CN101466683B - Akt(蛋白激酶b)抑制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及作为Akt抑制剂的4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物，其是抗肿瘤药和/或抗病毒药，本发明还涉及包含这些化合物的组合物以及应用这些化合物的方法。
Description
本发明提供了作为Akt抑制剂的化合物、包含这些化合物的组合物以及应用这些化合物的方法。
发明背景
蛋白激酶参与信号转导途径，在正常和病理条件下把生长因子、激素和其它细胞调节分子与细胞生长、存活和代谢联系起来。一种此类蛋白激酶(蛋白激酶B(也称为Akt))是丝氨酸/苏氨酸激酶，其在促进广泛的细胞类型的增殖和存活，从而保护细胞免于凋亡(编程性细胞死亡)中具有重要作用。
许多蛋白激酶和磷酸酶调节Akt活性。例如，Akt的活化由磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)介导，引发第二信使磷脂与Akt的血小板白细胞C激酶底物同系(PH)结合域的结合。该结合将Akt锚定至质膜并且引起酶的磷酸化和活化。PI3-K的催化亚单位p110α的扩增或者PI3-K调节亚单位p85α的突变在多种类型的人类癌症中引起Akt的活化。最近的研究也已经证明PI3-K/AKT途径在多种病毒的生命循环中的作用。
WO 01/91754关于蛋白激酶抑制剂。WO 2005/011697涉及蛋白激酶A和B抑制剂。WO 2005/054202关于AKT抑制剂。
由于在细胞存活的调节中的重要作用，Akt为有效治疗多种障碍、特别是癌症和病毒感染提供了新的治疗靶标。但是，此类治疗需要开发有效的、选择性的、生物可利用的Akt抑制剂。选择性Akt抑制剂成为了需要。因此，本发明提供了具有增加的有效性、选择性和/或生物可利用性的新的Akt抑制剂，包含这些化合物的组合物以及应用这些化合物的方法。
另外，包含新的Akt抑制剂的药物组合物当必须稀释或在溶液中时，其必须没有沉淀以使其传递至患者。本发明提供了在没有此类沉淀的特别pH范围内的包含新的Akt抑制剂的药物组合物。
发明概述
本发明提供了4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物。
本发明还提供了4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐。
本发明进一步提供了4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物。
本发明还提供了用作药物的4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物，包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物。
另外，本发明提供了4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物、包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物在制备用于治疗多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、黑素瘤或前列腺肿瘤、乳腺肿瘤、卵巢肿瘤、原发性胃肿瘤、肠型肿瘤、子宫内膜肿瘤、甲状腺肿瘤、胰腺肿瘤、肺肿瘤或膀胱肿瘤的药物中的用途。
本发明还提供了4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物、包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物在制备用于治疗多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤或前列腺肿瘤、乳腺肿瘤或卵巢肿瘤的药物中的用途。
本发明还提供了4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物、包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物在制备用于治疗非小细胞肺癌或成胶质细胞瘤的药物中的用途。
本发明进一步提供了4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物、包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物在制备用于治疗丙型肝炎、风疹、人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎或人类巨细胞病毒(HCMV)的药物中的用途。
另外，本发明提供了4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物、包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物，其用于治疗多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、黑素瘤或前列腺肿瘤、乳腺肿瘤、卵巢肿瘤、原发性胃肿瘤、肠型肿瘤、子宫内膜肿瘤、甲状腺肿瘤、胰腺肿瘤、肺肿瘤或膀胱肿瘤。
本发明还提供了4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物、包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物，其用于治疗多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤或前列腺肿瘤、乳腺肿瘤或卵巢肿瘤。
本发明还提供了4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物、包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物，其用于治疗非小细胞肺癌或成胶质细胞瘤。
本发明进一步提供了4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物、包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物，其用于治疗丙型肝炎、风疹、人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎或人类巨细胞病毒(HCMV)。
本发明还提供了在需要的患者中治疗多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、黑素瘤或前列腺肿瘤、乳腺肿瘤、卵巢肿瘤、原发性胃肿瘤、肠型肿瘤、子宫内膜肿瘤、甲状腺肿瘤、胰腺肿瘤、肺肿瘤或膀胱肿瘤的方法，该方法包括施用有效量的4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物、包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物。
本发明还提供了在需要的患者中治疗多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤或前列腺肿瘤、乳腺肿瘤或卵巢肿瘤的方法，该方法包括施用有效量的4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物、包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物。
