CN101518563A - 一种粉葛总苷元非口服制剂及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种粉葛总苷元非口服制剂及其制备方法和用途，属中药领域。该发明是将从粉葛中提取的总苷进行水解，得到总苷元，并将总苷元配合特殊的辅料制成高效制剂，可以大大提高粉葛总苷元的生物利用度。该制剂在治疗心血管疾病、高血压、脑血栓、头痛、糖尿病、更年期综合征及肿瘤疾病中有明显的疗效。

Description

一种粉葛总苷元非口服制剂及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种中药粉葛提取物，尤其是一种粉葛总苷元的提取物，以及该提取物的药物用途。属中药领域。

背景技术

粉葛为豆科植物干葛藤Pueraria thomsonii Benth.的干燥根，粉葛中含有多钟黄酮类成分，如葛根素、大豆苷、4，7-二葡萄糖大豆苷、3’甲氧基葛根素、7-木糖—葛根素、大豆苷元等，其大部分以苷类形式存在。粉葛中的总黄酮苷类成分在治疗心血管疾病、高血压、脑血栓、头痛、糖尿病、更年期综合征及肿瘤等疾病中具有较好的疗效。

文献报道中，李岂凡等在“从葛根中提取和纯化药用成分—总黄酮”(《安徽农业科学》，2007年，第35卷第27期)、杜德及“葛根的抗肿瘤作用研究”(《中药药理与临床》，1994年2月)、曾明在“葛根提取物对糖尿病大鼠肾脏功能的影响”(《中国实验方剂学杂志》，2007年8月，第13卷第8期)研究中表明，粉葛中的总黄酮苷类成分具有较强的生理作用；而在CN200410006579.9、CN200610042076.3、CN 200510135612.2、CN 91110602.2、CN200510013666.1、CN01106845.0等专利公开文献及其他普通文献中也提供了多种制备粉葛总苷的方法。可见在中药技术领域中，粉葛中总苷类成分一直是被研究的热点。

但是，现有的技术都忽视了对粉葛总苷元的研究，虽然翁红博等在“葛根黄豆苷元对脑缺血的保护作用及机制探讨”(《中国药理学通报》，1999年，第15卷第6期)、韩文全在“黄豆苷元的研究与开发”(《食品与药品》，2006年，第8卷第5期)等文献中对黄豆苷元进行了初步研究，但只是针对了单一成分黄豆苷元，并没有对粉葛中含有的总苷元进行系统研究，故总苷元的效果与应用情况也一直处于空白状态。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种以粉葛总苷元为活性成分的非口服药物。

第二目的是提供该药物的制剂形式，特别是一种高效制剂；

第三目的是提供该药物高效制剂的制备方法；

最后是提供该药物在用于治疗心血管疾病、高血压、脑血栓、头痛、糖尿病、更年期综合征及肿瘤疾病中的应用。

本发明目的第一目的是这样实现的：

发明人提供一种非口服的药物，该药物以粉葛总苷元为活性成分。

发明人发现，苷类物质其实是在植物体内产生的生物活性较低的化合物，如在化合物上添加极性基团，把具有生物活性的苷元和糖结合起来形成生理活性较低的苷类而加以储存，使之更易排出体外。同样，这些苷类化合物在人体内的生物利用度也较低，口服的苷类化合物在肠道内难以吸收、生物利用度低，多数在体内代谢并不完全，有的甚至完全以原型(苷类形式)排除体外，只有少量的苷类化合物经肠道细菌、酶分解为苷元后才发挥出疗效；非口服的苷类化合物，被人体吸收的苷还需经血液转运到肝脏，再通过肝肠循环，将苷水解为苷元再吸收入血而发挥疗效，但因为步骤较多，故也不能迅速发挥疗效。

