CN101550161A

CN101550161A - 一种穿心莲内酯衍生物及其盐及其制备方法及用途

Info

Publication number: CN101550161A
Application number: CNA200810014967XA
Authority: CN
Inventors: 刘珂; 李英霞; 邵萌
Original assignee: Shandong Target Drug Research Co Ltd
Current assignee: SUZHOU NANOMEDICINE R&D Co.,Ltd.
Priority date: 2008-04-03
Filing date: 2008-04-03
Publication date: 2009-10-07
Anticipated expiration: 2028-04-03
Also published as: CN101550161B

Abstract

本发明公开了一种新的水溶性穿心莲内酯衍生物，其盐及其制备方法，以及该衍生物包括衍生物的盐及包含该衍生物的药用组合物的医疗用途，本发明还公开了穿心莲内酯衍生物对LPS诱导的巨噬细胞分泌NO的抑制作用、抗菌作用及对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的抑制作用，可用于制备治疗抗炎、抗菌、抗病毒和抗癌药物，可用于制备治疗感染性休克、败血症、炎性肠病、炎风湿与风湿性关节炎的药物。

Description

一种穿心莲内酯衍生物及其盐及其制备方法及用途

技术领域：

本发明涉及一种新化合物，具体是指一种新的穿心莲内酯衍生物包括衍生物的盐及其制备方法和医药用途。

背景技术：

穿心莲内酯(andrographolide)为穿心莲(Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees)中的二萜类化合物，分子式：C₂₀H₃₀O₅，为无色方型或长方型结晶，m.p.：230～232℃，[α]_D ²⁰：-126°(c＝0.2，H₂O)。味极苦，可溶于甲醇、乙醇、丙醇、吡啶中，微溶于氯仿、乙醚，难溶于水及石油醚。结构式如下

因穿心莲内酯不溶于水，给制备注射液带来了困难，目前，有多种方法被用来转化穿心莲内酯成各种衍生物，以改善穿心莲内酯的水溶性，并先后有喜炎平注射液(穿心莲内酯总磺化物)、穿琥宁(脱水穿心莲内酯琥珀酸酯)、莲必治(穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成物)等产品投入国内市场。莲必治和穿琥宁部分改变了穿心莲内酯的结构骨架，且在临床使用中表现出了不同程度的毒副作用，而喜炎平注射液的主要成份是一组总磺化物，包含数十种化合物，给质量控制带来很大的困难。因此寻找新的水溶性穿心莲内酯衍生物是开发利用穿心莲内酯的一项十分重要的课题。

发明内容：

1.本发明设计合成了一种新的具有下列通式(I)的穿心莲内酯衍生物或其药用衍生物和盐，外消旋体，异构体和/或互变异构体，19位磷酸化后稳定性提高，所得化合物可溶于水，较穿心莲内酯本身有更好的生物活性。

R₁和R₂表示H、M，M为Li⁺、Na⁺、K⁺或NH₄ ⁺；R₁和R₂相同或不相同，但是不能为不同的M；

R₃和R₄可以相同或不同，各自选自氢，非强制性取代的烷基，非强制性取代的链烯基，非强制性取代的炔基，非强制性保护的羟基，非强制性取代的氨基，非强制性取代的烷氧基，非强制性取代的烯氧基，非强制性取代的炔氧基，非强制性取代的芳基，非强制性取代的芳烷基，非强制性取代的杂环基，羧基，羧基酯，酰胺基，酰基，芳酰基，酰氧基，巯基，非强制性取代的烷硫基，卤素，硝基，硫酸基，磷酸基，氰基或一组-(CO)-W-R₆基团，其中W可以为O，S或NR₇，R₇可以是羟基或链长为(C1-C6)的烷基，R₆可以为取代或非取代的烷基，芳基，芳烷基或芳酰基；

R5分别选自氢，卤素原子或者是XR₈，其中X为O，S，NH，R₈可以为氢，取代或为取代的烷基，环烷基，芳基，芳烷基，链烯基，炔基，芳酰基，卤素等杂原子，氨基，烷氧基，烯氧基，炔氧基，杂环基，羧基，羧基酯，酰胺基，酰基，酰氧基，巯基，硝基，磺酰基，硫酸基，磷酸基，氰基或一组-(CO)-NH-R₉基团，其中R₉可以为取代或为取代的烷基，环烷基，芳基，芳烷基，链烯基，炔基，芳酰基，卤素等与R3和R4限定相同。

