CN101565704A

CN101565704A - 一种新型麦类钾通道β亚基KTB和KHB基因的核酸序列及其应用

Info

Publication number: CN101565704A
Application number: CNA2009100594634A
Authority: CN
Inventors: 郑有良; 王峰; 王际睿; 魏育明; 蒲至恩; 江千涛
Original assignee: Sichuan Agricultural University
Current assignee: Sichuan Agricultural University
Priority date: 2009-05-31
Filing date: 2009-05-31
Publication date: 2009-10-28

Abstract

本发明公开了一种新型麦类电压门控钾通道β亚基编码基因KTB和KHB(分别来自小麦和大麦)，如序列表SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，通过该基因序列可以对麦类作物在不同发育过程中对钾离子的吸收、转运进行评价，并且其表达产物可用于推测钾离子吸收转运通道中与其相关功能物质的联系。同时，利用转基因技术将该基因转入麦类作物中，可使麦类作物在低钾条件萌发率显著提高，对于提高麦类作物对钾肥利用效率具有重要的实践价值和理论意义。

Description

一种新型麦类钾通道β亚基KTB和KHB基因的核酸序列及其应用

技术领域

本发明属于生物基因工程技术领域，特别涉及到一种新型麦类钾离子通道基因的核酸序列及其应用。

背景技术

近年来我国耕地的复种指数不断提高，氮、磷投入日益增多，而由于钾素资源缺乏，钾肥总体投入不足，全国缺钾土壤的范围逐渐扩大。某些生产区还存在钾肥利用效率低的现象，造成了钾素资源的大量浪费。此外，我国钾肥资源奇缺，钾肥主要依赖进口，价格昂贵，不能满足大规模种植的需要。因此，提高钾肥利用效率具有重要的实践价值和理论意义。开发钾矿并提高钾肥生产能力，提高作物对钾的利用效率是上述问题的主要手段。

钾是植物生长必需的三大营养元素之一，在植物中与酶的活化、蛋白质合成、光合作用、油脂合成、气孔运动、离子平衡及抗逆性都密切相关。钾以可溶性无机盐形式存在于植物体的细胞液中，或以离子形态吸附在原生质胶体表面，通过参与植物体的生理、生化过程调节植物的生长发育。小麦高产田施钾数量与小麦产量存在极显著相关性，同时，钾也被认为是作物生产的“品质元素”，其对作物品质的影响有提高蛋白质含量和质量的直接方面，以及减少病虫害、提高抗逆能力的间接影响。

目前小麦钾离子通道与吸收利用钾效率的关系还不清楚。本实验室从麦类作物中首次克隆到了KAB/KOB的同源基因KTB(来自小麦Triticum)、KHB(来自大麦Hordeum)。通过KTB、KHB与水稻类似基因KOB序列的比较，发现其具有一定同源性，属于同一类家族蛋白质。本发明以麦类为材料，利用反向遗传学方法，推测KTB和KHB基因差异及K⁺吸收转运通道中与其相关功能基因的关系，对小麦和大麦中该基因表达以及对钾吸收的影响进行分析。同时分析该基因所编码蛋白在钾吸收过程中的生物学功能，利用共表达技术探讨麦类作物K⁺通道β-亚基与α-亚基在K⁺吸收转运功能上的联系，为研究如何提高农作物自身的钾营养效率提供有利依据。

本发明呈现的小麦和大麦电压门控钾通道β亚基基因与已报道的其它物种的电压门控钾通道β亚基基因有明显不同。迄今为止，还没有相关的报道在国内外出版物上发表过。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种新型小麦和大麦电压门控钾通道β亚基KTB和KHB基因序列和氨基酸序列。本发明以小麦和大麦为材料，利用反向遗传学方法，寻找KTB和KHB基因差异及K⁺吸收转运通道中与其相关功能基因的关系，对小麦和大麦中该基因表达以及对钾吸收的影响进行分析，同时分析该基因所编码蛋白在钾吸收过程中的生物学功能，利用共表达技术探讨麦类作物K⁺通道β-亚基与α-亚基在K⁺吸收转运功能上的联系。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

