CN101500557B - 用于治疗癌症和血管发生的硝基呋喃化合物 - Google Patents
用于治疗癌症和血管发生的硝基呋喃化合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101500557B CN101500557B CN2007800176952A CN200780017695A CN101500557B CN 101500557 B CN101500557 B CN 101500557B CN 2007800176952 A CN2007800176952 A CN 2007800176952A CN 200780017695 A CN200780017695 A CN 200780017695A CN 101500557 B CN101500557 B CN 101500557B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cancer
- carcinoma
- purposes
- nifurtimox
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
- A61K31/541—Non-condensed thiazines containing further heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
- A61K31/345—Nitrofurans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
Abstract
本发明涉及硝基呋喃化合物(特别是硝呋替莫)的合成及其作为药物用于治疗癌症(特别是成神经细胞瘤)及抑制血管发生的用途。本发明还提供了包含所述化合物的组合物、单位剂型和试剂盒。
Description
技术领域
本发明涉及硝基呋喃化合物(例如硝呋替莫)的合成和用于治疗癌症及抑制血管发生的用途。本发明还提供了包含硝基呋喃化合物的治疗性组合物和试剂盒。
背景技术
癌症是美国的第二大的死亡原因。由于美国不断增加的老年人群,可以合理地预计癌症发病率会持续增长。目前使用多种方式治疗癌症,包括手术、放射疗法和化学疗法。治疗的选择取决于癌症的类型、定位和扩散情况。手术和放射疗法的优点之一是能够将疗法的影响控制在一定程度,从而限制对体内正常组织的毒性。按理说化学疗法是针对扩散型癌症如白血病和淋巴瘤以及转移的最合适治疗。化学疗法通常全身性施用,因此对正常组织的毒性是一个重要的问题。然而,并非所有的肿瘤都对化学治疗剂有反应,其他一些尽管最初对化学治疗剂有反应,但是也可能发展出抗性。因此,需要更好地了解癌症形成和发展以及发展出治疗抗性的内在机制。还需要更有效的癌症治疗。
在过去的若干年间积累了支持下述假说的证据:血管发生促进实体瘤和白血病的生长和发展。血管发生有利于增生转化为瘤形成,即从细胞增殖状态转化为肿瘤细胞特征性的失控增殖状态。血管发生还影响癌细胞扩散至整个身体,最终导致转移形成。
更近期的证据暗示血管发生与除癌症外的其他疾病的发病机制也有联系。例如,血管发生似乎为炎性细胞提供了进入慢性炎症(例如克罗恩病和慢性膀胱炎)位点的通道,并在类风湿性关节炎中破坏软骨。血管发生还促进动脉粥样硬化斑的生长和出血,在子宫内膜异位症中导致腹膜内出血,并且是失明的一个原因。血管发生还牵涉其他疾病的发病机制,因此更强烈要求寻找有效的血管发生抑制剂。目前已经发现了若干种血管发生抑制剂,有一些目前正在临床试验中。
成神经细胞瘤是儿童癌症死亡的最主要原因;它是儿童中最常见的颅外实体瘤,其预后很差。目前的高强度化疗、手术、放射和自体骨髓移植术常常是不成功的,使得患者未治愈、虚弱并且不能够承受更强烈的治疗。目前大部分年龄大于1岁的儿童在标准疗法中不成功。这些儿童中只有30%在诊断后存活长达5年1,2。因此,需要治疗策略中的新进展来改善成神经细胞瘤中的总体存活率。
发明内容
本发明提供了用于改进的硝基呋喃化合物合成的方法,以及用于在哺乳动物(特别是人)受试者中治疗癌症及抑制血管发生的方法和组合物。本发明部分基于下述偶然发现:在用硝呋替莫治疗查加斯病(Chagasdisease)的患者中,一种已知作为抗真菌剂使用的硝基呋喃化合物硝呋替莫减小了成神经细胞瘤肿瘤的大小。还发现硝呋替莫在体外抑制成神经细胞瘤细胞的增殖。本发明还部分基于硝呋替莫抑制血管发生这一发现。
硝呋替莫属于称为硝基呋喃的化合物组(图1)。硝基呋喃(包括硝呋替莫)是硝基杂环化合物,其中许多具有在哺乳动物中抵抗原生动物和细菌感染的生物活性。4迄今为止,没有研究将硝基呋喃用于治疗人类癌症,因为在兽医学动物中观察到了毒效应。例如,发现一种兽用抗微生物剂呋喃西林在动物中引起乳房和卵巢肿瘤。5
硝呋替莫减小肿瘤大小、抑制成神经细胞瘤细胞的增殖和抑制血管发生的这些新的观察结果表明,硝呋替莫和其他硝基呋喃化合物能够用于治疗癌症和由血管发生所介导或引起的疾病或病症。本文中描述了一些这类疾病和病症作为治疗的靶标。
因此,本发明的一个方面提供了治疗患有癌症的哺乳动物(优选人)受试者的方法。该方法包括以治疗癌症的有效量对该受试者施用硝基呋喃化合物。所述癌症可以是转移癌。在一些优选的实施方案中,所述癌症可以是实体瘤,例如成神经细胞瘤、成髓细胞瘤(medulloblastoma)、周围恶性神经鞘瘤、室管膜瘤、颅咽管瘤、星形细胞瘤(青少年纤维性星形细胞瘤、室管膜下巨细胞性星形细胞瘤、多形性黄色星形细胞瘤(pleimorphic xanthoastrocytoma)、间变性星形细胞瘤(anaplasticastrocytoma)或大脑胶质瘤病(gliomatosis cerebri))、脑脊膜瘤、生殖细胞瘤、胶质瘤、混合性胶质瘤、脉络丛瘤、少突胶质瘤(混合性胶质瘤(例如少星形细胞瘤(oligoastrocytoma))或间变性少突胶质瘤)、周围神经外胚层瘤、原始神经外胚层瘤(PNET)、CNS淋巴瘤、垂体腺瘤或施万鞘瘤。在一些特别优选的实施方案中,所述癌症是成神经细胞瘤或成髓细胞瘤。在任何实施方案中,受试者可以没有需要用硝基呋喃治疗的其他适应症,即受试者不需要还患有查加斯病或例如由微生物感染引起的其他一些适应症。该方法还可额外包括用化学疗法、手术和/或放射疗法治疗受试者。
另一方面,本发明提供了在哺乳动物(优选人)受试者中抑制血管发生的方法。该方法包括以有效抑制血管发生的有效量对该受试者施用硝基呋喃化合物。受试者可患有癌症、眼病(例如黄斑变性、黄斑病变、糖尿病性视网膜病或早熟性视网膜病(晶状体后纤维组织形成))、皮肤病(例如婴儿血管瘤、寻常疣、银屑病、神经纤维瘤病或大疱性表皮松解)、自身免疫性病(例如类风湿性关节炎)、妇科疾病(例如子宫内膜息肉、子宫内膜异位、功能障碍性子宫出血、卵巢过度刺激综合征、多囊性卵巢综合征(PCO)或先兆子痫)、心血管疾病(例如冠心病、缺血性心肌病、心肌缺血、动脉硬化、动脉粥样硬化、动脉粥样硬化斑块新血管形成(atherosclerotic plaque neovascularization)、动脉阻塞性疾病、缺血、缺血性溃疡、缺血或心肌缺血后血运重建、外周血管疾病,或间歇性跛行),或胃肠疾病(例如克罗恩病和溃疡性结肠炎、伯格病(Buerger Disease)、血栓闭塞性血管炎、闭塞性动脉硬化、缺血性溃疡、多发性硬化、特发性肺纤维化、HIV感染、足底筋膜炎(plantar fasciitis)、希普尔病(Von Hippel-Landau Disease)、CNS成血管细胞瘤、视网膜成血管细胞瘤、甲状腺炎、良性前列腺肥大、肾小球肾炎、异位骨形成(ectopic bone formation)或瘢痕疙瘩)。癌症可以是胆管癌;膀胱癌;骨癌;脑癌或CNS癌;乳腺癌;子宫颈癌;绒毛膜癌;结肠和直肠癌;结缔组织癌;消化系统癌;子宫内膜癌;食管癌;眼癌;fibromael;头与颈癌;胃癌;上皮内赘生物;肾癌;喉癌;白血病,包括急性髓细胞样白血病、急性淋巴样白血病、慢性髓细胞样白血病、慢性淋巴样白血病;肝癌;肺癌(例如小细胞和非小细胞的);淋巴瘤,包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤;黑色素瘤;口腔癌(例如唇、舌、口和咽癌);卵巢癌;胰腺癌;前列腺癌;视网膜母细胞瘤;横纹肌肉瘤;直肠癌;肾癌;呼吸系统癌;肉瘤;皮肤癌;胃癌;睾丸癌;甲状腺癌;子宫癌;泌尿系统癌;肉瘤或癌瘤(carcinoma)。所述癌症可以是转移癌。在任何实施方案中,受试者可以没有需要用硝基呋喃治疗的任何其他适应症,例如不患有查加斯病。该方法还可额外包括用化学疗法、手术和/或放射疗法治疗患者。
另一方面,本发明提供了用于治疗前述疾病、病症或状况的药物组合物。该组合物包含与可药用载体混合的一种或多于一种的硝基呋喃化合物。优选地,所述硝基呋喃化合物为硝呋替莫、呋喃唑酮(furazolidine)或硝呋太尔。更优选地,所述硝基呋喃化合物为硝呋替莫。在一个非常具体的方面中,该组合物包含药物单位剂型,其含有有效治疗成神经细胞瘤或其他相关癌症(即中枢神经系统癌)的用量的硝基呋喃化合物,优选硝呋替莫。优选地,该单位剂型为与可药用载体混合的约200-300mg药物。在另一个非常具体的方面中,所述组合物包含硝基呋喃化合物,特别是硝呋替莫,并且也可以包含抗坏血酸或丁硫氨酸亚砜胺(buthionine sulfoximine)作为第二活性成分或药剂。这些组合物可以配制为用于经口、鞘内、静脉内或肌内给药;优选经口给药配方。
在另一方面中,本发明是包含与合适的可药用载体混合的硝基呋喃化合物(例如硝呋替莫)的试剂盒,其被配制为用于经口、鞘内、静脉内或肌内给药。优选经口配方。该试剂盒还可以包含同样在合适的可药用载体中的有效量的抗坏血酸或丁硫氨酸亚砜胺或二者都有。该试剂盒还可包含使用说明。在一些实施方案中,使用说明教导保健提供者如何施用硝呋替莫。
如上所述,所述组合物、其用途及试剂盒可额外包括第二药剂或成分。该第二药剂可以是谷胱甘肽的拮抗剂或耗竭剂。谷胱甘肽的拮抗剂或耗竭剂的实例包括但不限于丁硫氨酸亚砜胺、异硫氰酸盐或酯、环磷酰胺、异环磷酰胺(ifosphamide)、放线菌素D或N-(4-羟基苯基)维甲酰胺(N-(4-hydroxyphenyl)retinamide,4-HPR)。该第二药剂可以是促氧化剂。促氧化剂的实例包括但不限于抗坏血酸、过氧化氢和氢醌。促氧化剂是本领域普通技术人员已知的。在一些重要的实施方案中,促氧化剂(例如抗坏血酸)与硝基呋喃化合物同时施用,或在硝基呋喃化合物之前施用。第二药剂可以是化学治疗剂。一些重要的化学治疗剂实例包括但不限于拓扑替康(topotecan);有机金属如顺铂、卡铂;多柔比星、长春新碱、长春碱、紫杉醇及其同源物(congener)、放线菌素D。这些化学治疗剂的实例在下文列出。第二药剂可以是血管破坏剂(vasculardisrupting agent)。血管破坏剂的例子包括但不限于考布他汀(combretostatin)、天然异硫氰酸盐或酯或其合成衍生物和类似物。第二药剂可以是血管发生抑制剂。血管发生抑制剂的实例包括但不限于2-甲氧雌二醇(2-ME)、AG3340、制管张素、抗凝血酶III、抗VEGF抗体、巴马司他、贝伐单抗(avastatin)、BMS-275291、CAI、Canstatin、卡托普利、软骨来源的抑制剂(CDI)、CC-5013、塞来考昔(CELEBREX)、COL-3、考布他汀、考布他汀A4磷酸盐、Dalteparin(FRAGIN)、EMD121974(西仑吉肽)、内皮抑制素、Erlotinib(TARCEV A)、gefitinib(Iressa)、高金雀花碱、氢溴酸卤夫酮(TEMPOSTATINTM)、Id1、Id3、IM862、甲磺酸伊马替尼、可诱导蛋白10、干扰素-α、白介素12、薰草菌素A、LY317615或AE-941(NEOVASTATTM)、马立马司他、Maspin、乙酸甲羟孕酮、Meth-1、Meth-2、新伐司他、骨桥蛋白切割产物、PEX、色素上皮生长因子(PEGF)、血小板因子4、促乳素片段、增殖蛋白相关蛋白(PRP)、PTK787/ZK222584、重组人血小板因子4(rPF4)、Restin、角鲨胺、SU5416、SU6668、苏拉明、紫杉醇、Tecogalan、沙利度胺、血小板反应素、TNP-470、肌钙蛋白I、Vasostatin、VEGl、VEGF-Trap和ZD6474。
所述血管发生抑制剂可以是VEGF拮抗剂。在一些实施方案中,所述VEGF拮抗剂是VEGF结合分子。VEGF结合分子可以是VEGF抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中,所述VEGF拮抗剂是NeXstar。
本发明的治疗组合物可以经口、舌下、向颊、鼻内、静脉内、肌内、鞘内、颅内、腹膜内、皮下、皮内、局部、直肠、阴道、滑膜内或玻璃体内给药。
另一方面,本发明包括制造本发明硝基呋喃化合物和硝基呋喃类似物的改进方法。该方法可以更有效和更无害地合成硝基呋喃和硝基呋喃类似物的侧链,并在“发明详述”中详细描述。
参考“详细描述”后,本发明的这些方面和其他方面以及多种优点和效用将是很明显的。应当理解本发明的各方面均可包括多种实施方案。
附图说明
图1是硝基呋喃化合物主链的结构。
图2A是显示不同硝呋替莫剂量下成神经细胞瘤细胞的细胞生存力的直方图。细胞生存力测定:在48孔平板中培养SMS-KCN、SMS-KCNR和IMR-32细胞(50,000个细胞/孔),并用1μg/ml、10μg/ml或20μg/ml硝呋替莫处理120个小时。如“材料和方法”中所述使用MTS测定法测定细胞生存力,并表述为以运载体处理的对照的百分比。数据表示为四个重复的均值±SD。
图2B是显示不同的硝呋替莫剂量下BrdU掺入的直方图。细胞增殖测定:在48孔平板中培养SMS-KCNR细胞并用0、1.0、5.0、10和20μg/ml硝呋替莫处理48小时。如实施例中所述通过BrdU掺入测定法来测定DNA合成。结果表述为未处理对照的百分比和六个重复的平均值(±SD)。
图3A是显示硝呋替莫对成神经细胞瘤细胞的影响的一组直方图。用0、1.0、10和20μg/ml硝呋替莫将SMS-KCNR细胞的亚汇合培养物处理96小时。如“材料和方法”中所述使用光学显微镜在100倍放大率下对细胞照相。使用经运载体处理的细胞作为对照。图i:运载体对照;ii:1μg/ml、iii:10μg/ml和iv:20μg/ml硝呋替莫。
图3B是显示硝呋替莫引起成神经细胞瘤细胞的凋亡性细胞死亡的一组图片。培养SMS-KCNR细胞并与0、1.0、10和20μg/ml硝呋替莫孵育96小时,如实施例中所述进行TUNEL测定,照相并加工。放大率=100倍。i到iv是叠加的凋亡染色和核染色的代表性图片。由SMS-KCNR细胞中DNA断裂造成的TUNEL阳性核表明,硝呋替莫处理引起了凋亡性细胞死亡的发生,(i):运载体对照,(ii):1μg/ml,(iii):10μg/ml和(iv):20μg/ml。凋亡性核的数目随着硝呋替莫剂量的提高而增加。
图4A是显示硝呋替莫对成神经细胞瘤细胞中胱天蛋白酶-3活化的影响的槽图。培养SMS-KCNR细胞并用浓度递增的硝呋替莫孵育96小时。裂解细胞、在12%SDS PAGE上分离、印迹至PVDF膜上并用对活化的胱天蛋白酶-3具有特异性的抗体探测,如实施例所述。清洗印迹并用肌动蛋白抗体作为上样对照进行再探测。上图-活化的胱天蛋白酶-3,下图-肌动蛋白。
图4B是显示不存在或存在Z-VAD-FMK时硝呋替莫对成神经细胞瘤细胞生存力的影响的直方图。用pancaspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理SMS-KCNR细胞。用50μM Z-VAD-FMK将SMS-KCNR细胞预处理90分钟,之后用硝呋替莫(10μg/ml)处理96小时。通过MTS测定法测量细胞生存力。如下测定pancaspase抑制剂对细胞毒性的反转:比较存在或不存在pancaspase抑制剂时经硝呋替莫处理的细胞的生存力。数值为四个重复的均值±SD。
图5是显示硝呋替莫对Akt磷酰化的影响的Western印迹图。(A):将SMS-KCNR细胞去血清处理18小时,用0、1.0、10和20μg/ml硝呋替莫处理90分钟,然后用BDNF(100μg/ml)刺激10分钟。裂解细胞并使用磷酸-Akt抗体通过Western印迹进行分析(上图)。清洗印迹并用对总Akt蛋白质特异的抗体再探测(下图)。(B):在存在血清时用硝呋替莫将SMS-KCNR细胞处理90分钟。然后裂解细胞并使用抗体通过Western印迹进行分析。
图6是一组图片,其显示生长因子刺激的主动脉环测定法中硝呋替莫对微血管萌发的血管发生抑制。(A)运载体处理的主动脉,无生长因子;(B)运载体处理的主动脉,有生长因子。(C)、(D)、(E)表示存在生长因子时1、10和20ug/ml浓度的硝呋替莫处理。
图7是直方图,其显示硝呋替莫以剂量依赖性方式抑制人主动脉内皮细胞增殖,这通过DNA合成中溴代脱氧尿苷(BrDu)掺入的减少来反映。
图8(A-C)是显示硝呋替莫以剂量依赖性方式抑制管形成(tubeformation)(血管发生过程中的关键步骤)的一组图。(A)经运载体处理的内皮细胞,无生长因子,(B)经运载体处理的内皮细胞,有生长因子。(C)表示存在生长因子时20ug/ml浓度硝呋替莫处理的图片和定量图。(D)是显示硝呋替莫对融合形成测定法(fuse formations assay)的影响的定量分析。
图9是显示与丁硫氨酸亚砜胺(BSO)组合的硝呋替莫对成神经细胞瘤细胞生存力的影响的直方图。过夜培养SMS KCNR细胞,然后用与1、50或100μM BSO组合的0、1或10μg/ml硝呋替莫处理48小时。用Calcein AM测定法测量细胞生存力。
图10是显示与抗坏血酸或BSO任一组合的硝呋替莫对成神经细胞瘤细胞生存力的影响的直方图。过夜培养SY5Y细胞,然后用10μg/ml硝呋替莫(N)、0.3mM抗坏血酸(A)或50μM BSO(B)单独或组合(NB,NA,NBA)处理24小时。用Calcein AM测定法测量细胞生存力。结果表述为运载体对照的百分比。
图11是直方图,其显示硝呋替莫处理对实施例12中所述成神经细胞瘤异种移植小鼠的影响。
图12是展示如实施例16中详述的本发明硝基呋喃化合物的合成方案的示意图。
发明详述
