CN101549153A - 用于自体治疗肿瘤的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

用于自体治疗肿瘤的组合物和方法。本发明提供了用一种或多种氧化剂或还原剂、半抗原和/或治疗剂，治疗肿瘤赘生物、肿瘤和癌症并使其产生肿瘤疫苗作用的方法，如能使体内产生CD4或CD8淋巴细胞，淋巴结及脾脏肿大等特异性免疫炎症反应。它们可以单独使用或与其它抗肿瘤剂或治疗剂一起使用。本发明也提供了药物组合物，和含有所述组合物用于有效治疗的试剂盒。

Description

用于自体治疗肿瘤的组合物和方法

技术领域

[1]本发明是关于治疗哺乳动物，特别是人的肿瘤的组合物和方法。更特别地，提供了用于在肿瘤内施用的组合物，其中包括肿瘤凝聚试剂和发炎反应增强试剂。也提供了通过施用这些组合物治疗肿瘤的方法。

背景技术

[2]对于癌症的治疗已经使用了许多方法，包括手术、化疗和辐射。手术是把全部或部分肿瘤移出身体的传统方法。手术一般是治疗早期癌症的唯一有效方法。对于目前能诊断出的癌症患者中的50％以上的人而言，他们不再是有效的手术治疗的候选人。在手术中，手术过程可能通过血液循环提高肿瘤的转移。大多数癌症患者不是死于诊断时或手术时的肿瘤，而是死于癌症的转移和复发。

[3]别的治疗方法经常是无效的。辐射治疗只对癌症早期和中期的局部癌症有效，对具有转移的晚期癌症无效。化疗是有效的，但有严重的负作用，如呕吐、白细胞(WBC)降低、脱发、体重降低和别的毒性作用。因为严重的毒性负作用，许多癌症患者不能成功的完成全部的化疗过程。一些癌症患者由于对化疗的弱耐受性而死于化疗。由于抗癌药物的低靶向特异性而导致抗癌药物的极大副作用。药物循环通过患者大多数正常的器官和预期的靶肿瘤。低靶向特异性是因为只有一部分药物正确地作用于目标，而造成负作用，也降低了化疗的有效性。化疗的有效性因为抗癌药物在靶肿瘤内的短滞溜时间，而进一步降低。

[4]免疫疗法，包括使用癌症疫苗，如自体疫苗，对于肿瘤荷载少于10⁸个肿瘤细胞的癌症患者有效。免疫疗法经常作为辅助疗法与其它的疗法如手术、辐射疗法和化疗相结合以清除任何残留的肿瘤细胞。免疫疗法和使用癌症疫苗不能证明对于肿瘤荷载大于5X10⁹到10¹¹个肿瘤细胞有效，其在具有轻微转移症状的患者中是典型的。此外，自体瘤疫苗接种需复杂的程序，且要求对每一患者的肿瘤标本进行处理。

[5]肿瘤内醇注射疗法在治疗肝脏肿瘤和别的肿瘤中已应用于临床实践。单独的醇注射疗法不能杀死全部的肿瘤细胞，因为注射的醇体积有限，醇导致正常的活组织凝固坏死；肿瘤内血液使醇稀释至无效浓度，特别在治疗大的肿瘤；以及别的因素。醇不能注射到关键结构附近，如中枢神经系统。肿瘤内醇注射疗法与某种抗肿瘤因子共同施用，称为共注射(YU et al.(1994)J.Current Oncology，1：97-100)。在这些方法中，醇注射导致的组织凝固团块作为抗肿瘤因子的缓释点。

[6]目前，对于具有高肿瘤荷载的患者，还没有有效的治疗方法。因为早期肿瘤不易早期检出，许多诊断有癌症的患者是处于肿瘤荷载大于5X10⁹到10¹¹个肿瘤细胞的癌症晚期，或肿瘤已经转移到别的组织。对于这些患者，传统的癌症治疗如手术、辐射和化疗可能不再有效和/或合适。

[7]尽管癌症治疗有一些进展，即便这样，有效的治疗方法仍很少。由于赘生性肿瘤、肿瘤和癌症的严重性和广泛性，很需要有效的治疗这些疾病的方法。理想的癌症治疗应有能力根除身体内多个位点的全身性肿瘤，并特异性地区别肿瘤细胞和非肿瘤细胞。所以本发明满足了上述需要。例如，本发明的一个目的是提供治疗这些疾病并能产生免疫疫苗作用的方法。特别的，本发明的一个目的是提供根除身体内多个位点的全身性肿瘤，并且特异性区别肿瘤细胞和非肿瘤细胞的癌症治疗方法。

发明内容

[8]本发明提供了用于肿瘤内治疗和术后治疗的组合物，其中包括导致肿瘤组织凝聚的试剂和提高针对所致肿瘤组织团块的发炎性反应的增强试剂。在这些组合物中，优选的是那些包括用于肿瘤内注射治疗的三种成分(称为三合一或TIO)的组合物。这些组合物包括氧化剂或还原剂、半抗原和治疗剂；可选地，它们可以与别的凝固方法或处理方法联合。这些组合物用于治疗肿瘤，如，实体肿瘤。因此，本发明还提供了使用这些组合物进行治疗的方法。一方面，治疗剂可以是抗肿瘤剂。进一步地，抗肿瘤剂可以是化疗剂。

[9]尽管不打算将本发明限于任何特定的原理，但认为，使用氧化剂可达到氧化肿瘤细胞外基质和间质的作用，即肿瘤凝聚作用，其变性变形并使氧化剂所到部位的肿瘤不变性坏死及死亡，同时使抗癌药物和半抗原镶嵌在变性的肿瘤组织之间，这些抗癌药物将逐步由内向外的释放出，去杀死那些还活着的肿瘤细胞，这些半抗原亦将与死亡的肿瘤细胞或肿瘤细胞死亡释放出的蛋白质结合，形成具有较强免疫原性的抗原，以刺激机体产生具有针对肿瘤特异的抗体或免疫淋巴细胞，去杀死那些肿瘤凝聚和抗癌药物没有杀死的肿瘤细胞。

[10]在此所示，这些组合物，例如那些包括一种或多种氧化剂或还原剂、半抗原和抗肿瘤剂的组合物，在治疗多种赘生性肿瘤、肿瘤和癌症，特别是用传统的癌症治疗方法如手术、辐射治疗、化疗和免疫治疗不能有效治疗的实体肿瘤中有很大的适用性。

[11]本发明提供了治疗赘生性肿瘤、肿瘤和癌症的方法和组合物。在这些方法中包含使用含有一种或多种氧化剂或还原剂、半抗原和一种或多种治疗剂(或基本上由上述成分组成)的任何组合物，其能有效减轻、减少、改善或阻止赘生性肿瘤、肿瘤和癌症生长并能产生CD4或CD8等免疫反应；或者调整或保持在临床症状或诊断标示的减轻状态中，临床症状或诊断标示是与赘生性肿瘤、肿瘤和癌症相关，特别是用传统的癌症治疗方法如手术、辐射治疗、化疗和免疫治疗不能有效治疗的实体肿瘤相关。该组合物可以单独使用或与别的治疗赘生性肿瘤、肿瘤和癌症的方法相结合施用。一方面，治疗剂可以是抗肿瘤剂。进一步地，抗肿瘤剂可以是化疗剂。

[12]能治疗的赘生性肿瘤、肿瘤和癌症包括，但不局限于，肾上腺，肛门，听觉神经，胆管，膀胱，骨，脑，乳房，bruccal，中枢神经系统，子宫颈，结肠，耳，子宫内膜，食管，眼，眼睑，输卵管，胃肠道，头和颈，心脏，肾，喉，肝脏，肺，下颌骨，下颌髁，上颌骨，嘴，鼻咽，鼻，口腔，卵巢，胰腺，腮腺，阴茎，耳廓，垂体，前列腺，直肠，视网膜，唾液腺，皮肤，小肠，脊髓，胃，睾丸，甲状腺，扁桃体，尿道，子宫，阴道，前庭蜗神经，外阴赘生性肿瘤，各种癌的淋巴和淋巴结转移病灶和恶性淋巴瘤。

[13]优选的是，治疗的赘生性肿瘤、肿瘤和癌症是实体肿瘤。对于实体肿瘤，包括大于10⁸个细胞的实体肿瘤，如从大约5X10⁹到10¹¹个细胞的实体肿瘤，该组合物特别有效。

[14]提供的所述组合物可以提高大多数癌症患者的癌症治疗的治疗效果，包括可见肿瘤团块但不适合作为手术治疗的候选者的早期癌症患者和已失去手术机会的肿瘤体积较大或转移的晚期癌症患者。

[15]所以，本发明提供了组合物，优选的是以药物组合物的形式，其中包括一种或多种氧化剂或还原剂、半抗原和治疗剂。该组合物一般是由包括氧化剂或还原剂、半抗原和治疗剂的活性成分配制成药物组合物以进行给药。组合物中的所述活性成分可以分别施用，例如接连地施用，或者能被间断地施用，或者三种分开的组合物混和为一种单一的组合物一起施用。当接连地或间断地给药时，每一给药的间隔一般小于一天，优选地，小于一小时，但可以长一些。给药的精确顺序和时间选择可以按经验决定。一方面，治疗剂可以是抗肿瘤剂。进一步地，抗肿瘤剂可以是化疗剂。

[16]每一组合物的剂量可以由经验决定，但一般是正常用于治疗赘生性肿瘤、肿瘤和癌症的剂量，数量足以进一步强化别的赘生性肿瘤的治疗，或当单独使用时足以减少或改善或以某种方式减轻赘生性肿瘤的症状。该组合物可以包装为试剂盒。

[17]该组合物可以直接施用入肿瘤中。在施用之后，它们使肿瘤凝固，并形成本发明中所称的肿瘤内自身药物释放生物物质库。这些生物物质库也被称为IATCWDD(Introtumroal autologous therapeutic coagulum with drug depot)。

[18]免疫佐剂也可加入组合物中。这些佐剂包括，但不局限于，小棒状杆菌，流产布鲁氏菌，葡萄球菌，链球菌，肠道杆菌，弧菌，螺旋杆菌，厌氧细菌，棒状杆菌，放线菌，螺旋体，支原体，阿米巴原虫，这些细菌和阿米巴可以是基因工程改造的工程菌。一方面，佐剂可以是包含选自abl，erbA，erbB，ets，fes(fps)，fgr，fms，fos，hst，int1，int2，jun，hit，B-lym，mas，met，mil(raf)，mos，myb，myc，N-myc，neu(ErbB2)，ral(mil)，Ha-ras，Ki-ras，N-ras，rel，ros，sis，src，ski，trk和yes的癌基因的病毒质粒，或带有这些基因病毒载体的细菌。

[19]卡介苗(BCG)、干扰素、或用低剂量的环磷酰胺(Cyclophosphamide)预处理后的集落刺激因子GM-CSF。

[20]当组合物TIO被施用以便形成IATCWDD时，治疗通过大剂量的氧化(或还原)肿瘤基质和肿瘤组织直接杀死许多肿瘤细胞，导致肿瘤的皱缩。这使肿瘤荷载值降低而可以应用免疫治疗和肿瘤疫苗治疗。同时也形成了发炎区吸引淋巴细胞和别的发炎反应介体到达靶向肿瘤位点。被吸引的淋巴细胞包括肿瘤抗原递呈细胞(APC)、巨噬细胞、树突细胞(DC)和活化B细胞。这些淋巴细胞暴露于由肿瘤细胞裂解而产生的肿瘤抗原而引发肿瘤特异性免疫反应。

[21]当TIO形成伴随发炎和肿瘤细胞裂解的IATCWDD时，在形成的位点中，裂解的肿瘤细胞被半抗原修饰，产生修饰的具有更复杂的免疫原的MHC-相关肽，然后被释放，作为自身肿瘤疫苗发挥作用。这样的肿瘤疫苗加强了患者自己的肿瘤免疫原性，刺激T淋巴细胞攻击没有被先前的凝固杀死的初始的肿瘤内和周边的活的肿瘤细胞，肿瘤内凝固治疗后的转移肿瘤和微病变肿瘤。自身肿瘤疫苗在阻止肿瘤转移和初始肿瘤恢复中发挥重要作用。

[22]另外，附加的治疗性病毒和核酸，如DNA、cDNA，也能包括在该组合物中。在施用时，这些可以被包裹在IAWBD中，能融合到或转染入一些保留在IAWBD中和周边的肿瘤细胞中，原位产生遗传修饰了的肿瘤疫苗和杂交疫苗。从肿瘤裂解得到的肿瘤DNA和RNA可以转染入树突细胞，其直接接受肿瘤抗原信号。化学和遗传修饰的肿瘤内肿瘤疫苗联合产生有效的抗原特异性和抗原非特异性的或共刺激信号抗肿瘤免疫反应。

[23]该组合物也可包括别的试剂，如抗血管生成试剂，放射致敏剂和别的癌症治疗剂，如同位素I¹²⁵。例如，在施用另外加入别的这样的试剂的TIO组合物时，得到的凝块(IATCWDD)将缓慢释放抗癌症药物和同位素，杀死不被先前的凝固杀死的初始肿瘤位点周围的肿瘤细胞。这样就实现了肿瘤内的放疗与化疗的一体化，有机地融为一体。当需要时，IATCWDD也可缓慢在肿瘤周围释放放射致敏剂以增加放射治疗的有效性。IATCWDD也可缓慢释放抗血管生成试剂以抑制新肿瘤生长所需的微血管的形成。

[24]在该组合物和方法中使用的抗肿瘤(抗癌症)试剂包括，但不局限于，抗血管生成剂，烷化剂，抗代谢物，天然产物，铂配位复合物，蒽二酮，取代尿素，甲基肼衍生物，肾上腺皮质遏抑剂，激素和拮抗剂，癌基因抑制剂如抗癌基因抗体或抗癌基因反义寡聚核苷酸，抗癌多聚糖，或药草提取物如中草药提取物。

[25]抗血管生成试剂包括，但不局限于，基底膜降解抑制剂，细胞迁移抑制剂，内皮细胞增殖抑制剂，三维组织和构建效能抑制剂，血管抑制基因，血管抑制化学因子基因，AGM-1470(TNP-470)，血管抑制类固醇，血管抑素，抗avβ3的抗体，抗碱性成纤维细胞生长因子抗体，IL-1的抗体，TNF-α的抗体，VEGF的抗体，金诺芬(auranofin)，咪唑硫嘌呤，BB-94，BB-2156，碱式可溶FGF受体，羧基胺基三唑类(CAI)，软骨衍生抑制剂(CDI)，几丁质，氯喹，顺铂，CM101，可的松/肝素，可的松/hyaluroflan，11-脱氧皮甾醇/肝素，CT-2584，环磷酰胺，环孢菌素A，地塞米松，二氯酚酸/透明质酸糖胺多糖，嗜酸性的主要碱性蛋白，纤连蛋白肽，明胶酶抑制剂，神经胶质瘤衍生的血管生成抑制因子(GD-AIF)，GM1474，氯化金，硫羟苹果酸金，肝素酶，透明质酸糖胺多糖(高分子量和低分子量种类)，氢化可的松/β环状右旋糖苷，布洛芬，吲哚美辛，α-干扰素，γ-干扰素诱导蛋白质10，γ-干扰素，IL-1，IL-2，IL-4，IL-12，层粘连蛋白，左旋咪唑，三羧氨基喹啉，LM609，基质金属蛋白酶抑制剂，马马司他(marimastat(BB-2516))，甲羟孕酮，6-甲基巯基嘌呤核糖核苷，metastat(Col-3)，氨甲喋呤，二甲胺四环素，一氧化氮，奥曲肽(生长激素释放抑制激素类似物)，杉醇，D-青霉酸衍胺，多硫戊聚糖，胎盘proliferin相关蛋白，胎盘核糖核酸酶抑制剂，纤溶酶原激活因子抑制剂(PAI)，血小板因子-4(PF4)，氢化泼尼松，催乳素(16Kda片断)，proliferin相关蛋白，前列腺素合酶抑制剂，鱼精蛋白，类维生素A，罗喹美克(LS-2616，三羟氨基喹啉)，生长激素释放抑制激素，基质溶素抑制剂，物质p，苏拉明，SU101，tecogalan sodium(DS-4152)，四氢皮质醇-sthrombospondins(TSPs)，金属蛋白质酶组织抑制剂(TIMP1，2，3)，血管内皮生长因子抑制剂，维生素A，vitaxin和玻璃体液。

[26]在一个实施方案中，该组合物包含单一的组合物，其含有一种或多种氧化剂和/或还原剂、半抗原和治疗剂，由之组成的配方可以用于注射形式的药物传输，或者三种组合物，一个含有一种或多种氧化剂或还原剂，另一个含有半抗原，还有一种含有治疗剂，每一种都与药学上可接受的载剂或赋形剂混合组成可以注射的形式。也可以由一种自动混合注射器直接注入肿瘤，或注入有癌性腹水的腹腔，或注入有癌性胸水的胸腔。同时也提供了特定的医疗程序、药学组合物和试剂盒。一方面，治疗剂可以是抗肿瘤剂。进一步地，抗肿瘤剂可以是化疗剂。