本发明还提供了在需要的患者中治疗非小细胞肺癌或成胶质细胞瘤的方法，该方法包括施用有效量的4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物、包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物。
本发明进一步提供了在需要的患者中治疗丙型肝炎、风疹、人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎或人类巨细胞病毒(HCMV)的方法，该方法包括施用有效量的4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物、包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物。
本发明还提供了药物组合物，该药物组合物包含4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物、包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物以及可药用载体、稀释剂或赋形剂。
本发明还提供了冻干的药物组合物，该药物组合物包含4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物、包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物以及可药用载体、稀释剂或赋形剂，其中当用水稀释剂稀释时所述组合物的pH小于4.2并且大于2.0、小于3.2并且大于2.0或者小于2.8并且大于2.0。
本发明还提供了在溶液中的药物组合物，该药物组合物包含4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或者化合物或其盐的水合物、包括4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐或4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物以及可药用载体、稀释剂或赋形剂，其中所述组合物的pH小于4.2并且大于2.0、小于3.2并且大于2.0或者小于2.8并且大于2.0。
本发明进一步提供了结晶形状的4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物，其具有强峰在2θ＝4.9、14.8和10.2处的X-射线粉末衍射图。
本发明还提供了4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或其水合物。
发明详述
本发明化合物是Akt抑制剂并且被相信用于治疗与Akt活性有关的障碍。因此，本发明化合物是抗肿瘤药或抗病毒药。
本发明化合物用于治疗表现PTEN缺陷的肿瘤、具有失调的PI3激酶活性的肿瘤或表现Akt活性升高的肿瘤。Akt抑制剂被相信用于治疗多发性骨髓瘤(Hsu等人，Blood(2001)98(9)2853-2855)；非小细胞肺癌(Balsara，Carcinogenesis(2004)25(11)2053-2059)；成胶质细胞瘤(Koul等人，Mol.Cancer Ther.(2006)5：637-644)；神经母细胞瘤(Li等人，Cancer Res.(2005)65(6)，2070-2075)；黑素瘤(Dai等人，J.of Clin.Oncology(2005)23(7)，1473-1482)和前列腺肿瘤(Majumder等人，Oncogene(2005)24，7465-7474)；乳腺肿瘤(Tokunaga等人，J.of Clin.Oncology(会议摘要)(2005)23(16S)，9500)；卵巢肿瘤(Cheung等人，PNAS(1992)89，9267-9271；Yuan等人(2000)；Hu等人(2000))；原发性胃肿瘤或肠型肿瘤(Ang等人，CancerLett.(2005)225(1)，53-59)；子宫内膜肿瘤(Jin等人，British J.of Cancer(2004)911808-1812)；甲状腺肿瘤(Ringel等人，Cancer Res.(2001)61(16)，6105-6111；De Vita等人，Cancer Res.(2000)60，916-3920)；胰腺肿瘤(Schliemen等人，Brit.J.of Cancer(2003)89，110-2115)；肺肿瘤(Massion等人，Am.J.Resp.Crit.Care Med.(2004)170，088-1094)；或膀胱肿瘤(Rieger-Christ等人，Oncogene(2004)23(27)，4745-4753)。Akt抑制剂还被相信用于治疗病毒，例如丙型肝炎和丙型肝炎的NS5A(Mannova等人，J.Virol.(2005)79(14)，8742-8749；He等人(2002))；风疹(Cooray等人，VirologyJ.(2005)2(1)，1-12)；人类免疫缺陷病毒(HIV)的Tat蛋白(Borgatti等人(1997))；乙型肝炎的蛋白X(Lee等人(2001))，或人类巨细胞病毒(HCMV)(Johnson等人(2001))。
4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚形成可药用酸加成盐，例如通常用于药物化学中的生理学上可接受的盐。此类盐也是本发明的部分。可药用盐和制备它们的通用方法是本领域众所周知的。参见例如P.Stahl等人，Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection and Use(药用盐手册：性质、筛选和应用)，(VCHA/Wiley-VCH，2002)；S.M.Berge等人，“Pharmaceutical Salts(药用盐)”Journal of Pharmaceutical Sciences，第66卷，第1期1977年1月。
4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚的优选盐包括一盐酸盐和二盐酸盐。
本文描述的中间体可以形成盐。
除了盐，本发明化合物和本文描述的中间体可以形成水合物和可药用盐的水合物。
优选的化合物是4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚。另一个优选的化合物是4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐。更优选的化合物是4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物。
本文所用的术语“患者”指的是患有一种或多种与Akt活性升高有关的障碍的哺乳动物。应当理解的是，最优选的患者是人类。还应当理解的是，本发明特别涉及哺乳动物Akt/PKB的抑制。
术语“治疗”指的是包括以下作用：例如降低和/或抑制肿瘤生长，Akt1、Akt2和/或Akt3的扩增和/或过表达，细胞增殖和存活和/或病毒复制。
本文所用的术语“有效量”指的是将Akt抑制到提供药理作用的程度的量。
