CN101405406A - 诊断胰癌的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了如下鉴别起源不明转移灶的起源的方法：获得含有转移细胞的样品；测量与至少2种不同癌有关的生物标记；将来自生物标记的数据组合进算法中，其中所述算法：相对参照标准化所述生物标记；和采用截止值，其最优化每种生物标记的灵敏度和特异性，使癌的患病率加权和选择起源组织；基于通过算法测定的最高概率，确定起源，或确定该癌不是源自特定癌集合；和任选地测量对一种或多种其它不同癌特异性的生物标记，并为其它生物标记重复所述步骤。

Description

诊断胰癌的方法

发明领域

本发明提供了诊断胰癌的方法。

发明背景

胰癌是一种致死疾病，它在美国的死亡率是每年超过27,000人。Lillemoe等(2000)。约85％诊断出该病的患者具有该疾病超出胰的转移或扩散，且通过外科手术切除几乎不可能治愈。如果较早发现生长，可以在具有好得多的治愈希望下切除。仅20％的肿瘤是可切除的，批准的化疗方案的存活益处相当差，且治愈机会通常是25％或更小。Kroep等(1999)；Wiesenauer等(2003)；Ros等(2001)；Ryu等(2002)；和Ito等(2001)。早期诊断对于较早的成功治疗是必需的。

尽管诊断成像方法如超声波检查(US)、内镜超声波检查(EUS)、双相(dualphase)螺旋计算机X线断层摄影术(CT)、磁共振成像(MRT)、内窥镜下逆行性胆管胰造影术(ERCP)和经皮肤的或EUS-引导的细针抽吸(FNA)取得了进展，但由于放射性和成像特征的相似性和缺少胰癌的特异性临床症状，难以区分胰癌和良性胰疾病、尤其慢性胰腺炎。

已经将相当大努力指向开发用于早期诊断胰癌的工具。尽管如此，确定性诊断经常依赖于在疾病已经进展过早期治疗可以实现的点后不可避免地进行的探查外科手术。20060029987。

外分泌胰的肿瘤可以源自导管、腺泡和基质细胞。80％的胰癌是源自导管上皮。60％这样的肿瘤位于胰的头部，10％在尾部，且30％位于胰体内或是弥散性的。Warshau等(1992)。在组织学上，这些肿瘤是分级和分化的，适度分化的和不良分化的。有些肿瘤分类成腺鳞的(adenosquamous)、粘蛋白的、未分化的或含有成骨细胞-样巨大细胞的未分化的。Gibson等(1978)。

已经阐述了与胰癌有关的各种基因表达概况和遗传标记。20050009067；20040219572；和20030212264。

附图简述

图1描述了显示一组组织中的2个基因的强度的微阵列数据。(A)前列腺干细胞抗原(PSCA)。(B)凝固因子V(F5)。条线图在y-轴上显示了强度，且在x-轴上显示了组织。Panc Ca，胰癌；Panc N，正常胰。

图2描述了从Agilent生物分析仪得到的电泳图谱。使用3小时(A)或16小时(B)蛋白酶K消化，从FFPE组织分离RNA。样品C22(红色)是1年龄块，而样品C23(蓝色)是5年龄块。大小梯显示为绿色。

图3描述了从3种不同qRTPCR方法得到的Ct值的对比：在反转录中的随机六聚体引发，随后用得到的cDNA进行qPCR(RH 2步骤)，在反转录中基因-特异性的(反向引物)引发，随后用得到的cDNA进行qPCR(GSP 2步骤)，或在单步反应中基因-特异性的引发和qRTPCR(GSP1步骤)。将来自11个样品的RNA分入3种方法中，且测量3个基因的RNA水平：β-肌动蛋白(A)、HUMSPB(B)和TTF(C)。用实线指示用每种方法得到的中值Ct值。

图4描述了测定最优化。(A和B)从Agilent生物分析仪得到的电泳图谱。使用3小时(A)或16小时(B)蛋白酶K消化，从FFPE组织分离RNA。样品C22(红色)是1年龄块，而样品C23(蓝色)是5年龄块。大小梯显示为绿色。(C和D)从3种不同qRTPCR方法得到的Ct值的对比：在反转录中的随机六聚体引发，随后用得到的cDNA进行qPCR(RH2步骤)，在反转录中基因-特异性的(反向引物)引发，随后用得到的cDNA进行qPCR(GSP 2步骤)，或在单步反应中基因-特异性的引发和qRTPCR(GSP 1步骤)。将来自11个样品的RNA分入3种方法中，且测量2个基因的RNA水平：β-肌动蛋白(C)、HUMSPB(D)。用实线指示用每种方法得到的中值Ct值。

图5是显示10个标记组在239个样品之间的相对表达水平的热图(heatmap)。红色指示更高的表达。

详细描述

生物标记是指示的标记基因的表达水平的任何标记。该标记可以是直接的或间接的，且可以测量在给定生理参数下，且与内部对照、正常组织或另一种癌相比，该基因的超表达或表达不足。生物标记包括但不限于，核酸(超表达和表达不足，且直接的和间接的)。使用核酸作为生物标记，可以包括本领域已知的任何方法，包括但不限于，测量DNA扩增、RNA、微RNA、杂合性丢失(LOH)、单核苷酸多态性(SNPs，Brookes(1999))、微卫星DNA、DNA甲基化不足或过度甲基化。使用蛋白作为生物标记，可以包括本领域已知的任何方法，包括但不限于，测量量，活性，修饰如糖基化、磷酸化、ADP-核糖基化、遍在蛋白化等，免疫组织化学(IHC)。其它生物标记包括成像、细胞计数和细胞凋亡标记。

本文提供的指示的基因是与特定肿瘤或组织类型相关的那些基因。标记基因可以与许多癌症类型相关，但是前提是，该基因的表达与使用本文所述算法鉴定为对特定起源是特异性的一种肿瘤或组织类型充分相关，该基因可以用于要求保护的发明中，以确定原发起源不明癌(CUP)的起源组织。本领域已知许多与一种或多种癌症相关的基因。本发明提供了优选的标记基因和甚至更优选的标记基因组合。它们在本文中予以详述。

如在“起源组织”中提及的“起源”是指组织类型(肺、结肠等)或组织学类型(腺癌、鳞状细胞癌等)，这取决于特定医学环境，且能被本领域技术人员所理解。

当标记基因含有SEQ ID NO指定的序列时，它与该序列相对应。当基因区段或片段含有足以辨别它是该基因的序列的参照序列或它的互补体的部分时，它与这样的基因的序列相对应。当它的RNA、mRNA或cDNA与具有这样的序列(例如探针)的组合物杂交时，或者，在肽或蛋白的情况下，它由这样的mRNA编码时，基因表达产物与这样的序列相对应。当它含有足以辨别它是该基因或基因表达产物的序列的参照基因表达产物或它的互补体的部分时，基因表达产物的区段或片段与这样的基因或基因表达产物的序列相对应。

本说明书中所述的和要求保护的本发明的方法、组合物、物品和试剂盒，包括一个或多个标记基因。“标记”或“标记基因”在贯穿本说明书中用于指与任何基因相对应的基因和基因表达产物，且其超表达或表达不足与肿瘤或组织类型相关。在表1和15中更详细地描述了优选的标记基因。

表1

CUP组

SEQIDNO：	名称	芯片名称	序列
				1	SP-B	209810_at	gaaaaaccagccactgctttacaggacagggggttgaagctgagccccgcctcacacccacccccatgcactcaaagattggattttacagctacttgcaattcaaaattcagaagaataaaaaatgggaacatacagaactctaaaagatagacatcagaaattgttaagttaagctttttcaaaaaatcagcaattccccagcgtagtcaagggtggacactgcacgctctggcatgatgggatggcgaccgggcaagctttcttcctcgagatgctctgctgcttgagagctattgctttgttaagatataaaaaggggtttctttttgtctttctgtaaggtggacttccagattttgattgaaagtcctagggtgattctatttctgctgtgatttatctgctgaaagctcagctggggttgtgcaagctagggacccattcctgtgtaatacaatgtctgcaccaatgct
2	TTF1	211024_s_at	gtgattcaaatgggttttccacgctagggcggggcacagattggagagggctctgtgctgacatggctctggactctaaagaccaaacttcactctgggcacactctgccagcaaagaggactcgcttgtaaataccaggatttttttttttttttgaagggaggacgggagctggggagaggaaagagtcttcaacataacccacttgtcactgacacaaaggaagtgccccctccccggcaccctctggccgcctaggctcagcggcgaccgccctccgcgaaaatagtttgtttaatgtgaacttgtagctgtaaaacgctgtcaaaagttggactaaatgcctagtttttagtaatctgtacattttgttgtaaaaagaaaaaccactcccagtccccagcccttcacattttttatgggcattgacaaatctgtgtatattatttggcagtttggtatttgcggcgtcagtctttttctgttgtaact
				3	DSG3	205595_at	ccatcccatagaagtccagcagacaggatttgttaagtgccagactttgtcaggaagtcaaggagcttctgctttgtccgcctctgggtctgtccagccagctgtttccatccctgaccctctgcagcatggtaactatttagtaacggagacttactcggcttctggttccctcgtgcaaccttccactgcaggctttgatccacttctcacacaaaatgtgatagtgacagaaagggtgatctgtcccatttccagtgttcctggcaacctagctggcccaacgcagctacgagggtcacatactatgctctgtacagaggatccttgctcccgtctaatatgaccagaatgagctggaataccacactgaccaaatctggatctttggactaaagtattcaaaatagcatagcaaagctcactgtattgggctaataatttggcacttattagcttctctcataaactgatcacgattataaattaaatgtttgggttcataccccaaaagcaatatgttgtcactcctaattctcaagtac
4	HPT1	209847_at	ctgcacccacctacttagatatttcatgtgctatagacattagagagatttttcatttttccatgacatttttcctctctgcaaatggcttagctacttgtgtttttcccttttggggcaagacagactcattaaatattctgtacattttttctttatcaaggagatatatcagtgttgtctcatagaactgcctggattccatttatgttttttctgattccatcctgtgtccccttcatccttgactcctttggtatttcactgaatttcaaacatttgtc
				5	PSCA	205319_at	ttcctgaggcacatcctaacgcaagtttgaccatgtatgtttgcaccccttttccccnaaccctgaccttcccatgggccttttccaggattccnaccnggcagatcagttttagtganacanatccgcntgcagatggcccctccaaccntttntgttgntgtttccatggcccagcattttccacccttaaccctgtgttcaggcacttnttcccccaggaagccttccctgcccaccccatttatgaattgagccaggtttggtccgtggtgtcccccgcacccagcaggggacaggcaatcaggagggcccagtaaaggctgagatgaagtggactgagtagaactggaggacaagagttgacgtgagttcctgggagtttccagagatg

6	F5	204713_s_at	atcctctacagccagatgtcacagggatacgtctactttcacttggtgctggagaattcanaagtcaagaacatgctaagcntaagggacccaaggtagaaagagatcaagcagcaaagcacaggttctcctggatgaaattactagcacataaagttgggagacacctaagccaagacatggttctccttccggaatgaggccctgggaggaccttcctagccaagacactggttctccttccagaatgaggccctggaaggaccctcctagtgatctgttactcttaaaacaaagtaactcatctaagattttggttgggagatggcatttggcttctgagaaaggtagctatgaaataatccaagatactgatgaagacacagctgttaacaattggctgatcagcccccagaatgcctcacgtgcttggggagaaagcacccctcttgccaacaagcctggaaag
				7	MGB1	206378_at	gcagcagcctcaccatgaagttgctgatggtcctcatgctggcggccctctcccagcactgctacgcaggctctggctgccccttattggagaatgtgatttccaagacaatcaatccacaagtgtctaagactgaatacaaagaacttcttcaagagttcatagacgacaatgccactacaaatgccatagatgaattgaaggaatgttttcttaaccaaacggatgaaactctgagcaatgttgaggtgtttatgcaattaatatatgacagcagtctttgtgatttattttaactttctgcaagacctttggctcacagaactgcagggtatggtgagaaaccaactacggattgctgcaaaccacaccttctctttcttatgtctttttact
8	PDEF	220192_x_at	gagtggggcccttaaactggattcaaaaaatgctctaaacataggaatggttgaagaggtcttgcagtcttcagatgaaactaaatctctagaagaggcacaagaatggctaaagcaattcatccaagggccaccggaagtaattagagctttgaaaaaatctgtttgttcaggcagagagctatatttggaggaagcattacagaacgaaagagatcttttaggaacagtttggggtgggcctgcaaatttagaggctattgctaagaaaggaaaatttaataaataattggtttttcgtgtggatgtactccaagtaaagctccagtgactaatatgtataaatgttaaatgatattaaatatgaacatcagttaaaaaaaaaattctttaaggctactattaatatgcagacttacttttaatcatttgaaatctgaactcatttacctcatttcttgccaattactcccttgggtatttactgcgta
				9	PSA	204582_s_at	tggtgtaattttgtcctctctgtgtcctggggaatactggccatgcctggagacatatcactcaatttctctgaggacacagataggatggggtgtctgtgttatttgtggggtacagagatgaaagaggggtgggatccacactgagagagtggagagtgacatgtgctggacactgtccatgaagcactgagcagaagctggaggcacaacgcaccagacactcacagcaaggatggagctgaaaacataacccactctgtcc
10	WT1	206067_s_at	atagatgtacatacctccttgcacaaatggaggggaattcattttcatcactgggagtgtccttagtgtataaaaaccatgctggtatatggcttcaagttgtaaaaatgaaagtgactttaaaagaaaataggggatggtccaggatctccactgataagactgtttttaagtaacttaaggacctttgggtctacaagtatatgtgaaaaaaatgagacttactgggtgaggaaatccattgtttaaagatggtcgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgttgtgttgtgttttgttttttaagggagggaatttattatttaccgttgcttgaaattactgtgtaaatatatgtctgataatgatttgctctttgacaactaaaattaggactgtataagtactagatgcatcactgggtgttgatcttacaagat

本发明提供了诊断胰癌的方法。本发明因而提供了如下确定治疗方向的方法，其中足够早地鉴别出胰癌来避免切除，从而允许化疗方案。

本发明另外提供了组合物，其含有选自SEQ ID NO：39-41和43-45的至少一个分离的序列。本发明另外提供了试剂盒，其用于进行根据本文提供的方法的测定，且另外含有生物标记检测试剂。

本发明另外提供了如下测量基因表达的方法，其中生成SEQ IDNO：42和46的扩增子来测定基因表达，并对比这些扩增子中的至少一个与正常组织基因表达的水平，以诊断胰癌。

本发明另外提供了用于进行本文所述方法的微阵列或基因芯片。

本发明另外提供了诊断/预后组合(portfolio)，其包含本文所述基因组合的分离的核酸序列、它们的互补体、或其部分，其中所述组合足以测量或表征生物样品中的基因表达，与来自不同癌或正常组织的细胞相比，所述生物样品具有转移细胞。

本发明所述的任意方法还可以包括，测量在样品中组成型表达的至少一个基因的表达。

优选地，胰癌的标记是凝固因子V(F5)、前列腺干细胞抗原(PSCA)、整联蛋白、β6(ITGB6)、激肽释放酶10(KLK10)、密蛋白18(CLDN18)、三件套蛋白同工型(trio isoform)(TR10)和类似于FK506结合蛋白的推定蛋白FLJ22041(FKBP10)。优选地，一起测量F5和PSCA的生物标记。除了F5和/或PSCA之外，或作为替代，可以测量ITGB6、KLK10、CLDN18、TR10和FKBP10的生物标记。F5描述在例如20040076955；20040005563；和WO2004031412中。PSCA描述在例如WO 1998040403；20030232350；和WO2004063355中。ITGB6描述在例如WO2004018999；和6339148中。KLK10描述在例如WO2004077060；和20030235820中。CLDN18描述在例如WO2004063355；和WO2005005601中。TR10描述在例如20020055627中。FKBP10描述在例如WO2000055320中。