[27]在一个特定的实施方案中，提供了组合物，其含有：a)氧化剂或还原剂；b)抗肿瘤(抗癌)剂，如Arc-C；和c)半抗原。

[28]在另一个特定的实施方案中，提供组合物，该组合物包括：a)半抗原；和b)化疗剂。

[29]在另一个特定的实施方案中，提供组合物，该组合物包括：a)半抗原；和b)氧化剂或还原剂。

[30]在另一个特定的实施方案中，提供组合物，该组合物包括：a)化疗剂；和b)氧化剂或还原剂。

[31]同时也提供一种治疗哺乳动物优选为人的肿瘤尤其是实体肿瘤的一种方法，包括原位施用有效量的氧化剂或还原剂、半抗原和肿瘤治疗剂，其引起肿瘤赘生物的凝固，由此产生针对肿瘤的自身免疫应答，治疗肿瘤赘生物。针对肿瘤的自身免疫应答可以是体液的和/或细胞免疫应答。

[32]在治疗中应用的半抗原包括，但不限于，三硝基苯酚(TNP)，二硝基苯酚(DNP)，N-碘乙酰基-N’-(5-磺酸基1-萘基)亚乙基二酰胺(AED)，二硝基氟苯(DNFB)和Ovabulin(OVA)，血清白蛋白(Albumin)。

[33]本方法和组合物所用的氧化剂包括，但不限于，过氧化氢(H₂O₂)，碳酸酰胺，维生素-C，高锰酸钾，臭氧，多元氧O₇，多元氧O₈，NaIO₄，过一硫酸氢钾(oxone)，D，L-S-甲基硫辛酸甲酯，叔丁基氢过氧化物，维生素K3，肼，iodogen，N-溴丁二酰亚胺，奥美拉唑和N-乙基马来酰亚胺。

[34]本方法和组合物中使用的还原剂包括，但不限于，苏木精，一种含氧量低的还原剂如一种硝基咪唑，和非硝基化合物SR 4233。

[35]优选地，该组合物也包括一种促进剂和该方法进一步包括施用一种促进剂，该促进剂促进了半抗原和一种肿瘤赘生物的肿瘤抗原的接合。促进剂包括，但不限于，螯合剂如甘氨酰酪氨酰基-(N-e-二乙三胺五乙酸)-赖氨酸(GYK-DTPA)或亚德利亚霉素己二酸-二酰肼(ADR-ADH)，或一个化学交联试剂如碳化二亚胺。

[36]同时优选地，该组合物也可以包括一种免疫应答增效剂，该方法还可以进一步包括在肿瘤上施用免疫应答增效剂。该免疫应答增效剂包括，但不限于，多糖，草药提取物如中草药提取物，卡介苗(BCG)，小棒状杆菌，葡萄球菌，链球菌，肠道杆菌，弧菌，螺旋杆菌，厌氧细菌，棒状杆菌，放线菌，螺旋体，支原体；一种酶如霍乱弧菌神经氨酸酶(VCN)，木瓜蛋白酶，β-半乳糖苷酶和伴刀豆球蛋白A，以及非致病性病毒如非致病性的新城疫病毒。也可以施用编码癌基因的核酸或编码的基因产物，或者包括于凝聚剂组合物中来提高免疫应答。其中的癌基因的实例包括，但不限于，abl，erbA，erbB，ets，fes(fps)，fgr，fms，fos，hst，int1，int2，jun，hit，B-lym，mas，met，mil(raf)，mos，myb，myc，N-myc，neu(ErbB2)，ral(mil)，Ha-ras，Ki-ras，N-ras，rel，ros，sis，src，ski，trk和yes。也包裹含有这些癌基因的病毒质粒和含这些质粒的细菌。这些免疫增强剂可以是这些细菌的抗原的组合物，也可以是这些细菌的活菌的组合物。

[37]该组合物还可以包括凝聚裂解剂，和该方法进一步包括对肿瘤赘生物施用这种试剂，既可以单独施用也可以作为组合物的一部分施用。凝聚裂解剂包括，但不限于，蛋白酶K，糖基-磷脂酰肌醇-B7和胰酶制剂。

[38]这些组合物中的如本文所述的活性成分以及可选的其它成分和/或其它方法例如化学治疗可以同时施用，或者连续施用如，它们在在同一天、同一周或其它周期下施用。

[39]目前的预期方法也可以与基因治疗结合，如，进一步在凝聚剂组合物中包括肿瘤抑制基因如p16，p21，p27，p53，RB，WT-1，DCC，NF-1和APC。优选地，肿瘤抑制基因在一个病毒载体中如腺病毒载体，猿病毒载体和条件复制人免疫缺陷病毒载体中。

[40]在一个优选的实施方案中，在治疗中应用特定的组合物，其中H₂O₂作为氧化剂，和TNP作为半抗原。

[41]在另一优选的实施方案中，使用的氧化剂或还原剂大约从0.01％(w/w)到大约35％(w/w)，例如，0.05％(w/w)、0.1％(w/w)、1％(w/w)、5％(w/w)、10％(w/w)、20％(w/w)、30％(w/w)，且使用的半抗原从大约1mg/ml到大约80mg/ml，例如5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、30mg/ml、40mg/ml、50mg/ml、60mg/ml、70mg/ml、80mg/ml。

[42]凝聚作用也可以通过用某些物理方法处理肿瘤赘生物来进行，包括低温疗法，激光凝聚(ILC)，经皮肤的微波凝聚治疗，射频诱导凝聚经皮肤坏死，反式瞳孔热治疗和辐射治疗。

[43]在一个优选的实施方案中，半抗原与凝聚剂通过注射施用于肿瘤赘生物。

[44]在一个优选的实施方案中，半抗原与凝聚剂通过与外科手术过程组合施用于肿瘤赘生物。

[45]进一步提供了一种在哺乳动物中优选人类中，治疗肿瘤尤其是实体瘤的方法，包括原位施用有效量的抗肿瘤(抗癌)剂，如Ara-C，和凝聚剂，其能引起肿瘤的凝聚，由此治疗肿瘤。优选地，凝聚剂包括一种氧化剂，其不能是醇或乙醇。同时优选的是，凝聚剂是包括氧化剂或还原剂的组合物。

[46]在另一个特定的实施方案中，提供了一种在哺乳动物中优选人类中治疗肿瘤，尤其是实体肿瘤的方法，该方法包括原位施用有效量的抗肿瘤(抗癌)剂，如Ara-C，和氧化剂或还原剂，其能引起肿瘤的凝聚凝固，由此治疗肿瘤。

[47]在其它特定的实施方案中，提供了一种在哺乳动物中优选是人的治疗肿瘤的方法尤其是实体肿瘤，该方法包括原位注射有效量的半抗原，和蛋白变性剂，由此产生对肿瘤的自身免疫反应，且治疗肿瘤。

[48]在其它特定的实施方案中，提供了一种在哺乳动物中优选是人的治疗肿瘤的方法尤其是实体肿瘤，该方法包括原位注射有效量的半抗原，和氧化剂或还原剂，由此产生对肿瘤的自身免疫反应，且治疗肿瘤。

[49]在其它特定的实施方案中，提供了一种在哺乳动物中优选是人的治疗肿瘤的方法尤其是实体肿瘤，该方法包括原位注射有效量的半抗原，和氧化剂或还原剂，或注入有癌性腹水的腹腔，或注入有癌性胸水的胸腔。由此产生对肿瘤的自身免疫反应，且治疗肿瘤。

[50]特定组合物和结合示例性地描述于以下的部分和随后的小部分中。

[51]本发明提供了下列实施方案：

1.一种组合物，其中包括：

a)凝聚剂；

b)半抗原；和

c)治疗剂。

2.如实施方案1的组合物，其中所述凝聚剂是氧化剂或还原剂。

3.如实施方案2的组合物，其中所述氧化剂或还原剂、所述半抗原和所述治疗剂配成单一的药物组合物或每个配成独立的药物组合物。

4.如实施方案3的组合物，其中所述氧化剂选自过氧化氢、碳酸酰胺、维生素-C、臭氧、多元氧O₇、多元氧O₈、NaIO₄、过一硫酸氢钾(Oxone)、高锰酸钾、D，L-S-甲基硫辛酸甲酯、奥美拉唑、N-乙基马来酰亚胺、以及它们的组合。

5.如实施方案2的组合物，其中所述还原剂选自苏木精、含氧量低的还原剂、和非硝基化合物替拉扎明(SR-4233)。

6.如实施方案5的组合物，其中所述含氧量低的还原剂是硝基咪唑。

7.如实施方案1至6任一项所述的组合物，其中所述半抗原选自三硝基苯酚(TNP)、二硝基苯酚(DNP)、N-碘乙酰基-N’-(5-磺酸基1-萘基)亚乙基二酰胺(AED)、二硝基氟苯(DNFB)和Ovabulin(OVA)、血清白蛋白(Albumin)、以及它们的组合。

8.如实施方案1至7任一项所述的组合物，其中所述治疗剂是抗肿瘤剂。

9.如实施方案8所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂是抗肿瘤化疗剂。

10.如实施方案8所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂是生物治疗剂。

11.如实施方案10所述的组合物，其中所述生物治疗剂是抗血管生成剂。

12.如实施方案11所述的组合物，其中所述抗血管生成剂选自基底膜降解抑制剂、细胞迁移抑制剂、内皮细胞增生抑制剂、三维结构和效能的建立的抑制剂、以及它们的组合。

13.如实施方案12所述的组合物，其中所述抗血管生成剂选自血管抑制基因、血管抑制趋化因子基因、AGM--1470(TNP-470)、血管抑制类固醇、血管抑素、抗avβ3抗体、抗碱性成纤维细胞生长因子抗体、抗IL-1抗体、抗TNF-α抗体、抗VEGF抗体、金诺芬、咪唑硫嘌呤、BB-94、BB-2516、碱性FGF-可溶性受体、羧基氨基三唑类(CAI)、软骨衍生抑制剂(CDI)、几丁质、氯喹、顺铂、CM101、可的松/肝素、可的松/hyaluroflan、cortexolone/肝素、CT-2584、环磷酰胺、环孢菌素A、地塞米松、二氯酚酸/透明质酸糖胺多糖、嗜酸性的主要碱性蛋白、纤连蛋白肽、明胶酶抑制剂、神经胶质瘤血管生成抑制因子(GD-AIF)、GM1474、氯化金、硫羟苹果酸金、肝素酶、透明质酸糖胺多糖(高分子量和低分子量种类)、氢化可的松、β环状右旋糖苷、布洛芬、吲哚美辛、α-干扰素、γ-干扰素诱导蛋白质10、γ-干扰素、IL-1、IL-2、IL-4、IL-12、层粘连蛋白、左旋咪唑、三羟氨基喹啉、LM609、基质金属蛋白酶抑制剂、marimastat(BB-2516)、甲羟孕酮、6-甲基巯基嘌呤核糖核苷、metastat(Col-3)、氨甲喋呤、二甲胺四环素、一氧化氮、奥曲肽(生长激素释放抑制激素类似物)、杉醇、D-青霉酸衍胺、多硫戊聚糖、胎盘proliferin相关蛋白、胎盘核糖核酸酶抑制剂、纤溶酶原激活因子抑制剂(PAI)、血小板因子-4(PF4)、氢化泼尼松、催乳素(16Kda片断)、proliferin相关蛋白、前列腺素合酶抑制剂、鱼精蛋白、类维生素A、罗喹美克(LS-2616、三羟氨基喹啉)、生长激素释放抑制激素、基质溶素抑制剂、物质p、苏拉明、SU101、tecogalan sodium(DS-4152)、四氢皮质醇-sthrombospondins(TSPs)、金属蛋白质酶组织抑制剂(TIMP1、2、3)、血管内皮生长因子抑制剂、维生素A、vitaxin和玻璃体液。

14.如实施方案9所述的组合物，其中所述抗肿瘤化疗剂选自烷化剂、抗代谢剂、天然产物、铂配位复合物、蒽二酮、取代脲、甲肼衍生物、皮质激素抑制物、某些激素和拮抗剂、抗癌症多糖和草药提取物。

15.如实施方案14所述的组合物，其中所述草药提取物是中药提取物。

16.如实施方案8所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂是癌基因抑制物或肿瘤抑制基因或蛋白质。

17.如实施方案16所述的组合物，其中所述癌基因抑制物是抗癌基因抗体或抗癌基因反义寡聚核苷酸。

18.如实施方案17所述的组合物，其中所述癌基因选自abl，erbA，erbB，ets，fes(fps)，fgr，fms，fos，hst，int1，int2，jun，hit，B-lym，mas，met，mil(raf)，mos，myb，myc，N-myc，neu(ErbB2)，ral(mil)，Ha-ras，Ki-ras，N-ras，rel，ros，sis，src，ski，trk和yes。

19.如实施方案16所述的组合物，其中所述肿瘤抑制基因选自p16，p21，p27，p53，RB，WT-1，DCC，NF-1和APC。

20.如实施方案1或2所述的组合物，进一步包含含有癌基因或肿瘤抑制基因序列的病毒载体。

21.如实施方案20所述的组合物，其中所述病毒载体选自腺病毒载体、猿病毒载体、条件复制人免疫缺陷病毒载体、反转录病毒载体、SV40载体、单纯孢疹病毒扩增子载体和痘病毒载体。

22.如实施方案18所述的组合物，其中所述癌基因包括带有所述癌基因的病毒质粒，或带有所述病毒质粒的细菌。

23.如实施方案1或2所述的组合物，进一步包含在所述半抗原和肿瘤抗原之间促进结合的促进剂。

24.如实施方案23所述的组合物，其中所述促进剂是螯合剂或化学交联剂。

25.如实施方案24所述的组合物，其中所述螯合剂是甘氨酰酪氨酰基-(N-e-二乙三胺五乙酸)-赖氨酸(GYK-DTPA)或亚德利亚霉素己二酸-二酰肼(ADR-ADH)。

26.如实施方案24所述的组合物，其中所述化学交联剂是碳化二亚胺。

27.如实施方案1或2所述的组合物，其中所述治疗剂进一步包含免疫增效剂或免疫趋化剂。

28.如实施方案27所述的组合物，其中所述免疫增效剂或免疫趋化剂选自卡介苗(BCG)、小棒状杆菌、流产布鲁氏菌、葡萄球菌、链球菌、肠道杆菌、弧菌、螺旋杆菌、厌氧细菌、棒状杆菌、放线菌、螺旋体、支原体、阿米巴原虫、和它们的基因工程菌；实施方案22所述的病毒质粒或所述细菌；葡聚糖、酶、左旋咪唑、泰洛伦、非致病性病毒、多糖和草药提取物；和它们的任意组合。

29.如实施方案28所述的组合物，其中所述免疫受体增效剂是所述细菌的活菌或活菌的组合物。

30.如实施方案29所述的组合物，其中所述活菌的组合物包含如实施方案22所述的病毒质粒或所述细菌。

31.如实施方案29至30所述的组合物，其中所述活菌是抗菌素可杀死的活菌。

32.如实施方案29至30所述的组合物，其中所述活菌是可致病的活菌或可引起人体免疫反应的活菌。

33.如实施方案29至32所述的组合物，其中所述活菌的量为从10⁷至10¹²个细菌。

34.如实施方案28所述的组合物，其中所述酶选自霍乱弧菌神经氨酸酶(VCN)、木瓜蛋白酶、β-半乳糖苷酶和伴刀豆球蛋白A。

35.如实施方案28所述的组合物，其中所述非致病性病毒是非烈性新成疫病毒。

36.如实施方案2所述的组合物，其中所述氧化剂是H₂O₂、碳酸酰胺、高锰酸钾、维生素-C或它们的组合，所述半抗原是TNP。

37.如实施方案36所述的组合物，其中所述氧化剂是H₂O₂，所述半抗原是DNP，且促进剂是碳化二亚胺。

38.如实施方案2所述的组合物，其中所述氧化剂或还原剂的量从大约0.01％(w/w)到大约35％(w/w)，且所述半抗原的量从大约1mg/ml到大约80mg/ml。

39.一种包含实施方案1-38任一项所述组合物的试剂盒。

40.一种制品，其包括：

a)包装材料；

b)实施方案1-38任一项所述的组合物；且

c)表明所述制品是用于治疗肿瘤的标签。

41.一种治疗哺乳动物肿瘤的方法，包括向所述哺乳动物肿瘤原位施用入治疗有效量的半抗原、抗肿瘤剂和凝聚剂。

42.如实施方案41所述的方法，其中所述抗肿瘤剂是化疗剂。

43.如实施方案41或42所述的方法，其中所述哺乳动物是人。

44.如实施方案41至43任一项所述的方法，其中所述半抗原选自三硝基苯酚(TNP)、二硝基苯酚(DNP)、N-碘乙酰基-N’-(5-磺酸基1-萘基)亚乙基二酰胺(AED)、二硝基氟苯(DNFB)和Ovabulin(OVA)、人血清白蛋白(Albumin)。

45.如实施方案44所述的方法，其中进一步包括对肿瘤施用促进剂。

46.如实施方案45所述的方法，其中所述促进剂是螯合剂或化学交联试剂。

47.如实施方案44所述的方法，其中所述螯合剂是甘氨酰酪氨酰基-(N-e-二乙三胺五乙酸)-赖氨酸(GYK-DTPA)或亚德利亚霉素己二酸-二酰肼(ADR-ADH)。

