CN101434971A

CN101434971A - 还原型辅酶q10的制备方法

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Publication number: CN101434971A
Application number: CNA2008100723698A
Authority: CN
Inventors: 朱法科; 张水陆; 林木荣; 周赞兴
Original assignee: XIAMEN KINGDOMWAY VITAMIN CORP
Current assignee: XIAMEN KINGDOMWAY VITAMIN CORP
Priority date: 2008-12-12
Filing date: 2008-12-12
Publication date: 2009-05-20

Abstract

还原型辅酶Q10的制备方法，涉及一种含羟基或氧－金属基的化合物，尤其是涉及一种使用氧化还原酶生产高纯度(＞98.5％)稳定性好的还原型辅酶Q10的方法。提供一种改进的还原型辅酶Q10的制备方法。将纯度大于99％的辅酶Q10用混合溶剂溶解，得产物A，混合溶剂用溶剂和水配制，溶解辅酶Q10时，按体积/质量比，混合溶剂的用量为混合溶剂∶辅酶Q10＝4～30∶1；将产物A倒入反应器中，将氧化还原酶按酶质量/产物A体积＝0.5～1/100的比例加入产物A中，搅拌，反应完成后，将含有还原型辅酶Q10的溶液进行超滤浓缩结晶，即可得到高纯度、性能稳定的还原型辅酶Q10产品。

Description

还原型辅酶Q10的制备方法

技术领域

本发明涉及一种含羟基或氧-金属基的化合物，尤其是涉及一种使用氧化还原酶生产高纯度(>98.5％)稳定性好的还原型辅酶Q10的方法。

背景技术

1957年，美国威斯康辛大学的格林博士领导下的一个研究小组首先从牛心脏中分离了一种黄色物质。接着，卡尔·福克斯博士以几微克样品测定了它的结构，它就是以后几十年里被广大科学工作者深入研究和广泛应用于医药、保健、食品及化妆品行业，成为给人类健康带来巨大好处的天然物质即辅酶Q10(氧化型)。

辅酶Q10的发现被称为营养研究方面的里程碑。米切尔博士因发现了辅酶Q10在能量产品过程中的作用，获得了1987年的诺贝尔奖，而福克斯也因为他研究辅酶Q10在医药方面的应用而获美国医药成就的最高奖。

自发现辅酶Q10以来，世界各国的学者进行了广泛深入的生理化研究，阐明了辅酶Q10在能量代谢中的途径和作用，证实具有以下方面的功效：

辅酶Q10是人体呼吸过程电子传递和ATP产生的基本物质，它在人体内的含量直接决定着人体细胞的能量水平。辅酶Q10通过自身氧化还原结构的变化阻止生物体内脂肪和蛋白质的过氧化，清除自由基；辅酶Q10通过刺激人体代谢而具有减肥作用；辅酶Q10在治疗心血疾病特别是充血性心力衰竭方面有突出的疗效；辅酶Q10在治疗病毒性肝炎、艾滋病、肿瘤有一定的辅助治疗效果；Q10可以有效预防心力衰竭、心率失常、中风、高心压、动脉硬化、肌肉萎缩、牙龈萎缩等疾病；Q10也是优良的化妆品添加剂，具有强大的清除自由基的能力，在皮肤的抗衰老、抗炎症、防皱、美白等方面显示了良好的应用性能。

目前辅酶Q10可以通过化学合成、发酵等方面得到，生产技术是成熟的。

还原型辅酶Q10是近几年提出的辅酶Q10的还原态，与辅酶Q10比较具有以下优点：

1、还原型辅酶Q10可以增加细胞能量，因为氧化型在细胞中要还原成还原型才可以起抗氧化作用；

2、还原型辅酶Q10在人体中吸收率要高于氧化型的辅酶Q10；

3、氧化型辅酶Q10和还原型辅酶Q10的抗氧化作用机理不同，氧化型辅酶Q10是在细胞内起作用，而还原型辅酶Q10是在人体血液中直接具有抗氧化作用；

4、还原型辅酶Q10在做药品时，可以制备更多的新剂型，例如可以制备针剂，直接进行静脉滴注；

5、氧化型辅酶Q10是黄色，而还原型辅酶Q10是白色，更容易生产各种形式的化妆品；

6、与辅酶Q10比较，还原型辅酶Q10有更高的在人身体中的生物利用率，该化合物以用作优良食品、营养功能食品、保健用食品、营养剂、饮料、化妆品、动物药物、治疗药物等应用领域。

