CN101460058A - 有机化合物 - Google Patents

Abstract

游离形式、盐形式或前体药物形式的2－(任选地杂)芳基甲基－3－(任选地杂)芳基氨基－[2H]－吡唑并[3，4－d]嘧啶－4，6(5H，7H)－二酮可用作药物，特别是用作磷酸二酯酶1抑制剂。

Description

有机化合物

技术领域

本发明涉及新的2-(任选地杂)芳基甲基-3-(任选地杂)芳基氨基-[2H]-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮化合物、它们的制备方法、它们作为药物的用途以及包含它们的药物组合物。特别感兴趣的是可用作磷酸二酯酶1(PDE1)抑制剂、例如可用于治疗涉及多巴胺D1受体细胞内途径障碍的疾病如帕金森病、抑郁、发作性睡眠和认识功能损害(例如精神分裂症中的认知功能损害)或可通过增强孕酮信号发送途径而被改善的障碍例如女性性功能障碍的新化合物。

背景技术

已经鉴定了十一族磷酸二酯酶(PDE)，但是已经表明仅第I族的PDE、即Ca²⁺-钙调蛋白-依赖性磷酸二酯酶(CaM-PDE)同时介导钙和环核苷酸(例如cAMP和cGMP)信号发送途径。三种已知的CaM-PDE基因、即PDE1A、PDE1B和PDE1C均在中枢神经系统组织中表达。PDE1A在整个脑中表达，在海马和小脑的CA1至CA3层中表达水平较高，在纹状体中表达水平低。PDE1A也在肺和心脏中表达。PDE1B主要在纹状体、齿状回、嗅束和小脑中进行表达，并且其表达与具有高水平多巴胺能神经分布的脑区域相关。虽然PDE1B主要在中枢神经系统中表达，但是在心脏中也可检测到PDE1B。PDE1C主要在嗅上皮、小脑颗粒细胞和纹状体中表达。PDE1C也在心脏和血管平滑肌中表达。

环核苷酸磷酸二酯酶通过将这些环核苷酸水解成其各自无活性的5’-一磷酸类(5’AMP和5’GMP)而降低细胞内cAMP和cGMP信号发送。CaM-PDE在介导脑细胞中、特别是被称为基底神经节或纹状体的脑区域内的信号转导中起重要作用。例如，NMDA-型谷氨酸受体活化和/或多巴胺D2受体活化造成细胞内钙浓度增加，从而导致效应器如钙调蛋白-依赖性激酶II(CaMKII)和钙调磷酸酶的活化和CaM-PDE的活化，从而造成cAMP和cGMP减少。另一方面，多巴胺D1受体活化导致核苷酸环化酶的活化，从而造成cAMP和cGMP增加。这些环核苷酸又活化蛋白激酶A(PKA；cAMP-依赖性蛋白激酶)和/或蛋白激酶G(PKG；cGMP-依赖性蛋白激酶)，其磷酸化下游信号转导途径元件如DARPP-32(多巴胺和cAMP-调控的磷蛋白)和cAMP反应元件结合蛋白(CREB)。磷酸化的DARPP-32又抑制蛋白磷酸酯-1(PP-1)的活性，从而增加底物蛋白如孕酮受体(PR)的磷酸化状态，从而导致生理学反应的诱导作用。用啮齿类动物进行的研究已经表明通过活化多巴胺D1或孕酮受体来诱导cAMP和cGMP合成增强与多种生理学反应有关的孕酮信号发送，所述生理学反应包括与一些啮齿类动物对交配的感受性有关的脊柱前凸反应。参见Mani等人，Science(2000)287：1053，将其内容引入本文作为参考。

因此，CaM-PDE能影响基底神经节(纹状体)中多巴胺-调控的和其它的细胞内信号发送途径，包括但不限于一氧化氮、去甲肾上腺素能、神经降压肽、CCK、VIP、血清素、谷氨酸(例如NMDA受体、AMPA受体)、GABA、乙酰胆碱、腺苷(例如A2A受体)、大麻素受体、利尿钠肽(例如ANP、BNP、CNP)、DARPP-32和内啡肽细胞内信号发送途径。

磷酸二酯酶(PDE)活性、特别是磷酸二酯酶1(PDE1)活性在脑组织中作为活动能力(locomotor activity)和学习及记忆的调节物发挥作用。PDE1是调节细胞内信号发送途径的治疗靶标，所述细胞内信号发送途径优选在神经系统中，包括但不限于多巴胺D1受体、多巴胺D2受体、一氧化氮、去甲肾上腺素能、神经降压肽、CCK、VIP、血清素、谷氨酸(例如NMDA受体、AMPA受体)、GABA、乙酰胆碱、腺苷(例如A2A受体)、大麻素受体、利尿钠肽(例如ANP、BNP、CNP)、内啡肽细胞内信号发送途径和孕酮信号发送途径。例如，抑制PDE1B将通过保护cGMP和cAMP不被降解而发挥作用以增强多巴胺D1激动剂的作用，并且应通过抑制PDE1活性抑制多巴胺D2受体信号发送途径。细胞内钙水平的长期升高与许多障碍、特别是神经变性疾病如阿尔茨海默病、帕金森病和亨廷顿舞蹈病中以及导致中风和心肌梗塞的循环系统障碍中的细胞死亡有关。因此，PDE1抑制剂可能用于以多巴胺D1受体信号发送活性降低为特征的疾病，如帕金森病、多动腿综合征、抑郁、发作性睡眠和认知功能损害。PDE1抑制剂还可用于可通过增强孕酮-信号发放而被减轻的疾病如女性性功能障碍。

因此，需要选择性抑制PDE1活性、尤其是PDE1B活性的化合物。

发明概述

本发明提供了游离形式、盐形式或前体药物形式的新的2-(任选地杂)芳基甲基-3-(任选地杂)芳基氨基-[2H]-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮(在下文被称为“本发明的化合物”)。2-位上的(任选的)杂芳基部分优选是相对于连接点被芳基或杂芳基对位取代、例如被苯基、吡啶基或噻二唑基取代的苄基或吡啶基甲基。令人吃惊地发现这些化合物选择性抑制磷酸二酯酶1(PDE1)活性，例如PDE1A、PDE1B和PDE1C活性，尤其是PDE1B活性。

本发明的化合物优选是游离形式、盐形式或前体药物形式的式I的吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮：