本发明部分基于下述的偶然发现(如实施例13中详述):4-[5-硝基亚糠基]氨基]-3-甲基硫代吗啉1,1-二氧化物(也被称作其非专有名称“硝呋替莫”)的施用减小肿瘤大小、抑制成神经细胞瘤细胞的增殖并抑制血管发生。因此,本发明在一些方面包括对患有癌症的受试者施用药物形式的硝基呋喃化合物,以治疗该受试者的癌症。本发明在一些方面还包括对受试者施用硝基呋喃化合物,以抑制该受试者中的血管发生。所述硝基呋喃化合物以有效且在生理上可接受的量施用,以治疗受试者的癌症。尽管不希望受任何具体理论的束缚,但是我们相信硝呋替莫具体是通过产生自由基来发挥其细胞毒效应。硝呋替莫是一种硝基杂环化合物;其硝基可以在无细胞体系中通过与细胞色素P-450还原酶、黄嘌呤氧化酶、抗坏血酸和儿茶酚胺类反应而还原为硝基阴离子基团。然后硝基阴离子能将氧还原为超氧阴离子基团和过氧化氢。在查加斯病中,硝基阴离子自由基和氧自由基已经显示对寄生虫克氏锥虫()具有细胞毒性。硝基的还原不仅产生阴离子基团,而且与儿茶酚胺3的相互作用似乎也产生半醌自由基,该自由基加重了对在功能上具有重要性的生物分子的损伤,导致成神经细胞瘤细胞系的凋亡。已知成神经细胞瘤细胞含有高水平的儿茶酚胺,从而可能导致相对特异性地靶向这些细胞。成神经细胞瘤细胞系中与儿茶酚胺的反应通过用AMPT预处理使细胞毒性降低来证实,AMPT是减少细胞中储存的儿茶酚胺总量的酪氨酸羟化酶抑制剂。另外,交感神经元(而非副交感神经元或非神经元细胞)对硝呋替莫增强的敏感性支持了该结论。
术语“治疗”包括改善、治愈或维持(即防止复发)病症。患病后治疗的目的在于减少、改善或完全消除病症和/或其相关的症状、预防其恶化或者当病症最初被消除时预防其再次发生(即防止复发)。
受试者是指哺乳动物物种,包括但不限于犬、猫、马、牛、猪、绵羊、山羊、鸡、啮齿动物或灵长类。受试者可以是室内宠物(例如犬、猫)、农业家畜(agricultural stock animal)(例如牛、马、猪、鸡等)、实验动物(例如小鼠、大鼠、兔等)、动物园动物(例如狮子、长颈鹿等),但不仅限于此。优选的受试者是人受试者。人受试者可以是儿童、成人或老年受试者。
本文使用的术语“硝基呋喃”和“硝基呋喃化合物”可互换使用,并包括具有侧链的呋喃,所述侧链含有一个或多个氮原子。如本领域所公知的,呋喃是由四个碳原子和一个氧原子组成的不饱和芳香杂环化合物。参阅Ege,Organic Chemistry,第三版,D.C.Heath & Co.,Lexington,MA(1994)。硝基呋喃的实例包括但不仅限于硝呋替莫、呋喃唑酮和硝呋太尔。参阅Raether W,Hanel H.Nitroheterocyclic Drugswith Broad Spectrum Acitivity,Parasit Res 2003;90:S19-S39;Albrecht等,J.Med.Chem.13(4):736(1970);Albrecht等,Arzneimittel-Forschung(Drug Res.)21(1):127-31(1971);Pozas等,Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 15:1417-21(2005)。“化合物”包括合成制备并施用的硝基呋喃化合物以及在施用其他化合物后在体内产生的硝基呋喃化合物。
本文使用的“癌症”是指影响身体器官和系统的正常功能的不受控制的细胞生长。从其原始部位迁移出来并在至关重要的器官中扎根的癌细胞能够通过该患病器官的功能衰退而最终导致受试者死亡。癌细胞是由于失去正常的生长控制而异常裂解和增殖的细胞。癌细胞几乎总是来自于至少一个遗传突变。在一些情况下,有可能根据所表达基因和蛋白质的谱及其表达水平来区分癌细胞与其对应的正常细胞。在癌细胞中通常受到影响的基因包括癌基因如ras、neu/HER2/erbB、myb、myc和abl,以及肿瘤抑制基因如p53、Rb、DCC、RET和WT。这些基因中一些基因内的癌症相关突变导致其表达降低或完全缺失。在其他情况下,突变引起表达提高或者正常对应物的活化变体的表达。
术语“肿瘤”通常等同于赘生物,在字面上表示“新的生长”,并可与“癌症”互换使用。“肿瘤性病症”是与细胞增殖、特别是与赘生物相关的任何病症。“赘生物”是在撤除启动赘生物出现的致癌因子后继续存在和增殖的异常组织块。存在两种类型的赘生物,良性的和恶性的。几乎所有的良性肿瘤都是被包裹的并且是非侵袭性的;相反,恶性肿瘤几乎都不是被包裹的,而是通过浸润性的破坏性生长来侵入相邻组织。这种浸润性生长之后可以是肿瘤细胞植入与原始肿瘤不连续的部位。
转移是与原发性肿瘤位点不同的癌细胞区域,由来自原发性肿瘤的癌细胞扩散至身体的其他部分而引起。在诊断原发性肿瘤块时,可监测受试者中转移的存在情况。除监测特定的症状外,通常通过单独或组合使用磁共振成像(MRI)扫描、计算机断层摄影术(CT)扫描、血和血小板计数、肝功能研究、胸部X射线和骨扫描来检测转移灶。
本发明的方法可用于在受试者中治疗癌症。在一些实施方案中,所述癌症是中枢神经系统(CNS)癌症。一些重要的CNS癌症包括但不限于成神经细胞瘤、成髓细胞瘤、周围恶性神经鞘瘤、室管膜瘤、颅咽管瘤、星形细胞瘤、脑脊膜瘤、生殖细胞瘤、胶质瘤、混合性胶质瘤、脉络丛瘤、少突胶质瘤、周围神经外胚层瘤、原始神经外胚层瘤(PNET)、CNS淋巴瘤、垂体腺瘤和施万鞘瘤。在一些实施方案中,所述星形细胞瘤为I级、II级、III级或IV级。星形细胞瘤可以是低级的或高级的。星形细胞瘤可以是青少年纤维星形细胞瘤、室管膜下巨细胞性星形细胞瘤、多形性黄色星形细胞瘤、间变型星形细胞瘤或大脑胶质瘤病。在一些实施方案中,所述少突胶质瘤为混合性胶质瘤(少星形细胞瘤)或间变型少突胶质瘤。在一个优选的实施方案中,所述癌症为成神经细胞瘤。
可以通过本发明的方法治疗的其他癌症包括但不仅限于基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑癌和CNS癌、乳腺癌、子宫颈癌、绒毛膜癌、结肠和直肠癌、结缔组织癌、消化系统癌、子宫内膜癌、食管癌、眼癌、纤维瘤、头与颈癌、胃癌、上皮内赘生物、肾癌、喉癌、白血病(包括急性髓细胞样白血病、急性淋巴样白血病、慢性髓细胞样白血病、慢性淋巴样白血病)、肝癌、肺癌(例如小细胞和非小细胞的)、淋巴瘤(包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤)、黑色素瘤、口腔癌(例如唇、舌、口和咽癌)、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、直肠癌、肾癌、呼吸系统癌、肉瘤、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、泌尿系统癌以及其他癌瘤(carcinoma)和肉瘤。
癌瘤是上皮起源的癌症。旨在用本发明的方法治疗的癌瘤包括但不限于腺泡癌、腺泡状癌、腺泡状腺癌(也称作囊性腺样癌、腺肌上皮瘤、筛状癌和圆柱瘤)、腺癌(carcinoma adenomatosum)、腺癌(adenocarcinoma)、肾上腺皮质癌、蜂窝状癌、肺泡细胞癌(也称作细支气管癌、肺泡细胞瘤和肺腺瘤病)、基底细胞癌(basal cellcarcinoma)、基底细胞癌(carcinoma basocellulare)(也称作basaloma或者basiloma和毛母质癌(hair matrix carcinoma))、基底细胞样癌(basaloid carcinoma)、基底鳞状细胞癌(basosquamous cellcarcinoma)、乳腺癌、细支气管肺泡癌、细支气管癌、支气管癌、髓样癌、胆管细胞癌(也称作胆管瘤和胆管癌)、绒毛膜癌、胶样癌、粉刺状癌、子宫体癌、筛状癌、胸廓癌、carcinoma cutaneum、柱状癌(cylindrical carcinoma)、柱状细胞癌(cylindrical cell carcinoma)、导管癌、硬癌、胚胎性癌、髓样癌、眼球上癌、表皮样癌、腺样上皮细胞癌、carcinoma exulcere、纤维癌、胶样癌(gelatiniform carcinoma)、胶样癌(gelatinous carcinoma)、巨细胞癌(giant cell carcinoma)、巨细胞癌(gigantocellulare)、腺癌、粒层细胞癌、毛母质癌、多血癌、肝细胞癌(也称作肝瘤、恶性肝瘤和肝癌)、Hurthle细胞癌、玻璃样癌(hyaline carcinoma)、肾上腺样癌、幼稚型胚胎性癌(infantileembryonal carcinoma)、原位癌、表皮内癌、上皮内癌、Krompecher′s癌、库尔切茨基细胞癌、豆状癌(lenticular carcinoma)、豆状癌(carcinoma lenticulare)、脂瘤样癌、淋巴上皮癌、乳腺炎性癌(carcinoma mastitoides)、黑色素癌(carcinoma medullare)、黑色素癌(medullary carcinoma)、黑色素癌(carcinoma melanodes)、黑色素癌(melanotic carcinoma)、粘液癌(mucinous carcinoma)、粘液癌(carcinoma muciparum)、粘液细胞癌、粘液表皮样癌、粘液癌(carcinoma mucosum)、粘液癌(mucous carcinoma)、粘液瘤样癌、鼻咽癌、恶性黑色素瘤、燕麦细胞癌、骨化性癌(carcinoma ossificans)、骨化性癌(osteoid carcinoma)、卵巢癌、乳头状癌、门脉周癌、原位癌、前列腺癌、肾细胞癌(也称作肾腺癌和肾上腺样癌)、reserve cellcarcinoma、肉瘤样癌、施奈德癌(scheinderian carcinoma)、硬癌、阴囊癌、印戒细胞癌、单纯癌、小细胞癌、硬癌、球状细胞癌、梭形细胞癌、髓样癌、鳞癌、鳞状细胞癌、绳捆癌、血管扩张性癌(carcinomatelangiectaticum)、血管扩张性癌(carcinoma telangiectodes)、移行细胞癌、结节性皮癌(carcinoma tuberosum)、结节性皮癌(tuberouscarcinoma)、疣状癌、绒毛状癌。
肉瘤是来自于骨和软组织的罕见的间质肿瘤。识别了不同类型的肉瘤,其包括:脂肪肉瘤(包括粘液样脂肉瘤和多形型脂肪肉瘤)、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性外周神经鞘瘤(也称作恶性神经鞘瘤、神经纤维肉瘤或神经原性肉瘤)、尤因瘤(包括骨尤因肉瘤、骨外(即非骨)尤因肉瘤和原发性神经外胚层瘤[PNET])、滑膜肉瘤、血管肉瘤(angiosarcomas)、血管肉瘤(hemangiosarcomas)、淋巴管肉瘤、卡波西肉瘤、血管内皮瘤、纤维肉瘤、硬纤维瘤(也称作侵袭性纤维瘤病)、隆凸性皮肤纤维肉瘤(DFSP)、隆凸性皮肤纤维肉瘤(MFH)、血管外皮细胞瘤、恶性间叶瘤、腺泡状软组织肉瘤、上皮样肉瘤、明细胞肉瘤、促结缔组织增生性小细胞瘤(desmoplastic small cell tumor)、胃肠道间质瘤(GIST)(也称为GI间质肉瘤)、骨肉瘤(也称作骨和骨外的成骨肉瘤以及软骨肉瘤。
待治疗的癌症可以是难治性癌症(refractory cancer)。本文使用的难治性癌症是对处方中护理的常规标准有抗性的癌症。这些癌症可能最初看来对治疗有反应,随后复发,或者它们可以对治疗完全没有反应。因此,根据本发明对难治性癌症进行治疗的受试者可能已经进行了针对其癌症的其他治疗。或者,如果癌症很可能是难治性的(例如考虑到癌细胞的分析或受试者的病史),则受试者可能尚未进行其他治疗。难治性癌症的实例包括但不限于白血病、黑色素瘤、肾细胞癌、结肠癌、肝癌、胰腺癌、非霍奇金淋巴癌和肺癌。
本发明还可用于治疗免疫原性的癌症。免疫原性的癌症是已知(或很可能)在其表面上或在细胞死亡时表达免疫原的癌症。这些免疫原是癌症抗原的体内内生性来源,它们的释放可以通过本发明的方法加以利用来治疗癌症。免疫原性癌症的实例包括恶性黑色素瘤和肾细胞癌。套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、T细胞急性成淋巴细胞性白血病、伯基特淋巴瘤、骨髓瘤、免疫细胞瘤、急性早幼粒细胞性白血病、慢性髓样/急性成淋巴细胞性白血病、急性非白血性白血病、B细胞急性成淋巴细胞性白血病、间变性大细胞淋巴瘤、骨髓增生异常综合征/急性髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、常见(前B细胞)急性淋巴细胞性白血病、恶性黑色素瘤、T细胞淋巴瘤、白血病、B细胞淋巴瘤、上皮恶性肿瘤(epithelialmalignancy)、淋巴样恶性肿瘤(lymphoid malignancy)、妇科癌症、胆腺癌(biliary adenocarcinoma)和胰腺导管腺癌。
本发明在一些方面中涉及抑制受试者中血管发生的方法。血管发生是内皮细胞的异常快速增殖,其导致异常新血管(微血管)的形成持续且不减退。持续数月或数年的血管发生能够支持癌症的生长和发展,并可导致对多种器官和组织(例如眼、皮肤、心、血管、肺、胃肠道和生殖泌尿道)的损伤。本发明的方法包括以有效抑制血管发生的量对受试者施用硝基呋喃化合物。所述硝基呋喃化合物以抑制受试者中血管发生的有效量施用。优选地,该化合物为硝呋替莫,该受试者为人受试者。
本文使用的术语“抑制血管发生”是指减少异常微血管的数目或密度。异常微血管数目的减少是指减少现有异常微血管的数目或减少新微血管的产生。本文使用的“减少”包括总体的消除或根除,以及不导致总体根除的其他减少。
可以通过多种方法或技术来评估血管发生。临床情况下最广泛使用的方法依赖于活检(切口或针刺)或标本中血管(微血管)的组织化学或免疫组织化学染色。可以检查的血管发生特征包括例如血管密度和/或形态和/或血管周围套(perivascular cuff)的厚度。定量组织活检或标本中的微血管区域密度。例如,高微血管密度区域(“热点”)可能含有最多的肿瘤细胞和/或具有最高的转移可能性。测定微血管密度的一种技术是测量毛细管间距离。评估血管发生的另一种方法是测量血管周围套的厚度。血管周围套厚度的增加与血管发生的发展相关,并可指示疾病的恶化。
也可以通过测量血管发生(血管原性)因子的血、血清、血浆或组织水平来评估血管发生。血管原性因子水平可充当血管发生的代用标记物。可以作为血管发生代用标记物的血管原性因子的实例包括但不仅限于血管生成素、血管生成素-1,Del-1、酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、卵泡抑素、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、肝细胞生长因子(HGF)/散射因子(scatter factor,SF)、白介素-8(IL-8)、瘦素、中期因子、胎盘生长因子、血小板来源的内皮细胞生长因子(PD-ECGF)、血小板来源的生长因子-BB(PDGF-BB)、多效营养因子(PTN)、前颗粒蛋白(Progranulin)、增殖蛋白、转化生长因子-α(TGF-α)/转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)/血管通透性因子(VPF)。成像技术也可用于评估血管发生。合适的成像技术或设备包括非侵入性设备,如CT、旋转式CT、显微-CT、多能计算机断层摄影术(multiple energy computedtomography,MECT)、单检测器CT(SDCT)、多检测器CT(MDCT)、容积CT(VCT)、MRI、显微-MR、X光、旋转式X光、PET、近红外线/可见光以及可在受试者体外使用或非侵入性地插入体腔的其他非侵入性扫描技术和设备。还可以通过CT血管造影术(CTA)、断层摄影合成(tomosynthesis)、X光微血管造影术和其他技术对血管发生进行成像。一种血管发生成像技术涉及使用与超声和对比增强成像模式(contrast specific imaging modality)组合的基于微气泡的造影剂(SonoVue),以检测肿瘤微血管灌流液的灌流改变。其他血管发生成像技术包括彩色多普勒和乳房造影术(mammography)。彩色多普勒成像可揭示肿瘤如乳腺癌中的血管发生。乳房造影术可揭示乳腺肿瘤的血管化边缘。可以通过染料增强多种成像或放射学体征。
受试者中的血管发生还可以通过包括向感兴趣的身体区域中引入至少一种造影剂的方法来评估。例如,可以向血管中注射用于检测血管的造影剂。可以局部引入少量造影剂,以增强在感兴趣的特定身体区域中的血管检测。或者,造影剂可以以足以在更大的身体区域或整个受试者身体中增强血管检测的量提供。可以获得针对受试者身体的结构数据,或可获得针对一个或多个靶器官(例如肺、心、乳腺、结肠等)、器官部分或受试者身体的另一靶区的结构数据。靶区可以是受试者身体的任何部分,例如四肢、腹、躯干、颈、头,或者其任何部分。可为了本发明的目的也可使用本文中未描述的其他方法或技术来评估血管发生。评估血管发生的方法和技术是本领域普通技术人员已知的。
硝基呋喃可以与其他疗法(例如放射疗法、手术、常规化学疗法)组合施用,或与一种或多种其他疗法的组合一起组合施用。
硝基呋喃可以在药物组合物中单独施用,或与治疗有效且生理可接受的量的一种或多种其他活性成分或药剂一起组合施用。这样的其他活性成分包括但不仅限于谷胱甘肽拮抗剂、血管发生抑制剂、化学治疗剂和抗体(例如癌症抗体)。硝基呋喃化合物和其他活性成分或药剂可以同时施用或依次施用。当硝基呋喃化合物与其他活性剂同时施用或与其他活性成分组合施用时,该硝基呋喃化合物和其他活性成分可以在相同或分开的配方中施用,但是同时施用。当所述其他活性剂和硝基呋喃的施用在时间上分开时,所述其他活性剂可以彼此依次施用并与硝基呋喃化合物依次施用。各施用之间的时间间隔可以是大概数分钟、数小时、数天,或可以更长。
谷胱甘肽拮抗剂的实例包括但不仅限于丁硫氨酸亚砜胺、环磷酰胺、异环磷酰胺(ifosphamide)、放线菌素D和N-(4-羟苯基)维甲酰胺(4-HPR)。
血管发生抑制剂的实例包括但不仅限于2-甲氧雌二醇(2-ME)、AG3340、制管张素、抗凝血酶III、抗VEGF抗体、图巴马司他、贝伐单抗(阿瓦斯汀)、BMS-275291、CAI、Canstatin、卡托普利、软骨源抑制因子(CDI)、CC-5013、塞来昔布(CELEBREX)、COL-3、考布他汀、考布他汀A4磷酸盐、达肝素(FRAGIN)、EMD121974(西仑吉肽)、恩多斯塔汀、埃罗替尼(TARCEV A)、吉非替尼(易瑞沙)、金雀异黄素、氢溴酸卤夫酮(TEMPOSTATINTM)、Id1、Id3、IM862、甲磺酸伊马替尼、诱导蛋白10、干扰素β、白细胞介素12、熏草菌素A、LY317615orAE-941(NEOVASTATTM)、马立马司他、乳腺丝抑蛋白、乙酸甲羟孕酮、Meth-1、Meth-2、新伐司他、骨桥蛋白分离产品、PEX、色素上皮增长因子(PEGF)、血小板因子4、催乳素片段、增殖素蛋白(PRP)、PTK787/ZK222584、重组人类血小板因子4(rPF4)、休眠蛋白、角鲨胺、SU5416、SU6668、苏拉明、紫杉醇、Tecogalan、沙利度胺、血小板反应蛋白、TNP-470、肌钙蛋白I、血管形成抑制素、VEGl、VEGF-Trap和ZD6474。在一些实施方案中,所述血管发生抑制剂是VEGF拮抗剂。VEGF拮抗剂可以是VEGF结合分子。VEGF结合分子包括VEGF抗体或其抗原结合片段。VEGF拮抗剂的一个实例是NeXstar。