本发明并试制了包含该水溶性穿心莲内酯衍生物与药学上可用载体的药物组合物。

本发明公开了该水溶性穿心莲内酯衍生物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将穿心莲内酯溶于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，在对甲苯磺酸(p-TsOH)的催化下与2，2-二甲氧基丙烷(DMP)反应得到3、19位羟基用丙叉保护的化合物19-O-异亚丙基穿心莲内酯；

(2)19-O-异亚丙基穿心莲内酯在Ag₂O的催化下与MeI反应得到将14-OH用甲基保护的化合物14-O-甲基-19-O-异亚丙基穿心莲内酯；

(3)14-O-甲基-19-O-异亚丙基穿心莲内酯在MeOH中用对甲苯磺酸吡啶盐(PPTs)催化脱除丙叉得14-O-甲基穿心莲内酯；

(4)14-O-甲基穿心莲内酯用亚磷酸二苄酯((H)(O)P(OBn)₂)选择性磷酸化19-OH得14-O-甲基-19-O-(二苄氧基磷酰基)-穿心莲内酯；

(5)将14-O-甲基-19-O-(二苄氧基磷酰基)-穿心莲内酯溶于CH₂Cl₂中，用三甲基溴硅烷(TMSBr)脱除苄基保护基，生成14-O-甲基-19-O-磷酰基穿心莲内酯；

(6)14-O-甲基-19-O-磷酰基穿心莲内酯溶于MeOH与NaOH反应得到最终目标化合物14-O-甲基穿心莲内酯-19-O-磷酸单钠盐；

本发明的化合物或可药用盐可以单独使用或以药物组合物的形式使用。药物组合物包括作为活性成分的本发明的化合物或其可药用盐及可药用载体。

可药用载体包括但不限于：硬脂酸铝、卵磷脂、自乳化药物传递系统(SEDDS)如d-α-维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯、缓冲物质如磷酸盐、氨基乙酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸部分甘油酯混合物、水、盐、氯化钠、锌盐、硅胶、硅酸镁等。聚乙烯吡咯酮、纤维素物质、聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、乙烯-聚氧乙烯-嵌段聚合物和羊毛酯、环糊精如α-、β-、γ-环糊精或其经化学修饰的衍生物如2-和3-羟丙基-β-环糊精等羟烷基环糊精或其他可溶性衍生物等均可用于促进本发明的化合物的药物传递。

其他可用辅料如填充剂(如无水乳糖、淀粉、乳糖珠粒和葡萄糖)、粘合剂(如微晶纤维素)、崩解剂(如交联羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素和交联PVP)、润滑剂(如硬脂酸镁)、吸收促进剂、香味剂、甜味剂、稀释剂、赋形剂、润湿剂、溶剂、增溶剂和着色剂等也可加入本发明的药物组合物中。

上述本发明的化合物、可药用盐以及药物组合物可通过肠道或者非肠道途径给药。非肠道给药制剂包括注射液、霜剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂等。给药途径包括皮下、皮内、动脉内、静脉内、肌内、关节内、滑液内、胸骨内、鞘内、病灶内、颅内注射或输注。其给药途径包括口服、局部、直肠、经鼻、经颊、阴道、舌下、皮内、粘膜、气管、尿道。本发明的化合物及药物组合物还可以通过吸入气雾或植入蓄积或者针刺方式给药。

本发明的化合物以及药物组合物的口服制剂包括但不限于胶囊、片剂、乳剂、水悬浮剂、溶液、微胶囊、丸剂、锭剂、颗粒剂或粉剂。常用于片剂的可药用载体包括乳糖和干玉米淀粉。当制成口服水悬浮剂和域乳剂时，所述化合物或可药用盐可悬浮或溶解于油相里并与乳化剂或悬浮剂相结合。也可以按需要加入一些甜味剂和/或香味剂和/或增色剂。