在对小麦良麦4号N、P、K吸收效率的研究中，发现小麦良麦4号对K⁺利用效率比其他小麦品种高，因此推测该品种可能具有特异的K⁺利用通道。本发明以普通小麦良麦4号(Triticum aectricum)和以色列大麦Shade-soil，Israel-36-01，123cDNA为模板，根据NCBI数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)中已知钾通道β亚基编码基因保守片段设计引物，利用PCR和分子克隆技术分离小麦和大麦电压门控钾通道β亚基因，然后将获得的基因序列与NCBI上的电压门控钾通道β亚基基因序列进行多重比对并分析它们在一级结构上的异同，结果表明我们首次克隆到小麦和大麦电压门控钾通道β亚基基因，分别命名为KTB和KHB。具体方法为：

1、材料诱导

选取由本实验室筛选的耐盐、盐敏感的大麦和小麦材料各1份进行诱导。每份材料取10粒种子放入垫有滤纸的培养皿中，加水置于暗室待发芽，两天后转到盛有蛭石的花盆中培养，仍然以水为培养液，光暗14/10小时，白天温度为22-25℃，夜间温度为18-20℃交替培养至3叶1心期，换MS培养液适应培养两天后，用低钾高钠MS培养液(LK+MS)继续培养，每2天换一次培养液。一周后取根部提取总RNA。

LK+MS大量母液中，以硝酸氨和磷酸二氢氨代替硝酸钾和磷酸二氢钾，每升LK+MS培养液中，补加0.0096g硝酸钾和8.775g氯化钠使得钾离子和钠离子的终浓度分别是100μM和150mM。

MS培养基母液成份表

每升MS培养液中含有下列成份：10*大量元素 100ml

100*微量元素 10ml

100*铁盐 10ml

100*有机成分 10ml

LK+MS 10*大量母液成份表

2、总RNA提取及反转录

2.1总RNA提取：

组织器官：根

总RNA提取使用天根公司TRNzol总RNA提取试剂(DP405)，所有操作均按照说明书进行。

2.2反转录：

使用宝生物PrimeScriptTM 1st Strand cDNA Synthesis Kit(D6110)，所有操作均按照说明书进行。

3、PCR扩增引物

根据相关EST序列设计了以下引物：

3.1大麦：

F1(barley)：5’-GCCAGCGAAGATGCAGTACAAC-3’

R1(barley)：5’-GTGCTTCATCTGTACGACTC-3’

3.2小麦：

F1(wheat)：5’-ATGCAGTACAACAACCTGGG-3’

R1(wheat)：5’-CCGCTTCATCTGTACGACTC-3’

