CN101506174A - 基于哒嗪酮骨架的半胱天冬蛋白酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

发明涉及可以用作半胱天冬蛋白酶抑制剂的哒嗪酮衍生物、其制备方法、以及包括所述哒嗪酮衍生物的用于抑制半胱天冬蛋白酶的药物组合物。

Description

基于哒嗪酮骨架的半胱天冬蛋白酶抑制剂
技术领域
本发明涉及作为各种半胱天冬蛋白酶的抑制剂的哒嗪酮衍生物或其药学可接受的盐，以及包括所述哒嗪酮衍生物或其药学可接受的盐的用于抑制半胱天冬蛋白酶的药物组合物，所述半胱天冬蛋白酶包括半胱天冬蛋白酶-1[白细胞间介素-1β-转换酶，ICE]、半胱天冬蛋白酶-3[细胞凋亡蛋白酶/CPP-32]、半胱天冬蛋白酶-8、和半胱天冬蛋白酶-9。
背景技术
半胱天冬蛋白酶是在过去10年间发现的α2β2四聚体形式的一类新的半胱氨酸蛋白酶。至今已知其约14个种类。作为其中之一的半胱天冬蛋白酶-1(ICE)是一种细胞因子，其参与生物学非活性的白细胞介素前体-1β(prointerleukin-1β)到活性的白细胞介素-1β的转化。白细胞介素-1由白细胞介素-1α和白细胞介素-1β组成，二者都是作为31KDa前体的形式在单核细胞中合成。只有白细胞介素前体-1β可以被ICE活化。被半胱天冬蛋白酶-1水解的位置是Asp27-Gly28和Asp116-Ala117。后一位置的水解得到白细胞介素-1β。据报道，白细胞介素-1β在引起炎症的过程中作为重要的介体起作用(1，3)。半胱天冬蛋白酶-1在1989年首次发现，由两个独立的研究组通过X射线结晶学的方法测定了其三维结构。
半胱天冬蛋白酶-3(CPP-32)在其作用或作用机制方面得到了广泛研究，并且在1996年测定了其三维结构(2)。从半胱天冬蛋白酶前体-3(procaspase-3)活化的半胱天冬蛋白酶-3(细胞凋亡蛋白酶)在(P4)Asp-X-X-Asp(P1)基序的位置水解，并且已知的底物包括聚(ADP-核糖)聚合酶、U1 70,000Mr核小核糖核蛋白、460,000Mr DNA-依赖性蛋白激酶的催化亚单位等。已经报道了半胱天冬蛋白酶-7的X射线衍射结构与半胱天冬蛋白酶-3非常相似(4)。
半胱天冬蛋白酶-8和9存在于半胱天冬蛋白酶-3，6，7的上游，并且已知所有这些半胱天冬蛋白酶都参与凋亡级联。半胱天冬蛋白酶-8的X射线衍射结构在1999年得到确定(5)，特别是其抑制剂可能有利地用于治疗与细胞程序死亡有关的疾病。
半胱天冬蛋白酶抑制剂是指抑制半胱天冬蛋白酶活性并且用于控制由半胱天冬蛋白酶活性引起的诸如炎症、细胞程序死亡等症状的那些化合物。可以通过给予该抑制剂治疗或减轻的疾病或症状包括以下那些：痴呆、脑中风、由于AIDS引起的脑损伤、糖尿病、胃溃疡、肝炎病毒引起的脑损伤、肝炎诱导的肝脏疾病、急性肝炎、暴发性肝衰竭、脓毒病、器官移植排斥、风湿性关节炎、缺血性心脏病、和肝硬化(6)。
在直到现在已知的半胱天冬蛋白酶抑制剂中，最著名的不可逆抑制剂是以下的那些：
Figure A200780031549D00061
上述两种抑制剂都基于不可逆地灭活酶来抑制细胞程序死亡的共同机制来表现其活性(不可逆的广谱抑制剂)。已经报道了不可逆抑制剂具有比可逆抑制剂更有效的抑制活性(7)。据报道，IDUN Co.的IDN-1965和Maxim Co.的MX-1013二者都在肝损伤的细胞程序死亡模型中表现出活性(8，9)。这些化合物现在处于临床前试验的阶段。不可逆抑制剂IDN-6556现在处于肝损伤治疗剂的II期临床试验阶段(10，11)。
Figure A200780031549D00062
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发明内容
技术主题
本发明人进行了广泛的研究以便设计可用作有效的和更具选择性的半胱天冬蛋白酶抑制剂的新的化合物。
技术方案
为了实现这一主题，本发明人合成多种化合物，并且测定它们对半胱天冬蛋白酶的结合能力和抑制活性。结果，发明人发现，以下式(1)的化合物满足这种要求，从而完成了本发明。
式1
Figure A200780031549D00101
其中
R、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和X如以下定义。
因此，本发明提供具有有效的半胱天冬蛋白酶抑制活性的式(1)的新的哒嗪酮衍生物或其药学可接受的盐。
本发明的另一个目的是提供用于抑制半胱天冬蛋白酶的药物组合物，特别是用于预防炎症和细胞程序死亡的组合物，其包括式(1)的化合物或其药学可接受的盐作为活性成分以及药学可接受的载体。
有益效果
本发明的式(I)的化合物具有优异的半胱天冬蛋白酶抑制活性，因此可以有利地用于由半胱天冬蛋白酶介导的各种疾病和症状。
具体实施方式
首先，在本发明中使用的重要的术语定义如下：
a)C1-C5-烃基：具有1-5个碳原子的直链或支链的烃，其包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基等。
b)C3-C10-环烃基：具有3-10个碳原子的环状烃，其包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
c)芳基：芳基包括所有的芳香族基团、杂芳族基团、和它们的部分还原的衍生物。芳香族基团是指5-15元的单不饱和烃或稠合的不饱和烃。杂芳族基团是指包含1-5个选自氧、硫、和氮的杂原子的芳香族基团。芳基包括但不限于苯基、萘基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、咪唑啉基、异噁唑基、噁唑基、噻唑基等。
所述C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基或芳基中的一个或多个氢可以替换为选自以下的基团：酰基、氨基、烷氧羰基、羧基、羧基氨基、氰基、卤代基、羟基、硝基、硫基、烷基、环烷基、烷氧基、芳基、芳基氧基、硫氧基、和胍基基团。
d)天然的氨基酸包括以下：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、和色氨酸。
另外，本说明书中包括以下缩写：
N-溴代琥珀酰亚胺：NBS
O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐]：HATU
N，N-二甲基甲酰胺：DMF
二甲基亚砜：DMSO
N-甲基吗啉：NMM
2，2′-偶氮双(2-甲基丙腈)：AIBN
2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧基、自由基：TEMPO
双(三甲基甲硅烷基)氨基锂：LiHMDS
N-(2-羟基乙基)哌嗪-N’-(2’-乙烷磺酸)：HEPES
3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基氨基]-1-丙烷磺酸酯：CHAPS
乙二胺四乙酸：EDTA
二硫苏糖醇：DTT
以下更详细地说明本发明。本发明的一个方面涉及以下式(1)的哒嗪酮衍生物：
[式1]
其中
I)R1表示H、C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、芳基、或所有天然氨基酸的侧链残基，
II)R2表示H、C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、芳基、或所有天然氨基酸的侧链残基，
III)R3表示H、C1-C5-烃基、羟基、C1-C5-烃氧基、或卤素，
IV)R4表示H、C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、或芳基，
V)R5表示H、C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、或芳基，
VI)R6和R7彼此独立地表示H、C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、或芳基，
VII)X表示-CH2OR9(R9为C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、或芳基)，-CH2OC(＝O)R10(R10为C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、或芳基)，-CH2-OP(＝O)R11 2(R11为C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、或芳基)，或-CH2-W(W为卤素)，或其药学可接受的盐，其可用作半胱天冬蛋白酶抑制剂。
在本发明的式(I)的化合物中，R1优选表示所有天然氨基酸的侧链残基、更优选为-CH2COOH。在R1所连接的碳由于R1基团而变为立体中心时，式(1)的化合物可以包括两类立体异构体、或其混合物(非对映体混合物)。在R1为包含羧基部分的氨基酸侧链残基时，式(1)的化合物可以包括酯的形式(-CO2Y，其中Y为C1-C5-烃基)，磺酰胺形式(-CONHSO2Z，其中Z为C1-C5-烃基)，和药学可接受盐的形式；或在R1是包含碱性部分的氨基酸的侧链残基时，式(1)的化合物也可以作为药学可接受的盐的形式存在。
在R1为-CH2COOH时，本发明的化合物(式1a)可以作为环状缩酮形式(式1b)存在，因此本领域技术人员应该理解，本发明包括所述环状缩酮形式(式1b)。
Figure A200780031549D00131
另外，应该理解，所述化合物的平衡形式涵盖了其互变异构形式。
R2优选表示C1-C5-烃基、更优选为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、或叔丁基。在R2所连接的碳由于R2基团而变为立构中心时，式(1)的化合物可以包括两类立体异构体或其混合物(非对映体混合物)。在R2为包含羧基部分的氨基酸侧链残基时，式(1)的化合物可以包括酯的形式(-CO2Y，其中Y为C1-C5-烃基)，磺酰胺形式(-CONHSO2Z，其中Z为C1-C5-烃基)，和药学可接受盐的形式；或者在R2是包含碱性部分的氨基酸的侧链残基时，式(1)的化合物也可以作为药学可接受的盐的形式存在。
R3优选表示H、C1-C5-烃基、C1-C5-烃氧基、或卤素，更优选为H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、或叔丁基、甲氧基、乙氧基、氟、或氯。
R4优选表示H。
R5优选表示被取代的C1-C5-烃基，取代基选自被取代的或未被取代的C3-C10-环烃基或被取代的或未被取代的芳基；或者表示被取代的或未被取代的芳基。R5更优选表示被C3-C10-环烃基或芳基取代的C1-C5-烃基，所述C3-C10-环烃基为未被取代的或被选自以下的一个或多个取代基取代：C1-C5-烃基、羟基、C1-C5-烃氧基和卤素，所述芳基为未被取代的或被选自以下的一个或多个取代基取代：C1-C5-烃基、羟基、C1-C5-烃氧基和卤素；或者表示为未被取代的或被选自以下的一个或多个取代基取代的芳基：C1-C5-烃基、羟基、C1-C5-烃氧基和卤素。例如，R5为苯基、萘基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、咪唑啉基、异噁唑基、噁唑基或噻唑基，或者是被苯基、萘基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、咪唑啉基、异噁唑基、噁唑基、噻唑基或环己基取代的甲基，其每一个为未被取代的或被选自以下的一个或多个取代基取代：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、三卤代甲基和卤素。
R6和R7各自优选表示H。
R9优选表示被一个或多个卤素取代的芳基，更优选为被一个或多个氟取代的苯基，并且最优选为2，3，5，6-四氟苯基、2，3，6-三氟苯基或2，6-二氟苯基。
R10优选表示被一个或多个卤素取代的芳基，更优选为被一个或多个氯取代的苯基，最优选为2，6-二氯苯基。
R11优选表示芳基、更优选为苯基。
W优选表示F。
最优选的化合物选自以下：
5-氟-3-[2-(5-甲基-3-氧代-2-苯基-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-4-氧代-戊酸(1)；
3-[2-(2-苄基-5-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸(2)；
3-[2-(2-苄基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸(3)；
3-[2-(2-苄基-5-氯-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸(4)；
3-[2-(2-苄基-5-甲氧基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸(5)；
3-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-5-氟-4-氧代-戊酸(6)；
3-2-[2-(3-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-5-氟-4-氧代-戊酸(7)；
5-氟-3-2-[2-(2-甲基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-4-氧代-戊酸(8)；
5-氟-3-2-[2-(3-甲基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-4-氧代-戊酸(9)；
5-氟-3-2-[2-(3-甲氧基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-4-氧代-戊酸(10)；
5-氟-3-[2-(2-萘-1-基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-4-氧代-戊酸(11)；
5-氟-3-[2-(2-萘-2-基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-4-氧代-戊酸(12)；
5-氟-3-2-[2-(2-甲基-噁唑-4-基甲基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-4-氧代-戊酸(13)；
5-氟-3-2-[2-(2-甲基-噻唑-4-基甲基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-4-氧代-戊酸(14)；
3-2-[2-(3，5-二甲基-异噁唑-4-基甲基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-5-氟-4-氧代-戊酸(15)；
3-[2-(2-环己基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸(16)；
5-氟-3-[2-(2-异喹啉-1-基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-4-氧代-戊酸(17)；
3-{2-[2-(2-氯-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸(18)；
3-{2-[2-(3-氯-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸(19)；
3-{2-[2-(3-溴-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸(20)；
5-氟-4-氧代-3-{2-[3-氧代-2-(2-三氟甲基-苄基)-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-戊酸(21)；
5-氟-4-氧代-3-{2-[3-氧代-2-(3-三氟甲基-苄基)-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-戊酸(22)；
2，6-二氯-苯甲酸(S)-3-{(R)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-羧基-2-氧代-丁酯和2，6-二氯-苯甲酸(S)-3-{(S)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-羧基-2-氧代-丁酯(23-1、23-2)；
(S)-3-{(R)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟-苯氧基)-戊酸和(S)-3-{(S)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟-苯氧基)-戊酸(24-1、24-2)；
(S)-3-{(R)-2-[2-(3-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟-苯氧基)-戊酸和(S)-3-{(S)-2-[2-(3-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟-苯氧基)-戊酸(25-1、25-2)；
(S)-3-{(R)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，6-三氟-苯氧基)-戊酸和(S)-3-{(S)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，6-三氟-苯氧基)-戊酸(26-1、26-2)；
(S)-3-{(R)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-(2，6-二氟-苯氧基)-4-氧代-戊酸和(S)-3-{(S)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-(2，6-二氟-苯氧基)-4-氧代-戊酸(27-1、27-2)；和
(S)-3-{2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-(二苯基-次膦酰基氧基)-4-氧代-戊酸(28)。
