CN101538295B

CN101538295B - 一种块菌的提取物、其制备方法及其在制备卷烟纸产品中的用途

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Publication number: CN101538295B
Application number: CN2009100943349A
Authority: CN
Inventors: 朱自忠; 张立新; 鲁红昌; 张红国
Original assignee: YUNNAN HONGTA BULE EAGLE PAPER CO Ltd
Current assignee: YUNNAN HONGTA BULE EAGLE PAPER CO Ltd
Priority date: 2009-04-10
Filing date: 2009-04-10
Publication date: 2011-06-15
Anticipated expiration: 2029-04-10
Also published as: CN101538295A

Abstract

本发明涉及一种块菌的提取物、其制备方法及其在制备卷烟纸中的用途，所述提取物从块菌子实体中提取，其中含有茋多酚类化合物A。其中所述块菌为野生或半人工栽培印度块菌。以重量百分比计，其中所述提取物中茋多酚类化合物A的含量为50％~65％。其特征在于块菌为子囊菌类中的块菌目(Tuberales)块菌科(Tuberaceae)的真菌的印度块菌(Tuber indicum Cooke et Massee)，所述提取物是从块菌子实体中提取，其中含有茋多酚类化合物A，茋多酚类化合物A结构式是：

Description

一种块菌的提取物、其制备方法及其在制备卷烟纸产品中的用途

技术领域

本发明涉及一种块菌提取物、其制备方法及其在制备卷烟纸中的用途。所述提取物从印度块菌发酵液中提取，其中含有茋多酚类化合物A。

背景技术

块菌(Truffles)属子囊菌亚门(Ascomycotina)盘菌纲(Helotiales)块菌目(Tuberales)块菌科(Tuberaceae)真菌，通常与林木根系具有共生关系，主要分布在北半球，全球种属逾60余种，80％以上块菌分布于西欧洲地区，主要为法国、意大利、西班牙等国。块菌在我国全国均有分布，约有20余种。在欧洲块菌中，黑孢块菌Tuber melanosporum Vittad、白块菌Tuber magnatum Pico、夏块菌T.aestivum Vittad、勃良第块菌T.uncinatum Chatin，均为重要的商业块菌。被誉为林中“黑钻石”的黑孢块菌，是其中价值较高的一种，为西欧许多国家最喜爱的食品之一。该菌最早发现于法国的Périgord省，法国、意大利、西班牙为其主产区。我国的块菌品种主要有中国块菌T.sinense K.Tao et Liu、印度块菌T.indicumCooke et Massee、太原块菌T.taiyuanse Liu、巨孢块菌T.gigantosporumY.Wang、刘氏块菌T.liui A.S.Xu、西藏块菌T.xizangense A.S.Xu为块菌属新种。喜峰块菌T.himalayense Zhang et Minter、拟喜峰块菌T.pseudohimalayense Morens.。我国目前出口欧洲的块菌种类主要是西南出产的印度块菌，该菌子囊果与黑孢块菌极其相似。块菌是一种珍贵的食用菌，目前块菌来源主要为野生或半人工栽培。块菌独特的口感和香味使其广泛的应用于食品、酿酒、高档香水、化妆品和香精香料等领域，其经济价值令人瞩目。我国西南地区拥有丰富的印度块菌资源，除出口量外，仍有大量的资源需要进行深度的开发和加工。