本发明还提供了药物组合物，该药物组合物包含4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐或其水合物以及可药用载体、稀释剂或赋形剂。本发明的药物组合物包括稀释前的形式(例如冻干形式)和稀释后的形式(例如准备施用于患者的形式)。这些药物组合物的pH为小于约4.2至大于约2.0。更优选的是，pH为小于约3.2至大于约2.0。最优选的pH为小于约2.8至大于约2.0。“可药用载体、稀释剂或赋形剂”是本领域通常接受的用于将生物活性剂传递至患者、例如哺乳动物、优选人类的介质。此类载体、稀释剂或赋形剂通常是根据在本领域普通技术人员确定或说明的范围内的多种因素配制的。这些包括但不限于：配制的活性剂的类型和性质；被施用包含试剂的组合物的个体；组合物预期的施用途径和靶向的治疗适应证。可药用载体和赋形剂包括水和非水液体介质以及多种固体和半固体剂型。此类载体、稀释剂或赋形剂除了活性剂外还可以包括本领域的多种不同的成分和添加剂，制剂中包含此种添加成分是由于多种原因，例如稳定活性试剂，这是本领域普通技术人员众所周知的。适合的可药用载体、稀释剂或赋形剂和在它们的选择中涉及的因素的描述可以在多种容易获得的来源中找到，参见例如Remington：The Science andPractice of Pharmacy(雷明顿：药学科学和实践)(A.Gennaro等人编，第19版，Mack Publishing Co.，1995)。
本发明化合物可以以包含常规的无毒可药用载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物的剂量单位制剂全身施用，例如静脉内(例如通过大丸剂或输液)施用。
对于4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚的药物组合物，活性成分通常是以基于组合物总重量的约0.5至95％重量的量存在。可以应用适合的包衣以提高适口性或延缓吸收。
用于在患者中治疗本文描述的障碍的本发明化合物的治疗有效量可以通过本领域的普通技术人员已知的多种方式确定。但是，应当理解的是，任何特别患者的特别剂量水平将取决于多种因素，包括所应用的特别化合物的活性、年龄、体重、一般健康、性别、饮食、施用时间、施用途径和排泄速率、药物组合以及特别疾病的严重程度。剂量的频率也可以取决于所应用的化合物和治疗的特别疾病而不同。例如，典型的日剂量可以包含约1mg至1g的活性成分。
除了文献中已知的或在试验过程中示例的其它标准制备外，也可以应用本文提供的信息制备本发明化合物。
除非另外指出，本文中应用的术语和缩略语具有它们常规的含义。例如“LC”指的是液相色谱；“dppb”指的是双(二苯基膦基)丁烷；Pd(OAc)2指的是乙酸钯；“DMF”指的是N，N-二甲基甲酰胺；“DMSO”指的是二甲亚砜；“Et2O”指的是乙醚，“EtOAc”指的是乙酸乙酯；“TFA”指的是三氟乙酸；MeOH指的是甲醇。
制备
制备1
2-[7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-磺酰基]-乙基胺二盐酸盐
将{2-[7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-磺酰基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(11.00g，24.85mmol)的无水MeOH(150mL)浆液用在二噁烷(350mL)中的4N HCl处理。将产生的反应混合物在室温下搅拌过夜，然后真空浓缩至1/2体积并且用过量的EtOAc处理，引起黄色固体沉淀。通过在N2气氛下真空过滤回收产生的固体；用EtOAc洗涤并且真空干燥(在N2气氛下)得到标题化合物(10.23g，99％产率)，为黄色固体：MS(ES)：m/z343.0(M++H)。
制备2
7-溴-异喹啉-5-磺酸
将发烟H2SO4(2,000mL，21.33mol；26-29.5％游离SO3)加入至安装有机械搅拌器、回流冷凝器、N2管和温度计的5L圆底烧瓶中。将发烟H2SO4用冰/丙酮浴冷却至～10℃，然后分批加入7-溴异喹啉HCl(500.00g，2.04mol)，保持反应混合物的温度低于～15-20℃。7-溴异喹啉HCl加入完成后，将产生的反应混合物在～100℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温，然后缓慢倾倒入搅拌的冰H2O溶液中。将产生的沉淀通过真空过滤回收，用H2O然后用Et2O洗涤，并且真空过滤干燥，然后在～35℃下在干燥箱中减压干燥，得到标题化合物(501.42g，85％产率)，为类白色固体：TOF-MS[ES+；m/z]287.9331/287.9330。
制备3
7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-磺酸
将7-溴-异喹啉-5-磺酸(150.00g，0.520mol)和4-甲氧基苯基硼酸(90.87g，0.598mol)的DMF(1,400mL)和MeOH(375mL)溶液用2M Na2CO3水溶液(652mL)处理。将产生的浆液3×用N2脱氧，然后加入Pd(OAc)2(2.33g，0.0104mol)和dppb(5.54g，0.0130mol)。将产生的反应混合物在～70℃下加热3小时，然后冷却至室温过夜。将反应混合物用H2O(4,000mL)稀释并且用5N HCl水溶液将pH调至～pH2。将产生的浆液在室温下搅拌30分钟，然后通过真空过滤回收棕色固体，用H2O洗涤并且真空过滤干燥。将棕色固体溶于DMF(1,000mL)和2M Na2CO3水溶液(650mL)中并且将产生的溶液通过硅藻土垫过滤，用DMF(400mL)/H2O(400mL)洗涤。将滤液用5N HCl水溶液处理以将pH调至～pH2。将产生的浆液在室温下搅拌30分钟，然后通过真空过滤回收固体，用H2O洗涤并且真空过滤干燥过夜。将固体再溶于DMF(1,000mL)和2M Na2CO3水溶液(1,000mL)中并且将产生的溶液用硅藻土处理以得到浆液。将产生的浆液在室温下搅拌30分钟，然后通过硅藻土垫过滤，用H2O洗涤。将滤液用5N HCl水溶液处理以将pH调至～pH2。将产生的浆液在室温下搅拌30分钟，然后通过真空过滤回收固体，用H2O洗涤并且真空过滤干燥过夜。将固体粉碎，然后用EtOAc洗涤，真空过滤干燥过夜，然后在～35℃下在干燥箱中减压干燥，得到标题化合物(136.79g，83％产率)，为黄色固体：TOF-MS[ES+；m/z]316.0624/316.0643。C16H13NO4S的分析计算值为：C60.94；H4.15；N4.44；S10.16。实测值为C60.76；H4.13；N4.50；S9.90。
制备4
7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-磺酰氯
在7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-磺酸(12.13g，38.5mmol)的1，2-二氯乙烷(200mL)和DMF(2.99mL，38.5mmol)浆液中滴加草酰氯(26.8mL，308mmol)。将浆液在氮气气氛下机械搅拌，同时在60-65℃下加热4小时。将浆液冷却至-10℃。等待30分钟然后过滤。将黄色固体用20％醚/二氯甲烷洗涤并且在氮气气氛下干燥，得到标题化合物(14.8g)，为黄色粉末。
制备5
7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-硫醇钠盐
A.在7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-磺酰氯(4.0g，12mmol)的二噁烷(40mL)浆液中加入三羧基乙基膦盐酸盐(13.73g，48mmol)和水(10mL)。将混合物加热至100℃并且搅拌3小时。将混合物在冰浴中冷却，并且通过移液管缓慢加入NaOH(5N，60mL)。将淡黄色沉淀过滤并且空气干燥，得到标题化合物(3.2g，95％)。质谱(LCMS)m/z＝266.2(M-Na+)。
