CN101480405B - 一种谷维素组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种谷维素药物组合物，所述药物组合物包含谷维素、磷脂、胆汁酸和/或其盐。本发明公开的药物组合物有效改善了谷维素的水溶性和稳定性，所提供的药物组合物粒径、稳定性均优于现有产品。进一步的，本发明提供了药物组合物的注射液、冻干粉针制剂及其制备方法。

Description

一种谷维素组合物及其制备方法

技术领域

本发明公开了一种谷维素组合物，含有谷维素、磷脂、胆汁酸和/或其盐，属于医药技术领域

背景技术

谷维素是以环木菠萝醇类为主体的阿魏酸酯和甾醇类的阿魏酸酯所组成的一种天然混合物，外观为白色至淡黄色晶体粉末、无味、有特异香味。谷维素主要存在于米糠油及其油脚中。在米糠油谷维素中，环木菠萝醇类阿魏酸酯含量约为70～80％。长期研究发现谷维素具有多种生理功能，主要包括：降低血脂、抵抗胆固醇的吸收、降低血清胆固醇、防止脂质氧化和预防心血管疾病。除此之外，谷维素还可以缓和女性进入更年期之后的各种身体障碍状态和自律神经失调症，改善间脑视床底部功能失调。

谷维素难溶于水、易氧化，导致很难做成一种稳定的制剂。较低的溶解度和易氧化的特点不仅导致谷维素实际应用中吸收率低，在生产中质量也难以控制。为了解决这些问题，研究人员进行了一定的摸索。中国专利CN123428公开了一种谷维素的植物油溶制剂，提高了生物利用度，临床效果优于一般片剂。但是由于油溶制剂临床应用时必须肌肉注射，病人痛苦感比较强，且易导致肌肉结块。同时油溶制剂起效缓慢，需要大约一个月的时间进行持续的肌肉注射。中国专利申请2007100156403为了解决采用植物油制剂带来的易沉淀、不稳定问题，采用油酸乙酯代替植物油做成谷维素的油溶制剂，从而达到稳定、不易产生沉淀的效果。但是该发明依旧没有从本质上解决油溶制剂带来的肌肉注射易导致病人痛苦、肌肉结块、依从性差的弊端。中国专利申请2004100945568公开了谷维素原料与胆固醇、磷脂结合制备为脂质体的技术方案，应用该发明技术方案的制剂克服谷维素口服效果差、生物利用率低的问题。但是制备脂质体是一个成本很高的工艺流程，生产过程质量不易控制，无法获得质量稳定可靠的谷维素脂质体。专利CN100386082C公开了谷维素的一种注射制剂，该发明通过将谷维素与表面活性剂、助溶剂同时结合第二表面活性剂的方法，获得了一种注射制剂。但是该方案获得的注射剂为注射乳剂，必须包括油相，而且制备的乳液粒径比较难控制、稳定性相对不佳，在制备时需乳均机等设备，操作较为复杂、成本高。

在现有的技术方案中，油溶制剂由于植物油不可能除去，实际上是一种半固体制剂，室温下稳定性比较差。实际上，所有应用植物油助溶的解决方案都存在着稳定性较差的问题。

尽管对谷维素制剂的研究取得了一些进展，但是综合上述内容，本领域依旧需要一种成本合理、药物稳定、吸收良好的技术方案，我们申请的专利成功解决了这些问题。

发明内容

本发明中，“注射剂”是指可用于静脉输注或推注的制剂，其包括但不限于注射液、输液、冻干粉针等。

本发明中，“冻干制剂”是指任何经过冻干，即水溶液的冷冻干燥得到的具体物质，水溶液中可以含有非水溶剂。

本发明中，“药物组合物”是指任何足以使其有作为药物产品实用性和稳定性的组合物形态。

本发明中，“有效治疗量”或“治疗有效量”是指在某种程度上减轻被治疗病症的一种或多种症状的被给药的量。即将本发明组合物应用的时候针对所对应病症，起到了治疗效果的药物组合物中的谷维素的量。

本发明中，“药学上可接受的”是指用于药物组合物的成分不导致不可接受的药理活性丧失或者不可接受的不良副作用。

本发明提供了一种性质稳定、水溶性高、适合工业化生产的谷维素药物组合物。同时，本发明提供了该组合物的制备方法。

本发明组合物中不需要加入油性成分，也不形成乳剂，有效地解决了乳剂粒径难以控制、不稳定、成本高、操作复杂的问题，也避免了使用植物油等带来的副作用。本发明组合物最终产物不含有油相成分，用药安全性高。所制备的组合物，在室温条件下能保持澄清8小时以上，组合物在使用前不需要采用有机溶媒稀释，直接加入注射用水或葡萄糖注射液、生理盐水即可使用，简化了操作。同时本发明公开的冻干制剂最大限度地减少了或者避免了吐温的使用，防止了潜在的溶血问题。相对于现有的解决方案，本发明辅料用量减少，降低了药物的副作用，解决了病人药物顺应性差的问题。本发明药物组合物不仅有效改善其溶解性，且磷脂基团与细胞膜存在高度亲和性，可以有效延长药效作用时间，提高生物利用度。本发明组合物长期稳定，便于贮藏运输，能防止在注射液时的氧化水解，提高了生物利用度和治疗指数。本发明组合物制备方法工艺简单，采用常规的工艺设备即可工业生产。