4、PCR扩增

PCR反应组成：cDNA 200-300ng

dNTPs 200μM

10*Taq Plus Buffer 5μl

引物F₁ 10pmol

引物R₁ 10pmol

Taq Plus聚合酶 1U

ddH₂0 加至终体积50μl

PCR反应程序：

大麦：(1)94℃ 5min

(2)94℃ 45sec

(3)65℃ 50sec

(4)72℃ 1min

重复步骤(2)→(4)40次

(5)72℃ 8min

小麦：(1)94℃ 5min

(2)94℃ 45sec

(3)63℃ 45sec

(4)72℃ 45sec

重复步骤(2)→(4)40次

(5)72℃ 8min

PCR反应在PTC-220型PCR仪(MJ Research，U.S.A.)中进行。扩增产物在1％琼脂糖凝胶上分离，130V恒定电压电泳30分钟。

5、PCR产物纯化

使用Tiangen的胶回收试剂盒(DP209-02)，所有操作均按照说明书进行。

6、PCR产物T-载体克隆

6.1连接反应组成：

pMD19-T载体 0.5μl

Solution I 5μl

PCR回收产物加至终反应体积10μl

于16℃水浴中反应过夜

6.2热击感受态的制备：

(1).取在无抗生素平板上生长良好的单个DH10B菌斑，接种于2ml LB液体培养基中，37℃震荡培养过夜

(2).取500μl活化过-夜的菌液于50mlLB液体培养基中，37℃震荡培养至OD600＝0.3

(3).将菌液倒入2个50ml离心管中，冰上放置10min

(4).在预冷至4℃的离心机中4000r/min离心10min去掉上清收集菌体

(5).加入20ml冰冷的0.1M CaCl2于每个50ml离心管中，均匀悬浮菌体后，放入冰中30分钟

(6).2000r/min离心10min再次去掉上清收集菌体，在每管中加入2ml冰冷的0.1M CaCl2均匀悬浮菌体后，放入冰中待用

6.3转化大肠杆菌：

(1).将连接产物加入100μl感受态细胞中，充分混匀，放于冰上30min

(2).42℃热击1min 30s，冰上放1-2min后加入预热至37℃的LB液体培养基200μl

(3).37℃低速震荡培养40min

(4).每个LB固体培养基平板(加入抗生素，氨苄青霉素50μg/ml)加入200μl菌液、10μl 0.1M IPTG和40μl 20mg/ml的x-gal均匀涂于平板上

(5).37℃培养箱中过夜培养

6.4阳性克隆筛选：

(1).挑取培养平板上生长良好的白色单菌落，在含有氨苄青霉素(33μg/ml)的LB固体培养基平板上划线，扩大培养(37℃培养12小时)；

(2).挑取扩大培养后的菌进行PCR扩增，反应体系如下：

DNA 少许菌体

10×Taq Buffer 2.5μl

dNTPs 100μM

引物F1 5pmol

引物R1 5pmol

Taq聚合酶 1U

ddH2O 加至终体积25μl；

(3).PCR反应程序同前。扩增产物在1％琼脂糖凝胶上分离，130V恒定电压电泳30分钟，检测有无目的片段。

7、序列测定与比较分析

随机选取阳性克隆进行测序，序列测定由上海英骏公司完成，测序结果比较分析采用NCBI网址中的blast(http://www.ncbi.nlm.nib.gov/BLAST/)程序、MEGA 3.1和DNAman 5.2.2软件进行。

8、生物信息学分析

对所获得的KTB、KHB基因序列分别在小麦及大麦核酸数据库中进行比较，结果显示这两个基因为未报道的基因。

本发明从小麦中获得的电压门控钾通道β亚基的编码基因序列(KTB)，其核酸序列如SEQ ID No.1所示，根据其编码基因序列(KTB)和通用密码子信息，得到其推导的氨基酸序列，该序列如SEQ ID No.2所示。

本发明从大麦中获得的电压门控钾通道β亚基的编码基因序列(KHB)，其核酸序列如SEQ ID No.3所示，根据其编码基因序列(KHB)和通用密码子信息，得到其推导的氨基酸序列，该序列如SEQ ID No.4所示。

9、KTB和KHB基因序列的应用

9.1、本发明所述KTB和KHB基因序列通过基因枪、农杆菌介导、花粉管通道等本领域工作人员共知的方法导入小麦，培育出低钾的小麦品种。

9.2、依据本发明克隆得到的基因序列，可以建立特异、便捷的分子标记体系，通过该体系进行定向育种，获得抗低钾的小麦新品种和种质。

本发明的积极性效果为：

目前小麦钾离子通道与吸收利用钾效率的关系还不清楚。本研究以小麦和大麦为材料，利用反向遗传学方法，推测KTB和KHB基因差异及K⁺吸收转运通道中与其相关功能基因的关系，对小麦和大麦中该基因表达以及对钾吸收的影响进行分析。同时分析该基因所编码蛋白在钾吸收过程中的生物学功能，利用共表达技术探讨麦类作物K⁺通道β-亚基与α-亚基在K⁺吸收转运功能上的联系。

本发明的测序及核酸序列比对、氨基酸序列比对结果表明：KTB和KHB与已知的水稻电压门控钾通道β亚基基因(KOB1，U46758)有很高的同源性，属于电压门控钾通道β亚基基因家族，但是其又不同于已经公布的所有电压门控钾通道β亚基基因的新基因类型。

通过转基因技术，将本发明所述KTB和KHB麦类电压门控钾通道β亚基KTB和KHB基因转入拟南芥中，对拟南芥T1代阳性植株种子在低钾条件下的萌发率进行统计。结果表明，含有KTB和KHB的植株的发芽率显著高于非转化植株，证明本发明所述基因序列能够显著提高麦类作物对K⁺的利用率和转化率，对于小麦提高作物对钾肥利用效率具有重要的实践价值和理论意义。