表现出半胱天冬蛋白酶抑制活性的式(1)的新的哒嗪酮衍生物的制备方法描述在以下反应图解1-4中。然而，在以下反应图解中说明的那些只是表示用于本发明的典型方法。操作顺序、试剂、反应条件、溶剂等可以进行变化而无限制。
反应图解1
Figure A200780031549D00171
在上述反应图解1中，烷基醛(2)(例如丙醛)和仲胺(例如二乙胺)在硫酸镁的存在下脱水，得到烯胺化合物(3)。这个烯胺(3)与马来酸二烷酯(例如马来酸二甲酯)在适合的溶剂(例如二氯甲烷)中反应，并且用乙酸处理，得到醛化合物(4)。然后，醛化合物(4)和水合肼在适合的溶剂(例如乙醇)中反应，得到二氢哒嗪酮化合物(5)。所述二氢哒嗪酮化合物(5)在适合的溶剂(例如二氯甲烷)中用适合的氧化剂(例如亚硫酰二氯)氧化，得到期望的哒嗪酮结构的化合物(6)。
反应图解2
Figure A200780031549D00181
在上述反应图解2中，将4，5-二氯-3(2H)-哒嗪酮(7)用甲氧基甲基保护基(8)保护，并且与丙二酸二乙酯和乙醇钠反应，得到丙二酸二乙酯的衍生物(9)。将衍生物(9)在DMSO中与NaCl加热，得到单乙酸酯(10)。将如此得到的单乙酸酯(10)在氢气气氛下用Pd/C处理，以合成衍生物(11)。衍生物(11)用BBr3脱保护，并将得到的衍生物(12)与适合的烷基卤化物反应，得到衍生物(13)。衍生物(13)与LiHMDS和适合的烷基卤化物反应，得到衍生物(14)，如有必要，进一步将衍生物(14)水解，得到没有保护基的羧酸衍生物(15)。
反应图解3
Figure A200780031549D00191
在反应图解3和4中，Z表示-OR9(R9为C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基或芳基)、-OC(＝O)R10(R10为C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基或芳基)、或-W(W为卤素)。
如上述反应图解3中所述，使羧酸衍生物(15)与天冬氨酸衍生物(18)偶联(参见以下反应图解4)，得到化合物(16)，然后使化合物(16)经过Dess-Martin高碘化物氧化反应，并且在需要的情况下经过脱保护反应，得到期望的式(1)的化合物。
反应图解3的化合物(1)中的官能团Z可以如下形成：首先根据反应图解4的方法合成已经具有期望的Z基团的化合物(18)，随后使化合物(18)与羧酸化合物(15)反应(参见WO 00/23421)。或者，可以在将羧酸化合物(15)与天冬氨酸(β-叔丁基)甲酯结合并且水解之后，随后根据反应图解4的方法引入所需的Z基团。在Z为F时，可以根据在Tetrahedron Letters，1994，35(52)，9693-9696中已知的方法制备外消旋化合物。
反应图解4
Figure A200780031549D00201
如以下实验部分所证明的，本发明的式(1)的化合物具有广谱的半胱天冬蛋白酶抑制活性，以及具有预防炎症和细胞程序死亡的作用。因此，本发明提供用于抑制半胱天冬蛋白酶的药物组合物，特别是用于预防炎症和细胞程序死亡的组合物，其包括式(1)的化合物或其药学可接受的盐作为活性成分以及药学可接受的载体。特别地，本发明的组合物对于痴呆、脑中风、由于AIDS引起的脑损伤、糖尿病、胃溃疡、肝炎引起的脑损伤、肝炎诱导的肝脏疾病、急性肝炎、暴发性肝衰竭、脓毒病、器官移植排斥、风湿性关节炎、由于缺血性心脏病引起的心脏细胞程序死亡、或肝硬化具有治疗或预防作用。
式(1)的化合物可以配制为用于给药目的的各种药物剂型。对于制备本发明的药物组合物，将有效量的式(1)的化合物或其药学可接受的盐与药学可接受的载体混合，取决于所要制备的制剂，所述载体可为多种形式。
取决于应用目的，半胱天冬蛋白酶抑制剂化合物可以配制为非肠道注射剂、或经皮或口服制备物。尤其有利的是将组合物配制为便于给药和有助于剂量均匀性的单位剂型。
对于口服制备物，可以使用任何常见的药物载体。例如，可以将水、二醇类、油类、醇类等用于诸如悬浮液、糖浆、酏剂和溶液这样的口服液体制备物；或可以将淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等用于诸如粉剂、丸剂、胶囊和片剂这样的固体制备物。由于容易给药，片剂和胶囊是最有利的剂量单位形式。还期望片剂和丸剂被配制为肠溶包衣的制备物。
对于非肠道制备物，通常将无菌水用作载体，尽管还可以使用例如溶解度助剂这样的其它成分。诸如灭菌的注射用水悬浮液或油悬浮液的注射剂可以根据已知的方法，使用适合的分散剂、润湿剂、或助悬剂来制备。可以用于制备注射剂的溶剂包括水、林格溶液、和等渗的NaCl溶液，另外灭菌的固定油可以方便地用作溶剂或悬浮介质。可以将包括甘油单酯或甘油二酯的任何非刺激性固定油用于这个目的。还可以将诸如油酸的脂肪酸用于注射剂。
对于经皮给药，载体可以包括渗透增强剂和/或适合的润湿剂，任选地与没有显著皮肤刺激性的适合的添加剂组合。所述添加剂可以促进通过皮肤的给药和/或可以帮助制备所需组合物。这些经皮制备物可以通过多种方式给药，例如，作为透皮贴剂、喷滴剂(spot-on)，或膏剂。
在本发明的半胱天冬蛋白酶抑制剂用于临床目的时，优选将其以0.1-100mg/kg体重/天的量给予患者。总的日剂量可以一次给予或者分为几次给予。然而，对于个体患者的特定给药剂量可以随所用的特定的化合物、患者的体重、性别、卫生状况、给药的时间或方法、排泄速率、药物的混合比例、所治疗的疾病的严重程度等而改变。
本发明的实施方案
通过以下实施例更具体地说明本发明。然而，应该理解，这些实施例只是用于说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
制备1-1)
(5-甲基-3-氧代-2，3，4，5-四氢-哒嗪-4-基)-乙酸甲酯
将硫酸镁(3.6kg，30.0mol)引入到二乙胺(6.6kg，90.0mol)中，在保持0℃温度的情况下向其中加入丙醛(1.76kg，30.3mol)。使混合物回温到室温，并且搅拌2.5小时。向这个混合物中引入18L的二氯甲烷，然后将其冷却到0℃。加入马来酸二甲酯(3.04kg，21.1mol)，并将得到的混合物搅拌20小时。将反应混合物过滤以除去固体，并将滤液减压蒸馏，得到粗品3-二乙基氨基-4-甲基-环丁烷-1，2-二甲酸二甲酯。
向上述得到的3-二乙基氨基-4-甲基-环丁烷-1，2-二甲酸二甲酯加入四氢呋喃(10L)和蒸馏水(5L)，向其中加入乙酸(2.54kg，42.3mol)，并将混合物在回流下搅拌1小时。通过减压蒸馏除去四氢呋喃。向残余物加入乙酸乙酯，然后将其通过常规的方式进行提取-干燥-浓缩，得到粗品2-(1-甲基-2-氧代-乙基)琥珀酸二甲酯(3.44kg)。
向这个2-(1-甲基-2-氧代-乙基)琥珀酸二甲酯加入乙醇(13L)，将其冷却到0℃。在保持该温度的情况下加入乙酸(1.2kg，20mol)。向反应混合物加入水合肼(1.08kg，21.6mol)，使其回温到室温并且搅拌16小时。通过减压蒸馏除去乙醇，向残余物加入二氯甲烷，然后将其通过常规的方式进行提取-干燥-浓缩，得到标题化合物(2.80kg，收率：51％)。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ 8.39(brs，1H)，7.17(d，0.5H)，6.94(s，0.5H)，3.71(d，3H)，3.20-3.15(m，0.5H)，3.03-2.98(m，0.5H)，2.78-2.73(m，1H)，2.67-2.61(m，1H)，2.39-2.34(m，0.5H)，1.24(d，0.5H)，1.01(d，1.5H)
制备1-2)
(5-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-乙酸甲酯
向制备1-1)的化合物(2.70kg，14.7mol)中加入二氯甲烷(27L)，然后将其冷却到0℃。在40分钟内向其中加入亚硫酰二氯(2.08kg，17.6mol)。使混合物回温到室温，并且搅拌4.5小时。向反应混合物加入20kg的10％氯化钠水溶液和16kg的二氯甲烷。通过相分离得到的有机层根据常规的方式进行干燥-浓缩，得到标题化合物(1.72kg，收率：64％)，为浅黄色固体。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ 12.08(br s，1H)，7.66(s，1H)，3.70(s，3H)，3.68(s，2H)，2.19(s，3H)
制备1-3)
(5-甲基-3-氧代-2-苯基-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-乙酸甲酯
向制备1-2)的化合物(182mg，1.0mmol)，苯基硼酸(244mg，2.0eq)，Cu(OAc)2·H2O(40mg，0.2eq)，吡啶(0.16mL，2.0eq)，TEMPO(172mg，1.1eq)和molecular sieve(120mg，4A，粉末，预先干燥的)的混合物中加入CH2Cl2(10mL)，然后将其在室温下在氮气下搅拌1小时。将反应混合物暴露于空气，并且搅拌一天。向其中加入饱和的乙酸铵(30mL)，并将混合物用乙酸乙酯(100mL)提取两次。提取物用碳酸氢钠的稀溶液(NaHCO3，100mL x 2)洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过柱色谱法分离(20-35％乙酸乙酯-己烷)，以化学计量的收率得到258mg的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.75(s，1H)，7.58(d，2H)，7.44(t，2H)，7.36(t，1H)，3.70(s，3H)，3.68(s，2H)，2.25(s，3H)
制备1-4)
2-(5-甲基-3-氧代-2-苯基-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酸甲酯
在氮气气氛下将制备1-3)的化合物(258mg，1.0mmol)溶解于无水THF(10mL)并且保持在-78℃的温度。向其中加入1.0MLiHMDS/THF(1.20mL，1.2eq)，并将混合物搅拌10分钟。加入碘乙烷(0.12mL，1.5eq)，并使混合物缓慢回温到室温，搅拌过夜。加入水(20mL)，并将混合物用乙酸乙酯提取(50mL x 2)，用氯化钠水溶液(100mL)洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩，以化学计量的收率得到286mg的标题化合物。这个化合物不经进一步纯化用于下一个步骤。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.72(s，1H)，7.60(d，2H)，7.44(t，2H)，7.35(t，1H)，3.77(dd，1H)，3.70(s，3H)，2.28(m，1H)，2.26(s，3H)，1.90(m，1H)，0.92(t，3H)
制备1-5)
2-(5-甲基-3-氧代-2-苯基-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酸
将制备1-4)的化合物(286mg)溶解于溶剂混合物(6mL，四氢呋喃：MeOH:H2O＝3:2:1)中，向其中加入LiOH.H2O(126mg，3.0eq)，并在搅拌下将混合物加热约2小时。反应溶液用1N盐酸水溶液中和，并且减压蒸馏到几乎完全除去四氢呋喃。将残余物溶解于过量的乙酸乙酯(50mL)，用氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩，以化学计量的收率得到标题化合物(272mg)。这个化合物不经进一步纯化用于下一个步骤。
制备1-6)
5-氟-3-[2-(5-甲基-3-氧代-2-苯基-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-4-氧代-戊酸叔丁酯
将制备1-5)的甲酸衍生物(271mg，1.00mmol)，3-氨基-5-氟-4-羟基-戊酸叔丁酯(参见Tetrahedron Letters，1994，35(52)，9693-9696，248mg，1.2eq)和HATU(494mg，1.3eq)的混合物冷却到0℃，向其中加入在DMF溶剂(5mL)中的三乙胺(0.56mL，4.0eq)并使混合物反应一天。将溶剂减压蒸馏。残余物用乙酸乙酯提取(30mL x 2)，用水、碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。向这个化合物和Dess-Martin试剂(848mg，2.0eq)中加入无水二氯甲烷(4mL)，然后将其在室温搅拌1小时。用异丙醇(1mL)中止反应。在减压下通过硅藻土过滤除去固体，并用乙酸乙酯提取(20mL x 2)。提取物用水、饱和碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过柱色谱法分离(30-40％乙酸乙酯-己烷)，得到330mg(72％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.79(brm，1H)，7.62(m，1H)，7.50-7.25(m，5H)，5.20-4.80(m，2H)，4.80-4.68(m，1H)，3.75(m，1H)，2.88-2.57(m，2H)，2.26(s，3H)，2.26-1.98(m，2H)，1.41(m，9H)，0.87(m，3H)
实施例1)
5-氟-3-[2-(5-甲基-3-氧代-2-苯基-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00251
将制备1-6)的化合物(100mg，0.218mmol)溶解于二氯甲烷(4mL)，并且在0℃加入三氟乙酸(2mL)。将混合物搅拌1小时，期间其缓慢回温到室温。将混合物减压浓缩，并且通过柱色谱法分离(10％甲醇-二氯甲烷)，得到68mg(78％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 7.93(m，1H)，7.84(br s，1H)，7.45-7.37(m，5H)，5.03(m，2H)，4.57-4.49(m，1H)，3.69(m，1H)，2.68-2.47(m，2H)，2.19(s，3H)，2.08-1.68(m，2H)，0.76(m，3H)
质谱M+H+ 402.74
制备2-1)
(2-苄基-5-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-乙酸甲酯
向制备1-2)的化合物(364mg，2.0mmol)和Cs2CO3(977mg，1.5eq)的混合物加入DMF(8mL)和苄基溴(0.31mL，1.3eq)，然后将其在氮气气氛下在60℃搅拌3小时。将混合物减压浓缩，并将残余物用乙酸乙酯(100mL)提取两次。提取物用饱和碳酸氢钠水溶液(NaHCO3，100mL x 2)和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过柱色谱法分离(30％乙酸乙酯-己烷)，得到484mg(89％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.61(s，1H)，7.39(d，2H)，7.35-7.26(m，3H)，5.29(s，2H)，3.70(s，3H)，3.65(s，2H)，2.15(s，3H)
制备2-2)
2-(2-苄基-5-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酸甲酯
在氮气气氛下将制备2-1)的化合物(471mg，1.73mmol)溶解于无水THF(6mL)，并且保持在-78℃。向其中加入1.0MLiHMDS/THF(2.10mL，1.2eq)，并将混合物搅拌10分钟。加入碘乙烷(0.21mL，1.5eq)并在搅拌过夜的情况下使混合物缓慢回温到室温。用饱和的乙酸铵溶液中止反应。反应混合物用乙酸乙酯提取(50mL x 2)，用氯化钠水溶液(100mL)洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过柱色谱法分离(20％乙酸乙酯-己烷)，得到400mg(77％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.57(s，1H)，7.37(d，2H)，7.30-7.25(m，3H)，5.38 & 5.17(2个d，J＝13.5Hz，2H)，3.70(s，3H)，3.69(dd，1H)，2.25(m，1H)，2.17(s，3H)，1.84(m，1H)，0.87(t，3H)
制备2-3)
2-(2-苄基-5-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酸
将制备2-2)的化合物(400mg，1.31mmol)溶解于溶剂混合物(6mL，四氢呋喃:MeOH:H2O＝3:2:1)中，向其中加入LiOH.H2O(165mg，3.0eq)，并在搅拌下将混合物加热约2小时。反应混合物用1N盐酸水溶液中和，在减压下蒸馏到几乎完全除去四氢呋喃。将残余物溶解于过量的乙酸乙酯(50mL)，用氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩，得到356mg(收率100％)的标题化合物。这个化合物不经进一步纯化用于下一个步骤。
制备2-4)
3-[2-(2-苄基-5-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁酯
将制备2-3)的甲酸衍生物(153mg，0.535mmol)，3-氨基-5-氟-4-羟基-戊酸叔丁酯(参见Tetrahedron Letters，1994，35(52)，9693-9696，133mg，1.2eq)和HATU(265mg，1.3eq)的混合物冷却到0℃，向其中加入在DMF溶剂(5mL)中的三乙胺(0.30mL，4.0eq)并使混合物反应一天。将溶剂减压蒸馏。残余物用乙酸乙酯提取(30mL x 2)，用水、碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过柱色谱法分离(40-60％乙酸乙酯-己烷)，得到233mg(92％)的3-[2-(2-苄基-5-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)丁酰基氨基]-5-氟-4-羟基-戊酸叔丁酯。向这个化合物和Dess-Martin试剂(312mg，3.0eq)中加入无水二氯甲烷(4mL)，然后将其在室温搅拌1小时。用异丙醇(1mL)中止反应。在减压下通过硅藻土过滤除去固体，并用乙酸乙酯提取(20mL x 2)。提取物用水、饱和碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过柱色谱法分离(30-40％乙酸乙酯-己烷)，得到201mg(79％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.13(brs，1H)，7.62(s，1H)，7.38-7.25(m，5H)，5.38-5.20(m，2H)，5.20-4.80(m，2H)，4.80-4.68(m，1H)，3.76(m，1H)，2.88-2.57(m，2H)，2.26(s，3H)，2.26-1.98(m，2H)，1.41(m，9H)，0.87(m，3H)
实施例2)
3-[2-(2-苄基-5-甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00271
将制备2-4)的化合物(198mg，0.418mmol)溶解于二氯甲烷(4mL)，并且在0℃加入三氟乙酸(2mL)。将混合物搅拌1小时，期间其缓慢回温到室温。将混合物减压浓缩，并且通过柱色谱法分离(10％甲醇-二氯甲烷)，得到175mg(化学计量的收率，白色粉末))的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 12.31(brs，1H)，7.95-7.86(dd，1H)，7.79(s，1H)，7.28-7.22(m，5H)，5.34-4.86(m，4H)，4.49-4.39(m，1H)，3.60(m，1H)，2.70-2.35(m，2H)，2.14(s，3H)，2.05-1.68(m，2H)，0.70(m，3H)
制备3-1)
2-苄基-4，5-二氯-2H-哒嗪-3-酮
向4，5-二氯-2H-哒嗪-3-酮(3.3g，20.0mmol)和Cs2CO3(9.77mg，1.5eq)的混合物加入DMF(15mL)和苄基溴(3.10mL，1.3eq)，然后将其在氮气气氛下在60℃搅拌3小时。将混合物减压浓缩，并将残余物用乙酸乙酯(200mL)提取两次。提取物用饱和碳酸氢钠水溶液(NaHCO3，100mL x 2)和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过柱色谱法分离(10％乙酸乙酯-己烷)，得到4.48g(88％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.77(s，1H)，7.43(d，2H)，7.35-7.30(m，3H)，5.32(s，2H)
制备3-2)
(2-苄基-5-氯-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-乙酸乙酯
将丙二酸二乙酯(1.73g，1.64mL，2.5eq)溶解于异丙基醚(2mL)中，在室温向其中加入乙醇钠(0.73g，2.5eq)，并将混合物搅拌30分钟。向反应混合物加入制备3-1)的化合物(1.10g，4.31mmol)，然后将其回流一天。混合物用乙酸乙酯提取(50mL x 2)，用氯化钠水溶液(100mL)洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过柱色谱法分离(10-20％乙酸乙酯-己烷)，得到1.34g(82％)的2-(2-苄基-5-氯-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丙二酸二乙酯和2-(1-苄基-5-氯-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-4-基)-丙二酸二乙酯的1:1混合物。将这个混合物溶解于12mL的溶剂混合物(H2O:DMSO＝1:5)中，向其中加入NaCl(1.0g，5eq)，并将混合物加热到120℃，维持1天。将混合物减压浓缩，并将残余物用乙酸乙酯(200mL)提取两次。提取物用水、饱和碳酸氢钠溶液(NaHCO3，100mL x 2)和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过柱色谱法分离(10-20％乙酸乙酯-己烷)，得到530mg(49％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.76(s，1H)，7.39(d，2H)，7.33-7.26(m，3H)，5.29(s，2H)，4.17(qt，2H)，3.75(s，2H)，1.24(t，3H)
制备3-3)
(2-苄基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-乙酸乙酯
将制备3-2)的化合物(1.15g，3.75mmol)溶解于30mL的EtOH，加入10％ Pd/C(200mg，Aldrich)，并将混合物在氢气气氛下搅拌3小时。使反应混合物通过硅藻土，用乙醇洗涤两次，并将乙醇提取物减压浓缩，得到1.00g(98％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.74(d，1H)，7.42(d，2H)，7.33-7.26(m，3H)，7.17(d，1H)，5.33(s，2H)，4.18(qt，2H)，3.59(s，2H)，1.25(t，3H)
制备3-4)
2-(2-苄基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酸乙酯
在氮气气氛下将制备3-3)的化合物(272mg，1.00mmol)溶解于无水THF(5mL)并且保持在-78℃的温度。向其中加入1.0MLiHMDS/THF(1.50mL，1.5eq)，并将混合物搅拌10分钟。加入碘乙烷(0.14mL，1.8eq)，并使混合物缓慢回温到室温，搅拌过夜。用饱和的乙酸铵溶液中止反应。反应混合物用乙酸乙酯提取(50mL x 2)，用氯化钠水溶液(100mL)洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过柱色谱法分离(10-20％乙酸乙酯-己烷)，得到220mg(73％，油状物)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.74(d，1H)，7.42(d，2H)，7.33-7.26(m，3H)，7.17(d，1H)，5.32(ABq，2H)，4.18-4.10(m，2H)，3.87(t，2H)，2.01-1.77(m，2H)，1.21(t，3H)，0.95(t，3H)
制备3-5)
3-[2-(2-苄基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁酯
将制备3-4)的化合物根据与制备2-3)相同的方法水解，得到羧酸衍生物。将这个羧酸衍生物(205mg，0.683mmol)，3-氨基-5-氟-4-羟基-戊酸叔丁酯(参见Tetrahedron Letters，1994，35(52)，9693-9696，170mg，1.2eq)和HATU(337mg，1.3eq)的混合物冷却到0℃，向其中加入在DMF溶剂(5mL)中的三乙胺(0.38mL，4.0eq)并使混合物反应一天。将溶剂减压蒸馏。残余物用乙酸乙酯提取(30mLx 2)，用水、碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩，得到3-[2-(2-苄基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)丁酰基氨基]-5-氟-4-羟基-戊酸叔丁酯。向这个化合物和Dess-Martin试剂(580mg，2.0eq)中加入无水二氯甲烷(4mL)，然后将其在室温搅拌1小时。用异丙醇(1mL)中止反应。在减压下通过硅藻土过滤除去固体，并用乙酸乙酯提取(20mL x 2)。提取物用水、饱和碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过柱色谱法分离(20-30％乙酸乙酯-己烷)，得到242mg(77％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.79(m，1H)，7.56(m，1H)，7.42-7.27(m，5H)，7.14(m，1H)，5.40-5.27(m，2H)，5.22-4.67(m，3H)，3.76(m，1H)，2.93-2.56(m，2H)，2.16(m，1H)，1.69(m，1H)，1.42 & 1.38(2个s，9H)，0.95(m，3H)
实施例3)
3-[2-(2-苄基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00311
使制备3-5)的化合物(242mg，0.527mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到195mg(92％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 12.40(brs，1H)，8.70(m，1H)，7.87(m，1H)，7.27-7.24(m，6H)，5.25-5.16(m，2H)，5.21(m，2H)，4.58-4.47(m，1H)，3.64(m，1H)，2.69-2.47(m，2H)，1.72-1.62(m，2H)，0.82(m，3H)
制备4-1)
2-(2-苄基-5-氯-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酸乙酯
使制备3-2)的化合物(170mg，0.554mmol)根据与制备3-4)相同的方法进行反应，得到137mg(74％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.74(s，1H)，7.38-7.26(m，5H)，5.37-5.17(ABq，2H)，4.18-4.02(m，2H)，3.91(dd，1H)，2.27(m，1H)，1.90(m，1H)，1.08(t，3H)，0.89(t，3H)
制备4-2)
2-(2-苄基-5-氯-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酸和
2-(2-苄基-5-甲氧基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酸
将制备4-1)的化合物(132mg，0.395mmol)溶解于溶剂混合物(6mL，四氢呋喃：MeOH:H2O＝3:2:1)，向其中加入LiOH.H2O(50mg，3.0eq)，并将混合物搅拌一天。反应混合物用1N盐酸水溶液中和，并且减压蒸馏到几乎完全除去四氢呋喃。将残余物溶解于过量的乙酸乙酯(50mL)，用氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩，得到118mg的标题化合物，然后通过NMR对其进行鉴定，为氯代衍生物和甲氧基衍生物的0.4:1.0比例的混合物。这些化合物不经进一步纯化用于下一个反应。
制备4-3)
3-[2-(2-苄基-5-氯-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁酯和
3-[2-(2-苄基-5-甲氧基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁酯
使在制备4-2)中得到的两个化合物根据与制备2-4)相同的方法进行反应，并且通过柱色谱法分离(30-50％乙酸乙酯-己烷)，得到氯代衍生物(45mg，23％)和甲氧基衍生物(62mg，32％)。
氯代衍生物
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.78(s，1H)，7.70(m，1H)，7.42-7.27(m，5H)，5.35-4.86(m，4H)，4.78-4.67(m，1H)，4.01(m，1H)，2.94-2.62(m，2H)，2.28-2.06(m，2H)，1.69(m，1H)，1.42 &1.41(2个s，9H)，0.89(m，3H)
甲氧基 衍生物
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.14-8.03(br m，1H)，7.84(m，1H)，7.40-7.26(m，5H)，5.40-4.70(m，5H)，3.94(2个s，3H)，3.94(m，1H)，2.88-2.58(m，2H)，2.26-1.90(m，2H)，1.42&1.40(2个s，9H)，0.86(m，3H)
实施例4)
3-[2-(2-苄基-5-氯-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00321
使制备4-3)的氯代化合物(45mg，0.091mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到23mg(58％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 8.17(s，1H)，7.97(m，1H)，7.40-7.23(m，5H)，5.36-5.29(m，1H)，5.29-4.70(m，2H)，5.09-5.05(m，1H)，4.52-4.43(m，1H)，3.74(m，1H)，2.67-2.46(m，2H)，2.10-1.74(m，2H)，0.73(m，3H)
实施例5)
3-[2-(2-苄基-5-甲氧基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00331
使制备4-3)的甲氧基化合物(62mg，0.127mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到28mg(51％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 8.17(s，1H)，7.89-7.81(m，1H)，7.26-7.21(m，5H)，5.34-5.09(Ab q，2H)，5.29-4.70(m，2H)，4.52-4.40(m，1H)，3.90(d，3H)，3.62(m，1H)，2.65-2.46(m，2H)，1.97-1.64(m，2H)，0.68(m，3H)
制备6-1)
4，5-二氯-2-甲氧基甲基-2H-哒嗪-3-酮
将4，5-二氯-2H-哒嗪-3-酮(30g，182mmol)，N，N-二异丙基乙基胺(47.5mL，258mmol)和4-二甲基氨基吡啶(2.20g，18.2mmol)溶解于200mL的二氯甲烷中，向其中缓慢滴加氯甲基甲基醚(16.6mL，21.8mmol)，同时保持在0℃。将混合物在室温搅拌3小时。反应溶液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，在减压下蒸馏，并且通过柱色谱法分离-纯化(10％二氯甲烷/乙酸乙酯)，得到标题化合物(26.6g，收率：70％)，为黄色固体。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 7.81(s，1H)，5.45(s，2H)，3.48(s，3H)
制备6-2)
2-(5-氯-2-甲氧基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丙二酸二乙酯和2-(5-氯-1-甲氧基甲基-6-氧代-1，6-二氢-哒嗪-4-基)-丙二酸二乙酯
将制备6-1)的化合物(26.6g，127mmol)和乙醇钠(13g，191mmol)悬浮在二异丙基醚(100mL)中，并且搅拌30分钟。向其中加入丙二酸二乙酯(29.0mL，191mmol)，并将混合物回流一天。在反应完成之后，将混合物减压蒸馏以除去二异丙基醚。将残余物再次溶解于二氯甲烷，用1N盐酸和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，并且减压蒸馏。残余物通过柱色谱法分离(14.3％，乙酸乙酯/己烷)，得到1∶1比例的标题混合物(32g，收率：76％)，为浅黄色液体。
制备6-3)
(5-氯-2-甲氧基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-乙酸乙酯
将制备6-2)的化合物(32.0g，96.2mmol)和氯化钠(228g，481mmol)溶解于水/二甲基亚砜(120mL，1/5)，并且在170℃搅拌16小时。通过真空蒸馏除去二甲基亚砜。将残余物溶解于二氯甲烷，用水洗涤，在减压下蒸馏，并且通过柱色谱法分离(33％，乙酸乙酯/己烷)，得到标题化合物(12g，收率：48％)，为无色液体。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ 7.78(s，1H)，5.42(s，2H)，4.18(t，2H)，3.77(s，2H)，3.44(s，3H)，1.26(q，3H)
制备6-4)
(2-甲氧基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-乙酸乙酯
将制备6-3)的化合物(405mg，1.55mmol)溶解于10mL的EtOH，加入10％ Pd/C(100mg，Aldrich)，并将混合物在氢气气氛下搅拌1小时。使反应混合物通过硅藻土，并用乙醇洗涤两次。将乙醇提取物减压浓缩，并且通过柱色谱法分离(40-50％，乙酸乙酯/己烷)，得到标题化合物(240mg，收率：68％)，为无色液体。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.76(d，1H)，7.21(d，1H)，5.45(s，2H)，4.18(qt，2H)，3.45(s，3H)，1.27(t，3H)
制备6-5)