发明人长期研究发现，在谷维素中加入一定量的磷脂以及胆汁酸和/或其盐可以显著提高其在水中的溶解度，形成澄清、性质稳定的组合物溶液。将磷脂类物质、胆汁酸类物质混合使用，其效果远远好于单独使用，可大大减少副作用、并且节约成本。该组合物为澄清胶体溶液，其中没有油相成分，也不形成乳剂，粒径在20nm以下，非常有效地解决了乳剂粒径难以控制、不稳定、成本高、操作复杂的问题。在进一步的研究中，发明人发现在上述方案中加入多元醇可以显著减小其在水溶液中的粒径，增加溶解速度，更易于应用吸收。基于上述发现，发明人做出了本发明组合物。

本发明提供了一种谷维素药物组合物，是一种胶束溶液，包括治疗有效量的谷维素、磷脂、胆汁酸和/或其盐。其中，谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂质量比是1∶1-100∶1-500；优选的，谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂质量比是1∶1-50∶1-100；最优选，谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂质量比是1∶5-40∶5-80。

另一方面，本发明还提供了一种冻干粉针剂，包括治疗有效量的谷维素、磷脂、胆汁酸和/或其盐。其是由本发明的谷维素胶束溶液中进一步冷冻干燥制得的。其中，谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂质量比是1∶1-100∶1-500；优选的，谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂质量比是1∶1-50∶1-100；最优选，谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂质量比是1∶5-40∶5-80。

进一步的，本发明组合物还可包含有多元醇，所述多元醇可以是乙二醇、聚乙二醇、丙二醇、丙三醇或其任意混合物。当组合物中加入多元醇时，谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂、多元醇质量比是1∶1-100∶1-500∶1-50；优选的，谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂、多元醇质量比是1∶1-50∶1-100∶1-30；最优选的，谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂、多元醇质量比是1∶5-40∶5-80∶2-15。

相应的，在上述组合物加入多元醇的基础上，可以将其胶束溶液冻干干燥获得冻干粉针剂。

本发明所用的磷脂选自大豆磷脂、蛋黄磷脂、大豆鞘磷脂、蛋黄鞘磷脂、氢化大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、二棕榈磷脂酰胆碱、二棕榈磷脂酰乙醇胺、二硬脂磷脂酰胆碱、二棕榈磷脂酰甘油脂、二棕榈磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二亚油酰磷脂酰胆碱、二亚油酸甘油脂磷脂酰胆碱、二亚油酸甘油脂磷脂酰乙醇胺、二亚油酸甘油脂磷脂酰甘油的一种和/或一种以上的混合物。优选大豆磷脂、蛋黄磷脂、大豆鞘磷脂、蛋黄鞘磷脂、氢化大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇，最优选大豆磷脂、蛋黄磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺。

胆汁酸和/或其盐加入后可以显著增加本发明组合物的稳定性。本发明所用的胆汁酸选自游离胆汁酸、结合胆汁酸或其混合物，所述的胆汁酸盐是胆汁酸成盐后的产物。其中，胆汁酸选自游离胆汁酸、结合胆汁酸或二者的混合物，游离胆汁酸包括胆酸、石胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸等，优选为胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸；结合胆汁酸为上述游离胆汁酸中的羧醛与甘氨酸(H₂NCH₂COOH)或牛磺酸(H₂NCH₂CH₂SO₃H)或其他含有氨基的化合物中的氨基形成酰胺键后的产物，优选为甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸；胆汁酸盐为上述游离胆汁酸或结合胆汁酸成盐后的产物，包括但不限于钾盐、钠盐、钙盐、镁盐、锌盐、硒盐、铁盐等，优选为钠盐和钾盐。

本发明组合物加入多元醇可以显著进一步减小组合物胶束粒径，改善溶解速度。在谷维素、磷脂、胆汁酸和/或其盐基础上加入多元醇可以使组合物溶解至完全澄清状态，并且所得溶液组合物粒径更小。在本发明中，多元醇可以是丙二醇、丙三醇、乙二醇、聚乙二醇和/或其任意的混合物。所述的聚乙二醇，平均分子量为200D～10000D，优选分子量为200D-1000D，更优选聚乙二醇-400、聚乙二醇-200。

本发明组合物、冻干粉针制剂中还可任选地含有其它辅料，包括但不限于等张调节剂、稳定剂、抗氧剂、PH调节剂、防腐剂、赋形剂中的一种和/或一种以上的混合物，从而提高药物的稳定性，有利于药品质量的控制。在实际应用中，有些物质功能是多样的，比如亚硫酸钠既可以是稳定剂，又可以是抗氧化剂，因此可以通过加入具有多种功能的成分来控制辅料用量。

所述的等张调节剂包括但不限于0.9％氯化钠溶液、5％葡萄糖溶液，优选5％葡萄糖溶液。

所述的稳定剂包括但不限于亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、硫脲、维生素C、叔丁基对羟基茴香醚、二丁基苯酚、没食子酸丙酯、生育酚、甲硫氨酸、盐酸半胱氨酸、乙酰半胱氨酸、N-乙酰-DL-甲硫氨酸、抗坏血酸棕榈酸酯、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠中的一种或几种，优选亚硫酸氢钠、维生素C、没食子酸丙酯、抗坏血酸棕榈酸酯，最优选维生素C。

