CN101424613A - 一种寄生虫虫卵检测方法 - Google Patents

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Abstract

一种寄生虫虫卵检测方法，按以下步骤进行，并按以下公式计算：首先将被检动物粪便定量，用定量粪便的3～5倍体积水调成羹；用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤；将滤液沉淀15－60分钟，或离心，弃上清液，再加水沉淀，重复三次；弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量；充分摇匀沉淀液后，用滴管迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内；最后在显微镜下观察计数器两个计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数按以下公式计算EPG值。EPG＝(计数器两小方格内的虫卵数×粪便沉淀液体积)/(粪便重量×0.2)。本发明操作简单，快速，结果可靠。适用于对人畜通过粪便排出卵的绝大多数寄生虫虫卵检测，特别是对迄今为止难于检测的片形吸虫、棘头虫、前后盘吸虫的虫卵能定性、定量检测，适用范围更广。

Description

一种寄生虫虫卵检测方法
技术领域
本发明涉及到一种寄生虫卵的快速而准确的定性、定量检测技术。
背景技术
目前，寄生虫虫卵的检测方法主要有3种：涂片法、麦氏法和斯氏法。
涂片法就是用镊子或小棒取少许新鲜粪便，置载玻片上，滴加清洁常水或50％甘油水数滴，混匀，除去粗渣，加盖玻片后，置显微镜下检查。制片厚度以通过粪便液膜能模糊识别片下字迹为宜。该法简便易行，适用于检查各种球虫卵囊等，但检出率较低并不能定量。
麦氏法就是利用了虫卵的漂浮原理，先要用两片载玻片做成虫卵计数器，即在一较狭的载玻片上刻长宽各1cm的方格，每一方格内再刻平等线数条，两载玻片间填上1.5mm厚的玻片条，并以粘合剂粘合。计数时取粪便2g置研钵中，先加入10mL水，搅匀，再加饱和食盐水50mL，混匀后立即吸取粪液充满两个计数室，静置1～2min，镜检计数两个计数室的虫卵数。计数室容积为1×1×0.15＝0.15mL，0.15mL内含粪2÷60×0.15＝0.005g，两个计数室则为0.010g。故数得的虫卵数乘以100即为每克粪便中虫卵数(EPG值)。该方法只能定性、定量检测较小虫卵的寄生虫病，但受室温、漂浮时间等因素的影响，并且不能用于片形吸虫、前后盘吸虫、蛭形巨吻棘头虫等虫卵的定量计数。
斯氏法用于片形吸虫虫卵的计数。在56mL和60mL处有刻度的小三角瓶或大试管内，先加入0.4％的氢氧化钠溶液至56mL刻度处，再加入被检粪便约4g，使液面上升到60mL刻度处，再放入一些玻璃珠，塞紧容器口，用力振荡，使粪完全散开，然后立即吸取0.15mL的粪液，滴于2～3张载玻片上，加盖玻片，在显微镜下顺序统计各种或某种虫卵数。因0.15mL粪液中实际含原粪量为0.15×4/60＝0.01g，因此，检出的虫卵数乘以100，即为每克粪便的虫卵数(EPG值)。该方法易产生重复或遗漏计数虫卵，结果误差很大，不能用于大规模的临床检测。
以上的几种方法都不能对危害家畜健康的一些常见寄生虫病(如片形吸虫病、棘头虫病、前后盘吸虫病等)的病情程度进行规范化诊断。
发明内容
针对传统方法对寄生虫虫卵检测中，准确性较差和不能检测片形吸虫、棘头虫的虫卵等问题，本发明的目的是提供一种快速，准确，简便，适用范围广的寄生虫虫卵定性、定量检测方法。
为了达到以上目的，本发明的技术方案为：
1.将被检动物粪便定量(中型动物最小称样量2克，大动物5克，检测片形吸虫虫卵时，最小称样量中型动物粪便为4.7克、大动物粪便27.5克)，用定量粪便的3～5倍体积水调成羹。
2.用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3.将滤液沉淀15-60分钟，或4000g离心5min；弃上清液，再加水沉淀，重复3次。
4.弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中小动物粪便沉淀液为5～10毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为3～5毫升)。
5.充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内。
6.在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7.按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
Figure A200810044544D00051
本发明操作简单，快速，结果可靠。检测猪蛔虫虫卵，本方法比麦氏法的查出率高30-45％。适用于对人畜通过粪便排出卵的绝大多数寄生虫虫卵检测，特别是对迄今为止难于检测的片形吸虫、棘头虫、前后盘吸虫的虫卵能定性、定量检测，适用范围更广。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行进一步的说明。
实施例1
片形吸虫虫卵检测
1.定量称取被检中型动物粪便4.7克或大型动物粪便27.5克以上，用定量粪便的3倍体积水调成羹。
2.用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3.将滤液沉淀30分钟；弃上清液，再加水沉淀，重复三次。
4.弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中型动物粪便沉淀液为5毫升，每克被检大型动物粪便沉淀液为3毫升)。
5.充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内。
6.在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7.按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
Figure A200810044544D00061
实施例2
前后盘吸虫虫卵检测.
1.定量称取被检家畜粪便2克以上，用定量粪便的3倍体积水调成羹。
2.用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3.将滤液沉淀30分钟；弃上清液，再加水沉淀，重复三次。
4.弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中型动物粪便沉淀液为3毫升，每克被检大型动物粪便沉淀液为3毫升)。
5.充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内。
6.在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7.按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
Figure A200810044544D00062
实施例3
猪蛭形巨吻棘头虫虫卵检测
1.定量称取被检家畜粪便2克以上，用定量粪便的3倍体积水调成羹。
2.用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3.将滤液沉淀15分钟；弃上清液，再加水沉淀，重复三次。
4.弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量，即每克被检猪粪便沉淀液为5毫升。
5.充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内。