式I

其中

(i)R₁是H或烃基(例如甲基)；

(ii)R₂是H、烃基(例如异丁基、2-甲基丁基、2，2-二甲基丙基)、环烃基(例如环戊基、环己基)、卤代烃基(例如三氟甲基、2，2，2-三氟乙基)、烃基氨基烃基(例如2-(二甲氨基)乙基)、羟基烃基(例如3-羟基-2-甲基丙基)、芳基烃基(例如苄基)、杂芳基烃基(例如吡啶基甲基)或烃氧基芳基烃基(例如4-甲氧基苄基)；

(iii)R₃是被取代的杂芳基烃基，例如被卤代烃基取代

或者

R₃与式1的吡唑并部分上的氮原子之一相连并且是式A的部分

式A

其中X、Y和Z独立地是N或C，R₈、R₉、R₁₁和R₁₂独立地是H或卤素(例如Cl或F)；R₁₀是卤素、烃基、环烃基、卤代烃基(例如三氟甲基)、芳基(例如苯基)、杂芳基(例如吡啶基(例如吡啶-2-基)或例如噻二唑基(例如1，2，3-噻二唑-4-基)、二唑基、三唑基(例如1，2，4-三唑-1-基)、四唑基(例如四唑-5-基)、烃噁二唑基(例如5-甲基-1，2，4-噁二唑)、吡唑基(例如吡唑-1-基)、烃基磺酰基(例如甲基磺酰基)、芳基羰基(例如苯甲酰基)或杂芳基羰基、烃氧基羰基(例如甲氧基羰基)、氨基羰基；优选苯基或吡啶基，例如2-吡啶基；前提是当X、Y或X是氮时，R₈、R₉或R₁₀分别不存在；

(iv)R₄是芳基(例如苯基)或杂芳基；和

(v)R₅是H、烃基、环烃基(例如环戊基)、杂芳基、芳基、对-苄基芳基(例如联苯-4-基甲基)；

其中“烃”或“烃基”是指C_1-6烃基，“环烃基”是指C_3-6环烃基。

本发明进一步提供了如下的式I化合物：

1.1 其中R₁是甲基的式I；

1.2 其中R₂是C_1-6烃基的式I或1.1；

1.3 其中R₂是异丁基、2，2-二甲基丙基或2-甲基丁基的式1.2；

1.4 其中R₂是羟基C_1-6烃基的式I或1.1；

1.5 其中R₂是3-羟基-2-甲基丙基的式I或1.1；

1.6 其中R₂是C_1-6烃氧基-苄基的式I或1.1；

1.7 其中R₂是对-甲氧基苄基的式1.6；

1.8 其中R₂是C_3-6环烃基的式I或1.1；

1.9 其中R₂是环戊基或环己基的式1.8；

1.10 其中R₂是C_1-6卤代烃基的式I或1.1；

1.11 其中R₂是2，2，2-三氟乙基的式1.10；

1.12 前式中的任何一种，其中R₃是其中R₈、R₉、R₁₁和R₁₂各自是H且R₁₀是苯基的式A的部分；

1.13 前面式I-1.11中的任何一种，其中R₃是其中R₈、R₉、R₁₁和R₁₂各自是H且R₁₀是吡啶基或噻二唑基的式A的部分；

1.14 式1.13，其中R₃是其中R₈、R₉、R₁₁和R₁₂各自是H且R₁₀是2-吡啶基的式A的部分；

1.15 前式中的任何一种，其中R₄是苯基；

1.16 前式中的任何一种，其中R₅是H；

1.17 前式中的任何一种，其中X、Y和Z均是C；

1.18 前式中的任何一种，其中R₂是四氢呋喃-2-基甲基；

1.19 前式中的任何一种，其中R₁₀是嘧啶基；

1.20 式1.19的化合物，其中所述嘧啶基是5-氟嘧啶基；

1.21 前式中的任何一种，其中R₁₀是吡唑-1-基；

1.22 前式中的任何一种，其中R₁₀是1，2，4-三唑-1-基；

1.23 前式中的任何一种，其中R₁₀是氨基羰基；

1.24 前式中的任何一种，其中R₁₀是甲基磺酰基；

1.25 前式中的任何一种，其中R₁₀是5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基；

1.26 前式中的任何一种，其中R₁₀是5-氟嘧啶-2-基；

1.26 前式中的任何一种，其中R₄是4-氟苯基；

1.27 前式中的任何一种，其中R₁₀是三氟甲基；

1.28 前式中的任何一种，其中R₃是式A的部分，X和Z是C，且Y是N；

1.29 化合物，其选自下面实施例1-24的化合物；和/或

1.30 前式中的任何一种，其中所述化合物抑制磷酸二酯酶-介导的(例如，PDE1-介导的，尤其是PDE1B-介导的)cGMP水解，例如，在固定的金属亲和颗粒试剂PDE测定法(例如，如实施例25所述)中其具有低于1μM、优选低于25nM的IC₅₀；

前式中任何一种所述的该类化合物是游离形式、盐形式或前体药物形式。

在一个尤其优选的实施方案中，本发明的化合物是游离形式或盐形式的式I的化合物，其中

(i)R₁是甲基；

(ii)R₂是C_1-6烃基；

(iii)R₃是式A的部分，其中X、Y和Z均是C，R₈、R₉、R₁₁和R₁₂各自是H，R₁₀是苯基、吡啶基(例如吡啶-2-基)或噻二唑基(例如1，2，3-噻二唑-4-基)；

(iv)R₄是苯基；和

(v)R₅是H。

例如，本发明优选的化合物包括游离形式、盐形式或前体药物形式的式II的化合物：

式II

其中

R₂是H、烃基(例如异丁基、2-甲基丁基、2，2-二甲基丙基)、环烃基(例如环戊基、环己基)、杂芳基(例如吡啶基)、芳基(例如苯基)、卤代烃基(例如三氟甲基、2，2，2-三氟乙基)、烃基氨基烃基(例如2-(二甲氨基)乙基)、羟基烃基(例如3-羟基-2-甲基丙基)、芳基烃基(例如苄基)或烃氧基芳基烃基(例如4-甲氧基苄基)；

其中“烃”或“烃基”是指C_1-6烃基；和

R₁₀是苯基、吡啶基(例如吡啶-2-基)或噻二唑基(例如1，2，3-噻二唑-4-基)。

在某些实施方案中，本发明的化合物是游离形式、盐形式或前体药物形式的式II的化合物，其中

R₂是H、烃基(例如异丁基、2-甲基丁基、2，2-二甲基丙基)、环烃基(例如环戊基、环己基、四氢呋喃-2-基甲基)、杂芳基(例如吡啶基)、芳基(例如苯基)、卤代烃基(例如三氟甲基、2，2，2-三氟乙基)、烃基氨基烃基(例如2-(二甲氨基)乙基)、羟基烃基(例如3-羟基-2-甲基丙基)、芳基烃基(例如苄基)或烃氧基芳基烃基(例如4-甲氧基苄基)；