本发明的化合物、可药用盐以及药物组合物可被制成无菌注射剂。其可用载体或溶剂包括甘露醇、水、林格氏液、等渗氯化钠等。

本发明的化合物、可药用盐以及药物组合物可制成栓剂以直肠给药，方法是将所述化合物、其前药与适宜的非刺激性赋形剂混合，后者在室温下为固体而在直肠温度下为液体，因而该栓剂可融解于直肠中并释放出活性成份。此类赋形剂包括但不限于：可可油、蜂蜡、聚乙二醇。本发明的化合物、可药用盐以及药物组合物的局部给药制剂(如油膏)可直接应用于患处。该局部制剂含有活性成份及可药用载体，所述可药用载体包括但不限于矿物油、液体石油、白石油、丙二醇、聚氧乙烯或聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。另外，本发明的化合物以及药物组合物还可制成洗剂或油剂。其适用的载体包括但不限于：矿物油、山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸腊酯、十六烷醇、2-十八烷醇、苯甲基乙醇和水。本发明的化合物、可药用盐以及药物组合物还可制成灌肠剂等进行直肠局部给药。局部透皮贴剂亦在本发明的保护范围之内。本发明的化合物、可药用盐以及药物组合物亦可经鼻喷雾或者吸入给药，即按本领域的常规方法使用苯甲基乙醇或其他防腐剂、吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他增溶剂或分散剂制得盐溶液。

本发明的化合物、可药用盐以及药物组合物还可通过植入给药。采用植入给药方式可达到在给药对象体内持续、定时释放本发明的化合物、其前药或可药用盐以及药物组合物的效果。另外，植入给药还能在局部组织和器官定位给药(Negrin et al.，Biomateriala 22(6)：563，2001)定时释放技术亦可用于本发明的化合物、其前药或可药用盐以及药物组合物的给药，如基于聚合体技术的定时释药胶囊、缓释技术和制剂包裹技术(如聚合体和脂质体)等。

贴剂同样包括在本发明的范围之内。其包括基层(如聚合体、布、纱和绷带)和本发明的药物组合物。基层的一边可设有一保护层以防止活性成份的流出。所述贴剂还可含有一用于固定的粘合剂，后者可以是一种自然的或者合成的物质，当其与给药对象的皮肤接触时可暂时粘附于皮肤上，粘合剂可以是防水的。

治疗有效量的本发明的化合物、可药用盐及药物组合物介于0.001-100mg/kg/d之间。任何介于上述范围之内的用量皆为本发明的有效量。所述“治疗有效量”可用于相关疾病的单一用药和联合用药治疗。本领域的专业人员能够理解，在实际给药时的用量可高于或低于上述剂量范围。针对某一对象(如哺乳动物-人)的“治疗有效量”和具体治疗方案可受诸多因素影响，包括所用化合物或其前药，可药用盐的药效活性，给药对象的年龄、体重、一般情况、性别、饮食、给药时间、疾病易感性、疾病进程以及收治医师的判断等。

为了便于理解本发明，特列举以下实施例。其作用应被理解为是对本发明的诠释而非对本发明的任何方式的限制。上文所列的各相关文献均以全篇引入本文参考。

附图说明

图1：14-O-甲基穿心莲内酯-19-O-磷酸单钠盐碳谱

图2：14-O-甲基穿心莲内酯-19-O-磷酸单钠盐氢谱

图3：14-O-甲基穿心莲内酯-19-O-磷酸单钠盐质谱

实施例1：

本实施例公开了19-O-磷酸单钠盐-14-O-甲基穿心莲内酯的制备过程

1.1.合成路线设计

1.2.3，19-O-异亚丙基穿心莲内酯(CXL-1)的制备

穿心莲内酯(5.0g，14.3mmol)溶于干燥的DMF(100mL)中，氩气保护下加入DMP(20mL，0.16mol)和p-TsOH(272.0mg，1.4mmol)，室温搅拌反应过夜。TLC检测反应结束后，加三乙胺(1mL)终止反应。反应液用EtOAc(200ml)稀释，分别用饱和NaHCO₃(3×100mL)，饱和食盐水(2×100mL)洗。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩硅胶柱层析(3∶1-1∶1，石油醚-EtOAc)得白色固体CXL-1(4.54g，81.5％)。R_f 0.53(1∶1，Petroleum ether-EtOAc，)。