48.如实施方案46所述的方法，其中所述化学交联试剂是碳化二亚胺。

49.如实施方案47或48所述的方法，其中进一步包括对所述肿瘤施用免疫应答增效剂或免疫趋化剂。

50.如实施方案49所述的方法，其中所述免疫应答增效剂选自卡介苗(BCG)、小棒状杆菌、葡萄球菌、链球菌、肠道杆菌、弧菌、螺旋杆菌、厌氧细菌、棒状杆菌、放线菌、螺旋体、支原体、流产布氏菌提取物和阿米巴、和它们的基因工程菌；实施方案22所述的病毒质粒或所述细菌；；葡聚糖，酶，左旋咪唑，泰洛伦，酶，非致病性病毒，多糖和草药提取物；以及它们的任意组合。

51.如实施方案48所述的方法，其中所述免疫应答增效剂选自所述细菌的活菌或活菌的组合物。

52.如实施方案50所述的方法，其中所述酶选自霍乱弧菌神经氨酸酶(VCN)、木瓜蛋白酶、β-半乳糖苷酶和伴刀豆球蛋白A。

53.如实施方案50所述的方法，其中所述非致病性病毒是非致病性的新成疫病毒。

54.如实施方案41至43任一项所述的方法，进一步包括对所述肿瘤施用凝聚裂解试剂。

55.如实施方案54所述的方法，其中所述凝聚裂解试剂选自蛋白酶K、糖基-磷脂酰肌醇-B7和胰酶制剂。

56.如实施方案41至55任一项所述的方法，其中所述凝聚剂是包括氧化剂或还原剂的组合物。

57.如实施方案56所述的方法，其中所述氧化剂或还原剂、所述半抗原和所述抗肿瘤剂被配制成单一的药物组合物，或每个配成独立的药物组合物。

58.如实施方案57所述的方法，其中所述氧化剂或还原剂、所述半抗原和所述抗肿瘤剂被配制成单一的药物组合物，并行肿瘤内注射治疗。

59.如实施方案58所述的方法，其中所述行肿瘤内注射治疗是重复行肿瘤内注射治疗。

60.如实施方案57所述的方法，其中所述单一的药物组合物通过血管导管实施于肿瘤内。

61.如实施方案60所述的方法，其中所述单一的药物组合物在通过血管导管实施于肿瘤内之前与肿瘤栓塞剂混合。

62.如实施方案56-61任一项所述的方法，其中所述氧化剂或还原剂、所述半抗原和所述抗肿瘤剂被配制成单一的药物组合物，其中所述氧化剂或还原剂、所述半抗原和所述抗肿瘤剂的至少两种经过自动注射混合装置混合。

63.如权利61所述的肿瘤栓塞剂是碘油、碘油乳化剂或任何起栓塞作用的乳化剂。

64.如实施方案58或59所述的方法，其中在所述行肿瘤内注射治疗后一定时间，行手术切除肿瘤。

65.如实施方案64所述的方法，其中切除得到的肿瘤保存于-80℃下，用于免疫疫苗治疗。

66.如实施方案64所述的方法，其中切除得到的肿瘤被直接无菌操作研成浆，过滤，行指和/或趾蹼皮下注射。

67.如实施方案65所述的方法，其中保存于-80℃下的肿瘤行无菌操作研成浆，过滤，行指和/或趾蹼皮下注射。

68.如实施方案65所述的方法，其中保存于-80℃下的肿瘤被复苏，细胞培养，再用半抗原侵染，用H₂O₂或放射灭活，再行指(趾)蹼皮下注射。

69.如实施方案41-68任一项所述的方法，其中所述哺乳动物或人的血液或者其所有白细胞和淋巴细胞被用于治疗同类的癌症患者。

70.如实施方案69所述的方法，其中所述哺乳动物或人的脾脏、淋巴结或胸腺被活检取得，再进行体外培养或与瘤细胞进行杂交，生产单克隆抗体和杀伤性的淋巴细胞。

71.如实施方案56所述的方法，其中所述氧化剂选自双氧水(H₂O₂)、碳酸酰胺、维生素-C、高锰酸钾、臭氧、多元氧O₇、多元氧O₈、NaIO₄、Oxone、D，L-S-甲基硫辛酸甲酯、叔丁基氢过氧化物、维生素K3、肼、Iodogen、N-溴丁二酰亚胺、奥美拉唑和N-乙基马来酰亚胺。

72.如实施方案56所述的方法，其中所述还原剂选自苏木精、含氧量低的还原剂和非硝基化合物SR 4233。

73.如实施方案72所述的方法，其中所述含氧量低的还原剂是硝基咪唑。

74.如实施方案56所述的方法，其中所述抗肿瘤剂是抗血管生成剂。

75.如实施方案74所述的方法，其中所述抗血管生成剂选自基底膜降解的抑制物、细胞迁移抑制物、内皮细胞增生抑制物、三维结构和效能的建立的抑制物。

76.如实施方案74所述的方法，其中所述抗血管生成剂选自血管抑制基因、血管抑制趋化因子基因、AGM--1470(TNP-470)、血管抑制类固醇、血管抑素、抗avβ3抗体、抗碱性成纤维细胞生长因子抗体、抗IL-1抗体、抗TNF-α抗体、抗VEGF抗体、金诺芬、咪唑硫嘌呤、BB-94、BB-2516、碱性FGF-可溶性受体、羧基氨基三唑类(CAI)、软骨衍生抑制剂(CDI)、几丁质、氯喹、顺铂、CM101、可的松/肝素、可的松/hyaluroflan、cortexolone/肝素、CT-2584、环磷酰胺、环孢菌素A、地塞米松、二氯酚酸/透明质酸糖胺多糖、嗜酸性的主要碱性蛋白、纤连蛋白肽、明胶酶抑制剂、神经胶质瘤血管生成抑制因子(GD-AIF)、GM1474、氯化金、硫羟苹果酸金、肝素酶、透明质酸糖胺多糖(高分子量和低分子量种类)、氢化可的松、β环状右旋糖苷、布洛芬、吲哚美辛、α-干扰素、γ-干扰素诱导蛋白质10、γ-干扰素、IL-1、IL-2、IL-4、IL-12、层粘连蛋白、左旋咪唑、三羟氨基喹啉、LM609、基质金属蛋白酶抑制剂、marimastat(BB-2516)、甲羟孕酮、6-甲基巯基嘌呤核糖核苷、metastat(Col-3)、氨甲喋呤、二甲胺四环素、一氧化氮、奥曲肽(生长激素释放抑制激素类似物)、杉醇、D-青霉酸衍胺、多硫戊聚糖、胎盘proliferin相关蛋白、胎盘核糖核酸酶抑制剂、纤溶酶原激活因子抑制剂(PAI)、血小板因子-4(PF4)、氢化泼尼松、催乳素(16Kda片段)、proliferin相关蛋白、前列腺素合酶抑制剂、鱼精蛋白、类维生素A、罗喹美克(LS-2616、三羟氨基喹啉)、生长激素释放抑制激素、基质溶素抑制剂、物质p、苏拉明、SU101、tecogalan sodium(DS-4152)、四氢皮质醇-sthrombospondins(TSPs)、金属蛋白质酶组织抑制剂(TIMP1、2、3)、血管内皮生长因子抑制剂、维生素A、Vitaxin和玻璃体液。

77.如实施方案56所述的方法，其中所述抗肿瘤剂选自烷化剂、抗代谢剂、天然产物、铂配位复合物、蒽二酮、取代脲、甲肼衍生物、皮质激素抑制物、激素和拮抗剂。

78.如实施方案56所述的方法，其中所述抗肿瘤剂是癌基因抑制物或肿瘤抑制基因或蛋白质。

79.如实施方案78所述的方法，其中所述癌基因抑制物是抗癌基因抗体或抗癌基因反义寡聚核苷酸。

80.如实施方案78所述的方法，其中所述癌基因选自abl，erbA，erbB。Ets，fes(fps)，fgr，fms，fos，hst，int1，int2，jun，hit，B-lym，mas，met，mil(raf)，mos，myb，myc，N-myc，neu(ErbB2)，ral(mil)，Ha-ras，Ki-ras，N-ras，rel，ros，sis，src，ski，trk和yes。

81.如实施方案78所述的方法，其中所述肿瘤抑制基因选自p16，p21，p27，p53，RB，WT-1，DCC，NF-1和APC。

82.如实施方案53所述的方法，进一步对肿瘤施用含有癌基因或肿瘤抑制基因序列的病毒载体，或含所述病毒载体的工程细菌。

83.如实施方案82所述的方法，其中所述病毒载体选自腺病毒载体、猿病毒载体和条件复制人免疫缺陷病毒载体、逆转录病毒载体、SV40载体、单纯孢疹病毒扩增子载体和痘病毒载体，或含所述病毒载体的细菌工程菌。

84.如实施方案56所述的方法，其中所述氧化剂是H₂O₂，所述半抗原是TNP。

85.如实施方案56所述的方法，其中所述氧化剂或还原剂从大约0.01％(w/w)到大约35％(w/w)，所述半抗原从大约1mg/ml到80mg/ml。

86.如实施方案41所述的方法，其中任选地，所述凝聚剂被选自下列的凝聚治疗替代：低温疗法、激光凝聚(ILC)、经皮肤的微波凝聚治疗、射频诱导凝聚坏死、反式瞳孔热治疗、超声波治疗和辐射治疗，或者与所述凝聚治疗联合施用。

87.如实施方案41-86任一项所述的方法，其中所述肿瘤选自肾上腺、肛门、听觉神经、胆管、膀胱、骨、脑、乳房、中枢神经系统、子宫颈、结肠、耳、子宫粘膜、食管、眼、眼睑、输卵管、肠胃束、头和颈、心脏、肾、喉、肝脏、肺、上颚、下颌髁、上颌骨、嘴、鼻咽、鼻、口腔、卵巢、胰腺、腮腺、阴茎、耳廓、垂体、前列腺、直肠、视网膜、唾液腺、皮肤、小肠、脊髓、胃、睾丸、甲状腺、扁桃体、尿道、子宫、阴道、前庭蜗神经、和外阴、各种癌的淋巴及淋巴结转移病灶和恶性淋巴瘤。

88.如实施方案41-86任一项所述的方法，其中所述肿瘤是实体肿瘤。

89.如实施方案88所述的方法，其中所述实体肿瘤的大小大于10⁸个细胞。

90.如实施方案89所述的方法，其中所述实体肿瘤的大小从大约5X10⁹到大约10¹¹个细胞。

91.如实施方案41所述的方法，其中所述半抗原与所述凝聚剂是通过肿瘤内注射施于所述肿瘤的。

92.如实施方案41所述的方法，其中所述半抗原与所述凝聚剂是通过与外科手术程序结合的方式施于所述肿瘤的。

93.如实施方案41所述的方法，其中所述半抗原与所述凝聚剂是通过血管导管的方式施于所述肿瘤的。

94.如实施方案41所述的方法，其中所述半抗原与所述凝聚剂在和肿瘤栓塞剂混合后通过血管导管的方式施于所述肿瘤。

95.如实施方案41所述的方法，其中所述半抗原与所述凝聚剂在通过混合注射装置混合后，再行肿瘤内或血管导管的方式施于所述肿瘤。

96.如实施方案41所述的方法，进一步包括原位施用选自自杀基因序列、细胞裂解基因序列、细胞因子基因序列、辐射致敏剂、含细胞因子的贮存库、报告子和报告基因序列的分子即含有这些基因的病毒质粒，即含有这些病毒质粒的细菌。

97.如实施方案1所述的组合物，进一步包括选自自杀基因序列、细胞裂解基因序列、细胞因子基因序列、辐射致敏剂、含细胞因子的贮存库、报告子和报告基因序列的分子。

98.一种组合物，其包括：

a)半抗原；和

b)抗肿瘤剂

99.实施方案1-38和97任一项所述的组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。

附图说明

[52]图1和2表示在鼠中的治疗研究结果。图1是各组小鼠弹力纤维、胶原纤维、网状纤维分析结果比较图；图2是各组肿瘤组织CD4和CD8含量比较图。

[53]图3是混合注射的示意图。

[54]图4和5是血管插管肝脏直接药液输注示意图。

[55]图6是本发明治疗机理的示意图。

[56]图7为彩色照片，包括图7-1、7-2和7-3，显示了鼠中的放射性同位素的保留研究结果。图7-1中第一排(上排)是常规的注射方法所得结果，第二排是本发明药物注射方法所得结果；显示刚注射完同位素显影大小一样。图7-2中第一排(上排)是常规的注射方法所得结果，第二排是本发明药物注射方法所得结果；显示：注射完同位素显影大小不一样，常规方法的同位素已经开始流散，本发明的同位素停留不动。图7-3中第一排(上排)是常规的注射方法所得结果，第二排是本发明药物注射方法所得结果；显示：注射完同位素显影大小不一样，常规方法的同位素已经流散无影，本发明的同位素停留不动，只是半衰期的原因变淡。这些照片显示了，随着时间推移，采用常规注射方法和本发明注射方法中的放射性同位素在肿瘤中的保留情况不同，本发明注射方法具有较高的肿瘤内保留率。

具体实施方式

[57]本发明提供的是一种用于肿瘤内免疫治疗癌症，包括肿瘤赘生物、肿瘤和癌症组织的组合物和方法，优选的是与肿瘤内聚焦化学疗法、基因疗法、放射疗法和外科手术相组合。在此公开的是在原位传送半抗原的同时，肿瘤赘生物、肿瘤或癌组织和细胞的凝聚，是治疗这些肿瘤赘生物、肿瘤或癌症的有效方法。凝聚可以通过化学方法来完成，如，用氧化剂或还原剂或者组合的氧化剂或还原剂和化疗剂来处理肿瘤组织或细胞。凝聚也可以通过物理方法来完成，如，用不同的物理治疗方法来处理肿瘤组织或细胞如低温治疗，激光凝聚(ILC)，经皮肤的微波凝聚治疗，射频诱导凝聚坏死，反式瞳孔热治疗和辐射治疗。

[58]尽管不希望受到在此描述的任何理论或机制的局限，目前了解的是以下凝聚效应和半抗原对于治疗肿瘤赘生物、肿瘤和癌症有作用。首先，通过原位的化学的或物理的方法介导肿瘤组织和细胞的凝聚杀死至少部分，大多数情况下，在靶肿瘤中大于50％的瘤细胞。总的来说，凝聚作用类似外科手术，其降低了肿瘤的重量，有利于后续的免疫治疗。此外，凝聚也可以导致细胞表面，胞外基质的结构变化，且细胞裂解释放肿瘤细胞的成分，即局部发炎。这一发炎效应，与加入的半抗原一起，进一步产生更多的复合的免疫原，其中半抗原与通过凝聚作用导致的肿瘤细胞裂解产生的肿瘤特异抗原结合。发炎区域吸引不同的淋巴细胞，如肿瘤抗原递呈细胞(APC)，巨噬细胞，树突细胞(DC)和活化的B细胞，淋巴细胞聚集于发炎区域且与肿瘤抗原作用，如，复合的肿瘤抗原，DNA，RNA和其它从细胞裂解释放的组分。这些相互作用诱导了肿瘤特异的免疫应答，其中包括体液的、细胞的和补体介导的应答。这一局部的肿瘤特异免疫应答通过在邻近存在的没有通过开始的凝聚作用杀死的活肿瘤赘生细胞得到更进一步增强。通过这种方式，后续的肿瘤特异免疫应答增强了凝聚作用的效果(原位接种疫苗)并且延伸至转移的肿瘤赘生物部位，作为“看不见的手术刀”来阻止肿瘤细胞的复发和转移。

[59]该组合物和方法也可以通过其对胞外基质(EM)的作用效果来达到治疗效果。在体内，肿瘤细胞被胞外基质包围，如胶原，纤维结合素，蛋白聚糖(蛋白/碳水化合物)，透明质酸和其它高分子量的物质。已经显示，肿瘤细胞与正常细胞的胞外基质是不同的。纤维结合素与胶原，两个主要的被研究的胞外基质成分，随着细胞的转化其质量和数量都会改变。研究表明转化细胞分泌的纤维结合素与相同的正常组织相比磷酸化增加许多。另外，肿瘤细胞合成的纤维结合素有慢的电泳迁移率。假如有的话，肿瘤细胞表面相关联的纤维结合素比较少。肿瘤细胞分泌的纤维结合素大大低于正常细胞分泌的纤维结合素。胶原是一种长的蛋白链和分子索，它把其它的物质结合在一起且作为细胞的信息载体。已经显示，包围细胞的胶原的性质与细胞的形状、分化和细胞分裂有关。据信癌症的胞外基质的修饰或破坏导致细胞的饥饿，切断癌症细胞紧急需要的葡萄糖的输送。

[60]当所述组合物，如发明内容中所描述的组合物或以下B部分描述的组合物，注射入肿瘤，该组合物将分散在肿瘤周围的胞外基质中。胞外基质会被氧化或还原变性或改变。例如，当过氧化氢(H₂O₂)作为氧化剂，胞外基质至少会部分被过氧化氢破坏产生羟基自由基(305nm光照)。胞外基质也至少会部分地通过被还原剂如苏木精反应损伤。这样的部分破坏会导致胞外基质形状损伤。另外，当抗癌药物与所述组合物结合使用时，抗癌症药物会在一定程度上被胶原和别的胞外基质物包围。随着胞外基质的改变，当周围发生微小的改变时，肿瘤的中心区域会坏死，这就允许初始治疗后缓慢释放抗癌症药物到肿瘤细胞的周围。进一步，当肿瘤坏死时，许多肿瘤蛋白会被半抗原，假如包括在所述组合物中的话，如TNP或DNP修饰，以增加肿瘤特异性抗原性。