可以用作额外的活性成分的化学治疗剂类别的实例包括但不仅限于DNA损伤剂,其包括拓扑异构酶抑制剂(例如依托泊甙、ramptothecin、拓扑替康、替尼泊苷、米托蒽醌)、抗微管物质(例如闻克斯丁、文拉亭)、抗代谢制剂(例如阿糖胞苷、甲氨碟呤、羟基脲、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、6-硫鸟嘌呤、6-巯基嘌呤、氟达拉滨、喷司他丁、氯脱氧腺苷)、DNA烷化剂(例如顺铂、盐酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、噻替哌、卡莫司汀、洛莫司汀、卡铂、氮烯唑胺、甲基苄肼)和DNA链断裂诱导剂(例如博来霉素、阿霉素、柔红霉素、去甲氧基柔红霉素、丝裂霉素C)。化学治疗剂包括合成的、半合成的和天然来源的药剂。重要的化学治疗剂包括但不仅限于阿西维辛、阿柔比星、阿考达唑、阿克罗宁、阿多来新、阿霉素、阿地白介素、阿维A酸胶囊、别嘌醇钠、六甲蜜胺、安波霉素、阿美蒽醌、氨鲁米特、胺苯丫啶、阿那曲唑、Aimonaceous Acetogenin、安曲霉素、巴婆(双呋)内酯、门冬酰胺酶、曲林菌素、阿扎胞苷、阿扎替派、阿佐霉素、巴马司他、苯佐替派、贝沙罗汀、比卡鲁胺、盐酸比卡鲁胺、双奈法德二去铁胺、比折来新、硫酸博来霉素、布喹那钠、溴匹立明、Bullatacin、白消安、卡麦角林、放线菌素C、卡普睾酮、卡醋胺、卡贝替姆、卡铂、卡莫司汀、盐酸卡柔比星、卡折来新、西地芬戈、塞来考昔、苯丁酸氮芥、西罗霉素、顺铂、克拉屈滨、克立那托去铁胺、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、DACA(N-[2-(二甲基-氨基)乙基]吖啶-4-羧酰胺)、更生霉素、盐酸柔红霉素、柔红霉素、地西他滨、地尼白介素、右奥马铂、地扎胍宁、地扎胍宁去铁胺、地吖醌、多西紫杉醇、多柔比星、盐酸多柔比星、屈洛昔芬、柠檬酸屈洛昔芬、丙酸屈他雄酮、达佐霉素、依达曲沙、盐酸依氟鸟氨酸、依沙芦星、恩洛铂、恩普氨酯、依匹哌啶、盐酸表柔比星、厄布洛唑、盐酸依索比星、雌莫司汀、雌氮芥磷酸钠、依他硝唑、乙碘油I131、依托泊苷、磷酸依托泊苷、氯苯乙嘧胺、盐酸法罗唑啉、法扎拉滨、芬维A胺、氟脲嘧啶脱氧核苷、磷酸氟达拉滨、氟尿嘧啶、5-FdUMP、氟西他滨、磷喹酮、福司曲星钠、FK-317、FK-973、FR-66979、FR-900482、吉西他滨、盐酸吉西他滨、吉姆单抗奥佐米星、Gold Au198、乙酸戈舍瑞林、胍那决尔、羟基脲、盐酸伊达比星、异环磷酰胺、伊莫福新、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素α-n1、干扰素α-n3、干扰素β-1a、干扰素γ-1b、异丙铂、盐酸伊立替康、醋酸兰瑞肽、来曲唑、醋酸亮丙瑞林、盐酸利阿唑、洛美曲索钠、洛莫司汀、盐酸洛索蒽醌、马索罗酚、Maytansine、盐酸氮芥、醋酸甲地孕酮、醋酸美仑孕酮、美法仑、美诺立尔、巯嘌呤、氨甲喋呤、氨甲蝶呤钠、甲氧沙林、氯苯氨啶、美妥替哌、米丁度胺、Mitocarcin、丝裂红素、米托洁林、米托马星、丝裂霉素、丝裂霉素C、米托司培、米托坦、盐酸米托蒽醌、麦考酚酸、诺考达唑、诺拉霉素、奥普瑞白介素、奥马铂、奥昔舒仑、紫杉醇、氨羟二磷酸二钠、培门冬酶、培利霉素、戊氮芥、硫酸培普利欧霉素、培磷酰胺、哌泊溴烷、哌泊舒凡、盐酸吡罗蒽醌、普卡霉素、普洛美坦、卟吩姆钠、泊非霉素、泼尼莫司汀、盐酸丙卡巴肼、嘌罗霉素、盐酸嘌呤霉素、Pyrazofurin、利波腺苷、利妥昔单抗、罗谷亚胺、Rolliniastatin、沙芬戈、盐酸沙芬戈、钐/来昔决南、司莫司汀、辛曲秦、磷乙酰天冬氨酸钠、司帕霉素、盐酸螺旋锗、螺莫司汀、螺铂、Squamocin、Squainotacin、链黑菌素、链佐星、氯化锶Sr89、磺氯苯脲、他利霉素、紫杉烷、Taxoid、替可加兰钠、替加氟、盐酸替洛蒽醌、替莫泊芬、替尼泊苷、替罗昔隆、睾内酪、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤、塞替派、Thymitaq、噻唑呋林、替拉扎明、雷替曲塞、TOP-53、盐酸拓扑替康、柠檬酸托瑞米芬、曲妥珠单抗、醋酸曲托龙、磷酸曲西立滨、三甲曲沙、葡萄糖醛酸三甲曲沙、曲普瑞林、盐酸妥布氯唑、尿嘧啶氮芥、乌瑞替派、戊柔比星、伐普肽、维替泊芬、长春碱、硫酸长春碱、长春新碱、硫酸长春新碱、长春地辛、硫酸长春地辛、硫酸长春匹定、硫酸长春甘酯、硫酸长春罗新、酒石酸长春瑞滨、硫酸异长春碱、硫酸长春利定、伏氯唑、折尼铂、净司他丁、盐酸佐柔比星、2-氯脱氧腺苷、2′-脱氧间型霉素、9-氨基喜树碱、雷替曲塞、N-炔丙基-5,8-二去氮杂叶酸、2-氯-2′-阿糖-氟-2′-脱氧腺苷、2-氯-2′-脱氧腺苷、茴香霉素、曲古抑菌素A、hPRL-G129R、CEP-751、利诺胺、硫芥、氮芥(双氯乙基甲胺)、双氯乙基甲胺、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺、白消安、N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)、N、N′-双(2-氯乙基)-N-亚硝基脲(BCNU)、N-(2-氯乙基)-N′-环己基-N-亚硝基脲(CCNU)、N-(2-氯乙基)-N′-(反式-4-甲基环己基-N-亚硝基脲(MeCCNU)、N-(2-氯乙基)-N′-(二甲基)磷酸乙酯-N-亚硝基脲(福莫司汀)、链唑霉素、达卡巴嗪(DTIC)、米托唑胺、替莫唑胺、替莫唑胺、丝裂霉素C、AZQ、阿多来新、顺铂、卡铂、奥马铂、奥沙利铂、C1-973、DWA2114R JM216、JM335、二铂、雷替曲塞、阿扎胞苷、阿糖胞苷、吉西他滨、6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、次黄嘌呤、替尼泊苷、9-氨基喜树碱、喜树碱、CPT-11、多柔比星、多柔比星、表柔比星、依达比星、米托蒽醌、洛索蒽醌、更生霉素(更生霉素D)、安吖啶、吡唑啉吖啶、全反式视黄醇14-羟基-反式视黄醇、全反式维甲酸、N-(4-羟苯基)维胺酯、13-顺式维甲酸、3-甲基TTNEB、9-顺式维甲酸、氟达拉滨(2-F-阿糖-AMP)和2-氯脱氧腺苷(2-Cda)。
其他化学治疗剂包括20-表-1,25二羟维生素D3、5-乙炔基尿嘧啶、阿比特龙、阿柔比星、acylfulvene、adecypenol、阿多来新、阿地白介素、ALL-TK拮抗剂、六甲蜜胺、氨莫司汀、amidox、氨磷汀、氨基乙酰丙酸、氨柔比星、安吖啶、阿那格雷、阿那曲唑、穿心莲内酯、血管生成抑制剂、拮抗剂D、拮抗剂G、antarelix、抗dorsalizing morphogeneticprotein-1、抗雄激素、前列腺癌、抗雌激素、antineoplaston、反义寡核苷酸、aphidicolin glycinate、凋亡基因调节剂、凋亡调节剂、脱嘌呤核酸、ara-CDP-DL-PTBA、精氨酸脱氨酶、asulacrine、阿他美坦、阿莫司汀、axinastatin1、axinastatin2、axinastatin3、阿扎司琼、阿扎毒素、重氮酪氨酸、浆果赤霉素III衍生物、balanol、巴马司他、BCR/ABL拮抗剂、苯佐利定、benzoylstaurosporine、β内酰胺衍生物、β-alethine、betaclamycin B、betulinic acid、bFGF抑制剂、比卡鲁胺、比生群、bisaziridinylspermine、双奈法德、bistratene A、比折来新、breflate、博来霉素A2、博来霉素B2、溴匹立明、布度钛、buthioninesulfoximine、卡泊三醇、calphostin C、喜树碱衍生物(例如10-羟基-喜树碱)、金丝雀痘IL-2;卡培他滨、氨甲酰-氨基三唑、carboxyamidotriazole、CaRest M3、CARN700、软骨来源的抑制剂、卡折来新、酪蛋白激酶抑制剂(ICOS)、castano spermine、杀菌肽B、西曲瑞克、氯、chloroquinoxaline sulfonamide、西卡前列素、顺式卟啉、克拉屈滨、氯米芬类似物、克霉唑、collismycin A、collismycin B、考布他汀A4、考布他汀类似物、conagenin、crambescidin816、克立那托、cryptophycin8、cryptophycin A衍生物、curacin A、cyclopentanthraquinones、cycloplatam、cypemycin、cytarabineocfosfate、溶胞因子、cytostatin、达昔单抗、地西他滨、dehydrodidemninB、2′deoxycoformycin(DCF)、地洛瑞林、dexifosfamide、右雷佐生、右维拉帕米、地吖醌、代代宁B、didox、diethylnorspermine、二氢-5-阿扎胞苷、二氢紫杉醇、dioxamycin、联苯螺莫司汀、discodermolide、二十二醇、多拉司琼、去氧氟尿苷、屈洛昔芬、屈大麻酚、duocarmycinSA、依布硒、依考莫司汀、依地福新、依决洛单抗、依氟鸟氨酸、榄烯、乙嘧替氟、表柔比星、epothilones(A、R=H、B、R=Me)、epithilones、依立雄胺、雌莫司汀类似物、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、依他硝唑、依托泊苷、依托泊苷4′-磷酸(凡毕复)、依西美坦、法倔唑、法扎拉滨、芬维A胺、非格司亭、非那雄胺、flavopiridol、氟卓斯汀、fluasterone、氟达拉滨、fluorodaunorunicin hydrochloride、福酚美克、福美坦、福司曲星、福莫司汀、gadolinium texaphyrin、硝酸镓、加洛他滨、加尼瑞克、明胶酶抑制剂、吉西他滨、谷胱甘肽抑制剂、hepsulfam、heregulin、六亚甲基二乙酰胺、高三尖杉酯碱(HHT)、金丝桃素、伊班膦酸、伊达比星、艾多昔芬、伊决孟酮、伊莫福新、伊洛马司他、imidazoacridone、咪喹莫特、免疫刺激肽、胰岛素样生长因子-1受体抑制剂、干扰素激动剂、干扰素、白介素、碘苄胍、碘阿霉素、甘薯苦醇、4-、伊立替康、伊罗普拉、伊索拉定、isobengazole、isohomohalicondrin B、伊他司琼、jasplakinolide、kahalalide F、lamellarin-N triacetate、兰瑞肽、leinamycin、来格司亭、硫酸蘑菇多糖、leptolstatin、来曲唑、非白血性白血病抑制因子、白细胞α干扰素、亮丙立德+雌激素+孕酮、亮丙瑞林、左旋咪唑、利阿唑、直链多胺类似物、亲脂二糖肽、亲脂铂化合物、lissoclinamide7、洛铂、胍乙基磷酸丝氨酸、洛美曲索、氯尼达明、洛索蒽醌、洛伐他汀、洛索立宾、勒托替康、lutetium texaphyrin、lysofylline、裂解肽、美坦新、mannostatin A、马立马司他、马索罗酚、maspin、matrilysin抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂、美诺立尔、merbarone、美替瑞林、甲硫氨酸酶、甲氧氯普胺、MIF抑制剂、米非司酮、米替福新、米立司亭、错配的双链RNA、普卡霉素、米托胍腙、二溴卫矛醇、丝裂霉素类似物、米托萘胺、丝裂毒素(mitotoxin)成纤维细胞生长因子-皂草素、米托蒽醌、莫法罗汀、莫拉司亭、单克隆抗体、人绒毛膜促性腺激素、单磷酰脂质A+分枝杆菌细胞壁sk、单磷酰脂质A、多重抗药性基因抑制剂、基于多瘤抑制基因-1的疗法、芥抗癌剂、mycaperoxide B、分支杆菌细胞壁提取物、myriaporone、N-acetyldinaline、N-取代苯酰胺、那法瑞林、那瑞替喷、纳洛酮+喷他佐辛、napavin、naphterpin、那托司亭、奈达铂、奈莫柔比星、奈立膦酸、中性肽链内切酶、尼鲁米特、nisamycin、氧化亚氮调节剂、一氧化二氮抗氧化剂、nitrullyn、O6-苄基鸟嘌呤、奥曲肽、okicenone、寡核苷酸、奥那司酮、昂丹司琼、昂丹司琼、oracin、口服细胞因子诱导剂、奥马铂、奥沙特隆、奥沙利铂、oxaunomycin、紫杉醇类似物、紫杉醇衍生物、palauamine、palmitoylrhizoxin、帕米磷酸、人参三醇、帕诺米芬、parabactin、帕折普汀、培门冬酶、培得星、木聚硫钠、喷司他丁、pentrozole、全氟溴烷、培磷酰胺、perillyl alcohol、phenazinomycin、乙酸苯酯、磷酸酶抑制剂、picibanil、盐酸毛果芸香碱、吡柔比星、吡曲克辛、placetin A、placetin B、纤溶酶原激活物抑制剂、铂络合物、铂化合物、铂-三胺络合物、鬼臼毒素、卟吩姆钠、泊非霉素、丙基双吖啶酮、前列腺素J2、蛋白酶体抑制剂、基于蛋白A的免疫调节剂、蛋白激酶C抑制剂、蛋白激酶C抑制剂、microalgal、蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂、嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂、红紫素、吡唑啉吖啶、吡哆基化的(pyridoxylated)血红蛋白聚氧乙烯缀合物、raf拮抗剂、雷替曲塞、雷莫司琼、ras法呢基蛋白转移酶抑制剂、ras抑制剂、ras-GAP抑制剂、脱甲基化的瑞替普汀、依替膦酸铼Re186、根霉素、核酶、RII维胺酯、罗谷亚胺、rohitukine、罗莫肽、罗喹美克、rubiginone B1、ruboxyl、沙芬戈、saintopin、SarCNU、sarcophytol A、沙格司亭、Sdi1模拟体、司莫司汀、衰老来源的抑制剂1、有义寡核苷酸、信号转导抑制剂、信号转导调节剂、单链抗原结合蛋白、西佐喃、索布佐生、硼卡钠、乙酸苯酯钠、solverol、生长调节素结合蛋白、索纳明、膦门冬酸、spicamycinD、螺莫司汀、splenopentin、spongistatin1、角鲨胺、干细胞抑制剂、干细胞分裂抑制剂、stipiamide、间充质溶解素抑制剂、sulfinosine、强效舒血管肠肽拮抗剂、suradista、苏拉明、苦马豆碱、合成的氨基聚糖、他莫司汀、他莫昔芬甲碘化物、牛磺莫司汀、他扎罗汀、替可加兰钠、替加氟、tellurapyrylium、端粒酶抑制剂、替莫泊芬、替莫唑胺、替尼泊苷、tetrachlorodecaoxide、tetrazomine、thaliblastine、沙利度胺、噻可拉林、血小板生成素、血小板生成素模拟体、胸腺法新、胸腺生成素受体激动剂、胸腺曲南、甲状腺刺激激素、锡本紫红素乙酯、替拉扎明、二氯环戊二烯钛、托泊替康、topsentin、托瑞米芬、全能干细胞因子、翻译抑制剂、维甲酸、triacetyluridine、曲西立滨、三甲曲沙、曲普瑞林、托烷司琼、妥罗雄脲、酪氨酸激酶抑制剂、tyrphostin、UBC抑制剂、乌苯美司、尿殖窦来源的生长抑制抑制、尿激酶受体拮抗剂、伐普肽、variolin B、载体系统、红细胞基因疗法、维拉雷琐、藜芦明、verdins、维替泊芬、长春瑞滨、vinxaltine、vitaxin、伏氯唑、扎诺特隆、折尼铂、亚苄维和净司他丁斯酯。
其他化学治疗剂包括抗增殖剂(例如异苏氨酸吡曲克辛)、抗前列腺肥大剂(例如西托糖苷)、良性前列腺增生治疗剂(例如盐酸坦索罗辛)、前列腺生长抑制剂(例如喷托普利)以及放射剂:[125I]血纤维蛋白原、[氟18F]脱氧葡糖、氟[18F]多巴、碘[125I]胰岛素、碘[131I]胰岛素、碘[123I]碘苄胍、碘[131I]胆影酸钠、碘[131I]安替比林、碘[131I]胆甾醇、碘[123I]马尿酸钠、碘[125I]马尿酸钠、碘[131I]马尿酸钠、碘[125I]碘奥酮、碘[131I]碘奥酮,盐酸碘[123I]非他胺、碘[125I]双胺喹、碘[131I]双胺喹、[125I]碘酞钠、[131I]碘酞钠、[131I]碘酪氨酸、碘[125I]塞罗宁、碘[131I]塞罗宁、汞[179]Hg丙醇醋酸盐、汞[203]Hg丙醇醋酸盐、汞[197]Hg丙醇、甲基碘代苯甲酸鸟嘌呤(MIBG-131I和MIBG-123I)、硒[75Se]蛋氨酸、锝[99mTc]锑三硫化物胶体、锝[99mTc]比西酸、锝[99mTc]地索苯宁、锝[99mTc]羟乙二膦酸、锝[99mTc]依沙美肟、锝[99mTc]呋膦、葡庚糖酸锝[99mTc],锝[99mTc]利多苯宁、锝[99mTc]甲溴菲宁、99m锝美罗酸盐、99m锝美罗酸盐二钠、锝[99mTc]巯替肽、锝[99mTc]羟亚甲基二膦酸盐、锝[99mTc]二乙三胺五乙酸盐、锝[99mTc]三胺五乙酸一钙三钠、99m-锝甲氧基异丁基异腈、西硼肟锝[99mTc]、锝[99mTc]二巯丁二酸、锝[99mTc]胶体硫、替肟锝[99mTc]、替曲膦[99mTc]、锝[99mTc]Tiatide、碘[125I]甲状腺素、碘[131I]甲状腺素、碘[131I]托泊酮、碘[125I]甘油三油酸酯和碘[131I]甘油三油酸酯。MIBG-131I和MIBG-123I是用于和本发明的含硝基呋喃的药物组合物共同施用的特别优选的化学治疗剂。
化学治疗剂的另一类别是抗癌的补充性增效剂,包括:三环类抗抑郁剂(例如丙咪嗪、地昔帕明、amitryptyline、氯丙咪嗪、曲米帕明、多虑平、去甲替林、普罗替林、阿莫沙平和马普替标)、非三环类抗抑郁剂(例如舍曲林、曲拉唑酮和西酞普兰)、Ca++拮抗剂(例如维拉帕米、硝苯地平、尼群地平和卡罗维林)、钙调蛋白抑制剂(例如普尼拉明、三氟拉嗪和氯丙咪嗪)、两性霉素B、曲帕拉醇类似物(例如三苯氧胺)、抗心律失常药(例如奎纳定)、抗高血压药物(例如利舍平)、硫醇消耗剂(例如布替诺林和亚砜胺(sulfoximine))和多数药物抗性还原药剂例如Cremaphor EL.