附图说明

图1：大麦和水稻电压门控钾通道β亚基基因核酸序列比对结果。

图2：小麦和水稻电压门控钾通道β亚基基因序列比对结果。

图3：大麦和水稻电压门控钾通道β亚基基因氨基酸序列比对结果。

图4：小麦和水稻电压门控钾通道β亚基基因氨基酸序列比对结果。

图5：KTB和KHB真核表达载体结构示意图。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步的详细描述，但并非对本发明的限制，凡依照本发明公开内容所作的任何本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。

实施例1：

1、材料诱导

选取由本实验室筛选的耐盐、盐敏感的大麦和材料1份。每份材料取10粒种子放入垫有滤纸的培养皿中，加水置于暗室待发芽，两天后转到盛有蛭石的花盆中培养，仍然以水为培养液，光暗14/10小时，白天温度为22-25℃，夜间温度为18-20℃交替培养至3叶1心期，换MS培养液适应培养两天后，用低钾高钠MS培养液(LK+MS)继续培养，每2天换一次培养液。一周后取根部提取总RNA。

MS培养基母液成份表

每升MS培养液中含有下列成份：10*大量元素100ml

100*微量元素10ml

100*铁盐10ml

100*有机成分10ml

LK+MS 10*大量母液成份表

2、总RNA提取及反转录

2.1总RNA提取：

组织器官：根

2.2反转录：

使用宝生物PrimeScript^TM 1st Strand cDNA Synthesis Kit(D6110)，所有操作均按照说明书进行。

3、PCR扩增引物

根据相关EST序列设计了以下引物：

大麦：

F₁(barley)：5’-GCCAGCGAAGATGCAGTACAAC-3’

R₁(barley)：5’-GTGCTTCATCTGTACGACTC-3’