正因为还原型辅酶Q10有许多优点，所以世界范围内的科学家都在高度关注和研究还原型辅酶Q10的生产和应用开发。目前已公开发表的还原型辅酶Q10的专利有：

中国专利CN1551864A(WO2003/006412)还原型辅酶Q10的制备方法；

中国专利CN1551863A(WO2003/006410)制备还原型辅酶Q10油性产物的方法；

中国专利CN1861556A生产具有优异处理性质的还原型辅酶Q10晶体的方法；

中国专利CN1527807A(WO2003/006408)利用防氧化效果高的溶剂生产还原型辅酶Q10的方法；

中国专利CN1723181A(WO2004/063131)纯化还原型辅酶Q10的方法；

中国专利CN1599603A(WO2003/032967)还原型辅酶Q10的稳定方法；

中国专利CN1620413A(WO2003/062182)还原型辅酶Q10的稳定方法和组合物；

中国专利CN1525951A(WO2003/008363)还原型辅酶Q10D的稳定方法及酸性结晶方法；

中国专利CN101087598A(WO2006/075502)含有还原型辅酶Q10的固体制剂及其制造方法；

中国专利CN1849287A(WO2005/033054)稳定性优异的还原型辅酶Q10结晶及含有还原型辅酶Q10结晶的组合物。

以上公开的专利申请采用的共同技术路线是以高纯度辅酶Q10为原料，用不同的类型的溶剂溶解，采用化学法把辅酶Q10还原成还原型辅酶Q10，再采用不同的技术进行纯化、结晶生产性能稳定的还原型辅酶Q10。这些专利的生产方法存在的共同缺点是：在还原时要加入化学化合物，而这些化合物对产品的品质产生影响，需要通过复杂的方法把这些化合物去掉，并进行不断的纯化，因而造成生产工艺复杂，生产成本高，产品稳定性差。

发明内容

本发明的目的是针对现有的在制备还原型辅酶Q10的方法中所存在的需要在还原时加入化学化合物，而这些化合物对产品的品质产生影响，需要通过复杂的方法把这些化合物去掉，并进行不断的纯化，因而造成生产工艺复杂、生产成本高、产品稳定性差等问题，提供一种改进的还原型辅酶Q10的制备方法。

本发明的技术方案是使用氧化还原酶的生物技术。氧化还原酶(oxidordeuctase)是能催化两分子间发生氧化还原作用的酶的总称。其中氧化酶(oxidase；oxydase)能催化物质被氧气所氧化的作用，脱氢酶(dehydrogenase)能催化从物质分子脱去氢的作用，主要是存在与细胞中。氧化还原酶催化底物的氧化或还原，反应时需要电子供体或受体，因此在反应时添加必要的催化剂。

本发明包括以下步骤：

1)将纯度大于99％的辅酶Q10用混合溶剂溶解，得产物A，混合溶剂用溶剂和水配制，溶解辅酶Q10时，按体积/质量比，混合溶剂的用量为混合溶剂∶辅酶Q10＝(4～30)∶1；

2)将步骤1)所得的产物A倒入反应器中，将氧化还原酶按酶质量/产物A体积＝(0.5～1)/100的比例加入产物A中，搅拌，反应完成后，将含有还原型辅酶Q10的溶液进行超滤浓缩结晶，即可得到高纯度、性能稳定的还原型辅酶Q10产品。

在步骤1)中，溶剂最好选自乙醇、丙酮、乙酸乙酯、已烷、环已烷、石油醚等中的至少一种，优选丙酮、乙醇中的至少一种；按体积比混合溶剂中水的含量最好为0％～2％，优选0.15％～1％；溶解的温度可为40～100℃，优选40～60℃；所述溶解最好在氮气保护下进行。

