CN101430261A - 一种塑料包埋制片方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种骨髓组织塑料包埋制片方法，该方法包括固定、脱钙、脱水、浸透、包埋、切片和染色过程，其中固定、脱钙、脱水、浸透过程在超声波高频振谐下进行。本塑料包埋制片方法与传统塑料包埋制片法相比，时间从50小时缩短到15小时左右，约节省3个工作日。大大减少塑料包埋制片的时间，从而减少了患者的经济负担，蠃来宝贵的治疗时间。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物标本的包埋制片方法，尤其是一种塑料包埋制片方法。
背景技术
塑料包埋是指它的包埋剂是一种甲基丙烯酸羟乙酯、聚乙二醇-400、N-N＝甲基苯胺的混合试剂，用于替代石蜡。用塑料包埋剂制作的切片，与石蜡切片相比，具有细胞收缩小，结构清晰，分辨率高等优点。传统的塑料包埋的制片方法采用下述工艺步骤：
1、固定：用升汞、重铬酸钾、甲醛混合固定液(PCF)固定组织标本。固定时间>12h。
2、脱钙：用体积分数2％硝酸对组织标本脱钙2.5h。
3、脱水：梯度脱水，对组织标本脱水，用体积分数80％乙醇脱水40mim-95％乙醇脱水40mim-100％乙醇脱水40mim(2次)，纯丙酮吸附组织标本中残留乙醇15mim。
4、浸透：浸透液选用甲基丙烯酸羟乙脂(HEMA)，浸透脱水后的组织标本，在浸透进行到一半时，用甲基丙烯酸羟乙脂更换一次甲基丙烯酸羟乙脂，继续浸透，约12h。
5、包埋：(1)从浸透液最后一步液体中取出组织标本，用滤纸吸去多余浸透液；
(2)把组织标本放入包埋盒底部，放平，同时把标签放入，包埋盒壁的一侧数字正面向外；
(3)包埋液：甲液(甲基丙烯酸羟乙脂)：乙液(聚乙二醇-400、N-N＝甲基苯胺的混合液)＝100∶1.6—100∶2，将包埋液搅拌均匀立即加满盛满组织标本的内包埋盒，在包埋盒口盖一塑料薄膜，使液体与空气隔离促进表面聚合；
(4)将包埋盒放入4℃冰箱内冷藏，时间大于12h。取出后放室温2h，变硬后即可去掉包埋盒。
6、切片：用钢锉磨去包埋块底部，暴露出组织切面，用切片机将组织切面切成1—3μm薄切片，在洁净水面中展平，捞至洁净玻片上。并在60—80℃电热板上充分烤1.5-2.5h。此过程需3h左右。
7、染色：用苏木素—姬娒萨—伊红(H-Giemsa-E)染色，然后用中性树胶封片，即可得到塑料包埋制片。
上述得到的塑料包埋制片用图文分析系统根据组织形态的特点即可分析结果。这种传统常规操作程序大致需要4个工作日(注：在>12小时操作中过夜的时间未计算在工作日内)，严重制约了制片速度，长期以来是组织学领域的一个难以解决的困难。对于急需获得病理结果的患者来说，4天时间太长，尤其是门诊病人、远道求医的患者或者外地甚至国外的患者，4天的时间的等待、住宿及消费会消耗患者大量的时间和金钱，从而使患者承担严重的经济负担、消耗保贵的治疗时间。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种制片时间短的塑料包埋制片方法，以减少患者的经济负担和等待时间。
为解决上述技术问题，本发明方法包括固定、脱钙、脱水、浸透、包埋、切片和染色过程，其中固定、脱钙、脱水、浸透在超声波高频振谐下进行。
本发明方法进一步的工艺步骤为：
(1)、固定：用升汞、重铬酸钾、甲醛混合固定液固定组织标本3—5h；
(2)、脱钙：用体积分数2％硝酸对组织标本脱钙15—25mim；
(3)、脱水：用体积分数60％、70％、80％、95％、100％乙醇溶液对脱钙后的组织标本梯度脱水，各浓度乙醇溶液分别脱水7—12mim，然后用纯丙酮吸附组织标本中残留乙醇3—6mim；
(4)、浸透：用甲基丙烯酸羟乙脂浸透脱水后的组织标本2—5h；