6.在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7.按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
Figure A200810044544D00071
实施例4
线虫虫卵检测
1.定量称取被检动物粪便2克以上，用定量粪便的5倍体积水调成羹。
2.用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3.将滤液沉淀30分钟；弃上清液，再加水沉淀，重复三次。
4.弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中小动物粪便沉淀液为10毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为5毫升)。
5.充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内。
6.在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7.按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
Figure A200810044544D00072
实施例5
线虫虫卵检测
1.定量称取将被检动物粪便2克以上，用定量粪便的5倍体积水调成羹。
2.用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3.将滤液沉淀60分钟；弃上清液，再加水沉淀，重复三次。
4.弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中小动物粪便沉淀液为10毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为5毫升)。
5.充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内。
6.在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7.按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
Figure A200810044544D00081
实施例6
绦虫虫卵检测
1.定量称取被检动物粪便2克以上，用定量粪便的5倍体积水调成羹。
2.用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3.将滤液沉淀30分钟；弃上清液，再加水沉淀，重复三次。
4.弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中小动物粪便沉淀液为10毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为5毫升)。
5.充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内。
6.在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7.按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
Figure A200810044544D00091
实施例7
吸虫虫卵检测
1.定量称取被检动物粪便2克以上，用定量粪便的5倍体积水调成羹。
2.用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3.将滤液沉淀30分钟；弃上清液，再加水沉淀，重复三次。
4.弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中小动物粪便沉淀液为5毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为5毫升)。
5.充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内。
6.在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7.按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
Figure A200810044544D00092
实施例8
蠕虫虫卵检测
1.定量称取被检动物粪便2克以上，用定量粪便的5倍体积水调成羹。
2.用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3.将滤液4000g离心5分钟。
4.弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中小动物粪便沉淀液为10毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为3毫升)。
5.充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内。
6.在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7.按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
实施例9
球虫卵囊检测
1.定量称取被检动物粪便2克以上，用定量粪便的5倍体积水调成羹。
2.用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3.将滤液4000g离心5分钟。
4.弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中小动物粪便沉淀液为10毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为3毫升)。
5.充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内。
6.在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7.按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
Figure A200810044544D00102

Claims (2)

1.一种寄生虫虫卵检测方法，其特征在于检测方法按以下步骤进行，并按以下公式计算：
(1)将被检动物粪便定量，用定量粪便的3～5倍体积水调成羹。
(2)用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
(3)将滤液沉淀15-60分钟，或离心；弃上清液，再加水沉淀，重复三次。
(4)弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检小动物粪便沉淀液为5～10毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为3～5毫升)。
(5)充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内。
(6)在显微镜下观察计数器两个计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
(7)按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
2.根据权利要求1所述寄生虫卵为片形吸虫虫卵，或前后盘吸虫虫卵，或猪蛭形巨吻棘头虫虫卵，或线虫虫卵，或吸虫虫卵，或绦虫虫卵，或蠕虫虫卵，或球虫卵囊。
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