其它化学治疗剂包括:番荔枝内酯、内酯、rolliniastatin、胍那克林、squamocin、泡番荔枝辛、squamotacin、紫杉烷、紫杉醇、吉西他滨、氨甲喋呤、钫-900482、FK-973、钫-66979、FK-317、5-FU FUDR、FdUMP、羟基脲素、多西他赛、discodermolide、大环内酯类抗肿瘤药、长春新碱、长春碱、长春瑞滨、meta-pac、依利替康、锡-38、10-OH开普拓、拓扑替康、依托泊苷、阿霉素、黄酮类抗肿瘤药、顺铂、卡铂、博来霉素、丝裂霉素C、普卡霉素、卡培他滨、阿糖胞苷、2-Cl-2′脱氧腺苷、氟达拉宾-PO4、米托蒽醌、米托唑胺、喷司他丁和雷替曲塞.
重要的一类化学治疗剂是紫杉烷(例如紫杉醇和多西紫杉醇)。与他莫昔芬或芳香酶抑制剂瑞宁得(即阿那曲唑)组合的硝基呋喃化合物尤其适用于乳腺癌和妇科癌症。
可用作本发明其它活性成分的抗体实例包括但不仅限于抗CD20mAb(单克隆抗体)、利妥昔单抗、RituxanTM、抗CD20mAb、托西莫单抗Bexxar、抗HER2、曲妥珠单抗、HerceptinTM、抗HER2、MDX-210、抗CA125mAb、oregovomab、B43.13、OvarexTM、Breva-Rex、AR54、GivaRex、ProstaRex、抗EGF受体mAb、IMC-C225、ErbituxTM、抗EGF受体mAb、MDX-447、吉姆单抗奥佐米星、Mylotarg、CMA-676、抗CD33(WyethPharmaceuticals)、抗组织因子蛋白(TF)、(Sunol)、ior-c5、c5、抗EGF受体mAb、MDX-447、抗17-1A mAb、依决洛单抗、Panorex、抗CD20mAb(Y-90labeled)、替伊莫单抗(IDEC-Y2B8)、Zevalin、神经节苷脂GD3表位的抗独特型mAb模拟体、BEC2、抗HLA-Dr10mAb(131I LYM-1)、OncolymTM、抗CD33人源化mAb(SMART M195)、ZamylTM、抗CD52humAb(LDP-03)、CAMPATH、抗CD1mAb、ior t6、抗CAR(补体活化受体)mAb、MDX-11、人源化双特异性mAb缀合物(补体级联激活剂)、MDX-22、OV103(Y-90标记的抗体)、西洛果瓦、OncoScintTM、抗17-1AmAb、3622W94、抗VEGF(RhumAb-VEGF)、贝伐单抗、AvastinTM、抗TAC(IL-2受体)人源化抗体(SMART)、达克珠单抗、赛尼哌、抗TAG-72部分人源化的双特异性抗体MDX-220、高分子量蛋白聚糖的抗独特型mAb模拟体(I-Mel-1)、MELIMMUNE-1、高分子量蛋白聚糖的抗独特型mAb模拟体(I-Mel-2)、MELIMMUNE-2、抗CEA Ab(hMN14)、CEACideTM、PretargetTM放射性靶向剂、hmAbH11 scFv片段(NovomAb-G2)、H11 scFv、抗DNA或DNA相关蛋白(组蛋白)mAb和缀合物、TNT(例如CotaraTM)、Gliomab-H mAb、GNI-250mAb、抗EGF受体mAb、EMD-72000、抗CD22人源化Ab、LymphoCide、非霍奇金抗CD33mAb与刺孢霉素的缀合物(CMA676)、吉姆单抗奥佐米星、MylotargTM、Monopharm-C、colon、GD2神经节苷脂的抗独特型人mAb、4B5、黑色素瘤、抗EGF受体人源化Ab、ior egf/r3、抗ior c2糖蛋白mAb、ior c5、BABS(生物合成的抗体结合位点)蛋白、抗FLK-2/FLT-3mAb、mAb/小分子缀合物、TAP(肿瘤活化的前药)、抗GD-2双特异性mAb、MDX-260、抗核自身抗体(结合核小体)、ANAAb、抗HLA-DRAb(SMART1D10Ab)、RemitogenTM、SMART ABL364Ab、抗CEA1131标记的mAb、ImmuRAIT-CEA。
可以根据本发明使用的其他抗体包括抗TNFα抗体,如针对类风湿性关节炎和克罗恩病的英夫利昔单抗(Remicade)和依那西普(Enbrel);帕利珠单抗、用于儿童受试者的抗RSV抗体、贝伐单抗、阿仑单抗、Campath-1H、BLyS-mAb、fSLE;抗VEGF2、抗Trail受体;B3mAb、m170mAb、mABBR96和Abx-Cbl mAb。本发明涵盖大量种类的抗体及其片段,包括但不仅限于针对癌症抗原(如上所述)、细胞表面分子、基质细胞分子、胞外基质分子和肿瘤血管系统相关分子的抗体。
细胞表面分子是在细胞表面表达的分子。除了胞外区以外,其可还包含跨膜结构域和胞质结构域。实例包括HER2、CD20、CD33、EGF受体、HLA标记如HLA-DR、CD52、CD1、CEA、CD22、GD2神经节苷脂、FLK2/FLT3、VEGF、VEGFR等。
基质细胞分子是由基质细胞表达的分子。实例包括但不仅限于FAP和CD26。
胞外基质分子是存在于胞外基质中的分子。实例包括但不仅限于胶原、糖胺聚糖(GAG)、蛋白聚糖、弹性蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白。
肿瘤血管系统相关分子是由肿瘤(实体瘤而非全身性癌症如白血病)的血管系统表达的分子。如同癌症抗原一样,肿瘤血管系统相关分子可以由正常的血管系统表达,但是其在肿瘤血管系统上的存在使其成为抗癌疗法的合适靶标。在一些情况下,肿瘤血管系统结合分子在肿瘤血管系统上表达的水平高于正常血管系统。实例包括但不仅限于内皮糖蛋白(见美国专利No.5,660,827)、ELAM-1、VCAM-1、ICAM-1、与LAM-1反应的配体、II类MHC抗原、氨基磷脂如磷脂酰丝氨酸和磷脂酰乙醇胺(如美国专利No.6,312,694中所述)、VEGFR1(FIt-1)和VEGFR2(KDR/Flk-1),以及其他肿瘤血管系统相关抗原,如美国专利No.5,776,427中所述的那些。针对内皮糖蛋白的抗体描述于美国专利No.5,660,827中,包括TEC-4和TEC-11以及识别与这些抗体相同的表位的抗体。针对氨基磷脂的抗体描述于美国专利No.6,312,694中。抑制VEGF的抗体描述于美国专利No.6,342,219中,包括2C3(ATCC PTA1595)。对肿瘤血管系统具有特异性的其他抗体包括与生长因子及其受体的复合体反应的抗体,所述复合体如FGF和FGFR的复合体或TGFβ和TGFβR的复合体。后一类抗体描述于美国专利No.5,965,132中,包括GV39和GV97。
应当理解,本发明所包括的抗体包括在本文中明确提及的这些,也包括与本文所提及的相同表位结合的抗体。
例如以下的抗体也可用于本发明,它们均是可购得的:
细胞凋亡抗体:
BAX抗体:抗人Bax抗体(单克隆)、抗人Bax抗体(多克隆)、抗鼠Bax抗体(单克隆)、抗鼠Bax抗体(多克隆);
Fas/Fas配体抗体:抗人Fas/Fas配体抗体、抗鼠Fas/Fas配体抗体、粒酶抗体、粒酶B抗体;
BCL抗体:抗细胞色素C抗体、抗人BCL抗体(单克隆)、抗人bcl抗体(多克隆)、抗鼠bcl抗体(单克隆)、抗鼠bcl抗体(多克隆);
杂项凋亡抗体:抗TRADD、TRAIL、TRAFF、DR3抗体、抗人Fas/Fas配体抗体、抗鼠Fas/Fas配体抗体;
杂项凋亡相关抗体:BIM抗体:抗人、鼠bim抗体(多克隆);抗人、鼠bim抗体(单克隆);
PARP抗体:抗人PARP抗体(单克隆)、抗人PARP抗体(多克隆)、抗鼠PARP抗体;
胱天蛋白酶抗体:抗人胱天蛋白酶抗体(单克隆)、抗鼠胱天蛋白酶抗体;
抗CD抗体:抗CD29、PL18-5PanVera、抗CD29、PL4-3Pan Vera、抗CD41a、PT25-2PanVera、抗CD42b、PL52-4PanVera、抗CD42bGUR20-5PanVera、抗CD42b、WGA-3PanVera、抗CD43、1D4PanVera、抗CD46、MCP75-6PanVera、抗CD61、PL11-7PanVera、抗CD61、PL8-5PanVera、抗CD62/P-slctn、PL7-6PanVera、抗CD62/P-slctn、WGA-1PanVera、抗CD154、5F3PanVera;以及抗CD1、抗CD2、抗CD3、抗CD4、抗CD5、抗CD6、抗CD7、抗CD8、抗CD9、抗CD10、抗CD11、抗CD12、抗CD13、抗CD14、抗CD15、抗CD16、抗CD17、抗CD18、抗CD19、抗CD20、抗CD21、抗CD22、抗CD23、抗CD24、抗CD25、抗CD26、抗CD27、抗CD28、抗CD29、抗CD30、抗CD31、抗CD32、抗CD33、抗CD34、抗CD35、抗CD36、抗CD37、抗CD38、抗CD39、抗CD40、抗CD41、抗CD42、抗CD43、抗CD44、抗CD45、抗CD46、抗CD47、抗CD48、抗CD49、抗CD50、抗CD51、抗CD52、抗CD53、抗CD54、抗CD55、抗CD56、抗CD57、抗CD58、抗CD59、抗CD60、抗CD61、抗CD62、抗CD63、抗CD64、抗CD65、抗CD66、抗CD67、抗CD68、抗CD69、抗CD70、抗CD71、抗CD72、抗CD73、抗CD74、抗CD75、抗CD76、抗CD77、抗CD78、抗CD79、抗CD80、抗CD81、抗CD82、抗CD83、抗CD84、抗CD85、抗CD86、抗CD87、抗CD88、抗CD89、抗CD90、抗CD91、抗CD92、抗CD93、抗CD94、抗CD95、抗CD96、抗CD97、抗CD98、抗CD99、抗CD100、抗CD101、抗CD102、抗CD103、抗CD104、抗CD105、抗CD106、抗CD107、抗CD108、抗CD109、抗CD110、抗CD111、抗CD112、抗CD113、抗CD114、抗CD115、抗CD116、抗CD117、抗CD118、抗CD119、抗CD120、抗CD121、抗CD122、抗CD123、抗CD124、抗CD125、抗CD126、抗CD127、抗CD128、抗CD129、抗CD130、抗CD131、抗CD132、抗CD133、抗CD134、抗CD135、抗CD136、抗CD137、抗CD138、抗CD139、抗CD140、抗CD141、抗CD142、抗CD143、抗CD144、抗CD145、抗CD146、抗CD147、抗CD148、抗CD149、抗CD150、抗CD151、抗CD152、抗CD153、抗CD154、抗CD155、抗CD156、抗CD157、抗CD158、抗CD159、抗CD160、抗CD161、抗CD162、抗CD163、抗CD164、抗CD165、抗CD166、抗CD167、抗CD168、抗CD169、抗CD170、抗CD171、抗CD172、抗CD173、抗CD174、抗CD175、抗CD176、抗CD177、抗CD178、抗CD179、抗CD180、抗CD181、抗CD182、抗CD183、抗CD184、抗CD185、抗CD186、抗CD187、抗CD188、抗CD189、抗CD190、抗CD191、抗CD192、抗CD193、抗CD194、抗CD195、抗CD196、抗CD197、抗CD198、抗CD199、抗CD200、抗CD201、抗CD202、抗CD203、抗CD204、抗CD205、抗CD206、抗CD207、抗CD208、抗CD209、抗CD210、抗CD211、抗CD212、抗CD213、抗CD214、抗CD215、抗CD216、抗CD217、抗CD218、抗CD219、抗CD220、抗CD221、抗CD222、抗CD223、抗CD224、抗CD225、抗CD226、抗CD227、抗CD228、抗CD229、抗CD230、抗CD231、抗CD232、抗CD233、抗CD234、抗CD235、抗CD236、抗CD237、抗CD238、抗CD239、抗CD240、抗CD241、抗CD242、抗CD243、抗CD244、抗CD245、抗CD246、抗CD247、抗CD248、抗CD249、抗CD250等。
人趋化因子抗体:人CNTF抗体、人Eotaxin抗体、人上皮嗜中性粒细胞激活肽-78、人Exodus抗体、人GRO抗体、人HCC-1抗体、人I-309抗体、人IP-10抗体、人I-TAC抗体、人LIF抗体、人肝表达的趋化因子抗体、人淋巴毒素抗体、人MCP抗体、人MIP抗体、由IFN-γ抗体诱导的人单核因子、人NAP-2抗体、人NP-1抗体、人血小板因子-4抗体、人RANTES抗体、人SDF抗体、人TECK抗体;
鼠趋化因子抗体:人B-细胞吸引鼠趋化因子抗体、趋化因子-1抗体、鼠Eotaxin抗体、鼠Exodus抗体、鼠GCP-2抗体、鼠KC抗体、鼠MCP抗体、鼠MIP抗体、鼠RANTES抗体、大鼠趋化因子抗体、大鼠趋化因子抗体、大鼠CNTF抗体、大鼠GRO抗体、大鼠MCP抗体、大鼠MIP抗体、大鼠RANTES抗体;
细胞因子/细胞因子受体抗体:人生物素化的细胞因子/细胞因子受体抗体、人IFN抗体、人IL抗体、人瘦素抗体、人制瘤素抗体、人TNF抗体、人TNF受体家族抗体、鼠生物素化的细胞因子/细胞因子受体抗体、鼠IFN抗体、鼠IL抗体、鼠TNF抗体、鼠TNF受体抗体;抗CCR4抗体;
大鼠细胞因子/细胞因子受体抗体:大鼠生物素化的细胞因子/细胞因子受体抗体、大鼠IFN抗体、大鼠IL抗体、大鼠TNF抗体;
ECM抗体:胶原/前胶原、层粘连蛋白、胶原(人)、层粘连蛋白(人)、前胶原(人)、玻璃粘连蛋白/玻璃粘连蛋白受体、玻璃粘连蛋白(人)、玻璃粘连蛋白受体(人)、纤连蛋白/纤连蛋白受体、纤连蛋白(人)、纤连蛋白受体(人);
生长因子抗体:人生长因子抗体、鼠生长因子抗体、猪生长因子抗体;
杂项抗体:杆状病毒抗体、钙粘蛋白抗体、补体抗体、C1q抗体、VonWillebrand因子抗体、Cre抗体、HIV抗体、流感抗体、人瘦素抗体、鼠瘦素抗体、鼠CTLA-4抗体、人CTLA-4抗体、P450抗体、RNA聚合酶抗体;
神经生物学抗体:淀粉样蛋白抗体、GFAP抗体、人NGF抗体、人NT-3抗体、人NT-4抗体。
仍然有其他抗体可以用于本发明中,其包括在参考文献(如MSRSCatalog of Primary Antibodies和Linscott目录)中列出的抗体。
在本发明的一些优选的实施方案中,实施抗体为Avastin(贝伐单抗)、BEC2(米妥莫单抗)、Bexxar(托西莫单抗)、Campath(阿仑单抗)、CeaVac、Herceptin(曲妥珠单抗)、IMC-C225(centuximab)、LymphoCide(依帕珠单抗)、MDX-210、Mylotarg(吉姆单抗奥佐米星)、Panorex(依决洛单抗)、Rituxan(利妥昔单抗)、Theragyn(pemtumomab)、Zamyl和Zevalin(ibritumomab tituxetan)。本发明还包括其抗体片段。
在一些优选的实施方案中,癌症抗原是VEGF、抗独特型mAb(GD3神经节苷脂模拟物)、CD20、CD52、抗独特型mAb(CEA模拟物)、ERBB2、EGFR、CD22、ERBB2X CD65(fcγRI)、EpCam、PEM和CD33。
本发明包括抗体和抗体片段二者的用途。抗体可以是单克隆的或多克隆的,并可以通过常规方法制备。它们可进一步分离或存在于腹水中。这类抗体可进一步加工以产生嵌合抗体或人源化抗体,在下文中将更加详细讨论。
重要的是,如本领域所公知的,抗体分子中只有一小部分(互补位)涉及抗体与其表位的结合(一般参阅Clark,W.R.(1986)The ExperimentalFoundations of Modern Immunology Wiley & Sons,Inc.,New York;Roitt,I.(1991)Essential Immunology,第七版,Blackwell Scientific Publications,Oxford)。例如,pFc′和Fc区是补体级联的效应器,但是不涉及抗原结合。酶促切下了pFc′区的的抗体或生产为无pFc′区的抗体命名为F(ab′)2片段,其保留了完整抗体的全部两个抗原结合位点。类似地,酶促切下了Fc区的抗体或生产为无Fc区的抗体命名为Fab片段,其保留了完整抗体分子的一个抗原结合位点。更进一步,Fab片段由共价结合的抗体轻链和一部分抗体重链(名为Fd)组成。Fd片段是抗体特异性的主要决定簇(单个Fd片段可以与多达十种不同的轻链结合而不改变抗体特异性),且Fd片段在分离中保留表位结合能力。
如本领域所公知的,在抗体的抗原结合部分中存在互补性决定区(CDR)和构架区(FR),互补性决定区直接与抗原的表位相互作用,构架区维持互补位的三级结构(一般参阅Clark,1986;Roitt,1991)。在IgG免疫球蛋白的重链Fd片段和轻链二者中,都有分别被三个互补性决定区(CDR1到CDR3)分隔开的四个构架区(FR1到FR4)。CDR(尤其是CDR3区,更尤其是重链CDR3)主要负责抗体特异性。