所述的抗氧剂包括但不限于生育酚、维生素E、维生素C、无水亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、叔丁基对羟基茴香醚，优选亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠，维生素E，最优选无水亚硫酸钠。

所述的PH调节剂包括但不限于盐酸、枸橼酸、酒石酸、磷酸、偏磷酸、聚偏磷酸、碳酸、氢氧化钠、氢氧化钾、枸橼酸钠、枸橼酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸胺、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、1，2-己二胺、碳酸钠、酒石酸钠钾、偏磷酸钾、聚偏磷酸钾、偏磷酸钠中的一种或几种，优选盐酸、氢氧化钠、醋酸钠或其任意混合物。

所述的防腐剂包括但不限于苯酚、甲酚、三叔丁醇、苯甲醇、尼泊金中的一种或几种，优选甲酚、苯甲醇、尼泊金，最优选尼泊金。

所述的赋形剂包括但不限于甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、氯化钠、水解明胶、右旋糖酐、蔗糖、甘氨酸、聚乙烯吡咯烷酮等中的一种或几种，优选为甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、甘氨酸或其任意混合物，更优选甘露醇、甘氨酸或其任意混合物，最优选甘露醇。

在本发明中，可以加入增溶剂用于进一步改善谷维素的溶解度。所述增溶剂选自吐温、聚乙二醇十二位羟基硬脂酸酯、羟丙基β环糊精、γ-环糊精、甲基-β环糊精、氨基酸、聚丙基甲基纤维素、聚维酮中的一种和/或一种以上的混合物。所述吐温选自吐温-20，吐温-40，吐温-60，吐温-80，优选为吐温-80。所述氨基酸选自赖氨酸、精氨酸、颉氨酸，优选赖氨酸。本发明所获得的胶束溶液可作为注射液直接注射给药，或者进一步冷冻干燥制成冻干粉针剂，所制成的冻干粉针剂在加入注射用水、葡萄糖溶液或氯化钠溶液复溶后，为澄清状态。

在所述注射液中或冻干粉针冷冻干燥前的溶液中，谷维素的浓度为1mg～100mg/ml，磷脂的浓度为1mg～1000mg/ml，胆汁酸和/或其盐浓度为1mg～500mg/ml。优选的，谷维素的浓度为1mg～60mg/ml，磷脂的浓度为1mg～400mg/ml，胆汁酸和/或其盐浓度为1mg～200mg/ml。

本发明的药物组合物的pH不大于10，优选pH为6-9。

本发明药物组合物可以通过如下制备方法来制备，包括将谷维素、磷脂、胆盐混合、搅拌的步骤，进一步包括将以上混合物制备成注射液的步骤。具体过程如下

①将谷维素、胆汁酸和/或其盐、胆盐溶解于有机溶剂中，搅拌，形成澄清溶液，采用减压蒸馏的方法除去该溶液中的有机溶剂，从而得到本发明组合物的有机相；

②将本发明药物组合物的辅料等溶解于水中，从而得到水相；

③A.注射液：将步骤①的有机相溶解于步骤②的水相中充分搅拌混匀。

B.冻干粉针：按照常规方法将①所得到的有机相溶解于步骤②所得水相中，搅拌混匀，然后分装。例如，将①蒸馏后所得的有机相溶液溶解于水中，在30℃～80℃条件下高速搅拌0.5～1小时，形成澄清溶液，加入pH调节剂调节至pH6～9，分装。在溶液中加入注射用活性碳滤膜精滤、冷冻干燥，得到本发明冻干粉针。

在步骤①中，所述的有机溶剂涵盖可以溶解谷维素、磷脂、胆汁酸和/或其盐的药学上可接受的有机溶剂，包括但不限于乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮中的一种和/或一种以上的混合物。谷维素、磷脂、胆汁酸和/或其盐可以以任意先后顺序或者同时加入到有机溶剂中。可以根据需要，在本步骤的任何分步骤加入多元醇、增溶剂、稳定剂、抗氧化剂等。例如，可以将谷维素溶解于乙酸乙酯中，搅匀后加入磷脂、胆汁酸和/或其盐混合物。还可以是将多元醇先加入有机溶剂中，然后分别加入谷维素、磷脂、胆汁酸和/或其盐、增溶剂溶解于有机溶剂中，混匀搅拌得到本发明药物组合物有机相。在本步骤中，为了提高溶解速度，溶液应处于50～100℃加热搅拌状态。步骤①所用有机溶剂的量并不受到特别限制，以不低于溶解谷维素、磷脂、胆汁酸和/或其盐最小的量即可。

在所述步骤②中，按照常规或者已知的方法制备含有辅料的水溶液。各种辅料可以任意顺序或者同时加入，例如可以将等张调节剂加入水中，然后加入抗氧化剂、稳定剂，搅拌混匀。

在所述步骤③中，按照常规方法将①的有机溶液中有机溶剂挥发以后溶解于步骤②所得水相中，搅拌混匀，然后分装。例如，将①蒸馏后所得有机相溶解于水中，在30℃～80℃条件下高速搅拌0.5～1小时，形成橙黄色溶液，加入pH调节剂调节至pH6～9，分装。