[61]肿瘤特异性免疫反应可以通过原位施用或通过包含氧化剂、促进半抗原与肿瘤抗原结合的促进剂、免疫反应增效剂、凝固细胞裂解剂、癌基因产物或任何这些物质的组合物而增加。

[62]预期的治疗可以单独使用或与别的癌症治疗相结合，例如，但不局限于，手术，辐射治疗，化疗和传统的免疫治疗。例如，这种治疗可以通过在氧化凝固剂组合物中加入第二种抗肿瘤剂，如抗血管生成剂，与化疗一起使用。这种组合治疗是有利的，因为氧化凝固增加抗肿瘤剂保留在凝固的肿瘤团块中的时间，使肿瘤团块暴露于抗肿瘤剂下更长的时间。在这一点上，氧化凝聚是作为控制药物释放的工具。

[63]总之，氧化凝固减少至少靶肿瘤内的一些或大于50％的肿瘤细胞所杀死。抗肿瘤剂杀死没有被凝固初始杀死的仍活着的细胞。原位“接种”进一步减少活的肿瘤细胞，导致比分开的任何一种治疗更好的效果。

[64]在一实施例中，通过在氧化凝固剂组合物中加入辐射致敏剂，治疗可以与辐射治疗一起使用。在这方面，凝固作为控制药物释放的工具，释放辐射致敏剂到没有被凝固初始杀死的仍活着的肿瘤细胞，增加辐射治疗的效果。

[65]在另一实施例中，治疗可以在手术前使用。在这方面，氧化凝固在预治疗肿瘤前发挥重要作用，使手术易于排除肿瘤团块，减少肿瘤转移率。

[66]在另一实施例中，通过在凝固剂组合物中加入编码所要的野生型癌基因、肿瘤抑制基因、免疫细胞因子基因或凋亡基因的核酸，该治疗可以与基因治疗结合使用。这种组合治疗是有利的，因为氧化凝固有利于把这些野生型癌基因或肿瘤抑制基因导入活的肿瘤细胞，然后这些基因会被带到别的位点。在这方面，受到氧化凝固作用影响的活的肿瘤细胞会被作为基因治疗的载体发挥作用。

[67]在所有的治疗中，半抗原所起到的作用，是特异免疫反应的作用，如肿瘤免疫染色CD4和CD8呈阳性反应；淋巴结及脾脏肿大。

[68]在所有的治疗中，免疫佐剂，如BCG，可以与凝固剂组合物相结合增加对肿瘤细胞的免疫反应，如使CD4和CD8阳性率高或淋巴结及脾脏肿大更明显。其中活菌的接种到肿瘤中心起到的主动免疫的作用，因细菌的繁殖增生，产生内外毒素，杀死肿瘤细胞，同时引起人体的主动非特异免疫作用，肿瘤的死亡被半抗原所修饰成为全抗原，起到主动的特异性免疫作用。

[69]免疫佐剂可以重复地再注射，如每隔2到4周注射。低剂量cyclosphamide，如200到300mg/m²也可以预先施用，例如提前3天，每一原位免疫接种以加强对抗原的细胞介导免疫的发展。

[70]在所有的治疗中，有效的病例的血液内的白细胞和淋巴细胞等，可以用来治疗同类的癌症患者，因为这些病人在上述治疗中，肿瘤死亡和半抗原的结合，已经起到了免疫疫苗的作用，在病人身体中白细胞和淋巴细胞，是被抗原刺激后生长起来的，具有杀伤肿瘤的作用。

[71]在所有的治疗中，有效病例的血液包裹白细胞和淋巴细胞，和脾脏，淋巴结和胸腺，可以体外培养，或与瘤细胞进行杂交，生产出单克隆抗体和杀伤性的淋巴细胞，用于治疗同类的癌症患者。

A.定义

[72]除非另外定义，在此使用的所有技术和科学术语都有与本发明所属技术领域的技术人员一般理解的同样意义。所有在此参考的专利、申请、公开的申请和别的出版物和来自GenBank和其他数据库的序列是完整的引入此处作为参考。如果此节中阐明的定义与引入此处作为参考的申请、公开的申请和别的出版物和来自GenBank和其他数据库的序列中阐明的定义相反或不一致，此节中阐明的定义比在此引入作为参考的定义优先。

[73]正如在此使用，“一个”意味着“至少一个”或“一个或多个”。

[74]正如在此使用，氧化-还原反应指电子从供体传到受体分子的反应。

[75]正如在此使用，氧化试剂(或氧化剂)指在氧化-还原反应中接受电子的试剂。

[76]正如在此使用，还原试剂(或还原剂)指在氧化-还原反应中提供电子的试剂。

[77]正如在此使用，蛋白质变性剂指导致蛋白质变性的试剂，也就是，部分或全部伸展蛋白质多肽链特定天然的构象(二级，三级，四级结构)。

[78]正如在此使用，半抗原指除非与载体或分子相结合，才能诱导抗体形成的抗体特异性物质。一旦半抗原与载体/分子结合，用该偶合物产生的抗体可以识别半抗原和/或载体/部分。半抗原-载体/分子的偶合物也可以产生特异的细胞免疫反应。

[79]正如在此使用，抗肿瘤治疗指设计的任何减少或改良其症状的治疗肿瘤赘生物、肿瘤或癌症的治疗方案。预防肿瘤赘生物、肿瘤或癌症复发或减少其严重性的治疗方法也在考虑之列。

[80]正如在此使用，肿瘤赘生物指异常的新的生长，所以与肿瘤同义，可以是良性瘤或恶性瘤。不同于增生，肿瘤赘生物的增殖甚至在没有起始的刺激的情况下还在持续。

[81]正如在此使用，癌症指由任何形式的恶性肿瘤引起的一类疾病的总称。

[82]正如在此使用，恶性的，当用于肿瘤时，指具有癌扩散转移能力，同时失去生长控制和位置控制的初级瘤。

[83]正如在此使用，抗肿瘤剂(可以与抗赘生物肿瘤剂，抗瘤或抗癌剂互换使用)指任何用于抗肿瘤治疗的试剂。这些试剂包括，当单独使用或与别的化合物组合使用的任何试剂，它们可以减轻、减少、改善、阻止或调整或保持与赘生性肿瘤、肿瘤或癌症相关联的临床症状或诊断标记的缓解状态，它们可以用于此处所提供的方法、组合和组合物中。抗赘生物肿瘤剂包括，但不限于，抗血管生成剂，烷化剂，抗代谢物，一些天然产物，铂配位复合物，蒽二酮，取代脲，甲肼衍生物，肾上腺皮质激素抑制物，某些激素和拮抗剂，抗癌症多糖和某些草药提取物如中草药提取物。

[84]正如在此使用，抗肿瘤剂(或抗肿瘤或抗癌剂)或抗赘生物肿瘤治疗并不包括包含氧化剂或还原剂、蛋白变性剂、和半抗原的组合物，或采用它们的治疗，但包括本技术领域的技术人员所知的为了改善肿瘤赘生物、肿瘤或癌症的一些形式的症状的所有药剂和治疗形式。

[85]正如在此使用，“血管生成”指从母微血管中产生新的血管。血管生成是由血管生成刺激物和抑制物系统严密调控的。病理的血管生成是由血管生成刺激物和抑制物间的净平衡的移动导致，如，过量产生正常的或畸形的血管生成介体，或由于在此过程中相对缺乏抑制物。

[86]正如在此使用，“不需要的和/或不受控制的血管生成”指病理的血管生成，其中血管生成的刺激物影响超出了血管生成抑制物的影响。

[87]正如在此使用，“抗血管生成治疗或药剂”指包括当单独使用或与别的化合物组合使用的任何治疗方案和化合物，它们可以减轻、减少、改善、阻止或调节或保持与不理想和/或不受控制的血管生成相联系的临床症状或诊断标记的缓解状态。正如在这里所用，“内皮酶抑制剂”不认为是“抗血管生成处理或抗血管生成剂”。

[88]正如在此使用，“肿瘤抑制基因”(或抗癌基因，癌症易感基因)指编码正常地负调控细胞周期的产物的基因，它们在细胞进行快速分裂前必须变异否则是无活性。肿瘤抑制基因的实例包括，但不局限于，p16，p21，p53，RB(成视网膜细胞瘤)，WT-1(胚性癌肉瘤)，DCC(在结肠癌中发生缺失)，NF-1(神经纤维肉瘤)和APC(结肠息肉样腺瘤)。

[89]正如在此使用，“癌基因”指动物细胞(原癌基因)的正常基因的变异和/或过度表达形式，其占优势时能使细胞脱离正常的生长抑制，从而单独，或与其它变化相结合，可把细胞转变为肿瘤细胞。肿瘤抑制基因的实例包括，但不局限于，abl，erbB，ets，fes(fps)，fgr，fms，fos，hst，intl，int2，jun，hit，B-lym，mas，met，mil(raf)，mos，myb，myc，N-myc，neu(ErbB2)，ral(mil)，Ha-ras，Ki-ras，N-ras，rel，ros，sis，src，ski，trk和yes。

[90]正如在此使用，“反义寡核苷酸”指与mRNA或双链DNA的有意链互补的核苷酸碱基的合成序列。有意和反义寡聚核苷酸混合物在合适条件下可以导致两种分子的配对或杂交。当这些寡聚核苷酸与mRNA配对(杂交)，发生阻碍蛋白合成(翻译)。当这些寡聚核苷酸与双链DNA配对，发生阻碍RNA合成(转录)。所致翻译和/或转录的抑制导致有意链编码的蛋白的合成受阻。

[91]正如在此使用，抗体包括抗体片段，如Fab片段，其由轻链和重链的可变区组成。

[92]正如在此使用，人源化抗体指通过修饰以便包括“人”氨基酸序列的抗体，以至施用于人而不会引起免疫应答。制备这些抗体的方法是已知的。例如，表达单克隆抗体的杂交瘤已经被重组DNA技术改变从而来表达其中的不变区的氨基酸组成是以人抗体为基础的抗体。已经设计了计算机程序来确定这些区域。

[93]正如在此使用，“促进剂，它们促进半抗原与一个肿瘤抗原的结合”指一种交联半抗原与肿瘤抗原的试剂，或任何促进交联反应的试剂。半抗原与肿瘤抗原的交联可以是共价键或非共价键，可以通过疏水、极性、离子静电或其它相互作用介导。

[94]正如在此使用，“免疫应答”指一个生物体在应答一个抗原时，其免疫系统的反应性的变化；在脊椎动物中，这可以包括抗体的产生，诱导细胞介导的免疫，补体激活或免疫耐受性的发展。

[95]正如在此使用，“免疫应答增效剂”指一种可以增强抗原引起一种免疫应答效应的物质。

[96]正如在此使用，“凝聚作用”指引起细胞、其中的成分和胞外基质转化为一种软的、半固体或固体块的过程。

[97]正如在此使用，“凝聚裂解剂”指一种可以松散化或溶解凝聚物的试剂。

[98]正如在此使用，“凝聚剂”指能引起细胞、其中的成分和胞外基质转化为一种软的、半固体或固体块的任何试剂。为了本发明的目的，凝聚剂也可以指起到凝聚作用的任何手段，包括但不限于，变性方法；氧化，包括生物还原；以及物理方法，以及这些方法的组合使用。物理方法可以是低温疗法、激光凝聚、辐射、经皮的微波凝聚、超声吸引、反式瞳孔热疗、电化学疗法等等。所有提及的这些方法可以单独使用，或者组合使用，也可以与引起凝聚作用的试剂组合使用，只要达到适当凝聚肿瘤即可。

[99]正如在此使用，“肿瘤的凝聚”指引起肿瘤细胞、其中的成分和胞外基质转化为一种软的、半固体或固体块的过程，这种转化导致凝聚的肿瘤细胞的死亡，并且增强凝聚的肿瘤细胞中施用入肿瘤的试剂的保持力。

[100]正如在此使用，细胞因子是一种因子，如淋巴因子或单核因子，它由细胞产生，影响相同或别的细胞。“细胞因子”是在免疫反应中在细胞之间传递信号的分子组中的一种。细胞因子是蛋白质或肽；一些是糖蛋白。

[101]正如在此使用，“白细胞介素(IL)”指主要由T细胞产生的一大组细胞因子，虽然一些由单核吞噬细胞产生，或由组织细胞产生。它们有多种功能，但大多数直接参与指导别的细胞分裂和分化。每一种白细胞介素作用于特定的，有限的表达此种细胞因子的正确受体的细胞。

[102]正如在此使用，白细胞介素-1(IL-1)指某种肿瘤抗原递呈细胞(APC)产生的白细胞介素，与IL-6一起，作为T细胞激活的共刺激信号。IL-1基因组包括IL-1α，IL-1β和IL-1受体拮抗物(IL-1Rα)(Dinarello，Eur，Cytokine Netw.，5(6)：517-522(1994))。每一种成员首先合成为前体蛋白；IL-1前体(ProIL-1α，ProIL-1β)的分子量是大约31000道尔顿。ProIL-1α和成熟的17000道尔顿的IL-1α都有生物活性，然而ProIL-1β需要切割成17000道尔顿的肽而有最佳的生物活性。IL-1R α前体有一前导序列，切割后成为成熟形式，象大多数蛋白一样分泌。IL-1α和IL-1β是强效的激动剂，IL-Ra是特定的受体拮抗剂。而且，IL-Ra显然是纯粹的受体拮抗剂而在体外或体内没有激动剂活性。虽然IL-1Rα是分泌蛋白，但这种分子有别的保留在细胞内的形式。它被叫做“胞内”(ic)IL-1Ra。IcIL-1Rα由改变的IL-1Rα基因的mRNA拼接插入物替代编码信号肽的外显子而产生。IL-1Rα形式在功能性上是不可区别的。

[103]因而，例如，提及的“IL-1”包括所有的由IL-1基因家族包括IL-1α，IL-1β，IL-1Rα，和icIL-1Ra编码的蛋白质，或别的来源或合成制备的同等分子。预计包含保守氨基酸被取代，但取代不改变其活性的IL-1。本技术领域的技术人员知道合适的保守取代氨基酸，并且这些取代一般不改变得到的分子的生物活性。本技术领域的技术人员认识到，一般地，在多肽的非必需区单个氨基酸取代并不一定改变生物活性(参见，如，Watson et al Molecular Biology of theGene，4^th edition，1987，the Bejacmin/Cummings Pub co，p224)，优选的这些取代与表1列出的一致，如下所示：

表1

原始残基	保守取代	原始残基	保守取代
				Ala(A)	Gly；Ser	Leu(L)	Ile；Val
Arg(R)	Lys	Lys(K)	Arg；Gln；Glu
				Asn	(N)	Met(M)	Leu；Tyr；Ile
Cys(C)	Ser	Phe(F)	Met；Leu；Tyr
				Gln(Q)	Asn	Ser(S)	Thr
Glu(E)	Asp	Thr(T)	Ser
				Gly(G)	Ala；Pro	Trp(W)	Tyr
His(H)	Asn；Gln	Tyr(Y)	Trp；Phe
				Ile(I)	Leu；Val	Val(V)	Ile；Leu

[104]也允许别的取代，可以经验决定或根据已知的保守取代确定。

[105]正如在此使用，在此出现的多种氨基酸序列中的氨基酸根据它们众所周知的三个字母或一个字母的缩写来表示。在多种DNA片段中出现的核苷酸用本技术领域中常规使用的标准单字母表示来表达。

[106]正如在此使用，术语“治疗剂”，“治疗法”，“辐射防护剂”，“化疗药剂”指传统的药物和药物治疗，包括疫苗，其为本技术领域的技术人员所知。“辐射治疗”剂在本技术领域也是已知的。

[107]正如在此使用，“疫苗”指用于积极的免疫学预防的任何组合物。疫苗可以在治疗上用作治疗疾病，或者主动地或在感染后阻止疾病的发展或减轻疾病的严重性。疫苗的实例包括，但不局限于，已被杀死的烈性菌株细菌或减毒(变种或变异)菌株的活细菌，或微生物，真菌植物，原生动物，后生动物衍生物或产物的制备物。“疫苗”也包含基于蛋白质/肽和核苷酸的疫苗。

[108]正如在此使用，“细胞毒性细胞”指杀死病毒性感染靶细胞的细胞，靶细胞表达MHC1型分子抗原肽。

[109]正如在此使用，“血清”指除去了纤维蛋白凝块和血细胞后得到的血液液体部分，区别于循环血中的血浆。

[110]正如在此使用，治疗特定疾病的化合物的有效量是足以改善或以某种方式减少与疾病相关的症状的量。此量可以作为单一剂量施用或根据情况决定，借此可以有效治疗。药物剂量可以治愈疾病，但一般的，治疗是为了缓解疾病症状。重复的施用可以得到理想的症状缓解效果。

[111]正如在此使用，这种偶合物的药物可接受盐，酯或别的衍生物包括任何盐，酯或衍生物，这些物质可以由本技术领域的技术人员使用已知的此种衍生方法容易地制备它们，这一过程产生施用到动物或人，不会产生实质毒性作用的化合物，这些化合物或者有药物活性或者是前体药物。