本领域目前明确,哺乳动物抗体的非CDR区可以被共特异性抗体(co-specific antibody)或异特异性抗体的类似区域取代,而同时保留原始抗体的表位特异性。这最明显地表现在“人源化”抗体的开发和使用中,其中非人CDR与人FR和/或Fc/pFc′区共价接合,产生功能抗体。因此,例如PCT国际公布号WO92/04381教导了人源化鼠RSV抗体的生产和使用,其中鼠FR区的至少一部分已经被入来源的FR区取代。这类抗体(包括完整抗体中具有抗原结合能力的片段)通常被称作“嵌合”抗体。人源化抗体或嵌合抗体的商业来源包括GenPharm、Xenotech、AbGenix和CellGeneSys。
因此,本领域普通技术人员应当明白,本发明还提供了F(ab′)2、Fab、Fv和Fd片段;嵌合抗体,其中Fc和/或FR和/或CDR1和/或CDR2和/或轻链CDR3链已经被同源的人或非人序列取代;嵌合F(ab′)2片段抗体,其中FR和/或CDR1和/或CDR2和/或轻链CDR3区已经被同源的人或非人序列取代;嵌合的Fab片段抗体,其中FR和/或CDR1和/或CDR2和/或轻链CDR3区已经被同源的人或非人序列取代;和嵌合的Fd片段抗体,其中FR和/或CDR1和/或CDR2区已经被同源的人或非人序列取代。本发明还包括所谓的单链抗体。
硝基呋喃化合物以治疗有效且生理可接受的量施用,该量是受试者在生理上能够容忍的、实现想要的有益生物效应所必需或足够的量,所述有益的生物效应在该情况下是治疗癌症或抑制血管发生。可以例如通过在进行治疗后测量治疗的生理效应来测量有益生物效应。生物有益效应可以是改善或完全消除由被治疗病症所引起的症状,或是抑制被治疗病症中的血管发生,这例如通过成像时微血管(例如异常微血管)数量的减少来表明。
治疗有效且生理可接受的量可以取决于使用的具体化合物或化合物组合和/或疗法而变化。其也可以取决于下述因素,如受治疗的病症(例如癌症)、受试者的身材或者疾病或病症的严重性。本领域普通技术人员能够根据经验确定具体的硝基呋喃化合物或组合的有效量,而无需过度实验。结合本文提供的教导,通过在多种化合物和权重因子中选择,可以规划出不引起重大的毒性然而能够完全有效治疗具体受试者的有效的预防性或治疗性治疗方案,所述权重因子如效力、相对生物利用率、患者体重、不良副作用的严重性和优选的给药模式。
在一些情况下,使用硝基呋喃化合物或第二药剂的亚治疗剂量进行治疗,或者二者均使用亚治疗剂量来治疗。例如,当硝基呋喃化合物与抗癌剂一起使用时,硝基呋喃化合物和抗癌剂可以以亚治疗剂量施用,并仍然产生想要的治疗效果。本文使用的“亚治疗剂量”是指这样的剂量,其低于在不存在另一药剂的情况下施用时在受试者中产生治疗性结果的剂量。因此,抗癌剂的亚治疗剂量是在不施用硝基呋喃化合物时不会在受试者中产生相同的或基本相似的治疗结果的剂量。抗癌剂的治疗剂量是医学领域中已知的。这些剂量已经广泛描述于参考文献中,并且是本领域所公知的,如Remington′s Pharmaceutical Sciences,第十八版,1990或the PhysicianDesktop Reference;以及医务人员作为治疗癌症的指南而依赖的许多其他医学参考文献。
对于本文所述的任何化合物而言,治疗有效量首先可以通过体外测定法如细胞培养物测定法来测定。也可以在动物研究中测定治疗有效量。例如,可以使用体内测定来评估带有或不带有第二药剂时硝基呋喃化合物的有效量,所述测定例如肿瘤消退和/或防止肿瘤形成的测定。相关的动物模型包括如向动物受试者中注射(通常在确定的部位中)恶性细胞的测定。一般地,对动物施用一定范围的硝基呋喃化合物剂量。注射恶性细胞后肿瘤生长的抑制指示着降低癌症发生风险的能力。抑制预先存在的肿瘤的进一步生长(或减小其大小)指示着治疗癌症的能力。
可以根据所施用化合物的相对生物利用率和效力来调节两种药剂的应用剂量。基于上文所述的方法和其他方法调节剂量以实现最高效力,这在普通技术人员的能力范围内。
本文所述化合物的受试者剂量通常范围在从约0.1μg到30,000mg,更通常从约1μg/天到20,000mg,甚至更通常从约10μg到15,000mg,最通常从约100μg到10,000μg。就受试者体重而言,典型的剂量范围从约0.1μg到200mg/kg/天,更通常从约0.5到150mg/kg/天。在一些重要的实施方案中,以从约1到100mg/kg/天的量施用化合物。在一些其他的重要的实施方案中,以10-60mg/kg/天的量施用化合物。
本文使用的“常规时间表”是指预先确定的指定时间段。常规时间表可包括长度相同或不同的时间段,只要该时间表是预先确定的即可。例如,常规时间表可涉及每天2、3、4或6次施用、以以下为基础施用:每天、每两天、每三天、每四天、每五天、每六天、每周、每月或其间任何固定数目的天或周、每两个月、三个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、十个月、十一个月、十二个月等。或者,预先确定的常规时间表可包括在第一周每日施用,然后在数月中每月施用,之后每三个月施用。任何具体的组合都应当涵盖在常规时间表中,只要预先确定适当的时间表包括在某天施用即可。
本发明的化合物可以在可药用的运载体中施用,或在载体或递送体系中施用。本发明的化学/物理载体的一个实例是胶体分散体系。胶体分散体系包括基于脂质的体系,包括水包油乳剂、胶束、混合的胶束和脂质体。本发明的一个优选的胶体体系是脂质体。脂质体是适合用作体内或体外递送载体的人工容器。已经显示尺寸范围从0.2-4.0μm的大单层容器(largeunilamellar vessel,LUV)能够包封大的大分子。RNA、DNA和完整的病毒粒可以被包封在水性内部中,并以生物活性形式递送至细胞(Fraley等,Trends Biochem.Sci,(1981)6:77)。
可以通过与特异性配体如糖、糖脂或蛋白质偶联而将脂质体靶向特定组织。可用于将脂质体靶向细胞的配体包括但不仅限于与细胞特异性受体及分子相互作用的完整分子或片段,如抗体,其与细胞的细胞表面标记相互作用。这类配体可以通过本领域技术人员公知的结合测定法容易地鉴定。在另一些实施方案中,可以通过例如与前文所述的免疫治疗抗体之一偶联而将脂质体靶向癌。另外,载体可以与核靶向肽偶联,所述核靶向肽会引导载体至宿主细胞核。
脂质体可购自Gibco BRL,例如LIPOFECTINTM和LIPOFECTACETM,其由阳离子脂质如N-[1-(2,3二油酰氧基)-丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)和二甲基双十八烷基溴化铵(DDAB)形成。用于制造脂质体的方法是本领域公知的,并描述于许多出版物中。脂质体还综述于Gregoriadis,G.,Trends in Biotechnology,(1985)3:235-241。
在另一实施方案中,所述化学/物理载体是适用于递送(例如口服或粘膜递送)的生物相容性微球。这类微球公开于Chickering等,Biotech.AndBioeng.,(1996)52:96-101和Mathiowitz等,Nature,(1997)386:.410-414和PCT专利申请WO97/03702中。
不可生物降解的和可生物降解的聚合物基质均可用于将硝基呋喃化合物和/或第二药剂递送给受试者。优选可生物降解的基质。这类聚合物可以是天然或合成的聚合物。所述聚合物根据想要释放的时间来选择,一般在数小时到一年或更长的量级中。通常,最理想的是范围在数小时和三到十二个月之间的时间中释放。该聚合物任选地是在水中能够吸收多至其重量的约90%的水凝胶形式,并且还任选地与多价离子或其他聚合物交联。
聚合物基质优选地是微粒形式,如微球(其中药剂分散于整个固体聚合物基质中)或微胶囊(其中药剂储存于聚合物壳的核心中)。用于包含药剂的其他聚合物基质形式包括膜、包衣、凝胶、植入物和支架。选择聚合物基质设备的大小和组成,使得在引入该基质的组织中产生良好的释放动力学。还根据要使用的本发明递送方法来选择聚合物的大小,所述递送方法通常是注射进组织中或通过气雾剂将悬浮液施用至鼻和/或肺区域中。优选地,当使用气雾剂途径时,聚合物基质和硝基呋喃化合物包含在表面活性剂载体中。可以将聚合物基质组成选择为既具有有利的降解速率,又由具有生物粘附性(bioadhesive)的材料形成,从而在基质被施用给受损的鼻和/或肺表面时进一步提高转移效率。基质组成也可以被选择为不降解,而是通过扩散在更长的时间段中释放。在一些优选的实施方案中,硝基呋喃化合物通过植入物施用给受试者。
尤其感兴趣的生物粘附性聚合物包括由H.S.Sawhney,CP.Pathak和J.A.Hubell在Macromolecules,(1993)26:581-587中描述的生物蚀解水凝胶,该参考文献的教导并入本文,还包括polyhyaluronic acids、酪蛋白、明胶、明胶蛋白、聚酸酐、聚丙烯酸、藻酸盐/酯、壳聚糖、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸乙酯、聚甲基丙烯酸丁酯、聚甲基丙烯酸异丁酯、聚甲基丙烯酸己酯、聚甲基丙烯酸异癸酯、聚甲基丙烯酸月桂酯、聚甲基丙烯酸苯酯、聚丙烯酸甲酯、聚丙烯酸异丙酯、聚丙烯酸异丁酯和聚丙烯酸十八烷酯。
本发明的组合物和方法在某些情况下可用于替换现有的手术方法或药物疗法,尽管在大部分情况下本发明可用于改善现有的疗法治疗这类病症的效力。因此,组合疗法可用于治疗经受或将要经受癌症治疗的受试者。例如,药剂可以与其他抗增殖(例如抗癌)疗法组合施用于受试者。合适的抗癌疗法包括去除肿瘤块的手术方法、化学疗法或局部放射。所述其他抗增殖疗法可以在用本发明的药剂治疗之前、同时或之后施用。在施用不同的治疗之间也可以有数小时、数天和在一些情况下为数周的延迟,使得所述药剂可以在所述其他治疗之前或之后施用。在一些实施方案中,硝基呋喃化合物可以与其他抗增殖治疗一起施用(例如在手术、放射或化学疗法之前)或单独施用,但时间并不仅限于此。
硝基呋喃化合物也可以与非手术的抗增殖(例如抗癌)药物疗法组合施用。在一个实施方案中,该药剂可以与抗癌剂如细胞抑制化合物组合施用。细胞抑制化合物是抑制细胞生长和/或增殖的化合物(例如核酸、蛋白质)。在一些实施方案中,细胞抑制化合物针对肿瘤的恶性细胞。在另一些实施方案中,细胞抑制化合物是抑制血管平滑肌细胞或成纤维细胞生长和/或增殖的化合物。
根据本发明的方法,硝基呋喃或硝基呋喃类似物可以在其他抗癌剂之前、同时或之后被施用。施用时间表可包括以交替方式施用不同的药剂。在另一些实施方案中,本发明的组合疗法可以在用其他疗法治疗之前和期间、或期间和之后、或之前和之后递送。在一些情况下,在施用其他抗增殖治疗之前24小时以上施用药剂。在另一些实施方案中,可以对受试者施用多于一种抗增殖疗法。例如,受试者可接受与手术和至少一种其他抗增殖化合物组合的本发明药剂。或者,该药剂可以与多于一种抗癌剂组合施用。
硝基呋喃化合物可以与其他治疗剂如佐剂组合,以增强免疫应答。硝基呋喃或硝基呋喃类似物和其他治疗剂可以同时或依次施用。当同时施用其他治疗剂时,它们可以在相同的配方中施用,或在独立的配方中施用但同时施用。所述其他治疗剂与硝基呋喃或硝基呋喃类似物的施用也可以在时间上分开,即在施用硝基呋喃或硝基呋喃类似物之前或之后的不同时间施用治疗剂。这些化合物与药剂的施用之间的时间间隔可以是大约数分钟,或可以更长。其他治疗剂包括但不仅限于核酸佐剂、非核酸佐剂、细胞因子、非免疫治疗性抗体、抗原等。
核酸佐剂是属于核酸的佐剂。实例包括免疫刺激性核酸分子,如含有CpG二核苷酸的免疫刺激核酸分子,如2001年2月27日提交的美国专利US6,194,388B1,2001年3月27日提交的US6,207,646B1和2001年5月29日提交的US6,239,116B1中所述。
“非核酸佐剂”是能够刺激体液和/或细胞免疫应答的除本文所述免疫刺激性核酸之外的任何分子或化合物。非核酸佐剂包括例如产生depo效应的佐剂、免疫刺激佐剂、产生depo效应并且刺激免疫系统的佐剂,以及粘膜佐剂。
本文使用的“产生depo效应的佐剂”是引起抗原(例如存在于癌症疫苗中的癌症抗原)在体内缓慢释放从而延长免疫细胞与抗原的接触的佐剂。这类佐剂包括但不仅限于明矾(例如氢氧化铝、磷酸铝);或基于乳剂的配方,包括矿物油、非矿物油、油包水或油包水包油乳剂、水包油乳剂,如Seppic ISA系列的Montanide佐剂(例如Montanide ISA720,AirLiquide,Paris,France);MF-59(用Span85和Tween80稳定的水包角鲨烯乳剂;Chiron Corporation,Emeryville,CA)和PROVAX(含有稳定去污剂和胶束形成剂的一种水包油乳剂;IDEC PharmaceuticalsCorporation,San Diego,CA)。
“免疫刺激剂”是引起免疫系统细胞活化的佐剂。例如,它可以引起免疫细胞产生和分泌细胞因子。这类佐剂包括但不仅限于从皂树(Q.saponaria)的树皮中纯化的皂苷类,如QS21(在HPLC分级分离的21st峰中洗脱的糖脂;Antigenics,Inc.,Waltham,MA);聚二羧酸基苯氧基磷腈(poly[di(carboxylato phenoxy)phosphazene,PCPP聚合物;VirusResearch Institute,USA);脂多糖衍生物如单磷脂酰脂质A(MPL;RibiImmunoChem Research,Inc.,Hamilton,MT)、胞壁酰二肽(MDP;Ribi)和苏氨酰-胞壁酰二肽(t-MDP;Ribi);OM-174(与脂质A相关的葡糖胺二糖;OM Pharma SA,Meyrin,Switzerland);和利什曼原虫(Leishmania)延伸因子(纯化的利什曼原虫蛋白;Corixa Corporation,Seattle,WA)。
“产生depo效应并刺激免疫系统的佐剂”是上述两种功能都具有的化合物。这类佐剂包括但不仅限于ISCOMS(免疫刺激复合体,其含有混合的皂苷类、脂质并形成带孔的病毒大小的颗粒,所述孔能够容纳抗原;CSL,Melbourne,Australia);SB-AS2(SmithKline Beecham佐剂系统#2,其为含有MPL和QS21的水包油乳剂:SmithKline Beecham Biologicals[SBB]Rixensart,Belgium);SB-AS4(SmithKline Beecham佐剂系统#4,其含有明矾和MPL;SBB,Belgium);形成胶束的非离子嵌段共聚物,如CRL1005(其含有疏水性聚氧丙烯的直链,侧翼是聚氧乙烯链;Vaxcel,Inc.,Norcross,GA);以及Syntex佐剂制剂(SAF,含有Tween80和非离子嵌段共聚物的水包油乳剂;Syntex Chemicals,Inc.,Boulder,CO)。