因而，针对粉葛的药用价值，发明人提出一种新的药用物质，即粉葛总苷元。它是按现有技术从粉葛药材中提取得到粉葛总苷，对该有效部位进行水解，使其中的苷类物质脱去糖基，生成更具生物活性的苷元，即成为本发明所提供的粉葛总苷元。人体皮肤细胞膜及各种腔道粘膜具有类脂质特性，非极性强，一般脂溶性药物比水溶性药物易穿透皮肤，而且组织液是极性的，因此既有一定脂溶性又有一定水溶性的药物(分子具有极性基团和非极性基团)更易穿透。药物分子的大小对药物经皮吸收也有影响，小分子药物更易扩散，分子量大于600的药物较难透过角质层。可见，外用制剂宜选用分子量小，中等极性的药物，否则吸收和利用差，疗效极不理想。即使苷类透过粘膜和皮肤屏障进入血液，还需经过肝肠循环，将苷水解为苷元再吸收入血而发挥疗效，吸收少，疗效慢。发明人经研究证实，苷类水解成苷元后，所得苷元分子量变小，一般均在600以下，其极性减小，脂溶性增强；因此苷元易于透膜吸收，而且吸收迅速，疗效成倍增强，大大提高了药物的生物利用率，节约了药物资源。

在本发明提供的药物中，粉葛总苷元可以单独使用，也可以与其他药物成分联合使用，即：在药物活性成分中，可以只有粉葛总苷元纯品，也可以是粉葛总苷元粗品，还可以是粉葛总苷元与其他药物的混合物。本发明优选使用粉葛总苷元粗品，即从药材中提取粉葛总苷，再以适当方式水解，并根据需要进行精制，得到所需纯度。

上述的水解方法包括了酸水解、酶水解或微生物水解，发明人经过筛选，分别提供如下几种具体的水解方法：酸水解可以用1～10mol/L的盐酸、硫酸、醋酸及甲酸等进行水解；酶水解可以用苦杏仁酶、麦芽糖酶、转化糖酶、橙皮苷酶等进行水解；微生物可以用大肠杆菌、肠球菌、乳酸杆菌、梭状芽孢杆菌、畸形菌体、双岐杆菌及人体肠道正常菌群等进行水解。

本发明的第二目的是提供上述粉葛总苷元的药物制剂，尤其是一种高效制剂。由于本发明的第一目的中已解决了药物的吸收问题，所以本领域技术人员可以方便地将本发明的粉葛总苷元配合适当的辅料，制备成各种常规制剂。但是发明人还注意到另一个问题，即由于苷元的脂溶性相对较强，因而其制剂应用于人体后，其中的苷元成分不易被润湿和溶出，如果不能解决这一问题，也会影响苷元的吸收。所以，针对这一问题，发明人提供了一种新技术方案，可以保证将粉葛总苷元制成高效制剂，该技术方案是：

一种以本发明所述粉葛总苷元为活性成分的高效药物制剂，其辅料中含有吸收促进剂和/或润湿剂，并被制成的非口服制剂。

该技术方案的核心在于将粉葛总苷元用于药物制剂，并通过特殊辅料保证粉葛总苷元的高效利用。因而，体现到具体的药物制剂中，其药物活性成分中可以只有本发明的粉葛总苷元，也可以与其他药用或非药用物质配合使用，只要其目的是将所含的粉葛总苷元利用吸收促进剂和润湿剂进行润湿、分散，以制成非口服高效制剂，均应在本发明申请保护的范围内。同理，本发明技术方案选用吸收促进剂和润湿剂作为主要辅料，目的在于使粉葛总苷元得以充分、均匀的分散，利于吸收；在实际应用中，还可以根据需要加入其他常规辅料及成型辅料，如甘油明胶、聚乙二醇、西黄芪胶、甲基纤维素、乙基纤维素、结冷胶、压敏胶、三乙醇胺、甘油等，这些均应视为在本发明技术的基础上完成的工作，也应受本发明申请的保护。

在该技术方案中，吸收促进剂优选为氮酮、桉油或其混合物，润湿剂优选为卵磷脂、泊洛沙姆、丙二醇或它们之间的混合物。

其中，氮酮、桉油等作为药物吸收促进剂，能打开上皮细胞的紧密连接，促进药物有效成分快速、充分的吸收利用，增强药效。卵磷脂、泊洛沙姆、丙二醇等表面活性剂对粉葛总苷元有表面润湿的作用，降低表面张力，增加脂溶性的粉葛总苷元的溶解度，促进其迅速吸收利用，利于迅速发挥疗效。将本发明的粉葛提取物与上述辅料配合使用，充分混合均匀，可以增强其中粉葛总苷元的分散性、润湿性，提高其生物利用度。