本发明另外提供了如下提供预后的方法：根据本文所述方法确定胰癌的存在，和鉴别其对应预后。

本发明另外提供了发现生物标记的方法，其包含，测定特定转移灶中标记基因的表达水平，测量标记基因的生物标记，以确定其表达，根据本文所述方法分析标记基因的表达，并确定所述标记基因是否对胰癌是有效特异性的。

本发明另外提供了组合物，其包含选自SEQ ID NO：39-46的至少一个分离的序列。

本发明另外提供了用于进行本文所述测定的试剂盒、物品、微阵列或基因芯片、诊断/预后组合，和报告通过本发明方法得到的结果的患者报告。

已仅仅罕见地发现，仅仅特定核酸序列在组织样品中的存在或不存在，就具有诊断或预后价值。另一方面，关于各种蛋白、肽或mRNA的表达的信息，日益显得重要。仅仅具有表达蛋白、肽或mRNA的潜力的核酸序列(这样的序列称作“基因”)在基因组中的存在本身，不能确定蛋白、肽或mRNA是否在给定细胞中表达。能表达蛋白、肽或mRNA的给定基因是否表达，且在什么程度发生这样的表达，如果发生的话，由许多复杂因素决定。不考虑理解和评价这些因素的困难，测定基因表达可以提供关于重要事件的发生的有用信息，所述重要事件例如肿瘤发生、转移、细胞凋亡和其它临床上相关的现象。在基因表达概况中，可以发现关于基因有活性或无活性程度的相关指示。本发明的基因表达概况用于为CUP提供诊断和治疗患者。

在上述方法中，所述样品可以通过本领域已知的任意方法制备，包括但不限于，大组织制剂和激光捕获显微解剖。大组织制剂可以从例如活组织检查或外科手术样品得到。

在上述方法中，所述基因表达测量也可以包括，测量在样品中组成型表达的至少一个基因的表达水平。

在上述方法中，特异性优选地是至少约40％，且灵敏度是至少约80％。

在上述方法中，样品中相对于良性细胞或正常组织的预定截止水平是至少约1.5-倍超表达或表达不足。

在上述方法中，相对于良性细胞或正常组织，具有转移细胞的样品中的预定截止水平具有至少统计学显著的p-值超表达，优选地p-值小于0.05。

在上述方法中，基因表达可以通过本领域已知的任意方法测量，包括但不限于，微阵列或基因芯片，通过聚合酶链反应(PCR)例如反转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行的核酸扩增，测量或检测由基因编码的蛋白，例如通过对蛋白特异性的抗体，或测量基因的特征，例如DNA扩增、甲基化、突变和等位基因变异。微阵列可以是，例如，cDNA阵列或寡核苷酸阵列。所有这些方法且可以另外含有一种或多种内部对照试剂。

本发明提供了如下生成胰癌预后患者报告的方法，其中确定本文所述任一种方法的结果，且制备展示该结果的报告，和由此生成的患者报告。报告还可以含有患者结果的评估和/或与患者群体有关的危险概率。

样品制备需要收集患者样品。在本发明的方法中使用的患者样品是被怀疑含有患病细胞的样品，所述患病细胞例如在组织细针抽吸(FNA)中从小结获得的细胞。从活组织检查或外科手术样品和激光捕获显微解剖得到的大组织制剂也适用。激光捕获显微解剖(LCM)技术是一种选择要研究的细胞的方式，它使由细胞类型不均匀性造成的变异性最小化。结果，可以容易地检测出正常或良性和癌细胞之间的标记基因表达的中等或小变化。样品也可以包含从外周血提取的循环上皮细胞。这些可以根据许多方法得到，但是最优选的方法是，6136182所述的磁分离技术。一旦已得到含有目标细胞的样品，就使用适当组合中的基因的生物标记获取基因表达概况。

确立基因表达概况的优选方法包括，测定由可以编码蛋白或肽的基因产生的RNA的量。这可以通过下述方法实现：反转录酶PCR(RT-PCR)、竞争RT-PCR、实时RT-PCR、差示RT-PCR、RNA印迹分析和其它相关试验。尽管可能使用单个的PCR反应进行这些技术，但最好扩增从mRNA产生的互补DNA(cDNA)或互补RNA(cRNA)，并通过微阵列分析它。许多不同的阵列构型和它们的生产方法是本领域技术人员已知的，且记载在例如5445934；5532128；5556752；5242974；5384261；5405783；5412087；5424186；5429807；5436327；5472672；5527681；5529756；5545531；5554501；5561071；5571639；5593839；5599695；5624711；5658734；和5700637中。

微阵列技术允许同时测量数千个基因的稳态mRNA水平，从而为鉴定如不受控制的细胞增殖的开始、停滞或调节的作用提供强有力的工具。目前广泛使用两种微阵列技术，第一种是cDNA阵列，且第二种是寡核苷酸阵列。虽然这些芯片存在构造差异，但是基本上所有的下游数据分析和输出是相同的。这些分析的结果，一般是从用于检测与微阵列中已知位置的核酸序列杂交的样品中的cDNA序列的标记探针接收的信号强度的测量值。通常，信号强度与在样品细胞中表达的cDNA以及因此mRNA的量成比例。大量的这种技术是可以获得和有用的。确定基因表达的优选的方法可参见，6271002；6218122；6218114；和6004755。

可以通过比较所述信号强度来分析表达水平。这最好通过生成试验样品与对照样品中基因表达强度的比率矩阵来进行。例如，可以把患病组织的基因表达强度，与从相同类型的良性或正常组织中产生的表达强度进行比较。这些表达强度的比率显示了试验样品与对照样品之间在基因表达中的倍数改变。

选择可以基于统计学检验，所述统计学检验产生与肿瘤原始起源部位相关因子之间的每个基因的差别表达的显著性证据有关的排序表。这样的检验的实例包括ANOVA和Kruskal-Wallis。排序可以用作模型中的权重，所述模型设计用于将这些加权的总和、最高达截止值解释为有利于一类的证据胜过另一类。文献所述的以前证据也可以用于调节权重。

优选实施方案是，通过鉴别稳定的对照集合，和将该集合换算至所有样品间零方差，标准化每个测量值。该对照集合定义为任意单个内源转录物，或内源转录物的集合，其受测定中的系统误差影响，且不清楚其独立于该误差而变化。用样品特异性的因子调节所有标记，所述因子对于对照集合(例如平均值或中值)的任意描述性统计或对于直接测量产生零方差。或者，如果仅与系统误差有关的对照变化的前提不成立，然而进行标准化时产生的分类误差更小，对照集合将仍然按照所述使用。非内源峰值(spike)对照也是有用的，但不是优选的。

基因表达概况也可用很多方式展示。最常用的是将原始荧光强度或比率矩阵排列为树形图，其中的列表示试验样品，且行表示基因。这样排列数据，以便具有相似表达概况的基因彼此接近。每个基因的表达比用颜色显示。例如，小于1的比率(下调)出现在谱的蓝色部分，而大于1的比率(上调)出现在谱的红色部分。商业化的计算机软件程序可用于展示这种数据，包括“GeneSpring”(Silicon Genetics，Inc.)和“Discovery”以及“Infer”(Partek，Inc.)。

在测量蛋白水平以确定基因表达的情况下，本领域已知的任何方法都是适用的，前提是它导致充分的特异性和灵敏性。例如，通过结合对蛋白特异性的抗体或抗体片段，并测量抗体-结合的蛋白的量，可以测量蛋白水平。可以用放射性的、荧光的或其它可检测的试剂标记抗体，以促进检测。检测的方法包括但不限于，酶联免疫吸附测定(ELISA)和免疫印迹技术。

在实施例中描述了在本发明的方法中使用的受调节的基因。与具有不同起源癌的那些患者相比，差别表达的基因在具有特定起源癌的患者中受到上调或下调。上调和下调是相对的术语，指发现的基因表达量相对于一些基线的可检测的差异(超过用于测量它的系统中的噪音的影响)。在该情况下，基于算法来确定基线。然后，使用相同的测量方法，相对于基线水平上调或下调患病细胞中的目标基因。在本上下文中，患病的指身体状态的改变，其中断或扰乱身体功能的正确性能，或具有扰乱身体功能的正确性能的潜力，如细胞的不受控制的增殖所发生的。当一个人的基因型或表型的一些方面与疾病的存在相一致时，即可诊断他患有疾病。但是，进行诊断或预后的行为，可以包括确定疾病/状态问题，例如确定复发的可能性，治疗的类型和治疗监控。在治疗监控中，通过对比随时间推移的基因表达，来确定基因表达概况是否已经变化，或正在变化成与正常组织相一致的模式，从而作出关于给定治疗过程效果的临床判断。

可以将基因分组，从而使得得到的关于组中基因集合的信息提供作出临床上相关判断(例如诊断、预后或治疗选择)的可靠基础。这些基因集合构成本发明的组合。与大多数诊断标记一样，经常需要使用足以作出正确的医学判断的最少数目的标记。这可以防止在进一步分析期间的治疗的延迟，以及时间和资源的无价值的利用。

确立基因表达组合的一个方法是通过使用最优化算法，如广泛用于确立股票组合的均值方差算法。这种方法详细描述于20030194734。实质上，这种方法要求确立一组输入值(金融应用中的股票，这里指通过强度测量的表达)，该输入值将最优化人们使用其接受的返回值(例如形成的信号)，同时使返回值的变异性最小化。很多商业软件程序可以用来进行这种操作。在整个说明书中称为“Wagner软件”的“Wagner联合均值-方差最优化应用(Wagner Associates Mean-Variance OptimizationApplication)”是优选的。这个软件使用“Wagner联合均值-方差最优化文库(Wagner Associates Mean-Variance Optimization Library)”的功能来测定有效的边界，且在Markowitz意义上的最佳组合是优选的。Markowitz(1952)。使用这种类型的软件要求转换微阵列数据，以便当该软件用于其预期的金融分析目的时，数据能以使用股票返回值和风险测量值的方式作为输入值而处理。

选择组合的方法也包括启发式规则的应用。优选地，这些规则是基于生物学和用于产生临床结果的技术的理解而制定的。更优选地，它们可用于从最优化方法中输出。例如，组合选择的均值方差方法可用于癌症受试者中大量差异表达的基因的微阵列数据。从该方法中得到的输出值将是一组最优化的基因，其可包括一些在外周血液中和患病组织中表达的基因。如果用于测试方法中的样品是获自外周血液的，而且在癌中差异表达的某些基因也能在外周血中差异表达，那么就可以应用启发式规则，其中从排除了在外周血中差异表达的那些的有效边界选择组合。当然，通过例如在数据预选择过程中运用该规则，可以在形成有效边界前应用该规则。

也可以应用与所讨论的生物学不必然相关的其它启发式规则。例如，人们可以应用只有规定百分比的组合可被特定的基因或基因的组所代表的规则。商业化可得的软件，如Wagner软件，容易提供这些类型的启发式法。这也是有用的，例如，当准确度和精确度以外的因素(如预期的许可费)，对包括一个或多个基因的希求有影响时。

本发明的基因表达概况也可以与在癌症诊断、预后或治疗监控中有用的其它非遗传诊断方法联合使用。例如，在一些情况下，有益地是把上述的基于基因表达的方法的诊断能力与来自常规标记如血清蛋白标记(例如，癌抗原27.29(“CA 27.29”))的数据结合起来。存在一系列这种标记，包括分析物，如CA 27.29。在一种这样的方法中，从被治疗的患者中周期性采血，然后对其进行酶免疫测定，以测定上述血清标记之一。当标记的浓度提示肿瘤复发或治疗失败时，取得可进行基因表达分析的样品源。当存在可疑块时，可以进行细针抽吸(FNA)，然后如上所述对从块采集的细胞的基因表达概况进行分析。或者，可以从与先前取出肿瘤的组织相邻的区域采集组织样品。当其它测试所得结果不明确时，这种方法是特别有用的。

根据本发明制备的试剂盒，包括用于确定基因表达概况的格式化测定。这些可以包括进行测定所需的所有或一些材料，如试剂和说明书和测定生物标记的介质。

本发明的物品包括用于治疗、诊断、预后和以另外方式评价疾病的基因表达概况的表示法(representation)。这些概况表示法处理至一种可被机器自动读取的介质，如计算机可读介质(磁性的、光学的等)。物品也可包括在这种介质中评价基因表达概况的指令。例如，物品可包括CD ROM，它具有用于对比上述基因组合的基因表达概况的计算机指令。物品也可包括数字化地记录在其中的基因表达概况，以便其可以用于与患者样品的基因表达数据进行比较。或者，概况可以不同的表示形式记录。图形记录就是这样一种格式。例如上面提到的Partek，Inc.的“DISCOVERY”和“INFER”软件中整合的聚类算法，能最好的协助这些数据的显现。

本发明的制品的不同类型，是用于揭示基因表达概况的介质或格式化的测定。这些可以包括，例如，微阵列，其中序列互补体或探针固定于基质上，指示目标基因的序列与之结合，从而产生关于其存在的可读测定。或者，本发明的物品可被制作成试剂盒，以用于进行指示用于检测癌症的目标基因表达水平的杂交、扩增和信号产生。

提供下面的实施例用于解释而不是限制本发明。本文引用的所有参考文献都在本文中引作参考。

实施例1

材料和方法

胰癌标记基因发现。

使用Trizol，从胰肿瘤、正常胰、肺、结肠、乳房和卵巢组织分离RNA。然后，将RNA用于产生扩增的、标记的RNA(Lipshutz等(1999))，其随后在Affymetrix U133A阵列上杂交。然后以2种方式分析数据。

在第一种方法中，过滤该数据集，以仅保留在整个数据集间具有至少2次存在信号(present calls)的那些基因。该过滤剩下14,547个基因。测得2,736个基因与正常胰相对在胰癌中超表达，p值小于0.05。2,736个基因中的45个基因，也比在肺和结肠组织中发现的最大强度超表达至少2倍。最后，发现了6个探针集合，其比在肺、结肠、乳房和卵巢组织中发现的最大强度超表达至少2倍。

在第二种方法中，过滤该数据集，以仅保留在乳房、结肠、肺、和卵巢组织中具有仅仅2次存在信号的那些基因。该过滤剩下4,654个基因。发现4,654个基因中的160个基因，在胰组织(正常和癌症)中具有至少2次存在信号。最后，选择了8个探针集合，它们在胰癌和正常组织之间表现出最大差别表达。

组织样品。

从许多商业卖主，获取共260FFPE转移和原发组织。测试的样品包括：30乳房转移、30结肠直肠转移、56肺转移、49卵巢转移43胰转移、18前列腺原发和2前列腺转移和32其它起源(6胃、6肾、3喉、2肝、1食管、1咽、1胆管、1胸膜、3膀胱、5黑素瘤、3淋巴瘤)。