本文使用的“非核酸粘膜佐剂”是与抗原结合施用至粘膜表面时能够在受试者中诱导粘膜免疫应答的除免疫刺激核酸外的佐剂。粘膜佐剂包括但不仅限于细菌毒素:例如霍乱毒素(CT),CT衍生物包括但不仅限于CT B亚基(CTB)(Wu等,1998,Tochikubo等1998)、CTD53(Val到Asp)(Fontana等,1995)、CTK97(Val到Lys)(Fontana等,1995)、CTK104(Tyr到Lys)(Fontana等,1995)、CTD53/K63(Val到Asp,Ser到Lys)(Fontana等,1995)、CTH54(Arg到His)(Fontana等,1995)、CTN107(His到Asn)(Fontana等,1995)、CTE114(Ser到Glu)(Fontana等,1995)、CTE112K(Glu到Lys)(Yamamoto等,1997a)、CTS61F(Ser到Phe)(Yamamoto等,1997a,1997b)、CTS106(Pro到Lys)(Douce等,1997,Fontana等,1995)和CTK63(Ser到Lys)(Douce等,1997,Fontana等,1995);紧密连接毒素(Zonula occludens toxin)、zot;大肠杆菌不耐热肠毒素、不耐热毒素(LT)、LT衍生物包括但不仅限于LT B亚基(LTB)(Verweij等,1998)、LT7K(Arg到Lys)(Komase等,1998,Douce等,1995)、LT61F(Ser到Phe)(Komase等,1998)、LT112K(GIu到Lys)(Komase等,1998)、LT118E(GIy到GIu)(Komase等,1998)、LT146E(Arg到GIu)(Komase等,1998)、LT192G(Arg到GIy)(Komase等,1998)、LTK63(Ser到Lys)(Marchetti等,1998,Douce等,1997,1998,Di Tommaso等,1996)和LTR72(Ala到Arg)(Giuliani等,1998);百日咳毒素(PT)(Lycke等,1992,Spangler BD,1992,Freytag和Clemments,1999,Roberts等,1995,Wilson等,1995)包括PT-9K/129G(Roberts等,1995,Cropley等,1995);毒素衍生物(见下文)(Holmgren等,1993,Verweij等,1998,Rappuoli等,1995,Freytag和Clements,1999);脂质A衍生物(例如单磷酰脂质A,MPL)(Sasaki等,1998,Vancott等,1998;胞壁酰二肽(MDP)衍生物(Fukushima等,1996,Ogawa等,1989,Michalek等,1983,Morisaki等,1983);细菌外膜蛋白(例如博氏螺旋体(Borreliaburgdorferi)外表面蛋白A(OspA)脂蛋白、脑膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白)(Marinaro等,1999,Van deVerg等,1996);水包油乳剂(例如MF59)(Barchfield等,1999,Verschoor等,1999,O′Hagan,1998);铝盐(Isaka等,1998,1999);以及皂苷类(例如QS21)Aquila Biopharmaceuticals,Inc.,Worcester,MA)(Sasaki等,1998,MacNeal等,1998)、ISCOMS、MF-59(用Span85和Tween80稳定的水包角鲨烯乳剂;Chiron Corporation,Emeryville,CA);Seppic ISA序列的Montanide佐剂(例如Montanide ISA720;AirLiquide,Paris,France);PROVAX(含有稳定去污剂和胶束形成剂的水包油乳剂;IDEC Pharmaceuticals Corporation,San Diego,CA);Syntext佐剂制剂(SAF;Syntex Chemicals,Inc.,Boulder,CO);聚二羧酸基苯氧基磷腈(PCPP聚合物;Virus Research Institute,USA)和利什曼原虫延伸因子(Corixa Corporation,Seattle,WA)。
本发明还提供试剂盒,其包含本发明的化合物和/或药剂并任选地包含使用说明。所述化合物和/或药剂可以以肠胃外形式(例如静脉内、肌内或鞘内给药)或口服形式如片剂、丸剂、胶囊剂、小胶囊等等存在。试剂盒还可含有第二活性成分或药剂,其与硝基呋喃配制在一起或单独地配制。以各个形式提供的单位剂量应取决于硝基呋喃化合物是与第二活性成分或药剂一起使用还是单独使用。试剂盒可任选地包含外包装如盒子或袋子。使用说明可以与分散单位或外包装分别提供,或它可以印在分配单位或外包装中之一或之二上。所述化合物和/或药剂可以在一天分散单位如鼓泡包装(blister pack)或刻度包装(dial pack)型分配器中提供,优选地将周的天数或月的天数(例如1、2、3、4等)印刷在分配器上。如果每隔一天或一天两次(或更多)施用化合物和/或药剂,则可以相应地更改分配单位。
提供以下的实施例以举例说明实施本发明的具体情况。它们不旨在限制本发明的范围。本领域普通技术人员应当明白,本发明可应用于多种方法和组合物。在实施例中,使用三种成神经细胞瘤细胞系(SMS-KCNR、SMS-KCN和IMR-32)证明了硝呋替莫对成神经细胞瘤的治疗潜能,所述成神经细胞瘤细胞系是成神经细胞瘤的3型儿童期形式的代表16。不旨在受任何具体的理论束缚,相信硝呋替莫作用的分子机制包括在细胞内形成自由基9,17。由自由基导致的细胞损伤引起对凋亡的诱导,导致观察到的硝呋替莫毒性18-20。较早的研究显示,用硝呋替莫治疗泰氏锥虫(T.cruzi)短膜虫期降低了细胞生存力,这与细胞中提高的超微结构损伤相关10,21。如实施例4中所述,观察到硝呋替莫对SMS-KCNR、SMS-KCN和IMR-32成神经细胞瘤细胞系类似的细胞毒效应。在所使用的不同成神经细胞瘤细胞系之间,发现SMS-KCNR对硝呋替莫最为敏感,并使用该细胞系进行进一步的研究。硝呋替莫显示剂量和时间依赖性的细胞生存力降低(图2A)。细胞生存力的降低可能是由于该药物的细胞毒性所引起的细胞死亡或缺乏增殖。如实施例5中所述,我们的研究使用BrdU测定法证明了剂量依赖性的细胞增殖降低。如实施例6中所述,硝呋替莫的细胞毒性效应在显微镜检查期间是明显的,其中发现细胞变圆并漂浮,提示发生了凋亡(图3A)。进行TUNEL测定来证实凋亡。在该测定中,使用末端脱氧核苷酸转移酶,用发荧光的脱氧胸苷类似物标记在凋亡的情况下断裂后产生的DNA末端。DNA中末端数的增加导致标记增加,这继而反映在荧光信号的增加中22。用硝呋替莫处理后观察到提高的TUNEL染色(图3B),这表明该药物在成神经细胞瘤细胞中引起了凋亡。
胱天蛋白酶是细胞凋亡机器的中心组分,胱天蛋白酶-3是被若干种抗癌药活化的执行者胱天蛋白酶(executioner caspase)23。如实施例9中所详述的,用硝呋替莫处理后存在胱天蛋白酶-3的强活化。这通过用抗体进行的经处理细胞的免疫印迹来显示,所述抗体对活化的胱天蛋白酶-3具有特异性(图4A)。胱天蛋白酶-3活化是剂量依赖性的,这与经处理的细胞中以TUNEL染色提高为标志的凋亡一致。
通过使用胱天蛋白酶抑制剂来研究胱天蛋白酶在硝呋替莫诱导的凋亡中的作用。用泛胱天蛋白酶抑制剂(pan-caspase inhibitor)Z-VAD-FMK预处理细胞24逆转了成神经细胞瘤细胞中硝呋替莫诱导的凋亡(图4B),所述抑制剂具有有效抑制广泛的胱天蛋白酶的能力。Z-VAD-FMK对凋亡的这种逆转证实,胱天蛋白酶参与了硝呋替莫诱导的成神经细胞瘤细胞凋亡。其他人已经使用泛胱天蛋白酶抑制剂Z-VAD-FMK,通过经Flavopiridol处理的成神经细胞瘤细胞系来证实胱天蛋白酶诱导的凋亡25。
TrkB是一种受体酪氨酸激酶,是神经营养蛋白的高亲和力受体。与其他Trk类似,神经营养蛋白对TrkB的活化与神经元细胞中的分化和对凋亡的抑制相关26。TrkB几乎仅在生物学方面不利的成神经细胞瘤中表达2,3。BDNF与TrkB结合导致Ras/MAPK和PI3K/Akt信号转导途径的活化。Akt途径已经显示对于细胞存活和对化学疗法的抗性而言至关重要3,15。如实施例3中所详述的,当用BDNF刺激SMS-KCNR细胞时,由于TrkB受体活化导致的Akt磷酸化在硝呋替莫存在下被抑制(图6A)。这提示硝呋替莫可通过抑制TrkB信号转导来发挥作用。这一发现是很重要的,因为TrkB-BDNF途径促进细胞存活,并且已知在成神经细胞瘤细胞中为细胞提供对DNA损伤性治疗剂的保护,导致化学抗性的发生3,18,27。因此,抑制该途径的药物在治疗成神经细胞瘤中是有价值的。另外,硝呋替莫降低Akt磷酸化(图6B),提示Akt可能是硝呋替莫的一个直接靶标。
与Akt类似,ERK1/2磷酸化被认为在成神经细胞瘤中促进存活,并由BDNF/TrkB途径活化26。然而,用硝呋替莫处理SMS-KCNR细胞并未改变ERK1/2磷酸化的磷酸化(数据未显示)。硝呋替莫的这些不同作用很可能反映了各个途径的独特功能。例如,据报道,Akt介导由BDNF诱导的对细胞存活的促进,而ERKl/2介导BDNF诱导的细胞分化28。这些研究指出,硝呋替莫能够作为抗击成神经细胞瘤的治疗剂。
根据体内测试,硝呋替莫处理导致小鼠中肿瘤尺寸的显著减小。见实施例12。在人中,单独或与其他疗法组合的硝呋替莫处理导致肿瘤消退而无毒性副作用。其他研究者发现,硝呋替莫在成人中具有许多副作用,包括恶心/呕吐、肌痛、虚弱、头痛、感觉异常、多神经炎、神经障碍和癫痫发作6,并确定它在儿童的耐受更好,如在针对查加斯病使用硝呋替莫的67名儿童的研究中所观察到的11。然而在实施例13和14中详述的我们的研究中,没有患者由于不良药物而被该研究排除5,11。
总而言之,实施例显示硝呋替莫对成神经细胞瘤细胞有细胞毒性。其在成神经细胞瘤中抑制增殖并诱导凋亡。凋亡由胱天蛋白酶-3的活化来介导。硝呋替莫抑制基本的和TrkB介导的Akt磷酸化,提示其抑制TrkB信号转导。因此,硝呋替莫是有效的细胞毒剂和细胞凋亡剂,并可作为抗击成神经细胞瘤的治疗剂。
实施例
实施例1:试剂制备
将硝呋替莫(来自Bayer,Germany)溶于二甲亚砜(DMSO)中,作为20mg/ml储存液,并以等分式样储存于-20℃下。将zVAD-fmk(Calbiochem La Jolla CA)以10mM的浓度溶于DMSO中并储存于-20℃下。将脑源性神经营养因子(BDNF)溶于无菌水中(100μg/ml)并储存于-80℃下(Santa Cruz Biotechnology,Santa Cruz,CA)。针对已切割的胱天蛋白酶-3以及磷酸化及完整形式Akt的抗体得自Cell SignalingTechnology,Beverly MA,与HRP偶联的第二抗兔抗体来自AmershamPharmacia Biotech,Piscataway,NJ,碘化丙锭来自Sigma Chemical Co.,St Louis,MO。
实施例2:细胞培养和处理
于37℃下在加湿的培养箱中,在补充有10%胎牛血清、100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640培养基中培养人成神经细胞瘤细胞系IMR-32(ATCC)、SMS-KCN、SMS-KCNR(来自John Maris,CHOP,Philadelphia,PA)。将细胞在6孔平板或100mm平皿中培养至75%汇合,并在处理前除去血清(含0.1%BSA的RPMI1640)过夜。用硝呋替莫(0、1、10或20μg/ml))处理细胞24小时用于胱天蛋白酶活化研究,或处理2小时并用100μg/ml BDNF(Santa CruzBiotechnology,CA)刺激10分钟,用于Trk信号转导分析。
实施例3:硝呋替莫抑制Akt磷酸化和TrkB介导的信号转导
已知SMS-KCNR细胞表达TrkB受体14。BDNF特异性刺激成神经细胞瘤上的TrkB受体,并导致在细胞存活中起关键作用的AktT15发生磷酸化,最终导致化学抗性3,15。为了理解成神经细胞瘤细胞中介导硝呋替莫的抗增殖和细胞毒效应的信号转导途径,测定SMS-KCNR细胞中的TrkB和Akt信号转导。在没有硝呋替莫时用BDNF刺激SMS-KCNR细胞导致提高的Akt磷酸化(图6A,第1道);然而,硝呋替莫的添加(10和20μg/ml)显著地抑制Akt磷酸化,如降低的条带强度所示(图6A,第3和4道)。总Akt蛋白质水平不被硝呋替莫改变(图6A)。另外,硝呋替莫抑制了血清刺激的Akt磷酸化(图6B)。在血清存在下,存在高水平的Akt活化(图6B,第1道);然而,硝呋替莫的添加消除了血清刺激的Akt活化。在1.0和10μg/ml的剂量下,硝呋替莫完全抑制Akt的磷酸化(图6B,第2道和第3道)。这些研究清楚地显示,硝呋替莫在成神经细胞瘤中抑制Akt信号转导。另一方面,ERK1/2(TrkB的另一下游靶标)的磷酸化不受影响。ERK1/2磷酸化没有改变,表明硝呋替莫可能不影响ERK介导的信号转导(数据未显示)。
实施例4:硝呋替莫抑制成神经细胞瘤细胞的细胞生存力
通过MTS测定法来测定硝呋替莫对SMS-KCN、SMS-KCNR和IMR-32成神经细胞瘤细胞系的生长抑制作用。使用CellTiter96AQOne Solution细胞增殖测定试剂盒(Promega,Madison WI)来测量细胞生存力4。将细胞在48孔板中培养(每孔50,000个)24小时,并用浓度递增的硝呋替莫(0、1、10和20μg/ml)处理24、48、72和96小时。经运载体处理的细胞用作对照(0.001%DMSO)。孵育期结束时,在新鲜培养基中向每孔添加MTS试剂(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑盐)12至0.5mg/ml的终浓度并孵育4小时。使用平板读数仪(Multiskan RC,Fisher Scientific Pittsburgh,PA)在490nm处测量吸光度。细胞生存力表达为处理之前和之后吸光度的平均百分比+/-SD。
如图2A中所示,硝呋替莫以时间和剂量依赖性的方式显著抑制这些细胞系的生长,并且在SMS-KCNR细胞中最为显著。在20μg/ml硝呋替莫下处理120小时后,细胞生存力下降至37%(SMS-KCNR)、59%(SMS-KCN)、78%(IMR-32)。这些细胞系的IC50值(达到50%生长抑制需要的浓度)测定为对SMS-KCNR的14.7μg/ml,对SMS-KCN的25.4μg/ml和对IMR-32的52.9μg/ml。这些研究清楚地显示,硝呋替莫对成神经细胞瘤细胞系具有细胞毒性。重要的是,在培养的正常上皮细胞中未观察到硝呋替莫的这类细胞毒效应1。
实施例5:硝呋替莫抑制成神经细胞瘤细胞增殖和DNA合成
细胞生存力是包括增殖和细胞死亡的事件的总和。首先,我们测试了硝呋替莫抑制DNA合成的能力,作为其对增殖的影响的度量。通过测量进入DNA的BrdU掺入来测定DNA合成,作为增殖的代用品。
根据制造商的说明(Roche Molecular Biochemicals,IndianapolisIN),在DNA合成期间6,13通过BrdU(溴代脱氧尿苷)掺入测定法来测定硝呋替莫对成神经细胞瘤细胞系和上皮细胞增殖的影响。在48孔平板中将SMS-KCNR细胞(50,000个/孔)培养24小时,去血清处理18小时并用硝呋替莫(0、1、10和20μg/ml)处理24小时。用10μM BrdU标记细胞6小时。固定细胞并使用过氧化物酶缀合的抗BrdU抗体和TMB(3,3′,5,5′-四甲基联苯胺)显色底物来显色。使用微孔板读数仪(Multiskan RC,Fisher Scientific,Pittsburgh,PA)在450nm处测量吸光度。在该测定法中,色彩强度(color intensity)与BrdU掺入量直接相关,BrdU量进而反映增殖。结果表达为BrdU掺入的百分比(+/-SD),并示于图2B。BrdU掺入随药物浓度的提高而降低,表明硝呋替莫抑制DNA合成。在18.1μg/ml硝呋替莫下观察到50%的DNA合成抑制。BrdU掺入研究证明,硝呋替莫是成神经细胞瘤细胞增殖的有效抑制剂。结果在图7中展示。当用硝呋替莫处理时,HEC中存在剂量依赖性的DNA合成抑制;在10μg/ml硝呋替莫下观察到50%的抑制,在20μg/ml浓度的硝呋替莫下观察到超过80%的抑制,在低至5μg/ml硝呋替莫浓度下观察到30%的抑制。BrdU掺入研究证明,硝呋替莫是HEC增殖的有效抑制剂。
实施例6:硝呋替莫诱导成神经细胞瘤细胞的细胞凋亡
进一步研究硝呋替莫在成神经细胞瘤细胞中的细胞毒效应,以理解其内在的机制。在48孔平板中将SMS-KCNR细胞培养至60%的汇合,用浓度递增的硝呋替莫诱导96小时。经运载体处理的细胞用作对照。处理之后,首先使用安装了Fuji数字照相机(Japan)的倒置显微镜(Nikon Eclipse TS100,Japan),通过光学显微术观察形态学特征。用PBS洗涤细胞,用多聚甲醛固定,在室温下用Triton X-100透化处理,使用末端脱氧核苷酸转移酶用荧光素-12-dUTP标记,并用碘化丙锭(5μg/ml)复染。每个实验中均包括阴性对照(无末端转移酶)。通过荧光显微术(安装了冷却的CCD照相机的Nikon Eclipse TE2000-E,Japan)检测细胞凋亡。使用碘化丙锭染色来检测非凋亡细胞和凋亡细胞,并使用荧光染色来检测凋亡细胞。
经硝呋替莫处理的细胞的显微镜检查揭示了形态学改变,如减小的轴突长度、指示细胞凋亡的变圆和漂浮(图3A)。形态学改变随着硝呋替莫浓度的提高而越来越显著。在1μg/ml硝呋替莫下,与经运载体处理的细胞相比,轴突长度的减小是明显的(分别为图3A-ii和A-I)。在10μg/ml硝呋替莫下,轴突长度的减小更加突出,并且伴随着细胞的变圆(图3A-iii)。在20μg/ml硝呋替莫下,细胞变圆并且漂浮,少量细胞保持粘附在平板上。(图3A-iv)。重要的是,这些形态学凋亡改变以剂量依赖性方式发生。
使用TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷5’-三磷酸(dUTP)切口末端标记)测定法来证实硝呋替莫对凋亡的诱导。使用末端核苷酸转移酶反应在用硝呋替莫(0-20μg/ml)处理96小时的SMS-KCNR细胞中鉴定含有断裂DNA的核。通过红色溴化丙锭染色来鉴定核,通过PI和TUNEL叠加中的黄色斑点来鉴定TUNEL阳性核。TUNEL测定法显示了用硝呋替莫处理72小时后SMS-KCNR细胞中凋亡的剂量依赖性增加。随着药物浓度的提高,在核中观察到凋亡信号的提高(图3B)。