可选择的是，标题化合物可以制备如下：
B.(i)将7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-磺酸(100.00g，0.317mol)的无水甲苯(2,500mL)3×溶液用N2脱氧，然后用Ph3P(332.58g，1.268mol)、I2(80.46g，0.317mol)和Bu3N(152.00mL，0.638mol)处理。将产生的反应混合物在N2下回流1小时，然后冷却至室温过夜，同时向反应混合物中鼓入空气。将反应混合物用1N NaOH水溶液(500mL)处理，然后将产生的反应混合物在室温下搅拌过夜，同时向反应混合物中鼓入空气。将产生的的黄褐色沉淀通过真空过滤回收。用THF/Et2O的1/1溶液洗涤，然后真空过滤干燥，得到双-(7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5)-二硫化物(72.50g，86％产率)，为淡黄褐色固体：1H NMR(400MHz，DMSO)δ 9.39(s，2H)，8.51(d，2H)，8.41(s，2H)，8.11(d，2H)，8.00(d，2H)，7.53(d，4H)，6.94(d，4H)，3.78(s，6H)。
B.(ii)将双-(7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5)-二硫化物的无水THF(850mL)浆液用NaBH4(2.84g，75.07mmol)处理。将产生的反应混合物在N2、～35℃下加热～1小时，然后在N2、～45℃下加热1小时。
制备6
7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-亚磺酸钠
将Na2SO3(1.01g，8mmol)和NaHCO3(1.01g，12mmol)加入至在水(10mL)中的7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-磺酰氯(1.48g，4mmol)中。将混合物加热至100℃并且搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温，并且减压除去水。将甲醇(40mL)加入至残留物中，搅拌10分钟。将白色固体过滤，用甲醇洗涤，并且合并滤液。浓缩得到标题化合物(1.1g)。
制备7
(3，5-二氯-亚苄基)-(2，2-二乙氧基-乙基)-胺
将2，2-二乙氧基-乙基胺(1852.5g；1.00当量；13.63mol)、3，5-二氯-苯甲醛(2453g；1.00当量；13.60mol)和甲苯(12L)加入至安装有迪安-斯达克榻分水器、冷凝器、氮气入口、顶置式搅拌器和热电偶的22L烧瓶中。将淡黄色反应物温至回流。溶剂在88℃下开始蒸馏。总共收集到～650mL馏出液(～240mL的水)。在蒸馏过程中温度升高至114℃。回流2小时后的NMR显示有产物。2.5小时后停止加热。将溶液用带凹槽的滤纸重力过滤至坛中以除去少量颗粒(包括小部分玻璃管，其最可能来自3，5-二氯-苯甲醛)。将过滤的溶液在设置为45℃的水浴中用Buchi烧瓶浓缩。当溶剂停止出来时，将温度在完全真空下升至70℃并且保持～1.5小时以除去任何残留的甲苯。(3，5-二氯-亚苄基)-(2，2-二乙氧基-乙基)-胺的重量为4059.3g(理论为102.9％)。质谱(LCMS)m/z＝291.2(M+H+)。
制备8
5，7-二氯-异喹啉盐酸盐
将三氟甲磺酸(2.97L；33.52mol；5.03kg)加入至安装有迪安-斯达克榻分水器、顶置式搅拌器、冷凝器、氮气入口、3L加料漏斗(通过冷凝器缓冲于烧瓶)和热电偶的12L烧瓶中。将三氟甲磺酸加热至120℃。将(3，5-二氯-亚苄基)-(2，2-二乙氧基-乙基)-胺(1350.5g；1.00当量；4.65mol)用二氯甲烷(1350mL)稀释并且加入至加料漏斗中。温度在119℃时开始加入。历经90分钟完成加入，保持温度在120℃。在加入过程中收集约1500mL馏出液。加入完成后45分钟的HPLC面积％并且显示94.14％产物和4.86％(3，5-二氯-亚苄基)-(2，2-二乙氧基-乙基)-胺。1.5小时后停止加热。将反应冷却至～80℃。此时将烧瓶置于冰水浴中并且进一步冷却。反应在9℃下加入甲醇(2.7L)。历经60分钟加入完成。最高温度是27℃。在甲醇加入过程中形成了一些固体。将该浆液分批转移至2L加料漏斗中并且加入至在22L烧瓶中的氢氧化铵(5.1L；36.67mol；4.59kg)和水(5.1L)溶液中，在冰水中冷却至<2℃。加料漏斗具有
管延长部分以防止物质流到烧瓶的边上，从而引起更多的油状固体附着到烧瓶壁上。将物质以小块加入以防止加料漏斗由于固体堵塞。包括甲醇(900mL)冲洗烧瓶和加料漏斗，加入历经35分钟完成。最高温度是26℃。形成棕色固体。将浆液冷却至14℃。将固体过滤至聚丙烯垫上。将固体用2×4L和1×2L水洗涤。然后将固体用2L庚烷洗涤以帮助干燥。将固体在50℃下真空干燥至重量为999.0g(理论为108.4％)。将5，7-二氯-异喹啉(997g；1.00当量；5.03mol)和乙醇(14.97L)加入至安装有加料漏斗、氮气入口、顶置式搅拌器和热电偶的22L烧瓶中。将棕色浆液在环境温度(22℃)下搅拌。将乙酰氯(1180mL；16.58mol；1.30kg)加入至加料漏斗中。将其滴加至烧瓶中。棕色浆液变深。通过加入100-200mL乙酰氯固体大部分溶解。没有形成完全的溶液。继续加入固体再出现。历经45分钟加入完成。最高温度是43℃，该温度在加入约一半时达到并且用冷却水浴保持。加入～3/4乙酰氯后将反应样品取出进行NMR。一旦该样品出现盐，就可能不需要过量的乙酰氯。将浆液搅拌并且冷却。40分钟后，温度是30℃。将浆液冷却至<2℃并且在冰水浴中保持1.5小时。将浆液过滤。将固体用2×1.3L冷却的乙醇洗涤。湿滤饼重量为811.4g。将固体在50℃下真空干燥。干燥重量为648.4g。这表示61.0％产率。质谱(LCMS)m/z＝199.05(M+H+)。
制备9
[2-(7-氯-异喹啉-5-基硫烷基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯
将碳酸钾(1952g；14.12mol)加入至安装有顶置式搅拌器、加料漏斗、氮气入口和热电偶的22L烧瓶中。加入二甲基甲酰胺(4L)。将5，7-二氯-异喹啉盐酸盐(646.1g；1.00当量；2.76mol)和DMF(330mL)分批加入。将Boc-半胱胺(514g；1.05当量；2.90mol)溶于二甲基甲酰胺(1520mL)中并且加入至加料漏斗中。将混合物温至60℃。将氮气通过顶空吹扫15分钟，同时将混合物温热。历经2小时15分钟，在60℃下加入Boc-半胱胺溶液。加入后1小时20分钟的HPLC显示28.1％原料、67.26％产物、4.22％异构体和0.25％双。将反应温至75℃。表A中的HPLC数据是在75℃下收集的。
| 在75℃下的时间 | ％5，7-二氯-异喹啉HCl | ％[2-(7-氯-异喹啉-5-基硫烷基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯 | ％异构体 | ％双取代的 |
| 30分钟 | 2.75 | 90.27 | 5.54 | 1.44 |
| 1小时 | 0.93 | 91.39 | 5.52 | 2.16 |
| 1.5小时 | 0.20 | 91.25 | 5.32 | 3.23 |
表A.制备[2-(7-氯-异喹啉-5-基硫烷基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯的反应HPLC数据。
1.5小时后，将罩用冷却浴代替。将反应冷却至20-25℃。将固体过滤并且用DMF(2×810mL)洗涤。将DMF溶液用MTBE(5.15L)和5％LiCl(5.15L)稀释。在50L底部出口的烧瓶中搅拌后，将各层分离。将水层用MTBE(2.9L)萃取。将MTBE层合并并且用5％LiCl(2×2.9L)洗涤。将MTBE层通过带凹槽的滤纸重力过滤并且在设置为35℃的水浴中用Buchi烧瓶浓缩，得到892.7g[2-(7-氯-异喹啉-5-基硫烷基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(理论为95.6％，未校正)。质谱(LCMS)m/z＝339.85(M+H+)。
制备10
[2-(7-氯-异喹啉-5-磺酰基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯
通过在水浴设置为50℃的BuChi烧瓶中旋转将[2-(7-氯-异喹啉-5-基硫烷基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(700g；1.00当量；2.07mol)溶于异丙醇(10.53L)中。将对甲氧酚(12.29g；98.01mmol；12.29g)、二水合钨酸钠(31.4g；95.20mmol)、[2-(7-氯-异喹啉-5-基硫烷基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯溶液、异丙醇(2.77L)、水(3.38L)和乙酸(123mL；2.15mol；128.90g)加入至安装有冷凝器、氮气入口、顶置式搅拌器、加料漏斗和热电偶的22L烧瓶中。水的加入引起棕色溶液变为轻微的乳状样。用热水浴将反应温至50℃。历经1小时加入过氧化氢(607mL；5.94mol；673.77g)。在加入过程中，通过过氧化氢的加入速率并且根据需要在水浴中加入冷或温水使温度保持在50-55℃。反应仍然是乳状棕色。反应温度在加入末期是54℃并且用温水浴保持在53-57℃。加入后10分钟的HPLC显示在2.89分钟处24.69％峰、65.57％产物、5.03％异构体、4.33％双和在3.05分钟处0.18％峰。加入后2小时的HPLC显示0.06％亚砜、在3.046分钟处1.27％峰、88.10％产物、4.61％异构体和5.79％双。将水浴排出并且用冰水代替以冷却反应。当反应温度达到27℃时，通过加入9％的亚硫酸氢钠溶液(250mL)将过氧化物猝灭。没有观察到温度的升高。过氧化物试验带和淀粉碘化物试纸显示没有过氧化物存在。历经15-20分钟加入水(5.64L)。在加入过程中温度从18℃升至24℃。将混合物在环境温度下搅拌过夜。将浆液在冰水浴中冷却至<5℃并且保持。上清液随时间的定量HPLC显示在<5℃下结晶在1.5小时后完成。将固体过滤并且用水(2×2L)洗涤。湿滤饼的重量为831g。将固体在50℃下真空干燥。干燥的[2-(7-氯-异喹啉-5-磺酰基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯的重量为531g(理论为69.31％，未校正)。质谱(LCMS)m/z＝371.85(M+H+)。
制备11
(2-{7-[4-(四氢-吡喃-2-基氧基)-苯基]-异喹啉-5-磺酰基}-乙基)-氨基甲酸叔丁酯
在氮气吹扫下，将PEPPSITM(Pyridine-Enhanced PrecatalystPreparation Stabilization and Initiation；51.0g；74.9mmol)、[2-(7-氯-异喹啉-5-磺酰基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(1.383kg；3.729mol)、苯基硼酸(895g；4.03mol)、K2CO3(1.039kg；7.518mol)和乙醇(15L)加入至60L的反应器中。开始将12L乙醇加入至反应器中并且剩余的3L在其它加入中用于冲洗。将反应温至回流(78℃)。HPLC显示1/2小时后反应完成。将反应用
循环器冷却至59℃。历经18分钟将水(8.7L)加入至反应中。在水加入的过程中，温度从59℃降低至42℃。历经1小时将反应用
循环器从42℃冷却至0℃。将浆液在0℃下保持1小时。将固体用聚丙烯垫过滤并且用1:1的乙醇:水(3.7L；冷却的)洗涤。将固体在过滤器上干燥过夜。然后将固体在60℃下真空干燥22小时。固体的干燥重量为2.171kg。在粗2-{7-[4-(四氢-吡喃-2-基氧基)-苯基]-异喹啉-5-磺酰基}-乙基)-氨基甲酸叔丁酯中Pd的水平是2196mcg/g并且通过KF固体包含6.9％的水。将二氯甲烷(4L)加入至50L底部出口的烧瓶中。将粗2-{7-[4-(四氢-吡喃-2-基氧基)-苯基]-异喹啉-5-磺酰基}-乙基)-氨基甲酸叔丁酯加入至50L烧瓶中并且用二氯甲烷(1L)冲洗。将Na2SO4(1.9kg)加入并且用二氯甲烷(0.1L)冲洗。将Darco 
(3.8kg)加入至20L的Büchi烧瓶中并且在二氯甲烷(12L)中制成浆液。将该浆液转移至50L烧瓶中并且用二氯甲烷(4.9L)冲洗。将混合物在环境温度下搅拌2小时。50cm的不锈钢过滤器装有聚丙烯垫并且装有Hyflo Super 
(1.7kg)。将Hyflo Super 
垫用二氯甲烷(2L)冲洗。将50L烧瓶中的内容物过滤至Hyflo Super 
垫上。将烧瓶和滤饼用二氯甲烷(22L)冲洗。将滤液通过0.45微米的柱过滤器加入至60L的反应器中。将反应器中的内容物温热并且通过在轻微的真空下(～640mmHg)蒸馏浓缩。在35-37℃下，历经2小时收集了约33L馏出液。加入乙醇(10L)。将真空缓慢调节至280mmHg，同时继续蒸馏。一旦真空达到，将温度升高以保持蒸馏。一旦反应器中的体积达到～10L，加入乙醇(6.5L)，速率为保持反应器中的体积同时蒸馏出溶剂。当所有的乙醇加入后停止蒸馏。最终的体积是～10L。蒸馏末期的温度是56℃。将溶剂交换中形成的浆液冷却至20℃并且保持过夜。将浆液过滤。将固体用1:1的乙醇:水(1.8L)洗涤。湿滤饼重量为1.878kg。将固体在50℃下真空干燥，得到1.2306kg(64.36％产率)(2-{7-[4-(四氢-吡喃-2-基氧基)-苯基]-异喹啉-5-磺酰基}-乙基)-氨基甲酸叔丁酯。质谱(LCMS)m/z＝513.62(M+H)。
实施例
实施例1
4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐
A.{2-[7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-基硫烷基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯
将(2-溴-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(0.22g，1mmol)和碳酸钾(0.14g，1mmol)加入至在丙酮(10mL)中的7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-硫醇钠盐(0.29g，1mmol)中。将混合物在室温下搅拌4小时，然后上样至硅胶柱上，并且用在己烷中的65％乙酸乙酯洗脱，得到标题化合物(0.35g，86％)。质谱(LCMS)m/z＝355.2(M+H+)。
B.{2-[7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-磺酰基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯
将水(2mL)加入至{2-[7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-基硫烷基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.35g，0.85mmol)的乙酸(8mL)溶液中。将混合物在冰浴中冷却至0℃。历经5分钟滴加入KMnO4(0.27g，1.7mmol)的水(2mL)溶液。加入后，将反应混合物在0℃下搅拌30分钟。滴加入H2O2(30％在水中)直至棕色消失。将混合物在乙酸乙酯(50mL)和饱和的碳酸氢钠(40mL)之间分配。将有机层分离，经硫酸钠干燥；过滤并且浓缩。将残留物在硅胶柱上用在己烷中的66％乙酸乙酯进行色谱，得到标题化合物(0.245g)，为白色固体。质谱(LCMS)m/z＝433.2(M+H+)。
C.4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐
在-20℃下，将BBr3(1.0M在二氯甲烷中，3.0mL)加入至在二氯乙烷(10mL)中的{2-[7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-磺酰基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.22g，0.51mmol)中。加入后，将反应混合物在-20℃下搅拌2小时，缓慢温至室温并且在室温下搅拌2小时。加入甲醇(5mL)以猝灭过量的BBr3。将溶剂减压蒸发，并且将残留物通过反相HPLC(0-100％乙腈:水，含0.01％TFA)纯化，得到4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚，为TFA盐(0.18g)。然后，通过在TFA盐中加入2mL饱和的碳酸氢钠水溶液将0.12gTFA盐转化为二盐酸盐并且搅拌过夜以便将TFA盐转化为游离碱。将游离碱过滤。将游离碱先用水，然后用乙醚洗涤。将固体干燥。然后，将固体悬浮于MeOH中。加入0.2mL浓HCl水溶液并且搅拌1小时。将溶剂减压浓缩，得到二盐酸盐(0.10g)。质谱(LCMS)m/z＝329.0(M+H+)。
实施例2
4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚
在0℃下，在剧烈的顶置式搅拌下，历经40分钟将BBr3(1.0M在二氯甲烷中，200mL，200mmol)加入至在二氯甲烷(1L)中的{2-[7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-磺酰基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(25.00g，56·49mmol)中。将冷却浴除去并且在室温下搅拌过夜。冷却至0℃并且历经1小时滴加入甲醇(500mL)。将产生的浆液过滤，将烧瓶用二氯甲烷(100mL)冲洗并且将固体用冲洗液洗涤。将固体用另外的二氯甲烷(150mL)洗涤并且真空过滤干燥。在搅拌下将固体在甲醇(400mL)中制成浆液，然后真空浓缩成稀糊状物。加入另外的甲醇(400mL)并且在搅拌下进一步将固体制成浆液。将浆液真空浓缩至干，并且将固体真空干燥过夜。将固体粉碎成粉末并且在甲醇(1L)中制成浆液。加入
A-21树脂(75g)并且搅拌直至粉末溶解。过滤树脂，将过滤的树脂在甲醇(220mL)中制成浆液并且再过滤树脂，合并滤液。将过滤的树脂用甲醇(100mL)洗涤并且将该洗涤液加入至滤液中。将滤液和乙醇(200mL)合并并且将混合物真空浓缩至体积约200mL以得到浆液。加入乙醇(400mL)，将浆液温至50℃约15分钟，然后真空浓缩至体积约200mL。将浆液冷却至室温，过滤并且将滤饼用乙醇(2×15mL)冲洗，然后真空干燥，得到标题化合物(10.22g，55％)，为黄褐色固体。质谱(LCMS)m/z＝329.0(M+H+)。
实施例3
4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚
将2-[7-(4-甲氧基-苯基)-异喹啉-5-磺酰基]-乙基胺二盐酸盐(9.5504g，22.99mmol)的无水CH2Cl2(400mL)浆液在冰/H2O浴中冷却至～5℃，然后将冷浆液用滴加的1.0M BBr3的CH2Cl2溶液(92.00mL，92.00mmol)处理。BBr3加入完成后，将冷却浴除去并且将产生的反应混合物在N2、室温下搅拌过夜。将产生的反应混合物用MeOH猝灭，然后真空浓缩得到残留物。将产生的残留物溶于MeOH(200mL)中并且真空浓缩得到残留物。将上述操作重复3次，然后将残留物在Et2O(300mL)中制成浆液并且用饱和的NaHCO3水溶液处理直至达到～pH7。将产生的固体通过真空过滤回收，然后溶于3/1的CHCl3/MeOH溶液中。将滤液用NaCl饱和，然后用3/1的CHCl3/MeOH溶液(每次2×400mL)萃取。将合并的有机物经MgSO4干燥，过滤，然后真空浓缩得到固体/残留物。将固体/残留物在少量的MeOH(20mL)和过量的己烷中制成浆液，然后将产生的固体通过真空过滤回收，用己烷洗涤并且真空过滤干燥，得到淡黄色固体(7.60g)。将淡黄色固体(7.60g)在无水CH2Cl2(400mL)中制成浆液并且用冰/H2O浴冷却至～5℃，然后用滴加1.0M BBr3的CH2Cl2溶液(70.00mL，70.00mmol)处理。BBr3加入完成后，将冷却浴除去并且将产生的反应混合物在N2、室温下搅拌4小时。将另外量的在CH2Cl2中的1.0M BBr3(70.00mL，70.00mmol)滴加至反应混合物中，然后将产生的反应混合物在N2、室温下搅拌过夜。将反应在～40℃下加热～1小时，然后用滴加另外的在CH2Cl2中的1.0MBBr3(23.00mL，23.00mmol)处理。将产生的反应混合物在～40℃下加热～2小时，然后用MeOH猝灭并且真空浓缩得到残留物。将产生的残留物溶于MeOH(200mL)中并且真空浓缩得到黄色残留物。将上述操作重复3次。将黄色残留物用饱和的NaHCO3处理以将pH调至～7，然后将产生的固体通过真空过滤回收。将固体预先吸附到硅胶上，然后通过柱色谱(ISCO 330g硅胶，纯CH2Cl2至5％在CH2Cl2中的2N NH4/MeOH至10％在CH2Cl2中的2N NH4/MeOH)半纯化得到固体。将固体预先吸附到硅胶上，然后通过柱色谱(ISCO 330g硅胶，纯CH2Cl2至5％在CH2Cl2中的2NNH4/MeOH至10％在CH2Cl2中的2N NH4/MeOH)再纯化得到固体。将固体预先吸附到硅胶上，然后通过柱色谱(ISCO 330g硅胶，纯CH2Cl2至5％在CH2Cl2中的2N NH4/MeOH至10％在CH2Cl2中的2N NH4/MeOH至15％在CH2Cl2中的2N NH4/MeOH)再纯化得到固体。将固体预先吸附到硅胶上，然后通过柱色谱(ISCO 330g硅胶，5％在CHCl3中的MeOH至10％在CHCl3中的MeOH至20％在CHCl3中的MeOH至30％在CHCl3中的MeOH)再纯化得到标题化合物(6.85g，90.8％产率)，为黄色固体：MS(ES+，m/z)：329.0(M+1)。
实施例4