和

R₁₀是苯基、吡啶基(例如吡啶-2-基)、嘧啶基(例如5-氟嘧啶-2-基)、吡唑基(例如吡唑-1-基)、噻二唑基(例如1，2，3-噻二唑-4-基)、卤代烃基(例如三氟甲基)、烃基磺酰基(例如甲基磺酰基)、噁二唑基(例如5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)、氨基羰基(例如，从而形成4-苯甲酰胺结构)、三唑基(例如1，2，4-三唑-1-基)；

其中“烃”或“烃基”是指C_1-6烃基。

如果上下文没有规定或没有清楚说明，则本文的下列术语具有下面的含义：

(a)本文所用的“烃基”是饱和或不饱和的烃部分，优选是饱和的，优选具有1至6个碳原子，其可以是直链或支链的，并且可任选地被单-、二-或三-取代，例如被卤素(例如氯或氟)、羟基或羧基取代。

(b)本文所用的“环烃基”是饱和或不饱和的非芳族烃部分，优选是饱和的，优选包含3至9个碳原子，其中至少一些碳原子形成非芳族的单环或二环或桥连的环状结构，并且其可任选地被取代，例如被卤素(例如氯或氟)、羟基或羧基取代。在某些实施方案中，环烃基可任选地在其环部分或连接部分中包含一个或多个杂原子例如氮、氧或硫，例如四氢呋喃基甲基。

(c)本文所用的“芳基”是单环或二环的芳族烃，优选苯基，其任选地被取代，例如被烃基(例如甲基)、卤素(例如氯或氟)、卤代烃基(例如三氟甲基)、羟基、羧基或另外的芳基或杂芳基(例如联苯基或吡啶基苯基)取代。

(d)本文所用的“杂芳基”是其中组成芳族环的一个或多个原子是硫或氮而非碳的芳族部分，例如吡啶基或噻二唑基，其可任选地被取代，例如被烃基、卤素、卤代烃基、羟基或羧基取代。

(e)为了便于参考，除非另有说明，否则按照式I中所述的编号对本发明的化合物的吡唑并嘧啶核进行编号。

本发明的化合物可以以游离形式或盐形式存在，例如以酸加成盐形式存在。在本说明书中，除非另有说明，否则措辞如“本发明的化合物”应理解为包括任何形式例如游离形式或酸加成盐形式的化合物，或者在化合物包含酸性取代基的情况中，包括碱加成盐形式的化合物。本发明的化合物被用作药物，因此优选药学上可接受的盐。不适合药用的盐也可能是有用的，例如用于分离或纯化游离的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，因此也被包括在本发明中。

本发明的化合物在一些情况中也可以以前体药物形式存在。前体药物形式是在体内转化成本发明的化合物的化合物。例如，当本发明的化合物包含羟基或羧基取代基时，这些取代基可形成生理学可水解和可接受的酯。本文所用的“生理学可水解和可接受的酯”是指可在生理条件下水解产生酸(在具有羟基取代基的本发明的化合物的情况中)或醇(在具有羧基取代基的本发明的化合物的情况中)的本发明的化合物的酯，其本身在施用剂量下是生理学可耐受的。如将意识到的那样，该术语因此包括常规的药用前体药物形式。

本发明还提供了制备本发明的化合物的方法、可用于制备本发明的化合物的新中间体以及用本发明的化合物治疗下述疾病和障碍(尤其是治疗以多巴胺D1受体信号发送活性降低为特征的疾病，如帕金森病、图雷特综合征、孤独症、脆性X染色体综合征、ADHD、多动腿综合征、抑郁和精神分裂症的认知功能损害)的方法。

发明详述

制备本发明化合物的方法

式I的化合物以及其药学上可接受的盐可以通过本文所述和所例举的方法和通过与其类似的方法以及通过化学领域已知的方法来制备。该类方法包括但不限于下面所述的那些方法。如果不能商购获得，则用于这些方法的起始材料可以用选自化学领域的操作使用与已知化合物的合成类似或相似的技术来制备。本文所引用的所有参考资料在此均被全部引入作为参考。

本发明的化合物包括其对映异构体、非对映异构体和外消旋物以及其多晶型物、水合物、溶剂化物和复合物。本发明的范围内的一些个别化合物可包含双键。本发明中双键的描述包括双键的E和Z异构体。此外，本发明范围内的一些化合物可包含一个或多个不对称中心。本发明包括任何光学纯的立体异构体以及立体异构体的任何组合的使用。

熔点是未校正的，(dec)表示分解。温度是以摄氏度(℃)为单位给出的；除非另有说明，否则操作是在室温或环境温度下、即在18-25℃范围内的温度下进行的。色谱法是指硅胶快速色谱法；薄层色谱法(TLC)是在硅胶板上进行的。NMR数据是以主要特征质子的δ值给出的，单位是相对于作为内标的四甲基硅烷(TMS)的百万分数(ppm)。使用信号形式的常规缩写。偶合常数(J)是以Hz为单位给出的。对于质谱(MS)而言，在同位素分裂产生多重质谱峰的情况中，报告了分子的最低质量主要离子。溶剂混合组合物是以体积百分比或体积比的形式给出的。在NMR谱复杂的情况中，仅报告特征信号。