[112]正如在此使用，治疗意味着任何方式，其中一种情况、紊乱或疾病的症状发生好转或有利的改变。治疗也包括在此讨论的组合物的药物上的用途。

[113]正如在此使用，通过施用特定药物组合物发生特定紊乱的症状的改善指任何减轻，或者是永久的或者是暂时的，持续的或短暂的，都可以归为或与该组合物的施用有关。

[114]正如在此使用，充分纯化是指足够均一，通过常规的分析方法确定没有容易检出的杂质的状态，这些分析方法包括薄层色谱(TLC)，凝胶电泳和高效液相色谱(HPLC)，本技术领域的技术人员使用这些方法达到这种纯度，或者足够纯粹，以致进一步的纯化不能可检测地改变物质的物理或化学性质，例如酶或生物活性。化合物通过纯化得到充分化学纯的化合物的方法对于本技术领域的技术人员来说是熟知的。但是，一种充分化学纯的化合物可以是立体异构体或异构体的混合物。在这些例子中，进一步的纯化可能会增加化合物的特异活性。

[115]正如在此使用，前体药物是一种化合物，一旦进入体内，其可以代谢为或转化为具有生物活性，药学活性或治疗活性形式的化合物。为了制作一种前体药物，药学活性的化合物经过修饰以使活性化合物可以通过代谢过程再生。前体药物可以设计成改变了代谢稳定性或药物的运输特性，屏蔽了药物的副作用或毒性，改进了药物的味道或改变了药物的其它特点或性质。依靠在体内的药物动力学过程和药物代谢的知识，本技术领域的技术人员，一旦知道了药物活性形式的化合物，就可以设计该化合物的前体药物(参见，如Nogrady(1985)MedicinalChemistry A Biochemical Approach，Oxford University Press(牛津大学出版社)，NewYork，388-392页)。

[116]正如在此使用，生物活性指对于体内施用一种化合物、组合物或其它混合物，该化合物在体内的活性或它们引起的生理性反应。这样，生物学活性包括治疗效应和这些化合物、组合物和混合物的药理学活性。生物学活性可以通过设计用于检测或利用这些活性的体外系统来观察。这样，在此所述的用途中，荧光素酶的生物活性是其氧合酶活性，即，通过氧化一种底物而发光。

[117]正如在此使用，受体指对于一种特定的配体具有亲和性的分子。受体可以是天然产生的或合成的分子。受体在本技术领域也可以指抗配体。在此所用，受体和抗配体可以互换使用。受体可以以其未变化的状态或与其它种类分子形成聚集体使用。受体可以直接或经由一个特殊的结合物或连接物间接地附着，共价或非共价，或物理接触结合到结合成员上。受体的例子包括，但不限于；抗体，细胞膜受体表面受体和内在化的受体，单克隆抗体和与特定的抗原决定族作用[如病毒，细胞，或其它物质]的抗血清，药物，多聚核苷酸，核酸，肽，辅因子，凝集素，糖，多糖，细胞，细胞膜，和细胞器。

[118]受体和使用这些受体的应用的例子包括，但不限于：

a)酶：对于微生物的生存而必须的特定转运蛋白或酶，其可以作为抗生素[配体]选择的靶子；

b)抗体：研究确定与有关抗原的表位结合的抗体分子的配体结合位点；通过模仿抗原表位序列的确定可以导致以一个或多个这些序列为基础的免疫原的疫苗的发展，或导致对于如自身免疫疾病的治疗有用的相关诊断剂或治疗中有用化合物的发展

c)核酸：确定配体，如蛋白或RNA，结合位点；

d)催化性多肽；聚合物，优选为多肽，其可以加速包括转化一种或多种反应物为一种或多种产物的化学反应；这些多肽一般包括与至少一种反应物或反应中间物特异结合的位点和一个靠近结合位点的活性功能基，其中的功能基是可以化学修饰所结合的反应物[参见，如，U.S.专利5,215,899]；

e)激素受体：以高亲和力结合于受体的配体的确定对于发展激素替代疗法有用；如，确定结合于这样的受体的配体可以导致控制血压的药物的发展；且

f)阿片制剂受体：确定与在脑中的阿片制剂受体结合的配体对于发展低成瘾替换吗啡和相关药物有用。

[119]正如在此使用，抗体包括抗体片段，如Fab片段，其由一条轻链和一条重链的可变区组成。

[120]正如在此使用，人源化抗体指抗体经修饰包含“人”抗体氨基酸序列以便用于人而不会引起免疫反应。制备这些抗体的方法是已知。例如，表达单克隆抗体的杂交瘤被重组DNA技术改变以便表达其非可变区的氨基酸组成以人抗体为基础的抗体。已经设计了计算机程序来辨别这样的区域。

[121]正如在此使用，通过重组子生产是指通过使用重组DNA技术，是指使用已熟知的分子生物学方法来表达克隆的DNA编码的蛋白。

[122]正如在此使用，一种产品的实质相同是指足够相似，以便相关的性质足以保持不变化，以至于这种充分一致的产物可以代替该产品。

[123]正如在此所用，等效的，当提到核苷酸的两个序列时，意味着讨论的两个序列编码相同序列的氨基酸或等效的蛋白质。当在提到两种蛋白或肽时，使用“等效”意味着两种蛋白或肽实质上有相同的氨基酸序列，只有保守的氨基酸代替(参见，如，以上表1)，并不实质上改变蛋白或肽的活性或功能。当“等效”指性质时，性质并不需要达到同样的程度(如，两种肽可以表现出同样类型的酶活性，但具有不同的速度)，但活性实质上优选为相同的。当指出两个核苷酸序列“互补”时，意味着核苷酸的两个序列能杂交，优选的少于25％，更优选的少于15％，甚至更优选的少于5％，最优选的是相对的核苷酸之间没有错配。优选的两个分子在高度严格的条件下杂交。

[124]正如在此使用：杂交的条件严紧度以错配百分率确定，情况如下：

1)高度严紧：0.1XSSPE，0.1％SDS，65℃

2)中度严紧：0.2XSSPE，0.1％SDS，50℃

3)低度严紧：1.0XSSPE，0.1％SDS，50℃

[125]应当能理解到，当使用可替换的缓冲液、盐和温度时，可以达到等效的严格条件。

[126]术语“实质上”相同或同源或相似在本上下文中发生变化，正如相关技术领域的技术人员所理解的那样，一般意味着至少70％，优选的至少80％，更优选的至少90％，最优选的至少95％的同一性。

[127]正如在此使用，组合或组合物指两个或多个项目的联合。其包括两种或多种组分包含在一个单一的混合物中的组合物；它也包括相关的两种独立的组合物。所述组合物可以是溶液，悬浮液，液体，粉末，糊剂，含水的，不含水的，或它们的任何组合物。

[128]正如在此使用，液体指任何可以流动的组合物。所以液体包含以半固体、糊剂、溶液、含水的混合物、凝胶、洗剂、乳膏和别的这样的组合物形式的组合物。

[129]正如在此使用，保护基团、氨基酸和其它化合物的缩写，除非特别指明，均与其普遍用法、公认缩写方式或国际理论与应用化学联合会-国际生物化学联合会(IUPAC-IUB)所制定的生物化学命名相一致(参见，1972)Biochem，11：1726)。

[130]为公开的清楚起见，但并不受其限制，对本发明的详细描述分为以下几个小部分。

B.组合物

[131]在一个特定的实施方案中，其中所提供的是一种应用于肿瘤内治疗的组合物，该组合物包括：A)一种氧化剂和/或一种还原剂；B)一种治疗剂例如化疗剂；和一种半抗原。

[132]该氧化或还原剂、化疗剂和半抗原可以配制为一种单一的药剂组合物，或每一种可分别配制为药剂组合物。

[133]任何一种具生物耐受性的氧化剂可用于该组合物中。在一个优选的实施方案中，所使用的氧化剂为过氧化氢(H₂O₂)、碳酸酰胺、维生素-C，高锰酸钾、臭氧、多元氧(O₇)、多元氧(O₈)、过氧碘化钠(NaIO₄)、过一硫酸氢钾(oxone)(Wozniak等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，8(19)：2641-6(1998))，D，L-S-甲基硫辛酸甲基酯(Pan和Jordan，Biochemistry，37(5)：1357-64(1998))，叔丁基氢过氧化物(Tarin等人，Mol Hum Reprod，2(12)：895-901，(1996)；维生素K3(Santini等人，Free Radic Biol Med，20(7)：915-24(1996))，二酰胺(Bosin和Kasper，J Biochem Toxicol，7(3)：139-45(1992))，iodogen(Saha等人，Int J Rad ApplInstrum，16(4)：431-3(1989))，N-溴丁二酰亚胺(Sinn等人，Anal Biochem，170(1)：186-92(1988)，奥美拉唑(Im等人，J Biol Chem 260(8)：4591-7(1985))，N-乙基马来酰亚胺(Marzulli等人，Boll.Soc.Ital.Biol.Sper.，61(1)：121-7(1985))。

[134]任何一种具生物耐受性的还原剂可用于该组合物中。在一个优选的实施方案中，所使用的还原剂为苏木精、一种如硝基咪唑的低氧还原剂或无氮化合物替拉扎明(SR-4233)(Zhang和Stevens，Melanoma Res.，8(6)：510-5(1998))。

[135]任何一种具生物耐受性的半抗原可用于该组合物中。在一个优选的实施方案中，所使用的半抗原为三硝基苯(TNP)(Dieli等人，Int.Immunol.，9(1)：1-8(1997))，二硝基苯(DNP)(Stjarnkvist  等人，J.Pharm.Sci.，80(5)：436-40(1991))，N-碘乙酰-N’-(5-磺基1-萘基)亚乙基二酰胺(AED)(Mizuochi等人，J.Immunol.，134(2)：673-6(1985))，二硝基氟苯(DNFB)(Claman，J.Immunol.，116(3)：704-9(1976))或Ovabulin(OVA)(Katz等人，J.Immunol.，107(5)：1319-28(1971))。

[136]在另一个特定的实施方案中，该组合物进一步包括一种抗肿瘤试剂，用于联合肿瘤内治疗和化疗。

[137]任何抗肿瘤试剂可用于这种组合物中。在一个优选的实施方案中，所使用的抗肿瘤试剂是一种抗血管生成剂。更加优选的，这种抗血管生成剂是一种基底膜降解抑制剂、一种细胞迁移抑制剂、一种内皮细胞增殖的抑制剂、一种组织和构建三维结构效能的抑制剂。该类抗血管生成剂的实例进一步表现在下面的表2中(Auerbach和Auerbach，Pharmacol.Ther.，63(3)：265-311(1994)))。

表2抗血管生成剂

[138]在另一个优选的实施方案中，所使用的抗血管生成剂是AGM-1470(TNP-470)，血管抑制类固醇、血管抑素、抗av β3的抗体、抗碱性成纤维细胞生长因子抗体、抗白介素-1抗体、抗肿瘤坏死因子α抗体、抗血管内皮细胞生长因子抗体、金诺芬、咪唑硫嘌呤、BB-94、BB-2516、碱性成纤维细胞生长因子的可溶性受体、羧基酰胺三唑类(CAI)、软骨衍生抑制剂(CDI)、几丁质、氯奎、顺铂、CM101、可的松/肝素、可的松/透明质酸、11-脱氧皮甾醇/肝素、CT-2584、环磷酰胺、环孢菌素A、地塞米松、二氯酚酸/透明质酸、嗜酸性的主要碱性蛋白、纤连蛋白肽、白明胶酶抑制剂、神经胶质瘤衍生的血管生成抑制因子(GD-AIF)、GM1474、氯化金、硫羟苹果酸金、肝素酶、透明质酸、糖胺多糖、(高和低分子量的种类)，氢化可的松/β环右旋糖苷、布洛芬、吲哚美辛、α干扰素、γ干扰素诱导的蛋白质10、γ干扰素、白介素1、白介素2、白介素4、白介素12、层粘连蛋白、左旋咪唑、三羧氨基喹啉、LM609、基质金属蛋白酶抑制剂、马马司他(BB2516)、甲羟孕酮、6-甲基硫基嘌呤、metastat(Col-3)、甲氨蝶呤、美满霉素、氧化氮、奥曲肽(生长激素抑制剂类似物)、紫杉醇、D-青霉酸衍胺、多聚硫酸戊糖、胎盘proliferin相关蛋白、胎盘核糖核酸酶抑制剂、纤溶酶原激活因子抑制物(PAI)、血小板因子4(PF4)、氢化泼尼松、催乳素(16Kda片段)、proliferin相关蛋白、前列腺素合成酶抑制剂、鱼精蛋白、类维生素A、罗喹美克(LS-2616，三羧氨基喹啉)、生长抑素、基质溶素抑制剂、P物质、苏拉明、SU101、tecogalansodium、四氢皮质醇-sthrombospondins(TSPs)、组织基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP1，2，3)、血管内皮细胞生长因子抑制剂、维生素A、Vitaxin、玻璃体液、沙利度胺、3-氨基沙利度胺、3-羟基沙利度胺及沙利度胺、3-氨基沙利度胺、3-羟基沙利度胺的代谢物或水解物(O’Reilly，Investigational New Drugs，15：5-13(1997)；J Nat’l Cancer Instit，88：786-788(1996)；美国专利5593990、5629327和5712291)。同样优选的，使用的抗血管生成剂是一种血管抑制基因，如血管阻素、内皮他丁、kringle-5、PEX、TIMP1、TIMP2、TIMP3、TIMP4、endo::angio、或endo::PEX、或是一种血管抑制趋化因子基因，如IP-10、Mig或SDF-1α。

[139]在另一个更加优选的实施方案中，所使用的抗肿瘤试剂是一种烷化剂、一种抗代谢物、一种天然产品、一种铂配位复合物、一种恩二酮、一种替代的尿素、一种甲基肼衍生物、一种肾上腺皮质激素抑制剂、一种激素和一种拮抗剂。该类抗肿瘤试剂的实例见下面的表3。

表3用于肿瘤疾病的化疗剂

[140]在另一个优选的实施方案中，使用的抗肿瘤药剂是胞嘧啶类似物如胞苷阿糖腺苷(araC)、道诺霉素、阿霉素、氨甲蝶呤(MTX)、氟化嘧啶如5-氟尿嘧啶(5-FU)、羟基脲、6-巯基嘌呤、植物生物碱如长春新碱(VCR)、VP-16和长春碱(VLB)；烷化剂如环磷酰胺肿瘤细胞裂解剂、美司钠、美法仑、1，3-双氯乙基亚硝基脲(BCNU)、顺铂、氮芥(HN2)、三胺(HN3)，非典型烷化剂如甲基苄肼、博来霉素、丝裂霉素C、放线菌素D(DACT)，或一种酶如L-天冬酰胺酶。

[141]在另一个优选的实施方案中，使用的抗肿瘤药剂是一种癌基因抑制剂。更优选的，该癌基因抑制剂是抗癌基因抗体或抗癌基因反义寡核苷酸。例如，下面表4中所列的寡核苷酸抗体和反义寡核苷酸可用于该组合物。

[142]在另一个实施方案中，使用的抗肿瘤药剂是一种细胞基质抑制剂。更加优选的，细胞基质抑制剂是一种抗细胞基质抗体或抗细胞基质反义寡核苷酸。例如，可使用抗以下细胞基质或细胞基质基因的抗体和反义寡核苷酸：小窝蛋白-1、核心蛋白多糖、钙粘蛋白、连环蛋白、整连蛋白。

[143]在一个特定的实施方案中，该组合物进一步包括一种用于联合肿瘤内治疗和基因治疗的肿瘤抑制基因。在一个优选的实施方案中，使用的肿瘤抑制基因是p16，p21，p27，p53，RB，WT-1，DCC，NF-1和APC。在另一个特定的实施方案中，该组合物进一步包括一种自杀基因如HSV1tk(1型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶)、tdk&tmk(胸腺嘧啶激酶&胸苷酸激酶)、coda&upp(胞嘧啶脱氨酶&尿嘧啶磷酸核糖转移酶)；一种溶细胞基因如粒酶A、粒酶B、穿孔素；或一种凋亡基因如Bak，Bax，Bcl-XL，Bcl-XS，Bik，Sarp-2，TRAIL。在另一个更加优选的实施方案中，该组合物进一步包括一种细胞因子基因，如白介素1β、白介素2、白介素4、白介素6、白介素8、白介素10、白介素12、白介素15、GM-CSF、干扰素α、干扰素β、干扰素γ、肿瘤坏死因子α、B7.1或B7.2以增强免疫应答。

[144]作为基因转运系统原件的基因可使用裸DNA、复合DNA、cDNA、质粒DNA、RNA或它们的其它组合物。在另一个实施方案中，肿瘤抑制基因包含于一个病毒载体中。任何适用于基因治疗的病毒载体均可应用于该组合物中。例如，可应用一种腺病毒载体(美国专利5869305)、一种猿病毒载体(美国专利5962274)、一种条件复制型人免疫缺陷病毒载体(美国专利5888767)，逆转录病毒，SV40，单纯疱疹病毒复制子载体和痘苗病毒载体。另外，可以用非病毒载体系统如脂质体转运基因，其中的脂质可保护DNA或其它生物材料在凝集过程中免于氧化。

[145]在另一个特定的实施方案中，该组合物进一步包括一种辐射致敏剂用于联合肿瘤内治疗和放疗。在一个优选的实施方案中，所使用的辐射致敏剂是SR2508(依他硝唑)(Chang等人，Int J Radiat Oncol Biol Phys，40(1)：65-70(1998))或Buthionine sulfoximine(BSO)(Vahrmeij等人，Cancer Chemother Pharmacol，44(2)：111-6(1999))。