2-(2-甲氧基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酸乙酯
使制备6-4)的化合物(240mg，1.06mmol)根据制备与2-2)相同的方法进行反应，得到179mg(67％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.77(d，1H)，7.21(d，1H)，5.46(m，2H)，4.22-4.10(m，2H)，3.88(m，1H)，3.45(s，3H)，2.00-1.78(2个m，2H)，1.24(t，3H)，0.96(t，3H)
制备6-6)
2-(3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酸乙酯
将制备6-5)的化合物(172mg，0.676mmol)溶解于8mL的CH2Cl2，在-78℃加入BBr3(70
Figure A200780031549D0035103823QIETU
，或1.1eq/1.0M的CH2Cl2溶液)，并将混合物搅拌2小时，同时缓慢回温到室温。用饱和乙酸铵中止反应。反应混合物用乙酸乙酯提取，并用氯化钠水溶液洗涤。将提取物减压浓缩，并且通过制备TLC分离(70％，乙酸乙酯/己烷)，得到标题化合物(132mg，收率：91％)，为无色液体。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.76(d，1H)，7.26(d，1H)，4.18-4.10(m，2H)，3.88(m，1H)，2.00-1.75(2个m，2H)，1.23(t，3H)，0.94(t，3H)
制备6-7)
1-溴甲基-2-叔丁基-苯
向1-叔丁基-2-甲基-苯(940mg，6.34mmol)，NBS(1.24g，1.1eq)和AIBN(20mg，催化量)中加入CCl4(12mL)，然后将其回流1小时。通过过滤除去悬浮颗粒，并用CCl4洗涤。将有机层合并并且减压浓缩，以化学计量的收率得到1.5g的的黄色液体。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.46(m，1H)，7.38(m，1H)，7.22-7.21(m，2H)，4.83(s，2H)，1.46(s，9H)
制备6-8)
2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酸乙酯
使制备6-6)的化合物(58mg，0.276mmol)和制备6-7)的化合物(81mg，1.3eq)根据与制备2-1)相同的方法进行反应，得到53mg(54％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.78(d，1H)，7.42(d，1H)，7.25(m，1H)，7.18(d，1H)，7.09(t，1H)，6.82(d，1H)，5.66(ABq，2H)，4.21-4.10(m，2H)，3.94(t，1H)，2.03-1.80(2个m，2H)，1.49(s，9H)，1.23(t，3H)，0.97(t，3H)
制备6-9)
3-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁酯
使制备6-8)的化合物(53mg，0.149mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到46mg(60％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.84(2个d，1H)，7.52(m，1H)，7.43(2个s，1H)，7.23-7.09(m，2H)，7.08(2个d，1H)，5.71 &5.66(2个s，2H)，5.21-4.70(m，3H)，3.81(m，1H)，2.91-2.58(m，2H)，2.17(m，1H)，1.72(m，1H)，1.50(s，9H)，1.40&1.36(2个s，9H)，0.97(m，3H)
实施例6)
3-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-5-氟-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00371
使制备6-9)的化合物(46mg，0.089mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(29mg，71％)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 8.65-8.61(m，1H)，7.93(q，1H)，7.39-7.34(m，2H)，7.14(t，1H)，7.04(t，1H)，6.67(m，1H)，5.50(Abq，2H)，5.02(m，2H)，4.58-4.48(m，1H)，3.69(m，1H)，2.63(m，2H)，1.75-1.64(m，2H)，1.40(s，9H)，0.83(m，3H)
制备7-1)
1-溴甲基-3-叔丁基-苯
向1-甲基-3-叔丁基-苯(551mg，3.72mmol)，NBS(730mg，1.1eq)和AIBN(14mg，催化量)加入CCl4(8mL)，然后将其回流2小时。通过过滤除去悬浮颗粒，并用CCl4洗涤。将有机层合并并且减压浓缩，得到860mg的黄色液体(其通过NMR鉴定包含约15％的二溴衍生物)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.39-7.19(m，4H)，4.51(s，2H)，1.35(s，9H)
制备7-2)
2-[2-(3-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酸乙酯
向制备6-6)的化合物(50mg，0.238mmol)和Cs2CO3(116mg，1.5eq)的混合物加入DMF(3mL)和制备7-1)的1-溴甲基-3-叔丁基-苯(70mg，1.3eq)，然后将其在氮气气氛下在60℃搅拌2小时。将混合物减压浓缩，并将残余物用乙酸乙酯(50mL)提取两次。提取物用饱和碳酸氢钠水溶液(NaHCO3，30mL x 2)和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过制备TLC分离(30％乙酸乙酯-己烷)，得到57mg(67％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.74(d，1H)，7.43(s，1H)，7.30-7.16(m，4H)，5.32(ABq，2H)，4.18-4.10(m，2H)，3.88(t，1H)，1.99-1.76(2个m，2H)，1.29(s，9H)，1.20(t，3H)，0.95(t，3H)
制备7-3)
3-2-[2-(3-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁酯
使制备7-2)的化合物(56mg，0.157mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(49mg，60％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.79(2个d，1H)，7.58(m，1H)，7.42(2个s，1H)，7.32-7.14(m，4H)，5.35-5.28(m，2H)，5.21-4.68(m，3H)，3.75(m，1H)，2.91-2.58(m，2H)，2.14(m，1H)，1.69(m，1H)，1.43&1.41(2个s，9H)，1.29(s，9H)，0.95(m，3H)
实施例7)
3-2-[2-(3-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-5-氟-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00381
使制备7-3)的化合物(48mg，0.0931mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(31mg，72％)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 8.65(m，1H)，7.89(q，1H)，7.31(t，1H)，7.27(s，1H)，7.26(m，1H)，7.19(t，1H)，7.00(m，1H)，5.21(m，2H)，5.20-4.67(m，2H)，4.57-4.48(m，1H)，3.68(m，1H)，2.62(m，2H)，1.73-1.63(m，2H)，1.20(s，9H)，0.83(m，3H)
制备8-1)
2-[2-(2-甲基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酸乙酯
使制备6-6)的化合物(98mg，0.47mmol)和1-溴甲基-2-甲基苯(112mg，1.3eq)根据与制备2-1)相同的方法进行反应，得到标题化合物(118mg，80％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.75(d，1H)，7.20-7.13(m，5H)，5.40-5.31(ABq，2H)，4.20-4.10(m，2H)，3.89(m，1H)，2.40(s，3H)，1.97(m，1H)，1.82(m，1H)，1.22(t，3H)，0.96(t，3H)
制备8-2)
5-氟-3-2-[2-(2-甲基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-4-氧代-戊酸叔丁酯
使制备8-1)的化合物(118mg，0.38mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(145mg，82％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.80(2个d，1H)，7.57(m，1H)，7.20-7.13(m，5H)，5.38-5.35(2个s，2H)，5.21-4.68(m，3H)，3.77(m，1H)，2.91-2.57(m，2H)，2.42 & 2.41(2个s，3H)，2.15(m，1H)，1.70(m，1H)，1.43 & 1.39(2个s，9H)，0.95(m，3H)
实施例8)
5-氟-3-2-[2-(2-甲基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00391
使制备8-2)的化合物(143mg，0.302mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(109mg，87％)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 12.40(br s，1H)，8.72-8.63(m，1H)，7.88(m，1H)，7.31(m，1H)，7.14(m，2H)，7.07(t，1H)，6.94(t，1H)，5.28-4.95(m，4H)，4.58-4.48(m，1H)，3.65(m，1H)，2.69-2.47(m，2H)，2.29(s，3H)，1.73-1.64(m，2H)，0.83(m，3H)
制备9-1)
2-[2-(3-甲基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酸乙酯
使制备6-6)的化合物(103mg，0.49mmol)和1-溴甲基-3-甲基苯(118mg，1.3eq)根据与制备2-1)相同的方法进行反应，得到标题化合物(110mg，71％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.74(d，1H)，7.22-7.08(m，4H)，7.08(m，1H)，5.33-5.24(ABq，2H)，4.20-4.01(m，2H)，3.88(m，1H)，2.32(s，3H)，1.95(m，1H)，1.81(m，1H)，1.21(t，3H)，0.95(t，3H)
制备9-2)
5-氟-3-2-[2-(3-甲基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-4-氧代-戊酸叔丁酯
使制备9-1)的化合物(110mg，0.35mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(141mg，89％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.79(2个d，1H)，7.59(m，1H)，7.22-7.08(m，5H)，5.36-4.69(m，5H)，3.75(m，1H)，2.92-2.59(m，2H)，2.32(2个s，3H)，2.15(m，1H)，1.70(m，1H)，1.44 & 1.41(2个s，9H)，0.95(m，3H)
实施例9)
5-氟-3-2-[2-(3-甲基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00401
使制备9-2)的化合物(137mg，0.289mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(104mg，86％)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 12.41(br s，1H)，8.72-8.64(m，1H)，7.87(m，1H)，7.29(s，1H)，7.16(t，1H)，7.05(m，3H)，5.26-4.92(m，4H)，4.58-4.47(m，1H)，3.66(m，1H)，2.69-2.47(m，2H)，2.22(s，3H)，1.73-1.63(m，2H)，0.83(m，3H)
制备10-1)
2-[2-(3-甲氧基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酸乙酯
使制备6-6)的化合物(114mg，0.54mmol)和1-溴甲基-3-甲氧基-苯(142mg，1.3eq)根据与制备2-1)相同的方法进行反应，得到标题化合物(145mg，81％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.79(d，1H)，7.25(t，1H)，7.22(d，1H)，7.03(d，1H)，7.00(s，1H)，6.87(d，1H)，5.40-5.30(ABq，2H)，4.21-4.13(m，2H)，3.93(t，1H)，3.82(s，3H)，1.98(m，1H)，1.85(m，1H)，1.26(t，3H)，1.00(t，3H)
制备10-2)
5-氟-3-2-[2-(3-甲氧基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-4-氧代-戊酸叔丁酯
使制备10-1)的化合物(145mg，0.44mol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(70mg，33％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.79(2个d，1H)，7.58(m，1H)，7.23(t，1H)，7.15(2个d，1H)，7.00-6.90(m，2H)，6.81(m，1H)，5.32(m，2H)，5.30-4.68(m，3H)，3.77(s，3H)，3.74(m，1H)，2.92-2.58(m，2H)，2.15(m，1H)，1.68(m，1H)，1.43 & 1.40(2个s，9H)，0.95(m，3H)
实施例10)
5-氟-3-2-[2-(3-甲氧基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00421
使制备10-2)的化合物(70mg，0.14mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(56mg，90％)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 8.64(brs，1H)，7.88(m，1H)，7.30(m，1H)，7.19(m，1H)，6.80-6.77(m，3H)，5.41-4.80(m，2H)，5.28-5.14(m，2H)，4.57-4.49(m，1H)，3.67(m，3H)，3.65(m，1H)，2.71-2.32(m，2H)，1.74-1.63(m，2H)，0.82(m，3H)
制备11-1)
2-(2-萘-1-基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酸乙酯
使制备6-6)的化合物(98mg，0.47mmol)和1-氯甲基-萘(107mg，1.3eq)根据与制备2-1)相同的方法进行反应，得到标题化合物(81mg，50％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.29(d，1H)，7.87-7.79(m，2H)，7.73(d，1H)，7.56-7.42(m，4H)，7.16(d，1H)，5.86-5.73(ABq，2H)，4.20-4.10(m，2H)，3.90(m，1H)，1.97(m，1H)，1.82(m，1H)，1.20(t，3H)，0.95(t，3H)
制备11-2)
5-氟-3-[2-(2-萘-1-基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-4-氧代-戊酸叔丁酯
使制备11-1)的化合物(81mg，0.23mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(82mg，70％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ 8.32(2个d，1H)，7.91-7.81(m，3H)，7.65-7.46(m，5H)，7.19(m，1H)，5.89-5.80(m，2H)，5.28-4.75(m，3H)，3.83(m，1H)，2.96-2.65(m，2H)，2.18(m，1H)，1.75(m，1H)，1.47 & 1.42(2个s，9H)，0.99(m，3H)