为了进一步改善谷维素的粒径和溶出时加入多元醇可以在步骤①或②中进行。即可以把多元醇加入到谷维素、磷脂、胆汁酸和/或其盐的有机相中，也可以加入到辅料水溶液中。

在上述步骤中，调节pH并不局限于最后进行，在步骤①或者②中预先调节到一定范围同样可以获得本发明组合物。

具体实施方式

下面将通过实施例来说明实现本发明的技术方案，这些实施方式并不用来限制本发明。本领域技术人员根据现有知识对本发明进行等同替换或相应的逻辑改进，属于本发明的范围。在下述实施例中，加入甘露醇等赋形剂是满足制备成冻干剂型的需要。如果在实际应用中，直接使用组合物胶体溶液可以不加入赋形剂。

实施例1

谷维素        10mg

磷脂酰胆碱    50mg

熊去氧胆酸    50mg

甘露醇        50mg

注射用水      至10ml

将谷维素、磷脂酰胆碱、熊去氧胆酸溶解于2ml乙酸乙酯中，加热至60℃搅拌，至充分溶解。采用减压蒸发的方法蒸馏，得到有机相。加入已经溶解了甘露醇的注射用水至全量，60℃下充分搅拌混匀，即可得本发明注射液。用氢氧化钠溶液调节PH到7.0，加入0.05％注射用活性碳搅拌三十分钟，脱碳过滤后，0.22um微孔滤膜进行精滤，分装至西林瓶。

实施例2

谷维素        2mg

大豆磷脂      800mg

磷脂酰胆碱    200mg

牛磺胆酸      200mg

乳糖          80mg

注射用水      至10ml

将谷维素、牛磺胆酸、大豆磷脂、磷脂酰胆碱溶解于5ml乙醇中，加热至80℃搅拌，至充分溶解。采用减压蒸发的方法蒸馏，得到有机相。加注射用水至全量，然后加入乳糖60℃下充分搅拌混匀，即可得本发明注射液。用氢氧化钠溶液调节PH到7.0，加入0.05％注射用活性碳搅拌三十分钟，脱碳过滤后，0.22um微孔滤膜进行精滤，分装至西林瓶。

实施例3

谷维素            10mg

大豆鞘磷脂        60mg

甘氨去氧胆酸钠    100mg

丙二醇            10mg

甘氨酸            20mg

注射用水          至10ml

将谷维素、大豆鞘磷脂、甘氨去氧胆酸钠、丙二醇溶解于7ml二氯甲烷中，加热至80℃搅拌，至充分溶解。采用减压蒸发的方法蒸馏，得到有机相。加入已经溶解了甘氨酸的注射用水至全量，65℃下充分搅拌混匀，即可得本发明注射液。用氢氧化钠溶液调节PH 到7.5，加入0.05％注射用活性碳搅拌三十分钟，脱碳过滤后，0.22um微孔滤膜进行精滤，分装至西林瓶。

实施例4

谷维素          20mg

甘氨胆酸        200mg

氢化蛋黄磷脂    600mg

葡萄糖          100mg

注射用水        至10ml

将谷维素、甘氨胆酸、氢化蛋黄磷脂溶解于8ml乙醇中，加热至75℃搅拌，加热混匀，至充分溶解。采用减压蒸发的方法蒸馏，得到有机相。加溶解了葡萄糖的注射用水至全量，70℃下充分搅拌混匀，即可得本发明注射液。用氢氧化钠溶液调节PH到8.5，加入0.05％注射用活性碳搅拌三十分钟，脱碳过滤后，0.22um微孔滤膜进行精滤，然后分装至西林瓶。

实施例5

谷维素          20mg

甘氨胆酸钠      1000mg

氢化蛋黄磷脂    5000mg

甘露醇          200mg

注射用水        至20ml

将谷维素、甘氨胆酸钠、氢化蛋黄磷脂溶解于15ml乙醇中，加热至75℃搅拌，加热混匀，至充分溶解。采用减压蒸发的方法蒸馏，得到有机相。加入已经溶解了甘露醇的注射用水至全量，70℃下充分搅拌混匀，即可得本发明注射液。用碳酸氢钠溶液调节PH到6.5，加入0.05％注射用活性碳搅拌三十分钟，脱碳过滤后，0.22um微孔滤膜进行精滤，然后分装至西林瓶。

实施例6

谷维素          40mg

甘氨去氧胆酸    300mg

磷脂酰乙醇胺    100mg

磷脂酰丝氨酸    200mg

聚乙二醇-400    100mg

维生素C         2mg

亚硫酸钠        3mg

甘露醇          100mg

注射用水        至10ml

将谷维素、甘氨去氧胆酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸溶解于6ml乙酸乙酯中，加热至80℃搅拌，然后加入维生素C加热混匀，至充分溶解。采用减压蒸发的方法蒸馏，得到有机相。加入已经溶解了亚硫酸钠、聚乙二醇-400、甘露醇的注射用水至全量，60℃下充分搅拌混匀，即可得本发明注射液。加入0.05％注射用活性碳搅拌三十分钟，脱碳过滤后，0.22um微孔滤膜进行精滤，分装至西林瓶。