术语和缩写：

Bu^tOH＝叔-丁醇，

CAN＝硝酸铈(IV)铵，

DIPEA＝二异丙基乙基胺，

DMF＝N，N-二甲基甲酰胺，

DMSO＝二甲基亚砜，

Et₂O＝乙醚，

EtOAc＝乙酸乙酯，

equiv.＝当量，

h＝小时，

HPLC＝高效液相色谱法，

K₂CO₃＝碳酸钾，

MeOH＝甲醇，

NaHCO₃＝碳酸氢钠，

NH₄OH＝氢氧化铵，

PMB＝对-甲氧基苄基，

POCl₃＝三氯氧化磷，

SOCl₂＝亚硫酰氯，

TFA＝三氟乙酸，

THF＝四氢呋喃。

下面对本发明的合成方法进行阐述。除非另有说明，否则基团R的含义如上面式I中所述。

在本发明的一个方面，式IIb的中间体化合物可以通过使式IIa的化合物与二羧酸、乙酸酐和乙酸混合物在加热下反应约3小时、然后冷却来合成：

其中R¹是H或C_1-4烃基[例如甲基]。

中间体IIc可以通过例如使IIb的化合物与例如氯化化合物如POCl₃反应(有时具有少量水)并加热约4小时、然后冷却来制备：

中间体IId可以通过使IIc的化合物与例如在溶剂如DMF中的P¹-X和碱如K₂CO₃在室温下或在加热下反应来形成：

其中P¹是保护基团[例如对-甲氧基苄基(PMB)]；X是离去基团如卤素、甲磺酸基(mesylate)或甲苯磺酸基(tosylate)。

中间体IIe可以通过使IId的化合物与肼或水合肼在溶剂如甲醇中反应并回流约4小时、然后冷却来制备：

中间体IIf可以通过使化合物IIe与例如异硫氰酸或异氰酸芳基酯在溶剂如DMF中反应并在110℃下加热约2天、然后冷却来合成：

其中R⁴是(杂)芳基或(杂)芳基甲基[例如苯基或苄基]。

中间体IIg可以通过使化合物IIf与例如在溶剂如DMF中的R³-X和碱如K₂CO₃在室温或加热下反应来形成：

其中R³如前面所定义[例如任选地被取代的苄基]；X是离去基团如卤素、甲磺酸基或甲苯磺酸基。

中间体IIh可以通过用适宜的方法除去保护基团P¹由化合物IIg来合成。例如，如果P¹是对-甲氧基苄基，则可以用AlCl₃在存在茴香醚的情况下在室温下将其除去：

化合物I可以通过使化合物IIh与例如在溶剂如DMF中的R²-X和/或R⁵-X和碱如K₂CO₃在室温或加热下反应来形成：

其中R²和R⁵如前面所定义[例如环戊基]；X是离去基团如卤素、甲磺酸基或甲苯磺酸基。

还有一种合成化合物I的供替代选择的方法。

中间体IIIa可以通过使化合物IIc与例如在溶剂如DMF中的R²-X和碱如K₂CO₃在室温或加热下反应来形成：

中间体IIIb可以通过使化合物IIIa与肼或水合肼在溶剂如甲醇中反应并加热约数小时、然后冷却来制备：

中间体IIIc可以通过使化合物IIIb与例如异硫氰酸或异氰酸芳基酯在溶剂如DMF中反应并在110℃下加热约2天、然后冷却来合成：

化合物I可以通过使化合物IIIc与例如在溶剂如DMF中的R³-X和碱如K₂CO₃在室温或加热下反应来形成。可使所获得的产物I(R⁵＝H)进一步与例如R⁵-X在碱性条件下反应，从而得到化合物I：

因此，本发明提供了制备上文所述的本发明的化合物的方法，例如，其包括

(i)使2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮与其中X是离去基团例如卤素、甲磺酸基或甲苯磺酸基且R³是任选地被取代的芳基烃基或杂芳基烃基、例如其中R³是如上面所定义的式A的被取代的苄基的式X-R³的化合物反应，例如，在碱性条件下反应，例如其中所述2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮是式IIIc的化合物：

其中R₁、R₂和R₄如上文所定义，例如参见式I；和/或

(ii)使2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮与其中X是离去基团例如卤素、甲磺酸基或甲苯磺酸基且R²是烃基、环烃基、芳基烃基或杂环烃基、例如其中R₂是异丁基的式X-R²的化合物反应，例如在碱性条件下反应，例如其中所述2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮是式IIh的化合物：

其中R₁、R₃和R₄如上文所定义，例如参见式I。

使用本发明的化合物的方法

本发明的化合物可用于治疗以cAMP和cGMP介导的途径的破坏或损害为特征的疾病，例如所述cAMP和cGMP介导的途径的破坏或损害是由PDE1的表达增加或cAMP和cGMP的表达减少导致的，而cAMP和cGMP的表达减少是环核苷酸合成诱导物如多巴胺和一氧化氮(NO)被抑制或水平降低造成的。通过阻止PDE1B对cAMP和cGMP的降解、从而增加cAMP和cGMP的细胞内水平，本发明的化合物增强环核苷酸合成诱导物的活性。

本发明提供了治疗下列病症中的任何一种或多种的方法：

(i)神经变性疾病，包括帕金森病、多动腿(restless leg)、震颤、运动障碍、亨廷顿舞蹈病、阿尔茨海默病和药物诱导的运动失调；

(ii)精神障碍，包括抑郁、注意力缺陷障碍、注意缺陷多动症、双相性障碍(bipolar illness)、焦虑、睡眠障碍例如发作性睡眠、认知功能损害、痴呆、图雷特综合征、孤独症、脆性X染色体综合征、精神兴奋剂戒断和药物成瘾；

(iii)循环和心血管障碍，包括脑血管疾病、中风、充血性心脏病、高血压、肺动脉高压和性功能障碍；

(iv)呼吸和炎性障碍，包括哮喘、慢性阻塞性肺病和变应性鼻炎以及自身免疫性和炎性疾病；

(v)以表达PDE1的细胞中低水平的cAMP和/或cGMP(或者cAMP和/或cGMP信号发送途径抑制)为特征的任何疾病或病症；和/或

(vi)以多巴胺D1受体信号发送活性降低为特征的任何疾病或病症，其包括给需要其的人或动物患者施用有效量的本发明的化合物，例如式1-1.30中任意一项或式II的化合物。

在一个尤其优选的实施方案中，本发明提供了治疗或预防发作性睡眠的方法。在该实施方案中，PDE1抑制剂可用作唯一的治疗剂，但是也可以与其它活性剂组合使用或共同施用。因此，本发明进一步包括治疗发作性睡眠的方法，其包括给需要其的人或动物患者同时(simultaneously)、相继或并行(contemporaneously)施用治疗有效量的

(i)PDE1抑制剂，例如式1-1.30中任意一项或式II的化合物，和

(ii)促进觉醒或调控睡眠的化合物，例如其选自(a)中枢神经系统兴奋剂-苯丙胺类和苯丙胺样化合物，例如哌甲酯、右旋苯丙胺、去氧麻黄碱和匹莫林；(b)莫达非尼，(c)抗抑郁药，例如三环类(包括丙咪嗪、去甲丙咪嗪、氯丙咪嗪和普罗替林)和选择性血清素再摄取抑制剂(包括氟西汀和舍曲林)；和/或(d)γ羟基丁酸盐(GHB)。