(5)、包埋：从浸透液取出的组织标本放入包埋盒内，然后在包埋盒内加入包埋液后密封，将包埋盒在4℃冷藏40mim—2h，然后去掉包埋盒；
(6)、切片：用切片机将包埋后的组织切面切成1—3μm薄切片，将薄切片在60—80℃电热板上充分烤1.5—2.5h；
(7)、染色：用苏木素—姬娒萨—伊红将薄切片染色，然后用中性树胶封片，即可得到塑料包埋制片。
本发明原理是：超声波以每秒80万次高频振谐使生物组织、有机溶剂、浸透液(HEMA)随高速振荡而产生周期性缩张运动，在一定温度下加速分子运动，使生物组织的水分更容易被有机溶剂替代出来，并加速有机溶剂、浸透液(HEMA)浸透到生物组织内。由于分子运动加快，加速了组织与各种试剂的反应，使整个操作程序在短时间内完成。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本发明方法与传统塑料包埋制片法相比，时间从50小时缩短到15小时左右，约节省3个工作日。大大减少塑料包埋制片的时间，从而减少了患者的经济负担，蠃来保贵的治疗时间。
具体实施方式
本塑料包埋制片方法使用生物组织快速处理仪(型号规格：TKY-KC)在超声波为每秒80万次高频振谐的环境下进行包埋切片。
实施例1：本塑料包埋制片方法在超声波每秒80万次高频振谐下，采用下述工艺步骤，
1、固定：用升汞、重铬酸钾、甲醛混合固定液固定组织标本4h；
2、脱钙：用体积分数2％硝酸对组织标本脱钙20mim；
3、脱水：采用梯度脱水，即用体积分数60％、70％、80％、95％乙醇溶液对脱钙后的组织标本分别脱水10mim，再用体积分数100％乙醇脱水5min，更换100％乙醇后，再脱水5min；最后用纯丙酮吸附组织标本中残留乙醇4mim；
4、浸透：用甲基丙烯酸羟乙脂浸透脱水后的组织标本1.5h，更换甲基丙烯酸羟乙脂后再浸透1.5h。
5、包埋：(1)从浸透液最后一步液体中取出组织标本，用滤纸吸去多余浸透液；
(2)把组织标本放入包埋盒底部，放平，同时把标签放入，包埋盒壁的一侧数字正面向外；
(3)包埋：包埋液是甲液∶乙液＝100∶1.6～100∶2(体积比)混合而成；其中甲液是甲基丙烯酸羟乙脂，乙液为聚乙二醇-400∶N-N＝甲基苯胺＝15∶1(体积比)的混合液。将包埋液搅拌均匀立即加满盛满组织标本的内包埋盒，在包埋盒口盖一塑料薄膜，使液体与空气隔离促进表面聚合；
(4)将包埋盒放入4℃冰箱内冷藏1h。包埋盒取出变硬后即可去掉包埋盒。
6、切片：用钢锉磨去包埋块底部，暴露出组织切面，用切片机将组织切面切成1—3μm薄切片，在洁净水面中展平，捞至洁净玻片上。并在60—80℃电热板上充分烤2h。
7、染色：用苏木素—姬娒萨—伊红将薄切片染色，然后用中性树胶封片，即可得到塑料包埋制片。
实施例2：本塑料包埋制片方法在超声波每秒80万次高频振谐下，采用下述工艺步骤，
(1)、固定：用升汞、重铬酸钾、甲醛混合固定液固定组织标本3h；
(2)、脱钙：用体积分数2％硝酸对组织标本脱钙25mim；
(3)、脱水：脱水，用体积分数60％、70％、80％、95％、100％乙醇溶液对脱钙后的组织标本梯度脱水，各浓度乙醇溶液分别脱水7mim，然后用纯丙酮吸附组织标本中残留乙醇3mim；
(4)、浸透：用甲基丙烯酸羟乙脂浸透脱水后的组织标本5h；
(5)、包埋：从浸透液取出的组织标本放入包埋盒内，然后在包埋盒内加入包埋液后密封，将包埋盒在4℃冷藏40mim，然后去掉包埋盒；
(6)、切片：用切片机将包埋后的组织切面切成1—3μm薄切片，将薄切片在60—80℃在烤片机上烤2.5h；
(7)、染色：用苏木素—姬娒萨—伊红将薄切片染色，然后用中性树胶封片，即可得到塑料包埋制片。
实施例3：本塑料包埋制片方法在超声波每秒80万次高频振谐下，采用下述工艺步骤，