块菌的化学成分研究发现其成分较为复杂，包括含S化合物、鞘脂、多种脂肪酸、氨基酸、甾醇类物质和多种挥发性物质。这些物质除具有独特的香气外，还具有一定的药用价值，如用于治疗内分泌失调疾病。结合卷烟辅料的工作，我们对多种植物和真菌的提取物进行了系列的筛选，发现块菌的部分提取物添加到卷烟纸或水松纸中可增加卷烟纸的附加功能，主要包括：(1)协香作用。协调卷烟的香韵，掩盖卷烟的地方杂气。(2)加香作用。补偿卷烟因降低焦油带来的香味不足的确定。(3)减少烟气中包括自由基在内的有害物质。另外，与一般的植物或真菌提取物相比，经处理过的在卷烟辅料的可用性上具有特色。其一，提取物的色泽为白色到浅黄色，添加到卷烟纸等卷烟辅料中不会对产品白度等外观参数造成影响，亦不会在生产过程中对机器设备着色而造成损失。其二，该提取物属于“潜香”性质的物质，在常温常压下不挥发出香气，其独特的协香、偿香作用是通过卷烟高温或燃烧的过程得以释放。因此，将其应用于卷烟辅料产品，不会对辅料产品本身的气味指标造成干扰和影响。

深入的成分分析首次发现块菌的提取物中含有茋多酚类成分A，从结构上看，该化合物是一个强的自由基清除剂，极可能是提取物功效的物质基础。

目前，块菌挥发性精油在国外有用于卷烟领域的研究和实践，但其无香气的具有抗自由基活性提取物部分用于烟草领域尚未见任何报道。

背景技术

本发明的目的之一是发明一种块菌提取物，所述提取物从块菌的子实体中提取，其中含有茋多酚类化合物A，其化学式如下：

化合物A

本发明所述块菌为印度块菌Rheum lhasaense A.J.Li et P.K.Haiao。来源可以是野生的，也可以是半人工种植的，半人工栽培可以进一步扩大原料来源。

本发明目的是这样实现的：一种块菌提取物，其特征在于块菌为子囊菌类中的块菌目(Tuberales)块菌科(Tuberaceae)的真菌的印度块菌(Tuber indicumCookeet Massee)，所述提取物是从块菌子实体中提取，其中含有茋多酚类化合物A，茋多酚类化合物A结构式是：

化合物A

其中所述块菌为野生或半人工栽培印度块菌。

以重量百分比计，其中所述提取物中茋多酚类化合物A的含量为50％~65％。

块菌提取物的制备方法包括下列步骤：

(1)前处理：前处理步骤包括块菌子实体的采集、净制、干燥和粉碎；

(2)提取：所述提取是采用0％~50％的乙醇或甲醇的水溶液作为提取溶剂对步骤(1)所述块菌子实体进行常规提取并进行浓缩得到提取液；

(3)后处理：后处理步骤包括将步骤(2)的提取液上吸附树脂进行纯化和脱色，并用10~50％的乙醇或甲醇水溶液洗脱，经浓缩和干燥得到块菌提取物。

其步骤(3)所述树脂为弱极性或中极性大孔吸附树脂。

块菌提取物用于在制备卷烟纸中的用途。

按本发明方法所获得的提取物发现块菌的部分提取物添加到卷烟纸或水松纸中可增加卷烟纸的附加功能，主要包括：(1)协香作用。协调卷烟的香韵，掩盖卷烟的地方杂气。(2)加香作用。补偿卷烟因降低焦油带来的香味不足的确定。(3)显著降低烟气中包括自由基在内的有害物质。另外，与一般的植物或真菌提取物相比，经处理过的在卷烟辅料的可用性上具有特色。其一，提取物的色泽为白色到浅黄色，添加到卷烟纸等卷烟辅料中不会对产品白度等外观参数造成影响，亦不会在生产过程中对机器设备着色而造成损失。其二，该提取物属于“潜香”性质的物质，在常温常压下不挥发出香气，其独特的协香、偿香作用是通过卷烟高温或燃烧的过程得以释放。因此，将其应用于卷烟辅料产品，不会对辅料产品本身的气味指标造成干扰和影响。

另外，深入的成分分析惊奇发现本发明所得块菌的提取物中含有50％～60％的茋多酚类成分A，从结构上看，该化合物是一个强的自由基清除剂，是提取物对烟气中自由基清除物质基础的体现。