在优选的情况下，本发明药物中各成分所占比例优选为本发明药物中各成分所占比例优选为活性成分10～50％，吸收促进剂0～5％，润湿剂1～10％，其他辅料40～89％；其中的其他辅料是指制剂在成型过程中的一些其他辅料，如甘油明胶、聚乙二醇、西黄芪胶、甲基纤维素、乙基纤维素、结冷胶、压敏胶、明胶、三乙醇胺、甘油、凡士林、羊毛脂、聚氯乙烯、乙醇、水等。

上述技术方案主要应用于非口服制剂，包括经皮给药制剂或粘膜及腔道给药制剂等，最适宜的剂型为凝胶剂、栓剂、软膏剂和贴剂。

本发明的第三目的是提供上述高效制剂的制备方法，其中的核心技术是将粉葛总苷元与所需辅料通过熔融、溶解、搅拌、研磨或超微粉碎混合中的任一种方法混合均匀后，再加入所需常规制剂辅料，按常规工艺制成制剂。而这里的混合方法优选振动磨超微粉碎混合的方法。

只有通过有效的混合方式，才能保证提取物中所含粉葛总苷元与特殊辅料充分分散均匀，应用于人体时才能够迅速润湿、溶出、吸收，发挥高效的作用。经发明人验证，熔融、溶解、搅拌、研磨或超微粉碎混合等方式，都能够实现本发明目的，而其中的超微粉碎方式效果最为突出。

虽然超微粉碎技术早已出现，但在中药技术领域的应用，一直停留于“粉碎”的概念上，始终没有突破，因而其范围很局限。发明人在实践中发现，超微粉碎技术已不仅仅是粉碎技术，更是一种高效混合技术，它可使苷元与辅料一起受到强烈的正向挤压力和切向剪切力的作用，运用高速、高能量进行粉碎、混合，所得到的粉末中心粒径由原来的75μm减小到10μm以下，粒度细腻、均匀，表面积增加，孔隙率增大，使药物粒子与辅料粒子充分接触、混合，既提高了药物粒子的分散度，又保证了其迅速润湿并溶出，大大提高了药物的吸收率和生物利用度，其优势是目前常规混合方法不可比拟的。在这其中，振动磨超微粉碎方式是实现本发明目的的最佳方法。

有益效果

本发明的粉葛总苷元，可用于治疗心血管疾病、高血压、脑血栓、头痛、糖尿病、更年期综合征及肿瘤疾病的药物中的应用。配合本发明的高效制剂手段，更可以充分发挥其功效。发明人通过以下动物实验，来说明本发明的突出效果。

一、粉葛总苷元对大鼠糖尿病症的影响

1.试验动物与药物

Wistar大鼠，雄性，体重220～250g，3～4月龄，由山东大学实验动物中心提供。

供试样品的制备：取粉葛5kg，粉碎，加70％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，滤过，滤液回收乙醇，水液加乙酸乙酯提取五次，合并乙酸乙酯液，蒸干，取1/2干燥物制备粉葛总苷制剂；其余1/2干燥物加10％盐酸，加热水解4小时，水解液加氢氧化钠调节至近中性，滤过，滤液备用；沉淀以70％乙醇提取一次，滤过，回收乙醇，与前述水液合并，继续浓缩，减压干燥，干燥物制备苷元的制剂。

粉葛总苷制剂为取粉葛总苷干燥物，加卵磷脂5g，并加S-40至100g，加热熔融，混匀，制成栓(0.5g/枚)。

粉葛总苷元制剂为取苷元的干燥物，加卵磷脂5g，并加S—40至100g，加热熔融，混匀，制成栓(0.5g/枚和0.25g/枚，供做高剂量组和低剂量组)。

2.主要试剂与仪器

链脲佐菌素(STZ)，美国Sigma公司产品

Unicheck血糖测试条，美国Diagnlstic Solutions Inc公司产品

One Touch血糖仪，美国Scanl ife公司产品

AL204型万分之一电子天平。

3.试验方法

3.1 糖尿病大鼠病理模型制备

选取大鼠55只，造模前于自然光线、自由饮水、自由摄食条件下训练1周。随机抽取9只为正常对照组(正常组)，9只为预防给药组(预防组)，造模前4d给予本发明药物，1次/d共5周。4d后与剩余30只一起制备糖尿病病理模型。造模前先更换笼具，禁食(不禁水)12h，然后将STZ溶于配制好的柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液中，配成浓度为2％的溶液，按STZ50mg/kg的剂量行腹腔注射，72h后取尾血，用One touch血糖仪测定其空腹血糖(FBG)，FBG≥11.11mmol/L者确定为造模成功。正常对照组从腹腔注射相同条件下等体积的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。