实施例7:Western印迹分析
处理后,通过刮取收集细胞并重悬于200μl E缓冲液(10mM TrispH7.6、50mM NaCl、5mM EDTA、50mM NaF、0.1mM NaVO4、1%Triton、10μg/ml抑肽酶、10ug/ml亮抑酶肽,ABSF)中,并在冰上孵育20分钟以裂解细胞。将细胞裂解物超声处理10秒钟并在4℃下以14,000rpm离心20分钟。用BioRad蛋白质估值试剂盒(BioRad,Hercules,CA)测定蛋白质浓度。将裂解物在12%SDS-PAGE凝胶上电泳细胞并印迹在PVDF(聚偏氟乙烯)膜上。用PBST中的5%脱脂乳(BioRad,Hercules,CA)封闭印迹1小时。使用对已切割的胱天蛋白酶-3以及磷酸化及完整形式Akt和ERK1/2具有特异性的抗体来检测标记印迹。使用辣根过氧化物酶缀合的第二抗体(Amersham-PharmaciaBiotech,Piscataway,NJ)使蛋白质条带显影,然后增强化学发光(Upstate,Waltham,MA)并使用BioRad,Gel Document System,GDS8000(BioRad,Hercules CA)记录。清洗印迹并用肌动蛋白抗体作为内部上样对照(Sigma Chemical Company,St.Louis,MO)进行检测。
实施例8:HEC的BrdU掺入测定
通过测量DNA合成期间的BrdU掺入来评估硝呋替莫对增殖的影响。在96孔板中培养人上皮细胞(HEC)(1×104个细胞),去血清处理16小时并在存在50ng/ml VEGF时用培养基200中0、0.15、0.3、0.6125、1.25、2.5、5、10和20μg/ml处理72小时。向细胞中添加BrdU(10μM终浓度)并再孵育6小时。固定细胞并使用抗BrdU-POD抗体和TMB显色底物显色。根据制造商的说明进行测定。在这种比色法细胞增殖测定中,色彩强度与掺入DNA中的BrdU量直接相关,该量进而代表了增殖。结果表达为BrdU掺入百分比。
实施例9:胱天蛋白酶-3在硝呋替莫所导致的凋亡中的作用;胱天蛋白酶抑制研究
通过证实胱天蛋白酶-3(凋亡级联的抑制剂)的活化来获得硝呋替莫处理诱导凋亡的证明。用0、1、10和20μg/ml硝呋替莫将SMS-KCNR细胞处理24小时,使用识别活化形式胱天蛋白酶-3的抗体,通过免疫印迹来测定胱天蛋白酶-3的活化。如上通过MTS测定法测量细胞生存力。在用运载体处理的细胞中观察到最小或基础水平的胱天蛋白酶-3活化(图4A)。硝呋替莫的添加导致剂量依赖性且强烈的胱天蛋白酶3活化,如19kDa和17kDa条带的出现所证明(图4A)。硝呋替莫对胱天蛋白酶-3的活化与形态学观察和TUNEL测定法所示的凋亡增加一致(图3A,3B)。
为了评价胱天蛋白酶在成神经细胞瘤细胞中硝呋替莫所诱导凋亡中的关键作用,使用Z-VAD-FMK,它是与胱天蛋白酶1到9的催化位点不可逆结合的泛胱天蛋白酶抑制剂。胱天蛋白酶的失活导致对胱天蛋白酶所介导凋亡的抑制。用50μM泛胱天蛋白酶抑制剂Z-VAD-FMK将SMS-KCNR细胞预处理90分钟,然后用硝呋替莫(10μg/ml)处理96小时。在用硝呋替莫处理(10μg/ml处理96小时)前,用50μMZ-VAD-FMK将SMS-KCNR细胞预处理90分钟。选择10μg/ml硝呋替莫的剂量,因为其接近于IC50值(图2A)。通过MTS测定法测量细胞生存力。与用运载体处理的对照相比,硝呋替莫将SMS-KCNR细胞的生存力降低50%。然而,添Z-VAD-FMK导致对硝呋替莫细胞毒活性的逆转(图4B)。用50μM Z-VAD-FMK预处理90分钟将硝呋替莫存在下的细胞生存力提高至90%。该研究清楚地显示,硝呋替莫的细胞毒效应被泛胱天蛋白酶抑制剂Z-VAD-FMK逆转,说明观察到的硝呋替莫的凋亡效应由胱天蛋白酶介导。
实施例10:硝呋替莫抑制血管发发生-导管测定法
首先,我们测试了硝呋替莫对Matrigel基质上导管形成的影响。用生长因子刺激进行导致内皮细胞的形态学分化和基质上导管样结构的形成。在Matrigel床中进行内皮导管形成测定。简言之,通过在冰上使用预冷的移液器、平板和导管来制备Matrigel床。将生长因子减少的Matrigel在4℃解冻过夜并混合均匀,用0.1ml Matrigel包被培养平板(48孔),并使其在37℃凝胶30分钟。将每孔(2×104)个HEC播种在Matrigel床上,并在存在或不存在VEGF(50ng/ml)时在含硝呋替莫(0、10或20μg/ml)的EBM-2基本培养基中培养8小时。使用相差显微镜(安装有Fuji数字照相机的Nikon Eclipse TS100,Japan)对毛细血管网照相,并通过计数每孔四个象限的分支点来定量导管数。
在Matrigel培养基上,内皮细胞形成聚集体,然后聚集的细胞开始萌芽和融合,形成导管样结构。存在生长因子时,HEC形成有组织的、伸长的导管样结构,模拟了带有广泛网络的毛细血管。(图8A)。然而,没有生长因子时(对照),没有观察到这样有组织的结构(图8B)。在存在VEGF时,硝呋替莫显示对HEC的导管样结构形成有显著的抑制作用。导管的形成减少,形成毛细血管样结构的不完全网络(图8C)。20μg/ml时硝呋替莫分别显示抑制50%(±7%)的导管形成。这些发现提示,硝呋替莫抑制血管发生中的导管形成步骤。
实施例11:硝呋替莫抑制血管发生-主动脉环测定法
接下来,我们使用埋入Matrigel床的大鼠主动脉环(外植体)测试了硝呋替莫抑制生长因子所诱导的毛细血管萌芽的能力。Matrigel床模拟代表其天然组成和结构的生理学细胞外基质。因为这些特性,Matrigel使得若干种细胞类型(包括内皮细胞)能够在培养中维持其体内表型和三维组织情况。从安乐死的大鼠中取出主动脉弓并立刻转移至含有冰冷的无血清培养基的培养皿中。用小显微解剖镊和虹膜切除剪小心地去除主动脉周纤维脂肪组织(peri-aortic fibroadipose tissue),注意不要损伤主动脉壁。切开主动脉环(1mm厚)并在5次连续的培养基200洗涤中充分洗涤。然后将大鼠主动脉的环形外植体包埋在48孔板中的Matrigel床中,在存在或不存在生长因子时用1、10或20μg/ml硝呋替莫处理,并在组织培养箱中于37℃下孵育。每隔一天用NikonEclipse TS100倒置显微镜在合适的放大率下检查外植体,并在第9天结束时拍照。第9天时,使用Nikon Eclipse TS100荧光显微镜(Japan)和Fuji数字照相机,通过分级和记录萌芽的程度来定量毛细血管萌芽,其直接反映血管发生。
在无血清培养基中培养的主动脉环显示很少或无萌芽(图7A)。当在生长因子存在下(完全培养基)培养主动脉环时,最初在第3-4天注意到微血管的萌芽,微血管的数量和长度随着培养时间的延长而增加。微血管从植入环的边缘起向外生长。HEC的最初的线性萌芽逐渐分支、分开,并产生复杂的微血管网络。从外植体的周围发展出带有管和环的分支微血管的稠密毛细血管网,发现其向朝向孔的边缘伸展(图7B)。相反,向完全培养基中添加硝呋替莫时,这种微血管形成以剂量依赖性的方式显著减少。在用硝呋替莫处理的主动脉环中,观察到萌芽从外植体向外的生长有显著的延迟,微血管的数量和分支的数量均退化。在较低剂量(1和10μg/ml)的硝呋替莫下,毛细血管网络是稀疏和不完全的(图7C和D),在较高剂量(20μg/ml)的硝呋替莫下,存在微血管萌芽的完全抑制(图7E)。通过用Dil-Ac-LDL染色主动脉环来证明微血管的内皮性质(数据未显示)。Dil-Ac-LDL被内皮细胞选择性摄入并且不破坏其生长、存活或功能。根据其内皮来源,管状向外生长物发出荧光,并且与相差显微照片一致。向外生长的微血管的分析揭示,硝呋替莫强烈抑制血管发生。
实施例12:小鼠中肿瘤尺寸的减小
异种移植实验使用107个SMS-KCNR细胞注射进裸鼠中,并在食物块中含有或不含有150mg/kg/天的硝呋替莫,连续处理30天。收获后测量肿瘤尺寸。结果在图11中显示。观察到大于三倍的肿瘤尺寸减小(1.14克与0.3克)。
实施例13:治疗患有成神经细胞瘤和查加斯病的人患者
用常规的化疗药物环磷酰胺(50ml/m2NS中250mg/m2/剂,在30分钟中输注)和托泊替康(50ml NS或D5W中0.75mg/m2/剂,在30分钟中输注)治疗的患有进行性难治性成神经细胞瘤的五岁龄女性患者通过输血患上了查加斯病。查加斯病是由南美洲特有的克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)引起的寄生虫病。尽管硝呋替莫目前在美国尚未被FDA批准用于查加斯病或任何其他疾病,但是其通过疾病控制中心(Center for Disease Control(CDC))获得,用于治疗患者的查加斯病。
患者通过每天三次口服片剂开始15-20mg/kg/天的硝呋替莫给药;患者的肿瘤随后消退1。减少和切断所有药物时患者复发,重新开始使用硝呋替莫、环磷酰胺和托泊替康,并再次显示肿瘤消退。该患者中没有显著的副作用或显著的器官毒性迹象。
实施例14:治疗仅患有成神经细胞瘤的人患者
用单独或与下文所述的其他治疗组合的20mg/kg/day(三次给药)硝呋替莫来治疗患复发性成神经细胞瘤(但未患查加斯病)的三名其他患者。他们均显示肿瘤消退,并且对其治疗方案的耐受良好,没有显著的副作用或器官毒性的迹象。
年龄 | 抗坏血酸 | 环磷酰胺 | 托泊替康 | |
患者A | 4 | 无 | 在第15天开始,50ml/m2NS中250mg/m2/剂,在30分钟中输注;每21天在连续5天中每天一次,3个循环 | 第15天开始,50ml NS或D5W中0.75mg/m2/剂,在30分钟中输注;每21天在连续5天中每天一次,3个循环 |
患者B | 6 | 5克,每周两次,静脉注射,增加至25克,每周两次 | 50ml/m2NS中250mg/m2/剂,在30分钟中输注;每21天在连续5天中每天一次,3个循环 | 50ml NS或D5W中0.75mg/m2/剂,在30分钟中输注;每21天在连续5天中每天一次,3个循环 |
患者C | 9 | 在第22天开始,5克,每周两次,增加至30克,每周两次 | 50ml/m2NS中250mg/m2/剂,在30分钟中输注;每21天在连续5天中每天一次,3个循环 | 50ml NS或D5W中0.75mg/m2/剂,在30分钟中输注;每21天在连续5天中每天一次,3个循环 |
患者A患有多次复发的成神经细胞瘤,并以上文所述的剂量开始使用硝呋替莫。两周后患者的生活质量改善,并观察到肿瘤的稳定。与环磷酰胺和托泊替康共同施用硝呋替莫治疗四个月后,观察到显著和持续的肿瘤消退。开始治疗方案两个月后,患者B的肿瘤标记物发生正常化;骨髓吸取物澄清,并且疾病和MIBG扫描为阴性,在扫描时显示多个点的所述MIBG扫描显示剩余一个点。患者C具有22个初始肿瘤标记物VMA,并且骨髓是肿瘤阳性的。在开始抗坏血酸共同施用前的第21天,患者的肿瘤标记物VMA减少至17个,并且患者的骨髓为阴性。3个治疗循环后,患者的肿瘤标记物VMA进一步减少至13。
实施例15:人患者中的剂量毒性研究
儿童中用于治疗查加斯病的标准治疗剂量为15-20mg/kg/天。这些剂量下的毒性通常很低。为了进行剂量毒性研究,使用下表中公开的递增剂量。
在第1-21天,每天三次口服仅用硝呋替莫治疗受试者。之后,向硝呋替莫治疗方案中添加环磷酰胺和托泊替康。如下,每21天在连续5天中如下给予各个化学疗法循环:在30-60分钟中用500ml/m2D5W1/2NS预水合,配合止吐疗法。环磷酰胺,50ml/m2NS中250mg/m2/剂,在30分钟中输注。托泊替康,50ml NS或D5W中0.75mg/m2/剂,在30分钟中输注。FILGRASTIM,在第5天的化学疗法完成后24-48小时开始每天皮下给予5微克/kg,直到中性粒细胞恢复。在治疗医生的斟酌下可以针对>40kg的患者替换为PEG-非格司亭皮下6mg。
这种21天的循环总计重复3次,在每个循环之前重新评估。重新评估将包括CBC LDH、铁蛋白、尿儿茶酚胺、原发部位的MRI和MIBG扫描,如果在方案开始时是阳性的话加上骨髓抽吸和/或活检。4个循环疗法后的治疗根据治疗医生的斟酌保留。
实施例16:改进的硝基呋喃(特别是硝呋替莫)合成
完成了一种改进的、更有效的、更无害的硝基呋喃侧链合成,示于图12中并在下文中描述。
参考图12,在作为溶剂的乙醇中,在回流下用巯基乙醇对环氧丙烷碱促进的亲核加成反应来实现二醇(1)的合成。如本领域技术人员所知,该反应可以用除乙醇外的溶剂和除乙醇钠外的碱来实现。
1H NMR(CDCl3):δ3.868(1H),3.734(2H),2.725(4H),2.465(2H),1.222(3H)MS(FAB):159[M+Na]+
砜二醇(2)的合成在回流下在催化量的酸(如磷酸)中用过氧化氢溶液来实现。在减压下或在空气、N2或氩气的气流中去除溶剂,然后在高真空下干燥。
1H NMR(CDCl3):δ4.48(1H),4.12(2H),3.31(3H),3.13(1H),1.31(3H);MS(FAB):191[M+Na]+.
在过夜回流下,用tBoc-NHNH2(1.25当量)通过碱促进的阱嵌入(hydrazine insertion)实现砜二醇(2)(1当量)环化为化合物(3)。用乙酸乙酯萃取反应混合物并在减压下浓缩,提供半固体的产物。
MS(FAB):165.2[M+H]+,187[M+Na]+.
在长至24小时的回流下,通过化合物(3)(1.1当量)与5-硝基-2-糠醛(1当量)在醇溶剂(如乙醇,优选无水的)中实现硝呋替莫的合成。在抽吸下热过滤或冷过滤反应混合物,提供想要的产物。
1H NMR(CDCl3+CD3OD):δ7.40(1H),7.32(1H),6.67(1H),4.16-4.23(1H),3.98-4.04(1H),3.64-3.74(1H),2.80-3.02(4H)and1.45-1.47(d,3H)
在本公开的启发下,本文公开和要求保护的所有组合物和方法无需过度实验即可制造和实施。尽管本发明的组合物和方法已经就优选实施方案进行了描述,但是本领域普通技术人员应当明白,可以对所述组合物和方法进行变更,而不偏离本发明的概念、构思和范围。例如,如果能够达到相同或类似的结果,则化学上相关的某些药剂和组合物可以替换本文所述的药剂。所有这些类似的取代和修改对本领域技术人员是很明显的,认为是在本发明的构思、范围和概念中。
本文引用的所有出版物、专利申请、专利和其他文件都通过参考以其整体并入本文。在冲突的情况下,以包括定义的本说明书为准。另外,材料、方法和实施例仅用于说明,而不旨在限制。
参考文献
1.Brodeur GM,Pritchard J,Berthold F,et al.,Revisions of the international criteria forneuroblastoma diagnosis,staging,and response to treatment.J Clin Oncol 1993;11:1466-1477.
2.Brodeur GM,Maris JM,Yamashiro DJ,Hogarty MD,White PS.Biology andGenetics of Human Neuroblastomas.J Pediatr Hematol Oncol 1997;19:93-101.
3.HoR,Eggert A,Hishiki T.et al.,Resistance to Chemotherapy Mediated by TrkB inNeuroblastomas.Cancer Res 2002;62;6462-6466.
4.Raether W,Hanel H.Nitroheterocyclic Drugs with Broad Spectrum Acitivity,ParasitRes 2003;90:S19-S39.
5.Hiraki Y,Sekine A,Nabeshi H,Midorikawa K,Murata M,Kumagai Y,Kawanishi S.Mechanism of carcinogenesis induced by a veterinary antimicrobial drug,nitrofurazone,viaoxidative DNA damage and cell proliferation.Cancer Letters 2004;215:141-150..
6.Castro J,Diaz De Toranzo EG.Toxic Effects of Nifurtimox and Benznidazole,TwoDrugs used against American Trypanosomiasis(Chagas’Disease).Biomed Environ Sci1988;1:19-33.