[146]在另一个特定的实施方案中，该组合物进一步包括一种促进剂，可促进半抗原与肿瘤抗原之间的偶联以提高自身肿瘤特异性免疫应答。优选的，所使用的促进剂是一种螯合剂或是一种化学交联剂。更优选的，使用的螯合剂是甘氨酰酪氨酰基-(N-e-二乙三胺五乙酸)-赖氨酸(GYK-DTPA)或亚德利亚霉素己二酸-二酰肼(ADR-ADH)。同样更优选的，使用的化学交联剂是碳化二亚胺。

[147]在另一个特定的实施方案中，该组合物进一步包括一种免疫应答增效剂以增强自身肿瘤特异性免疫应答。优选的，所使用的增效剂是卡介苗(BCG)(Ratliff，Eur Urol，2：17-21(1992)、小棒状杆菌(Lillehoj等人，Avian Dis，37(3)：371-40(1993))、流产布氏杆菌提取物、葡聚糖、左旋咪唑、泰洛伦、一种酶、一种非毒性病毒、多糖，或草药提取物如中草药提取物。更优选的，所使用的酶是霍乱孤菌神经酰氨酶(VCN)(Seiler和Sedlacek，Recent Results Cancer Res，75：53-60(1980))；木瓜蛋白酶(Helting和Nau，Acta Pathol.Microbiol.Immunol.Scand，92(1)：59-63(1984)；和Hess，Eur J Immunol，6(3)：188-93(1976))，β-半乳糖苷酶或伴刀豆球蛋白A。同样更优选的，所使用的非毒性病毒是一种非毒性新城疫病毒(Meulemans等人，VetRec，143(11)：300-3(1998)；和Adams，Poult Sci，49(1)：229-33(1970))。进一步更优选的，所使用的多聚糖是来源于液体培养的蘑菇属blazei mill菌丝体的抗肿瘤多聚糖(起先为葡苷露聚糖，主链为β-1，2-连接-D-甘露吡喃残基，侧链为β-D-葡萄糖吡喃残基-3-O-β-D-葡萄糖吡喃残基)(Mizuno等人，Biochem Mol BiolInt，47(4)：707-14(1999))；从绒状火菇得到的抗肿瘤多聚糖制备物(多聚糖的主链主要含β-(1-＞3)-D-连接葡萄糖，其分子量大约为200KD)(Leung等人，Immunopharmacology，35(3)：255-63(1997))；西佐糖(SPG)(Tanji等人，YakugakuZasshi，110(11)：869-75(1990))；schizophyllan(Sakagami等人，Biochem Biophys ResCommun，155(2)：650-5(1998))；甘露聚糖(Gavrilenko等人，Vopr Onkol，29(4)：67-70(1983))；蘑菇多糖(Haba等人，Int J Cancer，18(1)：93-104(1976))；Su-多糖(Su-Ps)(Kumazawa等人，Gan To Kagaku Ryoho，14(12)：3329-35(1987))；mannozym(Zastrow，Padiatr Grenzgeb，24(3)：229-36(1985))。

[148]在另一个特定的实施方案中，该组合物也可含一种凝集溶解剂以增强自身肿瘤特异性免疫应答。优选的，所使用的凝集溶解剂是一种蛋白酶K，糖基-磷脂酰肌醇-B7(Brunschwig等人，J Immunother，22(5)：390-400(1999)；和McHugh等人，Cancer Res，59(10)：2433-7(1999))和胰酶制剂。

[149]在另一个特定的实施方案中，该组合物也可含一种细胞因子以增强自身肿瘤特异性免疫应答。优选的，给予的细胞因子是用于储存配方的脂质体包埋的白介素2(Krup等人，J Immunother，22(6)：525-38(1999))或储存配方为粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)(Leong等人，J Immunother，22(2)：166-74(1999))。

[150]在另一个特定的实施方案中，该组合物可进一步含一种癌基因以增强自身肿瘤特异性免疫应答。优选的，可使用以上表4中所列的癌基因。

[151]在另一个实施方案中，该组合物可以包括一种减毒的、可复制的病毒载体以增强自身肿瘤特异性免疫应答。优选的，使用的减毒的、可复制的病毒载体是1型单纯疱疹病毒(HSV-1)的突变体G207，它可在人肿瘤细胞中复制并引起细胞死亡，从而抑制肿瘤的生长，但对正常组织没有致病性(Toda等人，Hum.Gene.Ther.，10(3)：385-93(1999))。

[152]在另一个实施方案中，该组合物可以包括一种报告子来监测治疗进程。该报告子可以是化学制品或酶。优选的，这种报告酶是β-半乳糖苷酶或它的基因。也可用其它在本技术领域中已知的报告子。

¨53]在所有的实施方案中，有效的病例的血液包裹白细胞和淋巴细胞，可以用来治疗同类的癌症患者，因为这些病人在上述治疗中，肿瘤死亡和半抗原的结合，已经起到了免疫治疗的作用，在病人身体中白细胞和淋巴细胞，是被抗原刺激后生长起来的，具有杀伤肿瘤的作用。

[154]在所有的实施方案中，有效病例的血液包裹白细胞和淋巴细胞，和脾脏，淋巴结和胸腺，可以体外培养，或与瘤细胞进行杂交，生产出单克隆抗体和杀伤性的淋巴细胞，用于治疗同类的癌症患者。

[155]在一个典范的实施方案中，该组合物含过氧化氢作为氧化剂，TNP为半抗原。也可以含有乙醇作为蛋白变性剂。也可以含碳化二亚胺作为促进剂。

[156]氧化剂或还原剂以被包含在组合物中的方式给药，浓度大约0.01％(w/w)到35％(w/w)，蛋白质变性剂的浓度约为大约1％(w/w)到98％(w/w)，半抗原的浓度约为1mg/ml到80mg/ml。

[157]本发明也提供用于肿瘤内治疗的试剂盒，该试剂盒含这种组合物，其中包括的成分为一种或多种A)一种氧化剂和/或一种还原剂；B)一种治疗剂；和C)一种半抗原。试剂盒也包含用于将所述组合物给药的注射器以及给药说明书。一方面，治疗剂可以是抗肿瘤剂。进一步地，抗肿瘤剂可以是化疗剂。

[158]本发明也提供用于肿瘤内治疗的生产商品。该生产商品包括：A)包装材料；B)一种或多种氧化剂或一种还原剂，一种治疗剂和一种半抗原；以及C)一种标签，指明该商品用于治疗肿瘤。一方面，治疗剂可以是抗肿瘤剂。进一步地，抗肿瘤剂可以是化疗剂。

C.治疗方法

[159]本发明提供的是用于治疗哺乳动物体内肿瘤的方法，该方法通过在哺乳动物的肿瘤原位施用有效剂量的氧化剂或还原剂，半抗原和治疗剂，导致肿瘤的凝集，通过对肿瘤产生自身免疫应答从而治疗该肿瘤。在一个特定的实施方案中，所治疗的哺乳动物是人。一方面，治疗剂可以是抗肿瘤剂。进一步地，抗肿瘤剂可以是化疗剂。

[160]在另一个特定的实施方案中，所使用的半抗原为三硝基苯(TNP)、二硝基苯(DNP)、N-碘乙酰-N’-(5-磺基1-萘基)亚乙基二酰胺(AED)、二硝基氟苯(DNFB)、卵清蛋白Ovabulin(OVA)，或血清蛋白(Abumin)。

[161]在另外一个特定的实施方案中，该治疗方法可进一步包括原位给予一种促进剂，通过促进半抗原和肿瘤抗原之间的偶联来增强肿瘤特异性自身免疫应答。优选的，所使用的促进剂是一种螯合剂或是一种化学交联剂。更优选的，使用的螯合剂是甘氨酰酪氨酰基-(N-e-二乙三胺五乙酸)-赖氨酸(GYK-DTPA)或亚德利亚霉素己二酸-二酰肼(ADR-ADH)。同样更优选的，使用的化学交联剂是碳化二亚胺。

[162]在另外一个特定的实施方案中，该治疗方法可进一步包括原位给予一种免疫应答增效剂，以增强肿瘤特异性自身免疫应答。优选的，所使用的免疫应答增效剂是卡介苗(BCG)(Ratliff，Eur Urol，2：17-21(1992))，小棒状杆菌(Lillehoj)等，Avian Dis，37(3)：371-40(1993))，流产布氏杆菌提取物，也可以是一些细菌的抗原的组合物，也可以是一些细菌的活菌的组合物；葡聚糖，左旋咪唑，泰洛伦，一种酶，一种非毒性病毒，多糖，或草药提取物如中草药提取物。更优选的，所使用的酶是霍乱孤菌神经酰氨酶(VCN)、木瓜蛋白酶、β-半乳糖苷酶或伴刀豆球蛋白A。同样更优选的，所使用的非毒性病毒是一种非毒性新城疫病毒。

[163]在另外一个特定的实施方案中，治疗方法可进一步包括原位给予一种凝集溶解剂，以增强肿瘤特异性自身免疫应答。优选的，所使用的凝集溶解剂是一种蛋白酶K，糖基-磷脂酰肌醇-B7或胰酶制剂。

[164]可以使用任何可能凝集肿瘤组织或细胞的方法，如化学或物理方法。在一个特定的实施方案中，通过原位给予一种组合物来达到凝集肿瘤的目的。这种组合物包括：A)一种氧化剂和/或一种还原剂；B)一种半抗原和C)化疗剂。一方面，治疗剂可以是抗肿瘤剂。进一步地，抗肿瘤剂可以是化疗剂。

[165]该氧化或还原剂、半抗原和化疗剂可以配制为一种药剂组合物，或每一种可分别配制为药剂组合物。

[166]在一个优选的实施方案中，所使用的氧化剂为过氧化氢、碳酰酸铵，高锰酸钾，臭氧、多元氧(O₇)、多元氧(O₈)、过氧碘化钠(NaIO₄)、过一硫酸氢钾(oxone)(Wozniak等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，8(19)：2641-6(1998))，D，L-S甲基硫辛酸甲基酯(Pan和Jordan，Biochemistry，37(5)：1357-64(1998))，叔丁基氢过氧化物(Tarin等人，Mol Hum Reprod，2(12)：895-901，(1996)；维生素K3(Santini等人，Free Radic Biol Med，20(7)：915-24(1996))，二酰胺(Bosin和Kasper，J Biochem Toxicol，7(3)：139-45(1992))，iodogen(Saha等人，Int J Rad ApplInstrum，16(4)：431-3(1989))，N-溴丁二酰亚胺(Sinn等人，Anal Biochem，170(1)：186-92(1988)，奥美拉唑(Im等人，J Biol Chem 260(8)：4591-7(1985))，N-乙基马来酰亚胺(Marzulli等人，Boll Soc Ital Biol Sper，61(1)：121-7(1985))。

[167]在一个特定的实施方案中，所使用的还原剂为苏木精、一种如硝基咪唑的低氧还原剂、或无氮化合物(SR-4233)。

[168]在另一个特定的实施方案中，所使用的蛋白质变性剂为醇、盐酸胍、硫氰酸胍、柠檬酸钠、2-巯基乙醇、sarcosyl、苯酚、氯仿或尿素。例如在治疗中可使用甲基、乙基、n-丙基、n-丁基、n-戊基、n-己基、n-庚基、n-辛基、n-葵基、n-十二烷基、n-十四烷基、n-十六烷基、n-十八烷基、异丙基、异丁基、sec-丁基、tert-丁基、异戊基、旋性戊基、tert-戊基、环戊醇、环己醇、烯丙基、丁烯基、乙烯基甲醇、苯甲基、α-苯乙基、β-苯乙基、二苯基甲醇、三苯基甲醇、苯丙烯基、1，2-乙烷二醇、1，2-丙烷二醇、丙三醇、或季戊四醇。优选的，所使用的醇是乙醇。可通过化学的或物理学的处理造成酸性条件，如大约pH2-5来使蛋白质变性。

[169]本发明提供的肿瘤内治疗可单独或与其它癌症治疗法联合应用。在一个特定的实施方案中，该肿瘤内疗法与化疗联合应用，即进一步原位给予一种抗肿瘤剂。

[170]可应用任何抗肿瘤剂。在一个优选的实施方案中，所使用的抗肿瘤试剂是一种抗血管生成剂。更加优选的，这种抗血管生成剂是一种基底膜降解抑制剂、一种细胞迁移的抑制剂、内皮细胞增殖的抑制剂、组织和构建三维结构的抑制剂。更加优选的，所使用的抗血管生成剂是AGM-1470(TNP-470)，血管抑制类固醇、新血管抑素、抗avβ3的抗体、抗碱性成纤维细胞生长因子抗体、抗白介素-1抗体、抗肿瘤坏死因子α抗体、抗血管内皮细胞生长因子抗体、金诺芬、咪唑硫嘌呤、BB-94、BB-2516、碱性成纤维细胞生长因子的可溶性受体、羧基胺三唑类(CAI)、软骨抑制剂、几丁质、氯奎、顺式铂氨、CM101、可的松/肝素、可的松/透明质酸、11-脱氧皮甾醇/肝素、CT-2584、环磷酰胺、环孢菌素A、地塞米松、二氯酚酸/透明质酸糖胺多糖、嗜酸性的主要碱性蛋白、纤维连接肽、白明胶酶抑制剂、神经胶质瘤来源的抗生血抑制因子(GD-AIF)、GM1474、金卡方氯化物、硫羟苹果酸金、肝素酶、透明质酸糖胺多糖(高和低分子量的种类)，氢化可的松/β环右旋糖苷、布洛芬、吲哚美辛、α干扰素、γ干扰素诱导的蛋白质10、γ干扰素、白介素1、白介素2、白介素4、白介素12、层粘连蛋白、左旋咪唑、三羧氨基喹啉、LM609、基质蛋白酶抑制剂、马马司他(BB2516)、甲羟孕酮、6-甲基硫基嘌呤、metastat(Col-3)、甲氨蝶呤、美满霉素、氧化氮、奥曲肽(生长激素抑制剂类似物)、紫杉醇、D-青霉酸衍胺、多聚硫酸戊糖、胎盘proliferin相关蛋白、胎盘核糖核酸酶抑制剂、纤溶酶原激活因子抑制物(PAI)、血小板因子4(PF4)、氢化泼尼松、催乳素(16Kda片段)、proliferin相关蛋白、前列腺素合成酶抑制剂、鱼鱼精蛋白、类维生素A、罗喹美克(LS-2616)、生长抑素、基质降解酶抑制剂、P物质、苏拉明、SU101、tecogalan sodium(-4152)、四氢皮质醇-sthrombospondins(TSPs)、组织基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP1，2，3)、血管内皮细胞生长因子抑制剂、维生素A、Vitaxin、玻璃体液、沙利度胺、3-氨基沙利度胺、3-羟基沙利度胺及沙利度胺、3-氨基沙利度胺、3-羟基沙利度胺的代谢物或水解物。也可以应用在B节中描述的其它抗血管生长剂。同样优选的，所使用的抗血管生长剂是一种血管抑制基因，如血管抑素、内皮他丁、kringle-5、PEX、TIMP1、TIMP2、TIMP3、TIMP4、endo::angio、或endo::PEX、或是一种血管抑制趋化因子基因，如IP-10、Mig或SDF-1α。

[171]在另一个优选的实施方案中，所使用的抗肿瘤试剂是一种烷化剂、一种抗代谢物、一种天然产品、铂配位复合物、一种蒽二酮、一种取代的尿素、一种甲基肼衍生物、一种肾上腺皮质抑制素、一种激素、一种拮抗剂、一种抗癌多糖、或草药提取物如中草药提取物。也可能使用B节中所描述的另外的抗肿瘤剂。

[172]在另一个优选的实施方案中，使用的抗肿瘤药剂是一种癌基因抑制剂如抗癌基因抗体或抗癌基因反义寡核苷酸。例如，可使用抗以下癌基因的抗癌基因抗体或抗癌基因反义寡核苷酸：abl、erbA、erbB、ets、fes(fps)、fgr、fms、fos、hst、int1、int2、Jun、hit、B-lym、mas、met、mil(raf)、mos、myb、myc、N-myc、neu(ErbB2)、ral(mil)、Ha-ras、Ki-ras、rel、ros、sis、src、ski、trk和yes。

[173]在另一个特定的实施方案中，通过进一步给肿瘤原位注射一种肿瘤抑制基因序列，将肿瘤内治疗和基因治疗联合应用。优选的，使用的肿瘤抑制基因序列是p16，p21，p27，p53，RB，WT-1，DCC，NF-1和APC。在另一个特定的实施方案中，该方法进一步包括原位给予一种自杀基因如HSV1tk(单纯疱疹病毒1胸腺嘧啶激酶)、tdk&tmk(胸腺嘧啶激酶&胸苷酸激酶)、coda&upp(胞嘧啶脱氨酶&尿嘧啶磷酸核糖转移酶)；一种溶细胞基因如粒酶A、粒酶B、穿孔素；或一种凋亡基因如Bak，Bax，Bcl-XL，Bcl-XB，Bik，Sarp-2，TRAIL。在另一个更加特定的实施方案中，该方法进一步包括原位给予一种细胞因子基因，如白介素1β、白介素2、白介素4、白介素6、白介素8、白介素10、白介素12、白介素15、GM-CSF、干扰素α、干扰素β、干扰素γ、肿瘤坏死因子α、B7.1或B7.2以增强免疫应答。