3.2 试验方法

随机抽取10只大鼠为正常对照组(正常组)。剩余45只，造模成功40只，再依血糖水平随机分为模型组、粉葛总苷元低剂量组、粉葛总苷元高剂量组、粉葛苷组4组，每组各10只。

再按以下方法处理：正常组：直肠给药基质栓，1次/d，共4周。模型组：直肠给药基质栓，造模成功后给予，1次/d，共4周。粉葛总苷元低剂量组：直肠给药粉葛总苷元低剂量栓，造模前4d开始给药，1次/d，共5周。粉葛总苷元高剂量组：直肠给药粉葛总苷元高剂量栓，造模成功后给药，1次/d，共4周。粉葛苷组：直肠给药粉葛苷栓，造模成功后给药，1次/d，共4周。

3.3 观察指标与方法

大鼠每周测体重1次，并加以记录。分别于造模后第0周、第4周末取血，禁食不禁水12h，采血测空腹血糖。方法：测血糖前5min把大鼠置于设置温度为40℃的电热恒稳鼓风干燥箱中，然后取出，置于大鼠台上，用锐利刀片切断大鼠尾尖，弃去第1滴血，取第2滴血，用血糖仪测定血糖。

4.结果

4.1 各组大鼠体重比较

表1  粉葛总苷元对大鼠体重的影响(g，x±s)

注：与正常组比较：^*P<0.05，^**P<0.01；与模型组比较，^*P<0.05

上表结果表明，第0周，各实验组大鼠的体重无明显差异(P>0.05)，说明随机分组均衡合理。第4周末体重变化率，各造模组与正常组比较均有显著差异(P<0.05或P<0.01)，给药各组和模型组比较有显著差异(P<0.05)。给药各组之间比较无差异。

4.2 各组大鼠血糖水平比较

表2  粉葛总苷元对大鼠试验性血糖的影响(x±s)

注：与正常组比较，P<0.05，P<0.01；与模型组比较，^*P<0.05，^**P<0.01；与苷元高剂量比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。

上表结果表明，第0周、第4周末的给药组的FBG水平均显著高于同期正常组(P<0.01或P<0.05)，说明本实验造模模型稳定可靠。第4周末FBG及其变化率，粉葛总苷元高、低剂量组、粉葛苷组与模型组差异显著(P<0.01)，说明治疗有效。且粉葛总苷元高、低剂量的高效制剂组的效果尤为显著。

结果表明，本发明中的粉葛总苷元药物可以提高大鼠的营养水平，遏制病鼠因肌肉组织的新陈代谢紊乱而导致的逐渐消瘦的进程，阻止病鼠脾胃功能的下降趋势、促进其脾胃的运化功能、改善病鼠的糖代谢，并能明显降低大鼠造模成功后的血糖。

二、抗大鼠静脉血栓形成的作用

1、材料

1.1 动物  Wister大鼠40只，雌雄各半，体重200±20g。由山东大学实验动物中心提供。

1.2 药品与试剂

供试样品的制备取粉葛5kg，粉碎，加70％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，滤过，滤液回收乙醇，水液加乙酸乙酯提取五次，合并乙酸乙酯液，蒸干，取1/2干燥物制备粉葛总苷制剂；其余1/2干燥物加10％盐酸，加热水解4小时，水解液加氢氧化钠调节至近中性，滤过，滤液备用；沉淀以70％乙醇提取一次，滤过，回收乙醇，与前述水液合并，继续浓缩，减压干燥，干燥物制备苷元的制剂。

粉葛总苷制剂为取粉葛苷干燥物，加卵磷脂5g，并加S-40至100g，加热熔融，混匀，制成栓(0.5g/枚)。

粉葛总苷元制剂为取粉葛总苷元的干燥物，加卵磷脂5g，并加S—40至100g，加热熔融，混匀，制成栓(0.5g/枚和0.25g/枚，供做高剂量组和低剂量组)。

2、方法与结果

2.1 试验方法  取Wistar大鼠40只，雌雄各半，体重200±20g，随机分为4组，每组10只：粉葛总苷元低剂量组、粉葛总苷元高剂量组、粉葛苷组、空白对照组，每天直肠给药相应栓剂1枚，空白对照组和模型组给予空白基质栓，连续7天。末次给药6h后，用内径为1mm的玻璃毛细管插入鼠内眦静脉丛取血，至毛细管血柱达5cm，每隔30s折断毛细管一段，检查有无出现凝血丝，计算毛细管采血到出现血凝丝时间，即为凝血时间。

