衍生物(其中R₅是可被除去以产生R₅是H的化合物的临时封闭基团，LG是例如手性辅助剂形式的离去基团(如Yurek-George，A.；Habens，F.；Brimmell，M.；Packham，G.；Ganesan，A.J.Am.Chem.Soc.2004，126，1030-1031中所报道的)或者LG是醇)偶联，从而得到能进行标准酰胺偶联反应的游离酸。在步骤(e)中，所述酯基被水解，然后在步骤(f)中环化。可对结合锌的基团L进行其它化学转化以保护所述结合锌的基团，例如-SH向SPr²的转化。

可通过对其中R₆是氢的相应本发明化合物或中间体进行烷基化或者利用适当取代的原材料得到其中R₆不是氢的本发明化合物。

当R₇和L相连接而形成基团M时可制得式VIII化合物。

技术人员应当理解，当R₁、R₂、R₃、R₄、R₆、R₇、L、K和Z中之一带有诸如-OH、-SH、-NH₂或-COOH的官能团时，则优选在基团被引入后的一个或多个反应步骤中将其保护。在该情形下，所述基团可在其引入后的单独步骤中被保护，或者，在引入时其已经使被保护。技术人员应当明了可用于此方面的合适保护基。

由此得到的BVD类似物可利用合适的酸或碱处理而成盐。可通过标准技术(例如在手性色谱柱上洗脱)拆分通过上述任何步骤得到的外消旋混合物。

优选的本发明化合物具有至少等于辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)所表现出的HDAC抑制活性。因此，在另一个实施方案中，本发明提供了选择具有至少等于SAHA所表现出的HDAC抑制活性的化合物的方法，所述方法包括通过以下步骤制备式VII或VIII的化合物：

(i)使式(X)化合物与式(XI)化合物反应

其中R₁、R₂和R₆如上文定义，R₈是C₁-C₄烷基或C₂-C₄烯基，Y是氨基保护基；

或者，(i)使式(XII)化合物与式(XIII)化合物反应

其中R₁、R₂和R₆如上文定义，R₈是C₁-C₄烷基或C₂-C₄烯基，Y是氨基保护基；

(ii)将由此得到的中间体脱保护并使其与式(XIV)化合物反应

其中R₆和R₇如上文定义，Y’是氨基保护基；

(iii)将由此得到的中间体脱保护并使其与式(XV)化合物反应

其中R₃和R₆如上文定义，Y”是氨基保护基；

(iv)将由此得到的中间体脱保护并使其与式(XVI)化合物反应

其中R₄、R₅、K和L如上文定义，R₅是氢或羟基保护基，LG是离去基团；

(v)任选地将由此得到的中间体上的β-羟基脱保护以除去R₅保护基并用H将其替代；

(vi)将由此得到的中间体水解和环化；

(vii)任选地对结合锌的基团进行改性，例如通过添加保护基Pr¹或Pr²；

(viii)任选地除去存在于R₁、R₂、R₃和R₇上的任何保护基并用H将其替代；以及

(ix)筛选由此得到的化合物以测量其作为HDAC抑制剂的活性。

通常，在步骤(vi)中，在环化之前进行酯基的水解。

本领域技术人员应当理解，可将多种身份用于保护基Y、Y’和Y”，在每种情形下，优选的身份将取决于所存在特定基团的性质。

基团Y、Y’和Y”可以例如是叔丁氧基羰基(Boc)或9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)。通常，它们是Fmoc。

技术人员应当明了所述离去基团LG的合适身份。例如，其可以是手性辅助剂，例如通过其N原子相连接的噻唑烷硫酮基，如Yurek-George，A.etal(J.Am.Chem.Soc.2004，126，1030-1031)中所解释的。或者，其可以是-OH基。

基团R₈通常是C₁-C₄烷基或C₁-C₄烯基。更通常地，其是甲基或烯丙基。

技术人员应当理解，有多种试验适用于测试HDAC抑制作用并且可用于测量由步骤(viii)所得化合物与已知HDAC抑制剂SAHA相比较而言的活性。因此，试验化合物抗HDAC的IC₅₀可例如通过体外试验进行测定，并与相同试验条件下SAHA的IC₅₀进行比较。如果试验化合物的IC₅₀值等于或小于SAHA的IC₅₀值，则应当认为其具有至少等于SAHA所表现出的HDAC抑制活性。

在一个优选实施方案中，本发明提供了一种选择具有上文定义的至少等于SAHA所表现出的HDAC抑制活性的化合物的方法，其中在步骤(ix)中，所述筛选步骤是体外HDAC测试。通常，所述测试包括使不同浓度的试验化合物和SAHA与稀释的Hela细胞核提取液相接触，以测定所述试验化合物和SAHA的抗Hela细胞核提取液的IC₅₀。在相同条件下具有等于或小于SAHA抗Hela细胞核提取液的IC₅₀的所测试验化合物被认为是具有至少等于SAHA所表现出的抑制活性。通常利用HDAC荧光活性试剂盒(Biomol，UK)进行所述试验，并在分析之前对所述试验化合物进行还原。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种选择具有至少等于SAHA所表现出的抑制人癌细胞生长活性的化合物的方法，所述方法包括通过上述步骤(i)至(viii)制备结构VII或VIII的化合物，然后是步骤(ix)筛选由此得到的化合物以测量其作为人癌细胞生长抑制剂的活性。

技术人员应当理解，有多种试验适用于测试人癌细胞生长抑制作用并且可用于测量由步骤(viii)所得的化合物与SAHA相比较而言的活性。因此，试验化合物抗人癌细胞生长的IC₅₀可例如通过体外试验进行测定，并与相同试验条件下SAHA的IC₅₀进行比较。如果试验化合物的IC₅₀值等于或小于SAHA的IC₅₀值，则应当认为其具有至少等于SAHA所表现出的人癌细胞生长抑制活性。通常，在该实施方案中，步骤(ix)包括使不同浓度的试验化合物和SAHA与MCF7乳腺癌细胞系、HUT78T细胞白血病癌细胞系、A2780卵巢癌细胞系、PC3或LNCAP前列腺癌细胞系相接触以测定所述试验化合物和SAHA的抗所述细胞系的IC₅₀。在相同条件下具有等于或小于SAHA所表现出的抗这些细胞系的IC₅₀之抑制活性的所测化合物应当被认为是具有至少等于SAHA的抑制活性。通常，在该实施方案中，利用CyQuant^TM试验系统(MoelcularProbes，Inc.USA)进行所述试验。