¹H NMR(500MHz，DMSO)：δ6.63(td，1H，J＝8.2，1.8Hz，H-12)，5.72(d，1H，J＝7.3Hz，OH)，4.92(d，1H，J＝7.2Hz，H-14)，4.85(d，1H，J＝1.1Hz，H-17a)，4.68(s，1H，H-17b)，4.40(dd，1H，J＝11.9，7.6Hz，H-15a)，4.04(dd，1H，J＝11.9，2.5Hz，H-15b)，3.88(d，1H，J＝13.9Hz，H-19a)，3.41(dd，1H，J＝10.8，4.5Hz，H-3)，3.11(d，1H，J＝13.9Hz，H-19b)，2.52-2.49(m，2H，H-11)，2.36-2.33(m，1H，H-7a)，1.99-1.90(m，3H，H-9，H-7b and H-2a)，1.69-1.65(m，3H，H-2b and H-1)，1.34(s，3H，CH₃)，1.26(s，3H，CH₃)，1.31-1.28(m，2H，H-5 and H-6a)，1.24-1.18(m，1H，H-6b)，1.13(s，3H，18-Me)，0.88(s，3H，20-Me).

1.3. 3，14-O-甲基-19-O-异亚丙基穿心莲内酯(CXL-2)的制备

化合物CXL-1(2.0g，5.1mmol)溶于干燥的CH₃CN(60mL)中，依次加入Ag₂O(1.4g，6.1mmol)和MeI(10mL)，升温至60℃加热回流反应，TLC检测反应进程。约10h反应完毕，反应液过滤，用CH₂Cl₂洗涤滤渣。合并滤液，浓缩硅胶柱层析(4∶1，石油醚-EtOAc)得淡黄色粘稠物CXL-2(1.35g，65.2％)。R_f 0.42(2∶1，石油醚-EtOAc)。

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ7.03(t，1H，J＝8.7Hz，H-12)，4.90(d，1H，J＝11.7Hz，H-14)，4.64(s，1H，H-17a)，4.60(s，1H，H-17b)，4.37-4.36(m，2H，H-15)，4.19(d，1H，J＝13.4Hz，H-19a)，4.11(d，1H，J＝13.4Hz，H-19b)，3.49(dd，1H，J＝9.0，4.8Hz，H-3)，3.36(s，3H，OMe)，2.54-2.48(m，2H，H-11)，2.43-2.41(m，1H，H-7a)，2.00-1.96(m，2H，H-9 and H-7b)，1.83-1.74(m，4H，H-2 and H-1)，1.47(s，3H，CH₃)，1.28(s，3H，CH₃)，1.32-1.29(m，2H，H-5 and H-6a)，1.25-1.22(m，1H，H-6b)，1.20(s，3H，18-Me)，0.70(s，3H，20-Me).

1.4. 14-O-甲基穿心莲内酯(CXL-3)的制备

化合物CXL-2(123.4mg，0.3mmol)溶于干燥的MeOH(10mL)，氩气保护下加入PPTs(30.6mg，0.12mmol)，室温搅拌反应过夜。TLC检测反应完毕，浓缩硅胶柱层析(2∶1-1∶2，石油醚-EtOAc)得白色固体CXL-3(111.2mg，70.1％)。R_f 0.35(20∶1，CHCl₃-MeOH)。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ7.03(td，1H，J＝7.0，1.4Hz，H-12)，5.07(d，1H，J＝4.7Hz，OH)，4.83(s，1H，H-17a)，4.73(t，1H，J＝1.8Hz，H-14)，4.60(s，1H，H-17b)，4.35-4.31(m，2H，H-15)，4.14(dd，1H，J＝7.3，2.9Hz，H-19a)，3.84(dd，1H，J＝11.0，2.9Hz，H-19b)，3.29(s，3H，OMe)，3.26(dd，1H，J＝11.0，8.0Hz，H-3)，2.53-2.49(m，1H，H-11a)，2.42-2.36(m，1H，H-11b)，2.34-2.31(m，1H，H-7a)，1.95-1.90(m，1H，H-7b)，1.87(d，1H，J＝10.3Hz，H-9)，1.75-1.63(m，4H，H-2 andH-1)，1.39-1.32(m，1H，H-5)，1.24-1.19(m，2H，H-6)，1.08(s，3H，18-Me)，0.70(s，3H，20-Me).ESIMS：calcd for[M+Na]⁺m/z 387.2；found：m/z 387.2.