实施例7

谷维素              18mg

脱氧胆酸            20mg

牛磺鹅去氧胆酸钠    50mg

大豆磷脂            200mg

丙二醇              5mg

丙三醇              20mg

甲基-β环糊精       20mg

乳糖                90mg

注射用水            至10ml

将谷维素、脱氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸钠、大豆磷脂、丙三醇溶解于5ml丙酮中，加热至80℃搅拌，至充分溶解。采用减压蒸发的方法蒸馏，得到有机相。加入已经溶解了甲基-β环糊精、丙二醇、乳糖的注射用水至全量，60℃下充分搅拌混匀，即可得本发明注射液。用氢氧化钠溶液调节PH至7.5，加入0.05％注射用活性碳搅拌三十分钟，脱碳过滤后，0.22um微孔滤膜进行精滤，分装至西林瓶。

实施例8

谷维素          100mg

大豆磷脂        1000mg

甘氨去氧胆酸    200mg

丙三醇          110mg

吐温-80         3mg

赖氨酸          15mg

甘氨酸          200mg

注射用水        至20ml

将谷维素、大豆磷脂、甘氨去氧胆酸、吐温-80、丙三醇溶解于20ml乙酸乙酯中，加热至70℃搅拌，至充分溶解。采用减压蒸发的方法蒸馏，得到有机相。加入已经溶解了赖氨酸、甘氨酸的注射用水至全量，60℃下充分搅拌混匀，即可得本发明注射液。加入0.05％注射用活性碳搅拌三十分钟，脱碳过滤后，0.22um微孔滤膜进行精滤，分装至西林瓶。

实施例9

谷维素         6mg

磷脂酰胆碱     50mg

磷脂酰乙醇胺   50mg

丙三醇         50mg

丙二醇         30mg

牛磺胆酸钠     80mg

赖氨酸         15mg

维生素E        2mg

甘氨酸         30mg

注射用水       至10ml

将谷维素、磷脂酰胆碱、丙三醇、牛磺胆酸钠、磷脂酰乙醇胺、甘氨酸溶解于10ml二氯甲烷中，加热至80℃搅拌，至充分溶解。采用减压蒸发的方法蒸馏，得到有机相。加入已经溶解了维生素E、赖氨酸、丙二醇的注射用水至全量，60℃下充分搅拌混匀，即可得本发明注射液。加入0.05％注射用活性碳搅拌三十分钟，脱碳过滤后，0.22um微孔滤膜进行精滤装至西林瓶。

实施例10

谷维素        2mg

磷脂酰胆碱    20mg

牛磺胆酸      40mg

丙二醇        25mg

亚硫酸氢钠    50mg

甘露醇        10mg

注射用水      至10ml

将谷维素、磷脂酰胆碱、牛磺胆酸、丙二醇溶解于5ml乙酸乙酯中，加热至75℃搅拌，至充分溶解。采用减压蒸发的方法蒸馏，得到有机相。加入已经溶解了甘露醇、亚硫酸氢钠的注射用水至全量，60℃下充分搅拌混匀，然后采用氢氧化钠溶液调节PH为9即可得本发明注射液。加入0.05％注射用活性碳搅拌三十分钟，脱碳过滤后，0.22um微孔滤膜进行精滤，分装至西林瓶。

实施例11

谷维素        15mg

磷脂酰胆碱    45mg

牛磺胆酸      60mg

丙三醇        10mg

葡萄糖        50mg

氯化钠        90mg

维生素E       1mg

注射用水      至10ml

将谷维素、磷脂酰胆碱、丙三醇、牛磺胆酸溶解于3ml乙醇中，加热至70℃搅拌，至充分溶解。采用减压蒸发的方法蒸馏，得到有机相。加入已经溶解了葡萄糖、氯化钠、维生素E的注射用水至全量，60℃下充分搅拌混匀，即可得本发明注射液。加入0.05％注射用活性碳搅拌三十分钟，脱碳过滤后，0.22um微孔滤膜进行精滤，分装至西林瓶。

实施例12

谷维素        30mg

大豆磷脂酰胆碱    150mg

甘氨胆酸钾盐      140mg

丙三醇            10mg

丙二醇            30mg

维生素E           2mg

蔗糖              100mg

注射用水          至10ml

将谷维素、大豆磷脂酰胆碱溶解于10ml二氯甲烷中，60℃下充分搅拌下加入溶解了甘氨胆酸钾盐、丙二醇、丙三醇、维生素E的注射用水。采用减压蒸馏的方法除去溶液中的二氯甲烷，加溶解了蔗糖的注射水至全量，然后加入0.05％注射用活性碳搅拌三十分钟，脱碳过滤后，0.22um微孔滤膜进行精滤，分装至西林瓶。

对比实施例1

谷维素           20mg

磷脂酰胆碱       100mg

注射用水         至10ml

将谷维素、磷脂酰胆碱溶解于乙酸乙酯中，加热至60℃搅拌，至充分溶解。采用减压蒸发的方法蒸馏，得到有机相，加入注射用水至全量，60℃下充分搅拌混匀，结果形成颗粒度很大的乳状物，不澄清。