在步骤2)中，搅拌的温度最好为40～50℃，搅拌的时间最好为8～28h，搅拌的速度最好为30～90rpm/min；所述超滤可分为二级，第一级采用聚丙烯腈膜，孔径为1～5μm；第二级采用聚丙烯腈膜，孔径为0.001～0.02μm，通过二级超滤可以将含有还原型辅酶Q10的溶液中残留的酶及微小的不溶杂质全部排除；所述浓缩是将含有还原型辅酶Q10的溶液浓缩到溶液中还原型辅酶Q10的浓度为质量百分比5％～10％；所述结晶是将浓缩后的溶液在5～26℃的条件下，结晶6～24h，晶体在40～45℃下真空干燥4～10h，即得高纯性能优良的还原型辅酶Q10；所述反应最好用99.9％氮气充入反应器内保护下进行，尽可能减少与空气的接触；氧化还原酶可选自EC1.1.1氧化还原酶或EC1.2.1氧化还原酶等，优选EC1.2.1氧化还原酶(定义为辅酶Q10氧化还原酶)。EC1.1.1氧化还原酶可选自氢或电子受体为醇、NAD或NADP的氧化还原酶，EC1.2.1氧化还原酶可选自氢或电子受体为醛或酮基、NAD或NADP的氧化还原酶。

为了提高酶氧化还原反应的速度，可在步骤2)的反应(氧化还原反应)中加入催化剂，催化剂最好选自金属离子、酸碱化合物或辅酶等，金属离子选自Fe²⁺、Fe³⁺、Cu²⁺、Co³⁺、Na⁺、K⁺、Mg²⁺、Ca²⁺等中的一种；酸碱化合物选自有机酸、无机酸或无机碱，优选乙酸、抗坏血酸、盐酸和碳酸钠，更优选抗坏血酸；辅酶选自烟酰胺泉嘌呤二核苷酸(NAD)、烟酰胺泉嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、黄素单核苷酸(FMN)、黄素泉嘌呤二核苷酸(FAD)等中的一种，优选烟酰胺泉嘌呤二核苷酸或烟酰胺泉嘌呤二核苷酸磷酸。

在传统的概念中酶是催化水溶性底物的反应，在有机溶剂中不仅不能反应，还会引起酶蛋白的变化，但实验证明，这种概念是片面的，许多酶在无水或含微水(<2％)的有机溶剂中，酶不仅能催化特殊反应，而且稳定性会显著提高，由于介质的改变，使酶具备了不少水相中所不具备的特点，如有利于疏水底物的反应，能明显提高酶的热稳定性，能催化在水中不能进行的反应，能改变反应的平衡点，提高酶的专一性，易于实现固定化，产品容易回收等优点。

与辅酶Q10比较，还原型辅酶Q10有更高的在人身体中的生物利用率，该化合物可以用作优良食品、营养功能食品、保健用食品、营养剂、饮料、化妆品、动物药物、治疗药物等应用领域。

具体实施方式

以下实施例将进一步说明本发明的内容，但这些实施例绝不限定本发明的保护范围。

辅酶Q10/还原型辅酶Q10的HPLC分析方法：

柱：SYMMETRY C18(250×4.6mm)；

流动相：C₂H₅OH∶CH₃OH＝4∶3(V/V)；

检测波长：210nm；

流速：1ml/min；

柱温：30℃。

实施例1

取50g 99.3％的辅酶Q10，在40℃的条件下溶于500ml含去离子0.6％的已烷中，倒入1000ml的三口反应瓶中。加入辅酶Q10氧化还原酶3g，再加入5ml含有1g抗坏血酸的去离子水，充99.9％的氮气保护，温度保持在45～50℃，搅拌进行氧化还原反应，搅拌速度180rpm/min，反应18h至溶液透明无色停止反应。把反应完成后的溶液真空抽入旋转蒸发瓶中，在40～45℃时的条件下，真空蒸馏已烷，待已烷全部蒸出后，真空抽入无水乙醇1000ml并加热至60℃，保温用0.02μm的聚丙烯腈膜过滤溶液，滤液放入2000ml的三角瓶中，充氮气并密封瓶口，自然降温至20～25℃，结晶8h，过滤晶体，晶体在40～45℃的条件下真空干燥8h，即得45.6g还原型辅酶Q10，HPLC检测纯度为99.2％。