在另一个优选的实施方案中，本发明提供了一种选择具有至少等于SAHA所表现出的抗炎活性的化合物的方法，所述方法包括通过如上所述的步骤(i)至(viii)制备结构VII或VIII的化合物，然后是步骤(ix)筛选由此得到的化合物以测量其抗炎活性。

技术人员应当理解，有多种试验适用于评价化合物的抗炎活性。可例如通过测量化合物相对于SAHA而言抑制外周血液单核细胞(PBMC)产生TNFα的活性来测定相对于SAHA而言的试验化合物的抗炎活性。因此，可例如在试验中测定化合物抑制PBMC产生TNFα的能力，并且与相同试验条件下SAHA的活性进行比较。如果试验化合物的体外抑制TNFα产生的活性等于或大于同样试验条件下SAHA的活性，则应当认为其具有至少等于SAHA所表现出的抗炎活性。通常，利用Human-α试剂盒(R&Dsystems，AbingdonUK)进行步骤(viii)。

在该实施方案的另一个方面中，可通过评价化合物相对于SAHA而言的抑制Balb/c小鼠中炎症的活性来测定试验化合物相对于SAHA而言的抗炎活性。如果试验化合物的体内抑制活性等于或大于在相同条件下SAHA的体内抑制活性，则应当认为其具有至少等于SAHA所表现出的抗炎活性。通常，在该实施方案中，通过评价试验化合物和SAHA抑制化学刺激诱导的Balb/c小鼠中炎症的体内活性来进行步骤(viii)。通常，所述化学刺激包括向小鼠局部施用奥沙拉宗(oxalazone)或丙酮。在该实施方案中，可在化学刺激之前或之后施用研究化合物。

在另一个优选的实施方案中，本发明提供了一种选择具有至少等于SAHA所表现出的诱导MCF7细胞中显著的G2/M期阻滞或细胞死亡的化合物的方法，所述方法包括通过如上所述的步骤(i)至(viii)制备结构VII或VIII的化合物，然后是步骤(ix)筛选由此得到的化合物以测量其相对于SAHA而言的诱导MCF7细胞中显著的G2/M期阻滞或细胞死亡的活性。

发现本发明的化合物是HDAC抑制剂。因此，本发明的化合物是治疗上有用的。

本发明的药物组合物包含结构VII或VIII的化合物以及可药用稀释剂或载体。这种药物组合物通常包含高达85wt％的本发明化合物。更典型地，其包含高达50wt％的本发明化合物。优选的药物组合物是无菌和不含热原的。此外，本发明所提供的药物组合物通常包含是基本上纯的光学异构体的本发明化合物。优选地，所述药物组合物包含结构VII或VIII的化合物的可药用盐或其电子等排体。

可以多种剂型施用本发明化合物和包含其的组合物。在一个实施方案中，可将含有本发明化合物的药物组合物配制成适于口服、直肠、胃肠外、鼻内或经皮施用的形式或者通过吸入或栓剂施用的形式。代表性的施用途径是胃肠外、鼻内或经皮施用或者通过吸入施用。

本发明的化合物可通过口服施用，例如以片剂、锭剂、糖锭、水性混悬液或油性混悬液、可分散粉末或颗粒形式施用。优选的本发明药物组合物是适于口服施用的组合物，例如片剂和胶囊。

本发明的化合物还可以通过胃肠外施用，通过皮下、静脉内、肌肉内、胸骨内(intrasternally)、经皮施用或者通过输注技术进行施用。所述化合物还可以作为栓剂施用。

本发明的化合物还可以通过吸入形式施用。相比于通过口服途径吸收的多种药物而言，吸入型药物的一个优点是它们被直接递送到血液供应丰富的区域中。因此，吸收非常快，因为肺泡具有巨大的表面积和丰富的血液供应，并且避免了首过代谢。另一个优点可能是治疗肺系统疾病，使得通过吸入将递送药物递送至需要治疗的细胞附近。

本发明还提供了含有该药物组合物的吸入装置。通常，所述装置是计量剂量吸入器(MDI)，其包含可药用的化学抛射剂以将药物推出所述吸入器。

本发明的化合物还可以通过鼻内施用进行施用。鼻腔的高度渗透性组织非常容易接受药物，其对药物的吸收比片剂形式的药物更快、更有效。经鼻药物递送比注射较少痛苦和侵入性的轻，患者较少产生焦虑。通过该方法，吸收非常快，通常避免了首过代谢，因此降低了患者间的易变性。此外，本发明还提供了含有该药物组合物的鼻内装置。

本发明的化合物还可以通过经皮施用方式来施用。因此，本发明还提供了含有本发明化合物的经皮贴剂。

本发明的化合物还可以通过舌下施用方式进行施用。因此，本发明还提供了含有本发明化合物的舌下片剂。

本发明化合物还可以与通过不同于患者正常代谢的过程来减少物质降解的药剂一起进行配制，例如抗菌剂或蛋白酶抑制剂，所述蛋白酶可能存在于患者中或者存在于寄生在患者表面或体内的寄生虫中并能降解所述化合物。

用于口服施用的液体分散体可以是糖浆、乳剂和混悬剂。

混悬剂和乳剂可包含载体，例如天然树胶、琼脂、藻酸钠、果胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯醇。用于肌肉内注射的混悬剂或溶液可包含与活性化合物一起的可药用载体，例如无菌水、橄榄油、油酸乙酯、二醇(例如丙二醇)，必要时，还可包含合适量的盐酸利多卡因。

用于注射或输注的溶液可包含载体，例如无菌水，或者，其优选为无菌等渗盐水溶液的形式。

本发明化合物在治疗或预防由HDAC介导的病症中是治疗上有效的。因此，本发明提供了结构VII或VIII的化合物或其可药用盐在制备用于治疗或预防实质上受到HDAC活性影响的病症的药物中的用途。还提供了治疗患有或易患有由HDAC介导的病症的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的结构VII或VIII的化合物、其电子等排体或其可药用盐。