对比实施例2

谷维素           20mg

脱氧胆酸钠       150mg

注射用水         至10ml

将谷维素、脱氧胆酸钠溶解于乙醇中，加热至70℃搅拌，至充分溶解。采用减压蒸发的方法蒸馏，得到有机相，加入注射用水至全量，60℃下充分搅拌混匀，结果形成颗粒度很大的乳状物，不澄清。

对比实施例3

谷维素          5mg

胆酸            150mg

磷脂            20mg

维生素E         5mg

注射用水        至10ml

将复合物和胆酸加热溶于5mol/L氢氧化钠溶液中，用1mol/L盐酸调PH值至7.0，加入磷脂、维生素E搅拌溶解，加注射用水至全量。形成有很多大颗粒的混悬液，并且在10分钟内药品成份迅速析出。

对比实验例4

谷维素        250mg

脱氧胆酸      2500mg

磷脂          300mg

维生素C       5mg

乙醇          0.25ml

注射用水      至10ml

将谷维素和脱氧胆酸加热溶解于5mol/L氢氧化钠溶液中，加入维生素C搅拌溶解。将磷脂用乙醇加入后溶解，加注射用水至全量。加入0.1％注射用活性炭搅拌三十分钟，脱碳过滤后用0.45um微孔滤膜精滤，装瓶，100摄氏度流通蒸汽30分钟灭菌。

对比实验例5

谷维素        4.5mg

大豆油        30mg

大豆磷脂      11mg

维生素E       0.1mg

甘油          2.5mg

注射用水      至10ml

将大豆油、谷维素加入容器中，将此容器置于油浴中，加热至100℃，搅拌至药物溶解，降温至80℃。然后加入大豆磷脂、维生素，搅拌至磷脂溶解形成均匀油相。将注射用水80ml置于另一容器中，加入甘油于80℃下搅拌溶解形成水相。将油相在搅拌下加入水相中，继续搅拌40分钟形成初乳，用氢氧化钠调节PH至8。加注射用水至100ml，将初乳用高压匀质机或超声探头匀化。所得乳液不澄清，放置约1小时后可见明显沉淀析出。

由上述对比实施例可以看出，现有技术中的方案并没有很好的解决谷维素的溶解和应用问题。

实施例1～12制的溶液澄清度判断方法

依据《中国药典2005年版(二部)》附录IX B方法，将制备的溶液与等量的浊度标准液分别置于配对的比浊用玻璃管中，在浊度标准液制备5分钟后，在暗室内垂直同置于伞棚灯下，照度为1000Lx，从水平方向观察、比较，制备的溶液澄清，不深于1号浊度标准液。

将实施例1～12制的溶液按照下述方法进行冷冻干燥

预冻：制品温度下降至-45℃，保温3小时后即可以进行升华干燥；

升华干燥：升华干燥温度控制在-12℃以下；

再干燥：再干燥阶段最高温度控制在35℃，干燥失重应符合规定；

干燥结束后，箱内压胶塞，出箱锁铝盖，成品检验合格后包装即得。

冷冻干燥后，取实施例1-12产品，加入注射用水或5％葡萄糖溶液复溶。依据《中国药典2005年版(二部)》附录IX B方法，将制备的溶液与等量的浊度标准液分别置于配对的比浊用玻璃管中，在浊度标准液制备5分钟后，在暗室内垂直同置于伞棚灯下，照度为1000Lx，从水平方向观察、比较，制备的溶液澄清，不深于1号浊度标准液。

实施例13稳定性和粒径考察

取实施例1、7制备的注射冻干粉针在于25±2℃，相对湿度60±10％的条件下放置半年，观察其含量、粒径情况，标记为含量1、含量2、粒径1、粒径2，以对比实验例5为对照，观察其含量、粒径，记为含量3、粒径3。记录为下列表格。

表1室温留样观察结果

时间(月)	0	1	2	4	6
						含量1	99.96	99.82	99.42	98.94	98.70
含量2	99.90	99.90	99.89	98.89	98.87
						含量3	99.60	99.24	99.08	98.41	98.38
粒径1	＜20nm	＜20nm	＜20nm	＜20nm	＜20nm
						粒径2	＜15nm	＜15nm	＜15nm	＜15nm	＜15nm
粒径3	543.0nm	547.2nm	548.3nm	560.0nm	554.8nm

由上述结果可知，本发明制备的注射溶液在加速稳定性试验中含量变化非常小，充分说明了本发明组合物制备注射液的稳定性。本发明组合物粒径远远小于现有技术制备的产品，更易于患者吸收。同时上述数据证实在本发明组合物基础上加入多元醇对本发明组合物粒径有明显的改善。

实施例14

取本发明实施例1制备的注射液与对比实验例3和4制备的注射液在室温下进行了粒径、外观、澄清稳定时间检测，所得结果如下表。粒径1、外观1、时间1代表本发明注射液的胶束粒径、外观、澄清稳定时间，粒径2、外观2、时间2，粒径3、外观3、时间3代表对比实验例3和4制备的注射液注射液的粒径、外观、澄清稳定时间。