在另一个实施方案中，本发明进一步提供了治疗或预防可通过增强孕酮信号发送而被减轻的病症的方法，其包括给需要其的人或动物患者施用有效量的本发明的化合物，例如式1-1.30中任意一项或式II的化合物。可通过增强孕酮信号发送而被改善的疾病或病症包括但不限于女性性功能障碍、继发性闭经(例如运动性闭经、无排卵、绝经、绝经期症状、甲状腺功能减退症)、经前期综合征、早产、不孕例如由于重复流产造成的不孕、不规则月经周期、异常子宫出血、骨质疏松、自身免疫性疾病、多发性硬化、前列腺肿大(prostate enlargement)、前列腺癌和甲状腺功能减退症。例如，通过增强孕酮信号发送，PDE1抑制剂可用于通过影响子宫内层来促进排植入和帮助由于对妊娠或低孕酮功能发生免疫反应而易于流产的女性维持妊娠。新PDE1抑制剂、例如本文所述的新PDE1抑制剂还可用于在绝经后女性中增强激素替代疗法的有效性，例如可以与雌激素/雌二醇/雌三醇和/或孕酮/孕激素类组合施用，以及用于雌激素-诱导的子宫内膜增生和癌。本发明的方法还可用于动物繁殖，例如以诱导待繁殖的非人雌性哺乳动物的性感受性和/或动情期。

在该实施方案中，PDE1抑制剂可作为唯一的治疗剂用于前面的治疗或预防方法中，但是也可以与其它活性剂组合使用或共同施用，例如与激素替代疗法联合。因此，本发明进一步包括治疗可通过增强孕酮信号发送而被改善的障碍的方法，其包括给需要其的人或动物患者同时、相继或并行施用治疗有效量的

(i)PDE1抑制剂，例如式1-1.30中任意一项或式II的化合物，和

(ii)激素，例如其选自雌激素和雌激素类似物(例如雌二醇、雌三醇、雌二醇酯类)以及孕酮和孕酮类似物(例如孕激素类)。

本发明还提供了增强或加强细胞或组织中多巴胺D1细胞内信号发送活性的方法，其包括使所述细胞或组织与足以抑制PDE1B活性的量的本发明的化合物接触。

本发明还提供了增强或加强细胞或组织中孕酮信号发送活性的方法，其包括使所述细胞或组织与足以抑制PDE1B活性的量的本发明的化合物接触。

本发明还提供了在需要其的患者中治疗与PDE1有关的、尤其是与PDE1B有关的障碍、多巴胺D1受体细胞内信号发送途径障碍或可通过增强孕酮信号发送途径而被减轻的障碍的方法，其包括给所述患者施用有效量的抑制PDE1B的本发明的化合物，其中PDE1B活性调节DARPP-32和/或GluR1AMPA受体的磷酸化。

本发明还提供了

(i)用作药物、例如用于上文所述的任何方法或用于治疗上文所述的任何疾病或病症的本发明的化合物，

(ii)本发明的化合物在制备用于治疗上文所述的任何疾病或病症的药物中的用途，

(iii)包含本发明的化合物以及与之组合或联合的药学上可接受的稀释剂或载体的药物组合物，和

(iv)用于治疗上文所述的任何疾病或病症的包含本发明的化合物以及与之组合或联合的药学上可接受的稀释剂或载体的药物组合物。

因此，措辞“治疗”应理解为包括预防和治疗或改善疾病的症状以及治疗疾病的原因。

本发明的化合物特别是可用于治疗帕金森病、发作性睡眠和女性性功能障碍。

本发明的化合物可用作唯一的治疗剂，但是也可以与其它活性剂组合使用或共同施用。例如，因为本发明的化合物加强D1激动剂如多巴胺的活性，因此它们可以与常规多巴胺能药物如左旋多巴和左旋多巴助剂(adjunct)(卡比多巴、COMT抑制剂、MAO-B抑制剂)、多巴胺激动剂和抗胆碱能药同时、相继或并行施用，例如在患有帕金森病的患者的治疗中。此外，新PDE1抑制剂、例如本文所述的新PDE1抑制剂还可以与雌激素/雌二醇/雌三醇和/或孕酮/孕激素类组合施用以增强激素替代疗法的有效性或治疗雌激素诱导的子宫内膜增生或癌。

实施本发明所用的剂量当然将根据例如所治疗的具体疾病或病症、所用的具体的本发明的化合物、施用方式和所需的治疗而变化。本发明的化合物可通过任何适宜的途径(包括口服、胃肠外、透皮或吸入)施用，但是优选口服施用。一般而言，表明以约0.01至2.0mg/kg的剂量口服施用可获得令人满意的结果，例如对于上文所述的疾病的治疗而言。因此，在较大的哺乳动物例如人中，适用的口服施用的日剂量将为约0.75至150mg，方便地每天施用一次或以分剂量施用2至4次或者以持续释放形式施用。因此，口服施用的单位剂型例如可包含约0.2至75或150mg、例如约0.2或2.0至50、75或100mg本发明的化合物以及药学上可接受的稀释剂或载体。

包含本发明的化合物的药物组合物可以用盖仑制剂领域中已知的常规的稀释剂或赋形剂和技术来制备。因此，口服剂型可包括片剂、胶囊剂、溶液剂、混悬剂等。

实施例

实施例1：

2-(联苯-4-基甲基)-7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

(a)1-甲基嘧啶-2，4，6(1H，3H，5H)-三酮

向70℃的丙二酸(80g，0.79mol)和甲脲(50g，0.68mol)在180ml乙酸中的溶液中缓慢加入乙酸酐(130ml，1.37mol)。在完全加入后，将反应混合物在90℃下搅拌3小时，然后冷却至室温。减压除去溶剂，将残余物用350mL乙醇处理，沉淀出微黄色固体。将该固体用乙醇重结晶，得到63.1g结晶性固体形式的产物(收率：65.8％)。m.p.＝131.2-133.1℃[文献¹：m.p.＝130-131.5℃]。

(b)6-氯-3-甲基嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮

在0℃下，将水(2.7mL)滴加到1-甲基嘧啶-2，4，6(1H，3H，5H)-三酮(14.2g，100mol)在POCl₃(95mL)中的混悬液中。然后将反应混合物在80℃下加热5小时。将所得的微棕色溶液冷却，减压蒸发掉POCl₃。将残余物用MeOH处理，将所得的固体用乙醇重结晶，得到11.5g产物(收率：71.6％)。m.p.＝279-282℃(dec)[文献²：280-282℃]。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ3.10(S，3H)，5.90(S，1H)，12.4(br，1H)。

(c)6-氯-1-异丁基-3-甲基嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮

将6-氯-3-甲基嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(3g，18.8mmol)、异丁基碘(5mL，43.5mmol)和碳酸钾(5.3g，38.4mmol)在无水DMF(200mL)中的混合物在50℃下加热8小时。加入另外的异丁基碘(4.3mL，37.5mmol)，将反应混合物在50℃下加热24小时。在热过滤后，将滤液减压蒸发至干。将所得的油状物进一步用硅胶快速色谱法进行纯化，得到2.1g纯产物(收率：52％)。