实施例11)
5-氟-3-[2-(2-萘-1-基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00431
使制备11-2)的化合物(82mg，0.16mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(57mg，78％)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 8.66(brs，1H)，8.20(d，1H)，7.93-7.84(m，3H)，7.52(m，2H)，7.42(m，1H)，7.31(m，1H)，7.26(m，1H)，5.70(m，2H)，5.43-4.80(m，2H)，4.55-4.48(m，1H)，3.72(m，1H)，2.70-2.33(m，2H)，1.75-1.65(m，2H)，0.84(m，3H)
制备12-1)
2-(2-萘-2-基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酸乙酯
使制备6-6)的化合物(97mg，0.46mmol)和2-溴甲基-萘(132mg，1.3eq)根据与制备2-1)相同的方法进行反应，得到标题化合物(91mg，57％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.88(s，1H)，7.83-7.78(m，3H)，7.76(d，1H)，7.56(d，1H)，7.47-7.44(m，2H)，7.18(d，1H)，5.53-5.43(ABq，2H)，4.20-4.10(m，2H)，3.88(m，1H)，1.95(m，1H)，1.82(m，1H)，1.19(t，3H)，0.95(t，3H)
制备12-2)
5-氟-3-[2-(2-萘-2-基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-4-氧代-戊酸叔丁酯
使制备12-1)的化合物(91mg，0.26mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(83mg，63％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.91(d，1H)，7.87-7.83(m，4H)，7.66-7.56(m，2H)，7.53-7.48(m，2H)，7.20(t，1H)，5.60-5.52(m，2H)，5.28-4.75(m，3H)，3.82(m，1H)，2.94-2.65(m，2H)，2.19(m，1H)，1.74(m，1H)，1.47 & 1.44(2个s，9H)，1.00(m，3H)
实施例12)
5-氟-3-[2-(2-萘-2-基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00441
使制备12-2)的化合物(83mg，0.16mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(68mg，92％)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 8.64(brs，1H)，7.90(m，1H)，7.85-7.83(m，3H)，7.76(s，1H)，7.46(m，2H)，7.42(m，1H)，7.31(m，1H)，5.44-5.34(m，2H)，5.31-4.73(m，2H)，4.57-4.49(m，1H)，3.69(m，1H)，2.63-2.32(m，2H)，1.75-1.63(m，2H)，0.82(m，3H)
制备13-1)
(2-甲基-噁唑-4-基)-甲醇
向LiAlH4(304mg，1.5eq)加入无水THF(20mL)。在-78℃向其中加入溶解于THF(20mL)的2-甲基-噁唑-4-甲酸甲酯(参见J.of Org.Chem.，2003，68，p.4215-4234)，并且在相同的温度下搅拌1小时。用水中止反应。使反应混合物通过硅藻土，并用乙酸乙酯提取(50mL x3)。有机层用氯化钠水溶液洗涤，在减压下蒸馏，并且通过柱色谱法分离(乙酸乙酯)，得到标题化合物(308mg，收率：51％)，为浅黄色固体。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.48(s，1H)，4.56(d，2H)，2.45(s，3H)，2.18(t，1H)
制备13-2)
4-溴甲基-2-甲基-噁唑
将制备13-1)的化合物(307mg，2.71mmol)溶解于CH2Cl2(20mL)，向其中加入CBr4(1.17g，1.3eq)和PPh3(1.07g，1.5eq)，并将混合物搅拌3小时。将反应混合物减压干燥并且通过柱色谱法分离(25％乙酸乙酯/己烷)，得到标题化合物(139mg，收率：29％)，为无色液体。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.58(s，1H)，4.39(s，2H)，2.50(s，3H)
制备13-3)
2-[2-(2-甲基-噁唑-4-基甲基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酸乙酯
使制备6-6)的化合物(160mg，0.761mmol)和4-溴甲基-2-甲基-噁唑(139mg，1.3eq)根据与制备2-1)相同的方法进行反应，得到标题化合物(159mg，69％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.77(d，1H)，7.56(s，1H)，7.18(d，1H)，5.19(ABq，2H)，4.20-4.10(m，2H)，3.86(t，1H)，1.98-1.74(2个m，2H)，1.22(t，3H)，0.94(t，3H)
制备13-4)
5-氟-3-2-[2-(2-甲基-噁唑-4-基甲基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-4-氧代-戊酸叔丁酯
使制备13-3)的化合物(155mg，0.508mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(150mg，64％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.80(2个d，1H)，7.60-7.55(m，2H)，7.15(m，1H)，5.30-4.69(m，5H)，3.75(m，1H)，2.93-2.62(m，2H)，2.39 & 2.37(2个s，3H)，2.12(m，1H)，1.66(m，1H)，1.41 &1.38(2个s，9H)，0.92(m，3H)
实施例13)
5-氟-3-2-[2-(2-甲基-噁唑-4-基甲基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00461
使制备13-4)的化合物(150mg，0.323mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(113mg，86％)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 12.41(brs，1H)，8.70-8.63(dd，1H)，7.85(m，1H)，7.78(m，1H)，7.30(m，1H)，5.24-4.97(m，4H)，4.59-4.46(m，1H)，3.63(m，1H)，2.82-2.47(m，2H)，2.30(s，3H)，1.73-1.63(m，2H)，0.83(m，3H)
制备14-1)
2-[2-(2-甲基-噻唑-4-基甲基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酸乙酯
使制备6-6)的化合物(98mg，0.47mmol)和4-溴甲基-2-甲基-噻唑(112mg，1.3eq，Lancaster)根据与制备2-1)相同的方法进行反应，得到标题化合物(101mg，67％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.79(d，1H)，7.20(d，1H)，7.05(s，1H)，5.45-5.37(ABq，2H)，4.20-4.10(m，2H)，3.88(t，1H)，2.68(s，3H)，1.96 & 1.81(2个m，2H)，1.22(t，3H)，0.95(t，3H)
制备14-2)
5-氟-3-2-[2-(2-甲基-噻唑-4-基甲基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-4-氧代-戊酸叔丁酯
使制备14-1)的化合物(101mg，0.31mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(32mg，21％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.83(2个d，1H)，7.58(m，2H)，7.20-7.03(m，2H)，5.51-4.69(m，5H)，3.75(m，1H)，2.93-2.62(m，2H)，2.64(m，3H)，2.12(m，1H)，1.66(m，1H)，1.41 & 1.38(m，9H)，0.94(m，3H)
实施例14)
5-氟-3-2-[2-(2-甲基-噻唑-4-基甲基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00471
使制备14-2)的化合物(32mg，0.066mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(16mg，58％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.82(m，1H)，7.80-7.76(dd，1H)，7.25(s，1H)，7.12(m，1H)，6.07-6.91(m，1H)，5.15-4.57(m，4H)，3.90(m，1H)，2.92-2.75(m，2H)，2.67(s，3H)，2.22-1.67(m，2H)，0.97(m，3H)
制备15-1)
2-[2-(3，5-二甲基-异噁唑-4-基甲基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酸乙酯
使制备6-6)的化合物(96mg，0.46mmol)和4-氯甲基-3，5-二甲基-异噁唑(86mg，1.3eq，Aldrich)根据与制备2-1)相同的方法进行反应，得到标题化合物(119mg，82％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.71(d，1H)，7.18(d，1H)，5.10-5.02(ABq，2H)，4.20-4.10(m，2H)，3.85(t，1H)，2.46(s，3H)，2.32(s，3H)，1.98-1.74(2个m，2H)，1.22(t，3H)，0.95(t，3H)
制备15-2)
3-2-[2-(3，5-二甲基-异噁唑-4-基甲基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁酯
使制备15-1)的化合物(119mg，0.37mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(47mg，40％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.79(2个d，1H)，7.48(m，1H)，7.21(d，2H)，5.30-4.79(m，5H)，3.77(m，1H)，2.97-2.69(m，2H)，2.54(2个s，3H)，2.36(s，1H)，2.16(m，1H)，1.72(m，1H)，1.47& 1.42(2个s，9H)，0.99(m，3H)
实施例15)
3-2-[2-(3，5-二甲基-异噁唑-4-基甲基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基-5-氟-4-氧代-戊酸
使制备15-2)的化合物(47mg，0.098mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(27mg，66％)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 8.64(br s，1H)，7.86(dd，1H)，7.28(m，1H)，5.32-4.91(m，2H)，5.08-4.96(m，2H)，4.56-4.47(m，1H)，3.66(m，1H)，2.63-2.32(m，2H)，2.37(s，3H)，2.16(s，3H)，1.72-1.63(m，2H)，0.82(m，3H)
制备16-1)
2-(2-环己基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酸乙酯
使制备6-6)的化合物(101mg，0.48mmol)和溴甲基-环己烷(111mg，1.3eq，Aldrich)根据与制备2-1)相同的方法进行反应，得到标题化合物(82mg，56％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.71(d，1H)，7.16(d，1H)，4.20-4.10(m，2H)，4.14-3.94(m，2H)，3.86(t，1H)，1.98-1.74(2个m，2H)，1.72-1.60(宽m，5H)，1.23(t，3H)，1.20-1.16(宽m，3H)，1.05-1.00(m，2H)，0.96(t，3H)
制备16-2)
3-[2-(2-环己基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁酯
使制备16-1)的化合物(80mg，0.26mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(106mg，88％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.77(m，1H)，7.64(m，1H)，7.14(m，1H)，5.29-4.72(m，3H)，4.10-3.98(m，2H)，3.76(m，1H)，2.94-2.62(m，2H)，2.15(m，1H)，1.94(m，1H)，1.72-1.60(宽m，5H)，1.43 & 1.41(2个s，9H)，1.23-1.00(m，5H)，0.96(m，3H)
实施例16)
3-[2-(2-环己基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸
使制备16-2)的化合物(106mg，0.23mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(71mg，76％)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 8.65(brs，1H)，7.83(m，1H)，7.26(m，1H)，5.35-4.88(m，2H)，4.57-4.48(m，1H)，3.97-3.82(m，2H)，3.63(m，1H)，2.66-2.47(m，2H)，1.79(m，1H)，1.73(m，1H)，1.61(m，3H)，1.55(m，1H)，1.49(m，2H)，1.10(m，3H)，0.95(m，2H)，0.82(m，3H)
制备17-1)
1-溴甲基-异喹啉
向1-甲基异喹啉(0.99g，6.91mmol)，NBS(1.35g，1.1eq)和AIBN(10mg，催化量)加入CCl4(15mL)，然后将其回流2小时。通过过滤除去悬浮颗粒，并用CCl4洗涤。将有机层合并，减压浓缩，并且通过柱色谱法分离(30％，乙酸乙酯/己烷)，得到标题化合物(270mg，收率：18％)，为紫色固体。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.48(d，1H)，8.25(d，1H)，7.87(d，1H)，7.75-7.67(2个t，2H)，7.65(d，1H)
制备17-2)
2-(2-异喹啉-1-基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酸乙酯
使制备6-6)的化合物(110mg，0.52mmol)和在制备17-1)中得到的1-溴甲基-异喹啉(151mg，1.3eq)根据与制备2-1)相同的方法进行反应，得到标题化合物(135mg，73％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.42(d，1H)，8.26(d，1H)，7.82(d，1H)，7.77(d，1H)，7.60(t，1H)，7.57(d，1H)，7.22(d，1H)，6.06-5.91(ABq，2H)，4.21-4.10(m，2H)，3.91(t，1H)，2.01-1.78(2个m，2H)，1.21(t，3H)，0.96(t，3H)
制备17-3)
5-氟-3-[2-(2-异喹啉-1-基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-4-氧代-戊酸叔丁酯
使制备17-2)的化合物(130mg，0.37mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(150mg，79％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 8.39(d，1H)，8.27(d，1H)，7.88-7.80(m，2H)，7.73-7.56(m，3H)，7.22(m，1H)，6.12-5.95(m，2H)，5.23-4.68(m，3H)，3.80(m，1H)，2.92-2.58(m，2H)，2.19(m，1H)，1.75(m，1H)，1.34(m，9H)，0.96(m，3H)
实施例17)
5-氟-3-[2-(2-异喹啉-1-基甲基-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基)-丁酰基氨基]-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00511