由此，本发明进一步提供本发明之块菌提取物在制备卷烟纸中的用途。

按照常规的生产工艺，可在多个环节将本发明之提取物添加到卷烟纸、水松纸和/或烟丝上直接加以利用，也可通过涂布的方法加载于卷烟纸上。

同样，本发明之块菌提取物也可以与其它物质联合使用形成新的添加物。显然，这些含有本发明所述提取物的添加物在本发明的权利要求范围内。

本发明之块菌提取物在作为制备卷烟辅料方面具有明确的功能和特点，不影响各级产品的品质，因此具有较强的可用性。所述的提取物中功能成分的结构清楚、含量明确，有利于各级产品的质量监测和控制。另外，本发明所述有效部位的制备方法简单易行，生产成本低，可连续操作，具有极强的实用性。

具体实施方案

以下通过具体实施例将进一步说明本发明的内容。

下文实施例仅为就本发明所述提取物的来源、制备方法、化学组成及其用途的特殊说明，显然，本发明权利范围不受这些实施例限制。本发明中所述提取物中，以重量百分比计，茋多酚类化合物A含量为50～65％。

本发明所提供的一种块菌提取物是一种以茋多酚类化合物A为主要化学成分的混合物。可以理解，此提取物中化合物A的含量随原料批次不同、处理工艺参数变化而有所变化。

本发明提供上述提取物的制备方法，所述制备方法包括下列步骤：

(1)前处理：前处理步骤包括块菌子实体的采集、净制、干燥和粉碎。

(2)提取：所述提取是采用0％~50％的乙醇或甲醇的水溶液作为提取溶剂对步骤(1)所述块菌子实体进行常规提取并进行浓缩得到提取液。

(3)后处理：后处理步骤包括将步骤(2)的提取液上吸附树脂进行纯化和脱色，并用10~50％的乙醇或甲醇水溶液洗脱，经浓缩和干燥得到权利要求1~3所述块菌提取物。

采集的新鲜块菌一般需要经过净制、切制和/或粉碎等前处理。所述净制可包括去除附着于子实体上的泥土等杂物，可以应用其鲜品，也可以采用其风干、晒干或机器干燥的干品；所得原料优选进行适当切制或粉碎以利提取。

步骤(2)所述有机溶剂为含水低于50％的甲醇、乙醇和水。其中优选乙醇水溶液作为提取溶剂；进一步地，本发明优选采用20％的乙醇水溶液作为提取溶剂。

步骤(2)所得块菌提取液需经适当的后处理方可获得块菌提取物。

步骤(3)中吸附树脂优选大孔吸附树脂为弱极性和中极性的树脂，例如商品型号D101型吸附树脂作为层析纯化和脱色的层析材料。步骤(3)所述洗脱液优选20％的乙醇水溶液。柱床体积一般按每100ml吸附树脂(装柱后体积)吸附1~3g块菌提取物设置，这时一般可以获得良好的吸附转移率。上清液上样吸附后，可顺次采用水、约15％～20％的乙醇洗脱。收集15％～20％的乙醇洗脱液并进行浓缩干燥，得到本发明所述块菌提取物。

实施例1：化合物A的检测测定

(1)样品来源

标准品：化合物A，自制，纯度99％(高液相色谱图中相对峰面积)。

待测样品：见实施例2

(2)薄层色谱法(TLC)检查化合物

本法采用硅胶薄层层析。取标准品溶液及待测样品溶液液各4 l，分别点于同一硅胶薄层层析板(Gf 254)板上，以石油醚∶丙酮(体积比，7∶13)为展开剂展开，取出，晾干，在紫外灯下观查或置于碘缸中显色，在标准品相同的位置，观察待测样品是否有相应的斑点。

(3)高效液相色谱法(HPLC)测定化合物A

色谱条件：用(4.5×100mm)反相色谱柱，15％甲醇，用紫外检测仪进行检测，检测波长306nm，进样量：10μl。

标准曲线建立：上述标准品溶液分别配成5、10、15、20、25μg/ml进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，以各对照品进样量(Y，g)对峰面积(x，A)进行线性回归，回归方程：Y＝3.0028X+0.2031，r＝0.9997(虎杖苷，n＝5)。