(d)6-肼基-1-异丁基-3-甲基嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮

向6-氯-1-异丁基-3-甲基嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(2.0g9.3mmol)在EtOH(8mL)中的溶液中缓慢加入在EtOH(3mL)中的肼一水合物(1.3mL)。将反应混合物回流5小时，然后冷却。向反应混合物中加入大量AcOEt，然后冷却，过滤，得到1.95g微黄色固体形式的产物(收率：100％)。

(e)7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮将异硫氰酸苯酯(0.17mL，1.4mmol)加入到6-肼基-1-异丁基-3-甲基嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(31mg，0.47mmol)在DMF(10mL)中的溶液中。将反应混合物在120℃下加热6小时，然后减压蒸发以除去溶剂。将残余物进一步用硅胶快速色谱法进行纯化，得到20mg产物(收率：41％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ 0.95(s，3H)，0.97(s，3H)，2.30(m，1H)，3.37(s，3H)，3.77(d，2H)，7.16-7.43(m，5H)，7.61(s，1H)。MS(FAB)m/z 314.3[M+H]⁺。

(f)2-(联苯-4-基甲基)-7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

将7-异丁基-5-甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮(12.0g，0.0383mmol)、对-联苯基甲基溴(9.46mg，0.0383mmol)和碳酸钾(5.3mg，0.0383mmol)在丙酮(2.5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。减压蒸发掉溶剂。将残余物直接用色谱法进行纯化，得到7.0mg白色固体形式的产物(收率：38.0％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ 0.97(s，3H)，0.99(s，3H)，2.33(m，1H)，3.34(s，3H)，3.85(d，2H)，4.99(s，2H)，6.76(s，1H)，6.91-7.56(m，13H)。MS(FAB)m/z 480.3[M+H]⁺。

实施例2

2-(联苯-4-基甲基)-7-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(c)中加入对-甲氧基苄基氯来代替异丁基碘。TLC R_f＝0.61(AcOEt:己烷＝1:1)。¹H NMR(CDCl₃)δ3.31(s，3H)，3.71(s，3H)，4.99(s，2H)，5.10(s，2H)，6.75-7.57(m，19H)。MS(FAB)m/z 544.4[M+H]⁺

实施例3

2-(联苯-4-基甲基)-3-((联苯-4-基甲基)(苯基)氨基)-7-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(c)中加入对-甲氧基苄基氯来代替异丁基碘。TLC R_f＝0.81(AcOEt:己烷＝1:1)。¹H NMR(CDCl₃)δ3.38(s，3H)，3.68(s，3H)，4.99(s，2H)，5.10(s，2H)，5.20(s，2H)，6.70-7.57(m，27H)。MS(FAB)m/z 710.5[M+H]⁺

实施例4

7-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(三氟甲基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(c)中加入对-甲氧基苄基氯来代替异丁基碘；在步骤(f)中加入对-三氟甲基苄基溴来代替对-联苯基甲基溴(收率：80％)。MS(ESI)m/z 536.5[M+H]⁺

实施例5

7-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(c)中加入对-甲氧基苄基氯来代替异丁基碘；在步骤(f)中加入对-(吡啶-2-基)苄基溴来代替对-联苯基甲基溴(收率：60％)。MS(ESI)m/z 545.2[M+H]⁺

实施例6

5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

在氩气下，将AlCl₃(0.733g，5.50mmol)加入到7-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮(1.08g，1.98mmol)和茴香醚(mL)在1，2-二氯乙烷(15mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在冷却的情况下用水淬灭。将所得的混悬液用20％ NaOH(70mL)处理，然后用二氯甲烷萃取5次。将有机相合并并蒸发至干。将残余物进一步用色谱法进行纯化，得到751mg纯产物(收率：89％)。MS(FAB)m/z 425.3[M+H]⁺。

实施例7

7-环戊基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

将甲基乙基酮(1.2mL)加入到0.5～5mL包含5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮(25mg，0.0589mmol)、碘代环戊烷(8.2μL，0.0707mmol)和K₂CO₃(9.8mg，0.0707mmol)的反应容器中。将密封了的容器放到Biotage微波仪中并在140℃下进行微波反应1小时。然后将所得的粗产物用硅胶快速色谱法进行纯化，得到14.9mg纯产物(收率：51.4％)。TLC R_f＝0.72(AcOEt:己烷＝2:1)。MS(ESI)m/z 493.4[M+H]⁺

实施例8

3-(环戊基(苯基)氨基)-5-甲基-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

将甲基乙基酮(1.2mL)加入到0.5～5mL包含5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮(25mg，0.0589mmol)、碘代环戊烷(8.2μL，0.0707mmol)和K₂CO₃(9.8mg，0.0707mmol)的反应容器中。将密封了的容器放到Biotage微波仪中并在140℃下进行微波反应1小时。然后将所得粗产物用硅胶快速色谱法进行纯化，得到5.2mg纯产物(收率：17.9％)。TLC R_f＝0.50(AcOEt:己烷＝2:1)。MS(ESI)m/z 493.4[M+H]⁺

实施例9

7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例7相似，其中加入异丁基碘来代替碘代环戊烷(收率：95.8％)。MS(ESI)m/z 481.4[M+H]⁺

实施例10

7-环己基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例7相似，其中加入碘代环己烷来代替碘代环戊烷(收率：10％)。MS(ESI)m/z 507.4[M+H]⁺

实施例11

5-甲基-7-新戊基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例7相似，其中加入1-碘-2，2-二甲基丙烷来代替碘代环戊烷(收率：4.1％)。MS(ESI)m/z 495.4[M+H]⁺

实施例12

(S)-5-甲基-7-(2-甲基丁基)-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例7相似，其中加入(S)-1-碘-2-甲基丁烷来代替碘代环戊烷(收率：81.8％)。MS(ESI)m/z 495.4[M+H]⁺

实施例13

5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-7-(2，2，2-三氟乙基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例7相似，其中1，1，1-三氟-2-碘乙烷来代替碘代环戊烷(收率：14.8％)。MS(ESI)m/z 507.3[M+H]⁺

实施例14

(R)-7-(3-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例7相似，其中加入(S)-3-溴-2-甲基丙-1-醇来代替碘代环戊烷(收率：86.3％)。MS(ESI)m/z 497.4[M+H]⁺

实施例15

7-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例7相似，其中加入溴化2-溴-N，N-二甲基乙铵来代替碘代环戊烷(收率：64.4％)。MS(ESI)m/z 496.3[M+H]⁺