使制备17-3)的化合物(150mg，0.29mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(123mg，92％)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 12.42(brs，1H)，8.74-8.64(dd，1H)，8.28(m，2H)，7.98(d，1H)，7.87(m，1H)，7.79(m，1H)，7.72-7.65(m，2H)，7.37(m，1H)，5.92(m，2H)，5.22-5.00(m，2H)，4.60-4.48(m，1H)，3.67(m，1H)，2.74-2.54(m，2H)，1.77-1.65(m，2H)，0.84(m，3H)
制备18-1)
2-[2-(2-氯-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酸乙酯
使制备6-6)的化合物(100mg，0.476mmol)和1-溴甲基-2-氯苯(127mg，1.3eq，Aldrich)根据与制备2-1)相同的方法进行反应，得到标题化合物(92mg，58％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.77(d，1H)，7.37(d，1H)，7.23-7.16(m，3H)，7.07(d，1H)，5.51-5.43(ABq，2H)，4.21-4.10(m，2H)，3.90(t，1H)，2.02-1.79(2个m，2H)，1.22(t，3H)，0.96(t，3H)
制备18-2)
3-{2-[2-(2-氯-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁酯
使制备18-1)的化合物(92mg，0.275mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(113mg，83％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.82(2个d，1H)，7.54(m，1H)，7.38(m，1H)，7.24-7.18(m，3H)，7.09-7.02(m，1H)，5.54-5.44(m，2H)，5.21-4.71(m，3H)，3.79(m，1H)，2.90-2.56(m，2H)，2.16(m，1H)，1.73(m，1H)，1.41 & 1.38(2个d，9H)，0.96(m，3H)
实施例18)
3-{2-[2-(2-氯-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00521
使制备18-2)的化合物(103mg，0.29mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(74mg，81％)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 8.63(br，1H)，7.91(m，1H)，7.45-7.25(m，4H)，7.00(m，1H)，5.32(m，2H)，5.30-4.60(br，2H)，4.57 & 4.50(2个br m，1H)，3.69(m，1H)，2.70-2.50(br，2H)，1.77-1.65(m，2H)，0.84(m，3H)
制备19-1)
2-[2-(3-氯-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酸乙酯
使制备6-6)的化合物(98mg，0.466mmol)和1-溴甲基-3-氯苯(127mg，1.3eq，Aldrich)根据与制备2-1)相同的方法进行反应，得到标题化合物(115mg，74％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.74(d，1H)，7.38(s，1H)，7.28-7.21(m，3H)，7.18(d，1H)，5.32-5.22(ABq，2H)，4.21-4.10(m，2H)，3.84(t，1H)，1.99-1.75(2个m，2H)，1.20(t，3H)，0.94(t，3H)
制备19-2)
3-{2-[2-(3-氯-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁酯
使制备19-1)的化合物(115mg，0.343mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(130mg，77％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.80(m，1H)，7.54(d，1H)，7.38(d，1H)，7.30-7.23(m，3H)，7.18(m，1H)，5.31-5.25(m，2H)，5.21-4.71(m，3H)，3.76(m，1H)，2.91-2.62(m，2H)，2.14(m，1H)，1.69(m，1H)，1.43 & 1.39(2个d，9H)，0.96(m，3H)
实施例19)
3-{2-[2-(3-氯-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00531
使制备19-2)的化合物(120mg，0.243mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(87mg，82％)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 8.62(br，1H)，7.89(m，1H)，7.32-7.30(m，4H)，7.20(m，1H)，5.28-5.18(m，2H)，5.20-4.60(br，2H)，4.58 & 4.50(2个br m，1H)，3.66(m，1H)，2.70-2.50(br，2H)，1.77-1.58(m，2H)，0.84(m，3H)
制备20-1)
2-[2-(3-溴-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酸乙酯
使制备6-6)的化合物(100mg，0.48mmol)和1-溴-3-溴甲基苯(154mg，1.3eq，Aldri ch)根据与制备2-1)相同的方法进行反应，得到标题化合物(102mg，54％)。
1HNMR(500MHz，CDCl3)；δ 0.95(t，3H)，0.96(t，3H)，1.78-1.95(m，2H)，3.85(t，1H)，4.15(m，2H)，5.27(q，2H)，7.17-7.45(m，5H)，7.54(s，1H)，7.75(d，1H)
制备20-2)
3-{2-[2-(3-溴-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁酯
使制备20-1)的化合物(100mg，0.254mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(120mg，88％)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)；δ 0.96(m，3H)，1.41(d，9H)，1.69(m，1H)，2.13(m，1H)，2.60-2.91(m，2H)，3.76(m，1H)，4.77(m，1H)，5.01(m，2H)，5.29(m，2H)，7.18(m，2H)，7.30-7.45(m，2H)，7.52(m，2H)，7.80(m，1H)
实施例20)
3-{2-[2-(3-溴-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00541
使制备20-2)的化合物(80mg，0.15mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(59mg，81％)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)；δ 0.96(m，3H)，1.68(m，1H)，2.06(m，1H)，2.50-3.16(m，2H)，3.84(m，1H)，4.77(m，3H)，5.29(m，2H)，7.19-7.52(m，6H)，7.91(m，1H)
制备21-1)
2-[3-氧代-2-(2-三氟甲基-苄基)-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酸乙酯
将制备6-6)的化合物(104mg，0.50mmol)，DIAD(偶氮二甲酸二异丙酯，151mg，1.5eq)，(2-三氟甲基-苯基)-甲醇(131mg，1.5eq)和三苯膦(261mg，2.0eq)溶解于THF(6mL)中，并且在室温搅拌2小时。将混合物减压浓缩并且通过柱色谱法分离(30％EA/己烷)，得到标题化合物(125mg，68％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.79(d，1H)，7.67(d，1H)，7.44(t，1H)，7.36(t，1H)，7.26(d，1H)，6.97(d，1H)，5.62-5.54(ABq，2H)，4.21-4.12(m，2H)，3.90(t，1H)，2.03-1.81(2个m，2H)，1.22(t，3H)，0.97(t，3H)
制备21-2)
5-氟-4-氧代-3-{2-[3-氧代-2-(2-三氟甲基-苄基)-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-戊酸叔丁酯
使制备21-1)的化合物(125mg，0.34mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(48mg，27％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.83(2个d，1H)，7.68(m，1H)，7.51-7.44(m，2H)，7.36(d，1H)，7.23(d，1H)，7.00-6.92(2个d，1H)，5.69-5.51(m，2H)，5.21-4.73(m，3H)，3.78(m，1H)，2.90-2.58(m，2H)，2.16(m，1H)，1.75(m，1H)，1.37(m，9H)，0.96(m，3H)
实施例21)
5-氟-4-氧代-3-{2-[3-氧代-2-(2-三氟甲基-苄基)-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-戊酸
Figure A200780031549D00551
使制备21-2)的化合物(48mg，0.092mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(37mg，86％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.92(dd，1H)，7.70(d，1H)，7.60(bs，1H)，7.45(t，1H)，7.39(t，1H)，7.35(m，1H)，6.95(d，1H)，5.64-5.51(m，2H)，4.77-4.35(m，3H)，3.84(m，1H)，3.06-2.90(m，1H)，2.68-2.58(m，1H)，2.12(m，1H)，1.74(m，1H)，0.97(t，3H)
制备22-1)
2-[3-氧代-2-(3-三氟甲基-苄基)-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酸乙酯
将制备6-6)的化合物(100mg，0.48mmol)，DIAD(偶氮二甲酸二异丙酯，192mg，2.0eq)，(3-三氟甲基-苯基)-甲醇(168mg，2.0eq)和三苯膦(312mg，2.5eq)溶解于THF(6mL)，并且在室温搅拌2小时。将混合物减压浓缩并且通过柱色谱法分离(30％EA/己烷)，得到标题化合物(158mg，90％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.76(d，1H)，7.65(s，1H)，7.60(d，1H)，7.53(d，1H)，7.43(t，1H)，7.20(d，1H)，5.40-5.30(ABq，2H)，4.20-4.08(m，2H)，3.85(t，1H)，2.01-1.76(2个m，2H)，1.19(t，3H)，0.94(t，3H)
制备22-2)
5-氟-4-氧代-3-{2-[3-氧代-2-(3-三氟甲基-苄基)-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-戊酸叔丁酯
使制备22-1)的化合物(157mg，0.43mmol)根据与制备3-5)相同的方法进行反应，得到标题化合物(93mg，41％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.80(2个d，1H)，7.65(2个s，1H)，7.60(m，1H)，7.52(m，2H)，7.44(m，1H)，7.18(2个d，1H)，5.42-5.33(m，2H)，5.18-4.71(m，3H)，3.74(m，1H)，2.90-2.60(m，2H)，2.12(m，1H)，1.68(m，1H)，1.42&1.38(2个s，9H)，0.94(m，3H)
实施例22)
5-氟-4-氧代-3-{2-[3-氧代-2-(3-三氟甲基-苄基)-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-戊酸
Figure A200780031549D00571
使制备22-2)的化合物(93mg，0.18mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(75mg，90％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.90(dd，1H)，7.65(s，1H)，7.57(m，2H)，7.45(t，1H)，7.32(m，1H)，5.37(m，2H)，4.86-4.35(m，3H)，3.84-3.96(m，1H)，3.13-2.92(m，1H)，2.70-2.59(m，1H)，2.08(m，1H)，1.69(m，1H)，0.96(t，3H)
制备23-1)
(3S)-3-{[(苄基氧基)羰基]氨基}-5-(叔丁氧基)-2-羟基-5-氧代戊基2，6-二氯苯甲酸酯
在氮气气氛下向N-苄基氧基羰基-β-叔丁基-天冬氨酸(5.03g，15.6mmol)和NMM(1.90mL，17.1mmol)加入无水四氢呋喃(60mL)，将其保持在-15℃。加入氯甲酸异丁酯(2.12mL，16.3mmol)，并将混合物搅拌约20分钟。向保持在0℃的反应混合物加入重氮甲烷-乙醚溶液(由2.0eq的1-甲基-3-硝基-1-亚硝基-胍合成，60mL)，然后将其在0℃搅拌30分钟，得到重氮酮衍生物。在0℃向其中加入30％HBr/AcOH(6.42mL，2.0eq)，并且搅拌30分钟。反应混合物用乙酸乙酯提取，用水、饱和碳酸氢钠水溶液(两次)，和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩，得到溴甲基酮衍生物(6.4g)。
将溴甲基酮衍生物(4.36g)和2，6-二氯苯甲酸(2.28g，1.1eq)溶解于二甲基甲酰胺(18mL)中，向其中加入KF(1.58g，2.5eq)，并将混合物在室温搅拌2小时。将通过减压浓缩得到的残余物用乙酸乙酯提取，用水、饱和碳酸氢钠水溶液(两次)，和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩，得到2，6-二氯苄氧基甲基酮衍生物。将这个化合物溶解于甲醇(20mL)，并且通过加入NaBH4(412mg)-甲醇溶液(40mL)进行反应。使反应混合物缓慢回温到室温，维持2小时。用乙酸中止反应。将反应混合物减压蒸馏以除去甲醇，用乙酸乙酯提取(50mL x 2)，用水和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，减压浓缩，并且通过柱色谱法分离(乙酸乙酯-己烷，1:5)，得到4.80g(86％)的标题化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.3-7.2(m，8H)，5.9(m，1H)，5.2(m，4H)，4.7(m，1H)，2.9(m，1H)，2.7(m，1H)，1.4(s，9H)
制备23-2)
(3S)-3-氨基-5-(叔丁氧基)-2-羟基-5-氧代戊基2，6-二氯苯甲酸酯
将制备23-1)的化合物(4.80g，9.37mmol)溶解于EtOH，并且在氢气球下进行脱苄基氧基羰基化(Pd/C)进行40分钟，得到3.47g(98％)的标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d)δ 8.2(br，2H)，7.6-7.5(m，3H)，6.1(m，1H)，4.4-3.9(m，3H)，3.0-2.6(m，2H)，1.4(s，9H)
制备23-3)
2，6-二氯-苯甲酸(S)-4-叔丁氧基羰基-3-{2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-2-氧代-丁酯
根据与制备2-3)相同的方法水解制备6-8)的化合物，得到羧酸衍生物.将这个羧酸衍生物(100mg，0.304mmol)，制备23-2)的化合物(151mg，1.2eq)和HATU(337mg，1.3eq)的混合物冷却到0℃，向其中加入在DMF溶剂(4mL)中的三乙胺(0.17mL，4.0eq)，并使混合物反应1小时。将溶剂减压蒸馏。残余物用乙酸乙酯提取(30mL x 2)，用水、碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩，得到2，6-二氯-苯甲酸(S)-4-叔丁氧基羰基-3-{2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-2-羟基-丁酯。向这个化合物和Dess-Martin试剂(260mg，2.0eq)中加入无水二氯甲烷(4mL)，然后将其在室温搅拌0.5小时。用异丙醇(1mL)中止反应。在减压下通过硅藻土过滤除去固体，并用乙酸乙酯提取(20mL x 2)。提取物用水、饱和碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过柱色谱法分离(20-25％乙酸乙酯-己烷)，得到163mg(78％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.84(m，1H)，7.62(m，1H)，7.43(t，1H)，7.34-7.25(m，4H)，7.16(m，1H)，7.06(t，1H)，6.83-6.74(2个d，1H)，5.86-5.52(m，2H)，5.22-4.81(m，3H)，3.86(m，1H)，2.89-2.62(m，2H)，2.02(m，1H)，1.75(m，1H)，1.49 & 1.48(2个s，9H)，1.41 & 1.37(2个s，9H)，0.99(m，3H)