2.2 试验结果结果见下表。

表3  粉葛总苷元对大鼠静脉血栓形成的影响(X±S)

注：与空白对照组比较(t检验)，^*P<0.05，^**P<0.01，^***P<0.001。

以上试验结果表明，粉葛总苷元的高、低剂量组均可明显延长凝血时间，与空白对照组比较具有显著性差异，均较粉葛苷组效果好。且粉葛总苷元大、小剂量的高效制剂组效果尤为显著。

三、粉葛总苷元对小鼠移植性肿瘤S₁₈₀的抑制作用研究

1、材料

动物：昆明种小鼠，体重18～22g，雌性兼有，由山东大学实验动物中心提供。腹水型肉瘤S₁₈₀由山东大学实验动物中心提供。

供试样品的制备  取粉葛5kg，粉碎，加70％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，滤过，滤液回收乙醇，水液过D101大孔树脂柱，用70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，余水液取1/2制备粉葛总苷制剂，其余1/2用β-糖苷酶水解24小时，水解液过D101大孔树脂柱，用70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，回收乙醇，减压干燥，干燥物制备苷元制剂。

粉葛总苷制剂：取乙基纤维素2g加水润胀24小时，加三乙醇胺5g，搅匀，加入苷元干燥物、氮酮2g、卵磷脂5g，并加水至100g，混合均匀，即得；

粉葛总苷元制剂：取乙基纤维素2g加水润胀24小时，加三乙醇胺5g，搅匀，加入苷元干燥物、氮酮2g、卵磷脂5g，并加水至100g，混合均匀，即得，作为苷元高剂量组；另取50g，加水至100g，作为苷元低剂量组。

2、方法

小鼠40只，在无菌条件下取生长7～9d的小鼠腹水型移植性肿瘤S₁₈₀，以1:3生理盐水稀释，接种于小鼠腋窝皮下0.2ml每只，接种次日按体重随机分成4组，分别为基质组、粉葛总苷元小剂量组、粉葛总苷元大剂量组、粉葛苷组。各组小鼠用脱毛剂脱去背部毛，清水洗净皮肤表面，分别涂抹相应量的药物；接种后第11天，脱椎，处死小鼠，称重，剥离其瘤块并称瘤重，计算抑瘤率(IR)。

IR＝(对照组平均瘤重—给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％

(当IR>30％和P<0.05时，评定药物有一定疗效。)

试验结果见表4。

表4  粉葛总苷元对小鼠S₁₈₀的抑制作用

以上试验结果表明，粉葛总苷元的各组均可明显抑制肿瘤的增长，与空白对照组、总苷组比较具有显著性差异，且粉葛总苷元大、小剂量的高效制剂组效果尤为显著。

四、粉葛总苷元对酒石酸锑钾致小鼠扭体反应的影响

1、材料

1.1 动物  昆明种小鼠，由山东大学实验动物中心提供。

1.2 药品与试剂

供试样品的制备  取粉葛5kg，粗粉碎，加70％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，水液以乙酸乙酯提取四次，乙酸乙酯液蒸干，取1/2的干燥物制备粉葛总苷制剂；其余1/2的加水溶解，115℃灭菌20min，以乳酸菌菌种发酵水解72小时，水解液加于AB-8大孔吸附树脂柱上，以70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，减压干燥，干燥物制备苷元制剂。

粉葛总苷制剂：取卡波姆加水润胀24小时，以三乙醇胺调pH为7，放置12小时，再以三乙醇胺调pH为7，作为基质；再加入粉葛苷干燥物、氮酮5g、卵磷脂10g，并加水至100g，混合均匀，即得；

粉葛总苷元制剂：取卡波姆加水润胀24小时，以三乙醇胺调pH为7，放置12小时，再以三乙醇胺调pH为7，作为基质；加入苷元干燥物、氮酮5g、卵磷脂10g，并加水至100g，混合均匀，即得，作为苷元高剂量组；另取50g，加水至100g，混匀，作为苷元低剂量组。