实施例16

2-(4-(1H-吡唑-1-基)苄基)-7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(f)中加入1-(4-(溴甲基)苯基)-1H-吡唑来代替对-联苯基甲基溴。MS(ESI)m/z 470.1[M+H]⁺

实施例17

2-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苄基)-7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(f)中加入1-(4-(溴甲基)苯基)-1H-1，2，4-三唑来代替对-联苯基甲基溴(收率：89.2％)。MS(ESI)m/z471.1[M+H]⁺

实施例18

4-((7-异丁基-5-甲基-4，6-二氧代-3-(苯基氨基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)甲基)苯甲酰胺

其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(f)中加入4-(氯甲基)苯甲酰胺来代替对-联苯基甲基溴。MS(ESI)m/z 447.1[M+H]⁺

实施例19

7-异丁基-5-甲基-2-(4-(甲基磺酰基)苄基)-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(f)中加入1-(溴甲基)-4-(甲基磺酰基)苯来代替对-联苯基甲基溴。MS(ESI)m/z 482.1[M+H]⁺

实施例20

7-异丁基-5-甲基-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苄基)-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(f)中加入3-(4-(溴甲基)苯基)-5-甲基-1，2，4-噁二唑来代替对-联苯基甲基溴。MS(ESI)m/z 486.1[M+H]⁺

实施例21

2-(4-(5-氟嘧啶-2-基)苄基)-7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(f)中加入2-(4-(溴甲基)苯基)-5-氟嘧啶来代替对-联苯基甲基溴。MS(ESI)m/z 500.0[M+H]⁺

实施例22

5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-7-((四氢呋喃-2-基)甲基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例7相似，其中加入2-(溴甲基)-四氢呋喃来代替碘代环戊烷。MS(ESI)m/z 509.2[M+H]⁺

实施例23

5-甲基-7-新戊基-3-(苯基氨基)-2-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例1相似，其中在步骤(c)中加入1-碘-2，2-二甲基丙烷来代替异丁基碘；在步骤(f)中加入5-(溴甲基)-2-(三氟甲基)吡啶来代替对-联苯基甲基溴。MS(ESI)m/z 487.2[M+H]⁺

实施例24

3-(4-氟苄基氨基)-7-异丁基-5-甲基-2-(4-(三氟甲基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其合成方法与实施例7相似，其中加入3-(4-氟苄基氨基)-5-甲基-2-(4-(三氟甲基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮来代替5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮，加入异丁基碘来代替碘代环戊烷。MS(ESI)m/z 490.2[M+H]⁺

实施例25

用IMAP磷酸二酯酶测定法试剂盒体外测量PDE1B抑制

磷酸二酯酶1B(PDE1B)是一种钙/钙调蛋白依赖性磷酸二酯酶，其将环鸟嘌呤核苷单磷酸(cGMP)转化成5’-鸟嘌呤核苷单磷酸(5’-GMP)。PDE1B还可以将修饰的cGMP底物如荧光分子cGMP-荧光素转化成相应的GMP-荧光素。可以用例如IMAP(分子仪器公司(Molecular Devices)，Sunnyvale，CA)固定的金属亲和颗粒试剂来对由cGMP-荧光素产生GMP-荧光素进行定量。

简言之，IMAP试剂以高亲合力与在GMP-荧光素中存在但在cGMP-荧光素中不存在的游离5’-磷酸结合。所得的GMP-荧光素-IMAP复合物比cGMP-荧光素大。因为其发荧光所发射的光子保留了与激发荧光所用光子相同的极性，在大的缓慢翻转的复合物中结合的小荧光团可以与未结合的荧光团相区别。

在该磷酸二酯酶测定法中，不能与IMAP结合并因此保留了微小荧光偏振的cGMP-荧光素被转化成GMP-荧光素，当与IMAP结合时，该GMP-荧光素在荧光偏振(Δmp)方面产生大的增加。因此，以Δmp的减少来检测磷酸二酯酶的抑制。

酶测定法

材料：除IMAP试剂(反应缓冲剂，结合缓冲剂，FL-GMP和IMAP小珠)外，所有化学物质均得自西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)(St.Louis，MO)，IMAP试剂得自分子仪器公司(Sunnyvale，CA)。

测定法：用50％甘油将3’，5’-环-核苷酸特异性牛脑磷酸二酯酶(西格玛公司(Sigma)，St.Louis，MO)重构成2.5U/ml。一个单位的酶在pH7.5、30℃下每分钟将1.0μmol 3’，5’-cAMP水解成5’-AMP。向1999份反应缓冲剂(30μM CaCl₂，10U/ml钙调蛋白(西格玛公司P2277)，10mM Tris-HCl pH7.2，10mM MgCl₂，0.1％ BSA，0.05％ NaN₃)中加入一份酶，从而获得1.25mU/ml的终浓度。将99μl被稀释的酶溶液加入到平底96孔聚苯乙烯板的各孔中，向其中加入1μl溶解于100％ DMSO中的供试化合物。将化合物与酶混合并在室温下预孵育10分钟。

在384孔微量滴定板中，通过将4份酶和抑制剂混合物与1份底物溶液(0.225μM)合并来开始FL-GMP转化反应。将该反应在黑暗中在室温下孵育15分钟。通过向384孔板的各孔中加入60μl结合试剂(1:400 IMAP小珠在补加了1:1800消泡剂稀释液的结合缓冲剂中的稀释液)来停止反应。将板在室温下孵育1小时以使IMAP结合进行完全，然后放置到Envision多模式微量滴定板读数器(珀金埃尔默公司(PerkinElmer)，Shelton，CT)中，以测量荧光偏振(Δmp)。

以Δmp降低形式测得的GMP浓度的降低表示PDE活性的抑制。通过在存在0.0037nM至80,000nM范围内的8至16个化合物浓度的情况下测量酶活性、然后用药物浓度-ΔmP作图来测定IC₅₀值，其使得可以用非线性回归软件(XLFit；IDBS，Cambridge，MA)来估算IC₅₀值。

实施例26

PDE1抑制剂对雌性大鼠性反应的影响

如Mani等人，Science(2000)287：1053中所述的那样来测量PDE1抑制剂对雌性大鼠脊柱前凸反应的影响。将卵巢切除和插套管的野生型大鼠用2μg雌激素灌注，然后24小时后脑室内(icv)注射孕酮(2μg)、本发明的PDE1抑制剂(0.1mg，1.0mg或2.5mg)或芝麻油介质(对照)。测试这些大鼠在存在雄性大鼠情况下的脊柱前凸反应。用脊柱前凸商(LQ＝脊柱前凸数/10登骑(mounts)x100)来定量脊柱前凸反应。接受化合物1或2、甚至在0.1mg下的雌激素-灌注的雌性大鼠的LQ高于75，与接受孕酮的雌激素灌注的大鼠相似并显著高于(p<0.001)接受基质的雌激素-灌注的大鼠。