在一个实施方案中，本发明化合物可与其它已知的HDAC抑制剂(例如SAHA)组合使用。在该实施方案中，可配制组合产品使得其包含用于同时、分开或依序使用的每一种药物。

因此，本发明还提供了结构VII或VIII的化合物或其电子等排体或其可药用盐在制备用于与其它已知的HDAC抑制剂(例如SAHA)共施用的药物中的用途。

本发明化合物可用于癌症的治疗和预防，并且可以单一治疗或组合治疗的形式使用。当以组合治疗使用时，本发明化合物通常与小的化合物(例如顺铂)、抗代谢物、DNA拓扑异构酶抑制剂、放射、基于抗体的治疗(例如曲妥单抗(herceptin)和利妥昔单抗)、抗癌接种疫苗、基因治疗、细胞治疗、激素治疗、放射治疗或细胞因子治疗一起使用。

在本发明的一个实施方案中，本发明化合物与其它化学治疗剂或抗肿瘤剂组合用于治疗癌症。这些其它化学治疗剂或抗肿瘤剂的实例包括米托蒽醌、长春花生物碱类(例如长春新碱和长春碱)、蒽环类抗生素(例如柔红霉素和阿霉素)、烷化剂(例如苯丁酸氮芥和美法仑)、紫杉烷类(例如紫杉醇)、抗叶酸剂(例如甲氨蝶呤和雷替曲塞(tomudex))、表鬼臼毒素类(例如依托泊苷)、喜树碱类(例如依立替康及其活性代谢物SN38)和DNA甲基化抑制剂(例如WO02/085400中公布的DNA甲基化抑制剂)。

因此，根据本发明，提供了包含本发明化合物和其它化学治疗剂或抗肿瘤剂的产品，作为组合制剂同时、分开或依次使用用于缓解癌症。根据本发明，还提供了上文定义的FK228类似物或其电子等排体或其可药用盐在制备通过与其它化学治疗剂或抗肿瘤剂共施用用于缓解癌症的药物中的用途。本发明的化合物和所述其它药剂可以任何次序施用。在这两种情形下，本发明化合物和所述其它药剂可同时施用，或者，如果分开施用时，由医师确定任何次序。

HDAC被认为在几种不同疾病的病理学和/或症候学中起作用，使得通过抑制HDAC而降低对象中HDAC的活性可用于在治疗上针对这些疾病的症状。本文中描述了可利用本发明的HDAC抑制剂进行治疗的多种疾病的实例，通过结构VII或VIII所示的本发明化合物的用途包括在本文中。应当指出，随着对HDAC在不同途径中所发挥的生物学作用的更全面了解，以后可能将本文中所公开以外的其它疾病确认为本发明化合物的适用症。

可使用本发明的HDAC抑制剂进行治疗的一组适应症是涉及不希望或不可控的细胞增殖的那些。这些适应症包括良性肿瘤、各种类型的癌症(例如原发性肿瘤和肿瘤转移)、再狭窄(例如冠状动脉损伤、颈动脉损伤和脑损伤)、内皮细胞的异常刺激(动脉粥样硬化)、由于手术引起的对身体组织的损伤、异常的伤口愈合、异常的血管生成、引起组织纤维化的疾病、重复性运动病症、非高度血管化组织的病症、以及与器官移植有关的增殖性反应。对于HDAC抑制剂而言，更具体的适应症包括但不限于前列腺癌、肺癌、急性白血病、多发性骨髓瘤、膀胱癌、肾癌、乳腺癌、结肠直肠癌、成纤维细胞瘤和黑素瘤。

在一个实施方案中，提供了用于治疗与不希望的和不可控的细胞增殖相关的疾病的方法。所述方法包括向患有不可控的细胞增殖的对象施用治疗有效量的本发明的HDAC抑制剂，使得所述不可控的细胞增殖减少。待使用的抑制剂特定剂量将取决于疾病状态的严重程度、施用途径和可由主治医师确定的相关因素。一般而言，可接受的有效日剂量是足以有效减缓或消除不可控的细胞增殖的量。

本发明的HDAC抑制剂还可以与其它药剂联合使用以抑制不希望的和不可控的细胞增殖。可与本发明的HDAC抑制剂联合使用的其它抗细胞增殖剂的实例包括但不限于视黄酸及其衍生物、2-甲氧基雌二醇、ANGIOSTATIN(TM)蛋白质、ENDOSTATIN(TM)蛋白质、苏拉明、角鲨胺、金属蛋白酶-1的组织抑制剂、金属蛋白酶-2的组织抑制剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、由软骨衍生的抑制剂、紫杉醇、血小板因子4、硫酸鱼精蛋白(鲱精蛋白)、硫酸壳多糖衍生物(由雪花蟹壳制得)、硫酸多糖肽聚糖复合物(sp-pg)、星形孢菌素、基质代谢调节剂(包括例如脯氨酸类似物(1-氮杂环丁烷-2-羧酸(LACA)、顺羟基脯氨酸、d，l-3，4-二氢脯氨酸、硫代脯氨酸)、富马酸β-氨基丙腈、4-丙基-5-(4-吡啶基)-2(3H)-噁唑酮)、甲氨蝶呤、米托蒽醌、肝素、干扰素、血清2-巨球蛋白、chimp-3、胰凝乳蛋白酶抑制剂、β-环糊精十四硫酸酯、eponemycin；烟曲霉素、硫代苹果酸金钠、d-青霉胺(CDPT)、血清β-1-抗胶原酶、α-2-抗纤维蛋白溶酶、比生群、氯苯扎利二钠、n-(2-羧基苯基-4-氯邻氨基苯甲酸二钠或“CCA”、沙利度胺；抑制血管生产的类固醇、羧基氨基咪唑；金属蛋白酶抑制剂如BB94。可使用的其它抗血管生成剂包括抗体，优选抗以下这些血管生成生长因子的单克隆抗体：βFGF、αFGF、FGF-5、VEGF异构体、VEGF-C、HGF/SF以及Ang-1/Ang-2。FerraraN.和Alitalo，K.″Clinicalapplicationofangiogenicgrowthfactorsandtheirinhibitors″(1999)NatureMedicine5：1359-1364。