4、PCR扩增

PCR反应组成：

cDNA 200-300ng

dNTPs 200μM

10*Taq Plus Buffer 5μl

引物F₁ 10pmol

引物R₁ 10pmol

Taq Plus聚合酶 1U

ddH₂0 加至终体积50μl

PCR反应程序

(1)94℃ 5min

(2)94℃ 45sec

(3)65℃ 50sec

(4)72℃ 1min

重复步骤(2)→(4)40次

(5)72℃ 8min

5、PCR产物纯化

6、PCR产物T-载体克隆

连接反应组成：

pMD19-T载体 0.5μl

SolutionI 5μl

PCR回收产物加至终反应体积10μl

于16℃水浴中反应过夜

热击感受态的制备：

(2).取500μl活化过-夜的菌液于50mlLB液体培养基中，37℃震荡培养至OD₆₀₀＝0.3

(3).将菌液倒入2个50ml离心管中，冰上放置10min

(4).在预冷至4℃的离心机中4000r/min离心10min去掉上清收集菌体

(5).加入20ml冰冷的0.1M CaCl₂于每个50ml离心管中，均匀悬浮菌体后，放入冰中30分钟

(6).2000r/min离心10min再次去掉上清收集菌体，在每管中加入2ml冰冷的0.1M CaCl₂均匀悬浮菌体后，放入冰中待用

转化大肠杆菌：

(3).37℃低速震荡培养40min

(5).37℃培养箱中过夜培养

阳性克隆筛选：

(2).挑取扩大培养后的菌进行PCR扩增，反应体系如下：

DNA 少许菌体

10×Taq Buffer 2.5μl

dNTPs 100μM

引物F₁ 5pmol

引物R₁ 5pmol

Taq聚合酶 1U

ddH₂O 加至终体积25μl；

7、序列测定与比较分析

8、生物信息学分析

对所获得的KHB基因序列在大麦核酸数据库中进行比较，结果显示该基因为未报道的基因。

9、KHB基因序列的应用

9.1、基因序列通过基因枪、农杆菌介导、花粉管通道等本领域工作人员共知的方法导入小麦，培育出低钾的小麦品种。

9.2、依据克隆得到的基因序列，可以建立特异、便捷的分子标记体系，通过该体系进行定向育种，获得抗低钾的小麦新品种和种质。

实施例2：

1、材料诱导

选取由本实验室筛选的耐盐、盐敏感的小麦材料1份进行诱导。诱导方法同实施例1第1步。

2、总RNA提取及反转录

同实施例1第2步。

3、PCR扩增引物

根据相关EST序列设计了以下引物：

小麦：

F₁(wheat)：5’-ATGCAGTACAACAACCTGGG-3’；

R₁(wheat)：5’-CCGCTTCATCTGTACGACTC-3’。

4、PCR扩增

PCR反应组成：

cDNA 200-300ng

dNTPs 200μM

10*Taq Plus Buffer 5μl

引物F₁ 10pmol

引物R₁ 10pmol

Taq Plus聚合酶 1U

ddH₂0 加至终体积50μl

PCR反应程序：

(1)94℃ 5min

(2)94℃ 45sec

(3)63℃ 45sec

(4)72℃ 45sec

重复步骤(2)→(4)40次

(5)72℃ 8min

5、PCR产物纯化

同实施例1第5步。

6、PCR产物T-载体克隆

同实施例1第6步。

7、序列测定与比较分析

同实施例1第7步。

8、生物信息学分析

对所获得的KTB基因序列在小麦核酸数据库中进行比较，结果显示该基因为未报道的基因。

9、KHB基因序列的应用

方法同实施例1第9步。

SEQUENCE LISTING

<110>四川农业大学

<120>一种新型麦类钾通道β亚基KTB和KHB基因的核酸序列及其应用

<130>090523

<160>8

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>987

<212>DNA

<213>小麦Triticum

<400>1

atgcagtaca acaacctggg acggtcgggc ctccgcgtca gccagctctc ctacggcgcg 60

tgggtgacct tcggcaacca gctcgacgtc aaggaggcga aatccctcct ccaggcctgc 120

cgggacgcgg gggtcaactt cttcgacaac gcggaggtgt acgccaacgg gcgcgccgag 180

gagatcatgg ggcaggcgat ccgggacctg gggtggcgcc gcgccgacgt ggtcatctcc 240

accaagctct tctggggcgg ccaggggccc aacgacaagg gcctctcccg caagcacgtc 300

gtcgagggcc tgaaagcctc gctcaagcgg ctcgacatgg agtacgtcga cgtggtctac 360

tgccaccggc ccgacgccac cacgcccatc gaggagacgg tgcgggccat gaactgggtg 420

atcgaccagg ggtgggcctt ctactggggc acgtcggagt ggaccgcgca gcagatcacc 480

gaggcctggg gcgtggcgaa ccggcttgac ctcgtcgggc ccatcgtcga gcagcccgag 540

tacaacctct tctcccgcca caaggttgag tctgagtttg tacctcttta caacacttat 600

ggcattgggt tgactacatg gagtcctctc gcttcagggg ttctcactgg gaagtatagc 660

aaagggaata tacccgctga aagccggttt gccctagata actacaagaa cctggcaaac 720

aggtccctgg ttgacgacac gcttagaaaa gtgaacgggc tcaagccaat cgcttcggag 780

cttggcgtct cgatggcgca gctgggtatc gcctggtgcg cgtcgaaccc caacgtgtcg 840