4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐，未知水合状态
将4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚(171.8mg)和15mL95％EtOH置于小瓶中。将小瓶置于设置为80℃的热板上，同时搅拌溶液以溶解化合物。当很少或几乎没有溶解发生时，加入一摩尔当量的HCl(0.52mL在水中的1N HCl)以溶解固体并且产生亮黄色溶液。加入HCl后不到一分钟，开始形成固体并且随时间增加。在80℃下～2小时后，将样品从热源移走并且在室温下搅拌过夜。将固体通过滤纸用真空过滤收集。空气干燥过夜后，回收107.8mg标题化合物(63％产率)。X-射线粉末衍射：角，2θ(％强度)：11.8(100.0)；16.6(52.9)；8.2(43.4)。
实施例5
4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物
A.晶种物质的制备。将HCl水溶液(1M，0.765mL，0.765mmol)加入至4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚(0.2509g，0.764mmol)的乙醇(5mL)浆液中。将产生的混合物加热至回流过夜。冷却至室温并且真空过滤浆液。将固体用乙醇冲洗，并且真空过滤干燥，得到0.1842g黄色固体。
B.4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物。将HCl水溶液(1M，5.33mL，5.33mmol)加入至4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚(1.75g，5.33mmol)的乙醇(35mL)浆液中。将混合物加热至回流并且加入水(2.5mL)以获得溶液。将溶液冷却至60℃并且加入约2mg从上述A中获得的黄色固体晶种以获得浆液。冷却至室温并且搅拌过夜。将浆液真空过滤并且将滤饼用乙醇冲洗，然后真空过滤干燥，得到1.331g(67％)标题化合物，为黄色固体。质谱(LCMS)m/z＝329.0(M+H+)。卡尔·歇尔法：3.00％。X-射线粉末衍射：角，2θ(％强度)：4.9(47.3)；14.8(55.8)；10.2(45.5)。
实施例6
4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐
将4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚(16.57g，50.45mmol)在甲醇(500mL)中制成浆液。通过将乙酰氯(12.60mL，177.05mmol)加入至甲醇(165mL)中单独制备HCl的甲醇溶液。历经30分钟，将HCl的甲醇溶液在室温下滴加至4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚的甲醇浆液中。搅拌30分钟，然后历经1小时滴加入乙酸乙酯(600mL)。搅拌30分钟，然后将固体过滤并且用乙酸乙酯(2×100mL)洗涤。将固体在50℃下真空干燥，然后进一步在室温下缓慢通入氮气真空干燥，得到标题化合物(18.3g，90％)。质谱(LCMS)m/z＝329.0(M+H+)。
实施例7
4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐
将乙醇(24L)和(2-{7-[4-(四氢-吡喃-2-基氧基)-苯基]-异喹啉-5-磺酰基}-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(2.652kg；5.173mol)加入至60L反应器中。将(2-{7-[4-(四氢-吡喃-2-基氧基)-苯基]-异喹啉-5-磺酰基}-乙基)-氨基甲酸叔丁酯用乙醇(2.6L)冲洗。将盐酸溶液(31.9％；1780g；15.6mol)用水(1.42L)稀释。将HCl溶液加入至反应器中并且用水(0.2L)冲洗。将反应温至70℃。在约30℃下形成黄色溶液并且在接近70℃下形成黄色浆液。将反应在70℃下保持1/2小时，然后温至回流(78℃)。HPLC显示在回流1.5小时后反应完成。历经13分钟将水(14.5L)加入至反应中。温度降低至69℃。将反应加热至回流(80℃)并且形成溶液。将反应冷却至68℃并且开始形成固体。将反应在68℃下保持1/2小时，然后历经1.5小时冷却至2℃。将浆液在1-2℃下保持1小时。将固体过滤并且用乙醇(4.6L)洗涤。湿滤饼的重量为3.236kg。将固体在50℃下真空干燥，得到2.106kg(理论为101.4％)4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐。质谱(LCMS)m/z＝402.31(M+H)。
实施例8
4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物
该实施例中应用的乙醇和氢氧化钠溶液通过0.22微米的柱过滤器过滤。应用的水是内毒素控制的纯化水。
将乙醇(8L)和4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐(841.6g；2.097mol)加入至安装有顶置式搅拌器、冷凝器、氮气入口、加热套、热电偶和加料漏斗的22L烧瓶中。将4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐用乙醇(3.28L)冲洗。将反应温至55℃。历经7分钟将氢氧化钠溶液(1100mL；1.91N；2.10mol)加入至反应中，在此过程中温度升高至62℃。将反应加热至回流(78℃)并且保持1小时。将水(1.96L)立即加入至反应中。温度降低至68℃。将反应加热至回流(79℃)并且形成溶液。将Darco (438g)加入至反应中。将反应在回流下保持1.25小时。将热的Darco 浆液通过GFF纸过滤至另一个22L的烧瓶中。产生淡黄色溶液。将原来的烧瓶和Darco 
滤饼用热乙醇(2.5L)冲洗。在冲洗过程中，滤液中开始形成固体。将包含滤液和洗涤液的22L烧瓶安装上顶置式搅拌器、氮气入口和热电偶。将浆液搅拌并且冷却至环境温度。将固体过滤并且用乙醇(2L)洗涤。湿滤饼的重量为672g。将固体在50℃下真空干燥，得到540g(68.9％产率)4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物。质谱(LCMS)m/z＝329.3(M+H+)。
该示例性化合物是Akt活性抑制剂。这些化合物的抑制活性可以通过以下方法证明。
Akt1磷酸化试验
试验通过竞争性荧光偏振免疫分析(FPIA)测定PKC α-假底物肽的磷酸化。试验通过测定当被磷酸肽产物从磷酸特异性抗体置换出时荧光标记的示踪肽发射出的偏振光的强度变化直接测定反应中形成的磷酸肽产物的浓度。用标准曲线校准得到定量结果。
酶和底物
从Sf9昆虫细胞纯化的活性人重组Akt1(全长)从UpstateBiotechnology，Inc获得。肽底物(M.W.1561)是购买的。
标准试验溶液
溶液(A)：20％DMSO(二甲亚砜)或在20％DMSO中的化合物或500mM EDTA；溶液(B)：试验缓冲混合物：75μM肽底物、38mM MgCl2、70mM HEPES(pH7.4)、0.01％Triton 
和50μM ATP(腺苷三磷酸)；溶液(C)：Akt激酶混合物：70mM HEPES(pH7.4)、1mM DTT(二硫苏糖醇)、0.01％Triton 和Akt1酶。
FPIA方法