RNA提取。

基于高纯RNA石蜡试剂盒手册(Roche)所述的方法和试剂，经下述改进，从石蜡组织切片分离RNA。根据包埋的转移灶的大小(2-5mm＝9×10μm，6-8mm＝6×10μm，8-≥10mm＝3×10μm)，将石蜡包埋的组织样品切片，且置于RNA酶/DNA酶1.5ml Eppendorf管中。如下将切片脱蜡：涡旋10-20秒后，在室温在1ml二甲苯中温育2-5分钟。然后离心管，取出上清液，且重复脱蜡步骤。取出上清液后，加入1ml乙醇，将样品涡旋1分钟，离心，且取出上清液。将该过程重复另外一次。取出剩余的乙醇，在55℃烘箱中干燥沉淀5-10分钟，且重新悬浮于100μl组织裂解缓冲液、16μl10％SDS和80μl蛋白酶K。涡旋样品，且在设定为400rpm的热混合仪(thermomixer)中在55℃温育2小时。向每个样品加入325μl结合缓冲液和325μl乙醇，然后混合，离心，且将上清液加到过滤器柱上。将过滤器柱和收集管一起在8000rpm离心1分钟，且抛弃流过物(flow through)。进行一系列连续洗涤(500μl洗涤缓冲液I→500μl洗涤缓冲液II→300μl洗涤缓冲液II)，其中将每种溶液加到柱中，离心并抛弃流过物。然后将柱在最大速度离心2分钟，置于新鲜的1.5ml管中，且加入90μl洗脱缓冲液。在室温温育1分钟，随后在8000rpm离心1分钟后得到RNA。通过加入10μl DNA酶温育缓冲液、2μl DNA酶I，并在37℃温育30分钟，DNA酶处理样品。在加入20μl组织裂解缓冲液、18μl 10％SDS和40μl蛋白酶K后，灭活DNA酶。再次，将325μl结合缓冲液和325μl乙醇加入每个样品中，然后混合，离心，且将上清液加到过滤器柱上。如上所述进行RNA的连续洗涤和洗脱，例外是，使用50μl洗脱缓冲液洗脱RNA。为了消除从柱携带的玻璃纤维污染，将RNA全速离心2分钟，且将上清液移入新鲜的1.5mlEppendorf管。通过从分光光度计得到的OD 260/280读数，定量样品，且将样品稀释至50ng/μl。将分离的RNA在-80℃保藏在无RNA酶的水中备用。

TaqMan引物和探针设计。

适当mRNA参照序列登记号以及Oligo 6.0用于开发

CUP测定(肺标记：人表面活性剂、肺-相关蛋白B(HUMPSPBA)、甲状腺转录因子1(TTF1)、桥粒芯糖蛋白3(DSG3)，结肠直肠标记：钙粘着蛋白17(CDH17)，乳房标记：乳腺珠蛋白(mammaglobin)(MG)、前列腺-衍生的ets转录因子(PDEF)，卵巢标记：wilms瘤1(WT1)，胰标记：前列腺干细胞抗原(PSCA)、凝固因子V(F5)，前列腺标记激肽释放酶3(KLK3))和持家测定β肌动蛋白(β-肌动蛋白)，羟甲基胆色烷合酶(PBGD)。在表2中列出了每个测定的引物和水解探针。通过设计外显子-内含子剪接位点周围的测定，排除基因组DNA扩增。在5′核苷酸处用FAM作为报道染料、且在3′核苷酸处用BHQ1-TT作为内部猝灭染料，标记水解探针。

定量实时聚合酶链反应。

在ABI Prism 7900HT序列检测系统(Applied Biosystems)上，在384孔板中进行基因-特异性的RNA的定量。对于每个热循环仪运行，放大校准器和标准曲线。每个标记的校准器由在来自大鼠肾的载体RNA中以1×10⁵拷贝稀释的靶基因体外转录物组成。持家标记的标准曲线由在来自大鼠肾的载体RNA中以1×10⁷、1×10⁵和1×10³拷贝系列稀释的靶基因体外转录物组成。在每个测定运行中也包括无靶对照，以确保没有环境污染。所有样品和对照都一式两份运行。使用一般实验室用试剂，在10μl反应物中进行qRTPCR，所述反应物含有：RT-PCR缓冲液(50nMN-二(羟乙基)甘氨酸/KOH pH 8.2，115nM KAc，8％甘油，2.5mM MgCl₂，3.5mM MnSO₄，0.5mM每种dCTP、dATP、dGTP和dTTP)，添加剂(2mMTris-Cl pH 8，0.2mM牛清蛋白，150mM海藻糖，0.002％Tween 20)，酶混合物(2U Tth(Roche)，0.4mg/μl Ab TP6-25)，引物和探针混合物(0.2μM探针，0.5μM引物)。遵从下述循环参数：1个在95℃1分钟的循环；1个在55℃2分钟的循环；斜升(Ramp)5％；1个在70℃2分钟的循环；和40个在95℃15秒、58℃30秒的循环。完成PCR反应后，在ABI7900HT Prism软件中设定基线和阈值，且将计算的Ct值输出到Microsoft Excel中。

一步对两步反应

每个反应使用100ng随机六聚体或基因特异性的引物，进行第一链合成。在第一步中，将11.5μl混合物-1(引物和1ug总RNA)加热至65℃5分钟，然后在冰上冷却。将8.5μl混合物-2(1x缓冲液，0.01mM DTT，0.5mM每种dNTP’s，0.25U/μl

10U/μl Superscript III)加入混合物-1，且在50℃温育60分钟，然后在95℃温育5分钟。将cDNA保藏在-20℃备用。如上所述进行两步反应的第二步的qRTPCR，循环参数如下：1个在95℃1分钟的循环；40个在95℃15秒、58℃30秒的循环。精确如前段所述，进行一步反应的qRTPCR。一步和两步反应二者都在100ng模板(RNA/cDNA)上进行。完成PCR反应后，在ABI 7900HTPrism软件中设定基线和阈值，且将计算的Ct值输出到Microsoft Excel中。

热图的产生。

对于每个样品，通过取每个CUP标记的平均Ct，且从平均Ct减去持家标记的平均值，计算ΔCt(ΔCt＝Ct(CUP标记)-Ct(Ave.HK标记))。测定每个样品的每个起源组织标记集合(肺、乳房、前列腺、结肠、卵巢和胰)的最小ΔCt。将具有总最小ΔCt的起源组织评分为1，且所有其它起源组织评分为0。根据病理学诊断，分选数据。用修饰的可行性数据计算Partek Pro，且产生强度图。

结果。

新胰起源肿瘤和癌症状态标记的发现。

首先，分析了5个胰标记候选物：前列腺干细胞抗原(PSCA)、丝氨酸蛋白酶抑制剂，进化枝A成员1(SERPINA1)、细胞角蛋白7(KRT7)、基质金属蛋白酶11(MMP11)和粘蛋白4(MUC4)(Varadhachary等(2004)；Fukushima等(2004)；Argani等(2001)；Jones等(2004)；Prasad等(2005)；和Moniaux等(2004))，其中使用DNA微阵列和一组13个胰管腺癌，5个正常胰组织，和98个来自乳房、结肠直肠、肺和卵巢肿瘤的样品。仅PSCA表现出在高特异性(91/98或93％被正确地鉴别为非胰起源)的中等灵敏度(检测了6/13或46％的胰肿瘤)(图1A)。相反，KRT7、SERPINA1、MMP11和MUC4分别表现出在特异性分别为66％、91％、82％和81％的38％、31％、85％和31％的灵敏度。这些数据与在27个胰起源转移和39个非胰起源转移上为所有标记进行的qRTPCR十分一致，例外是MMP 11，它在qRTPCR和转移中表现出更差的灵敏度和特异性。总之，在骤冻的、原发组织上的微阵列数据可以用作标记使用qRTPCR鉴别FFPE转移为胰起源的能力的良好指示物，但是其它标记可能对最佳性能有用。

因为胰管腺癌从管上皮细胞发展而来，所述管上皮细胞仅占所有胰细胞的小百分比(其中腺泡细胞和胰岛细胞占大多数)，且因为胰腺癌组织含有显著量的邻近正常组织(Prasad等(2005)；和Ishikawa等(2005))，所以已经难以鉴别也能将该器官从器官中区分开的胰癌标记(即，在癌症中上调的)。对于在CUP组中的用途，这样的区分是必需的。第一种查询方法(见材料和方法)返回6个探针集合：凝固因子V(F5)、类似于FK506结合蛋白的推定蛋白FLJ22041(FKBP10)、β6整联蛋白(ITGB6)、转谷氨酰胺酶2(TGM2)、异质核内核糖核蛋白A0(HNRP0)和BAXδ(BAX)。第二种查询方法(见材料和方法)返回8个探针集合：F5、TGM2、配对-样同源域转录因子1(PITX1)、三件套蛋白同工型mRNA(TRIO)、p73H的mRNA(p73)、MGC：10264的一种未知蛋白(SCD)和密蛋白18的2个探针集合。F5和TGM2存在于2种查询结果中，且在二者中，F5似乎最有前途(图1B)。

使用FFPE组织最优化样品制备和qRTPCR。

接着，在检查标记组性能之前，使用固定的组织最优化RNA分离和qRTPCR方法。首先，分析了将蛋白酶K温育时间从16小时减小至3小时的作用。对产量没有作用。但是，当使用更短的蛋白酶K步骤时，有些样品表现出更长的RNA片段(图2)。例如，当RNA是从1年龄块(C22)中分离时，在电泳图谱中没有观察到差异。但是，当RNA是从5年龄块(C23)中分离时，如通过肩上的峰评估的，当使用更短的蛋白酶K消化时，观察到更大部分的更高分子量RNA。当加工其它样品时，该趋势通常会保持，无论FFPE转移的起源器官。总之，缩短蛋白酶K消化时间不牺牲RNA产量，且可能辅助分离更长的、更低降解的RNA。

接着，对比了3种不同的反转录方法：使用随机六聚体的反转录、随后用qPCR(2步)，使用基因-特异性的引物的反转录、随后用qPCR(2步)，和使用基因-特异性的引物的一步qRTPCR。从11个转移分离RNA，并横过3种方法对比β-肌动蛋白、人表面活性剂蛋白B(HUMSPB)、和甲状腺转录因子(TTF)的Ct值(图3)。所有对比都存在统计学显著的差异(p＜0.001)。对于所有3个基因，使用随机六聚体的反转录、随后用qPCR(2步反应)产生最高的Ct值，而使用基因-特异性的引物的反转录、随后用qPCR (2步反应)产生比对应的1步骤反应略微(但是统计学显著的)更低的Ct值。但是，使用基因-特异性的引物的2步骤RTPCR具有更长的反转录步骤。当将每个样品的HUMSPB和TTF Ct值对对应的β-肌动蛋白值标准化时，3种方法之间的标准化的Ct值没有差异。总之，最优化RTPCR反应条件可以产生更低的Ct值，这可以辅助分析更老的石蜡块(Cronin等(2004))，且使用基因-特异性的引物的一步RTPCR反应可以产生与在对应的2步反应中产生的Ct值可比较的Ct值。

CUP qRTPCR测定的诊断性能。

接着，在239FFPE转移上进行12qRTPCR反应(10标记和2个持家基因)。在表2中显示了测定所用的标记。肺标记是人表面活性剂肺-相关蛋白B(HUMPSPB)、甲状腺转录因子1(TTF1)和桥粒芯糖蛋白3(DSG3)。结肠直肠标记是钙粘着蛋白17(CDH17)。乳房标记是乳腺珠蛋白(MG)和前列腺-衍生的Ets转录因子(PDEF)。卵巢标记是Wilms瘤1(WT1)。胰标记是前列腺干细胞抗原(PSCA)和凝固因子V(F5)，且前列腺标记是激肽释放酶3(KLK3)。关于基因描述，见表15。

表2.引物和探针序列、登记号和扩增子长度.

*探针是5′FAM-3′BHQ1-TT

分析热图中的标准化的Ct值，揭示了乳房和前列腺标记的高特异性，结肠、肺和卵巢的中等特异性，和胰标记的稍微更低的特异性。组合标准化的qRTPCR数据和计算精制，提高了标记组的性能。从组合的标准化的qRTPCR数据与算法得到结果，并确定qRTPCR测定的准确度。

讨论。

在该实施例中，在原发性肿瘤上使用基于微阵列的表达概况分析，以鉴别用于转移的候选标记。原发性肿瘤可以用于发现转移的起源肿瘤标记的事实，与最近的几项发现相一致。例如，Weigelt及同事已经表明，原发乳房肿瘤的基因表达概况在远距离转移中保持。Weigelt等(2003)。Italiano及同事发现，通过IHC评估的EGFR状态在80原发结肠直肠肿瘤和80相关转移中类似。Italiano等(2005)。80个中仅5个表现出EGFR状态的不一致性。Italiano等(2005)。Backus及同事鉴别出了用于检测乳腺癌转移的推定标记，其中使用乳房和其它组织的全基因组的基因表达分析，并证实乳腺珠蛋白和CK19可以以90％灵敏度和94％特异性检测乳房警戒淋巴结中临床上起作用的转移。Backus等(2005)。

使用原发组织进行的基于微阵列的研究证实了已知标记的特异性和灵敏度。结果，除了F5以外，使用的所有标记都对这里研究的组织具有高特异性。Argani等(2001；Backus等(2005)；Cunha等(2005)；Borgono等(2004)；McCarthy等(2003)；Hwang等(2004)；Fleming等(2000)；Nakamura等(2002)；和Khoor等(1997)。最近的研究使用IHC确定，PSCA在前列腺癌转移中超表达。Lam等(2005)。Dennis等(2002)也证实，PSCA可以用作胰和前列腺的起源肿瘤标记。如本文所显示的，在RNA水平发现有些前列腺组织中PSCA的强表达，但是由于在测定中包含PSA，所以现在可以分离前列腺和胰癌。该研究的一项新发现是，使用F5作为胰起源组织的互补(与PSCA互补)标记。在微阵列数据集(含有原发组织)和qRTPCR数据集(含有FFPE转移)中，发现F5与PSCA互补(图4和表3)。

表3可行性数据

以前的研究人员已经使用IHC或微阵列生成了CUP测定。Su等(2001)；Ramaswamy等(2001)；和Bloom等(2004)。最近，已经将SAGE与小qRTPCR标记组相结合。Dennis(2002)；和Buckhaults等(2003)。该研究首次组合了基于微阵列的表达概况分析和小组qRTPCR测定。使用原发组织的微阵列研究鉴别出了一些、但不是所有与以前通过SAGE研究鉴别出的标记相同的起源组织标记。一些研究已经证实，基于SAGE和DNA微阵列的概况分析数据之间存在中等一致性，且该相关性对于具有更高表达水平的基因提高。van Ruissen等(2005)；和Kim(2003)。例如，Dennis及同事鉴别出了PSA、MG、PSCA和HUMSPB，而Buckhaults及同事(Dennis等(2002))鉴别出了PDEF。使用qRTPCR执行CUP测定是优选的，因为它是有力的技术，且可能具有胜过IHC的性能优点。Al-Mulla等(2005)；和Haas等(2005)。如本文所示，通过在一步反应中使用基因-特异性的引物，改进了qRTPCR规程。这首次证实了基因-特异性的引物在含有FFPE组织的一步qRTPCR反应中的应用。其它研究人员已经进行了2步qRTPCR(在一个反应中合成cDNA，随后qPCR)，或已经使用随机六聚体或截短的基因-特异性的引物。Abrahamsen等(2003)；Specht等(2001)；Godfrey等(2000)；Cronin等(2004)；和Mikhitarian等(2004)。

实施例2

胰管腺癌从管上皮细胞发展而来，所述管上皮细胞在正常胰中仅占所有胰细胞的小百分比(其中腺泡细胞和胰岛细胞占大多数)。此外，胰腺癌组织含有显著量的邻近正常组织。Prasad等(2005)；和Ishikawa等(2005)。因此，为在胰腺癌中比在正常胰细胞中升高的基因，富集候选胰标记。第一种查询方法返回6个探针集合：凝固因子V(F5)、类似于FK506结合蛋白的推定蛋白FLJ22041(FKBP10)、β6整联蛋白(ITGB6)、转谷氨酰胺酶2(TGM2)、异质核内核糖核蛋白A0(HNRP0)和BAX δ(BAX)。第二种查询方法(细节见材料和方法部分)返回8个探针集合：F5、TGM2、配对-样同源域转录因子1(PITX1)、三件套蛋白同工型mRNA(TRIO)、p73H的mRNA(p73)、MGC：10264的一种未知蛋白(SCD)和密蛋白18的2个探针集合。

选择共23个组织特异性的标记候选物，用于进一步通过qRT-PCR在转移癌FFPE组织上进行RT-PCR验证。标记候选物在来自肺、胰、结肠、乳房、卵巢、前列腺和前列腺原发癌的205FFPE转移癌上测试。表4提供了为RT-PCR验证选择的组织特异性标记的基因符号，并也总结了用这些标记进行的检验的结果。

表4

基于它们的交叉反应性、在对应转移组织中的低表达水平或冗余，在23个测试的标记中排除13个。选择10个标记用于最后的测定形式。肺标记是人表面活性剂肺-相关蛋白B(HUMPSPB)、甲状腺转录因子1(TTF1)和桥粒芯糖蛋白3(DSG3)。胰标记是前列腺干细胞抗原(PSCA)和凝固因子V(F5)，且前列腺标记是激肽释放酶3(KLK3)。结肠直肠标记是钙粘着蛋白17(CDH17)。乳房标记是乳腺珠蛋白(MG)和前列腺-衍生的Ets转录因子(PDEF)。卵巢标记是Wilms瘤1(WT1)。

使用FFPE组织最优化样品制备和qRT-PCR。接着，在检查标记组性能之前，使用固定的组织最优化RNA分离和qRTPCR方法。首先，分析了将蛋白酶K温育时间从16小时减小至3小时的作用。对产量没有作用。但是，当使用更短的蛋白酶K步骤时，有些样品表现出更长的RNA片段(图4A，B)。例如，当RNA是从1年龄块(C22)中分离时，在电泳图谱中没有观察到差异。但是，当RNA是从5年龄块(C23)中分离时，如通过肩上的峰评估的，当使用更短的蛋白酶K消化时，观察到更大部分的更高分子量RNA。当加工其它样品时，该趋势通常会保持，无论FFPE转移的起源器官。总之，缩短蛋白酶K消化时间不牺牲RNA产量，且可能辅助分离更长的、更低降解的RNA。

接着，对比了3种不同的反转录方法：使用随机六聚体的反转录、随后用qPCR(2步)，使用基因-特异性的引物的反转录、随后用qPCR(2步)，和使用基因-特异性的引物的一步qRTPCR。从11个转移分离RNA，并横过3种方法对比β-肌动蛋白、HUMSPB(图4C，D)和TTF的Ct值。所有对比的结果都显示统计学显著的差异(p＜0.001)。对于2个基因，使用随机六聚体的反转录、随后用qPCR(2步反应)产生最高的Ct值，而使用基因-特异性的引物的反转录、随后用qPCR(2步反应)产生比对应的1步骤反应略微(但是统计学显著的)更低的Ct值。但是，使用基因-特异性的引物的2步骤RTPCR具有更长的反转录步骤。当将每个样品的HUMSPB Ct值对对应的β-肌动蛋白值标准化时，3种方法之间的标准化的Ct值没有差异。总之，最优化RTPCR反应条件可以产生更低的Ct值，这可以辅助分析更老的石蜡块(Cronin等(2004))，且使用基因-特异性的引物的一步RTPCR反应可以产生与在对应的2步反应中产生的Ct值可比较的Ct值。

最优化的qRTPCR测定的诊断性能。在260FFPE转移灶的新集合上进行12qRTPCR反应(10标记和2个持家基因)。21个样品产生持家基因的高Ct值，所以在热图分析中使用了仅239个样品。分析热图中的标准化的Ct值，揭示了乳房和前列腺标记的高特异性，结肠、肺和卵巢的中等特异性，和胰标记的稍微更低的特异性(图5)。组合标准化的qRTPCR数据和计算精制，提高了标记组的性能。

使用对2个持家基因的表达的平均值标准化的表达值，通过组合标准化的qRTPCR数据和算法，开发了预测转移起源组织的算法，并通过进行leave-one-out交叉验证检验(LOOCV)，测定qRTPCR测定的准确度。对于测定中包括的6个组织类型，分别估计出假阳性信号的数目(当将样品错误预测为在测定中包括的其它肿瘤类型时(例如，将胰预测为结肠))和没有将样品预测为在测定组织类型中包括的那些类型(其它)的次数。LOOCV的结果在表5示出。

表5

为260个测试的样品中的204个，以78％的总准确度正确预测了起源组织。相当大比例的假阳性信号是由于组织学上类似的组织中的标记交叉反应性。例如，源自咽、喉和食管的3种鳞状细胞转移癌被错误预测为肺，这是由于这些组织中的DSG3表达。CDH17在结肠GI癌以外(包括胃和胰)的阳性表达，造成6个测试的胃中的4个和43个测试的胰癌转移中的3个错误分类成结肠。

除了LOOCV检验以外，将数据随机分成3独立对的训练和试验集合。每个分离含有约50％的每类样品。在50/50分离时，在3独立对的训练和试验集合中，测定总分类准确度是77％、71％和75％，从而证实了测定性能稳定性。

最后，测试了48FFPE转移癌的另一个独立集合，其包括已知原发的转移癌、含有通过病理学评价(包括IHC)提供的起源组织诊断的CUP样品、和在测试IHC测试后保持CUP的CUP样品。为每类样品分别估计起源组织预测准确度。表6总结了测定结果。

表6

	测试的	正确	准确度
				已知转移	15	11	73.3
分析的CUP	22	17	77.3
				未分析的CUP	11

除了仅小量例外以外，起源组织预测与通过临床/病理学评价(包括IHC)评估的已知原发或起源组织诊断相一致。类似于训练集合，测定不能区分源自不同来源的鳞状细胞癌，且将它们错误预测为肺。

测定也为在标准诊断试验后保持CUP的11个样品中的8个作出推定的起源组织诊断。CUP病例中的一个是特别令人感兴趣的。具有前列腺癌历史的男性患者被诊断出在肺和胸膜中的转移癌。在转移组织上进行的血清PSA试验和使用PSA抗体的IHC是阴性的，所以病理学家的诊断是倾向于胃肠肿瘤的CUP。所述测定强烈(后验概率0.99)预测起源组织是结肠。

讨论。在该研究中，原发性肿瘤上的基于微阵列的表达概况分析用于鉴别为转移灶使用的候选标记。原发性肿瘤可以用于发现转移的起源肿瘤标记的事实，与最近的几项发现相一致。例如，Weigelt及同事已经表明，原发乳房肿瘤的基因表达概况在远距离转移中保持。Weigelt等(2003)。Backus及同事鉴别出了用于检测乳腺癌转移的推定标记，其中使用乳房和其它组织的全基因组的基因表达分析，并证实乳腺珠蛋白和CK19可以以90％灵敏度和94％特异性检测乳房警戒淋巴结中临床上起作用的转移。Backus等(2005)。

在测定开发过程中，选择集中于6个癌症类型，包括在CUP中最普遍的肺、胰和结肠(Ghosh等(2005)；和Pavlidis等(2005))和治疗可能对患者最有益的乳房、卵巢和前列腺。Ghosh等(2005)。但是，其它组织类型和标记也可以加入组中，只要不损害测定的总准确度即可，且如果适用，不妨碍RTPCR反应的逻辑(logistics)。

基于微阵列的使用原发组织的研究证实了已知标记的特异性和灵敏度。结果，大多数组织特异性的标记对这里研究的组织具有高度特异性。最近的使用IHC的研究发现，PSCA在前列腺癌转移中超表达。Lam等(2005)。Dennis等(2002)也证实，PSCA可以用作胰和前列腺的起源肿瘤标记。在RNA水平，在有些前列腺组织中存在PSCA的强表达，但是，由于在测定中包括PSA，所以现在可以分离前列腺和胰癌。该研究的新发现是，使用F5作为胰起源组织的互补(与PSCA互补)标记。在微阵列数据集(含有原发组织)和qRTPCR数据集(含有FFPE转移)中，发现F5与PSCA互补。

以前的研究人员已经使用IHC(Brown等(1997)；DeYoung等(2000)；和Dennis等(2005a))或微阵列产生了CUP测定。Su等(2001)；Ramaswamy等(2001)；和Bloom等(2004)。最近，已经将SAGE与小qRTPCR标记组相结合。Dennis(2002)；和Buckhaults等(2003)。该研究首次组合了基于微阵列的表达概况分析和小组qRTPCR测定。使用原发组织的微阵列研究鉴别出了一些、但不是所有与以前通过SAGE研究鉴别出的标记相同的起源组织标记。该发现不是令人奇怪的，因为研究已经证实，基于SAGE和DNA微阵列的概况分析数据之间存在中等一致性，且该相关性对于具有更高表达水平的基因提高。van Ruissen等(2005)；和Kim(2003)。例如，Dennis及同事鉴别出了PSA、MG、PSCA和HUMSPB，而Buckhaults及同事(Buckhaults等(2003))鉴别出了PDEF。使用qRTPCR执行CUP测定是优选的，因为它是有力的技术，且可能具有胜过IHC的性能优点。Al-Mulla等(2005)；和Haas等(2005)。此外，如本文所示，已通过在一步反应中使用基因-特异性的引物，改进了qRTPCR规程。这首次证实了基因-特异性的引物在含有FFPE组织的一步qRTPCR反应中的应用。其它研究人员已经进行了2步qRTPCR (在一个反应中合成cDNA，随后qPCR)，或已经使用随机六聚体或截短的基因-特异性的引物。Abrahamsen等(2003)；Specht等(2001)；Godfrey等(2000)；Cronin等(2004)；和Mikhitarian等(2004)。

总之，6个组织类型的测定的78％总准确度有利地与其它研究匹敌。Brown等(1997)；DeYoung等(2000)；Dennis等(2005a)；Su等(2001)；Ramaswamy等(2001)；和Bloom等(2004)。

实施例3

在该研究中，通过从MVO中选择，并使用分类器来预测5种主要癌症类型(包括乳房、结肠、肺、卵巢和前列腺)的组织起源和癌症状态，建立了使用基因标记组合的分类器。使用Affymetrix人U133AGeneChip，分析了378原发癌、23良性增生性上皮病变和103正常骤冻人组织样品。还分析了白细胞样品，以减去被白细胞背景细胞中的共表达潜在遮盖的基因表达。开发了新的基于MVO的生物信息学方法，来选择起源组织和癌症状态的基因标记组合。数据证实，26基因的组可以用作在5种癌症类型中准确预测起源组织和癌症状态的分类器。因而，通过测定适度小数目的基因标记的基因表达概况，可以得到多癌症分类方法。

表7显示了为指定的组织起源鉴别的标记。关于基因描述，见表15。

表7

组织	SEQ ID NO：	名称
			肺	59	SP-B
	60	TTF1
				61	DSG3
胰	66	PSCA
				67	F5
	71	ITGB6
				72	TGM2
	84	HNRPA0
			结肠	85	HPT1
	77	FABP1
				78	CDX1
	79	GUCY2C
			前列腺	86	PSA
	80	hKLK2
			乳房	63	MGB1
	81	PIP
				64	PDEF

卵巢	82	HE4
				83	PAX8
	65	WT1

样品集合包括共计299个转移结肠、乳房、胰、卵巢、前列腺、肺和其它癌和原发前列腺癌样品。执行基于组织学评价、RNA得率和对照基因β-肌动蛋白的表达的QC。其它样品类别包括源自胃(5)、肾(6)、胆管/胆囊(4)、肝(2)、头和颈(4)、回肠(1)癌和一种间皮瘤的转移。表8总结了结果。

表8

组织类型	收集的	组织学QC	RNA分离QC	ACTB截止QC
					肺	41	37	36	25
胰	63	57	49	41
					结肠	45	42	42	31
乳房	40	35	35	34
					卵巢	37	36	35	33
前列腺	27	27	25	19
					其它	46	34	29	23
总计	299	268	251	205

测试上述样品，导致将标记集合缩小至表9中的那些，结果见表10。

表9

表10

癌症	样品#	标记	正确	灵敏度％	错误	特异性％
							肺	25/180	SP-B	13/25	52	0/180	100
		TTF	12/25	48	1/180	99
									DSG3	5/25	20	0/180	100
胰	41/164	PSCA	24/41	59	6/164	96
									F5	6/41	15	4/164	98
结肠	31/174	HPT1	22/31	71	2/174	99
							乳房	33/172	MGB	23/33	70	3/172	98
		PDEF	16/33	48	1/172	99
							前列腺	19/186	PSA	19/19	100	0/186	100
		PDEF	19/19	100	2/186	99
							卵巢	33/172	WT1	24/33	71	1/172	99
总计	205

结果表明，在205个石蜡包埋的转移肿瘤中，166个样品(81％)具有决定性的测定结果，表11。

表11

	候选物	正确	错误	No	准确度(％)
						肺	SP-B+TFF+DSG3	19	0	6	76
胰	PSCA+F5	27	1	13	66
						结肠	HPT1	24	2	5	78
前列腺	PSA	19	0	0	100
						乳房	MGB+PDEF	23	3	7	70
卵巢	WT1	23	2	8	70
						其他		20	3		87
总计		155	11	39	76

在假阳性结果中，许多错误源自组织学和胚胎学类似的组织，表12。

表12

样品ID	诊断	预测的
			OV_26	卵巢	乳房
Br_24	乳房	结肠
			Br_37	乳房	结肠
CRC_25	结肠	卵巢
			Pn_59	胰	结肠
Cont_27	胃	胰
			Cont_34	胃	结肠
Cont_35	胃	结肠
			Cont_43	胆管	胰
Cont_44	胆管	胰
			Cong_25	肝	胰

为模型开发考虑下述参数：

分离女性和男性集合的标记，并分别为男性和女性患者计算CUP概率。男性集合包括：SP_B、TTF1、DSG3、PSCA、F5、PSA、HPT1；女性集合包括：SP_B、TTF1、DSG3、PSCA、F5、HPT1、MGB、PDEF、WT1。从测定结果排除背景表达：肺：SP_B、TTF1、DSG3；卵巢：WT1；和结肠：HPT1。

将CUP模型调节至CUP患病率(％)：肺23、胰16、结肠直肠9、乳房3、卵巢4、前列腺2、其它43。将男性患者的乳房和卵巢患病率调节至0％，且将女性患者的前列腺患病率调节至0％。

采取下述步骤：

将标记置于类似的标尺上。

通过从每个组织特异性集合选择最小值，将变量的数目从12减至8。

省去(leave out)1个样品。从剩余的样品建立模型。测试省去的样品。重复到测试了100％样品。

随机省去约50％的样品(每个组织约50％)。从剩余的样品建立模型。测试约50％的样品。对3个不同随机分离进行重复。

将分类准确度调节至癌症类型患病率，以产生表13总结的结果，原始数据如表14所示。

尽管已经通过用于理解清楚的目的的说明和实施例比较详细地描述了前述发明，但所述描述和实施例不应当理解为对本发明范围的限制。

表13

	乳房	结肠	肺	其他	卵巢	胰	前列腺	总计	调节的
										正确	23	29	22	19	24	35	19	171
未测试	3	2	2		2	3	0	12
										错误	7	0	1	4	7	3	0	22
患病率	0.03	0.09	0.23	0.43	0.04	0.16	0.02
测试的/总计％	91	94	92	100	94	93	100	94	95
										正确/总计％	70	94	88	83	73	85	100	89	89
未测试％	9	6	8	n/a	6	7	0	6	5
正确	23	25	19	20	20	24	19	150
										未测试％	7	6	5		10	15	0	43
错误	3	0	1	3	3	2	0	12
										患病率	0.03	0/09	0.23	0.43	0.04	0.16	0.02
										测试的/总计％	79	81	80	100	70	63	100	79	83
正确/总计％	70	81	76	87	61	59	100	73	76
										正确/测试的％	88	100	95	87	87	92	100	93	91
未测试％	21	19	20	n/a	30	37	0	21	17

表15

名称	SEQID NO	登记号	描述
				CDH17	62	NM_004063	钙粘着蛋白17
CDX1	78	NM_001804	同源框转录因子1
				DSG3	61/3	NM_001944	桥粒芯糖蛋白3
F5	67/6	NM_000130	凝固因子V
				FABP1	71	NM_001443	脂肪酸结合蛋白1，肝
GUCY2C	79	NM_004963	鸟苷酸环化酶2C
				HE4	82	NM_006103	推定的卵巢癌标记
KLK2	80	BC005196	激肽释放酶2，前列腺的
				HNRPA0	84	NM_006805	异质核内核糖核蛋白A0
HPT1	85/4	U07969	肠肽-相关转运蛋白
				ITGB6	71	NM_000888	整联蛋白，β6
KLK3	68	NM_001648	激肽释放酶3
				MGB1	63/7	NM_002411	乳腺珠蛋白1
PAX8	83	BC001060	配对框基因8
				PBGD	70	NM_000190	羟甲基胆色烷合酶
PDEF	64/8	NM_012391	含有Ets转录因子的结构域
				PIP	81	NM_002652	催乳素-诱导的蛋白
PSA	86/9	U17040	前列腺特异性的抗原前体
				PSCA	66/5	NM_005672	前列腺干细胞抗原
SP-B	59/1	NM_198843	肺表面活性剂-相关蛋白B
				TGM2	72	NM_004613	转谷氨酰胺酶2
TTF1	60/2	NM_003317	类似于甲状腺转录因子1
				WT1	65/10	NM_024426	Wilms瘤1
β-肌动蛋白	69	NM_001101	β-肌动蛋白
				p73H	87	AB010153	p53-相关蛋白
KLK10	88	NM_002776	激肽释放酶10
				CLDN18	89	NM_016369	密蛋白18
TR10	90	BD280579	肿瘤坏死因子受体

SERPINA1	91	NM_000295	丝氨酸蛋白酶抑制剂肽酶抑制剂，进化枝A成员1
				KRT7	92	NM_005556	角蛋白7
MMP11	93	NM_005940	基质金属肽酶11(溶基质蛋白酶3)
				MUC4	94	NM_018406	粘蛋白4细胞-表面相关的
FLJ22041	95	AK025694
				BAX	96	NM_138763	BCL2-相关的X蛋白转录物变体Δ
PITX1	97	NM_002653	配对-样同源域转录因子1
				MGC：10264	98	BC005807	硬脂酰辅酶A去饱和酶(Δ-9-去饱和酶)

参考文献

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<210>1

<211>476

<212>DNA

<213>人

<400>1

gaaaaaccag ccactgcttt acaggacagg gggttgaagc tgagccccgc ctcacaccca     60

cccccatgca ctcaaagatt ggattttaca gctacttgca attcaaaatt cagaagaata    120

aaaaatggga acatacagaa ctctaaaaga tagacatcag aaattgttaa gttaagcttt    180

ttcaaaaaat cagcaattcc ccagcgtagt caagggtgga cactgcacgc tctggcatga    240

tgggatggcg accgggcaag ctttcttcct cgagatgctc tgctgcttga gagctattgc    300

tttgttaaga tataaaaagg ggtttctttt tgtctttctg taaggtggac ttccagattt    360

tgattgaaag tcctagggtg attctatttc tgctgtgatt tatctgctga aagctcagct    420

ggggttgtgc aagctaggga cccattcctg tgtaatacaa tgtctgcacc aatgct        476

<210>2

<211>493

<212>DNA

<213>人

<400>2

gtgattcaaa tgggttttcc acgctagggc ggggcacaga ttggagaggg ctctgtgctg     60

acatggctct ggactctaaa gaccaaactt cactctgggc acactctgcc agcaaagagg    120

actcgcttgt aaataccagg attttttttt ttttttgaag ggaggacggg agctggggag    180

aggaaagagt cttcaacata acccacttgt cactgacaca aaggaagtgc cccctccccg    240

gcaccctctg gccgcctagg ctcagcggcg accgccctcc gcgaaaatag tttgtttaat    300

gtgaacttgt agctgtaaaa cgctgtcaaa agttggacta aatgcctagt ttttagtaat    360

ctgtacattt tgttgtaaaa agaaaaacca ctcccagtcc ccagcccttc acatttttta    420

tgggcattga caaatctgtg tatattattt ggcagtttgg tatttgcggc gtcagtcttt    480

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<213>人

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accttccact gcaggctttg atccacttct cacacaaaat gtgatagtga cagaaagggt    240

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tataaattaa atgtttgggt tcatacccca aaagcaatat gttgtcactc ctaattctca    540

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<213>人

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aatatgaaca tcagttaaaa aaaaaattct ttaaggctac tattaatatg cagacttact    420

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<210>60

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<212>DNA

<213>人

<400>60

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<210>61

<211>3336

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<213>人

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tgaaacccgc cctcaggggc ctctctcctg cctgccctgc ctcagccagg ccctgagatg    1500

ggggaaaacg ggcagtctgc tctgctgctc tgaccttcca gagcccaagg tcagggaggg    1560

gcaaccaact gccccagggg gatatgggtc ctctggggcc ttcgggacca tggggcaggg    1620

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caacacctgc ctctgacccc agcatttcca gagcagagcc tacagaaggg cagtgactcg    1740

acaaaggcca caggcagtcc aggcctctct ctgctccatc cccctgcctc ccattctgca    1800

ccacacctgg catggtgcag ggagacatct gcacccctga gttgggcagc caggagtgcc    1860

cccgggaatg gataataaag atactagaga actg                                1894

<210>65

<211>3029

<212>DNA

<213>人

<400>65

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ttcatccaac ttccaagaca agataccggt gcttctggaa actaccaggt gtgcctggaa    1920

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<213>人

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cagcaaaggc tgcagcttga actgcgtgga tgactcacag gactactacg tgggcaagaa    300

gaacatcacg tgctgtgaca ccgacttgtg caacgccagc ggggcccatg ccctgcagcc    360

ggctgctgcc atccttgcgc tgctccctgc actcggcctg ctgctctggg gacccggcca    420

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tctccaggac tcccacccgg cagatcggct ctattgacac agatccgcct gcagatggcc    660

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tccctgaatg gcagcctcag cacagcgtag gcccttaata aacacctgtt ggataagcca   1020

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agttctactg acctttgtcc ttaggtgtga ggtccagggt tgctaggaaa agaaatcagc    960

agacacaggt gtagaccaga gtgtttctta aatggtgtaa ttttgtcctc tctgtgtcct   1020

ggggaatact ggccatgcct ggagacatat cactcaattt ctctgaggac acagatagga   1080

tggggtgtct gtgttatttg tggggtacag agatgaaaga ggggtgggat ccacactgag   1140

agagtggaga gtgacatgtg ctggacactg tccatgaagc actgagcaga agctggaggc   1200

acaacgcacc agacactcac agcaaggatg gagctgaaaa cataacccac tctgtcctgg   1260

aggcactggg aagcctagag aaggctgtga gccaaggagg gagggtcttc ctttggcatg   1320

ggatggggat gaagtaagga gagggactgg accccctgga agctgattca ctatgggggg   1380

aggtgtattg aagtcctcca gacaaccctc agatttgatg atttcctagt agaactcaca   1440

gaaataaaga gctgttatac tgtg                                          1464

<210>69

<211>1793

<212>DNA

<213>人

<400>69

cgcgtccgcc ccgcgagcac agagcctcgc ctttgccgat ccgccgcccg tccacacccg     60

ccgccagctc accatggatg atgatatcgc cgcgctcgtc gtcgacaacg gctccggcat    120

gtgcaaggcc ggcttcgcgg gcgacgatgc cccccgggcc gtcttcccct ccatcgtggg    180

gcgccccagg caccagggcg tgatggtggg catgggtcag aaggattcct atgtgggcga    240

cgaggcccag agcaagagag gcatcctcac cctgaagtac cccatcgagc acggcatcgt    300

caccaactgg gacgacatgg agaaaatctg gcaccacacc ttctacaatg agctgcgtgt    360

ggctcccgag gagcaccccg tgctgctgac cgaggccccc ctgaacccca aggccaaccg    420

cgagaagatg acccagatca tgtttgagac cttcaacacc ccagccatgt acgttgctat    480

ccaggctgtg ctatccctgt acgcctctgg ccgtaccact ggcatcgtga tggactccgg    540

tgacggggtc acccacactg tgcccatcta cgaggggtat gccctccccc atgccatcct    600

gcgtctggac ctggctggcc gggacctgac tgactacctc atgaagatcc tcaccgagcg    660

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gtgctacgtc gccctggact tcgagcaaga gatggccacg gctgcttcca gctcctccct    780

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ctgccctgag gcactcttcc agccttcctt cctgggcatg gagtcctgtg gcatccacga    900

aactaccttc aactccatca tgaagtgtga cgtggacatc cgcaaagacc tgtacgccaa    960

cacagtgctg tctggcggca ccaccatgta ccctggcatt gccgacagga tgcagaagga   1020

gatcactgcc ctggcaccca gcacaatgaa gatcaagatc attgctcctc ctgagcgcaa   1080

gtactccgtg tggatcggcg gctccatcct ggcctcgctg tccaccttcc agcagatgtg   1140

gatcagcaag caggagtatg acgagtccgg cccctccatc gtccaccgca aatgcttcta   1200

ggcggactat gacttagttg cgttacaccc tttcttgaca aaacctaact tgcgcagaaa   1260

acaagatgag attggcatgg ctttatttgt tttttttgtt ttgttttggt tttttttttt   1320

tttttggctt gactcaggat ttaaaaactg gaacggtgaa ggtgacagca gtcggttgga   1380

gcgagcatcc cccaaagttc acaatgtggc cgaggacttt gattgcacat tgttgttttt   1440

ttaatagtca ttccaaatat gagatgcatt gttacaggaa gtcccttgcc atcctaaaag   1500

ccaccccact tctctctaag gagaatggcc cagtcctctc ccaagtccac acaggggagg   1560

tgatagcatt gctttcgtgt aaattatgta atgcaaaatt tttttaatct tcgccttaat   1620

acttttttat tttgttttat tttgaatgat gagccttcgt gccccccctt cccccttttt   1680

gtcccccaac ttgagatgta tgaaggcttt tggtctccct gggagtgggt ggaggcagcc   1740

agggcttacc tgtacactga cttgagacca gttgaataaa agtgcacacc tta          1793

<210>70

<211>1526

<212>DNA

<213>人

<400>70

ccggaagtga cgcgaggctc tgcggagacc aggagtcaga ctgtaggacg acctcgggtc     60

ccacgtgtcc ccggtactcg ccggccggag cccccggctt cccggggccg ggggacctta    120

gcggcaccca cacacagcct actttccaag cggagccatg tctggtaacg gcaatgcggc    180

tgcaacggcg gaagaaaaca gcccaaagat gagagtgatt cgcgtgggta cccgcaagag    240

ccagcttgct cgcatacaga cggacagtgt ggtggcaaca ttgaaagcct cgtaccctgg    300

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atttgttggg aagaccctag aaaccctgcc agagaagagt gtggtgggaa ccagctccct    600

gcgaagagca gcccagctgc agagaaagtt cccgcatctg gagttcagga gtattcgggg    660

aaacctcaac acccggcttc ggaagctgga cgagcagcag gagttcagtg ccatcatcct    720

ggcaacagct ggcctgcagc gcatgggctg gcacaaccgg gtggggcaga tcctgcaccc    780

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ccaggacatc ttggatctgg tgggtgtgct gcacgatccc gagactctgc ttcgctgcat    900

cgctgaaagg gccttcctga ggcacctgga aggaggctgc agtgtgccag tagccgtgca    960

tacagctatg aaggatgggc aactgtacct gactggagga gtctggagtc tagacggctc   1020

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ccctgaggat gacccacagt tggtaggcat cactgctcgt aacattccac gagggcccca   1140

gttggctgcc cagaacttgg gcatcagcct ggccaacttg ttgctgagca aaggagccaa   1200

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gctatctggg gagtgattac cccgggagac tgaactgcag ggttcaagcc ttccagggat   1380

ttgcctcacc ttggggcctt gatgactgcc ttgcctcctc agtatgtggg ggcttcatct   1440

ctttagagaa gtccaagcaa cagcctttga atgtaaccaa tcctactaat aaaccagttc   1500

tgaaggtgta aaaaaaaaaa aaaaaa                                        1526

<210>71

<211>2397

<212>DNA

<213>人

<400>71

gcaagaactg aaacgaatgg ggattgaact gctttgcctg ttctttctat ttctaggaag    60

gaatgatcac gtacaaggtg gctgtgccct gggaggtgca gaaacctgtg aagactgcct    120

gcttattgga cctcagtgtg cctggtgtgc tcaggagaat tttactcatc catctggagt    180

tggcgaaagg tgtgataccc cagcaaacct tttagctaaa ggatgtcaat taaacttcat    240

cgaaaaccct gtctcccaag tagaaatact taaaaataag cctctcagtg taggcagaca    300

gaaaaatagt tctgacattg ttcagattgc gcctcaaagc ttgatcctta agttgagacc    360

aggtggtgcg cagactctgc aggtgcatgt ccgccagact gaggactacc cggtggattt    420

gtattacctc atggacctct ccgcctccat ggatgacgac ctcaacacaa taaaggagct    480

gggctcccgg ctttccaaag agatgtctaa attaaccagc aactttagac tgggcttcgg    540

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cccttgcagt agtattccat acttctgttt acctacattt ggattcaagc acattttgcc    660

attgacaaat gatgctgaaa gattcaatga aattgtgaag aatcagaaaa tttctgctaa    720

tattgacaca cccgaaggtg gatttgatgc aattatgcaa gctgctgtgt gtaaggaaaa    780

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ggacagcaag aatgaatact ccatgtcaac tgtcttggaa tatccaacaa ttggacaact    960

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tcatttatat gagaattacg caaaacttat tcctggagct acagtaggtc tacttcagaa   1080

ggactccgga aacattctcc agctgatcat ctcagcttat gaagaactgc ggtctgaggt   1140

ggaactggaa gtattaggag acactgaagg actcaacttg tcatttacag ccatctgtaa   1200

caacggtacc ctcttccaac accaaaagaa atgctctcac atgaaagtgg gagacacagc   1260

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gtgtggggtg tgtgcctgcc accctggcca catggggcct cgctgtgagt gtggcgagga   1500

catgctgagc acagattcct gcaaggaggc cccagatcat ccctcctgca gcggaagggg   1560

tgactgctac tgtgggcagt gtatctgcca cttgtctccc tatggaaaca tttatgggcc   1620

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cggcgactgt gactgtggtg aatgtgtgtg caggagcggc tggactggcg agtactgcaa   1740

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gtcagcagct ggccaagccc gagaagaatg tgtggacaag tgcaaactag ctggtgcgac   1980

catcagtgaa gaagaagatt tctcaaagga tggttctgtt tcctgctctc tgcaaggaga   2040

aaatgaatgt cttattacat tcctaataac tacagataat gaggggaaaa ccatcattca   2100

cagcatcaat gaaaaagatt gtccgaagcc tccaaacatt cccatgatca tgttaggggt    2160

ttccctggct attcttctca tcggggttgt cctactgtgc atctggaagc tactggtgtc    2220

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aacgggaacc aatccactct acagaggatc cacaagtact tttaaaaatg taacttataa    2340

acacagggaa aaacaaaagg tagacctttc cacagattgc tagaactact ttatgca       2397

<210>72

<211>2118

<212>DNA

<213>人

<400>72

tggggagccc aagcagaaac gcaagctggt ggctgaggtg tccctgcaga acccgctccc     60

tgtggccctg gaaggctgca ccttcactgt ggagggggcc ggcctgactg aggagcagaa    120

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ggctgtgaag ggcttccgga atgtcatcat tggccccgcc taagggaccc ctgctcccag    300

cctgctgaga gcccccacct tgatcccaat ccttatccca agctagtgag caaaatatgc    360

cccttcttgg gccccagacc ccagggcagg gtgggcagcc tatgggggct ctcggaaatg    420

gaatgtgccc ctggcccatc tcagcctcct gagcctgtgg gtccccactc accccctttg    480

ctgtgaggaa tgctctgtgc cagaaacagt gggagccctg accttggctg actggggctg    540

gggtgagaga ggaaagacct acattccctc tcctgcccag atgccctttg gaaagccatt    600

gaccacccac catattgttt gatctacttc atagctcctt ggagcaggca aaaaagggac    660

agcatgcccc ttggctggat cagggaatcc agctccctag actgcatccc gtacctcttc    720

ccatgactgc acccagctcc aggggccctt gggacagcca gagctgggtg gggacagtga    780

taggcccaag gtcccctcca catcccagca gcccaagctt aatagccctc cccctcaacc    840

tcaccattgt gaagcaccta ctatgtgctg ggtgcctccc acacttgctg gggctcacgg    900

ggcctccaac ccatttaatc accatgggaa actgttgtgg gcgctgcttc caggataagg    960

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caaggctggg taatgtgaag gcccaagagc agagtctggg cctctgactc tgagtccact   1080

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caaaaaaaga ctcagccaag acaaggaggt agagagggga ctgggggact gggagtcaga   1200

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tgtttccttg ttggtcagag gagtgattga accagctcat ctccaaggat cctctccact   1320

ccatgtttgc aatgctttta tatggcccag ccttgtaaat aaccacaagg tccactccct   1380

gctccacgaa gccttaagcc ataggcccag gatatttctg agagtgaaac catgactgtg   1440

accaccttct gtccccagcc ctgtcctggt tccttcctat gcccaggtac cacccttcag   1500

accccagttc taggggagaa gagccctgga cacccctgct ctacccatga gcctgcccgc    1560

tgcaatgcct agacttccca acagccttag ctgccagtgc tggtcactaa ccaacaaggt    1620

tggcacccca gctacccctt ctttgcaggg ctaaggcccc caaacatagc ccctgccccg    1680

gaggaagctt ggggaaccca tgagttgtca gctttgactt tatctcctgc tctttctaca    1740

tgactgggcc tcccttgggc tggaagaatt ggggattctc tattggaggt gagatcacag    1800

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aactttctgc tttgcacagg aaagagtcac acaattaatc aacatgtata ttttctctat    1920

acatagagct ctatttctct acggttttat aaaagccttg ggttccaacc aggcagtaga    1980

tgtgcttctg aaccgcaagg agcaaacact gaaataaaat agtttatttt tcacactcaa    2040

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<211>2832

<212>DNA

<213>人

<400>73

aaagctcaaa ccgacaccct cacgcagatg atgacatcaa ctcttttttc ttccccaagt     60

gtacacaatg tgatggagac tgttacgcag gagacagctc ctccagatga aatgaccaca    120

tcatttccct ccagtgtcac caacacactc atgatgacat caaagactat aacaatgaca    180

acctccacag actccactct tggaaacaca gaagagacat caacagcagg aactgaaagt    240

tctaccccag tgacctcagc agtctcaata acagctggac aggaaggaca atcacgaaca    300

acttcctgga ggacctctat ccaagacaca tcagcttctt ctcagaacca ctggactcgg    360

agcacgcaga ccaccaggga atctcaaacc agcaccctaa cacacagaac cacttcaact    420

ccttctttct ctccaagtgt acacaatgtg acagggactg tttctcagaa gacatctcct    480

tcaggtgaaa cagctacctc atccctctgt agtgtcacaa acacatccat gatgacatca    540

gagaagataa cagtgacaac ctccacaggc tccactcttg gaaacccagg ggagacatca    600

tcagtacctg ttactggaag tcttatgcca gtcacctcag cagccttagt aacagttgat    660

ccagaaggac aatcaccagc aactttctca aggacttcta ctcaggacac aacagctttt    720

tctaagaacc accagactca gagcgtggag accaccagag tatctcaaat caacaccctc    780

aacaccctca caccggttac aacatcaact gttttatcct caccaagtgg attcaaccca    840

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agtgtcagca atacattcct ggtaacatca aaggtgttca gaatgccaat ctccagagac    960

tctactcttg gaaacacaga ggagacatca ctatctgtaa gtggaaccat ttctgcaatc   1020

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tctctacctc caaaaatatc cacagctttc cacacccagc agagtgaagg tgcagagacc   1140

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ctacatgaaa caacaacatg gccttcctca ttctccagca aaggccacac aacttggtca    1260

caaacagaac tgccctcaac atcaacaggt gctgccacta ggcttgtcac aggaaatcca    1320

tctacaggga cagctggcac tattccaagg gtcccctcta aggtctcagc aataggggaa    1380

ccaggagagc ccaccacata ctcctcccac agcacaactc tcccaaaaac aacaggggca    1440

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taaaggcaaa tgggagagac cctttgaagt caaggacacc gaggaagagg acttccacgt    960

ggaccaggtg accaccgtga aggtgcctat gatgaagcgt ttaggcatgt ttaacatcca   1020

gcactgtaag aagctgtcca gctgggtgct gctgatgaaa tacctgggca atgccaccgc   1080

catcttcttc ctgcctgatg aggggaaact acagcacctg gaaaatgaac tcacccacga   1140

tatcatcacc aagttcctgg aaaatgaaga cagaaggtct gccagcttac atttacccaa   1200

actgtccatt actggaacct atgatctgaa gagcgtcctg ggtcaactgg gcatcactaa   1260

ggtcttcagc aatggggctg acctctccgg ggtcacagag gaggcacccc tgaagctctc   1320

caaggccgtg cataaggctg tgctgaccat cgacgagaaa gggactgaag ctgctggggc   1380

catgttttta gaggccatac ccatgtctat cccccccgag gtcaagttca acaaaccctt   1440

tgtcttctta atgattgaac aaaataccaa gtctcccctc ttcatgggaa aagtggtgaa   1500

tcccacccaa aaataactgc ctctcgctcc tcaacccctc ccctccatcc ctggccccct   1560

ccctggatga cattaaagaa gggttgagct ggtccctgcc tgcaaaa                 1607

<210>75

<211>1753

<212>DNA

<213>人

<400>75

cagccccgcc cctacctgtg gaagcccagc cgcccgctcc cgcggataaa aggcgcggag     60

tgtccccgag gtcagcgagt gcgcgctcct cctcgcccgc cgctaggtcc atcccggccc    120

agccaccatg tccatccact tcagctcccc ggtattcacc tcgcgctcag ccgccttctc    180

gggccgcggc gcccaggtgc gcctgagctc cgctcgcccc ggcggccttg gcagcagcag    240

cctctacggc ctcggcgcct cacggccgcg cgtggccgtg cgctctgcct atgggggccc     300

ggtgggcgcc ggcatccgcg aggtcaccat taaccagagc ctgctggccc cgctgcggct     360

ggacgccgac ccctccctcc agcgggtgcg ccaggaggag agcgagcaga tcaagaccct     420

caacaacaag tttgcctcct tcatcgacaa ggtgcggttt ctggagcagc agaacaagct     480

gctggagacc aagtggacgc tgctgcagga gcagaagtcg gccaagagca gccgcctccc     540

agacatcttt gaggcccaga ttgctggcct tcggggtcag cttgaggcac tgcaggtgga     600

tgggggccgc ctggaggcgg agctgcggag catgcaggat gtggtggagg acttcaagaa     660

taagtacgaa gatgaaatta accaccgcac agctgctgag aatgagtttg tggtgctgaa     720

gaaggatgtg gatgctgcct acatgagcaa ggtggagctg gaggccaagg tggatgccct     780

gaatgatgag atcaacttcc tcaggaccct caatgagacg gagttgacag agctgcagtc     840

ccagatctcc gacacatctg tggtgctgtc catggacaac agtcgctccc tggacctgga     900

cggcatcatc gctgaggtca aggcgcagta tgaggagatg gccaaatgca gccgggctga     960

ggctgaagcc tggtaccaga ccaagtttga gaccctccag gcccaggctg ggaagcatgg    1020

ggacgacctc cggaataccc ggaatgagat ttcagagatg aaccgggcca tccagaggct    1080

gcaggctgag atcgacaaca tcaagaacca gcgtgccaag ttggaggccg ccattgccga    1140

ggctgaggag cgtggggagc tggcgctcaa ggatgctcgt gccaagcagg aggagctgga    1200

agccgccctg cagcggggca agcaggatat ggcacggcag ctgcgtgagt accaggaact    1260

catgagcgtg aagctggccc tggacatcga gatcgccacc taccgcaagc tgctggaggg    1320

cgaggagagc cggttggctg gagatggagt gggagccgtg aatatctctg tgatgaattc    1380

cactggtggc agtagcagtg gcggtggcat tgggctgacc ctcgggggaa ccatgggcag    1440

caatgccctg agcttctcca gcagtgcggg tcctgggctc ctgaaggctt attccatccg    1500

gaccgcatcc gccagtcgca ggagtgcccg cgactgagcc gcctcccacc actccactcc    1560

tccagccacc acccacaatc acaagaagat tcccacccct gcctcccatg cctggtccca    1620

agacagtgag acagtctgga aagtgatgtc agaatagctt ccaataaagc agcctcattc    1680

tgaggcctga gtgatccacg tgaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa    1740