7.Faundez M,Pino L,Letelier P.et al.,Buthionine sulfoximine increases the toxicity ofnifurtimox and benznidazole to Trypanosoma cruzi.Antimicrob Agents Chemother 2005;49:126-30.
8.Docampo R,Stoppani AOM.Generation of Superoxide anion and HydrogenPeroxide induced by Nifurtimox in Trypanosoma cruzi.Arch Biochem Biophys 1979;197:317-321.
9.Montalto do Mecca M,Diaz EG,Castro JA.Nifurtimox biotransformation to reactivemetabolites or nitrite in liver subcellular fractions and model systems.Toxicol Lett 2002;136;1-8.
10.Muelas-Serrano S,Perez-Serrano J,Gomez-Barrio A,Aran VJ,Rodriguez-CaabeiroF.Untrastructural Alterations Induced by Nifurtimox and another Nitro Derivative onEpimastigotes of Trypanasoma crui.Parasitol Res 2002;88:97-101.
11.Solari A,Ortiz S,Soto A,et al.,Treatment of Trypanosoma cruzi-infected childrenwith Nifurtimox:a3 year follow-up by PCR.J Antimicrob Chemother 2001;48:515-519.
12.Malich G,Markovic B,Winder C,The sensitivity and specificity of the MTStetrazolium assay for detecting the in vitro cytotoxicity of 20 chemicals using human celllines.Toxicology 1997;124:179-192.
13.Gratzner HG.Monoclonal antibody to 5-bromo-and 5-iodo-deoxyuridine:A newreagent for detection of DNA replication.Science 1982;218:474-475.
14.Feng X,Jiang H,Baik JC,Edgar C,Eide FF.BDNF Dependence in Neuroblastoma.JNeurosci Res 2001;64(4):355-63.
15.Jaboin J,Kim CJ,Kaplan DR,Thiele CJ.Brain-derived Neurotrophic FactorActivation of TrkB Protects Neuroblastoma Cells from Chemotherapy-induced Apoptosis viaPhosphatidylinositol 3’-Kinase Pathway.Cancer Res 2002;62;6756-6763.
16.Reynolds CP,Biedler JL,Spengler BA,Reynolds DA,Eoss RA,Frenkel EP,SmithRG,Characterization of human neuroblastoma cell lines established before and after therapy.J Natl Cancer Inst 1986;76:375-87.
17.Moreno SNJ,Mason RP,Docampo R-Reduction of Nifurtimox and Nitrofurantoin toFree Radical Metabolites by Rat Liver Mitochondria.J Biol Chem 1984;259:6298-6305.
18.Hileman EO,Liu J,Albitar M,Keating MJ,Huang P.Intrinsic Oxidative Stress inCancer Cells:a Biochemical Basis for Therapeutic Selectivity.Cancer Chemother Pharmacol2004;53:209-219.
19.Behrend L,Henderson G,Zwacka RM.Reactive Oxygen Species in OncogenicTransformation.Biochem Soc Trans 2003;31:1441-1444.
20.Carreras MC,Franco MC,Peralta JG,Poderoso JJ.Nitric Oxide,complex I,and theModulation of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Biology and Disease.Mol AspectsMed 2004;25:125-139.
21.Muelas-Serrano S,Le-Senne A,Fernandez-Portillo C,NogalJJ,Ochoa C,Gomez-Barrio A.In Vitro and In Vivo Anti-Trypanosoma cruzi Activity of a Novel Nitro-derivative.Mem Inst Oswaldo Cruz 2002;97:553-557.
22.Attanasio A,Schiffer D.Ultrastructural Delection of DNA Strand Breaks by in situEnd-labeling Techniques.J Pathol 1995;176:27-35.
23.Thomberry NA,Lazebnik Y.Caspases:enernieswithin.Science 1998;281:1312-1316.
24.Van Noorden CJ.The History of Z-VAD-FMK,a Tool for Understanding theSignificance of Caspase Inhibition.Acta Histochem 2001;103:241-251.
25.Puppo M,Pastorino S,Melillo G,Pezzolo A,Varesio L,Bosco MC.Induction ofApoptosis by Flavopiridol in Human Neuroblastoma Cells is Enhanced under Hypoxia andAssociated with N-myc Proto-Oncogene Down Regulation.Clin Cancer Res 2004;10:8704-8719.
26.Hetman M,Xia Z.Signaling pathways mediating anti-apoptotic action ofneurotrophins.Acta Neurobiol Exp 2000;60:531-545.
27.Middlemas DS,Kihl BK,Zhou J,Zhu X.Brain-derived Neurotrophic Factorpromotes Survival and Chemoprotection of Human Neuroblastoma Cells.J Biol Chem1999;274:16451-16460.
28.Encinas M,Iglesias M,LlechaN,Comella JX.Extracellular-regulated kinases andphosphatidylinositol 3-kinase are involved in brain-derived neurotrophic factor-mediatedsurvival and neuritogenesis of the neuroblastoma cell line SH-SY5Y.J Neurochem1999:73:1409-21.
Claims (34)
1.硝呋替莫用于制备在哺乳动物中治疗癌症或抑制血管发生的药物的用途。
2.根据权利要求1的用途,其中所述癌症为基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑癌或CNS癌、乳腺癌、绒毛膜癌、结肠和直肠癌、结缔组织癌、食管癌、眼癌、纤维瘤、头与颈癌、上皮内赘生物、肾癌、喉癌;白血病;肝癌;淋巴瘤;口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、横纹肌肉瘤、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌或子宫癌。
3.根据权利要求1的用途,其中所述癌症为消化系统癌、呼吸系统癌或泌尿系统癌。
4.根据权利要求1的用途,其中所述癌症为癌瘤或肉瘤。
5.根据权利要求1的用途,其中所述癌症为小细胞肺癌或非小细胞肺癌。
6.根据权利要求1的用途,其中所述癌症为视网膜母细胞瘤。
7.根据权利要求1的用途,其中所述癌症为唇癌、舌癌、口癌或咽癌。
8.根据权利要求1的用途,其中所述癌症为成神经细胞瘤。
9.根据权利要求1-8中任一项的用途,其中所述药物为适合经口、鞘内、颅内或肌内给药的形式。
10.根据权利要求1-8中任一项的用途,其中所述硝呋替莫以提供200-300mg单位剂量的量存在于该药物中。
11.根据权利要求10的用途,其中所述药物将以从每天一次到每天三次的间隔施用。
12.根据权利要求11的用途,其中所述药物将每天三次施用三周。
13.根据权利要求1-8中任一项的用途,其中所述药物包含治疗有效且生理可接受的量的至少一种其他活性成分或药剂。
14.根据权利要求13的用途,其中所述至少一种其他活性成分是抗坏血酸或丁硫氨酸亚砜胺。
15.根据权利要求1、2、4和8中任一项的用途,其中所述药物为药物单位剂量形式,其包含有效治疗成神经细胞瘤或其他中枢神经系统癌症的量的硝呋替莫,其中所述其他中枢神经系统癌症选自成髓细胞瘤、周围恶性神经鞘瘤、室管膜瘤、颅咽管瘤、星形细胞瘤、脑脊膜瘤、生殖细胞瘤、胶质瘤、脉络丛瘤、周围神经外胚层瘤、原始神经外胚层瘤、CNS淋巴瘤、垂体腺瘤和施万鞘瘤。
16.根据权利要求1、2、4和8中任一项的的用途,其中所述药物为药物单位剂量形式,其包含有效治疗成神经细胞瘤或其他中枢神经系统癌症的量的硝呋替莫,其中所述其他中枢神经系统癌症为混合性胶质瘤。
17.根据权利要求1、2、4和8中任一项的的用途,其中所述药物为药物单位剂量形式,其包含有效治疗成神经细胞瘤或其他中枢神经系统癌症的量的硝呋替莫,其中所述其他中枢神经系统癌症为少突胶质瘤。
18.根据权利要求15的用途,其中所述单位剂量为200-300mg。
19.根据权利要求18的用途,其被配制用于经口、鞘内、颅内、静脉内或肌内给药。
20.根据权利要求19的用途,其还包含抗坏血酸或丁硫氨酸亚砜胺。
21.根据权利要求1、2、4和8中任一项的用途,其中所述药物为用于治疗成神经细胞瘤或其他中枢神经系统癌症的药物的试剂盒的形式,所述试剂盒包含被配制用于经口、鞘内、颅内、静脉内或肌内给药的硝呋替莫,其中所述其他中枢神经系统癌症选自成髓细胞瘤、周围恶性神经鞘瘤、室管膜瘤、颅咽管瘤、星形细胞瘤、脑脊膜瘤、生殖细胞瘤、胶质瘤、脉络丛瘤、周围神经外胚层瘤、原始神经外胚层瘤、CNS淋巴瘤、垂体腺瘤和施万鞘瘤。
22.根据权利要求1、2、4和8中任一项的用途,其中所述药物为用于治疗成神经细胞瘤或其他中枢神经系统癌症的药物的试剂盒的形式,所述试剂盒包含被配制用于经口、鞘内、颅内、静脉内或肌内给药的硝呋替莫,其中所述其他中枢神经系统癌症为混合性胶质瘤。
23.根据权利要求1、2、4和8中任一项的用途,其中所述药物为用于治疗成神经细胞瘤或其他中枢神经系统癌症的药物的试剂盒的形式,所述试剂盒包含被配制用于经口、鞘内、颅内、静脉内或肌内给药的硝呋替莫,其中所述其他中枢神经系统癌症为少突胶质瘤。
24.根据权利要求21的用途,其中所述药物包含治疗有效且生理可接受的量的至少一种其他活性成分或药剂。
25.根据权利要求21的用途,其还包含所述药物的使用说明。
26.根据权利要求2的用途,其中所述CNS癌包括成神经细胞瘤、成髓细胞瘤、周围恶性神经鞘瘤、室管膜瘤、颅咽管瘤、星形细胞瘤、脑脊膜瘤、生殖细胞瘤、胶质瘤、脉络丛瘤、周围神经外胚层瘤、原始神经外胚层瘤、CNS淋巴瘤、垂体腺瘤和施万鞘瘤。
27.根据权利要求2的用途,其中所述CNS癌为混合性胶质瘤。
28.根据权利要求2的用途,其中所述CNS癌为少突胶质瘤。
29.根据权利要求3的用途,其中所述消化系统癌包括胃癌。
30.根据权利要求2的用途,其中所述白血病包括急性髓细胞样白血病、急性淋巴样白血病、慢性髓细胞样白血病和慢性淋巴样白血病。
31.根据权利要求2的用途,其中所述淋巴瘤包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。
32.根据权利要求3的用途,其中所述呼吸系统癌包括肺癌。
33.根据权利要求2的用途,其中所述皮肤癌包括黑色素瘤。
34.根据权利要求2的用途,其中所述子宫癌包括子宫颈癌和子宫内膜癌。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US78275606P | 2006-03-16 | 2006-03-16 | |
US60/782,756 | 2006-03-16 | ||
PCT/US2007/005927 WO2007108947A2 (en) | 2006-03-16 | 2007-03-07 | Nitrofuran compounds for the treatment of cancer and angiogenesis |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101500557A CN101500557A (zh) | 2009-08-05 |
CN101500557B true CN101500557B (zh) | 2012-10-31 |
Family
ID=38522894
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2007800176952A Active CN101500557B (zh) | 2006-03-16 | 2007-03-07 | 用于治疗癌症和血管发生的硝基呋喃化合物 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US8470815B2 (zh) |
EP (1) | EP2004177B1 (zh) |
CN (1) | CN101500557B (zh) |
AT (1) | ATE542531T1 (zh) |
AU (1) | AU2007227692B2 (zh) |
CA (1) | CA2646222C (zh) |
WO (1) | WO2007108947A2 (zh) |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8835506B2 (en) | 2008-06-05 | 2014-09-16 | Stc.Unm | Methods and related compositions for the treatment of cancer |
US9526648B2 (en) | 2010-06-13 | 2016-12-27 | Synerz Medical, Inc. | Intragastric device for treating obesity |
US10010439B2 (en) | 2010-06-13 | 2018-07-03 | Synerz Medical, Inc. | Intragastric device for treating obesity |
US8628554B2 (en) | 2010-06-13 | 2014-01-14 | Virender K. Sharma | Intragastric device for treating obesity |
US10420665B2 (en) | 2010-06-13 | 2019-09-24 | W. L. Gore & Associates, Inc. | Intragastric device for treating obesity |
CN104394854A (zh) * | 2012-05-08 | 2015-03-04 | 美全诺药业 | 具有增强活性和降低毒性的包括硝呋替莫的硝基呋喃的新型制剂 |
US10058542B1 (en) | 2014-09-12 | 2018-08-28 | Thioredoxin Systems Ab | Composition comprising selenazol or thiazolone derivatives and silver and method of treatment therewith |
US10779980B2 (en) | 2016-04-27 | 2020-09-22 | Synerz Medical, Inc. | Intragastric device for treating obesity |
EP3502700A1 (en) * | 2017-12-21 | 2019-06-26 | Fundació Privada Institut d'Investigació Oncològica de Vall-Hebron | Methods based on the detection of rad51 foci in tumor cells |
WO2019183385A1 (en) * | 2018-03-22 | 2019-09-26 | University Of Rochester | Mapk/erk inhibition for ovarian and other cancers |
CN108853114B (zh) * | 2018-03-30 | 2019-12-24 | 天津奥溪利亚医药技术开发有限公司 | 硝呋莫司在制备治疗癌症衍生的脑转移瘤的药物中的应用 |
CN114377018B (zh) * | 2020-10-21 | 2024-02-06 | 中国医学科学院药物研究所 | 硝呋莫司在制备抗流感病毒药物中的应用 |
CN112480097B (zh) * | 2020-11-26 | 2022-07-08 | 汕头大学医学院 | 一种靶向ets结构域蛋白的抑制剂及其应用 |
CN115708822A (zh) * | 2021-08-23 | 2023-02-24 | 南京施江医药科技有限公司 | 酰肼类药物在治疗肿瘤中的应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1537858A1 (en) * | 2003-12-04 | 2005-06-08 | Vectron Therapeutics AG | Drug delivery vehicles and uses thereof |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS54151134A (en) | 1978-05-19 | 1979-11-28 | Kureha Chem Ind Co Ltd | Antitumorigenic agent |
US5496830A (en) * | 1994-09-14 | 1996-03-05 | Johns Hopkins University | Inhibition of hemoflagellates by camptothecin compounds |
GB9601603D0 (en) * | 1996-01-26 | 1996-03-27 | Isis Innovations Ltd | Terpyridine-platinum (II) complexes |
WO2005010040A1 (en) | 2003-07-15 | 2005-02-03 | Barros Research Institute | Eimeria tenella antigen for immunotherapy of coccidiosis |
CA2676527C (en) | 2007-01-24 | 2015-08-11 | Women & Infants Hospital | N-amino tetrahydrothiazine derivatives, method of manufacture and use |
-
2007
- 2007-03-07 WO PCT/US2007/005927 patent/WO2007108947A2/en active Application Filing
- 2007-03-07 EP EP07752613A patent/EP2004177B1/en not_active Not-in-force
- 2007-03-07 CN CN2007800176952A patent/CN101500557B/zh active Active
- 2007-03-07 AT AT07752613T patent/ATE542531T1/de active
- 2007-03-07 CA CA2646222A patent/CA2646222C/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-03-07 US US12/225,202 patent/US8470815B2/en active Active
- 2007-03-07 AU AU2007227692A patent/AU2007227692B2/en not_active Ceased
-
2013
- 2013-05-17 US US13/897,168 patent/US9220714B2/en active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1537858A1 (en) * | 2003-12-04 | 2005-06-08 | Vectron Therapeutics AG | Drug delivery vehicles and uses thereof |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US8470815B2 (en) | 2013-06-25 |
WO2007108947A3 (en) | 2008-04-24 |
WO2007108947A2 (en) | 2007-09-27 |
US20110288080A1 (en) | 2011-11-24 |
US9220714B2 (en) | 2015-12-29 |
EP2004177A4 (en) | 2009-11-18 |
EP2004177A2 (en) | 2008-12-24 |
CA2646222A1 (en) | 2007-09-27 |
EP2004177B1 (en) | 2012-01-25 |
ATE542531T1 (de) | 2012-02-15 |
CN101500557A (zh) | 2009-08-05 |
US20130331383A1 (en) | 2013-12-12 |
CA2646222C (en) | 2016-07-05 |
AU2007227692B2 (en) | 2012-09-13 |
AU2007227692A1 (en) | 2007-09-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101500557B (zh) | 用于治疗癌症和血管发生的硝基呋喃化合物 | |
CN101171010B (zh) | 阿片样物质拮抗剂用于减少内皮细胞增殖和迁移的用途 | |
CN109196103A (zh) | 自组装的3d rna笼形纳米粒 | |
CN109069512A (zh) | 取代的氨基嘌呤化合物、其组合物以及相关治疗方法 | |
US9918972B2 (en) | Treatment of leukemia with artemisinin derivatives and combinations with other antineoplastic agents | |
US9980982B2 (en) | HE4 based therapy for malignant disease | |
CN103458902A (zh) | Tlr激动剂和联合治疗的治疗应用 | |
EP2766043A1 (en) | Methods for treating vascular leak syndrome and cancer | |
CN105338973A (zh) | 使用辅酶q10联合疗法治疗癌症 | |
CN109069528A (zh) | 通过DBait分子的全身性给药治疗癌症 | |
CN108025035A (zh) | 用于治疗与etbr激活相关的癌症的组合物和方法 | |
EP3145528A1 (en) | Highly soluble aquaporin-4 extracelluar loop c peptide immunization for treatment of neuromyelitis optica | |
CN105246480A (zh) | 使用4-氨基-2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-异吲哚啉-1,3-二酮治疗和控制中枢神经系统癌症的方法和组合物 | |
US20220280491A1 (en) | Septin inhibitors for treatment of cancers | |
US10583123B2 (en) | Method for the treatment of ATG4-related disorders | |
WO2012082992A1 (en) | Compositions and methods for cancer treatment | |
US20200199681A1 (en) | Mda-7 cancer therapies and methods of detecting biomolecules | |
Zhang et al. | A multifunctional therapy approach for cancer: Targeting Raf1-Mediated inhibition of cell motility, growth, and interaction with the microenvironment | |
KR102236038B1 (ko) | 신규 프리오노이드병용 치료약 | |
WO2020163553A1 (en) | Mda-7/il-24 for cancer treatment and methods of monitoring same | |
WO2007059099A2 (en) | Boroproline combination therapy for cancer | |
US20210355235A1 (en) | Compositions and Methods For Treating Cancer with Anti-Renalase antibodies and Anti-PD1 antibodies | |
CN1802090A (zh) | 硼脯氨酸化合物组合治疗 | |
CN107510843B (zh) | Dem1的功能与用途 | |
Michel | Potentially sight-saving dipstick developed for rapid testing of trachoma |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |