CN101422507A - 含有黄芩苷和白术内酯的组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含有黄芩和白术的组合物,该组合物是从药材黄芩、白术中提取而得,所述组合物同时含有黄芩苷、白术内酯(I,II,III),黄芩苷含量质量百分比为13%~27%,白术内酯(I,II,III)总含量质量百分比为0.5~2%。所述的组合物的制备方法可以是乙醇水溶液热回流提取加大孔树脂制备方法,又可用超临界提取方法。以黄芩、白术提取物为药效成分,添加药学上可接受的药用辅料可以制备药物组合物或单体制备成药物制剂,用于治疗和/或预防胎动不安及其保护婴儿。
Description
技术领域
本发明涉及一种含有黄芩苷和白术内酯的药物组合物,以及其制备方法和在安胎保婴类中药的应用,尤其涉及该药物组合物在治疗和/或预防胎动不安及其保护婴儿中的应用。
背景技术
胎漏、胎动不安和滑胎,即西医的先兆性流产和习惯性流产。习惯性流产属于中医学“滑胎”范畴之内,指凡堕胎、小产连续发生3次以上者,妇女妊娠12周内,胚胎自然殒堕者,称为“堕胎”。妊娠12~28周内,胎儿巳成形而自然殒堕者,称其为“小产”。
西医多是从了解卵巢和黄体的功能入手,主张黄体期按黄体功能逐步给予黄体技术治疗,用黄体酮来改善内膜发育,抑制子宫收缩、提高胚胎种植率和妊娠率。但黄体治疗仅适用于单纯黄体功能不全的流产,对原发性孕激素分泌不足者盲目使用大量孕激素保胎,若胚胎有缺陷,则会干扰自然淘汰。而对黄体功能正常者滥用孕激素,也会干扰内源性激素的生成而不利于保胎。另外,黄体酮保胎失败后还会使子宫收缩功能减弱,降低排异能力,致使死胎滞留宫内和胚胎组织粘连难以及时排出而增加手术难度。还有报道在妊娠早期大量使用黄体酮会使胎儿产生心脏缺陷的危险性,对女婴,有可能引起生殖器男性化或发育障碍,出现假两性畸形。因此,黄体酮并非为万全保胎药。还如,西药安胎素(绒毛膜促性腺素),用于不孕症、黄体功能不足、功能性子宫出血、隐睾症、男性性腺功能减退症、先兆流产或习惯性流产等,但本品溶液极不稳定,而且不耐热,配成后4日之内用完为宜;注射前需作过敏试验。
总之,目前各种西药的应用尚不能完全促使形成理想的内膜环境。
而在协调内分泌功能,以期达到各种细胞群间同步发育和平衡这一点上,中医药的辨证治疗较化学激素类药相比具有明显的优势,可以提高孕期血清激素水平、改善盆腔内环境或调节神经体液内分泌功能。中药保胎作用是多因素多机制综合作用的结果,既可作用于受体调节性激素平衡和卵巢功能,又对子宫平滑肌的收缩频率、活动率均有显著抑制作用。
中药黄芩、白术配伍,被历史上金、元时期的名医朱丹溪《丹溪心法》誉为“安胎圣药”。许多安胎方剂中均有黄芩、白术,其安胎效果已被千百年来的医疗实践所证明。云“产前安胎,白术黄芩为妙药也。黄芩,安胎圣药也,俗人不知,以为寒而不敢用,反谓温热之药可养胎,殊不知产前宜清热,令血循经而不妄行,故能养胎”。黄芩之安胎效用,古今本草书籍和医家多有论述。云“黄芩、白术安胎圣药,俗以黄芩为寒而不敢用,盖不知胎孕宜清热凉血,血不妄行,乃能养胎。黄芩乃上、中二焦药,能降火下行,白术能补脾也。”明确提出了黄芩与白术同为安胎圣药之说。张元素也曾提出:“黄芩凉心,治肺中湿热,泻火上逆,疗上热,目中肿赤,瘀血壅盛,上部积血,补膀胱寒水,安胎,养阴退阳。”《滇南本草》日:“黄芩,上行泻肺火,下行泻膀胱火,(治)男子五淋,女子暴崩,调经清热,胎有火热不安,清胎热,除六经实火实热。”
黄芩(Scutellaria baicalensi.s Georgi)为常用中药之一,具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎等功效,其主要有效成分为黄酮类化合物。目前,从黄芩中已发现41种黄酮类化合物,其中含量较高并具有明显药理作用的是黄芩甙、黄芩素、汉黄芩素和汉黄芩甙。现代药理研究证明黄芩不仅具有明显的抗菌消炎、抗过敏、抗氧化、抗致癌和抗病毒的作用,而且对心血管也具有一定作用。对其药理学的具体研究如下:
1.抗氧化和清除自由基作用
多数黄酮类化合物具有一定的抗氧化作用,黄酮结构中的2,3双键和4位羰基以及3或5位羟基对黄酮的抗氧化作用有重要贡献。黄芩中已知的黄酮大都具有酚羟基结构,因此是较好的抗氧化剂。黄芩素可抑制由铁诱导的鼠肝线粒体脂质过氧化,对前脑匀浆脂质过氧化水平的抑制能力及二苯基苦味肼(DPPH)诱导的自由基的清除能力与槲皮素相当。作为治疗癫痫的日本和汉药TJ一960中的成分之一,黄芩素是其中已知主要成分中最强的自由基清除剂。在鼠肝微粒体脂质过氧化实验中,黄芩素减少了抗坏血酸与FeCL3体系中硫化巴比妥酸活性物质(TBARs)的产生(GaoD,Sakuraik,kotohM,《黄芩素铁复合物对微粒体脂质过氧化反应的抑制作用》Biochem Mol Int.1996,39(2):215),谭廷华等的研究表明(谭廷华、刘爱芳、王新英等,“黄芩甙与芸香甙对·OH的清除作用”[J].《西安医科大学学报》1997,18(1):41~43),黄芩给药剂量为50和100mg·kg时均可显著抑制cch所致小鼠肝脂质过氧化损伤作用。
2.抗菌、抗病毒作用
黄芩具有广谱的抗菌和抗病毒作用。吕小迅等(吕小迅,周玉珍,吕华冲“黄芩、黄精抗真菌作用活性部位实验研究”[J].《广东药学院学报》,1995,11(3):180~182)研究了黄芩醇溶性部分和水溶性部分的抗真菌作用,发现黄芩的醇溶性部分对Tr的抑制作用较强,对其他供试菌种抑制作用则较弱;其水溶性部分对Tr,Tg,Ef,Cn和Ca等5种供试菌种均有较强抑制作用;同时证明黄芩的有效成分主要存在于其水溶性部分。
3.抗炎、抗变态作用
致病菌激活宿主免疫细胞产生各种炎性介质,如IL-113、PGE2和LTB4,它们与牙龈炎和牙槽骨吸收有着非常密切的关系。Chung评价了黄芩甲醇提取物及其黄酮类化合物的消炎和激活龈成纤维细胞作用,提示黄芩甲醇提取物、黄芩甙、黄芩素和汉黄芩素均无细胞毒性,可使脂多糖诱导的IL-18的合成降低50%以上。
4.抗肿瘤作用
Shinichi I等(参见Shinichi Ikemoto,kaiunobu Sugimuka,Naomasa Yoshida,eta1.黄芩根及其主要成分黄芩素、黄芩苷、汉黄芩素对膀胱癌细胞珠的抗肿瘤作用[J].Urology,2000,55(6):951-955)研究了黄芩及其化合物黄芩素、黄芩甙、汉黄芩甙对膀胱癌细胞链的抗肿瘤作用。结果证实,所有药物均可抑制癌细胞的增殖,且存在量效依赖关系,黄芩素表现出最大的抗增殖活性。
5.安胎作用
对该单味中药黄芩的安胎保胎报道如下:研究黄芩苷的促孕保胎作用及其对母胎界面细胞因子的影响。表明黄芩苷可剂量依赖性上调孕酮的含量,促进着床期IFN一7分泌,胚泡附植后又降低IFN一7的含量,调节着床和妊娠期Th1/Th2细胞因子平衡,影响内分泌一免疫网络,有利于胚胎着床和妊娠维持。[马爱团,钟秀会,孟立根等,“黄芩苷对小鼠的保胎作用及其对细胞因子的影响”,《畜牧兽医学报》2007,38(9):983~988]。黄芩在保胎安胎的作用也有报道和研究,研究表明,黄芩苷的了解黄芩对sD大鼠胚胎的影响,表明,黄芩无母体毒性、胚胎毒性、发育毒性和致畸作用。[杨丽萍,杨幼明,杨钧等,“黄芩对大鼠胚胎致畸作用的观察”,《中国比较医学杂志》,2003,13(3):155]
白术系菊科植物Atractylodes macrocephala Koidz的干燥根茎,具有健脾益气、燥湿利水、止汗安胎之效。主治脾虚食少、腹胀泄泻、痰饮眩悸、水肿、自汗、胎动不安等症。近年来的研究表明白术具有利尿、抗菌、抗衰老[白术可提高12月龄以上小鼠红细胞SOD活性,抑制小鼠脑单胺氧化酶B的活性,对抗红细胞自氧化溶血,并有清除活性氧自由基的作用,白术水煎液可显著提高老年小鼠全血谷光甘肽过氧化物酶(GSH—PX)活力,显著降低红细胞中丙二醛含量],抗肿瘤[白术有降低瘤细胞的增值率,降低瘤组织的侵袭性,提高机体抗肿瘤反应能力及对瘤细胞的细胞毒作用,白术对小鼠S实体瘤有明显的抑瘤作用]、对肠胃运动[白术煎剂有明显促进小鼠胃排空及小肠推进功能作用,大剂量白术煎剂能促进小鼠的肠胃推进运动,这种效应主要通过胆碱能受体介导,并与a一受体有关。小剂量白术煎剂对离体豚鼠回肠平滑肌收缩轻度抑制,较大剂量则作用相反,并呈量效反应关系也有一定作用],还能调节免疫功能。
对白术的安胎研究表明:白术醇提取物与石油醚提取物对未孕小鼠离体子宫的自发性收缩及对催产素、益母草引起的子宫兴奋性收缩均呈显著抑制作用,并随药物浓度增加而抑制作用增强,存在量效关系。白术醇提取物还能完全拮抗催产素对豚鼠在体怀孕子宫的紧张性收宿。白术水提取物对离体子宫的抑制作用较弱。实验结果与传统应用白术安胎相吻合,并提示白术对子宫平滑肌具有直接作用,且安胎成分可能主要是脂溶性的。[周海虹、徐兆兰、杨瑞琴,白术提取物对子宫平滑肌作用的研究,安徽中医学院学报,1993,12(4):39]
黄芩白术合用安胎的药理学研究:保胎中药黄芩白术有抑制母体子宫与胎儿界面TNF—a(肿瘤细胞坏死因子,可导致胚胎死亡)分泌的作用。所用药材原料及工艺为:黄芩、白术,按1:1混匀,切碎,加水浸泡1h。水煎2次,合并滤液,蒸发浓缩至每ml含生药1g。[钟秀会、周占祥、孙秉贵等,“黄芩白术对LPS诱导流产小鼠的保胎作用及子宫内TNF一a含量的影响”,《畜牧兽医学报》2000.31(5),430一435.],PXF和黄芩白术能够阻抑LPS诱发的流产,使子宫内IL一10平上升,从而有利于正常妊娠。[钟秀会,史万玉,宫新城等,黄芩白术与PXF对LPS诱导流产小鼠的保胎作用及子宫内IL一10含量的变化研究畜牧兽医学报,2005,36(5),517-520]
综上所述,黄芩、白术各自的安胎的药理学有很多初步的研究,而对二者合用的处方的安胎虽然传统方剂有报道,但对二者药材的比例,二者真正的药理作用部分并不清楚,因此,本发明对传统中药复方进行了系统的筛选和研究,按现代制备工艺制备出有明确安胎疗效的药用部位,该方面的前期制备工艺研究和相关筛选尚为空白。
发明内容
本发明目的是提供一种含有黄芩苷和白术内酯的组合物及其制备方法。
该组合物是从药材黄芩、白术中提取而得,同时含有黄芩苷、白术内酯(I,II,III),重量百分比为:黄芩苷含量为13%~27%,白术内酯(I,II,III)总含量为0.5~2%。
上述组合物制备方法,包括如下步骤:
1)黄芩、白术药材用50~80%的乙醇水溶液热回流提取2~3次,合并提取液;
2)减压浓缩步骤1)所得提取液至原药材的6~10倍体积;
3)以3~5倍体积的水稀释浓缩液,并作澄清处理,取上清液;
4)取上清液,过大孔树脂柱吸附,弃流出液;然后用1~5BV的水,以0.5~2.5BV/小时的流速洗涤所述吸附柱,弃水洗液;之后,以50~80%乙醇以0.5~2.5BV/小时的流速洗脱吸附柱,收集该乙醇洗脱液;两次洗脱液合并;
5)浓缩、干燥乙醇洗脱液,得到提取物。
一种含有黄芩、白术的组合物的制备方法还可以为超临界提取方法,包括如下步骤:黄芩、白术药材根茎烘干→粉碎→超临界二氧化碳萃取→一级减压分离→二级减压分离→提取物;所述的超临界二氧化碳萃取的分离罐中进行一级减压分离压力为5~10Mpa,温度为40℃~60℃;二级减压分离压力为5~7Mpa,温度为35℃~50℃,所述的黄芩、白术药材根茎烘干温度为50℃~80℃,烘干时间为4~7小时。
本发明进一步的目的是提供一种含有黄芩苷、白术内酯的组合物及药学上可接受的载体和/或赋形剂的药物组合物。
本发明更进一步的目的是提供一种含有黄芩苷、白术内酯的药物组合物在制备安胎保婴类药物中的应用,尤其涉及该药物组合物在治疗和/或预防胎动不安及其保护婴儿中的应用。
本发明实施例1、2和3观察了组合物的制备方法。该组合物即可通过实施例1和2的乙醇水溶液热回流提取加大孔树脂制备方法,又可通过实施例3用超临界提取方法制备工艺制备成。同时,在实施例4中,建立了几种关键成分的分析方法和测定,通过研究表明,该组合物的主要有效成分黄芩苷和白术内酯在一定范围内。
为了实现本发明的另一目的,以黄芩苷、白术内酯的组合物为药效成分,添加药学上可接受的药用辅料并通过本领域的常规方法可以制备成药物组合物或单体制备成药物制剂时,药物制剂的剂型可以是:口服给药的剂型诸如片剂、胶囊(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊和微囊)、粉剂、颗粒剂和糖浆剂;非口服给药的剂型诸如注射剂、栓剂、丸剂、凝胶剂和贴剂。除这些常规剂型外,还可以将口服的速释固体制剂(例如片剂、颗粒剂等)和用于口服或非口服给药的缓释制剂(片剂、颗粒、精细颗粒、丸剂、胶囊、糖浆、乳剂、悬浮液、溶液)用于本发明。本发明中的制剂可以是包衣或未包衣的形式,视需要而定。
本发明中的药用辅料包括用于固体制剂的赋形剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、稳定剂、发泡剂、包衣剂等,或用于半固体制剂、液体制剂的溶剂、增溶剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲剂、润肤剂、乳化剂等,此外,也可以根据需要使用其它药用添加剂诸如防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂和调味剂等。
本发明实施例5观察了黄芩、白术方提取物对己烯雌酚所致流产模型的保胎作用。结果表明,与对照组相比,含有黄芩、白术的提取物对己烯雌酚所致流产模型具备显著保胎作用。
本发明的积极效果是,由于本发明选用组分比例合理的含有黄芩苷、白术内酯的组合物,并通过大量试验实施例来验证,明确了安胎疗效的药用部位。为开发新的保胎类新药开辟了新路。
为了更好地理解发明的实质,下面用实施例来详细说明本发明的技术内容,但本发明的内容并不局限于此。
具体实施方式
【实施例1】含有黄芩、白术的提取物的制备
取中药材黄芩、白术各250公斤,加入1吨50%乙醇,加热回流提取3h,滤过,药渣继续加1吨5%乙醇。回流提取2h,滤过,两次提取液合并。减压回收溶剂,温度50-60℃,浓缩到原药材的6倍体积,将浓缩液加3倍热水稀释,离心,去沉淀,取上清液,上样于D101大孔树脂柱(在上样前分别用酸,碱,水,醇对树脂柱进行前处理),上样后先用3BV纯水冲洗,水溶液弃除,改用3BV的50%乙醇洗脱,洗脱液流速为1.5BV/h,收集该乙醇洗脱液,继续减压回收溶剂,收集浸膏,喷雾干燥,即得。
【实施例2】含有黄芩、白术的提取物的制备
取中药材黄芩、白术各250公斤,加入1吨80%乙醇,加热回流提取2h,滤过,药渣继续加1吨80%乙醇。回流提取2h,滤过,两次提取液合并。减压回收溶剂,温度50-60℃,浓缩到原药材的10倍体积,将浓缩液加5倍热水稀释,离心,去沉淀,取上清液,上样于D101大孔树脂柱(在上样前分别用酸,碱,水,醇对树脂柱进行前处理),上样后先用3BV纯水冲洗,水溶液弃除,改用3BV的80%乙醇洗脱,洗脱液流速为1.5BV/h,收集该乙醇洗脱液,继续减压回收溶剂,收集浸膏,喷雾干燥,即得。
【实施例3】含有黄芩、白术的提取物的制备
黄芩、白术药材根茎各1000g,粉碎至粒度为70目,烘干后投入萃取斧内,萃取条件为:萃取压力为25Mpa,温度为50℃,分离条件为:一级减压分离压力为8Mpa,温度为50℃,二级减压分离压力为7Mpa,温度为45℃,80%乙醇为夹带剂,动态运行5小时后,从一级减压分离斧和二级减压分离斧得到总提取液6500ml,萃取率为1.5%。
【实施例4】含有黄芩、白术的提取物的质量分析
下列质量分析中所用样品包括:
样品1:按实施例1的方法得到提取物,共5个批号;
样品2:按实施例3的方法得到5个批号。
1.2 黄芩苷、白术内酯的含量测定
采用高效液相色谱法(HPLC),以黄芩苷、白术内酯苷为对照品,测定含量。
1.2.1 色谱条件
高效液相色谱仪HP1100系列(美国惠普公司),用十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂,C18色谱柱,规格为5μm,4×250mm,柱温(30℃),水(A)和乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,洗脱程序为0min时,A:B按梯度,流速1ml/min,紫外检测器(UV),检测波长280nm,220nm。
1.2.2 标准品溶液配制
称取对照品黄芩苷、白术内酯(I,II,III)约15mg,用适量60%乙醇溶解,定容于100ml的容量瓶中,摇匀,作储备液。精密吸取5ml储备液,60%乙醇定容于50ml的容量瓶中。分别吸取1,1.5,2,4,10mL,转移到10mL容量瓶中,用60%乙醇定容至刻度。以对照品浓度(x)为横坐标,吸收度(y)为纵坐标进行回归计算,
1.2.3 测定方法
取样品适量,精密称定25mg左右,转移至50mL容量瓶中,加60%乙醇40mL,常温下超声30min,取出冷却到室温,加70%乙醇至刻度,摇匀,吸取2mL至10mL容量瓶中,60%乙醇定容至刻度,摇匀,即可测定。根据标准曲线即可计算二者的含量。
1.2.4 结果
样品1,样品2,其黄芩苷含量占总提取物重量比例为13%~27%;,白术内酯(I,II,III)占总提取物重量含量比例为0.5~2%。
以上充分说明了黄芩、白术提取物,可开发成保胎类新药。
【实施例5】含有黄芩、白术的提取物制备及对己烯雌酚所致流产模型的保胎作用。
1.试验材料
(1)受试药物
供试样品:黄芩苷(大于95%,HPLC法),白术内酯(含量95%,HPLC法),黄芩、白术提取物I(实施例1的方法制备),黄芩、白术提取物II(实施例3方法制备),复方药材水提液(黄芩、白术按1:1重量比混匀,切碎,加常水浸泡1h。水煎2次,合并滤液,蒸发浓缩至每ml含生药1g),复方药材醇提液(黄芩、白术按1:1重量比混匀,切碎,加乙醇回流提取2次,合并滤液,蒸发浓缩至每ml含生药1g),黄芩单方水提液(黄芩切碎,加常温水浸泡1h。水煎2次,合并滤液,蒸发浓缩至每ml含生药1g),黄芩单方醇提液(黄芩切碎,加乙醇回流提取2次,合并滤液),黄芩提取物I(按实施例1的制备工艺得来)、黄芩提取物II(按实施例3制备工艺得来的)、白术单方水提液(白术切碎,加常水浸泡1h。水煎2次,合并滤液,蒸发浓缩至每ml含生药1g),白术单方醇提液(白术切碎,加乙醇回流提取2次,合并滤液,蒸发浓缩至每ml含生药1g),白术提取物I(按实施例1制备工艺得来的),白术提取物II(按实施例3制备工艺得来的)。
保存条件:避光、密闭。
配制方法:称取一定量待试样品,用1%羧甲基纤维素钠溶液制成混悬液。
(2)实验方法
取阴栓鼠340只,分组见下表,自妊娠第1日起连续10日灌服以上各提取物;阳性对照组灌服安宫黄体酮。以上各组与己烯雌酚模型组于妊娠第7~8日皮下注射己烯雌酚,空白对照组灌服生理盐水连续10天,于妊娠第7~8天皮下注射生理盐水,剂量与给药组等量。各组动物于妊娠第1日解剖。
(3)实验结果
结果见表1,充分证明含有黄芩、白术的提取物对己烯雌酚所致小鼠流产模型有显著保胎作用。可见含有黄芩、白术的提取物药理效果最好,要远优于其他各组别,优于复方的水,醇提取液,优于各单药材不同制备方法的样品,可见本发明的复方提取物I和II,可开发为新的有潜力的保胎药。
表1 各组对己烯雌酚所致小鼠流产模型有保胎作用。
注意:以上除空白对照组、己烯雌酚模型组、己烯雌酚模型组外,其余各组均加己烯雌酚(5ūg/只,各组使用剂量均折算为原药材对应剂量)。
ΔΔ与空白对照组比较,p<0.01,**与模型对照组比较,p<0.01,*与模型对照组比较,p<0.05。
Claims (6)
1、一种含有黄芩苷和白术内酯的组合物,含有黄芩苷、白术内酯(I,II,III),其特征在于:含有质量百分比为13%~27%的黄芩苷,以及质量百分比为0.5~2%的白术内酯(I,II,III)。
2、一种权利要求1所述组合物的制备方法:包括如下步骤:
1)药材黄芩、白术用50~80%的乙醇水溶液热回流提取2~3次,合并提取液;
2)减压浓缩步骤1)所得提取液至原药材的6~10倍体积;
3)以3~5倍体积的水稀释浓缩液,并作澄清处理,取上清液;
4)取上清液,过大孔树脂柱吸附,弃流出液;然后用1~5BV的水,以0.5~2.5BV/小时的流速洗涤所述吸附柱,弃水洗液;之后,以50~80%乙醇以0.5~2.5BV/小时的流速洗脱吸附柱,收集该乙醇洗脱液;两次洗脱液合并;
5)浓缩、干燥乙醇洗脱液,得到提取物。
3、一种权利要求1所述的组合物的制备方法,为超临界提取方法,包括如下步骤:黄芩、白术药材根茎烘干→粉碎→超临界二氧化碳萃取→一级减压分离→二级减压分离→提取物。
4、根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于:所述的黄芩、白术药材根茎烘干,温度为50℃~80℃,烘干时间为4~7小时;所述的超临界二氧化碳萃取的分离罐中进行一级减压分离压力为5~10Mpa,温度为40℃~60℃;二级减压分离压力为5~7Mpa,温度为35℃~50℃。
5、一种药物组合物,含有权利要求1所述的组合物,并进一步包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。
6、权利要求5所述的药物组合物在制备安胎保婴类药物中的应用。
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