首先将5μL溶液(A)与10μL溶液(B)混合。通过在混合物中加入10μL溶液(C)引发酶反应。(在25μL反应混合物中的最终浓度或量：4％DMSO(最小抑制孔)或在4％DMSO中的多种化合物浓度或100mMEDTA(最大抑制孔)；30μM肽底物；15mM MgCl2；70mM HEPES(pH7.4)；20μM ATP；0.4mM DTT；0.01％Triton 
)。反应在黑色半面平底96孔微量滴定板上进行。
在室温下60分钟后，通过加入包含260mM EDTA、3.4nM荧光素示踪剂和7.5nM抗磷酸丝氨酸抗体的25μL猝灭/检测混合物将反应终止。将板在室温下避光培养超过3小时，然后应用Tecan Ultra读板仪读取荧光偏振(在λex＝485nm，λex＝530nm)。每孔中磷酸化产物的浓度是从微偏振(mP)单位计算得到的，应用制备的肽竞争剂稀释系列作为标准曲线。本发明的示例性化合物抑制Akt1磷酸化的IC50为1μM或更低。在本试验中实施例1的化合物抑制Akt1磷酸化的IC50为45+/-17nM(n＝3)。
用于测定磷酸-GSK3b(pGSK3b)的基于细胞的ELISA(cELISA)：
细胞中Akt的靶标
将指数生长的衍生自人类成胶质细胞瘤的U87MG细胞接种于96孔板上并且在37℃、5％CO2下培养过夜。通过将4mM储备液(在100％DMSO中)1:2系列稀释至培养基中制备10个浓度的实施例1化合物。将等体积的每个系列稀释液直接加入至细胞中。2小时后停止处理。在处理末期，将培养基除去，并且将细胞用冰冷的磷酸缓冲盐(PBS)洗涤一次。根据vendor的方法将细胞固定在PREFER中，然后用PBS/0.1％SDS和PBS/0.1％TritonX-
冲洗，然后在SEA Block封闭缓冲液中培养过夜。封闭步骤后将细胞与兔抗pGSK3b/Ser9抗体，然后与羊抗兔IgG培养过夜。按照vendor的方法通过超信号ELISA Femto检测pGSK3b。在本试验中实施例1的化合物抑制pGSK3b的IC50为2.04+/-0.68(n＝8)μM。
体内靶标抑制研究
通过单静脉内注射的体内靶标抑制
将指数生长的衍生自人类成胶质细胞瘤的U87MG细胞皮下植入至裸小鼠的后胁腹。当肿瘤的尺寸达到200-250mm3时，在剂量-响应研究或时间-过程研究中将化合物通过单静脉内注射施用于动物。在每次处理的末期，将动物用CO2窒息。通过外科切除得到肿瘤，将其迅速冻至液氮中并且在-80℃下贮存直至分析。血清通过心脏穿刺从心脏血制备并且在-80℃下贮存直至分析。
样品分析
Akt抑制剂是用乙腈/甲醇从血清中提取的并且与内标一起通过LC/MS/MS分析。将肿瘤用Powergen 125匀浆器在包含25mM Tris(pH7.5)、Roche完全蛋白酶抑制剂和1mM钒酸盐的2体积裂解缓冲液中匀浆，然后依次通过18号计量注射针和23号计量注射针。将裂解物在20,000×g离心30分钟，然后从上清液级分收集可溶的细胞质提取液。用BCA试剂盒测定细胞质提取液中的蛋白质浓度。用ELISA试剂盒分析可溶性提取液中的磷酸-GSK3b(pGSK3b)。
对于本试验中的成胶质细胞瘤，应用单静脉内注射25mg/kg，实施例1的化合物在1小时抑制了76％的pGSK3b。
体内肿瘤生长抑制研究
将指数生长的衍生自人类成胶质细胞瘤的U87MG细胞或衍生自人类非小细胞肺癌的H1155细胞皮下植入至裸小鼠的后胁腹。肿瘤细胞植入三天后，进行显微外科手术以插入导管用于通过颈静脉连续输注。然后第二天将配制于D5W(在水中5％葡萄糖)中的多种浓度的实施例1以40μL/小时给小鼠输注4天。每周测量两次肿瘤直至研究结束，通常是开始植入后的24天。通过用治疗组的平均肿瘤体积除以载体治疗组的平均肿瘤体积计算肿瘤生长抑制。
对于成胶质细胞瘤，在试验末期测定时，实施例1的化合物用27mg/kg/天连续输注抑制了50％的肿瘤生长。
对于非小细胞肺癌，在试验末期测定时，实施例1的化合物用24mg/kg/天连续输注抑制了63％的肿瘤生长。
药物组合物研究
4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物的药物组合物包含非还原糖和pH调节剂。溶解性研究显示甘露醇不影响4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物的溶解性。但是，半水合物的溶解性是pH依赖的并且在pH≤3.91时>19mg/mL。同样，沉淀发生的速率也是pH依赖的。
表1：起始溶液pH对沉淀(ppt)速率的影响。所有溶液起始都是以约15mg4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚一盐酸盐半水合物/mL制备的并且在室温下贮存。
| 介质 pH(起始) 沉淀(ppt) |
| 0.05 N HCl/3％甘露醇 1.68 直至96小时没有ppt0.01 N HCl/3％甘露醇 3.19 直至96小时没有ppt0.005 N HCl/3％甘露醇 3.58 48小时后有ppt0.0025 N HCl/3％甘露醇 3.91 36小时后有ppt0.001 N HCl/3％甘露醇 4.20 24小时后有ppt |
重新溶解的沉淀的LC/MS分析显示它是由两个4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚分子(4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚的质谱(LCMS)m/z＝329.1(M+H+))失去氨后形成的“二聚体样”分子(质谱(LCMS)m/z＝640.2(M+H+))。另外，由于转化为溶解性更小的固体状态形式沉淀没有出现。
Claims (14)
1.化合物，其是4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚或其可药用盐。
2.权利要求1的化合物，其是4-[5-(2-氨基-乙磺酰基)-异喹啉-7-基]-苯酚二盐酸盐。
3.权利要求1至2中任意一项的化合物在制备用于抑制Akt活性的药物中的用途。
4.权利要求3的用途，其用于治疗多发性骨髓瘤、神经母细胞瘤、黑素瘤或前列腺肿瘤、乳腺肿瘤、卵巢肿瘤、原发性胃肿瘤、肠型肿瘤、子宫内膜肿瘤、甲状腺肿瘤、胰腺肿瘤、肺肿瘤或膀胱肿瘤。
5.权利要求3的用途，其用于治疗多发性骨髓瘤或前列腺肿瘤、乳腺肿瘤或卵巢肿瘤。
6.权利要求1至2中任意一项的化合物在制备用于治疗非小细胞肺癌或成胶质细胞瘤的药物中的用途。
7.权利要求3的用途，其用于治疗丙型肝炎、风疹、人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎或人类巨细胞病毒(HCMV)。
8.药物组合物，该药物组合物包含权利要求1至2中任意一项的化合物以及可药用载体或赋形剂。
9.冻干的药物组合物，该药物组合物包含权利要求1至2中任意一项的化合物以及可药用载体或赋形剂，其中当用水稀释剂稀释时所述组合物的pH小于4.2并且大于2.0。
10.权利要求9的冻干的药物组合物，其中pH小于3.2并且大于2.0。
11.权利要求10的冻干的药物组合物，其中pH小于2.8并且大于2.0。
12.在溶液中的药物组合物，该药物组合物包含权利要求1至2中任意一项的化合物以及可药用载体或赋形剂，其中所述组合物的pH小于4.2并且大于2.0。
13.权利要求12的药物组合物，其中所述组合物的pH小于3.2并且大于2.0。
14.权利要求13的药物组合物，其中所述组合物的pH小于2.8并且大于2.0。
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