1.5.14-O-甲基-19-O-(二苄氧基磷酰基)-穿心莲内酯(CXL-4)的制备

化合物CXL-3(0.9g，2.5mmol)溶于干燥的CH₃CN/CH₂Cl₂(1∶1，100mL)混合溶剂中，降温至-10℃，氩气保护下滴加CCl₄(10.0mL，12.5mmol)，搅拌10min后，加入DMAP(60.3mg，0.5mmol)和DIEA(970μL，5.3mmol)。反应5min后，缓慢滴加(H)(O)P(OBn)₂(1.48mL，5.0mmol)，30min内加完。5min后置于冰浴下反应，自然升至室温反应，TLC检测反应进程。约24h反应完毕，加0.5mol·L^-1的KH₂PO₄(30mL)终止反应。反应液用EtOAc(2×200mL)萃取，合并有机层。有机相用饱和食盐水(2×100mL)洗，无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩硅胶柱层析(2∶3，石油醚-EtOAc)纯化得淡黄色液体CXL-4(1.31g，85.0％)。R_f0.45(23∶1，CHCl₃-MeOH)。

¹H NMR(CDCl₃)：δ7.35(m，10H，2×Ph)，7.00(t，1H，J＝6.4Hz，H-12)，5.09-4.98(m，4H，2×PhCH₂)，4.89(s，1H，H-17a)，4.66(brs，1H，H-14)，4.59(s，1H，H-17b)，4.36-4.33(m，2H，H-15)，4.26(dd，1H，J＝10.3，5.8Hz，H-19a)，3.81(dd，1H，J＝10.3，6.2Hz，H-19b)，3.35(s，3H，OMe)，3.25(dd，1H，J＝11.8，2.9Hz，H-3)，2.50-2.41(m，4H，H-11，H-7a and H-9)，1.93-1.90(m，1H，H-7b)，1.82-1.72(m，4H，H-2 and H-1)，1.64-1.57(m，1H，H-5)，1.28-1.18(m，2H，H-6)，1.13(s，3H，18-Me)，0.60(s，3H，20-Me).ESIMS：calcd for[M+H]⁺m/z 625.3；found：m/z 625.2.

1.6.14-O-甲基穿心莲内酯-19-O-磷酸单钠盐(CXL-6)的制备

化合物CXL-4(1.0g，1.6mmol)溶于干燥的CH₂Cl₂(30mL)中，氩气保护，冰浴下滴加TMSBr(0.9mL，6.4mmol)，自然升至室温反应。TLC检测2h反应完毕，反应液浓缩得粗产品CXL-5。不经分离，溶于MeOH(20mL)中，冰浴下滴加1M NaOH的MeOH溶液，调节pH＝8.5-9.0，自然升至室温搅拌反应过夜。滴加1M HCl的甲醇溶液至pH＝7.0终止反应，减压蒸馏除去溶剂，用H₂O/异丙醇，H₂O/丙酮多次重结晶得白色固体CXL-6(680.0mg，87.0％ for two steps)。

1.7.14-O-甲基穿心莲内酯-19-O-磷酸单钠盐波谱数据

CXL-6.¹H NMR(D₂O)δ6.92(t，1H，J＝6.3Hz，H-12)，4.72(brs，2H，H-17aand H-14)，4.42(s，1H，H-17b)，4.33(d，1H，J＝11.0Hz，H-15a)，4.27(dd，1H，J＝11.0，5.5Hz，H-15b)，4.03(dd，1H，J＝10.3，4.4Hz，H-19a)，3.42(dd，1H，J＝11.0，5.5Hz，H-19b)，3.24(s，3H，OMe)，3.16-3.13(m，1H，H-3)，2.45-2.42(m，1H，H-11a)，2.38-2.34(m，1H，H-11b)，2.25-2.23(m，1H，H-7a)，1.85-1.81(m，2H，H-9 andH-7b)，1.69-1.56(m，4H，H-2 and H-1)，1.23-1.09(m，3H，H-5 and H-6)，0.98(s，3H，18-Me)，0.55(s，3H，20-Me)；¹³C NMR(D₂O)δ173.1，152.8，149.1，125.1，107.4，78.0，74.2，72.1，65.2，55.6，55.5，54.7，42.2，38.6，37.3，36.9，27.3，25.5，23.7，22.1，14.4；ESIMS：calcd for[M+H]⁺m/z 467.2；found：m/z 467.3.

