CN101473803A - 一种全天候诱导华贵栉孔扇贝快速排卵的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及贝类催产技术，涉及一种诱导华贵栉孔扇贝雌性快速高效排卵的简便方法。其步骤为：挑选健康、性腺发育良好的华贵栉孔扇贝雌性个体为种贝并清洁种贝。种贝不阴干或至多阴干10分钟，用微量注射器向其卵巢内注射浓度为0.02－1mM的5－羟色胺溶液，注射剂量为0.1－0.5ml/枚种贝，注射并立即将种贝放入盛有砂滤海水的容器中待产。本发明可全天候对华贵栉孔扇贝雌性个体进行催产，具有快速高效、操作简便、应用广泛、成本低廉、容易推广等优点。
Description
技术领域：
本发明涉及贝类催产技术，具体地说是一种全天候诱导华贵栉孔扇贝快速排卵的方法。
背景技术：
华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis Reeve)为暖水性海产双壳类，属软体动物门(Mollusca)、瓣鳃纲(Lamellibranchia)、珍珠贝目(Pterioida)、扇贝科(Pectinidae)，自然分布于我国分布于广东、广西、海南等热带海域以及日本、越南、印度尼西亚等地(齐钟彦，1998；蔡英亚等，2006)。华贵栉孔扇贝以营养丰富、味道鲜美、肉质细嫩而著称。其闭壳肌干制品俗称“干贝”，是著名的海产八珍之一。
华贵栉孔扇贝个体较大，1龄贝壳长60.6mm、壳高64.5mm、壳宽22.2mm，2龄贝壳长113.9mm、壳高116.2mm、壳宽34.0mm。左壳较凸、右壳较平。右壳前耳下方具有明显的足丝孔及数枚细栉齿。壳表具有23-24天等粗的放射肋，肋上有翘起的小鳞片。壳色具多态性，有橙黄色、橙褐色、褐色、紫褐色、白色等。足丝细丝状、较发达。华贵栉孔扇贝多栖息在百米以内的浅海底，适温8～32℃，以18～25℃最适，适盐为23～34。以足丝附着于岩礁石块或砂砾碎壳上，营固着生活，以浮游植物和有机碎屑为食。
华贵栉孔扇贝雌雄异体，雄性生殖腺成熟时为乳白色，雌性生殖腺成熟时为桔黄色，精子和卵子进入肾腔后，由外肾孔排入外套腔内，再靠水流作用排出体外，行体外受精。繁殖期在5～10月间、可多次性成熟、产卵、排精。华贵栉孔扇贝可产卵300～1500万粒，卵子直径约62微米。水温在26～29℃条件下，受精卵约经过20小时，发育进入D型幼虫期；约经过9～10天发育成到眼点幼虫；第12～14天附着变态，贝壳大小为230×190μm；1龄贝个体较大者可达80mm；10月龄可达性成熟；寿命可达2年以上。
华贵栉孔扇贝也是一种优良的海水养殖贝类，具有生长快、产量高、养殖周期短、经济效益高等特点。自上世纪七十年代末以来，华贵栉孔扇贝在我国南方开始人工养殖，八十年代中后期就发展成为南方沿海重要的海水养殖种类之一。然而，近年来，由于养殖大规模死亡时有爆发，出柱率小、产量下降，商品价格下降、产值降低等问题，我国华贵栉孔扇贝养殖业遭遇严重挫折。抗逆、高产、高值良种的缺乏以及优质健康苗种的供应不足是制约我国南方华贵栉孔扇贝养殖业养殖进一步发展的瓶颈。因此，加强华贵栉孔扇贝良种培育和优质健康苗种繁育，不仅对发展我国南方海水养殖业具有重要作用，而且对华贵栉孔扇贝种质资源的保护与可持续利用也具有重要意义。
目前，国内外在华贵栉孔扇贝人工育苗生产在翁德全等，《湛江水产学 院学报》1980年第2期：44-49；张丹，《海洋渔业》1982年第2期：67-70；金启曾等，《热带海洋》1991年第3期：8-15；黄富钦，《渔业现代化》2004年第3期：12-14等文献有作介绍，科学实验在蔡友义等，《福建水产》1986第2期：26-32；孙长森等，《海洋与湖沼》2007年第3期：227-233；张善发等，《水产科学》2008年第4期等文献有介绍，从华贵栉孔扇贝中获得卵子一般采用：亲贝阴干(1～2小时)、日光/紫外照射(2～3小时)、变温刺激(升温3～5℃)、添加精液相结合的诱导方法。