实施例2

取50g 99.3％的辅酶Q10，在50℃的条件下溶于900ml含去离子水1％的丙酮中，倒入2000ml的三口反应瓶中，加入乙酸10ml，加入辅酶Q10氧化还原酶4g，充99.9％的氮气保护，温度保持在45～50℃，搅拌进行氧化还原反应，搅拌速度180rpm/min，反应18h至溶液透明无色停止反应。把反应完成后的溶液保温45～50℃，用孔径0.02μm聚丙烯腈膜过滤溶液，滤液放入2000ml的三角瓶中充氮气并密封瓶口，自然降温至室温并再降温至10℃，结晶24h。过滤晶体，晶体在40～45℃的条件下真空干燥8h，即得43.1g还原型辅酶Q10，HPLC检测纯度为99.3％。

实施例3

取50g 99.3％的辅酶Q10，在60℃条件下溶于1000ml含去离子水1％的无水乙醇中，倒入2000ml的三口反应瓶中，加入5ml含有1g抗坏血酸的去离子，加入辅酶Q10氧化还原酶4g，充99.9％的氮气保护，温度保护在45～50℃，搅拌进行氧化还原反应，搅拌速度180rpm/分，反应20h至溶液透明无色停止反应。把反应完成后的溶液保温45～50℃用孔径0.02μm聚丙烯腈膜过滤溶液，滤液放入2000ml的三角瓶中，充氮气并密封瓶口，自然降温至20～25℃，结晶8h。过滤晶体，晶体在40～45℃时的条件下真空干燥8h，即得44.3g还原型辅酶Q10，HPLC检测纯度为99.3％。

实施例4

1)将纯度大于99％的辅酶Q10用混合溶剂溶解，得产物A，混合溶剂用溶剂和水配制，溶解辅酶Q10时，按体积/质量比，混合溶剂的用量为混合溶剂∶辅酶Q10＝10∶1；溶剂为乙醇，按体积比混合溶剂中水的含量为0.15％，溶解的温度为60℃，所述溶解在氮气保护下进行。

2)将步骤1)所得的产物A倒入反应器中，将氧化还原酶按酶质量/产物A体积＝0.3/100的比例加入产物A中，搅拌，反应完成后，将含有还原型辅酶Q10的溶液进行超滤浓缩结晶，即可得到高纯度、性能稳定的还原型辅酶Q10产品。搅拌的温度为45℃，搅拌的时间为10h，搅拌的速度为90rpm/min；超滤分为二级，第一级采用聚丙烯腈膜，孔径为3μm；第二级采用聚丙烯腈膜，孔径为0.005μm，通过二级超滤将含有还原型辅酶Q10的溶液中残留的酶及微小的不溶杂质全部排除；浓缩是将含有还原型辅酶Q10的溶液浓缩到溶液中还原型辅酶Q10的浓度为质量百分比7％；所述结晶是将浓缩后的溶液在20℃的条件下，结晶6h，晶体在40℃下真空干燥10h，即得高纯性能优良的还原型辅酶Q10；反应用99.9％氮气充入反应器内保护下进行，尽可能减少与空气的接触；氧化还原酶为EC1.2.1氧化还原酶(定义为辅酶Q10氧化还原酶)。

实施例5

1)将纯度大于99％的辅酶Q10用混合溶剂溶解，得产物A，混合溶剂用溶剂和水配制，溶解辅酶Q10时，按体积/质量比，混合溶剂的用量为混合溶剂∶辅酶Q10＝20∶1；溶剂为丙酮，按体积比混合溶剂中水的含量为2％，溶解的温度为40℃，溶解在氮气保护下进行。

2)将步骤1)所得的产物A倒入反应器中，将氧化还原酶按酶质量/产物A体积＝0.5/100的比例加入产物A中，搅拌，反应完成后，将含有还原型辅酶Q10的溶液进行超滤浓缩结晶，即可得到高纯度、性能稳定的还原型辅酶Q10产品。搅拌的温度为43℃，搅拌的时间为28h，搅拌的速度为30rpm/min；所述超滤分为二级，第一级采用聚丙烯腈膜，孔径为1μm；第二级采用聚丙烯腈膜，孔径为0.001μm，通过二级超滤将含有还原型辅酶Q10的溶液中残留的酶及微小的不溶杂质全部排除；浓缩是将含有还原型辅酶Q10的溶液浓缩到溶液中还原型辅酶Q10的浓度为质量百分比8％；结晶是将浓缩后的溶液在10℃的条件下，结晶10h，晶体在43℃下真空干燥8h，即得高纯性能优良的还原型辅酶Q10；反应用99.9％氮气充入反应器内保护下进行，尽可能减少与空气的接触；氧化还原酶为EC1.2.1氧化还原酶。