一般而言，良性肿瘤中的细胞保留其分化特征并且不以完全不可控的方式进行分裂。良性肿瘤通常是局限性的和非转移性的。可利用本发明的HDAC抑制剂进行治疗的良性肿瘤的具体类型包括肝血管瘤、肝细胞腺瘤、巨大海绵状血管瘤、局灶性结节状增生、听神经瘤、神经纤维瘤、胆管腺瘤、胆管囊腺瘤(bileductcystanoma)、纤维瘤、脂肪瘤、平滑肌瘤、间皮瘤、畸胎瘤、粘液瘤、结节状再生性增生、颗粒性结膜炎以及化脓性肉芽肿。

在恶性肿瘤的情形下，细胞变得不分化、不对身体的生长控制信号做出响应并且以不可控的方式增殖。恶性肿瘤是侵入性的并且能扩散到远端部位(转移)。恶性肿瘤通常被分为两类：原发性的和继发性的。原发性肿瘤直接出现于发现其的组织中。继发性肿瘤或转移瘤是起源于身体别处但现已扩散到远端器官的肿瘤。常见的转移途径是直接生长到邻近结构中、通过血管或淋巴系统扩散、以及沿组织平面和身体空间(腹膜液、脑脊液等)走行。

可利用本发明HDAC抑制剂治疗的癌症或恶性肿瘤(原发性或继发性的)的具体类型包括但不限于白血病、乳腺癌、皮肤癌、骨癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、脑癌、喉癌、胆囊癌、胰腺癌、直肠癌、甲状旁腺癌、甲状腺癌、肾上腺癌、神经组织癌、头颈癌、结肠癌、胃癌、支气管癌、肾癌、基底细胞癌、溃疡型和乳头状的鳞状细胞癌、转移性皮肤癌、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、网状细胞细胞肉瘤、骨髓瘤、巨细胞瘤、小细胞肺肿瘤、胆石、胰岛细胞瘤、原发性脑瘤、急性和慢性淋巴细胞和粒细胞肿瘤、毛细胞肿瘤、腺瘤、增生、髓样癌、嗜铬细胞瘤、粘膜神经瘤、肠神经节瘤、增生性角膜神经肿瘤、马方样体态肿瘤(marfanoidhabitustumor)、维尔姆斯瘤、精原细胞瘤、卵巢瘤、平滑肌瘤、宫颈发育异常和原位癌、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、软组织肉瘤、恶性类癌、局部皮肤损伤、蕈样肉牙肿病、横纹肌肉瘤、卡波西肉瘤、骨源性肉瘤和其它肉瘤、恶性高钙血症、肾细胞肿瘤、真性红细胞增多症、腺癌、多形性胶质母细胞瘤、白血病、淋巴瘤、恶性黑素瘤、表皮样癌以及其它癌和肉瘤。

本发明的HDAC抑制剂还可以用于治疗由于手术过程中对身体组织的损伤而引起的异常细胞增殖。这些损伤可能因为多种手术过程(例如关节手术、肠手术和瘢痕疙瘩)而产生。产生纤维化组织的疾病包括气肿。可利用本发明治疗的重复性运动病症包括腕管综合征。可利用本发明治疗的细胞增殖性病症的一个实例是骨肿瘤。

可利用本发明的HDAC抑制剂治疗的与器官移植有关的增殖性反应包括促进可能的器官排斥或相关并发症的增殖性反应。具体而言，这些增殖性反应可发生在心、肺、肝、肾以及其它身体器官或器官系统的移植过程中。

可利用本发明治疗的异常血管生成包括伴有以下病症的那些异常血管生成：类风湿性关节炎、与脑水肿和损伤有关的缺血再灌注、皮层缺血、卵巢增生和血管过多(多囊卵巢综合征)、子宫内膜异位、银屑病、糖尿病视网膜病变以及其它眼睛血管生成疾病(例如早产儿视网膜病变(晶体后纤维增生症)、黄斑变性、角膜移植排斥、神经肌肉性青光眼(neuroscularglaucoma)和Oster-Webber综合征)。

可利用本发明治疗的与不可控的血管生成相关的疾病的实例包括但不限于视网膜/脉络膜新血管生成和角膜新血管生成。视网膜/脉络膜新血管生成的实例包括但不限于贝斯特病、近视、视窝、斯塔加特病、佩吉特病、静脉阻塞、动脉阻塞、镰刀形红细胞贫血症、结节病、梅毒、弹性假黄瘤、颈动脉载脂蛋白结构性疾病(carotidapostructivedisease)、慢性葡萄膜炎/玻璃体炎、分枝杆菌感染、莱姆病、系统性红斑狼疮、早产儿视网膜病变、伊尔斯病、糖尿病视网膜病变、黄斑变性、贝赫切特病(Bechetsdiseases)、引起视网膜炎或脉络膜炎的感染、拟眼部组织胞浆菌病综合征、睫状体平坦部炎、慢性视网膜剥离、高粘稠度综合征、弓形体病、创伤和激光后并发症、与虹膜变红(角的新生血管化)相关的疾病以及由纤维血管或纤维组织的异常增殖引起的疾病(包括所有形式的增生性玻璃体视网膜病变)。角膜新血管生成的实例包括但不限于流行性角结膜炎、维生素A缺乏、隐形眼镜超戴症、异位性角膜炎、上方角膜缘角膜炎、翼状胬肉、干燥性角膜炎、干燥综合征、酒渣鼻痤疮、phylectenulosis、糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、角膜移植排斥、蚕蚀性角膜炎、Terrien角膜边缘性变性、边缘角质层分离、多动脉炎、Wegener结节病、巩膜炎、类天疱疮放射状角膜切开术、新生血管性青光眼以及晶状体后纤维增生、梅毒、分枝杆菌感染、脂质变性、化学性灼伤、细菌性溃疡、真菌性溃疡、单纯疱疹感染、带状疱疹感染、原生动物感染以及卡波西肉瘤。