2 方法与结果

2.1 试验方法

将体重25g±2g的小白鼠用脱毛剂脱去背部毛，清水洗净皮肤表面，静养24h，取40只，雌雄各半，随机均匀分为4组，即空白组、粉葛总苷元高剂量组、粉葛总苷元低剂量组、粉葛苷组，分别于脱毛处涂抹生理盐水、粉葛总苷元高剂量组、粉葛总苷元低剂量组、粉葛苷组，每鼠腹腔注射新配制的酒石酸锑钾液，立即观察小鼠首次出现扭体反应的潜伏期及10min内小鼠扭体发生数。

2.2 试验结果结果见下表。

表5  粉葛总苷元对酒石酸锑钾所致小鼠扭体反应的影响(X±S)

注：与空白对照组比，*P<0.05，**P<0.01。

以上试验结果表明，粉葛总苷元的高、中剂量组均可明显延长小鼠首次发生扭体的潜伏期，减少小鼠扭体次数，与空白对照组比较具有显著性差异；且粉葛总苷元高效制剂的高、低制剂组效果尤为显著。

五、粉葛总苷元对高血压大鼠的降压作用

1、材料

1.1 动物  SD大鼠，由山东大学实验动物中心提供。

1.2 药品与试剂

供试样品的制备(同实验2)。

阳性药(卡托普利)：取卡托普利10g，加泊洛沙姆5g，并加S40至100g，加热熔融，混合均匀，制成栓剂，即得。

2、方法与结果

2.1 造模方法  取健康雄性大鼠60只，体重180～220g，随机分为6组，每组10只：总苷元高剂量组、总苷元低剂量组、总苷制剂组、阳性药组、正常对照组、模型组，采用电击足底作为单一应激源对大鼠进行应激刺激，刺激强度为30～48.5V，频率0.5Hz，将大鼠放于自制分格式电击鼠箱，并连接应激源，除正常对照组外，其余实验组大鼠每天上午8:00～10:00、下午2:00～4:00各接受1次应激刺激，共4周，最后一次施以应激刺激后2～5h内用尾套法测量尾动脉收缩压(即将大鼠置于软棉垫上后，尾部加热，将压脉套套至大鼠尾部近心端，换能器置于鼠尾中上部1/3处，打开记录系统，等有规律脉搏出现以后，利用充气球使套内压力升高到搏动完全消失，然后缓慢放气，仔细观察并读取脉搏波从无到开始出现时所对应的压力值，此即大鼠收缩压(mmHg)，重复3次，取平均值)。

2.2 实验方法  将造模成后的各组高血压大鼠及正常对照组的10只健康雄性大鼠直肠给予相应供试品1枚，正常对照组和模型组给予相应的空白基质栓剂，每天1次，连续给药3天后，以1％戊巴比妥腹腔麻醉(5mg/kg)，颈动脉插管取血，测定收缩压。

2.3 实验结果  实验结果见表6。

表6  对高血压大鼠收缩压的影响(X±S)

注：与模型组比较，^*P<0.05，^**P<0.01。

以上试验结果表明，模型组与正常对照组比较，收缩压增高有显著性差异，显示造模成功。粉葛总苷元的高剂量、阳性药组可明显降低高血压大鼠的收缩压，与空白对照组比较具有极显著性差异，较总苷元低剂量组、总苷制剂组效果好；总苷元低剂量组与空白对照组比较具有显著性差异，较总苷制剂组效果好。且粉葛总苷元的高、低剂量的高效制剂的效果尤为显著。

六、对MCAT大鼠脑梗塞范围的影响

1 实验材料

1.1 动物

Wistar大鼠，体重260-300g。由北京大学实验动物中心提供。

1.2 供试样品(同实验2)

1.3 试剂与仪器

FeCI₃(A.R.)，批号：20020128，广东山头市西陇化工厂

红四氮唑(TTC)，A.R.，北京化学试剂公司

AO光学显微镜，美国产品；

愠温水浴，HH.W21.Cu600，上海跃进医疗器械厂；

电子天平，JUPITER S2 160A型，日本生产。

2 实验方法

2.1 分组及给药

取Wistar大鼠60只，分为5组(即假手术组、MCAT模型组、粉葛总苷元高剂量组、粉葛总苷元低剂量组、粉葛总苷组)，每组10只，雌雄各半。各组大鼠直肠给予相应栓剂1枚，正常对照组和模型组给予相应的空白基质栓剂，每天1次，连续给药5天。