样品测定：待测样品配成40μg/ml，取10μl分别注入液相色谱仪中，根据标准曲线计算待测样品中化合物A的含量。

实施例2：块菌提取物的制备

(1)材料：

印度块菌子实体：收购于云南贡山地区，除去杂质，洗净，切成片或块，晒干。

树脂：D101大孔吸附树脂，天津市海光化工有限公司产品，按照生产厂说明书进行预处理；

(2)制备

(i)前处理：收购的印度块菌，水洗去泥土，切片，通风处阴干，粉碎机分别将其粉碎成粗颗粒。

(ii)提取：取5份上述样品，每份100g，分别以0％、25％、50％乙醇；25％甲醇；50％甲醇作为提取溶剂提取。各份原料分别以上述不同提取溶剂0.8L回流提取3次，每次2小时。分别合并提取液，薄层色谱法检测提取物中的化合物A。

表1：不同提取溶剂的提取试验结果

上述提取试验中，各种溶剂不同浓度水溶液均可检测到化合物A，可见它们均可作为有效提取溶剂，其中，鉴于乙醇的安全、廉价且提取物的提取率较高，因此本发明优选约20~25％的乙醇水溶液作为提取溶剂。

(iii)后处理：

取上述块菌粗颗粒300g，加入20％乙醇0.8L回流提取3次，每次2小时。合并提取液浓缩干，加入水90ml，上样5根D101大孔吸附树脂柱(φ4.5cm，80cm，柱床体积1350ml)。

薄层色谱法检查D101树脂柱上样流出液，未见茋多酚类化合物A泄漏。3根D101树脂柱分别以2000ml水、20％乙醇、50％乙醇、15％甲醇和50％甲醇洗涤，收集洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，高效液相色谱法检查化合物A含量。统计数据如下：

表2：大孔树脂层析纯化试验结果

表2显示，上述洗脱液除水外，均能将化合物A洗脱，但浓度较高的乙醇或甲醇水溶液洗脱制定的产品色泽较深，化合物A含量较低；另鉴于乙醇的安全、廉价，因此本发明优选15-25％的乙醇水溶液作为洗脱液。

(5)化合物A结构确认

化合物A的MS、¹H NMR、¹³CNMR谱图，其检测数据如下：白色针晶(甲醇)，mp.225-227℃。紫外灯下呈蓝紫色荧光。UV：λmax(MeOH)nm：217，308，319；negative FAB⁺MS[m/z，％]：407[M⁺+H]，358，228[M+H-C₆H₁₁O₆]^-；¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δppm：7.15(1H，d，J＝8.4Hz)，7.02(1H，d，J＝1.9Hz)，6.93(1H，dd，J＝8.0，1.9Hz)，6.91(1H，d，J＝16.3Hz)，6.83(1H，d，J＝16.3Hz)，6.45(2H，d，J＝2.1Hz)，6.18(1H，d，J＝2.1Hz)，4.78(1H，d，J＝7.2Hz)，3.2-3.9(4H，m，sugar-H)；¹³C NMR(500MHz，CD₃OD)δppm：140.9(C-1)，105.9(C-2)，160.2(C-3)，103.9(C-4)，159.5(C-5)，105.9(C-6)，134.9(C-1′)，114.5(C-2′)，148.4(C-3′)，146.5(4′)，118.7(5′)，119.5(C-6′)，128.9(C-α)，128.9(C-β)，104.1(C-1″)，74.7(C-2″)，77.8(C-3″)，71.2(C-4″)，78.1(C-5″)，62.7(C-6″)。上述UV，MS，¹H NMR和¹³C NMR数据与文献(YoshikiKashiwada et al.Chem.Pharm.Bull.1984，32(9)：3501-3517)报道的3，3′，4，4′-四羟基茋，4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷一致(3，3’，4，4’-tetrahydroxystilbene，4’-O-glucopyranoside)。