与不可控的血管生成相关的慢性炎性疾病也可利用本发明的HDAC抑制剂进行治疗。慢性炎症依赖于毛细血管芽的不断形成以维持炎性细胞流入。炎性细胞的流入和存在产生肉芽肿，并因此维持慢性炎症状态。利用HDAC抑制剂单独或与其它抗炎剂联合抑制血管生成可防止肉芽肿形成，从而缓解疾病。慢性炎性疾病的实例包括但不限于炎性肠病(例如克罗恩病和溃疡性结肠炎)、银屑病、结节病和类风湿性关节炎。

炎性肠病(例如克罗恩病和溃疡性结肠炎)的特征在于胃肠道中不同部位的慢性炎症和血管生成。例如，克罗恩病作为慢性透壁性炎性疾病出现，最常见影响远端回肠和结肠，但也可见于从入口到肛门的胃肠道的任何部分以及肛周区域。患有克罗恩病的患者通常出现慢性腹泻并伴有腹痛、发热、食欲减退、体重减轻和腹胀。溃疡性结肠炎也是一种出现在结肠粘膜中的慢性非特异性的炎性溃疡性疾病，特征在于存在血性腹泻。这些炎性肠病通常是由遍及胃肠道的慢性肉芽肿炎症引起的，涉及被炎性细胞包围的新毛细血管芽。利用这些抑制剂抑制血管生成应抑制芽形成以及防止肉芽肿的形成。炎性肠疾病还表现出肠外表现，例如皮肤损伤。这些损伤的特征在于炎症和血管生成并且可出现在不同于胃肠道的多个部位。利用本发明的HDAC抑制剂抑制血管生成可减少炎性细胞的流入和防止损伤形成。

结节病是另一种慢性炎性疾病，其特征在于多系统肉芽肿性病症。该疾病的肉芽肿可在身体的任何部位形成。因此，症状取决于肉芽肿的部位以及所述疾病是否是活动性的。所述肉芽肿是由提供炎性细胞的连续供应的生成血管的毛细血管芽产生的。利用本发明的HDAC抑制剂可抑制血管生成，从而可抑制肉芽肿形成。银屑病也是一种慢性复发性炎性疾病，其特征在于不同大小的丘疹和斑。利用这些抑制剂的单独或与其它抗炎剂联合的治疗应防止形成维持特征性损伤所必需的新血管以及减轻患者症状。

类风湿性关节炎(RA)也是一种慢性炎性疾病，其特征在于周围关节的非特异性炎症。认为关节滑膜衬里中的血管进行血管生成。除了形成新血管网络以外，内皮细胞释放导致血管翳生长和软骨破坏的因子和活性氧物质。参与血管生成的因子可积极促进和帮助维持类风湿性关节炎的慢性炎症状态。单独利用本发明的HDAC抑制剂或者将其与其它抗RA剂联合的治疗可防止形成维持慢性炎症所必需的新血管。

本发明的化合物还可用于治疗心脏/脉管系统疾病，例如肥大、高血压、心肌梗塞、再灌注、缺血性心脏病、心绞痛、心律不齐(arryhtmias)、高胆固醇血症、动脉粥样硬化以及中风。所述化合物还可用于治疗神经变性疾病/CNS病症，例如急性和慢性神经病，包括中风、亨廷顿舞蹈病、肌萎缩性侧索硬化症以及阿尔茨海默病。

本发明的化合物还可用作抗微生物剂，例如抗菌剂。因此，本发明还提供了用于治疗细菌感染的化合物。本发明的化合物可用作对抗病毒、细菌、真菌和寄生虫感染的抗感染化合物。感染的实例包括原生动物寄生虫(包括疟原虫、微小隐孢子虫(cryptosporidiumparvum)、刚地弓形虫(toxoplasmagondii)、神经元肉孢子虫(sarcocystisneurona)以及艾美秋虫(Eimeriasp.))感染。

本发明的化合物尤其适用于治疗不希望的或不可控的细胞增殖，优选用于治疗良性肿瘤/增生以及恶性肿瘤，更优选用于治疗恶性肿瘤，最优选用于治疗CCL、乳腺癌和T细胞淋巴瘤。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物用于减轻癌症、心脏肥大、慢性心力衰竭、炎性病症、心血管疾病、血红蛋白病、地中海贫血、镰刀形红细胞贫血、CNS病症、自身免疫疾病、糖尿病、骨质疏松、MDS、良性前列腺增生、口腔白斑、遗传相关的代谢病、感染、Rubens-Taybi、脆性X综合征、或α-1抗胰蛋白酶缺乏症、或者用于加速伤口愈合，或者用于保护毛囊或者作为免疫抑制剂。

通常，所述的炎性病症是皮肤炎性病症(例如银屑病、痤疮和湿疹)、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、类风湿性关节炎(RA)、炎性肠病(IBD)、克罗恩病或结肠炎。

通常，所述癌症是慢性淋巴细胞性白血病、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、间皮瘤或T细胞淋巴瘤。

通常，所述心血管疾病是高血压、心肌梗塞(MI)、缺血性心脏病(IHD)(再灌注)、心绞痛、心律不齐、高胆固醇血症、高脂血症、动脉粥样硬化、中风、心肌炎、充血性心力衰竭、原发性和继发性心肌病即扩张性(充血性)心肌病、肥厚型心肌病、限制型心肌病、外周血管病、心动过速、高血压或血栓。

通常，所述遗传相关的代谢病是囊性纤维化(CF)、过氧化物酶体生物合成病或肾上腺脑白质失养症。

通常，本发明的化合物用作器官移植后的免疫抑制剂。

通常，所述感染是病毒、细菌、真菌或寄生虫感染，尤其是金黄色葡萄球菌(S.aureus)，痤疮丙酸杆菌(P.acne)，假丝酵母菌(Candida)或曲霉菌(Aspergillus)的感染。

通常，所述CNS病症是亨廷顿舞蹈病、阿尔茨海默病、多发性硬化症或肌萎缩性侧索硬化症。

在该实施方案中，本发明的化合物可用于减轻癌症、心脏肥大、慢性心力衰竭、炎性病症、心血管疾病、血红蛋白病、地中海贫血、镰刀形红细胞贫血、CNS病症、自身免疫疾病、糖尿病或骨质疏松，或者用作免疫抑制剂。

