CN101570743A - 蚯蚓复合多酶及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种从蚯蚓制备的复合多酶及其制备方法。该复合多酶包含:多种蛋白酶、核酸酶、脂酶、溶菌酶、植酸酶、淀粉酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、纤维素酶等。其制备方法以蚯蚓为材料,通过缓冲液低温保护匀浆,离心分离,洗涤,加硫酸铵沉淀分离,透析去除SO2- 4,分子筛层析,超滤浓缩、低温真空干燥即得。纯化制备的复合多酶,在生物大分子分解、底物利用方面,具有高效、多功能的特点。本发明制备工艺方法成本低,复合多酶制剂活性高。可利用其中的全部酶或部分酶的功能,以达到相应的使用目的,应用广泛。
Description
技术领域
本发明提供一种从蚯蚓制备的复合多酶及其制备方法。该复合多酶包含:多种蛋白酶、核酸酶、脂酶、溶菌酶、植酸酶、淀粉酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、纤维素酶等。其制备包括蚯蚓处理、匀浆、离心分离、萃取、透析、分子筛层析等方法步骤。蚯蚓复合多酶可用于食品、饲料、化妆品、医药、生物制品、生物培养、动物养殖、生物工程等技术领域。
背景技术
现已公开的专利文献技术,还没有从蚯蚓制备的复合多酶。酶制剂在生物领域有广泛的用途,其来源、组成、目标、及制备工艺方法各有特点。蚯蚓复合多酶是从蚯蚓制备、富含多种酶类,特别是在生物大分子分解、底物综合利用方面,具有高效、多功能的特点。本发明提供的制备工艺方法成本低,复合多酶制剂活性高,应用广泛,具有重大的推广价值。
发明内容
本发明以蚯蚓,包括人工养殖、野生,鲜活或干制的蚯蚓,及其多酶体系为材料,制备、纯化成方便使用的复合多酶制剂,可利用其中的全部酶或部分酶的功能,以达到相应的使用目的。
该方法的制备步骤为:
(1)将蚯蚓洗净,在摄氏5-15度,PH=4-8的缓冲液中匀浆、搅拌,离心,弃沉淀物得粗提液。
(2)上述粗提液进行加热至40±2度,保温2-4小时,冷却到5-15度,过滤后滤液中加入丙酮。
(3)上述沉淀物用缓冲液洗涤溶解,弃沉淀物得上清液。
(4)上清液在搅拌下加入mg、Cu、Zn及保护剂,然后离心,弃去沉淀。
(5)向上清液中加入硫酸铵溶液,离心收集沉淀;将上述沉淀溶解在缓冲液中,接着透析至无SO2-。
(6)透析液上分子筛层析柱收集洗脱液。
(7)超滤浓缩。
(8)低温真空干燥,即得。
制备的复合多酶包含:多种蛋白酶、核酸酶、脂酶、溶菌酶、植酸酶、淀粉酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、纤维素酶等。
具体实施方式
实施例一
(1)将鲜活蚯蚓洗净,在摄氏5-15度,PH=4-8的缓冲液中匀浆、搅拌,离心,弃沉淀物得粗提液。
(2)上述粗提液进行加热至40±2度,保温2-4小时,冷却到5-15度,过滤后滤液中加入丙酮。
(3)上述沉淀物用缓冲液洗涤溶解,弃沉淀物得上清液。
(4)上清液在搅拌下加入mg、Cu、Zn及保护剂,然后离心,弃去沉淀。
(5)向上清液中加入硫酸铵溶液,离心收集沉淀;将上述沉淀溶解在缓冲液中,接着透析至无SO2- 4。
(6)透析液上分子筛层析柱收集洗脱液。
(7)超滤浓缩。
(8)低温真空干燥,即得。
实施例二
(1)将风干的蚯蚓洗净,在摄氏10-15度浸泡4-6小时,在PH=4-8的缓冲液中匀浆、搅拌,离心,弃沉淀物得粗提液。
(2)上述粗提液进行加热至40±2度,保温2-4小时,冷却到5-15度,过滤后滤液中加入丙酮。
(3)上述沉淀物用缓冲液洗涤溶解,弃沉淀物得上清液。
(4)上清液在搅拌下加入mg、Cu、Zn及保护剂,然后离心,弃去沉淀。
(5)向上清液中加入硫酸铵溶液,离心收集沉淀;将上述沉淀溶解在缓冲液中,接着透析至无SO2- 4。
(6)透析液上分子筛层析柱收集洗脱液。
(7)超滤浓缩。
(8)低温真空干燥,即得。
Claims (3)
1、一种从蚯蚓制备的复合多酶及其制备方法。该复合多酶包含:多种蛋白酶、核酸酶、脂酶、溶菌酶、植酸酶、淀粉酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、纤维素酶等。该复合多酶的制备工艺方法如下:
(1)将蚯蚓洗净,在摄氏5-15度,PH=4-8的缓冲液中匀浆、搅拌,离心,弃沉淀物得粗提液。
(2)上述粗提液进行加热至40±2度,保温2-4小时,冷却到5-15度,过滤后滤液中加入丙酮。
(3)上述沉淀物用缓冲液洗涤溶解,弃沉淀物得上清液。
(4)上清液在搅拌下加入Mg、Cu、Zn及保护剂,然后离心,弃去沉淀。
(5)向上清液中加入硫酸铵溶液,离心收集沉淀;将上述沉淀溶解在缓冲液中,接着透析至无SO2- 4。
(6)透析液上分子筛层析柱收集洗脱液。
(7)超滤浓缩。
(8)低温真空干燥,即得。
2、根椐权利要求1所述的从蚯蚓制备的复合多酶,其特征在于该复合多酶从蚯蚓制备,同时包含:多种蛋白酶、核酸酶、脂酶、溶菌酶、植酸酶、淀粉酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、纤维素酶。
3、根椐权利要求1所述的从蚯蚓制备的复合多酶制备方法,其特征在于步骤(4)上清液在搅拌下加入的保护剂为Mg、Cu、Zn。
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CN110734490A (zh) * | 2019-11-28 | 2020-01-31 | 苏州华研医用科技有限公司 | 重组人金属硫蛋白ⅲ纯品的制备方法 |
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2008
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DD01 | Delivery of document by public notice |
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C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
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Open date: 20091104 |