实施例23-1)和23-2)
2，6-二氯-苯甲酸(S)-3-{(R)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基}-丁酰基氨基}-4-羧基-2-氧代-丁酯和
2，6-二氯-苯甲酸(S)-3-{(S)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基}-丁酰基氨基}-4-羧基-2-氧代-丁酯
Figure A200780031549D00591
使制备23-3)的化合物(159mg，0.29mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物，为两种非对映体的混合物，然后通过制备TLC将其分离(70％ EtOAc/己烷)，得到62mg(42％)和50mg(34％)的每种非对映体。在TLC具有较小极性的化合物被指定为实施例23-1，较高极性的化合物指定为实施例23-2，但是没有鉴定它们的具体的非对映体形式。
较低极性的化合物：1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 8.78(br，1H)，7.93(m，1H)，7.56-7.52(m，3H)，7.40(m，1H)，7.34(t，1H)，7.11(m，1H)，7.05(m，1H)，6.67(d，1H)，5.58-5.42(ABq，2H)，5.30-4.60(brm，3H)，4.58&4.50(2个br m，1H)，3.72(m，1H)，2.70-2.50(br，2H)，1.82-1.63(m，2H)，1.40(m，9H)，0.85(m，3H)(实施例23-1)
较高极性的化合物：1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 8.74(br，1H)，7.93(m，1H)，7.57-7.51(m，3H)，7.40(d，1H)，7.34(d，1H)，7.11(m，1H)，7.02(m，1H)，6.67(d，1H)，5.56-5.43(ABq，2H)，5.26-5.00(brm，2H)，4.72(m，1H)，3.70(m，1H)，2.76-2.50(br，2H)，1.82-1.63(m，2H)，1.38(s，9H)，0.85(t，3H)(实施例23-2)
制备24-1)
叔丁基(3S)-3-氨基-4-羟基-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸酯(pentanoate)
使N-苄基氧基羰基-β-叔丁基-天冬氨酸(17.9g，55.5mmol)和2，3，5，6-四氟苯酚根据与制备23-1)和23-2)相同的方法进行反应，得到13.2g(68％)的标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ 8.2(br，2H)，7.6-7.5(m，1H)，5.9(m，1H)，4.3-4.1(m，3H)，3.6(m，1H)，2.7(m，1H)，1.4(s，9H)
制备24-2)
(S)-3-{(R)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟-苯氧基)-戊酸叔丁酯和；
(S)-3-{(S)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟-苯氧基)-戊酸叔丁酯
Figure A200780031549D00601
Figure A200780031549D00611
使制备6-8)的化合物(104mg，0.29mol)根据与制备2-3)相同的方法水解，得到羧酸衍生物。将这个羧酸衍生物(95mg，0.29mmol)，制备24-1)的化合物(113mg，1.2eq)和HATU(143mg，1.3eq)的混合物冷却到0℃，向其中加入在DMF溶剂(5mL)中的三乙胺(0.16mL，4.0eq)并使混合物反应2小时。将溶剂减压蒸馏。残余物用乙酸乙酯提取(30mL x 2)，用水、碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，减压浓缩，并且通过制备TLC预先纯化(500％EA/己烷)，得到172mg(89％)的(S)-3-{2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-羟基-5-(2，3，5，6-四氟-苯氧基)-戊酸叔丁酯。向这个化合物和Dess-Martin试剂(220mg，2.0eq)中加入无水二氯甲烷(4mL)，然后将其在室温搅拌1小时。用异丙醇(1mL)中止反应。在减压下通过硅藻土过滤除去固体，并用乙酸乙酯提取(20mL x 2)。提取物用水、饱和碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化(30％ EA/己烷)，得到74mg(38％)较低极性的标题非对映体和67mg(35％)的较高极性的标题非对映体。
较低极性的非对映体：
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.83(d，1H)，7.59(d，1H)，7.42(d，1H)，7.22(d，1H)，7.17(t，1H)，7.06(t，1H)，6.76(m，1H)，6.73(d，1H)，5.65(Abq，2H)，5.19-5.02(Abq，2H)，4.75(m，1H)，3.81(dd，1H)，2.76(dd，1H)，2.59(dd，1H)，2.19(m，1H)，1.73(m，1H)，1.48(s，9H)，1.34(s，9H)，0.98(t，3H)
较高极性的非对映体：
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.83(d，1H)，7.61(d，1H)，7.39(d，1H)，7.23(d，1H)，7.14(t，1H)，7.05(t，1H)，6.78(d，1H)，6.72(m，1H)，5.74-5.58(Abq，2H)，5.07-4.83(Abq，2H)，4.82(m，1H)，3.80(dd，1H)，2.89(dd，1H)，2.68(dd，1H)，2.16(m，1H)，1.75(m，1H)，1.48(s，9H)，1.39(s，9H)，0.96(t，3H)
实施例24-1)和24-2)
(S)-3-{(R)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟-苯氧基)-戊酸和
(S)-3-{(S)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟-苯氧基)-戊酸
Figure A200780031549D00621
使在制备24-2)中制备的较低极性的化合物(74mg，0.11mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到的标题化合物之一(58mg，87％)，将其指定为实施例24-1)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.91(d，1H)，7.43(d，1H)，7.39(bs，1H)，7.18(t，1H)，7.05(t，1H)，6.75(m，1H)，6.70(d，1H)，5.65(s，2H)，5.40-4.50(m，3H)，3.95(m，1H)，3.01(m，1H)，2.55(m，1H)，2.13(m，1H)，1.73(m，1H)，1.47(s，9H)，0.97(t，3H)(实施例24-1)
使在制备24-2)中制备的较高极性的化合物(67mg，0.10mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到另一种标题化合物(60mg，98％)，将其指定为实施例24-2)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.91(d，1H)，7.42(d，1H)，7.31(bs，1H)，7.16(t，1H)，7.03(t，1H)，6.75(m，1H)，6.70(d，1H)，5.65(s，2H)，4.89-4.03(m，3H)，3.76(m，1H)，2.99(m，1H)，2.70(m，1H)，2.12(m，1H)，1.75(m，1H)，1.48(s，9H)，0.97(t，3H)(实施例24-2)
制备25-1)
(S)-3-{2-[2-(3-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟-苯氧基)-戊酸叔丁酯
使制备7-2)的化合物(135mg，0.38mmol)根据与制备24-2)相同的方法进行反应，得到标题化合物(198mg，79％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.79(2个d，1H)，7.63(m，1H)，7.42(2个s，1H)，7.32-7.14(m，4H)，6.73(m，1H)，5.43-5.21(m，2H)，5.20-4.71(m，3H)，3.77(m，1H)，2.93-2.59(m，2H)，2.15(m，1H)，1.69(m，1H)，1.43 & 1.40(2个s，9H)，1.29(s，9H)，0.95(m，3H)
实施例25-1)和25-2)
(S)-3-{(R)-2-[2-(3-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟-苯氧基)-戊酸和
(S)-3-{(S)-2-[2-(3-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟-苯氧基)-戊酸
Figure A200780031549D00631
使制备25-1)的化合物(75mg，0.11mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物，为两种非对映体的混合物，然后通过制备TLC将其分离(70％ EtOAc/己烷)，得到31mg(44％)的较低极性的非对映体(实施例25-1)和33mg(48％)的较高极性的非对映体(实施例25-2)。
较低极性的非对映体：1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 8.70(m，1H)，7.87(d，1H)，7.50(m，1H)，7.30(s，1H)，7.24(d，2H)，7.18(m，1H)，6.97(m，1H)，5.24-5.03(m，4H)，4.64-4.52(m，1H)，3.68(m，1H)，2.68-2.58(m，2H)，1.73(m，1H)，1.63(m，1H)，1.19(s，9H)，0.82(m，3H)(实施例25-1)
较高极性的非对映体：1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 8.66(m，1H)，7.87(d，1H)，7.50(m，1H)，7.30(s，1H)，7.25(2个d，2H)，7.16(m，1H)，6.96(m，1H)，5.23-4.90(m，4H)，4.63-4.54(m，1H)，3.68(m，1H)，2.68-2.50(m，2H)，1.73(m，1H)，1.63(m，1H)，1.19(s，9H)，0.82(m，3H)(实施例25-2)
制备26-1)
(S)-2-氨基-琥珀酸4-叔丁酯1-甲酯盐酸盐
向Cbz-Asp(O-叔丁基)-OH.H2O(5.00g，14.6mmol)和K2CO3(4.05g，2.0eq)中加入DMF(100mL)和MeI(2.74mL，3eq)，然后将其在室温搅拌2-3小时。将溶剂减压蒸馏。残余物用乙酸乙酯提取(100mLx 2)，用水、碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(30％乙酸乙酯/己烷)，得到(S)-2-苄基氧基羰基氨基-琥珀酸4-叔丁酯1-甲酯以化学计量的收率。将这个化合物溶解于MeOH(100mL)，加入c-HCl(1.1mL，1.0eq)，并且在氢气球下进行脱苄基氧基羰基化(Pd/C)40分钟，从而得到3.28g(96％)的标题化合物。
制备26-2)
(S)-2-{2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-琥珀酸4-叔丁酯1-甲酯
使制备6-8)的化合物根据与制备2-3)相同的方法水解，得到羧酸衍生物。将羧酸衍生物(938mg，2.86mmol)，制备26-1)的化合物(753mg，1.1eq)和HATU(1.41g，1.3eq)的混合物冷却到0℃，向其中加入在DMF溶剂(18mL)中的三乙胺(2.00mL，5.0eq)并使混合物在室温反应1小时。将溶剂减压蒸馏。残余物用乙酸乙酯提取(50mLx 2)，用水、碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(50％乙酸乙酯-己烷)，得到1.24g(84％)的标题化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.84(dd，1H)，7.48(d，1H)，7.41-7.32(dd，1H)，7.30(d，1H)，7.23(m，1H)，7.14(m，1H)，6.92-6.83(dd，1H)，5.76-5.65(m，2H)，4.82(m，1H)，3.91(m，1H)，3.76，3.68(2个s，3H)，2.92-2.63(m，2H)，2.19(m，1H)，1.76(m，1H)，1.55(s，9H)，1.46，1.42(2个s，9H)，1.02(m，3H)。
制备26-3)
(S)-5-溴-3-{2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-戊酸叔丁酯
将制备26-2)的化合物(1.24g，2.41mmol)根据与制备2-3)相同的方法水解，得到羧酸衍生物(1.15g，95％)。在氮气气氛下向这个羧酸衍生物(1.15g，2.30mmol)和NMM(0.28mL，2.53mmol)中加入无水四氢呋喃(20mL)，将其保持在0℃。加入氯甲酸异丁酯(0.31mL，2.42mmol)，并将混合物搅拌约30分钟。向保持在0℃的反应混合物加入重氮甲烷-乙醚溶液(由4.0eq的1-甲基-3-硝基-1-亚硝基-胍合成，40mL)，然后将其在0℃搅拌4小时，得到重氮酮衍生物。在0℃向其中加入30％ HBr/AcOH(1.02mL，2.0eq)，并且搅拌30分钟。反应混合物用乙酸乙酯提取，用水、饱和碳酸氢钠水溶液(两次)，和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩，得到溴甲基酮衍生物(1.30g，98％)。这些化合物不经进一步纯化用于下一个反应。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.84(dd，1H)，7.63-7.58(dd，1H)，7.43(d，1H)，7.25-7.17(m，2H)，7.09(m，1H)，6.83-6.75(dd，1H)，5.74-5.62(m，2H)，4.91，4.82(2个m，1H)，4.12-3.93(m，2H)，3.79(m，1H)，2.91-2.60(m，2H)，2.17(m，1H)，1.74(m，1H)，1.49(s，9H)，1.40，1.36(2个s，9H)，0.97(m，3H)。
制备26-4)
(S)-3-{2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，6-三氟-苯氧基)-戊酸叔丁酯
将制备26-3)的化合物(100mg，0.17mmol)和2，3，6-三氟-苯酚(31mg，1.2eq)溶解于二甲基甲酰胺(2mL)，向其中加入KF(25mg，2.5eq)，并将混合物在室温搅拌4小时。将通过减压浓缩得到的残余物用乙酸乙酯提取，用水、饱和碳酸氢钠水溶液(两次)，和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化(70％乙酸乙酯/己烷)，得到77mg(69％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.82(m，1H)，7.56(m，1H)，7.42(t，1H)，7.23(t，1H)，7.16(m，1H)，7.06(m，1H)，6.82-6.73(m，3H)，5.76-5.55(m，2H)，5.10-4.78(m，3H)，3.82(m，1H)，2.94-2.60(m，2H)，2.16(m，1H)，1.73(m，1H)，1.46(s，9H)，1.39，1.34(2个s，9H)，0.95(m，3H)。
实施例26-1)和26-2)
(S)-3-{(R)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，6-三氟-苯氧基)-戊酸和
(S)-3-{(S)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-4-氧代-5-(2，3，6-三氟-苯氧基)-戊酸
Figure A200780031549D00661
使制备26-4)的化合物(77mg，0.12mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物，为两种非对映体的混合物，然后通过制备TLC将其分离(50％乙酸乙酯/己烷)，得到24mg(34％)的较低极性的非对映体(实施例26-1)和17mg(24％)的较高极性的非对映体(实施例26-2)。