实施例6

1)将纯度大于99％的辅酶Q10用混合溶剂溶解，得产物A，混合溶剂用溶剂和水配制，溶解辅酶Q10时，按体积/质量比，混合溶剂的用量为混合溶剂∶辅酶Q10＝4∶1；溶剂为乙酸乙酯或已烷，按体积比混合溶剂中水的含量为1％；溶解的温度为80℃，溶解在氮气保护下进行。

2)将步骤1)所得的产物A倒入反应器中，将氧化还原酶按酶质量/产物A体积＝0.7/100的比例加入产物A中，搅拌，反应完成后，将含有还原型辅酶Q10的溶液进行超滤浓缩结晶，即可得到高纯度、性能稳定的还原型辅酶Q10产品。搅拌的温度为47℃，搅拌的时间为15h，搅拌的速度为80rpm/min；超滤分为二级，第一级采用聚丙烯腈膜，孔径为2μm；第二级采用聚丙烯腈膜，孔径为0.01μm，通过二级超滤将含有还原型辅酶Q10的溶液中残留的酶及微小的不溶杂质全部排除；浓缩是将含有还原型辅酶Q10的溶液浓缩到溶液中还原型辅酶Q10的浓度为质量百分比5％；结晶是将浓缩后的溶液在5℃的条件下，结晶24h，晶体在42℃下真空干7h，即得高纯性能优良的还原型辅酶Q10；反应用99.9％氮气充入反应器内保护下进行，尽可能减少与空气的接触；氧化还原酶为氢或电子受体为醇的氧化还原酶。

实施例7

1)将纯度大于99％的辅酶Q10用混合溶剂溶解，得产物A，混合溶剂用溶剂和水配制，溶解辅酶Q10时，按体积/质量比，混合溶剂的用量为混合溶剂∶辅酶Q10＝30∶1；溶剂为环已烷，按体积比混合溶剂中水的含量为0.5％；溶解的温度为45℃，溶解在氮气保护下进行。

2)将步骤1)所得的产物A倒入反应器中，将氧化还原酶按酶质量/产物A体积＝0.8/100的比例加入产物A中，搅拌，反应完成后，将含有还原型辅酶Q10的溶液进行超滤浓缩结晶，即可得到高纯度、性能稳定的还原型辅酶Q10产品。搅拌的温度为40℃，搅拌的时间为20，搅拌的速度为50rpm/min；超滤分为二级，第一级采用聚丙烯腈膜，孔径为4μm；第二级采用聚丙烯腈膜，孔径为0.015μm，通过二级超滤将含有还原型辅酶Q10的溶液中残留的酶及微小的不溶杂质全部排除；所述浓缩是将含有还原型辅酶Q10的溶液浓缩到溶液中还原型辅酶Q10的浓度为质量百分比6％；结晶是将浓缩后的溶液在15℃的条件下，结晶15h，晶体在44℃下真空干燥5h，即得高纯性能优良的还原型辅酶Q10；反应用99.9％氮气充入反应器内保护下进行，尽可能减少与空气的接触；氧化还原酶为氢或电子受体为醛或NAD的氧化还原酶。

实施例8

1)将纯度大于99％的辅酶Q10用混合溶剂溶解，得产物A，混合溶剂用溶剂和水配制，溶解辅酶Q10时，按体积/质量比，混合溶剂的用量为混合溶剂∶辅酶Q10＝15∶1；溶剂为石油醚，按体积比混合溶剂中水的含量为0.8％；溶解的温度为100℃，溶解在氮气保护下进行。