实施例3：抄造添加于卷烟纸

将块菌提取物1000g溶于2L纯净水中，然后按1‰的量混入纸浆，进行充分混合，搅拌过程中应避免涡流和死角现象，防止浆料不均的现象。随后进行卷烟纸抛光、压纹等正常工艺，得1#卷烟纸。

实施例4：浸涂添加于卷烟纸

准备好符合规格的普通卷烟纸。卷烟纸应有相宜的定量、抗张强度、透气度、水分，不能有破边现象。因为浸涂提取物的缘故，提取物中的物质通过纸张的毛细显现会浸入纸张内部，卷烟纸的透气度会比原来有所下降，所以生产无压纹卷烟纸时应将透气度在原标准基础上提高一定基数。

将块菌提取物、水、酒精、和调色剂按2∶15∶25∶8投入搅拌桶中，进行充分混合，然后适量加入粘度调节剂搅拌均匀，用2#粘度杯检测，上机粘度应控制在17~21秒之间为宜。

在兑料在过程中，将卷烟纸及涂色辊安装至既定位置，然后将纸引至收卷轴上接好，并检查收放卷轴充气是否饱满，然后将干燥箱调至加温位置，待烘箱温度升至设定温度时即可启动机器，轻轻放下压辊，缓慢加速至正常速度。在此过程中，应注意观察颜色的变化，根据需要对料液粘度或组份适时调整。

涂布后，按所需规格、长度、分切位置进行分切、恒湿和包装。得2#卷烟纸。

实施例5：添加和涂布块菌提取物的卷烟纸卷烟(1#和2#卷烟)对烟气中有害成分的影响

表3不同卷烟纸卷烟样品有害成分(苯并芘、亚硝胺)含量

从表3数据可以看出，含有或附着块菌提取物的卷烟纸1#，2#和普通卷烟纸相比，主流烟气中有害成分3，4-苯并芘量有所下降，其中TSNAs中的NNN含量呈降低显著。

实施例6：添加和涂布块菌提取物的卷烟纸对卷烟感官抽吸品质的影响

按品析标准，共有21位专家参与品析。从表所列评吸数据可以看出，附着天然植物产物的卷烟纸1#，2#和普通卷烟纸相比，卷烟评吸各项指标均产生影响。

在香气方面1#，2#卷烟香气量增加，且香气较圆润柔和。

在烟气协调性方面、掩盖烟气杂气产生较佳的影响。

在减少刺激性方面也使刺激性呈下降趋势。

在口腔余味感方面，口腔干净度有所改善，但香气回味1#感觉有所欠缺。

表4不同卷烟纸对卷烟感官抽吸品质的影响评分

总体感觉较优，多方面感官均有所提升。

Claims

1.一种块菌提取物，其特征在于块菌为子囊菌类中的块菌目块菌科的真菌的印度块菌(Tuber indicum Cooke et Massee)，

块菌提取物含有芪多酚类化合物A，以重量百分比计，块菌提取物中芪多酚类化合物A的含量为50％～65％；

其芪多酚类化合物A结构式是：

2.根据权利要求1所述的块菌提取物，其特征在于其中所述块菌为野生或半人工栽培印度块菌。

3.一种块菌提取物的制备方法，其特征在于块菌提取物是从块菌子实体中提取，所述制备方法包括下列步骤：

(2)提取：所述提取是采用0％～50％的乙醇或甲醇的水溶液作为提取溶剂对步骤(1)所述块菌子实体进行常规提取并进行浓缩得到提取液；

(3)后处理：后处理步骤包括将步骤(2)的提取液上吸附树脂进行纯化和脱色，并用10～50％的乙醇或甲醇水溶液洗脱，经浓缩和干燥得到块菌提取物。

4.根据权利要求3所述的块菌提取物的制备方法，其特征在于其步骤(3)所述树脂为弱极性或中极性大孔吸附树脂。

5.根据权利要求1所述的块菌提取物，其特征在于块菌提取物作为在制备卷烟纸中的用途。