表2对比实验观察

样品号	1	2	3	4	5
						粒径1(nm)	＜20	＜20	＜20	＜20	＜20
粒径2(nm)	1100	1140	1027	1180	1124
						粒径3(nm)	1307	1332	1316	1374	1295
外观1	澄清	澄清	澄清	澄清	澄清
						外观2	混浊	混浊	混浊	混浊	混浊
外观3	明显颗粒状	明显颗粒状	明显颗粒状	明显颗粒状	明显颗粒状
						时间1	8小时无析出	8小时无析出	8小时无析出	8小时无析出	8小时无析出
时间2	37min明显沉淀	35min明显沉淀	30min明显沉淀	32min明显沉淀	34min明显沉淀
						时间3	15min药品析出	17min药品析出	15min药品析出	20min药品析出	18min药品析出

由上述数据可见，现有技术制备的谷维素注射液更接近于混悬液，并且不能长期稳定放置，非常容易析出，其在工业生产应用上受到巨大限制。从其制备方法看，现有技术需要使用高浓度的氢氧化钠等成分，这会导致对药品和胆酸的破坏，无法保证药品的品质。与之对比，本发明所公开的注射液溶液澄清、粒径小、性质稳定，并且在生产中不会对组合物成分进行破坏。

实施例15刺激性考察

将按照实施例1方法制得的冻干产物进行动物血管的刺激性。方法是取健康、耳缘无损伤家兔30只，按体重随机分为两组，即注射用谷维素试验组和氯化钠注射液对照组。以临床成人拟用剂量为依据设计家兔给药剂量，从家兔左侧耳缘静脉缓慢推注给药，对照组给予等容积氯化钠注射液，连续给予5天。试验结果表明，与氯化钠注射液组相比，静脉推注给予注射用谷维素，给药期间及末次给药24小时后，肉眼观察未见血管及周围组织红肿，组织切片检查可见兔耳静脉结构清晰，个别血管扩张明显，管壁厚薄均匀，内壁平滑，管周无炎性渗出物。表明实验条件下注射用谷维素对家兔耳缘静脉无明显刺激作用。

Claims (43)

1.一种谷维素胶束溶液，包含治疗有效量的谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂，按照以下方法制备而成：

①将谷维素、磷脂、胆汁酸和/或其盐混合、搅拌，形成澄清溶液，减压蒸馏，从而得到有机相；

②以注射用水或蒸馏水作为水相，如还有其它的药学辅料，也加入到水相中；

③将步骤①的有机相溶解于步骤②的水相中充分搅拌混匀。

2.一种冻干粉针剂，包含治疗有效量的谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂，其为权利要求1的胶束溶液冷冻干燥而得。

3.根据权利要求1的谷维素胶束溶液，谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂质量比是1∶1-100∶1-500。

4.根据权利要求2的冻干粉针剂，谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂质量比是1∶1-100∶1-500。

5.根据权利要求3的谷维素胶束溶液，谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂质量比是1∶1-50∶1-100。

6.根据权利要求4的冻干粉针剂，谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂质量比是1∶1-50∶1-100。

7.根据权利要求5的谷维素胶束溶液，谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂质量比是1∶5-40∶5-80。

8.根据权利要求6的冻干粉针剂，谷维素、胆汁酸和/或其盐、磷脂质量比是1∶5-40∶5-80。

9.根据权利要求1的谷维素胶束溶液，其中在所述胶束溶液中，所述谷维素的浓度为1mg～100mg/ml。

10.根据权利要求2的冻干粉针剂，其中在冻干粉针冷冻干燥前的溶液中，所述谷维素的浓度为1mg～100mg/ml。

11.根据权利要求1的谷维素胶束溶液，其中在所述胶束溶液中，所述磷脂的浓度为1mg～1000mg/ml。

12.根据权利要求2的冻干粉针剂，其中在冻干粉针冷冻干燥前的溶液中，所述磷脂的浓度为1mg～1000mg/ml。

13.根据权利要求1的谷维素胶束溶液，其中在所述胶束溶液中，所述胆汁酸和/或其盐的浓度为1mg～500mg/ml。

14.根据权利要求2的冻干粉针剂，其中在冻干粉针冷冻干燥前的溶液中，所述胆汁酸和/或其盐的浓度为1mg～500mg/ml。

15.根据权利要求1的谷维素胶束溶液，所述磷脂选自大豆磷脂、蛋黄磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇的一种和/或其任意混合物。

16.根据权利要求2的冻干粉针剂，所述磷脂选自大豆磷脂、蛋黄磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇的一种和/或其任意混合物。

17.根据权利要求1的谷维素胶束溶液，其中所述磷脂选自大豆鞘磷脂、蛋黄鞘磷脂、氢化大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、二棕榈磷脂酰胆碱、二棕榈磷脂酰乙醇胺、二硬脂磷脂酰胆碱、二棕榈磷脂酰甘油脂、二棕榈磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二亚油酰磷脂酰胆碱、二亚油酸甘油脂磷脂酰胆碱、二亚油酸甘油脂磷脂酰乙醇胺、二亚油酸甘油脂磷脂酰甘油的一种和/或其任意混合物。

18.根据权利要求2的冻干粉针剂，其中所述磷脂选自大豆鞘磷脂、蛋黄鞘磷脂、氢化大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、二棕榈磷脂酰胆碱、二棕榈磷脂酰乙醇胺、二硬脂磷脂酰胆碱、二棕榈磷脂酰甘油脂、二棕榈磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二亚油酰磷脂酰胆碱、二亚油酸甘油脂磷脂酰胆碱、二亚油酸甘油脂磷脂酰乙醇胺、二亚油酸甘油脂磷脂酰甘油的一种和/或其任意混合物。