2)将步骤1)所得的产物A倒入反应器中，将氧化还原酶按酶质量/产物A体积＝1/100的比例加入产物A中，搅拌，反应完成后，将含有还原型辅酶Q10的溶液进行超滤浓缩结晶，即可得到高纯度、性能稳定的还原型辅酶Q10产品。搅拌的温度为50℃，搅拌的时间为8h，搅拌的速度为60rpm/min；超滤分为二级，第一级采用聚丙烯腈膜，孔径为5μm；第二级采用聚丙烯腈膜，孔径为0.02μm，通过二级超滤将含有还原型辅酶Q10的溶液中残留的酶及微小的不溶杂质全部排除；浓缩是将含有还原型辅酶Q10的溶液浓缩到溶液中还原型辅酶Q10的浓度为质量百分比10％；结晶是将浓缩后的溶液在26℃的条件下，结晶20h，晶体在45℃下真空干燥4h，即得高纯性能优良的还原型辅酶Q10；反应用99.9％氮气充入反应器内保护下进行，尽可能减少与空气的接触；氧化还原酶为氢或电子受体为醛或NADP的氧化还原酶。

实施例9

与实施例1类似，其区别在于为了提高酶氧化还原反应的速度，在氧化还原反应中加入催化剂，催化剂为金属离子、酸碱化合物或辅酶等，金属离子选自Fe²⁺、Fe³⁺、Cu²⁺、Co³⁺、Na⁺、K⁺、Mg²⁺、Ca²⁺等中的一种；酸碱化合物选自有机酸、无机酸或无机碱，优选乙酸、抗坏血酸、盐酸和碳酸钠，更优选抗坏血酸；辅酶选自烟酰胺泉嘌呤二核苷酸(NAD)、烟酰胺泉嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、黄素单核苷酸(FMN)、黄素泉嘌呤二核苷酸(FAD)等中的一种，优选烟酰胺泉嘌呤二核苷酸或烟酰胺泉嘌呤二核苷酸磷酸。

Claims

1.还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将纯度大于99％的辅酶Q10用混合溶剂溶解，得产物A，混合溶剂用溶剂和水配制，溶解辅酶Q10时，按体积/质量比，混合溶剂的用量为混合溶剂∶辅酶Q10＝4～30∶1；

2)将步骤1)所得的产物A倒入反应器中，将氧化还原酶按酶质量/产物A体积＝0.5～1/100的比例加入产物A中，搅拌，反应完成后，将含有还原型辅酶Q10的溶液进行超滤浓缩结晶，即得还原型辅酶Q10产品。

2.如权利要求1所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于在步骤1)中，溶剂选自乙醇、丙酮、乙酸乙酯、已烷、环已烷、石油醚中的至少一种。

3.如权利要求1所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于在步骤1)中，按体积比混合溶剂中水的含量为0％～2％。

4.如权利要求1所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于在步骤1)中，溶解的温度为40～100℃；所述溶解在氮气保护下进行。

5.如权利要求1所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于在步骤2)中，搅拌的温度为40～50℃，搅拌的时间为8～28h，搅拌的速度为30～90rpm/min。

6.如权利要求1所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于在步骤2)中所述超滤分为二级，第一级采用聚丙烯腈膜，孔径为1～5μm；第二级采用聚丙烯腈膜，孔径为0.001～0.02μm。

7.如权利要求1所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述浓缩是将含有还原型辅酶Q10的溶液浓缩到溶液中还原型辅酶Q10的浓度为质量百分比5％～10％。

8.如权利要求1所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述结晶是将浓缩后的溶液在5～26℃的条件下，结晶6～24h，晶体在40～45℃下真空干燥4～10h。

9.如权利要求1所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于在步骤2)中，氧化还原酶选自EC1.1.1氧化还原酶或EC1.2.1氧化还原酶，EC1.1.1氧化还原酶选自氢或电子受体为醇、NAD或NADP的氧化还原酶，EC1.2.1氧化还原酶选自氢或电子受体为醛或酮基、NAD或NADP的氧化还原酶。

10.如权利要求1所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于在步骤2)的反应中加入催化剂，催化剂选自金属离子、酸碱化合物或辅酶，金属离子选自Fe²⁺、Fe³⁺、Cu²⁺、Co³⁺、Na⁺、K⁺、Mg²⁺、Ca²⁺中的一种；酸碱化合物选自有机酸、无机酸或无机碱；辅酶选自烟酰胺泉嘌呤二核苷酸、烟酰胺泉嘌呤二核苷酸磷酸、黄素单核苷酸、黄素泉嘌呤二核苷酸中的一种。