aaaaaaaaaa aaa                                                       1753

<210>76

<211>2255

<212>DNA

<213>人

<400>76

gatggctccg gccgcctggc tccgcagcgc ggccgcgcgc gccctcctgc ccccgatgct     60

gctgctgctg ctccagccgc cgccgctgct ggcccgggct ctgccgccgg acgcccacca    120

cctccatgcc gagaggaggg ggccacagcc ctggcatgca gccctgccca gtagcccggc    180

acctgcccct gccacgcagg aagccccccg gcctgccagc agcctcaggc ctccccgctg    240

tggcgtgccc gacccatctg atgggctgag tgcccgcaac cgacagaaga ggttcgtgct     300

ttctggcggg cgctgggaga agacggacct cacctacagg atccttcggt tcccatggca     360

gttggtgcag gagcaggtgc ggcagacgat ggcagaggcc ctaaaggtat ggagcgatgt     420

gacgccactc acctttactg aggtgcacga gggccgtgct gacatcatga tcgacttcgc     480

caggtactgg catggggacg acctgccgtt tgatgggcct gggggcatcc tggcccatgc     540

cttctccccc aagactcacc gagaagggga tgtccacttc gactatgatg agacctggac     600

tatcggggat gaccagggca cagacctgct gcaggtggca gcccatgaat ttggccacgt     660

gctggggctg cagcacacaa cagcagccaa ggccctgatg tccgccttct acacctttcg     720

ctacccactg agtctcagcc cagatgactg caggggcgtt caacacctat atggccagcc     780

ctggcccact gtcacctcca ggaccccagc cctgggcccc caggctggga tagacaccaa     840

tgagattgca ccgctggagc cagacgcccc gccagatgcc tgtgaggcct cctttgacgc     900

ggtctccacc atccgaggcg agctcttttt cttcaaagcg ggctttgtgt ggcgcctccg     960

tgggggccag ctgcagcccg gctacccagc attggcctct cgccactggc agggactgcc    1020

cagccctgtg gacgctgcct tcgaggatgc ccagggccac atttggttct tccaaggtgc    1080

tcagtactgg gtgtacgacg gtgaaaagcc agtcctgggc cccgcacccc tcaccgagct    1140

gggcctggtg aggttcccgg tccatgctgc cttggtctgg ggtcccgaga agaacaagat    1200

ctacttcttc cgaggcaggg actactggcg tttccacccc agcacccggc gtgtagacag    1260

tcccgtgccc cgcagggcca ctgactggag aggggtgccc tctgagatcg acgctgcctt    1320

ccaggatgct gatggctatg cctacttcct gcgcggccgc ctctactgga agtttgaccc    1380

tgtgaaggtg aaggctctgg aaggcttccc ccgtctcgtg ggtcctgact tctttggctg    1440

tgccgagcct gccaacactt tcctctgacc atggcttgga tgccctcagg ggtgctgacc    1500

cctgccaggc cacgaatatc aggctagaga cccatggcca tctttgtggc tgtgggcacc    1560

aggcatggga ctgagcccat gtctcctcag ggggatgggg tggggtacaa ccaccatgac    1620

aactgccggg agggccacgc aggtcgtggt cacctgccag cgactgtctc agactgggca    1680

gggaggcttt ggcatgactt aagaggaagg gcagtcttgg gcccgctatg caggtcctgg    1740

caaacctggc tgccctgtct ccatccctgt ccctcagggt agcaccatgg caggactggg    1800

ggaactggag tgtccttgct gtatccctgt tgtgaggttc cttccagggg ctggcactga    1860

agcaagggtg ctggggcccc atggccttca gccctggctg agcaactggg ctgtagggca    1920

gggccacttc ctgaggtcag gtcttggtag gtgcctgcat ctgtctgcct tctggctgac    1980

aatcctggaa atctgttctc cagaatccag gccaaaaagt tcacagtcaa atggggaggg    2040

gtattcttca tgcaggagac cccaggccct ggaggctgca acatacctca atcctgtccc    2100

aggccggatc ctcctgaagc ccttttcgca gcactgctat cctccaaagc cattgtaaat    2160

gtgtgtacag tgtgtataaa ccttcttctt cttttttttt ttttaaactg aggattgtca    2220

ttaaacacag ttgttttcta aaaaaaaaaa aaaaa                              2255

<210>77

<211>462

<212>DNA

<213>人

<400>77

agctctattg ccaccatgag tttctccggc aagtaccaac tgcagagcca ggaaaacttt     60

gaagccttca tgaaggcaat cggtctgccg gaagagctca tccagaaggg gaaggatatc    120

aagggggtgt cggaaatcgt gcagaatggg aagcacttca agttcaccat caccgctggg    180

tccaaagtga tccaaaacga attcacggtg ggggaggaat gtgagctgga gacaatgaca    240

ggggagaaag tcaagacagt ggttcagttg gaaggtgaca ataaactggt gacaactttc    300

aaaaacatca agtctgtgac cgaactcaac ggcgacataa tcaccaatac catgacattg    360

ggtgacattg tcttcaagag aatcagcaag agaatttaaa caagtctgca tttcatatta    420

ttttagtgtg taaaattaat gtaataaagt gaactttgtt tt                       462

<210>78

<211>2108

<212>DNA

<213>人

<400>78

gggaccgcct cggaggcaga agagccgcga ggagccagcg gagcaccgcg ggctggggcg     60

cagccacccg ccgctcctcg agtcccctcg cccctttccc ttcgtgcccc ccggcagcct    120

ccagcgtcgg tccccaggca gcatggtgag gtctgctccc ggaccctcgc caccatgtac    180

gtgagctacc tcctggacaa ggacgtgagc atgtacccta gctccgtgcg ccactctggc    240

ggcctcaacc tggcgccgca gaacttcgtc agccccccgc agtacccgga ctacggcggt    300

taccacgtgg cggccgcagc tgcagcggca gcgaacttgg acagcgcgca gtccccgggg    360

ccatcctggc cggcagcgta tggcgcccca ctccgggagg actggaatgg ctacgcgccc    420

ggaggcgccg cggccgccgc caacgccgtg gctcacggcc tcaacggtgg ctccccggcc    480

gcagccatgg gctacagcag ccccgcagac taccatccgc accaccaccc gcatcaccac    540

ccgcaccacc cggccgccgc gccttcctgc gcttctgggc tgctgcaaac gctcaacccc    600

ggccctcctg ggcccgccgc caccgctgcc gccgagcagc tgtctcccgg cggccagcgg    660

cggaacctgt gcgagtggat gcggaagccg gcgcagcagt ccctcggcag ccaagtgaaa    720

accaggacga aagacaaata tcgagtggtg tacacggacc accagcggct ggagctggag    780

aaggagtttc actacagtcg ctacatcacc atccggagga aagccgagct agccgccacg    840

ctggggctct ctgagaggca ggttaaaatc tggtttcaga accgcagagc aaaggagagg    900

aaaatcaaca agaagaagtt gcagcagcaa cagcagcagc agccaccaca gccgcctccg    960

ccgccaccac agcctcccca gcctcagcca ggtcctctga gaagtgtccc agagcccttg   1020

agtccggtgt cttccctgca agcctcagtg tctggctctg tccctggggt tctggggcca   1080

actggggggg tgctaaaccc caccgtcacc cagtgaccca ccggggtctg cagcggcaga    1140

gcaattccag gctgagccat gaggagcgtg gactctgcta gactcctcag gagagacccc    1200

tcccctccca cccacagcca tagacctaca gacctggctc tcagaggaaa aatgggagcc    1260

aggagtaaga caagtgggat ttggggcctc aagaaatata ctctcccaga tttttacttt    1320

ttcccatctg gctttttctg ccactgagga gacagaaagc ctccgctggg cttcattccg    1380

gactggcaga agcattgcct ggactgacca caccaaccag gccttcatcc tcctccccag    1440

ctcttctctt cctagatctg caggctacac ctctggctag agccgagggg agagagggac    1500

tcaagggaaa ggcaagcttg aggccaagat ggctgctgcc tgctcatggc cctcggaggt    1560

ccagctgggc ctcctgcctc cgggcaggca aggtttacac tgcggaagcc aaaggcagct    1620

aagatagaaa gctggactga ccaaagactg cagaaccccc aggtggcctg cgtctttttt    1680

ctcttccctt cccagaccag gaaaggcttg gctggtgtat gcacagggtg tggtatgagg    1740

gggtggttat tggactccag gcctgaccag ggggcccgaa cagggacttg tttagagagc    1800

ctgtcaccag agcttctctg ggctgaatgt atgtcagtgc tataaatgcc agagccaacc    1860

tggacttcct gtcattttca caatcttggg gctgatgaag aagggggtgg ggggagtttg    1920

tgttgttgtt gctgctgttt gggttgttgg tctgtgtaac atccaagcca gagtttttaa    1980

agccttctgg atccatgggg ggagaagtga tatggtgaag ggaagtgggg agtatttgaa    2040

cacagttgaa ttttttctaa aaagaaaaag agataaatga gctttccaga aaaaaaaaaa    2100

aaaaaaaa                                                             2108

<210>79

<211>3745

<212>DNA

<213>人

<400>79

cgcaaagcaa gtgggcacaa ggagtatggt tctaacgtga ttggggtcat gaagacgttg     60

ctgttggact tggctttgtg gtcactgctc ttccagcccg ggtggctgtc ctttagttcc    120

caggtgagtc agaactgcca caatggcagc tatgaaatca gcgtcctgat gatgggcaac    180

tcagcctttg cagagcccct gaaaaacttg gaagatgcgg tgaatgaggg gctggaaata    240

gtgagaggac gtctgcaaaa tgctggccta aatgtgactg tgaacgctac tttcatgtat    300

tcggatggtc tgattcataa ctcaggcgac tgccggagta gcacctgtga aggcctcgac    360

ctactcagga aaatttcaaa tgcacaacgg atgggctgtg tcctcatagg gccctcatgt    420

acatactcca ccttccagat gtaccttgac acagaattga gctaccccat gatctcagct    480

ggaagttttg gattgtcatg tgactataaa gaaaccttaa ccaggctgat gtctccagct    540

agaaagttga tgtacttctt ggttaacttt tggaaaacca acgatctgcc cttcaaaact    600

tattcctgga gcacttcgta tgtttacaag aatggtacag aaactgagga ctgtttctgg    660

taccttaatg ctctggaggc tagcgtttcc tatttctccc acgaactcgg ctttaaggtg    720

gtgttaagac aagataagga gtttcaggat atcttaatgg accacaacag gaaaagcaat   780

gtgattatta tgtgtggtgg tccagagttc ctctacaagc tgaagggtga ccgagcagtg   840

gctgaagaca ttgtcattat tctagtggat cttttcaatg accagtactt ggaggacaat   900

gtcacagccc ctgactatat gaaaaatgtc cttgttctga cgctgtctcc tgggaattcc   960

cttctaaata gctctttctc caggaatcta tcaccaacaa aacgagactt tgctcttgcc  1020

tatttgaatg gaatcctgct ctttggacat atgctgaaga tatttcttga aaatggagaa  1080

aatattacca cccccaaatt tgctcatgct ttcaggaatc tcacttttga agggtatgac  1140

ggtccagtga ccttggatga ctggggggat gttgacagta ccatggtgct tctgtatacc  1200

tctgtggaca ccaagaaata caaggttctt ttgacctatg atacccacgt aaataagacc  1260

tatcctgtgg atatgagccc cacattcact tggaagaact ctaaacttcc taatgatatt  1320

acaggccggg gccctcagat cctgatgatt gcagtcttca ccctcactgg agctgtggtg  1380

ctgctcctgc tcgtcgctct cctgatgctc agaaaatata gaaaagatta tgaacttcgt  1440

cagaaaaaat ggtcccacat tcctcctgaa aatatctttc ctctggagac caatgagacc  1500

aatcatgtta gcctcaagat cgatgatgac aaaagacgag atacaatcca gagactacga  1560

cagtgcaaat acgacaaaaa gcgagtgatt ctcaaagatc tcaagcacaa tgatggtaat  1620

ttcactgaaa aacagaagat agaattgaac aagttgcttc agattgacta ttacaacctg  1680

accaagttct acggcacagt gaaacttgat accatgatct tcggggtgat agaatactgt  1740

gagagaggat ccctccggga agttttaaat gacacaattt cctaccctga tggcacattc  1800

atggattggg agtttaagat ctctgtcttg tatgacattg ctaagggaat gtcatatctg  1860

cactccagta agacagaagt ccatggtcgt ctgaaatcta ccaactgcgt agtggacagt  1920

agaatggtgg tgaagatcac tgattttggc tgcaattcca ttttacctcc aaaaaaggac  1980

ctgtggacag ctccagagca cctccgccaa gccaacatct ctcagaaagg agatgtgtac  2040

agctatggga tcatcgcaca ggagatcatt ctgcggaaag aaaccttcta cactttgagc  2100

tgtcgggacc ggaatgagaa gattttcaga gtggaaaatt ccaatggaat gaaacccttc  2160

cgcccagatt tattcttgga aacagcagag gaaaaagagc tagaagtgta cctacttgta  2220

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cttgccaaga tatttggact ttttcatgac caaaaaaatg aaagctatat ggataccttg  2340

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gatacggtca acacagcctc taggatggaa tccactggcc tccctttgag aattcacgtg    2940

agtggctcca ccatagccat cctgaagaga actgagtgcc agttccttta tgaagtgaga    3000

ggagaaacat acttaaaggg aagaggaaat gagactacct actggctgac tgggatgaag    3060

gaccagaaat tcaacctgcc aacccctcct actgtggaga atcaacagcg tttgcaagca    3120

gaattttcag acatgattgc caactcttta cagaaaagac aggcagcagg gataagaagc    3180

caaaaaccca gacgggtagc cagctataaa aaaggcactc tggaatactt gcagctgaat    3240

accacagaca aggagagcac ctatttttaa acctaaatga ggtataagga ctcacacaaa    3300

ttaaaataca gctgcactga ggcagcgacc tcaagtgtcc tgaaagctta cattttcctg    3360

agacctcaat gaagcagaaa tgtacttagg cttggctgcc ctgtctggaa catggacttt    3420

cttgcatgaa tcagatgtgt gttctcagtg aaataactac cttccactct ggaaccttat    3480

tccagcagtt gttccaggga gcttctacct ggaaaagaaa agaaatgaat agactatcta    3540

gaacttgaga agattttatt cttatttcat ttattttttg tttgtttatt tttatcgttt    3600

ttgtttactg gctttccttc tgtattcata agatttttta aattgtcata attatatttt    3660

aaatacccat cttcattaaa gtatatttaa ctcataattt ttgcagaaaa tatgctatat    3720

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<210>80

<211>901

<212>DNA

<213>人

<400>80

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ccatcgcctt gtctgtgggg tgcactggtg ccgtgcccct catccagtct cggattgtgg    120

gaggctggga gtgtgagaag cattcccaac cctggcaggt ggctgtgtac agtcatggat    180

gggcacactg tgggggtgtc ctggtgcacc cccagtgggt gctcacagct gcccattgcc    240

taaagaagaa tagccaggtc tggctgggtc ggcacaacct gtttgagcct gaagacacag    300

gccagagggt ccctgtcagc cacagcttcc cacacccgct ctacaatatg agccttctga    360

agcatcaaag ccttagacca gatgaagact ccagccatga cctcatgctg cttcgcctgt    420

cagagcctgc caagatcaca gatgttgtga aggtcctggg cctgcccacc caggagccag    480

cactggggac cacctgctac gcctcaggct ggggcagcat cgaaccagag gagttcttgc    540

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cttactctga gaaggtgaca gagttcatgt tgtgtgctgg gctctggaca ggtggtaaag    660

acacttgtgg gggtgattct gggggtccac ttgtctgtaa tggtgtgctt caaggtatca    720

catcatgggg ccctgagcca tgtgccctgc ctgaaaagcc tgctgtgtac accaaggtgg    780

tgcattaccg gaagtggatc aaggacacca tcgcagccaa cccctgagtg cccctgtccc    840

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a                                                                    901

<210>81

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<212>DNA

<213>人

<400>81

ggggaccact tctctgggac acattgcctt ctgttttctc cagcatgcgc ttgctccagc     60

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tacgtccaaa tgacgaagtc actgcagtgc ttgcagttca aacagaattg aaagaatgca    240