2.2 实验方法

大鼠腹腔注射3％异戊巴比妥0.1ml/100g麻醉。按Tamura方法，稍加改进。大鼠右侧卧位固定，在眼外眦和耳道连线中点作一弧形切口，长约1.5cm，夹断颞肌并切除，暴露颞骨，用牙科钻在颧骨和颞骨接合处靠近口侧1mm处作一直径2.5mm骨窗，清理残渣，暴露大脑中动脉(位于嗅束及大脑下静脉之间)。置一小片塑料薄膜保护血管周围组织。将吸有50％三氯化铁溶液10μl的小片定量滤纸敷在此段大脑中动脉上，30min后取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，回笼饲养。假手术组大鼠除不滴加三氯化铁溶液外，其余手术步骤同模型组。

2.3 脑梗塞范围测定

最后一次给药12小时后，断头取脑。去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩余部分在4℃以下冠状切成5片。迅速将脑片置于TTC染液中(每5ml染料中含4％TTC1.5ml，1MK₂HPO₄0.1ml)，37℃避光温孵30min，再取出，置于甲醛中避光保存。经染色后非缺血区为玟瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占总脑重量的百分比作为脑梗塞范围。

3 实验结果

试验结果进行组间比较，t检验，结果见表7。

表7  对MCAT大鼠脑组织梗塞范围的影响(X±SD)

注：与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01。

结果显示，除假手术组未见异常改变外，血栓模型组大鼠及各给药组大鼠均有不同程度梗塞。粉葛总苷元的各剂量组均可明显减少梗塞程度，与模型组比较有显著差异。且粉葛总苷元高、低剂量的高效制剂组效果尤为显著。

具体实施方式

下面列举实施例，进一步说明本发明，各实施例仅用于说明本发明，并不限制本发明：

实施例1

取粉葛总苷元50g，加入泊洛沙姆5g、聚乙二醇60020g，并加聚乙二醇4000至500g，加热熔融，研磨混匀，制成1000枚栓剂，即得。

实施例2

取卡波姆5g，加水润胀24小时，加三乙醇胺调pH到8，搅匀，加入粉葛总苷元120g、断血流总苷元30g、氮酮12.5g、丙二醇5g，并加水至500g，振动磨超微粉碎50分钟，制成凝胶剂。

实施例3

取粉葛总苷元100g，加入卵磷脂5g、丙二醇5g、桉油5g、氮酮5g，并加羊毛脂至200g，振动磨超微粉碎60分钟，分装，制成软膏剂。

实施例4

取粉葛总苷元50g，用乙酸乙酯—乙醇—丙酮混合溶液溶解，加入压敏胶100g，混合均匀；另取压敏胶75g，加卵磷脂10g、丙二醇10g、泊洛沙姆5g，加乙酸乙酯—乙醇—丙酮混合溶液溶解，与前述的药物压敏胶溶液一起用振动磨超微粉碎20分钟，混合均匀，静置，在涂布机上涂膜，干燥，制成贴剂。

实施例5

取粉葛5kg，粉碎，加70％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，滤过，滤液回收乙醇，水液过D101大孔树脂柱，用70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，余水液用β-糖苷酶水解24小时，水解液过D101大孔树脂柱，用70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，回收乙醇，减压干燥，得到粉葛总苷元提取物(含粉葛总苷元65％以上，其余为未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副产物)，加入卵磷脂10g、泊洛沙姆15g、丙二醇5g，并加S-40至500g，加热熔融，保温下振动磨超微粉碎30分钟混匀，制成1000枚栓剂，即得。

实施例6

取粉葛5kg，粉碎，加80％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，滤过，滤液回收乙醇，水液加乙酸乙酯提取五次，合并乙酸乙酯液，蒸干，加10％盐酸，加热水解4小时，水解液加氢氧化钠调节至近中性，滤过，滤液备用；沉淀以70％乙醇提取一次，滤过，回收乙醇，与前述水液合并，继续浓缩，减压干燥，得到粉葛总苷元提取物(含粉葛总苷元55％以上，其余为未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副产物)，加乙酸乙酯—乙醇—丙酮混合溶液溶解，加入压敏胶250g，混合均匀；另取压敏胶110g，加泊洛沙姆10g、桉油10g、氮酮10g，加乙酸乙酯—乙醇—丙酮混合溶液溶解，与前述的药物压敏胶溶液一起用振动磨超微粉碎70分钟，混合均匀，静置，在涂布机上涂膜，干燥，制成贴片。