tctgtgatca ctggagccac caaagagagc cagatcgtcg agaacatgaa ggccctggag 900

gtcgtcccgc tgctgacccc agaggtcctg gagaagatcg aggcggtcgt ccagagcaag 960

ccgaagcgcc tcgagtcgta cagatga 987

<210>2

<211>328

<212>PRT

<213>小麦Triticum

<400>2

Met Gln Tyr Asn Asn Leu Gly Arg Ser Gly Leu Arg Val Ser Gln Leu

1 5 10 15

Ser Tyr Gly Ala Trp Val Thr Phe Gly Asn Gln Leu Asp Val Lys Glu

20 25 30

Ala Lys Ser Leu Leu Gln Ala Cys Arg Asp Ala Gly Val Asn Phe Phe

35 40 45

Asp Asn Ala Glu Val Tyr Ala Asn Gly Arg Ala Glu Glu Ile Met Gly

50 55 60

Gln Ala Ile Arg Asp Leu Gly Trp Arg Arg Ala Asp Val Val Ile Ser

65 70 75 80

Thr Lys Leu Phe Trp Gly Gly Gln Gly Pro Asn Asp Lys Gly Leu Ser

85 90 95

Arg Lys His Val Val Glu Gly Leu Lys Ala Ser Leu Lys Arg Leu Asp

100 105 110

Met Glu Tyr Val Asp Val Val Tyr Cys His Arg Pro Asp Ala Thr Thr

115 120 125

Pro Ile Glu Glu Thr Val Arg Ala Met Asn Trp Val Ile Asp Gln Gly

130 135 140

Trp Ala Phe Tyr Trp Gly Thr Ser Glu Trp Thr Ala Gln Gln Ile Thr

145 150 155 160

Glu Ala Trp Gly Val Ala Asn Arg Leu Asp Leu Val Gly Pro Ile Val

165 170 175

Glu Gln Pro Glu Tyr Asn Leu Phe Ser Arg His Lys Val Glu Ser Glu

180 185 190

Phe Val Pro Leu Tyr Asn Thr Tyr Gly Ile Gly Leu Thr Thr Trp Ser

195 200 205

Pro Leu Ala Ser Gly Val Leu Thr Gly Lys Tyr Ser Lys Gly Asn Ile

210 215 220

Pro Ala Glu Ser Arg Phe Ala Leu Asp Asn Tyr Lys Asn Leu Ala Asn

225 230 235 240

Arg Ser Leu Val Asp Asp Thr Leu Arg Lys Val Asn Gly Leu Lys Pro

245 250 255

Ile Ala Ser Glu Leu Gly Val Ser Met Ala Gln Leu Gly Ile Ala Trp

260 265 270

Cys Ala Ser Asn Pro Asn Val Ser Ser Val Ile Thr Gly Ala Thr Lys

275 280 285

Glu Ser Gln Ile Val Glu Asn Met Lys Ala Leu Glu Val Val Pro Leu

290 295 300

Leu Thr Pro Glu Val Leu Glu Lys Ile Glu Ala Val Val Gln Ser Lys

305 310 315 320

Pro Lys Arg Leu Glu Ser Tyr Arg

325

<210>3

<211>987

<212>DNA

<213>大麦Hordeum

<400>3

atgcagtaca acaacctggg ccggtcgggg ctgcgggtga gccagctgtc ctacggggcg 60

tgggtgacct tcggcaacca gctggacgtc aaggaggcca agtccctcct ccaggcctgc 120

cgcgacgccg gggtcaactt cttcgacaac gccgaggtct acgccaacgg ccgcgccgag 180

gagatcatgg gccaggcgat ccgggacctc ggctggcgcc gcgccgacgt cgtcatc tcc 240

accaagctct tctggggcgg ccaggggccc aacgacaagg gcctctcccg caagcacatc 300

gtcgagggcc tcaaggcctc cctcaagcgg ctcgacatgg agtacgtcga cgtggtgtac 360

gcgcaccgcc ccgacgccac cacgcccatc gaggagacgg tcagggccat gaactgggtc 420

atcgatcagg gctgggcctt ctactggggc acgtccgagt ggagcgcgca gcagatcacc 480

gaggcgtggg gcgtcgccaa ccggcttgac ctcgtcgggc ccatcgtcga gcagcccgag 540

tacaacctct tctcccgcca caaggttgag tctgagtttg tacctcttta cagtacttat 600

ggcattgggt tgactacatg gagtcctcta gcttcaggag ttctcactgg aaaatatagc 660

aaaggcaata tacctcctga aagtcggttt gccctagata actacaagaa cctggcaaac 720