(1)、固定：用升汞、重铬酸钾、甲醛混合固定液固定组织标本5h；
(2)、脱钙：用体积分数2％硝酸对组织标本脱钙15mim；
(3)、脱水：脱水，用体积分数60％、70％、80％、95％、100％乙醇溶液对脱钙后的组织标本梯度脱水，各浓度乙醇溶液分别脱水12mim，然后用纯丙酮吸附组织标本中残留乙醇6mim；
(4)、浸透：用甲基丙烯酸羟乙脂浸透脱水后的组织标本2h；
(5)、包埋：从浸透液取出的组织标本放入包埋盒内，然后在包埋盒内加入包埋液后密封，将包埋盒在4℃冷藏2h，然后去掉包埋盒；
(6)、切片：用切片机将包埋后的组织切面切成1—3μm薄切片，将薄切片在60—80℃在烤片机上烤1.5h；
(7)、染色：用苏木素—姬娒萨—伊红将薄切片染色，然后用中性树胶封片，即可得到塑料包埋制片。
Claims (9)
1、一种塑料包埋制片方法，该方法包括固定、脱钙、脱水、浸透、包埋、切片和染色过程，其特征在于该方法中固定、脱钙、脱水、浸透在超声波高频振谐下进行。
2、根据权利要求1所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于该方法采用下述工艺步骤：
(1)、固定：用升汞、重铬酸钾、甲醛混合固定液固定组织标本3—5h；
(2)、脱钙：用体积分数2％硝酸对组织标本脱钙15—25mim；
(3)、脱水：用体积分数60％、70％、80％、95％、100％乙醇溶液对脱钙后的组织标本梯度脱水，各浓度乙醇溶液分别脱水7—12mim，然后用纯丙酮吸附组织标本中残留乙醇3—6mim；
(4)、浸透：用甲基丙烯酸羟乙脂浸透脱水后的组织标本2—5h；
(5)、包埋：从浸透液取出的组织标本放入包埋盒内，然后在包埋盒内加入包埋液后密封，将包埋盒在4℃冷藏40mim—2h，然后去掉包埋盒；
(6)、切片：用切片机将包埋后的组织切面切成1—3μm薄切片，将薄切片在60—80℃电热板上充分烤1.5—2.5h；
(7)、染色：用苏木素—姬娒萨—伊红将薄切片染色，然后用中性树胶封片，即可得到塑料包埋制片。
3、根据权利要求1或2所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于所述固定过程中的固定时间为4h。
4、根据权利要求1或2所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于所述脱钙过程中的脱钙时间为20min。
5、根据权利要求1或2所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于所述脱水过程中在用体积分数100％乙醇脱水时，更换一次同等浓度乙醇溶液进行脱水。
6、根据权利要求1或2所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于所述浸透过程中的浸透时间为3h。
7、根据权利要求1或2所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于所述浸透过程中，更换一次甲基丙烯酸羟乙脂进行浸透。
8、根据权利要求1或2所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于所述包埋过程中的包埋液是体积比甲液∶乙液＝100∶1.6～100∶2混合而成；其中甲液是甲基丙烯酸羟乙脂，乙液为体积比聚乙二醇-400∶N-N＝甲基苯胺＝15∶1的混合液。
9、根据权利要求1或2所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于所述包埋过程中，包埋盒在4℃冷藏1h。
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