这种方法有几个缺点：1、只能够在天气晴朗、阳光灿烂、气温较高的日子催产，受气候条件制约；2、变温、紫外都可能损伤卵子；3、单个个体很难催产，不能建立育种家系；4、必须先获得精液，因此受制于精液；5、不能保证所有个体都能够排卵；6、费时费力，操作麻烦。而华贵栉孔扇贝无论是育苗生产，还是科学实验，及时、快速地获得大量的卵子是非常重要的。到目前为止，尚未见到任何有关全天候诱导华贵栉孔扇贝快速产卵方法的报道。5-羟色胺诱导贝类产卵仅见于国外在碎浪蛤蜊Spisula solidissima(Hirai等，J.Exp.Zoology，1988，45：318-321)、热带扇贝Pecten ziczac(Velez等，Aquaculture，1990，84：307-313)等种类上。他们药物浓为0.1-6M，剂量为0.4ml/枚种贝，诱导排放率为30％-50％，注射24小时后，亲贝死亡率为60％-90％，还不适宜于实际应用存。
发明内容：
本发明的目的是提供一种全天候诱导华贵栉孔扇贝快速产卵的方法。
本发明的技术方案是：利用化学药物5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)全天候诱导华贵栉孔扇贝快速高效产卵，其操作步骤为：
1)种贝挑选和处理：挑选1龄或2龄健康、性腺发育良好的雌性个体为种贝，清除种贝壳表附着的生物和污物，并用海水清洗干净。
2)催产处理：种贝不阴干或至多阴干10分钟，用微量注射器向种贝的卵巢内注射5-羟色胺溶液，溶液浓度为0.02—1mM，注射剂量为0.1—0.5ml/枚种贝，注射后，立即将种贝放入盛有砂滤海水的容器中，待其产卵。
本发明优选注射5-羟色胺溶液的浓度为0.5mM，注射剂量为0.1ml/枚种贝
本发明具有如下优点：
1、能全天候诱导华贵栉孔扇贝产卵。常规催产受到气候条件制约，只能在风和日丽、气温较高的日子中进行。由于本发明是利用化学药物进行诱导催产，可在室内、室外，白天、晚上，晴天、阴天等全天候条件下进行，摆脱了气候条件制约，增加了科学研究和生产操作的灵活性。
2、卵子质量好。由于本发明使用的砂滤海水没有经过变温处理、没有受到日晒或紫外线照射，不会对卵子造成损伤；更为重要的是本发明使用的化学药物5-HT具有促熟双壳贝类卵子的作用。因此，应用本发明获得的卵子质量好：大小均匀、色泽较深、性状浑圆。
3、催产快速、高效。应用本发明可在30分钟内诱导95％以上的种贝排卵，大大缩短了催产时间，而且排卵率高，显著地提高了催产效率。
4、应用广泛。既能够应用于遗传育种的家系建立等科学研究方面，也能够应用于养殖企业的苗种培育生产。
5、操作简便、成本低廉、容易推广应用。本发明操作比较简便，仅需要给种贝的性腺注射一次化学药物，不必对种贝进行阴干、变温、紫外照射、精液诱导等处理，操作简便；仅用到一支或几支微量注射器，不需要使用特殊的仪器设备，而且每枚种贝所需药物成本只有人民币0.08元，如一个育苗场一次催产500只种贝，药物成本只需人民币40.00元，成本低廉。由于本发明操作简单、成本低廉，因此容易推广应用。
具体实施方式：
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1：晴天室外诱导华贵栉孔扇贝2龄贝单个个体快速排卵
种贝2龄，壳长77.5mm、壳高84.5mm、壳宽26.3mm、活体重74.6g。通过性腺内注射化学药物5-HT诱导华贵栉孔扇贝快速高效排卵，其操作步骤为：
(1)种贝的挑选和处理：挑选健康、性腺发育良好(饱满、桔黄色)的雌性个体做种贝，共选出10枚、壳色为橙褐色。用牡蛎刀清除种贝壳表附着的牡蛎、藤壶、石灰虫等生物和污物，再用自然海水清洗干净。
(2)催产处理：首先，阴干种贝10分钟；然后，用微量注射器向种贝的卵巢内注射5-HT溶液，溶液浓度为0.05mM，注射剂量为0.1ml/枚种贝。接着，立即将每枚种贝单独放入1只50L的白色塑料桶中待产。桶中盛有20L的砂滤海水，自然水温25℃，盐度31，催产过程中不充气。种贝没有受到变温处理，海水没有经过日晒或紫外线照射，也没有添加精液。