本发明的化合物还可用于减轻慢性淋巴细胞性白血病、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、间皮瘤、T细胞淋巴瘤、心脏肥大、慢性心力衰竭或皮肤炎性病症，尤其是银屑病、痤疮或湿疹。

本发明的化合物可用于治疗动物，优选治疗哺乳动物，更优选治疗人。

适当时，本发明的化合物可用于预防性地降低这些病症的发生率。

将治疗有效量的本发明化合物施用给患者。根据具体化合物的活性，待治疗对象的年龄、重量和病症，疾病的类型和严重程度以及施用的频率和途径，典型的剂量是从约0.001mg/kg体重至50mg/kg体重。

下述实施例举例说明本发明。通过下述一般方案3和4制备化合物。通过多种技术(包括NMR(未给出细节))确证其结构。

方案3

(3S，4R)-4-[(R)-2-(3-9H-芴-9-基-丙酰基氨基)-丙酰基氨基]-3-羟基-5-甲基-己酸烯丙酯(3)的制备

在0℃和氩气下将TFA(2mL，40％v/v)加入到2(316mg，1.05mmol，根据Doi，T，；lijima，Y.；Shin-ya，K.；Ganesan，A，；Takahashi，T.；Tet.Lett.2006，47，1177-1080中的步骤制备)在CH₂Cl₂(5mL)中的溶液中，反应混合物反应2小时5分钟。然后真空下除去溶剂，并置于高真空下2小时。然后在搅拌下在0℃和氩气下用4分钟将二异丙基乙胺(0.71mL，4.1mmol)加入到PyBop(608mg，1.17mmol)和Fmoc-D-Ala-OH(359.6mg，1.16mmol)在CH₂Cl₂(20mL)中的溶液中。然后将该溶液加入到在CH₃CN(20mL)中的2的脱保护胺中，过夜搅拌溶液16小时。真空下除去溶剂。通过柱色谱在硅胶上(洗脱剂3∶7-1∶1EtOAc/己烷)纯化，得到白色固体3(330mg，0.67mmol，64％)：R_f0.40EtOAc/己烷(6∶4)；IR(薄膜)3315(b)，2962(m)，1712(s)，1660(s)，1529(s)cm^-1。

(3S，4R)-4-{(R)-2-[(R)-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基氨基}-3-羟基-5-甲基-己酸烯丙酯(4)的制备

在氩气下将二乙胺(2.5mL，10％v/v)加入到3(162.1mg，0.33mmol)在CH₃CN/CH₂Cl₂(15∶10mL)中的溶液中。1小时15分钟后真空下除去溶剂，利用己烷(3×15mL)重复此操作，然后将粗物质置于高真空下4小时45分钟。然后在0℃下将二异丙基乙胺(0.2mL，1.1mmol)逐滴加入到Fmoc-D-Val-OH(124.6mg，0.37mmol)和PyBop(191.1mg，0.37mmol)在CH₂Cl₂(20mL)中的溶液中。搅拌该溶液2分钟后，然后将该溶液加入到在CH₃CN(20mL)中的3的粗胺中。真空下除去溶剂，所形成的固体通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂6∶4-7∶3-8∶2EtOAc/己烷)，得到白色固体4(165.5mg，0.28mmol，84％)：R_f0.44EtOAc/己烷(6∶4)；IR(薄膜)3293(b)，2963(m)，1702(m)，1642(s)，1535(m)cm^-1。

(E)-(S)-3-羟基-7-三苯甲基硫基庚-4-烯酸((E)-(S)-3-Hydroxy-7-trisulfanylhept-4-enoicacid)(6)的制备

将氢氧化锂(196.1mg，8.19mmol)加入到5(934mg，1.66mmol，根据Yurek-George，A.；Habens，F.；Brimmell，M.；Packham，G.；Ganesan，A.J.Am.Chem.Soc.2004，126，1030-1031中的步骤进行制备)在THF/H₂O(39mL，3∶1)中的搅拌溶液中并搅拌50分钟。然后加入1MHCl直到pH达到2，加入EtOAc(20mL)，分层。利用EtOAc(20mL)萃取水层，合并有机层，干燥(MgSO₄)并真空浓缩。通过快速柱色谱纯化(洗脱剂3∶7-1∶1-1∶0EtOAc/己烷)，得到白色固体产物6(600mg，1.43mmol，86％)：R_f0.52EtOAc+2滴AcOH；[α]_D ²⁷-4.15(c0.975，CH₂Cl₂。

(3S，4R)-3-羟基-4-{(R)-2-[(R)-2-((E)-(S)-3-羟基-7-三苯甲基硫基庚-4-烯酰基氨基)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基氨基}-5-甲基-己酸烯丙酯(7)的制备

在氩气下于搅拌下将二乙胺(1.8mL，10％v/v)加入到4(165.5mg，0.28mmol)在CH₃CN/CH₂Cl₂(10∶8mL)中的溶液中。1小时30分钟后真空除去溶剂，利用己烷(3×15mL)重复操作，然后将粗物质置于高真空下1小时。然后在0℃下将二异丙基乙胺(0.13mL，0.75mmol)逐滴加入到在CH₂Cl₂(10mL)中的β-羟基酸6(128.4mg，0.31mmol)和PyBop(160mg，0.31mmol)中。搅拌该溶液5分钟后，然后将该溶液加入到在CH₃CN(10mL)中的粗的4的脱保护胺中。然后通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂8∶2-9∶1-1∶0EtOAc/己烷)，得到白色固体7(152.2mg，0.20mmol，70％)：R_f0.12EtOAc/己烷(8∶2)；IR(薄膜)3269(b)，2964(w)，2930(w)，1728(m)，1622(s)，1536(m)cm^-1。

(3S，4R)-3-羟基-4-{(R)-2-[(R)-2-((E)-(S)-3-羟基-7-三苯甲基硫基庚-4-烯酰基氨基)-3-甲基-丁酰基氨基]-丙酰基氨基}-5-甲基-己酸(8)的制备