较低极性的非对映体：1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.89(d，1H)，7.43(d，1H)，7.30(m，1H)，7.18(t，1H)，7.05(t，1H)，6.83(m，2H)，6.71(d，1H)，5.67-5.63(m，2H)，4.82-4.10(m，3H)，3.84(m，1H)，2.86(m，1H)，2.52(m，1H)，2.16(m，1H)，1.73(m，1H)，1.48(s，9H)，0.95(t，3H)。
较高极性的非对映体：1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.90(d，1H)，7.41(d，1H)，7.32(m，1H)，7.15(t，1H)，7.02(t，1H)，6.79(m，2H)，6.70(d，1H)，5.63(m，2H)，4.89-4.05(m，3H)，3.90(m，1H)，3.05(m，1H)，2.69(m，1H)，2.12(m，1H)，1.73(m，1H)，1.47(s，9H)，0.96(m，3H)。
制备27)
(S)-3-{2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-(2，6-二氟-苯氧基)-4-氧代-戊酸叔丁酯
将制备26-3)的化合物(100mg，0.17mmol)和2，6-二氟-苯酚(27mg，1.2eq)溶解于二甲基甲酰胺(2mL)，向其中加入KF(25mg，2.5eq)，并将混合物在室温搅拌4小时。将通过减压浓缩得到的残余物用乙酸乙酯提取，用水、饱和碳酸氢钠水溶液(两次)，和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化(70％乙酸乙酯/己烷)，得到77mg(71％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.79(m，1H)，7.54(m，1H)，7.41(m，1H)，7.23(m，1H)，7.16(m，1H)，7.05(m，1H)，6.92-6.72(m，4H)，5.76-5.52(m，2H)，5.02-4.73(m，3H)，3.84(m，1H)，2.97-2.62(m，2H)，2.15(m，1H)，1.71(m，1H)，1.48(s，9H)，1.40，1.34(2个s，9H)，0.96(m，3H)。
实施例27-1)和27-2)
(S)-3-{(R)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-(2，6-二氟-苯氧基)-4-氧代-戊酸
(S)-3-{(S)-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-(2，6-二氟-苯氧基)-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00681
使制备27)的化合物(75mg，0.11mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，得到标题化合物，为两种非对映体的混合物，然后通过制备TLC将其分离(50％ EtOAc/己烷)，得到25mg(36％)的较低极性的非对映体(实施例27-1)和24mg(35％)的较高极性的非对映体(实施例27-2)。
较低极性的非对映体：1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.88(d，1H)，7.43(d，1H)，7.28(m，1H)，7.18(t，1H)，7.05(t，1H)，6.97(m，1H)，6.87(t，2H)，6.71(d，1H)，5.67-5.63(m，2H)，4.77-4.10(m，3H)，3.82(m，1H)，2.83(m，1H)，2.51(m，1H)，2.14(m，1H)，1.71(m，1H)，1.48(s，9H)，0.95(t，3H)
较高极性的非对映体：1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.87(d，1H)，7.41(d，1H)，7.29(m，1H)，7.16(t，1H)，7.03(t，1H)，6.93(m，1H)，6.83(t，2H)，6.72(d，1H)，5.67-5.62(m，2H)，4.88-4.10(m，3H)，3.87(m，1H)，3.04(m，1H)，2.67(m，1H)，2.11(m，1H)，1.72(m，1H)，1.46(s，9H)，0.96(t，3H)。
制备28)
(S)-3-{2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-(二苯基-次膦酰基氧基(phosphinoyloxy))-4-氧代-戊酸叔丁酯
将制备26-3)的化合物(100mg，0.17mmol)和二苯基次膦酸(45mg，1.2eq)溶解于二甲基甲酰胺(2mL)，向其中加入KF(25mg，2.5eq)，并将混合物在室温搅拌4小时。将通过减压浓缩得到的残余物用乙酸乙酯提取，用水、饱和碳酸氢钠水溶液(两次)，和氯化钠水溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，并且减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化(50％乙酸乙酯/己烷)，得到80mg(65％)的标题化合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.87-7.76(m，5H)，7.56-7.41(m，8H)，7.18-7.14(m，2H)，7.07(m，1H)，6.83-6.72(dd，1H)，5.77-5.56(m，2H)，4.94-4.62(m，3H)，3.77(m，1H)，2.79-2.54(m，2H)，2.09(m，1H)，1.68(m，1H)，1.48(s，9H)，1.36 & 1.31(2个s，9H)，0.89(m，3H)。
实施例28)
(S)-3-{2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-丁酰基氨基}-5-(二苯基-次膦酰基氧基)-4-氧代-戊酸
Figure A200780031549D00691
使制备28)的化合物(80mg，0.11mmol)根据与实施例2)相同的方法进行反应，减压浓缩，并且通过制备TLC分离(10％ MeOH/CH2Cl2)，得到68mg(91％)的标题化合物，为两种非对映体的混合物。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ 7.80-7.71(m，5H)，7.52-7.40(m，7H)，7.20(m，1H)，7.15(m，1H)，7.04(m，1H)，6.75(m，1H)，5.72-5.49(m，2H)，4.76-4.10(m，3H)，3.84(m，1H)，2.93-2.54(m，2H)，1.98(m，1H)，1.65(m，1H)，1.46(s，9H)，0.87-0.79(m，3H)。
Figure A200780031549D0070141146QIETU
半胱天冬蛋白酶抑制效果的测定
通过对在Thornberry，N.A.等人，Nature，1992，356,768.Thornberry，N.A.Methods in Enzymology，1994，244,615.Walker，N.P.C.等人Cell，1994，78，343中已知的方法的改进来表达、纯化、和活化已知为半胱氨酸蛋白酶类的α2β2形式的半胱天冬蛋白酶-1和半胱天冬蛋白酶-8，并且还通过类似的方法纯化半胱天冬蛋白酶-9，对它们的抑制活性进行试验。简而言之，在大肠杆菌(E.Coli)中表达p10和p20亚单位(Thornberry，N.A.等人，Nature，1992，356，768)并且通过镍柱和阴离子交换色谱法纯化，得到半胱天冬蛋白酶-1、半胱天冬蛋白酶-8和半胱天冬蛋白酶-9。为如此获得的半胱天冬蛋白酶-1使用荧光底物AcYVAD-AFC、和为半胱天冬蛋白酶-8使用AcDEVD-AFC、和为半胱天冬蛋白酶-9使用AcLEHD-AFC，来测定合成抑制剂的比活度。酶反应在25℃进行，在对于10nM半胱天冬蛋白酶-1的50μM AcYVAD-AFC、对于2.1nM半胱天冬蛋白酶-8的50μMAcDEVD-AFC和对于200nM半胱天冬蛋白酶-9的150μM AcLEHD-AFC的存在下使用在缓冲溶液中的不同浓度的抑制剂，所述缓冲溶液包含50mM HEPES(pH 7.50)、10％(w/v)蔗糖、0.1％(w/v)CHAPS，100mM NaC l，1mM EDTA、和10mM DTT。通过使用荧光分光计测量随时间推移的反应速度和通过得到初始速率常数测定抑制剂的抑制常数Ki和Kobs。Ki由Lineweaver Burk Plot计算得到，Kobs从以下方程1计算得到。
方程式1
Kobs＝-1n(1-At/Aoo)/t
其中
At是指在时间t的裂解速率(％)，和
Aoo是指最大裂解速率(％)。
以405nm的激发波长和505nm的发射波长使用Molecular DeviceCo.的Spectra MAX GeminiXS Fluorescent Spectrometer。
如下测定抑制剂的体内抑制活性：使用Fas抗体(Upstate Biotech05-201)使Jurkat细胞(ATCC TIB-152)发生细胞程序死亡并且通过在Francoeur A.M.和Assalian A.(1996)Biochemica 3，19-25中已知的WST-1方法检测颜色改变来观察在用抑制剂处理细胞时的活的Jurkat细胞的量。以440nm的吸收波长使用Molecular Device Co.的Spectra MAX 340分光仪。
表1
 
实施例编号 半胱天冬蛋白酶-8Kobs/[I](M-1min-1) Jurkat细胞IC50(μM)
1 5.8 E4 8.0
2 4.4 E5 1.48
3 1.3 E6 0.46
4 4.1 E5 0.39
5 2.3 E5 2.07
6 3.8 E6 0.042
7 1.4 E6 0.035
8 1.2 E6 0.82
9 3.0 E6 0.88
10 1.2 E6 0.55
11 3.4 E6 0.17
12 9.3 E5 0.29
13 6.9 E5 3.76
14 8.4 E5 0.73
15 7.2 E5 0.80
16 7.4 E5 0.09
17 1.5 E6 0.13
18 4.4 E6 0.042
19 1.7 E6 0.035
20 1.1 E6 0.043
21 4.0 E6 0.043
22 8.6 E5 0.216
23-1 1.2 E6 0.14
23-2 5.6 E4 2.48
24-1 3.8 E6 0.012
24-2 1.1 E5 4.15
25-1 1.6 E6 0.031
25-2 5.4 E4 1.94
26-1 1.7 E6 0.045
26-2 4.7 E5 -
27-1 7.0 E5 0.090
27-2 1.9 E5 -
28 3.4 E6 0.365
Figure A200780031549D0072141012QIETU
在小鼠中对由Fas抗体诱导的肝脏受伤的治疗作用
步骤1)血样的制备
将雄性的Balb/c小鼠(6周龄，Charles River实验室，大阪，日本)保持在22℃，55％相对湿度，和12小时照明-黑暗循环的条件下。食物和水不限量供应。在无热原的磷酸盐缓冲液中溶解Fas抗体(Jo2；BD pharmingen，San Diego，California)，然后将其以0.15mg/kg的量通过尾部静脉注射给每只小鼠。在注射Fas抗体之后，立即对小鼠口服给予其中溶解试验化合物的媒介物(PEG400:乙醇＝2:1的混合物，用磷酸盐缓冲液稀释20倍)或单独的媒介物。在给药6小时后，从心脏取得血样。
步骤2：血浆转氨酶活性的测定
根据生产商的说明使用ALT试验试剂盒(Asan Pharm.Co.，SeouL，Korea)测定步骤1中所得血样的血浆ALT活性。结果表明，注射Fas抗体急剧地增加血浆中的ALT活性，而试验化合物以剂量依赖性的方式抑制酶活性升高。基于这些结果，使用GraphPad Co.的Prism软件计算试验化合物的ED50值，为0.001-10mg/kg。
Figure A200780031549D0072141039QIETU
如实验部分的上述结果所示，，本发明的式(1)的化合物具有优异的半胱天冬蛋白酶抑制活性，并且特别是在Fas抗体诱导的肝脏损伤的动物模型中表现出治疗作用。因此，式(1)的化合物可以有利地用于治疗由半胱天冬蛋白酶介导的各种疾病和症状。

Claims (12)

1.式(1)的化合物或其药学可接受的盐：
[式1]
Figure A200780031549C00021
其中
I)R1表示H、C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、芳基、或所有天然氨基酸的侧链残基，
II)R2表示H、C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、芳基、或所有天然氨基酸的侧链残基，
III)R3表示H、C1-C5-烃基、羟基、C1-C5-烃氧基、或卤素，
IV)R4表示H、C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、或芳基，
V)R5表示H、C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、或芳基，
VI)R6和R7彼此独立地表示H、C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、或芳基，
VII)X表示-CH2OR9(R9是C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、或芳基)，-CH2OC(＝0)R10(R10是C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、或芳基)，-CH2-OP(＝O)R11 2(R11是C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、或芳基)，或-CH2-W(W为卤素)。
2.权利要求1的化合物或其药学可接受的盐，其中R5表示被以下基团取代的C1-C5-烃基：被取代的或未被取代的C3-C10-环烃基或被取代的或未被取代的芳基；或者表示被取代的或未被取代的芳基。
3.权利要求2的化合物或其药学可接受的盐，其中R5表示被C3-C10-环烃基或芳基取代的C1-C5-烃基，所述C3-C10-环烃基为未被取代的或被选自以下的一个或多个取代基取代：C1-C5-烃基、羟基、C1-C5-烃氧基和卤素，所述芳基为未被取代的或被选自以下的一个或多个取代基取代：C1-C5-烃基、羟基、C1-C5-烃氧基和卤素；或者表示为未被取代的或被选自以下的一个或多个取代基取代的芳基：C1-C5-烃基、羟基、C1-C5-烃氧基和卤素。
4.权利要求1的化合物或其药学可接受的盐，其中
I)R1表示所有天然氨基酸的侧链残基，
II)R2表示C1-C5-烃基、
III)R3表示H、C1-C5-烃基、C1-C5-烃氧基、或卤素，
IV)R4表示H，
V)R5表示被C3-C10-环烃基或芳基取代的C1-C5-烃基，所述C3-C10-环烃基为未被取代的或被选自以下的一个或多个取代基取代：C1-C5-烃基、羟基、C1-C5-烃氧基和卤素，所述芳基为未被取代的或被选自以下的一个或多个取代基取代：C1-C5-烃基、羟基、C1-C5-烃氧基和卤素；或者表示为未被取代的或被选自以下的一个或多个取代基取代的芳基：C1-C5-烃基、羟基、C1-C5-烃氧基和卤素，
VI)R6和R7彼此独立地表示H，
VII)表示-CH2OR9(R9为C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、或芳基)，-CH2OC(＝O)R10(R10为C1-C5-烃基、C3-C10-环烃基、或芳基)，或-CH2-W(W为卤素)。
5.权利要求1的化合物或其药学可接受的盐，其中
I)R1表示-CH2COOH，
II)R2表示C1-C5-烃基、
III)R3表示H、C1-C5-烃基、C1-C5-烃氧基、或卤素，
IV)R4表示H，
V)R5表示被C3-C10-环烃基或芳基取代的C1-C5-烃基，所述C3-C10-环烃基为未被取代的或被选自以下的一个或多个取代基取代：C1-C5-烃基、羟基、C1-C5-烃氧基和卤素，所述芳基为未被取代的或被选自以下的一个或多个取代基取代：C1-C5-烃基、羟基、C1-C5-烃氧基和卤素；或者表示为未被取代的或被选自以下的一个或多个取代基取代的芳基：C1-C5-烃基、羟基、C1-C5-烃氧基和卤素，
VI)R6和R7彼此独立地表示H，
VII)X表示-CH2O-(2，3，5，6-四氟苯基)，-CH2O-(2，3，6-三氟苯基)，-CH2O-(2，6-二氟苯基)，-CH2O-(2，6-二氯苯甲酰基)或-CH2-F。
6.3-2-[2-(2-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-
丁酰基氨基-5-氟-4-氧代-戊酸。
7.3-2-[2-(3-叔丁基-苄基)-3-氧代-2，3-二氢-哒嗪-4-基]-
丁酰基氨基-5-氟-4-氧代-戊酸。
8.抑制半胱天冬蛋白酶的药物组合物，其包括权利要求1-7中任一项定义的化合物或其药学可接受的盐作为活性成分，以及药学可接受的载体。
9.权利要求8的组合物，用于预防炎症和细胞程序死亡。
10.权利要求8的组合物，用于治疗或预防痴呆、脑中风、由于AIDS引起的脑损伤、糖尿病、胃溃疡、肝炎引起的脑损伤、肝炎诱导的肝脏疾病、急性肝炎、暴发性肝衰竭、脓毒病、器官移植排斥、风湿性关节炎、由于缺血性心脏病引起的心脏细胞程序死亡、或肝硬化。
11.权利要求8的组合物，用于治疗急性肝炎或肝硬化。
12.权利要求8的组合物，用于治疗风湿性关节炎。
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