[174]作为该组合物成分的基因转运系统中的基因可使用的形式为裸DNA、复合DNA、cDNA、质粒DNA。在另一个优选的实施方案中，肿瘤抑制基因序列由一个病毒载体携带。任何适用于基因治疗的病毒载体均可应用于该组合物中。例如，可应用一种腺病毒载体(美国专利5869305)、一种猿病毒载体(美国专利5962274)、一种条件复制型人免疫缺陷病毒载体和痘病毒载体(美国专利5888767)，逆转录病毒，SV40，表达相关基因的单纯疱疹病毒扩增子载体和痘病毒载体。另外，可以用非病毒载体系统如脂质体转运基因，其中的脂质可保护DNA或其它生物材料在凝集过程中免于氧化。

[175]在另一个特定的实施方案中，该方法进一步包括原位给予一种辐射致敏剂用于肿瘤内治疗和放疗的联合应用。在一个优选的实施方案中，所使用的辐射致敏剂是raf的反义脱氧寡核苷酸(Gokhale等人，Antisense Nucleic Acid Drug Dev，9(2)：191-201(1999))；SR2508(依他硝唑)(Chang等人，Im J Radiat Oncol BiolPhys，40(1)：65-70(1998))或Buthionine sulfoximine(BSO)(Vahrmeijer等人，CancerChemother Pharmacol，44(2)：111-6(1999))。

[176]在另一个特定的实施方案中，该方法进一步包括原位给予一种含细胞因子的储存体以增强自身肿瘤特异性免疫应答。优选的，所使用的含细胞因子的储存体是一种配方为脂质体包埋的IL-2(Krup等人，J Immunother，22(6)：525-38(1999))，或配方为粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Leong等人，JImmunother，22(2)：166-74(1999))。

[177]在另一个特定的实施方案中，该方法进一步包括原位给予一种癌基因序列以增强自身肿瘤特异性免疫应答。优选的，可使用上面表4中所显示的癌基因序列。

[178]在另一个特定的实施方案中，该方法进一步包括原位给予一种减毒的、可复制的病毒载体以增强自身肿瘤特异性免疫应答。优选的，使用的减毒的、可复制的病毒载体是1型单纯疱疹病毒(HSV-1)的突变体G207，它可在人肿瘤细胞中复制并引起细胞死亡，从而抑制肿瘤的生长，但对正常组织没有致病性(Toda等人，Hum Gene Ther，10(3)：385-93(1999))。也可以是含这些病毒质粒的细菌。

[179]在另一个实施方案中，该方法进一步包括原位给予一种报告子来监测治疗进程。该报告子可以是化学制品或酶。优选的，这种报告酶是β-半乳糖苷酶或它的基因。也可用其它在本技术领域中已知的报告子。

[180]在一个特定的实施方案中，在治疗中使用过氧化氢作为氧化剂，TNP作为半抗原。此外，乙醇可以作为蛋白质变性剂。

[181]在另一个特定的实施方案中，在治疗中使用的氧化剂或还原剂的浓度大约为0.01％(w/w)到35％(w/w)，半抗原的浓度约为1mg/ml到80mg/ml。此外，可选地，蛋白质变性剂的浓度约为大约1％(w/w)到99％(w/w)。

[182]可以通过物理法处理达到聚集肿瘤组织和细胞的目的，如冷冻疗法(Morris，HPB Surg，9(2)：118-20(1996)；Seifert等人，World J Surg，23(10)：1019-26(1999)；和August，Clin Dermatol，13(6)：589-92(1995))，激光聚集(ILC)(Jocham，Recent Results Cancer Res，126：135-42(1993)；Chang等人，Br J Plast Surg，52(3)：178-81(1999)；和Jiao和Habib，Br J Surg，86(9)：1224(1999))，皮下微波聚集疗法(Ohmoto等人，Am J Roentgenol，173(5)：1231-3(1999)；Seki等人，Am J Gastroenterol，94(2)：322-7(1999)；和Shibata等人，Gan To Kagaku Ryoho，26(12)：1760-3(1999))，射频诱导的凝集坏死(Francica和Marone，Eur J Ultrasound，9(2)：145-53(1999)；Goldberg等人，Radiology，209(3)：371-9(1998)；Strmen和Furdova，Cesk Slow Oftalmol，55(3)：176-80(1999))，超声治疗(Lu等人，Int J Hyperthermia，12(3)：375-99(1996)；和Saitoh等人，Urology，43(3)：342-8(1983)；和Strashinin等人，Vopr.Onkok.，17(1)：78-9(1971))。

[183]在一个特定的实施方案中，由半抗原和氧化凝集剂或治疗剂的联合作用所产生的自身免疫应答是一种体液和/或细胞免疫应答，如肿瘤免疫染色CD4，CD8成阳性，淋巴结脾脏肿大。

[184]任何肿瘤赘生物、肿瘤或癌都可由这里提供的方法治疗。例如，可治疗以下部位的肿瘤：肾上腺、肛门、耳神经、胆道、膀胱、骨、脑、胸、bruccal、中枢神经系统、子宫颈、结肠、耳、子宫内膜、食管、眼、眼睑、输卵管、胃肠道、头和颈、心脏、肾脏、喉、肝脏、肺、下颚、下颚骨齿突、上颌骨、口、鼻咽、鼻、口腔、卵巢、胰腺、腮腺、阴茎、耳廓、垂体、前列腺、直肠、视网膜、唾液腺、皮肤、小肠、脊髓、胃、睾丸、甲状腺、扁桃体、尿道、子宫、阴道、前庭耳蜗神经、或外阴，各种癌的淋巴和淋巴结转移病灶和恶性淋巴瘤。

[185]可用这种方法治疗的其它肿瘤和癌的例子包括：乳腺癌、肺癌、结肠直肠癌、胰腺肿瘤、胆囊肝管肿瘤、肝肿瘤、胃肿瘤、食管癌、恶性黑色素瘤、尿道和男性生殖器癌、皮肤癌、头颈和甲状腺癌、中枢神经系统和垂体癌、眼和眼附属器肿瘤、骨恶性肿瘤、软组织肉瘤、霍奇金疾病和非霍奇金疾病、多发性骨髓瘤、小儿实体瘤、妇产科癌。其它的例子还包括：

A.间质来源的肿瘤：

(1)结缔组织及其衍生物：肉瘤、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤。

(2)内皮及相关组织血管：血管肉瘤、淋巴血管肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、侵袭性脑膜瘤。

B.上皮来源的肿瘤：

(1)鳞状分层的：癌、鳞状细胞或表皮样癌

(2)皮肤或附件基细胞：基细胞癌

(3)皮肤附属器腺体：汗腺癌、皮脂腺癌

(4)上皮内层：腺癌、乳头癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓癌、未分化腺癌

(5)呼吸道：支气管腺癌

(6)神经外胚层：黑色素瘤

(7)肾上皮：肾细胞癌、肾上腺样瘤

(8)肝细胞：肝细胞瘤(肝细胞癌)

(9)胆道：胆管癌、滴虫血管肉瘤(chlangiocarcinoma)

(10)泌尿道上皮：乳头癌、移行性细胞癌、鳞状细胞癌

(11)胎盘上皮：绒毛膜癌

(12)睾丸上皮(胚细胞)：精原细胞癌、胚癌

[186]进一步，也可以治疗来源于一种类型以上瘤细胞或一个以上胚层的肿瘤。

[187]在一个优选的实施方案中，所治疗的肿瘤是一种实体瘤。更优选的，这种实体瘤的大小大于10⁸个细胞。最优选的，实体瘤的大小为5×10⁹到10¹¹个细胞。

[188]在另一个优选的实施方案中，半抗原和凝集试剂是通过注射到肿瘤内的方式给药的。为更好地分配注射到肿瘤内的液体，可以在高压下缓慢注射，如达到6AMP的注射器。该溶液也可以用一种规格为15-35的针进行注射。在注射的过程中，可通过转动针柄使针在肿瘤内转动。需根据肿瘤的性质、大小和位置来调整注射的剂量和频率，以及治疗的进程。为使溶液在肿瘤内达到更好的分布，在对肿瘤实际注射之前，可通过使用脊柱针进行预注射来准备注射渠道。注射也可以在计算机X射线断层造影(CT)、磁共振(MR)、超声或其它合适的影像技术指导下进行操作。

[189]在一个特定的实施方案中，可使用美国专利5651986中所描述的方法和仪器将半抗原和凝集试剂向实体瘤中进行有控制的定位给药。美国专利5651986中所描述的方法和仪器是用来向实体瘤定位给予化疗药剂的，其中的药剂不通过血脑屏障，其特点是在体内具低生物药效和/或短的半衰期。该仪器具备储存器，可在延长的时间内给药，并同时保持药剂的生物活性和该药剂的生物有效度。

[190]在另一个特定的实施方案中，半抗原和氧化凝集剂针对肿瘤的给药或治疗是与外科操作联合进行的。例如，半抗原和氧化凝集剂针对肿瘤的给药或治疗可在外科操作之前、同时或之后进行。

[191]在另一个特定的实施方案中，半抗原和氧化凝集剂和化疗剂针对肿瘤的给药或治疗后，一或二周之后，可以重复肿瘤内注射治疗。

[192]在另一个特定的实施方案中，半抗原和氧化凝集剂和化疗剂针对肿瘤的给药或治疗后，一或二周之后，可以用不同的半抗原和氧化凝集剂和不同的化疗剂针对肿瘤的给药或治疗。

[193]在另一个特定的实施方案中，半抗原和氧化凝集剂和化疗剂针对肿瘤的给药或治疗后，一或二周之后，可以手术切除肿瘤，可以切成小块，保存于-80℃的冰箱，肿瘤小块已被半抗原所浸染，以备用于体外免疫疫苗治疗。

[194]在另一个特定的实施方案中，保存于-80℃的冰箱的手术切除肿瘤，可以直接进行小块复苏，研浆，过滤，行指(趾)蹼皮下注射，起到疫苗的作用。

[195]在另一个特定的实施方案中，保存于-80℃的冰箱的手术切除肿瘤，可以直接进行小块复苏，进行细胞培养，新增殖的肿瘤细胞，可再进行半抗原浸染后，行灭活后，行指(趾)蹼皮下注射，起到疫苗的作用。

[196]在所有的实施方案中，有效的病例的血液包裹白细胞和淋巴细胞，可以用来治疗同类的癌症患者，因为这些病人在上述治疗中，肿瘤死亡和半抗原的结合，已经起到了免疫治疗的作用，在病人身体中白细胞和淋巴细胞，是被抗原刺激后生长起来的，具有杀伤肿瘤的作用。

[197]在所有的实施方案中，有效病例的血液包裹白细胞和淋巴细胞，和脾脏，淋巴结和胸腺，可以体外培养，或与瘤细胞进行杂交，生产出单克隆抗体和杀伤性的淋巴细胞，用于治疗同类的癌症患者。

[198]本发明所提供的组合物或凝聚剂或其它凝聚作用，可引起肿瘤的凝聚，并能缓释其镶嵌在内部药物，起到缓慢杀死周边肿瘤细胞的作用，由于半抗原修饰肿瘤的死亡细胞，同时增强肿瘤的抗原性，由此产生针对肿瘤的自身免疫应答且治疗肿瘤。

[199]在一个实施方案中，氧化剂或还原剂，半抗原和化疗剂可以配制成单一的药物组合物使用，配合后，行肿瘤内注射治疗，目的是通过氧化还原剂的作用，使化疗剂和半抗原停留在肿瘤内部，并能缓释其镶嵌在内部药物，起到缓慢杀死周边肿瘤细胞的作用，由于半抗原修饰肿瘤的死亡的肿瘤细胞，同时增强肿瘤的抗原性，并发挥其抗癌作用和免疫炎性反应的作用，如肿瘤免疫染色CD4和CD8呈阳性反应；淋巴结及脾脏肿大。

[200]一方面，行肿瘤内注射治疗是重复行肿瘤内注射治疗，使其发挥加强其抗癌作用和免疫炎性反应的作用，如肿瘤免疫染色CD4和CD8呈阳性反应；淋巴结及脾脏更明显肿大。

[201]在另一个实施方案中，氧化剂或还原剂，半抗原和化疗剂可以配制成单一的药物组合物使用，配合后，可通过血管导管的方式实施于肿瘤内治疗，同样可以起到杀死肿瘤的作用，其中氧化剂所产生的凝聚作用是抗癌药物停留于肿瘤内，不断杀死肿瘤细胞，由于半抗原修饰肿瘤的死亡的肿瘤细胞，同时增强肿瘤的抗原性，并发挥其抗癌作用和免疫炎性反应的作用，吸引APC和DC细胞来接受抗原信号，进而引起炎性反应如肿瘤免疫染色CD4和CD8呈阳性反应；淋巴结及脾脏肿大，起到杀伤肿瘤残余灶，治疗微小肿瘤转移，或预防肿瘤微小转移。

[202]一方面，所述氧化剂或还原剂，半抗原和化疗剂可以配制成单一的药物组合物使用，配合后，可以与常规的肿瘤栓塞剂碘油，合为一体，再通过血管导管的方式实施于肿瘤内治疗，同样可以起到杀死肿瘤的作用，可以加强常规栓塞治疗的作用，同时又引发炎症反应，其中氧化剂所产生的凝聚作用是抗癌药物停留于肿瘤内，不断杀死肿瘤细胞，由于半抗原修饰肿瘤的死亡的肿瘤细胞，同时增强肿瘤的抗原性，并发挥其抗癌作用和免疫炎性反应的作用，吸引APC和DC细胞来接受抗原信号，进而引起炎性反应如肿瘤免疫染色CD4和CD8呈阳性反应。该方法可称为栓塞免疫治疗，也可以称为免疫栓塞治疗。

[203]一方面，肿瘤栓塞剂，可以是碘油，也可以是碘油乳化剂，或任何可以起栓塞作用的乳化剂。

[204]在一个实施方案中，所述氧化剂或还原剂，半抗原和化疗剂可以配制成单一的药物组合物使用，经过自动注射混合器的装置(如图3所示)，再行肿瘤内注射，或血管导管的方式实施与肿瘤内部药物治疗。

[205]自动注射混合器包括一个可以容纳两个或者更多个次级注射器的腔。腔的上端有推动活塞，活塞连有手柄；腔的下端有液体混合腔隙，液体混合腔隙上有各成分入口以及混合后的物质的出口，出口上可以连接上针头。使用时，将欲混合的各个成分分别吸入到次级注射器中，安装到自动注射混合器的腔中，其中每个次级注射器的出口端连接到液体混合腔隙的入口上，并且每个次级注射器的手柄接触自动注射混合器的活塞下端。推动自动注射混合器的手柄，自动注射混合器的活塞推动次级注射器的手柄，使次级注射器的内容物进入液体混合腔隙，实现药物组合物的各个成分的混合。混合后的物质可以用于治疗。

[206]对于如何进行血管导管方式的给药，本发明以肝脏直接给予药液为例进行说明。参见图4，将药物用注射器通过插入到血管中的导管，给药至肝脏。图中示意性显示了人体，包括注射器、导管、血管、肝脏。这里的描述和图4所显示的示意图，是示例性说明用药方式的，不构成对本发明的限制。图5是图4的给药方式的更详细显示，导管被插入到血管中，导管远端到达肝总动脉分支成肝动脉和胃十二指肠动脉处，优选伸入肝动脉；药物经注射器和导管直接到达肝动脉，从而进入肝脏。

[207]在另一个实施方案中，氧化剂或还原剂，半抗原和化疗剂可以配制成单一的药物组合物，其经过自动注射混合器的装置进行，其中至少两种成分是经过自动注射混合器混合，即，可以使是两种或两种以上的单一药物制剂经经过自动注射混合器的装置使用；也可以使氧化剂作为一种制剂和化疗及半抗原作为一种制剂的两种制剂经经过自动注射混合器的装置使用。

[208]在仍另一个实施方案中，所述行肿瘤内注射治疗后一定时间，并能缓释其镶嵌在内部药物，起到缓慢杀死周边肿瘤细胞的作用，也可以择期行手术切除肿瘤，这样手术可以减少肿瘤细胞流失和转移，避免术后的复发与转移。如果有癌细胞的流失，也可能是已被杀死的细胞，已被半抗原修饰的死细胞，可以起到自身肿瘤疫苗的作用。

[209]图6是本发明的肿瘤治疗机理的示意图。本发明的药物组合物可以实现至少三个方面的联合效应。

[210]第一个方面是凝聚，图中标示为(A)方面，诱导形成凝块的方法是多种多样的，包括变性方法；氧化，包括生物还原；以及物理方法，以及这些方法的组合使用。物理方法可以是低温疗法、激光凝聚、辐射、经皮的微波凝聚、超声吸引、反式瞳孔热疗、电化学疗法等等。所有提及的这些方法可以单独使用，或者组合使用，只要达到适当凝聚肿瘤即可。凝聚作用形成凝块，将实体瘤封闭起来；同时也是部分肿瘤细胞发生死亡，产生对机体的后续作用。