在氩气下将吗啉(35μl，0.40mmol)加入到7(152.2mg，0.2mmol)、Pd(PPh₃)₄(23.2mg，0.02mmol)在无水甲醇(6mL)中的溶液中并搅拌2小时。真空下浓缩反应混合物，通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂0∶1-5∶95-10∶90-10∶90+0.5％AcOHMeOH/CH₂Cl₂)，得到黄色固体8(137mg，0.18mmol，100％)：R_f0.19MeOH/CH₂Cl₂(1∶9+0.5％AcOH)；IR(薄膜)3271(b)，2962(m)，2926(m)，1624(S)，1536(m)cm^-1。

(3S，7R，10R，13R，14S)-14-羟基-7，13-二异丙基-10-甲基-3-((E)-4-三苯甲基硫基-丁-1-烯基)-1，2-二氧杂-6，9，12-三氮杂环十六烷-5，8，11，16-四酮(9)的制备

在4小时内将酸8(129mg，0.18mmol)在含有3滴DMF的CH₂Cl₂/THF(134.5mL，2∶1)中的溶液逐滴加入到MNBA(73.5mg，0.21mmol)和DMAP(51.9mg，0.42mmol)在CH₂Cl₂/THF(33mL，2∶1)中的溶液中。再过16小时后，真空下浓缩反应混合物。通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂1∶0-98∶2-96∶4-94∶6-92.8CH₂Cl₂/MeOH)，得到白色固体9(24.7mg，0.035mmol，17％)：R_f0.43CH₂Cl₂/MeOH(90∶10)；IR(薄膜)3293(b)，2963(m)，1732(m)，1660(s)，1536(m)cm^-1。

(3S，7R，10R，13R，14S)-14-羟基-7，13-二异丙基-3-((E)-4-巯基-丁-1-烯基)-10-甲基-1，2-二氧杂-6，9，12-三氮杂环十六烷-5，8，11，16-四酮(10)的制备

将三乙基硅烷(7μL，0.44mmol)加入到9(8mg，0.011mmol)在CH₂Cl₂(1mL)中的溶液中，然后逐滴加入TFA(0.2mL，20％v/v)。搅拌1.5小时后，真空下浓缩反应物，通过快速柱色谱纯化(洗脱剂1∶0-99∶1-98∶2-97∶3-96.4CH₂Cl₂/MeOH)，得到白色固体的产物10(0.47mg，0.001mmol，9％)：R_f0.44MeOH/CH₂Cl₂(1∶9)；MS(ES⁺)584.2(100％，[M+Na]⁺)。

硫代乙酸S-[(E)-4-((3S，7R，10R，13R，14S)-14-羟基-7，13-二异丙基-10-甲基-5，8，11，16-四氧代-1，2-二氧杂-6，9，12-三氮杂环十六烷-3基)-丁-3-烯基]酯(11)的制备

将三乙基硅烷(28μL，0.175mmol)加入到9(24.7mg，0.035mmol)在CH₂Cl₂(1.4mL)中的溶液中，然后逐滴加入TFA(0.35mL，25％v/v)。搅拌1小时后，真空下浓缩反应混合物并置于高真空下2小时，得到粗的硫醇10。在0℃下将二异丙基乙胺(30μL，0.172mmol)加入到硫醇10在CH₂Cl₂(0.45mL)中的溶液中，然后加入乙酰氯(2.43μL，0.034mmol)在CH₂Cl₂(0.1mL)中的溶液。搅拌2小时10分钟后，加入1MHCl(1mL)，然后加入EtOAc(10mL)，分层，利用饱和盐水(10mL)清洗有机层。将有机层干燥(MgSO₄)并真空浓缩。通过快速柱色谱纯化(洗脱剂1∶0-98∶2-96∶4-94∶6-92.8CH₂Cl₂/MeOH)，得到白色固体的产物11(7.3mg，0.014mmol，41％)：R_f0.47MeOH/CH₂Cl₂(1∶9)。

方案4

((R)-2-{(R)-2-[(R)-2-((E)-(R)-3-羟基-7-三苯甲基硫基-庚-4-烯酰氨基)-丙酰基氨基]-3-苯基-丙酰基氨基}-3-甲基-丁酰基氨基)乙酸甲酯(13)的制备

将溶解在CH₂Cl₂(3mL)中的5(242mg，0.43mmol)的溶液加入到四肽12(159mg，0.391mmol，购自中国上海的GLBiochemLtd，200241)在CH₃CN(7mL)中的溶液中，然后加入DMAP(4.78mg，0.0391mmol)。搅拌反应混合物过夜；然后真空下浓缩粗物质，通过快速柱色谱在硅胶上纯化残留物(洗脱剂1％MeOH/CH₂Cl₂)，得到白色固体13(190mg，0.236mmol，60％)：R_f0.28MeOH/CH₂Cl₂(5∶95)。

((R)-2-{(R)-2-[(R)-2-((E)-(R)-3-羟基-7-三苯甲基硫基-庚-4-烯酰基氨基)-丙酰基氨基]-3-苯基-丙酰基氨基}-3-甲基-丁酰基氨基)乙酸(14)的制备

在0℃下将LiOH(8.48mg，0.354mmol)在H₂O(1mL)中的溶液加入到13(190mg，0.236mmol)在THF(4mL)中的溶液中。搅拌1小时后，将CHCl₃(60mL)加入到溶液中，然后加入1MHCl(10mL)。分层，利用CHCl₃(2×10mL)清洗水层。合并有机层，用盐水清洗，以MgSO₄干燥并真空浓缩。然后通过快速柱色谱在硅胶上纯化粗物质(洗脱剂2％MeOH/CH₂Cl₂)，得到浅黄色固体14(80mg，0.1mmol，43％)：R_f0.21AcOH/MeOH/CH₂Cl₂/(1∶4∶95)。

(6R，9R，12R，16S)-9-苄基-6-异丙基-12-甲基-16-((E)-4-三苯甲基硫基-丁-1-烯基)-1-氧杂-4，7，10，13-四氮杂-环十六烷-2，5，8，11，14-五酮(15)的制备