实施例2

称取1g CXL-5，溶于MeOH(20mL)中，冰浴下滴加1M KOH的MeOH溶液，调节pH＝8.5-9.0，自然升至室温搅拌反应过夜。滴加1M HCl的甲醇溶液至pH＝7.0终止反应，减压蒸馏除去溶剂，用H₂O/异丙醇，H₂O/丙酮多次重结晶得14-O-甲基穿心莲内酯-19-O-磷酸单钾盐(530.7mg)。

实施例3

本实施例公开了14-O-甲基穿心莲内酯-19-O-磷酸单钠盐(CXL-6)对LPS诱导的巨噬细胞分泌NO的抑制作用：

1、药品及仪器：

脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)、MTT购自Sigma公司；小鼠巨噬细胞RAW 264.7购自中科院细胞库(ATCC)；RPMI 1640培养基、青霉素、链霉素、胎牛血清购自Gibco公司；其他常用生化试剂均为国产分析纯；全自动酶标仪(美国，Biotek集团生产)；恒温CO₂培养箱(美国，Thermo公司生产)。穿心莲内酯购自市场，以DMSO溶解用于体外细胞实验。14-O-甲基穿心莲内酯-19-O-磷酸单钠盐按实施例1方法制备，穿琥宁、莲必治、喜炎平购自市场。

2、小鼠巨噬细胞RAW 264.7培养：

小鼠巨噬细胞RAW 264.7培养于含10％热灭活(56℃，30min)胎牛血清(FBS)、100U/mL青霉素钠、100μg/mL链霉素的RPMI 1640培养基中，37℃、

的恒温培养箱中孵育生长。

3、NO释放量的测定：

由于NO极不稳定，在细胞培养上清液内很快代谢成亚硝酸基(NO^2-)，故采用Griess法测定样品中NO^2-的浓度作为衡量NO水平的指标。Griess试剂A：w(N-萘乙二胺盐酸盐)＝0.1％溶于水中；Griess试剂

中，使用前等体积混合试剂A和B。用RPMI 1640培养基将小鼠巨噬细胞RAW 264.7稀释至5×10⁵ cells/mL，接种于96孔细胞培养板中，每孔加入200μL细胞悬浮液。CO₂培养箱中培养1h后，每孔加入LPS(1μg/mL)和不同浓度(0.1-200μmol/L)的测试样品0.4μL，同时设LPS组(不加入被测试样品)和空白对照组(DMSO)，每个样品4个重复。在37℃、CO₂恒温培养箱中培养24h后吸取培养液上清100μL至酶标板中，加入等体积的Griess试剂，室温反应10min后测定540nm处的吸光值。用浓度分别为1、5、10、50μmol/L的NaNO₂绘制标准曲线，根据NaNO₂标准曲线计算细胞培养上清液中NO^2-的浓度以及对NO释放的抑制率，抑制率计算公式为：

4、结果：测得抑制率后，计算各样品的IC₅₀。详见下表3。

各受试物体外NO抑制活性

5、结论：CXL-6的活性优于其原型穿心莲内酯及其它衍生物。

实验例4

本实验例公开了14-O-甲基穿心莲内酯-19-O-磷酸单钠盐的抗菌作用：

样品及菌种

样品来源：14-O-甲基穿心莲内酯19-O-磷酸单钠盐(CXL-6)按实施例1方法制备，穿心莲内酯购自市场，均以DMSO溶解用于体外细胞实验。穿琥宁、莲必治、喜炎平购自市场。

菌种来源：中国医学微生物菌种保藏中心(CMCC)中的卫生部药品生物制品鉴定所细菌种类：①金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003②大肠埃希氏菌CMCC(B)44113③福氏志贺氏菌CMCC(B)51571④乙型溶血型链球菌CMCC(B)32210⑤肺炎链球菌CMCC(B)31001⑥短小芽孢杆菌IFFI(B)10211⑦变形杆菌CMCC(B)49027

培养基：营养肉汤培养基、营养肉汤琼脂、血琼脂基础、无菌脱纤维羊血(购自上海康润生物科技有限公司)