[211]第二个方面是免疫反应以及相关反应，图中标示为(B)方面，这一方面主要是调动体内器官、组织和细胞，形成对肿瘤细胞的搜寻和杀死的协作效应。首先是，遭到凝聚作用的一些肿瘤细胞会形成裂解液或者修饰的裂解液，这些裂解液刺激机体，导致白细胞(WBC)、抗原呈递细胞(APC)、T细胞、N细胞移动到具有炎症特征的肿瘤处，以便进行抗癌战斗。同时，这些细胞还可以接受抗肿瘤基因信号以及经过修饰的肿瘤抗原。T淋巴细胞和N细胞会杀死原发部位的肿瘤细胞或者转移到其他部位的肿瘤细胞，从而它们可以进一步作用于肿瘤凝块和转移的肿瘤。另外，可以制备肿瘤裂解液、从肿瘤提取的DNA制备物、RNA制备物等，不论这些物质的单一成分或者成分，将它们进行注射，刺激白细胞(WBC)、抗原呈递细胞(APC)，增加肿瘤免疫原性。还可以通过释放新的反义基因，对TRAPTEN：DNP、TNP化学修饰的肿瘤细胞裂解液、凝块周围的活的肿瘤细胞增加免疫原性，以及通过病毒进行遗传修饰，表达肿瘤蛋白P-16-GM-CSF、IL-2，或者是直接表达或者是其cDNA编码，COGEN cDNA、GM-CSF cDNA和IL-2cDNA。此外，肿瘤抑制基因会对_P53和_P16活肿瘤细胞进行作用。

[212]第三个方面是药物作用，图中标示为(C)方面。肿瘤被凝聚之后，药物也就会被封闭在凝块内部，形成一个缓慢释放的药物库，可以控制凝块周围的肿瘤细胞或者杀死这些肿瘤细胞。这个药物释放系统可以含有抗癌药、辐射敏化剂、抗血管发生剂、放射性同位素等。

[213]上述三个方面的任意一个方面均是本发明的范围。本发明是将多种抗癌方法和药物进行组合应用，也包括考虑机体自身功能。所以，本发明不局限于具体物质和方法，本发明体现的是综合应用。现有的肿瘤治疗和预防中的试剂和方法均是有可能与本发明的思想和精神相结合，取得良好的肿瘤治疗效果，形成用于肿瘤治疗的方法和产品，这些是在本发明范围之中。

[214]诱导实体瘤的凝聚，形成对机体刺激，用药物以缓释库形式不断作用于肿瘤细胞，从而对肿瘤进行多种方法和多种试剂的多机理作用是本发明的一个方面。优选地，本发明是多机理作用机制。进一步而言，本发明涉及扩大肿瘤凝聚所致的对机体的刺激作用，包括使用半抗原等。本发明所用的抗肿瘤药物可以是任何适宜的抗肿瘤药物，它们能够作用于凝块内部的肿瘤细胞，也可以缓慢释放作用于凝块周围的肿瘤细胞。

[215]本发明提供了一种具有优异效果的肿瘤治疗方法，以及相应的试剂。本发明的治疗组合，可以包括促进肿瘤组织凝聚的物质或者手段；促进凝聚后的肿瘤组织形成刺激机体的刺激物的能力的物质或者手段；以及直接作用于肿瘤细胞的物质或者手段。这种治疗组合，可以是物理手段，也可以是化学物质或者生物物质的组合。本发明不限于任何一种具体手段。本发明在于多种方式的综合应用。

[216]本发明的一个方面在于治疗实体瘤的药物组合物，该组合物包括凝聚剂、半抗原和抗癌药物。该组合物是直接给予到实体瘤中，导致肿瘤组织凝聚，形成凝聚块。凝聚作用导致一些肿瘤细胞死亡、裂解形成刺激机体的抗原物质等，同时半抗原可能修饰一些小分子物质、也形成复合物质，对机体构成刺激。抗癌药物能够直接作用于凝聚块内部的肿瘤细胞，也可以释放出凝聚块，作用于周围肿瘤细胞。这些作用的两个或者多个，或者全部的综合利用，均是本发明的范围。

[217]最基本地，本发明可以归纳为凝聚作用，即本发明是通过凝聚肿瘤组织，从而激发机体对肿瘤细胞的搜寻和抵抗，达到治疗肿瘤的目的。

[218]进一步，本发明也可以包括增强机体对肿瘤细胞的搜寻和抵抗，包括使用半抗原以及类似物质。

[219]再进一步，本发明还包括使用抗肿瘤药物。

[220]在一个方面，本发明是凝聚作用和机体作用的结合。在另外一个方面，本发明是凝聚作用和增强的机体作用的结合。在又一个方面，本发明是凝聚作用、机体作用、药物作用的结合。在再一个方面，本发明是凝聚作用、增强的机体作用和药物作用的结合。每一个作用的具体形式是不受限制的。所以，本发明提供了多种物质组合物和方法组合。本发明的任何一个要素与另外一个要素的结合使用，就会构成本发明的一个实施方案。因此，本发明是多种技术方案，不是一种技术方案。本发明的技术方案不仅仅限于本说明书和权利要求书中明确写出的各个具体技术方案，还包括将这些技术方案中的要素进行组合的任何一个衍生方案，以及在利用了本发明的精神和实质的基础上，所得到任何一个衍生方案。

[221]本发明重要的一点在于将外在作用和内在力量结合起来，形成一种治疗癌症的新治疗方法，本发明还包括用于这样一种治疗方法的药物。以及，本发明包括依据上述新方法，设计的治疗药物以及药物组合物。也可以将这些物质偶联，包括用连接物将不同功能的物质连接成一个分子，这些也是在本发明范围内。

[222]本发明还提供了本文所提供的组合物在制备抗癌药物中的用途。一方面，所述用途包括向哺乳动物肿瘤原位施用入治疗有效量的本文所提供的组合物。施用可以行肿瘤内注射进行，也可以通过血管导管的方式实施于肿瘤内。

D.实施例

实施例1

[223]S180瘤株皮下接种于小鼠，待瘤体长大到直径约0.6cm时，肿瘤内注射Ara-C，结合DNP及氧化剂碳酸酰胺(50至200mg)，每天观察肿瘤生长大小。

表1.DNP联合化疗后S180实体瘤小鼠抑瘤率(％)^△

^△分组后第9天，X±S ^*P＜0.05，与模型组比较。#P＜0.05，与化疗组比较。

[224]表明化疗加中等剂量的DNP以及碳酸酰胺的抑瘤率明显高。同时双侧的肿瘤仅仅治疗了右侧，左侧的肿瘤同样得到了抑制，充分说明：DNP修饰的瘤苗起到了治疗对侧肿瘤的作用。仅仅DNP治疗不能起到任何肿瘤治疗的作用。

实施例2

[225]H22瘤株皮下接种于小鼠，待瘤体长大到直径约0.6cm时，肿瘤内注射Ara-C，结合DNP及氧化剂碳酸酰胺，每天观察肿瘤生长大小。

表2.DNP联合化疗后H22皮下实体瘤小鼠抑瘤率(％)^△

^*分组后第9天，X±S ^*P＜0.05，与模型组比较。

[226]表明与实施例1同样的效果，化疗加中等剂量的DNP以及碳酸酰胺的抑瘤率明显高。同时双侧的肿瘤仅仅治疗了右侧，左侧的肿瘤同样得到了抑制，充分说明：DNP修饰的瘤庿起到了治疗对侧肿瘤的作用。仅仅DNP治疗不能起到任何肿瘤治疗的作用。

实施例3

[227]Lewis瘤株皮下接种于小鼠，待瘤体长大到直径约0.6cm时，肿瘤内注射Ara-C，结合DNP及氧化剂碳酸酰胺，每天观察肿瘤生长大小。

表3.DNP联合化疗后Lewis实体瘤小鼠抑瘤率(％)^△

^△分组后第9天，X±S^*P＜0.05，与模型组比较。

[228]表明与实施例1和2同样的效果，化疗加中等剂量的DNP以及碳酸酰胺的抑瘤率明显高。同时双侧的肿瘤仅仅治疗了右侧，左侧的肿瘤同样得到了抑制，充分说明：DNP修饰的瘤庿起到了治疗对侧肿瘤的作用。仅仅DNP治疗不能起到任何肿瘤治疗的作用。

实施例4：

[229]H22瘤株皮下接种于小鼠，待瘤体长大到直径约0.6cm时，肿瘤内注射Ara-C，结合DNP及氧化剂碳酸酰胺，每天观察胸腺指数、脾脏指。

表4.DNP联合化疗后H22实体瘤小鼠胸腺指数、脾脏指数(g/g)(×10-3)^*

^*分组后第9天，X±S

[230]表4说明化疗可以引起胸腺指数、脾脏指数下降，但是DNP可以提高胸腺指数、脾脏指数。

实施例5：

[231]S180瘤株皮下接种于小鼠，待瘤体长大到直径约0.6cm时，肿瘤内注射Ara-C，结合DNP及氧化剂碳酸酰胺，每天观察胸腺指数、脾脏指数。

表5.DNP联合化疗后S180实体瘤小鼠胸腺指数、脾脏指数(g/g)(×10-3)^*

^*分组后第9天，X±S

[232]同样，表5说明化疗可以引起胸腺指数、脾脏指数下降，但是DNP可以提高胸腺指数、脾脏指数。

实施例6：

[233]S180瘤株皮下接种于小鼠，待瘤体长大到直径约0.6cm时，肿瘤内注射Ara-C，结合DNP及氧化剂碳酸酰胺治疗，5天后处死，取肿瘤组织，行病理切片，进行免疫染色。如图1所示：肿瘤内注射化疗药和半抗原及氧化剂，可以引起肿瘤组织的弹力纤维、胶原纤维和网状纤维高度增生，起到限制肿瘤增长的作用和限制肿瘤转移的作用。

实施例7

[234]S180瘤株皮下接种于小鼠，待瘤体长大到直径约0.6cm时，肿瘤内注射Ara-C，结合DNP及氧化剂碳酸酰胺治疗，5天后处死，取肿瘤组织，行病理切片，进行免疫染色。如图2所示：肿瘤内注射化疗药和半抗原及氧化剂，可以引起肿瘤组织的CD4和CD8的免疫反应，起到杀伤肿瘤的作用和杀伤微小转移肿瘤的作用。证实了本发明的肿瘤内化疗加半抗原及氧化剂，可以诱导肿瘤自身免疫疫苗的作用。

实施例8

[235]我院用肿瘤内注射化疗药加半抗原以及氧化剂治疗了212例肺癌患者中，可评价疗效患者157例，其中病理分型：

[236]肿瘤内注射化疗药加半抗原治疗的临床受益率为：88.54％。

[237]肿瘤内注射化疗药加半抗原治疗的临床生存时间如下：可以看到应有了半抗原后的平均生存时间和半年生存率明显的好于未用半抗原的疗效。说明了本发明的药物组合有很好的治疗效果。达到了延长生命的效果。

*t＝2.21，P＜0.05注：212例患者中可评价生存期患者127例

实施例9：

[238]我院用肿瘤内注射化疗药加半抗原以及氧化剂H₂O₂、维生素-C治疗489例肝癌患者中，可评价疗效患者246例。

[239]肿瘤内注射化疗药加半抗原治疗的临床受益率为：80.89％如下表：

[240]肿瘤内注射化疗药加半抗原治疗的临床生存时间如下：可以看到应用了半抗原后的平均生存时间和半年生存率明显的好于未用半抗原的疗效。说明了本发明的药物组合有很好的治疗效果。达到了延长生命的效果。

实施例10：

[241]我院用肿瘤内注射化疗药加半抗原以及氧化剂治疗胰腺癌患者91例。可评价疗效患者46例。肿瘤内注射化疗药加半抗原治疗胰腺癌的临床受益率为：91％如下表。

[242]临肿瘤内注射化疗药加半抗原治疗的临床生存时间如下：可以看到应用了半抗原后的平均生存时间和半年生存率明显的好于未用半抗原的疗效。说明了本发明的药物组合有很好的治疗效果，达到了延长生命的效果。临床生存率如下：

实施例11：

[243]我院用肿瘤内注射化疗药加半抗原以及氧化剂治疗胰腺癌患者760例，可评价疗效患者623例。肿瘤内注射化疗药加半抗原治疗食道癌的临床受益率为91％如下表。

[244]临肿瘤内注射化疗药加半抗原治疗食道癌的临床生存时间如下：可以看到应用了半抗原后的平均生存时间和半年生存率明显的好于未用半抗原的疗效。说明了本发明的药物组合有很好的治疗效果，达到了延长生命的效果。临床生存率如下：

实施例12：

[245]2004年患者，姓李，患有恶性神经母细胞瘤，肿块5x6x7cm无法手术，来我院行化疗加半抗原及氧化剂(H₂O₂，维生素-C)，治疗5次。肿瘤有所缩小。抽取肿瘤液化组织，行趾蹼注射治疗。肿瘤渐渐缩小，于疗后5月时，CT显示肿瘤消失。表明本发明的组合物有的疫苗的作用，肿瘤液化组织已被半抗原修饰，能够起到了肿瘤疫苗的作用。

实施例13：

[246]2005年，患者，姓黄，患有骶骨恶性骨肉瘤，双肺转移。外院无法治疗，来我院行骶骨肿瘤内化疗加半抗原及氧化剂(H₂O₂，维生素-C)8次。于4月后骶骨肿瘤明显缩小，同时双肺转移灶消失。表明本发明的组合物有疫苗的作用，肿瘤液化组织被半抗原修饰起到了肿瘤疫苗的作用。

实施例14：

[247]2003年，患者，姓李，患有肝癌，并发肺转移。来我院治疗，先行干肿瘤内注射化疗药加半抗原及氧化剂(H₂O₂，维生素-C)，2次治疗后，病人因经济困难停止治疗。2年后仍然健在，回院复查，肝脏肿瘤明显缩小，双肺肿瘤稳定。表明本发明的组合物有疫苗的作用，肿瘤液化组织被半抗原修饰起到了肿瘤疫苗的作用，治疗一个部位的肿瘤诱发疫苗作用，起到了治疗另一个肿瘤的作用。

[248]本发明并不限于本申请描述的特定实施方式，所述的特定实施方式仅是本发明各方面的一些例示。对本发明进行各种修改和变化是可能的，它们并不脱离本发明的精神和范围，这对于本领域技术人员是明显的。根据本文前面的描述，除了本文提及的方法和组合，本发明范围内的功能上等价的方法和组合对本技术领域的技术人员是明显的。这样的修改和变化在所附权利要求的范围内。本发明仅受所附权利要求以及其等价物的范围的限制。应该理解，本发明不限于特定的方法、试剂、组合物或生物系统，它们可以变化。还应该理解，本文使用的术语仅是出于描述具体的实施方案的目的，并不是限制性的。本发明的其它实施方式在权利要求中提出。

Claims (20)

1.一种组合物，其中包括：

a)凝聚剂；

b)半抗原；和

c)治疗剂。

2.如权利要求1的组合物，其中所述凝聚剂是氧化剂或还原剂。

3.如权利要求2的组合物，其中所述氧化剂选自过氧化氢、碳酸酰胺、维生素-C、臭氧、多元氧O₇、多元氧O₈、NaIO₄、过一硫酸氢钾(Oxone)、高锰酸钾、D，L-S-甲基硫辛酸甲酯、奥美拉唑、N-乙基马来酰亚胺、以及它们的组合。

4.如权利要求2的组合物，其中所述还原剂选白苏木精、含氧量低的还原剂、和非硝基化合物替拉扎明(SR-4233)。

5.如权利要求1至4任一项所述的组合物，其中所述半抗原选自三硝基苯酚(TNP)、二硝基苯酚(DNP)、N-碘乙酰基-N’-(5-磺酸基1-萘基)亚乙基二酰胺(AED)、二硝基氟苯(DNFB)和Ovabulin(OVA)、血清白蛋白(Albumin)、以及它们的组合。

6.如权利要求1至5任一项所述的组合物，其中所述治疗剂是抗肿瘤剂。

7.如权利要求6所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂是抗肿瘤化疗剂。

8.如权利要求6所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂是生物治疗剂。

9.如权利要求6所述的组合物，其中所述抗肿瘤剂是癌基因抑制物或肿瘤抑制基因或蛋白质。

10.如权利要求1或2所述的组合物，进一步包含含有癌基因或肿瘤抑制基因序列的病毒载体。

11.如权利要求1或2所述的组合物，进一步包含在所述半抗原和肿瘤抗原之间促进结合的促进剂。

12.如权利要求11所述的组合物，其中所述促进剂是螯合剂或化学交联剂。

13.如权利要求1或2所述的组合物，其中所述治疗剂进一步包含免疫增效剂或免疫趋化剂。

14.如权利要求2所述的组合物，其中所述氧化剂或还原剂的量从大约0.01％(w/w)到大约35％(w/w)，且所述半抗原的量从大约1mg/ml到大约80mg/ml。

15.一种包含权利要求1-14任一项所述组合物的试剂盒。

16.一种制品，其包括：

a)包装材料；

b)权利要求1-14任一项所述的组合物；且

c)表明所述制品是用于治疗肿瘤的标签。

17.一种治疗哺乳动物肿瘤的方法，包括向所述哺乳动物肿瘤原位施用入治疗有效量的半抗原、抗肿瘤剂和凝聚剂。

18.如权利要求17所述的方法，其中任选地，所述凝聚剂被选自下列的凝聚治疗替代：低温疗法、激光凝聚(ILC)、经皮肤的微波凝聚治疗、射频诱导凝聚坏死、反式瞳孔热治疗、超声波治疗和辐射治疗，或者与所述凝聚治疗联合施用。

19.一种组合物，其包括：

a)半抗原；和

b)抗肿瘤剂

20.权利要求1-14任一项所述的组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。

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