实施例7

取粉葛5kg，粗粉碎，加70％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，水液以乙酸乙酯提取四次，乙酸乙酯液蒸干，取干燥物加水溶解，115℃灭菌20min，以乳酸菌菌种发酵水解72小时，水解液加于AB-8大孔吸附树脂柱上，以70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，减压干燥，得到粉葛总苷元提取物(含粉葛总苷元70％以上，其余为未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副产物)，加入黄芪总苷元20g，丙二醇5g、卵磷脂5g、氮酮7g，并加羊毛脂至500g，搅拌均匀，分装，制成软膏剂。

实施例8

取粉葛5kg，粗粉碎，加8倍量水煎煮三次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)的清膏，加乙醇至含醇量达60％，静置过夜，取上清液减压回收乙醇，余水液以水饱和正丁醇提取三次，正丁醇液蒸干，干燥物加水溶解，以乳酸菌菌种水解24小时，水解液加于D101大孔吸附树脂柱上，分别以水、30％乙醇、80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，减压干燥，得到粉葛总苷元提取物(含粉葛总苷元65％以上，其余为未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副产物)。取甲基纤维素8g，加水润胀24小时，搅匀，加入上述粉葛总苷元提取物，加卵磷脂10g、泊洛沙姆20g，并加水至500g，振动磨超微40分钟，混合均匀，制成凝胶剂。

实施例9

取实施例5所制栓剂治疗65例头痛患者。治疗方案：每日一次，每次一枚，使用7天后，治愈率为41.3％，显效率为50.4％，总有效率为91.7％。

实施例10

取实施例6所制贴片治疗82例高血压患者。治疗方案：每日一贴。15天为一个疗程，3个疗程后统计结果，治愈72例，好转7例，总有效率为96.3％。

实施例11

取实施例1所制栓剂治脑血栓患者125例。治疗方案：每天1次，每次一枚，2周为一个疗程，2个疗程后统计治疗结果，总有效率为88.1％。

Claims (13)

1、一种以粉葛总苷元为活性成分的非口服药物。

2、根据权利要求1所述的药物，其特征在于所述活性成分中可以只有粉葛总苷元，也可以是粉葛总苷元与其他药物成分联合使用。

3、根据权利要求2所述的药物，其特征在于所述粉葛总苷元是通过水解粉葛总苷而得到的。

4、根据权利要求3所述的药物，其特征在于水解方法为酸水解、酶水解或微生物水解。

5、根据权利要求1至4中任一项所述的药物，其特征在于药物活性成分与药剂学上可接受的辅料配合使用。

6、根据权利要求5所述的药物，其特征在于辅料中含有吸收促进剂和/或润湿剂。

7、根据权利要求6所述的药物，其特征在于辅料中的吸收促进剂是指氮酮和/或桉油，润湿剂是指卵磷脂、泊洛沙姆、丙二醇中的一种或二种以上的混合物。

8、根据权利要求7所述的药物，其特征在于药物活性成分与辅料的组成比例为：

活性成分              10～50％，

吸收促进剂            0～5％，

润湿剂                1～10％，

其他辅料              40～89％。

9、根据权利要求8所述的药物，其特征在于被制成经皮给药制剂或粘膜及腔道给药制剂。

10、根据权利要求9所述的药物，其特征在于被制成凝胶剂、栓剂、软膏剂或贴剂。

11、制备权利要求6至10中任一项所述药物的方法，其特征在于将药物活性成分与所需辅料通过熔融、溶解、搅拌、研磨或超微粉碎混合中的任一种方法混合均匀后，再加入所需常规制剂辅料，按常规工艺制成制剂。

12、根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于药物活性成分与所需辅料通过振动磨超微粉碎方法混合。

13、权利要求1至4中任一项所述药物在制备用于治疗心血管疾病、高血压、脑血栓、头痛、糖尿病、更年期综合征或肿瘤疾病的药物中的应用。