实验方法：

将购自卫生部药品生物制品鉴定所的冻干菌种传代复苏，15％甘油保存菌种于零下80度冰箱中。Kirby-Bauer(KB)纸片扩散法测药物对不同细菌的抑菌圈直径，抗菌药物纸片的制备：选择直径6mm的定性滤纸片高压灭菌，放在37℃烘箱中，使完全干燥。无菌镊子取出滤纸片分别加药液20μl(浓度20μg)，10μl(浓度10μg)于无菌净化台上自然晾干。取培养的菌液(细菌的菌量为10⁵CFU/ml用无菌玻璃棒将菌液分别均匀涂布于琼脂平板表面，稍干后再用无菌镊子取上述抗菌药片贴于琼脂平板表面，37℃恒温箱培养18-24小时后观察并测量抑菌圈直径，每个浓度的药物抑菌实验重复3次，抑菌结果为3次实验平均值。

每次加一个阳性对照药：庆大霉素10μg/片或红霉素15μg/片(购自北京天坛药物生物技术开发公司)

实验结果

注：肺炎球菌、乙型链球菌和金黄色葡萄球菌用红霉素做对照，其他用大庆霉素，抑菌圈：＜10mm抗药；10mm轻度敏感；11～15mm中度敏感；16～20mm高度敏感

实验例5

本实验例公开了14-O-甲基穿心莲内酯-19-O-磷酸单钠盐对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

1.材料

14-O-甲基穿心莲内酯-19-O-磷酸单钠盐(CXL-6)：按实施例1制备。

阳性对照药：地塞米松磷酸钠注射液，规格，1ml：5mg，批号，05010301-1，天津药业焦作有限公司。

1.分组及方法

取昆明种小白鼠50只，随机分为5组。模型组、CXL-6高剂量组(40mg/kg)、中剂量组(20mg/kg)、低剂量组(10mg/kg)、地塞米松阳性对照组(2mg/kg)。静脉注射给药三天，末次给药后40min，将50μl二甲苯涂于小鼠右耳廓两面致炎，左耳作为对照，致炎后1h断颈处死动力，沿耳廓基线剪下两耳，用直径9mm的打孔器分别在同一部位打下耳片，即时称重，计算各组肿胀度及抑制率。

肿胀度(mg)＝左耳耳片重(mg)-右耳耳片重(mg)

抑制率(％)＝(模型组平均耳片重-给药组平均耳片重)/模型组平均耳片重×100％

2.结果

CXL-6对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(x±s，n＝10)

注：与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。

由上表可见14-O-甲基穿心莲内酯-19-O-磷酸单钠盐、地塞米松均可显著抑制二甲苯引起的耳廓肿胀，提示具有一定的抗炎作用。

Claims

1.具有下列通式(I)的穿心莲内酯衍生物或其药用衍生物和盐，外消旋体，异构体和/或互变异构体：

R₃和R₄可以相同或不同，各自选自氢，非强制性取代的烷基，非强制性取代的链烯基，非强制性取代的炔基，非强制性保护的羟基，非强制性取代的氨基，非强制性取代的烷氧基，非强制性取代的烯氧基，非强制性取代的炔氧基，非强制性取代的芳基，非强制性取代的芳烷基，非强制性取代的杂环基，羧基，羧基酯，酰胺基，酰基，芳酰基，酰氧基，巯基，非强制性取代的烷硫基，卤素，硝基，硫酸基，磷酸基，氰基或一组-(CO)-W-R₆基团，其中W可以为O，S或NR₇，R₇可以是羟基或链长为(C1-C6)的烷基，R₆可以为取代或非取代的烷基，芳基，芳烷基或芳酰基

R5分别选自氢，卤素原子或者是XR₈，其中X为O，S，NH，R₈可以为氢，取代或为取代的烷基，环烷基，芳基，芳烷基，链烯基，炔基，芳酰基，卤素等杂原子，氨基，烷氧基，烯氧基，炔氧基，杂环基，羧基，羧基酯，酰胺基，酰基，酰氧基，巯基，硝基，磺酰基，硫酸基，磷酸基，氰基或一组-(CO)-NH-R₉基团，其中R₉可以为取代或为取代的烷基，环烷基，芳基，芳烷基，链烯基，炔基，芳酰基，卤素等与R3和R4限定相同，

2.权利要求1化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

3.一种用于抗炎、抗菌、抗病毒和抗癌的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1化合物和一种或多种药学上可接受的载体。

4.权利要求1化合物在制备治疗抗炎、抗菌、抗病毒和抗癌的药物中的应用。

5、权利要求1化合物在制备治疗感染性休克、败血症、炎性肠病、炎风湿与风湿性关节炎药物中的应用。