3)催产结果：种贝注射5-HT溶液13分钟后开始排卵，30分钟之内(平均时间28.5分钟)全部排卵，排放率为100％；镜检观察卵子质量好：大小均匀、色泽较深、性状浑圆。24小时后种贝无死亡。
本实施例说明，在晴天室外，不通过变温、日晒或紫外照射及添加精液，仅利用短时间阴干和性腺内注射5-HT就能够诱导华贵栉孔扇贝2龄贝快速高效排卵。
实施例2：晴天室外诱导华贵栉孔扇贝1龄贝单个个体快速排卵
与实施例1不同之处在于：种贝为1龄贝，壳长65.2mm、壳高70.0mm、壳宽22.7mm、活体重43.0g。通过性腺内注射化学药物5-HT诱导华贵栉孔扇贝快速高效排卵，其操作步骤为：
(1)种贝的挑选和处理：同实施例1的操作步骤(1)，种贝为32枚、壳色为橙褐色。
(2)催产处理：同实施例1的操作步骤(2)，但自然水温为26℃。
(3)催产结果：种贝注射5-HT溶液10分钟后开始排卵，30分钟之内(平均时间21.5分钟)全部排卵，排放率为100％；镜检观察卵子质量好：大小均匀、色泽较深、性状浑圆。24小时后种贝无死亡。
本实施例说明，在晴天室外，不通过变温、日晒或紫外照射及添加精液，仅利用短时间阴干和性腺内注射5-HT就能够诱导华贵栉孔扇贝1龄贝快速高效排卵。
实施例3：阴天室内诱导贵栉孔扇贝1龄贝单个个体快速排卵
与实施例1、2不同之处在于：种贝不阴干、阴天室内诱导。种贝1龄，壳长67.6mm，壳高71.8mm，壳宽23.5mm，活体重48.4g。通过性腺内注射化学药物5-HT诱导华贵栉孔扇贝快速高效排卵，其操作步骤为：
(1)种贝的挑选和处理：同实施例1的操作步骤(1)，种贝40枚、壳色为橙色。
(2)催产处理：同实施例1的操作步骤(2)，但种贝不阴干，阴天室内催产，自然水温为25.8℃。
(3)催产结果：种贝注射5-HT溶液10分钟后开始排卵，30分钟内(平均时间为27.4分钟)96％的个体排卵；镜检观察卵子质量好：大小均匀、色泽较深、性状浑圆。24小时后种贝无死亡。
本实施例说明，在阴天室内，亲贝不阴干、不通过变温、日晒或紫外照射及添加精液，仅利用性腺内注射5-HT也能够诱导华贵栉孔扇贝1龄贝快速高效排卵。
实施例4：晴天室内诱导贵栉孔扇贝1龄贝单个个体快速排卵
与实施例1、2不同之处在于：室内诱导、种贝不阴干。种贝1龄，壳长64.4mm、壳高68.6mm、壳宽22.5mm、活体重42.5g；通过性腺内注射化学药物5-HT诱导华贵栉孔扇贝快速高效排卵，其操作步骤为：
(1)种贝的挑选和处理：同实施例1的操作步骤(1)，种贝33枚、壳色为褐色。
(2)催产处理：同实施例1的操作步骤(2)，但种贝不阴干且室内催产，自然水温为26.5℃。
(3)催产结果：种贝注射5-HT溶液10分钟后开始排卵，30分钟内(平均时间为24.4分钟)97％的个体排卵；镜检观察卵子质量好：大小均匀、色泽较深、性状浑圆。24小时后种贝无死亡。
本实施例说明，在晴天室内，亲贝不阴干、不通过变温、日晒或紫外照射及添加精液，仅利用性腺内注射5-HT也能够诱导华贵栉孔扇贝1龄贝快速高效排卵。
实施例5：晴天室内诱导贵栉孔扇贝多个个体排卵
与实施例1、2、3、4不同之处在于：室内诱导、多个个体排卵(育苗生产)。种贝1龄贝与2龄贝混合。通过性腺内注射化学药物5-HT诱导华贵栉孔扇贝快速高效排卵，其操作步骤为：
(1)种贝的挑选和处理：同实施例1的操作步骤(1)，种贝有386枚、壳色有橙色、橙褐色和褐色。
(2)催产处理：首先，阴干种贝10分钟；然后，用微量注射器向种贝的卵巢内注射5-HT溶液，溶液浓度为0.5mM，注射剂量为0.1ml/枚种贝。注射后将所有种贝放入室内的一个水泥池中待产。水泥池体积40m3，水深30cm，自然海水，水温24.5℃，盐度31。海水没有受到变温处理、没有经过日晒或紫外线照射、也没有添加精液。
(3)催产结果：种贝注射5-HT溶液8分钟后开始排卵，排放率为98％；镜检观察卵子质量好：大小均匀、色泽较深、性状浑圆。24小时后种贝无死亡。
本实施例说明，在晴天室内，不通过变温、日晒或紫外照射及添加精液，仅利用性腺内注射5-HT也能够诱导华贵栉孔扇贝多个个体快速高效排卵。