aggtctctgg ttgacgacac gcttaggaaa gtgaacgggc tcaaaccgat cgcttccgag 780

ctcggggtct cgatggccca gctgggcatt gcgtggtgcg cgtctaaccc caacgtgtcg 840

tccgtgatca ccggggccac caaagaaagc cagatcgtgg agaacatgaa ggccctggag 900

gtcgtcccgc tgctgactcc ggaggtcctg gagaagatcg aggcggtcat ccagagcaag 960

cccaagcgcc tcgagtcgta cagatga 987

<210>4

<211>328

<212>PRT

<213>大麦Hordeum

<400>4

Met Gln Tyr Asn Asn Leu Gly Arg Ser Gly Leu Arg Val Ser Gln Leu

1 5 10 15

Ser Tyr Gly Ala Trp Val Thr Phe Gly Asn Gln Leu Asp Val Lys Glu

20 25 30

Ala Lys Ser Leu Leu Gln Ala Cys Arg Asp Ala Gly Val Asn Phe Phe

35 40 45

Asp Asn Ala Glu Val Tyr Ala Asn Gly Arg Ala Glu Glu Ile Met Gly

50 55 60

Gln Ala Ile Arg Asp Leu Gly Trp Arg Arg Ala Asp Val Val Ile Ser

65 70 75 80

Thr Lys Leu Phe Trp Gly Gly Gln Gly Pro Asn Asp Lys Gly Leu Ser

85 90 95

Arg Lys His Ile Val Glu Gly Leu Lys Ala Ser Leu Lys Arg Leu Asp

100 105 110

Met Glu Tyr Val Asp Val Val Tyr Ala His Arg Pro Asp Ala Thr Thr

115 120 125

Pro Ile Glu Glu Thr Val Arg Ala Met Asn Trp Val Ile Asp Gln Gly

130 135 140

Trp Ala Phe Tyr Trp Gly Thr Ser Glu Trp Ser Ala Gln Gln Ile Thr

145 150 155 160

Glu Ala Trp Gly Val Ala Asn Arg Leu Asp Leu Val Gly Pro Ile Val

165 170 175

Glu Gln Pro Glu Tyr Asn Leu Phe Ser Arg His Lys Val Glu Ser Glu

180 185 190

Phe Val Pro Leu Tyr Ser Thr Tyr Gly Ile Gly Leu Thr Thr Trp Ser

195 200 205

Pro Leu Ala Ser Gly Val Leu Thr Gly Lys Tyr Ser Lys Gly Asn Ile

210 215 220

Pro Pro Glu Ser Arg Phe Ala Leu Asp Asn Tyr Lys Asn Leu Ala Asn

225 230 235 240

Arg Ser Leu Val Asp Asp Thr Leu Arg Lys Val Asn Gly Leu Lys Pro

245 250 255

Ile Ala Ser Glu Leu Gly Val Ser Met Ala Gln Leu Gly Ile Ala Trp

260 265 270

Cys Ala Ser Asn Pro Asn Val Ser Ser Val Ile Thr Gly Ala Thr Lys

275 280 285

Glu Ser Gln Ile Val Glu Asn Met Lys Ala Leu Glu Val Val Pro Leu

290 295 300

Leu Thr Pro Glu Val Leu Glu Lys Ile Glu Ala Val Ile Gln Ser Lys

305 310 315 320

Pro Lys Arg Leu Glu Ser Tyr Arg

325

<210>5

<211>22

<212>DNA

<213>Unknown

<220>

<223>人工序列

<400>5

gccagcgaag atgcagtaca ac 22

<210>6

<211>20

<212>DNA

<213>Unknown

<220>

<223>人工序列

<400>6

gtgcttcatc tgtacgactc 20

<210>7

<211>20

<212>DNA

<213>Unknown

<220>

<223>人工序列

<400>7

atgcagtaca acaacctggg 20

<210>8

<211>20

<212>DNA

<213>Unknown

<220>

<223>人工序列

<400>8

ccgcttcatc tgtacgactc 20

Claims

1、一种新型麦类电压门控钾通道β亚基KTB和KHB基因的核酸序列，其特征在于，所述基因序列分别为序列表中SEQ ID No.1和SEQ ID No.3所示的核酸序列。

2、一种新型麦类电压门控钾通道β亚基KTB和KHB的氨基酸序列，其特征在于，所述氨基酸序列分别为序列表中SEQ ID No.2和SEQ ID No.4所示的氨基酸序列。

3、一种新型麦类电压门控钾通道β亚基KTB和KHB基因的核酸序列的衍生序列，其特征在于，该衍生序列为权利要求1所述的基因序列的一个或几个碱基的置换、插入或缺失获得的该基因序列的变构体。

4、一种新型麦类电压门控钾通道β亚基KTB和KHB基因的氨基酸序列的衍生序列，其特征在于，该衍生序列与权利要求3所述的一种新型蛋白基因的核酸序列的衍生序列相对应，为在相应蛋白质的氨基酸序列基础上经过一个或几个氨基酸的一个或几个碱基的置换、插入或缺失获得的该基因序列的变构体。