19.根据权利要求1的谷维素胶束溶液，所述胆汁酸选自游离胆汁酸、结合胆汁酸或二者的混合物；胆汁酸盐是胆汁酸成盐后的产物；其中所述结合胆汁酸为游离胆汁酸中的羧基与含有氨基的化合物中的氨基形成酰胺键后的产物。

20.根据权利要求2的冻干粉针剂，所述胆汁酸选自游离胆汁酸、结合胆汁酸或二者的混合物；胆汁酸盐是胆汁酸成盐后的产物；其中所述结合胆汁酸为游离胆汁酸中的羧基与含有氨基的化合物中的氨基形成酰胺键后的产物。

21.根据权利要求19的谷维素胶束溶液，其中的游离胆汁酸为胆酸、石胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸或其混合物。

22.根据权利要求20的冻干粉针剂，其中的游离胆汁酸为胆酸、石胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸或其混合物。

23.根据权利要求19的谷维素胶束溶液，其中的游离胆汁酸为胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸或其混合物；其中的结合胆汁酸为甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、甘氨猪去氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸、牛磺猪去氧胆酸或其混合物。

24.根据权利要求20的冻干粉针剂，其中的游离胆汁酸为胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸或其混合物；其中的结合胆汁酸为甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、甘氨猪去氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸、牛磺猪去氧胆酸或其混合物。

25.根据权利要求19的谷维素胶束溶液，其中的胆汁酸盐为胆汁酸的钾盐、钠盐、钙盐、镁盐、锌盐、硒盐、铁盐或其混合物。

26.根据权利要求20的冻干粉针剂，其中的胆汁酸盐为胆汁酸的钾盐、钠盐、钙盐、镁盐、锌盐、硒盐、铁盐或其混合物。

27.根据权利要求1的谷维素胶束溶液，还包含有多元醇。

28.根据权利要求2的冻干粉针剂，还包含有多元醇。

29.根据权利要求27的谷维素胶束溶液，所述多元醇为乙二醇、丙二醇、丙三醇或其任意混合物。

30.根据权利要求28的冻干粉针剂，所述多元醇为乙二醇、丙二醇、丙三醇或其任意混合物。

31.根据权利要求1的谷维素胶束溶液，还包含有聚乙二醇。

32.根据权利要求2的冻干粉针剂，还包含有聚乙二醇。

33.根据权利要求31的谷维素胶束溶液，所述聚乙二醇分子量为200-10000。

34.根据权利要求32的冻干粉针剂，所述聚乙二醇分子量为200-10000。

35.根据权利要求1的谷维素胶束溶液，还包含增溶剂，所述增溶剂选自吐温、聚乙二醇十二位羟基硬脂酸酯、羟丙基β环糊精、γ-环糊精、甲基-β环糊精、氨基酸、聚丙基甲基纤维素、聚维酮或其混合物。

36.根据权利要求2的冻干粉针剂，还包含增溶剂，所述增溶剂选自吐温、聚乙二醇十二位羟基硬脂酸酯、羟丙基β环糊精、γ-环糊精、甲基-β环糊精、氨基酸、聚丙基甲基纤维素、聚维酮或其混合物。

37.根据权利要求35的胶束溶液，当存在增溶剂时，增溶剂的量为权利要求1所述的磷脂、胆汁酸和/或其盐质量之和的0～2倍，并且不为0。

38.根据权利要求36的冻干粉针剂，当存在增溶剂时，增溶剂的量为权利要求1所述的磷脂、胆汁酸和/或其盐质量之和的0～2倍，并且不为0。

39.根据权利要求1的谷维素胶束溶液，还包含药学上可以接受的辅料，所述的辅料包括等张调节剂、稳定剂、抗氧剂、pH调节剂、防腐剂、赋形剂中的一种或其混合物。

40.根据权利要求2的冻干粉针剂，还包含药学上可以接受的辅料，所述的辅料包括等张调节剂、稳定剂、抗氧剂、pH调节剂、防腐剂、赋形剂中的一种或其混合物。

41.权利要求1所述的谷维素胶束溶液的制备方法，包括以下步骤：

①将谷维素、磷脂、胆汁酸和/或其盐溶解于有机溶剂中，搅拌，形成澄清溶液，采用减压蒸馏的方式除去该溶液中的有机溶剂，从而得到有机相；

②以注射用水或蒸馏水作为水相，如还有其它的药学辅料，也加入到水相中；

③将步骤①的有机相溶解于步骤②的水相中充分搅拌混匀。

42.权利要求2所述的冻干粉针剂的制备方法，包括以下步骤：

①将谷维素、磷脂、胆汁酸和/或其盐溶解于有机溶剂中，搅拌，形成澄清溶液，采用减压蒸馏的方式除去该溶液中的有机溶剂，从而得到有机相；

②以注射用水或蒸馏水作为水相，如还有其它的药学辅料，也加入到水相中；

③将步骤①的有机相溶解于步骤②的水相中充分搅拌混匀；

④将步骤③的组合物冷冻干燥。

43.根据权利要求41或42的制备方法，有机溶剂选自乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮或其混合物。