实施例6：阴天室内诱导贵栉孔扇贝多个个体排卵
与实施例5不同之处在于：阴天诱导、种贝不阴干。种贝1龄贝与2龄贝混合。通过性腺内注射化学药物5-HT诱导华贵栉孔扇贝快速高效排卵，其操作步骤为：
(1)种贝的挑选和处理：同实施例1的操作步骤(1)，种贝422枚、壳色有橙色、橙褐色和褐色。
(2)催产处理：同实施例5，但种贝不阴干、阴天诱导，海水温度23.8℃。
(3)催产结果：种贝注射5-HT溶液10分钟后开始排卵，排放率为96％；镜检观察卵子质量好：大小均匀、色泽较深、性状浑圆。24小时后种贝无死亡。
本实施例说明，在阴天室内、不通过变温、日晒或紫外照射及添加精液，仅利用性腺内注射5-HT也能够诱导华贵栉孔扇贝多个个体快速高效排卵。
实施例7：低浓度药物诱导贵栉孔扇贝个体排卵
与实施例1、2、3、4、5、6不同之处在于：药物浓度、剂量不同。种贝1龄，壳长63.8mm、壳高67.6mm、壳宽22.6mm、活体重43.7g；通过性腺内注射化学药物5-HT，其操作步骤为：
(1)种贝的挑选和处理：同实施例1的操作步骤(1)，种贝16枚、壳色为橙褐色。
(2)催产处理：同实施例1，但5-HT浓度为0.02mM，注射剂量为0.5ml/枚种贝，海水温度25.8℃。
(3)催产结果：种贝注射5-HT溶液40分钟后才开始排卵，排放率为37.5％；镜检观察卵子质量好：大小均匀、色泽较深、性状浑圆。24小时后种贝无死亡。
本实施例说明，利用低浓度的5-HT也能够诱导华贵栉孔扇贝排卵，但排卵时间延长，排放率低。
实施例8：高浓度药物诱导贵栉孔扇贝个体排卵
与与实施例1、2、3、4、5、6、7不同之处在于：药物浓度、剂量不同。种贝1龄，壳长64.6mm、壳高68.8mm、壳宽22.7mm、活体重44.5g；通过性腺内注射化学药物5-HT，其操作步骤为：
(1)种贝的挑选和处理：同实施例1的操作步骤(1)，种贝18枚、壳色为橙褐色。
(2)催产处理：同实施例1，但5-HT浓度为1mM，注射剂量为0.1ml/枚种贝，海水温度25.6℃。
(3)催产结果：种贝注射5-HT溶液10分钟后开始排卵，排放率为56％；镜检观察卵子质量好：大小均匀、色泽较深、性状浑圆。24小时后种贝死亡率达67％。
本实施例说明，利用高浓度的5-HT也能够诱导华贵栉孔扇贝排卵，但排放率低、且亲贝死亡率高。
另外，凡通过人工促熟的华贵栉孔扇贝雌性种贝催产也为本发明所述创意思想之所及。
Claims (2)
1.一种全天候诱导华贵栉孔扇贝快速排卵的方法，其操作步骤为：
1)种贝挑选和处理：挑选1龄或2龄健康、性腺发育良好的雌性个体为种贝，清除种贝壳表附着的生物和污物，并用海水清洗干净。
2)催产处理：种贝不阴干或至多阴干10分钟，用微量注射器向种贝的卵巢内注射5-羟色胺溶液，溶液浓度为0.02—1mM，注射剂量为0.1—0.5m1/枚种贝，注射后，立即将种贝放入盛有砂滤海水的容器中，待其产卵。
2.根据权利要求1所述诱导华贵栉孔扇贝快速排卵的方法，其中5-羟色胺溶液浓度为0.5mM，注射剂量为0.1ml/枚种贝。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105961242A (zh) * | 2016-05-11 | 2016-09-28 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种人工诱导砗磲排放配子的方法 |
| CN107173287A (zh) * | 2016-07-03 | 2017-09-19 | 李育培 | 一种砗磲的人工催产方法 |
| CN116391654A (zh) * | 2023-03-30 | 2023-07-07 | 中国海洋大学 | 一种雌雄同体扇贝规模化杂交育种方法 |
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2009
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