在3小时内将溶解在CH₂Cl₂(88mL)和DMF(5mL)中的酸14(80mg，0.10mmol)的溶液逐滴加入到2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(MNBA)(43.7mg，0.127mmol)和DMAP(29.9mg，0.245mmol)在CH₂Cl₂(26mL)中的溶液中，搅拌反应过夜。最后，真空下浓缩反应混合物，通过快速柱色谱在硅胶上纯化残留物(洗脱剂1-3％MeOH/CH₂Cl₂)，得到白色固体15(26.5mg，0.034mmol，34％)：R_f0.35MeOH/CH₂Cl₂(5∶95)。

(6R，9R，12R，16S)-9-苄基-6-异丙基-16-((E)-4-巯基-丁-1-烯基)-12-甲基-1-氧杂-4，7，10，13-四氮杂-环十六烷-2，5，8，11，14-五酮(16)的制备

将Et₃SiH(3.83μL，0.024mmol)和TFA(60μL)加入到15(9mg，0.012mmol)在CH₂Cl₂(500μL)中的溶液中。搅拌15分钟后，真空下除去溶剂，通过快速柱色谱在硅胶上纯化残留物(2-7％MeOH/CH₂Cl₂)，得到白色固体的硫醇16(2.3mg，0.0043mmol，36％)：R_f0.58MeOH/CH₂Cl₂(1∶9)；LRMS(ES⁺)m/z555.4(100％，[M+Na]⁺)。

硫代乙酸S-[(E)-4-((6R，9R，12R，16S)-9-苄基-6-异丙基-12-甲基-2，5，8，11，14-五氧代-1-氧杂-4，7，10，13-四氮杂-环十六烷-16-基)-丁-3-烯基]酯(17)的制备

将Et3SiH(16μL，0.1mmol)和TFA(0.2mL)加入到15(15mg，19μmol)在CH₂Cl₂(0.8mL)中的搅拌的溶液中。室温下于惰性气氛下搅拌30分钟后，浓缩反应混合物，高真空下干燥残留物。不需要进一步纯化，将粗硫醇16用在下一步中。在0℃下，将DIPEA(17μL，0.1mmol)和AcCl(2μL，28μmol)加入到硫醇16在CH₂Cl₂(0.3mL)中的搅拌的溶液中。30分钟后，将反应混合物温热至室温，再搅拌1.5小时，此时加入1MHCl(1mL)淬灭反应。加入EtOAc(5mL)稀释溶液，进行相分离，利用EtOAc(2×1mL)萃取水相。利用饱和NaCl水溶液(2mL)清洗合并的有机相，干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩。通过快速色谱纯化残留物(洗脱剂：1-10％IPA/CH₂Cl₂)，得到近白色固体的化合物17(5mg，8μmol，45％)。

测试

根据制造商的说明书，利用HDAC荧光活性检测试剂盒(Biomol，UK)进行体外HDAC测试。在分析之前将化合物还原；在室温和避光下利用在DMSO中的30mMDTT还原1mM化合物过夜。然后将反应置于96孔板中。对于每一反应而言，将10μl化合物(需要在测试缓冲液中将浓度稀释5倍)与15ml稀释的Hela细胞核提取液(在测试缓冲液稀释30倍)。制备每一化合物的系列稀释液。还建立了仅含细胞核提取液与仅含测试缓冲液的反应。将25μl稀释的FluordeLys^TM底物(在测试缓冲液稀释100倍)加入到每一反应中，然后在37℃下孵育1小时。通过加入50μlFluordeLys^TM开剂(在添加有稀释100倍的TSA的测试缓冲液中稀释20倍)使反应停止。然后将反应在室温下孵育10分钟，再利用带有滤光器的CytoFluorII荧光多孔板读数仪和CytoFluorII软件在360nM的激发波长和460nM的发射波长下测量荧光。以一式两份样品的平均值测定对体外HDAC活性的抑制，表示为相对于仅含有Hela提取液的反应的百分数。利用GraphPadPrism软件计算IC₅₀值。结果显示在下表中。

化合物编号	IC50(nM)
		10	4.4±0.45
11	21.63±6.0
		16	47±9.9
17	126±5.3

Claims (9)

1.通式VII的化合物，包括其可药用盐：

其中

R₁和R₃相同或不同，各自代表C₁-C₆烷基；

R₇是甲基或苄基；

R₂、R₄和R₆是H；

K是-CH＝CHCH₂CH₂-；

L代表SPr¹，其中Pr¹是H或形成硫醚、单硫缩醛、二硫缩醛或氨基硫缩醛、硫酯或氨基甲酸硫酯以保护硫醇基的保护基；

Z是通过单键或双键与大环键合的杂原子，与Z键合的任何其它基团是H或保护基。

2.权利要求1的化合物，其中X是-CO-NR₆-。

3.权利要求1的化合物，其中X是-CHZ-。

4.前述权利要求中任一项的化合物，其中Z是＝O、-OPr³、-N(Pr³)Pr⁴或-SPr³，Pr³和Pr⁴相同或不同，各自代表H或杂原子保护基，使得Z是醚、酯、酰胺、硫醚或硫酯。

5.权利要求1至3中任一项的化合物，其中R₇选自甲基。

6.权利要求1的化合物，其中满足：

Z是-O-或-NR”’，其中R”’是H或C₁-C₄烷基。

7.权利要求1至3中任一项的化合物，其中Pr¹选自-H和保护基，所述保护基选自：任选地被以下取代基取代的苄基：C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆酰氧基、羟基、硝基；吡啶甲基、吡啶甲基-N-氧化物、蒽基甲基、二苯基甲基、苯基、叔丁基、金刚烷基、C₁-C₆酰氧基甲基、C₁-C₆烷氧基甲基、四氢吡喃基、苄基硫甲基、苯基硫甲基、噻唑烷基、乙酰胺基甲基、苯甲酰胺基甲基、叔丁氧基羰基、乙酰基、苯甲酰基、氨基甲酰基、苯基氨基甲酰基以及C₁-C₆烷基氨基甲酰基。

8.权利要求7的化合物，其中Pr¹为-H。

9.权利要求1的化合物，其具有下式中任一种的结构：