Claims (16)

1.游离形式、盐形式或前体药物形式的2-(任选地杂)芳基甲基-3-(任选地杂)芳基氨基-[2H]-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮。

2.根据权利要求1所述的化合物，其是游离形式、盐形式或前体药物形式的式I的化合物：

式I

(i)R₁是H或烃基；

(ii)R₂是H、烃基、环烃基、卤代烃基、烃基氨基烃基、羟基烃基、芳基烃基、杂芳基烃基或烃氧基芳基烃基；

(iii)R₃是杂芳基甲基或式A的被取代的苄基

式A

其中R₈、R₉、R₁₁和R₁₂独立地是H或卤素；R₁₀是卤素、烃基、环烃基、卤代烃基、芳基、杂芳基、芳基羰基或杂芳基羰基、烃氧基羰基、氨基羰基；

(iv)R₄是芳基或杂芳基；和

(v)R₅是H、烃基、环烃基、杂芳基、芳基、对-苄基芳基；

其中“烃”或“烃基”是指C_1-6烃基，“环烃基”是指C_3-6环烃基。

3.根据权利要求2所述的化合物，其是游离形式、盐形式或前体药物形式的式II的化合物：

式II

其中

R₁是甲基；

R₂是H、烃基、环烃基、杂芳基、芳基、卤代烃基、烃基氨基烃基、羟基烃基、芳基烃基或烃氧基芳基烃基；

R₄是苯基；

R₅是H；和

R₁₀是苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、噻二唑基、卤代烃基、烃基磺酰基、噁二唑基、氨基羰基或三唑基；

其中“烃”或“烃基”是指C₁-₆烃基。

4.化合物，其选自

a.2-(联苯-4-基甲基)-7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

b.2-(联苯-4-基甲基)-7-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

c.2-(联苯-4-基甲基)-3-((联苯-4-基甲基)(苯基)氨基)-7-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

d.7-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(三氟甲基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

e.7-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

f.5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

g.7-环戊基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

h.3-(环戊基(苯基)氨基)-5-甲基-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

i.7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

j.7-环己基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

k.5-甲基-7-新戊基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

l.(S)-5-甲基-7-(2-甲基丁基)-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

m.5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-7-(2，2，2-三氟乙基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

n.(R)-7-(3-羟基-2-甲基丙基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

o.7-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

p.2-(4-(1H-吡唑-1-基)苄基)-7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

q.2-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苄基)-7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

r.4-((7-异丁基-5-甲基-4，6-二氧代-3-(苯基氨基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[3，4-d]嘧啶-2-基)甲基)苯甲酰胺

s.7-异丁基-5-甲基-2-(4-(甲基磺酰基)苄基)-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

t.7-异丁基-5-甲基-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苄基)-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

u.2-(4-(5-氟嘧啶-2-基)苄基)-7-异丁基-5-甲基-3-(苯基氨基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

v.5-甲基-3-(苯基氨基)-2-(4-(吡啶-2-基)苄基)-7-((四氢呋喃-2-基)甲基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

w.5-甲基-7-新戊基-3-(苯基氨基)-2-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

x.3-(4-氟苄基氨基)-7-异丁基-5-甲基-2-(4-(三氟甲基)苄基)-2H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮

其是游离形式或药学上可接受的盐形式。

5.药物组合物，其包含权利要求1、2、3或4中任意一项所述的化合物以及药学上可接受的稀释剂或载体。

6.治疗下列病症中任何一种的方法：帕金森病、多动腿、震颤、运动障碍、亨廷顿舞蹈病、阿尔茨海默病和药物诱导的运动失调；抑郁、注意力缺陷障碍、注意缺陷多动症、双相性障碍、焦虑、睡眠障碍、发作性睡眠、认知功能损害、痴呆、图雷特综合征、孤独症、脆性X染色体综合征、精神兴奋剂戒断和/或药物成瘾；脑血管疾病、中风、充血性心脏病、高血压、肺动脉高压和/或性功能障碍；哮喘、慢性阻塞性肺病和/或变应性鼻炎以及自身免疫性和炎性疾病；和/或女性性功能障碍、运动性闭经、无排卵、绝经、绝经期症状、甲状腺功能减退症、经前期综合征、早产、不孕、不规则月经周期、异常子宫出血、骨质疏松、多发性硬化、前列腺肿大、前列腺癌、甲状腺功能减退症、雌激素-诱导的子宫内膜增生或癌；和/或以表达PDE1的细胞中低水平的cAMP和/或cGMP(或者cAMP和/或cGMP信号发送途径抑制)和/或多巴胺D1受体信号发送活性降低为特征的任何疾病或病症；和/或可通过增强孕酮信号发送而被改善的任何疾病或病症；所述方法包括给需要该类治疗的患者施用有效量的权利要求1、2、3或4中任意一项所述的化合物或权利要求5所述的药物组合物。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述病症是帕金森病。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述病症是认知功能损害。

9.根据权利要求6所述的方法，其中所述病症是发作性睡眠。

10.根据权利要求9所述的方法，其进一步包括给需要其的患者施用选自中枢神经系统兴奋剂、莫达非尼、抗抑郁药和γ羟基丁酸盐的一种或多种化合物。

11.根据权利要求6所述的方法，其中所述病症是女性性功能障碍。

12.根据权利要求11所述的方法，其进一步包括给需要其的患者施用选自雌二醇、雌三醇、雌二醇酯类、孕酮和孕激素类的一种或多种化合物。

13.制备权利要求1、2、3或4所述的化合物的方法，其包括使吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮与其中X是离去基团且R₃是任选地被取代的苄基的式X-R₃的化合物反应和分离由此获得的权利要求1、2、3或4所述的化合物。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮是式IIIC的化合物：

其中R₁、R₂和R₄如权利要求2或3中针对式I或II所定义。

15.制备权利要求1、2、3或4所述的化合物的方法，其包括使吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮与其中X是离去基团且R₂如权利要求2或3中针对式I所定义的式X-R₂的化合物反应和分离由此获得的权利要求1、2或3所述的化合物。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述吡唑并[3，4-d]嘧啶-4，6(5H，7H)-二酮是式IIh的化合物：

其中R₁、R₃和R₄如权利要求2或3针对式I或II所定义。