tggtggttaa aacttacctc attagcagca tccctctaca aggtgcattt aactataagt    300

atactgcctg cctatgtgac gacaatccaa aaaccttcta ctgggacttt tacaccaaca    360

gaactgtgca aattgcagcc gtcgttgatg ttattcggga attaggcatc tgccctgatg    420

atgctgctgt aatccccatc aaaaacaacc ggttttatac tattgaaatc ctaaaggtag    480

aataatggaa gccctgtctg tttgccacac ccaggtgatt tcctctaaag aaacttggct    540

ggaatttctg ctgtggtcta taaaataaac ttcttaacat gcttctacaa aaaaaaaaaa    600

aaaaaaaaaa aaaaaaaa                                                  618

<210>82

<211>594

<212>DNA

<213>人

<400>82

gtcggtttag gactttctgc ctccactatt gctatcggta ctggaatagc aggcatttca     60

acatctgtca cgaccttcca tagcctatat aatgacttat ctgctagcat cacagacata    120

tcacaaactt tatcagtcct ccaggcccaa gttgaatctt tagctgcagt tgtcctccaa    180

aaccgccgag gccttgactt acttactgct taaagaggag gactctgcat attcttaaat    240

gaggagtgtt gtttttacat aaatcaatct ggcctggtgt atgacaacat aaaaaaattc    300

aaggatagag cccaaaaact taccaaccaa gcaagtaatt tcactgaacc cccttgggca    360

ctccctaatt gggtgtcctg ggtcctccca attcttagtc ctttaatacc catttttctc    420

ctccttttat tcagaccttg tatcttctgt ttagcttctc aattcatcca aaaccatatc    480

caggccatca ccaatcattc tatacgacaa atgtttctta taacatcccc acaatatcac    540

cccttaccac aagacctccc ttcaacttaa tctctcccga tataggttcc caca          594

<210>83

<211>1372

<212>DNA

<213>人

<400>83

gaattcggcg atgcctcaca actccatcag atctggccat ggagggctga accagctggg     60

aggggccttt gtgaatggca gacctctgcc ggaagtggtc cgccagcgca tcgtagacct    120

ggcccaccag ggtgtaaggc cctgcgacat ctctcgccag ctccgcgtca gccatggttg    180

cgtcagcaag atccttggca ggtactacga gactggcagc atccggcctg gagtgatagg    240

gggctccaag cccaaggtgg ccacccccaa ggtggtggag aagattgggg actacaaacg    300

ccagaaccct accatgtttg cctgggagat ccgagaccgg ctcctggctg agggcgtctg    360

tgacaatgac actgtgccca gtgtcagctc cattaataga atcatccgga ccaaagtgca    420

gcaaccattc aacctcccta tggacagctg cgtggccacc aagtccctga gtcccggaca    480

cacgctgatc cccagctcag ctgtaactcc cccggagtca ccccagtcgg attccctggg    540

ctccacctac tccatcaatg ggctcctggg catcgctcag cctggcagcg acaagaggaa    600

aatggatgac agtgatcagg atagctgccg actaagcatt gactcacaga gcagcagcag    660

cggaccccga aagcaccttc gcacggatgc cttcagccag caccacctcg agccgctcga    720

gtgcccattt gagcggcagc actacccaga ggcctatgcc tcccccagcc acaccaaagg    780

cgagcagggc ctctacccgc tgcccttgct caacagcacc ctggacgacg ggaaggccac    840

cctgacccct tccaacacgc cactggggcg caacctctcg actcaccaga cctaccccgt    900

ggtggcagat cctcactcac ccttcgccat aaagcaggaa acccccgagg tgtccagttc    960

tagctccacc ccttcctctt tatctagctc cgcctttttg gatctgcagc aagtcggctc   1020

cggggtcccg cccttcaatg cctttcccca tgctgcctcc gtgtacgggc agttcacggg   1080

ccaggccctc ctctcagggc gagagatggt ggggcccacg ctgcccggat acccacccca   1140

catccccacc agcggacagg gcagctatgc ctcctctgcc atcgcaggca tggtggcagg   1200

aagtgaatac tctggcaatg cctatggcca caccccctac tcctcctaca gcgaggcctg   1260

gcgcttcccc aactccagct tgctgagttc cccatattat tacagttcca catcaaggcc   1320

gagtgcaccg cccaccactg ccacggcctt tgaccatctg tagttgaagc tt           1372

<210>84

<211>2983

<212>DNA

<213>人

<400>84

gcccagatag gggagcggag gtggcggcgg cggcggtagc ggtggccttg gttgtcttcc     60

agtctcctcg gctcgccctt tagccggcac cgctcccctt ccctccccct tcctctcttc    120

cttccttccc tccccttccc tttttccctt ccccgtcggt gagcggcggg ggtggctcca    180

gcaacggctg ggcccaagct gtgtagaggc cttaaccaac gataacggcg gcgacggcga    240

aacctcggag ctcgcagggc gggggcaagg cccgggcctt ggagatggag aattctcagt    300

tgtgtaagct gttcatcggc ggcctcaatg tgcagacgag tgagtcgggc ctgcgcggcc     360

actttgaggc ctttgggact ctgacggact gcgtggtggt ggtgaatccc cagaccaagc     420

gctcccgttg ctttggcttc gtgacctact ccaatgtgga ggaggcggac gccgccatgg     480

ccgcctcgcc ccatgccgtg gacggcaaca ctgtggagct gaagcgggcg gtgtcccggg     540

aggattcggc gcggcccggt gcccacgcca aggttaagaa gctctttgtc ggaggcctta     600

aaggagacgt ggctgagggc gacctgatcg agcacttctc gcagtttggc accgtggaaa     660

aggccgagat tattgccgac aagcagtccg gcaagaagcg tggattcggc ttcgtgtatt     720

tccagaatca cgacgcggca gacaaggccg cggtggtcaa gttccatccg attcagggcc     780

atcgcgtgga ggtgaagaaa gcagtcccca aggaggatat ctactccggt gggggtggag     840

gcggctcccg atcctcccgg ggcggccgag gcggccgggg gcgcggcggt ggtcgagacc     900

agaacggcct ttccaagggc ggcggcggcg gttacaacag ctacggtggt tacggcggcg     960

gcggaggcgg cggctacaat gcctacggag gcggcggcgg cggttcgtcc tacggtggga    1020

gcgactacgg taacggcttc ggcggcttcg gcagctacag ccagcatcag tcctcctatg    1080

ggcccatgaa gagcggcggc ggcggcggcg gtggaggcag tagctggggc ggtcgcagta    1140

atagtggacc ttacagaggc ggctatggcg gtgggggtgg ctatggaggc agctccttct    1200

aaaagaaaat ttaaaatgcc tgggagtggc tataggggta gctctttcca acagcccaag    1260

tggggtcaac tcctaagccc caccccctca cacacaccgc cttccctgtt ttgcccttgg    1320

gggagccact tctaaggctg cttacccttg ggggtgttcc tctatttgcc tgccacctct    1380

cttgtctctc cctctgaaga tggactcggc cccacataca catttttgtg ttacagtcat    1440

tgatggactc tattttttta ttattacttg gaccttggtc gtttttatac tagcaaaatg    1500

tcttgtttta atttgtgttt tttgggggga gggagggagt gaacttgctg attctgtagc    1560

aaaacctggg tgggggttgg ggtggggggt agtttacttt gttgtaagga cttgataacc    1620

tggctacagc gttttctatg aaatctactt ggatcccatg cctgaaattt ggaagcatat    1680

gtacaaaaat catttttacg ttttattttt aataaatcat tgtgtttgac cgtacatgtc    1740

taacattttt tttctaggat ccattccgta ccgtttttta agggatattt gtttaagact    1800

ttacgtgtta attctttatt cttgatgtgt acttagagaa acttaagagg tcctgtggtt    1860

tttttcccct ctcctgttgc cctgctagtt gcgtgttgaa ttatatccct tacaggcaaa    1920

acttttgaag tggtggatgt ggctttttaa actcttaagt ttctgtgcat ccatctcttg    1980

tactaagcga attgtttatc atcttgacat ggttggtcat ttctatgaca atttacttca    2040

aactgtgtac tgtgtagttc tatatagttt gtgttaagca tgtcattcat ataaactgtt    2100

taaaattttt cagatggcct agtttcatcc ctcttactgg tttgtctgta atgaatggtt    2160

aaaaataagg gttatatttt accctcaaat gcgtttttgt actttcagag caggtttaaa    2220

cgtttttttt ttttttttcc tatatccgaa ctgttggcct catggaaatc cctttcccga    2280

tctttgtagc accatctact ggcagaatgg cagagtagct gcgaaacaat ttgtttaaaa    2340

acttgcttaa gacaattgca tcagatttgg aagttttgcc atcaaaattc tttgcagaat    2400

tggaagttaa cacatttgct tgtaactgag atgggcttca caggaatgta gttgccagtt    2460

catatcacaa tagccctttc tatatgaggt ttgaaaatgt aaactgctat gcatagcttg    2520

ggcaatagcc ctaaattgct atgacaacta atgaaccagc tacgtatact ggtattttag    2580

gtgcaagttg taaagcaaaa tatctgtgta ttctgcttgg ttaacaaatg tatatttgta    2640

gccctttcct gcaatagcat tcaagttgtt gtttataaga gaagaacaaa agtgataata    2700

ggtgaaaatt gcctttctgg atagaaatag agaatagcaa cgtttatgga tatcacaaat    2760

aaagaattca attctttaca tgattgagtg agagtatgta taacctggtg ggtgggttca    2820

gagtaccttt taatctagta tgcttaactt gatgttaata tttaacttaa atatttgact    2880

tacatgttga cgttgaaggc tcaaagctat actaagaagc tttctgaaag attgggcttt    2940

aaaataaaat aatattttaa tatt gaaaaa aaaaaaaaaa aaa                     2983

<210>85

<211>3345

<212>DNA

<213>人

<400>85

gaattccgtc tcgaccactg aatggaagaa aaggactttt aaccaccatt ttgtgactta     60

cagaaaggaa tttgaataaa gaaaactatg atacttcagg cccatcttca ctccctgtgt    120

cttcttatgc tttatttggc aactggatat ggccaagagg ggaagtttag tggacccctg    180

aaacccatga cattttctat ttatgaaggc caagaaccga gtcaaattat attccagttt    240

aaggccaatc ctcctgctgt gacttttgaa ctaactgggg agacagacaa catatttgtg    300

atagaacggg agggacttct gtattacaac agagccttgg acagggaaac aagatctact    360

cacaatctcc aggttgcagc cctggacgct aatggaatta tagtggaggg tccagtccct    420

atcaccatag aagtgaagga catcaacgac aatcgaccca cgtttctcca gtcaaagtac    480

gaaggctcag taaggcagaa ctctcgccca ggaaagccct tcttgtatgt caatgccaca    540

gacctggatg atccggccac tcccaatggc cagctttatt accagattgt catccagctt    600

cccatgatca acaatgtcat gtactttcag atcaacaaca aaacgggagc catctctctt    660

acccgagagg gatctcagga attgaatcct gctaagaatc cttcctataa tctggtgatc    720

tcagtgaagg acatgggagg ccagagtgag aattccttca gtgataccac atctgtggat    780

atcatagtga cagagaatat ttggaaagca ccaaaacctg tggagatggt ggaaaactca    840

actgatcctc accccatcaa aatcactcag gtgcggtgga atgatcccgg tgcacaatat    900

tccttagttg acaaagagaa gctgccaaga ttcccatttt caattgacca ggaaggagat    960

atttacgtga ctcagccctt ggaccgagaa gaaaaggatg catatgtttt ttatgcagtt   1020

gcaaaggatg agtacggaaa accactttca tatccgctgg aaattcatgt aaaagttaaa   1080

gatattaatg ataatccacc tacatgtccg tcaccagtaa ccgtatttga ggtccaggag   1140

aatgaacgac tgggtaacag tatcgggacc cttactgcac atgacaggga tgaagaaaat    1200

actgccaaca gttttctaaa ctacaggatt gtggagcaaa ctcccaaact tcccatggat    1260

ggactcttcc taatccaaac ctatgctgga atgttacagt tagctaaaca gtccttgaag    1320

aagcaagata ctcctcagta caacttaacg atagaggtgt ctgacaaaga tttcaagacc    1380

ctttgttttg tgcaaatcaa cgttattgat atcaatgatc agatccccat ctttgaaaaa    1440

tcagattatg gaaacctgac tcttgctgaa gacacaaaca ttgggtccac catcttaacc    1500

atccaggcca ctgatgctga tgagccattt actgggagtt ctaaaattct gtatcatatc    1560

ataaagggag acagtgaggg acgcctgggg gttgacacag atccccatac caacaccgga    1620

tatgtcataa ttaaaaagcc tcttgatttt gaaacagcag ctgtttccaa cattgtgttc    1680

aaagcagaaa atcctgagcc tctagtgttt ggtgtgaagt acaatgcaag ttcttttgcc    1740

aagttcacgc ttattgtgac agatgtgaat gaagcacctc aattttccca acacgtattc    1800

caagcgaaag tcagtgagga tgtagctata ggcactaaag tgggcaatgt gactgccaag    1860

gatccagaag gtctggacat aagctattca ctgaggggag acacaagagg ttggcttaaa    1920

attgaccacg tgactggtga gatctttagt gtggctccat tggacagaga agccggaagt    1980

ccatatcggg tacaagtggt ggccacagaa gtaggggggt cttccttaag ctctgtgtca    2040

gagttccacc tgatccttat ggatgtgaat gacaaccctc ccaggctagc caaggactac    2100

acgggcttgt tcttctgcca tcccctcagt gcacctggaa gtctcatttt cgaggctact    2160

gatgatgatc agcacttatt tcggggtccc cattttacat tttccctcgg cagtggaagc    2220

ttacaaaacg actgggaagt ttccaaaatc aatggtactc atgcccgact gtctaccagg    2280

cacacagact ttgaggagag ggcgtatgtc gtcttgatcc gcatcaatga tgggggtcgg    2340

ccacccttgg aaggcattgt ttctttacca gttacattct gcagttgtgt ggaaggaagt    2400

tgtttccggc cagcaggtca ccagactggg atacccactg tgggcatggc agttggtata    2460

ctgctgacca cccttctggt gattggtata attttagcag ttgtgtttat ccgcataaag    2520

aaggataaag gcaaagataa tgttgaaagt gctcaagcat ctgaagtcaa acctctgaga    2580

agctgaattt gaaaaggaat gtttgaattt atatagcaag tgctatttca gcaacaacca    2640

tctcatccta ttacttttca tctaacgtgc attataattt tttaaacaga tattccctct    2700

tgtcctttaa tatttgctaa atatttcttt tttgaggtgg agtcttgctc tgtcgcccag    2760

gctggagtac agtggtgtga tcccagctca ctgcaacctc cgcctcctgg gttcacatga    2820

ttctcctgcc tcagcttcct aagtagctgg gtttacaggc acccaccacc atgcccagct    2880

aatttttgta tttttaatag agacggggtt tcgccatttg gccaggctgg tcttgaactc    2940

ctgacgtcaa gtgatctgcc tgccttggtc tcccaataca ggcatgaacc actgcaccca    3000

tctacttaga tatttcatgt gctatagaca ttagagagat ttttcatttt tccatgacat    3060

ttttcctctc tgcaaatggc ttagctactt gtgtttttcc cttttggggc aagacagact    3120

cattaaatat tctgtacatt ttttctttat caaggagata tatcagtgtt gtctcataga  3180

actgcctgga ttccatttat gttttttctg attccatcct gtgtcccctt catccttgac  3240

tcctttggta tttcactgaa tttcaaacat ttgtcagaga agaaaaaagt gaggactcag  3300

gaaaaataaa taaataaaag aacagccttt tgcggccgcg aattc                  3345

<210>86

<211>990

<212>DNA

<213>人

<400>86

agccccaagc ttaccacctg cacccggaga gctgtgtcac catgtgggtc ccggttgtct     60

tcctcaccct gtccgtgacg tggattggtg ctgcacccct catcctgtct cggattgtgg    120

gaggctggga gtgcgagaag cattcccaac cctggcaggt gcttgtggcc tctcgtggca    180

gggcagtctg cggcggtgtt ctggtgcacc cccagtgggt cctcacagct gcccactgca    240

tcaggaacaa aagcgtgatc ttgctgggtc ggcacagcct gtttcatcct gaagacacag    300

gccaggtatt tcaggtcagc cacagcttcc cacacccgct ctacgatatg agcctcctga    360

agaatcgatt cctcaggcca ggtgatgact ccagccacga cctcatgctg ctccgcctgt    420

cagagcctgc cgagctcacg gatgctgtga aggtcatgga cctgcccacc caggagccag    480

cactggggac cacctgctac gcctcaggct ggggcagcat tgaaccagag gagttcttga    540

ccccaaagaa acttcagtgt gtggacctcc atgttatttc caatgacgtg tgtgcgcaag    600

ttcaccctca gaaggtgacc aagttcatgc tgtgtgctgg acgctggaca gggggcaaaa    660

gcacctgctc gggtgattct gggggcccac ttgtctgtaa tggtgtgctt caaggtatca    720

cgtcatgggg cagtgaacca tgtgccctgc ccgaaaggcc ttccctgtac accaaggtgg    780

tgcattaccg gaagtggatc aaggacacca tcgtggccaa cccctgagca cccctatcaa    840

ccccctattg tagtaaactt ggaaccttgg aaatgaccag gccaagactc aagcctcccc    900

agttctactg acctttgtcc ttaggtgtga ggtccagggt tgctaggaaa agaaatcagc    960

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<210>87

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<212>DNA

<213>人

<400>87

gcgcacactc tcctaagccc tctcatctcc tggaaccatg gccagcacat ccaccaccat     60

caggagccac agcagcagcc gccggggttt cagtgccaac tcagccaggc tccctggggt    120

cagccgctct ggcttcagca gcatctccgt gtcccgctcc aggggcagtg gtggcctggg    180

tggcgcatgt ggaggagctg gctttggcag ccgcagtctg tatggcctgg ggggctccaa    240

gaggatctcc attggagggg gcagctgtgc catcagtggc ggctatggca gcagagccgg    300

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tggctttggt ctgggtggtg gagccggcct tgctggtggc tttgggggcc ctggcttccc    420

tgtgtgcccc cctggaggca tccaagaggt cactgtcaac cagagtctcc tgactcccct    480

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cctcaagaac aaatatgagg atgaaatcaa caagcgcaca gcagcagaga atgaatttgt    840

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<210>88

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<213>人

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cttcgatgct ctctctccat cacccgccat cccctccaac accgactacc caggcccgca    300

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gaagatcaaa gagtccctgg aactcatgca gtaccttcct cagcacacaa ttgaaacgta    1080

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gtataaatat acagtataga tttttgggtg gggggcattg agtattgttt aaaatgtaat    2220

ttaaatgaaa gaaaattgag ttgcacttat tgaccatttt ttaatttact tgttttggat    2280

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<212>DNA

<213>人

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gctggcacac agggggcttg gtccttcacc tctgtcccct ctccctacgg acacatataa    120

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<213>人

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ctgacctgct ccagcatcac tatcctgagc cctaaagagt gtgaggtctt ctaccctggc    840

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tgagtattaa cctgaatgtt ttgttactta aatattaaaa acactgttat cctacagtt     3359

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<212>DNA

<213>人

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gacgcctgga aggacatctg gtggtcctta ggggagtggc ccctcctgag ccctgcgagc    5820

agcgtccttt tcctcttccc tcaggcagcg gctgtgtgaa ccgctggctg ctgttgtgcc    5880

tcatctctgg gcacattgcc tgcttccccc cagcgccggc ttctctcctc agagcgcctg    5940

tcactccatc cccggcaggg agggaccgtc agctcacaag gccctctttg tttcctgctc    6000

ccagacataa gcccaagggg cccctgcacc caagggaccc tgtccctcgg tggcctcccc    6060

aggcccctgg acacgacagt tctcctcagg caggtgggct ttgtggtcct cgccgcccct    6120

ggccacatcg ccctctcctc ttacacctgg tgaccttcga atgt                     6164

<210>98

<211>551

<212>DNA

<213>人

<400>98

accccatccg ctggctctca cccctcggag acgctcgccc gacagcatag tacttgccgc     60

ccagccacgc ccgcgcgcca gccaccatgc taggtaacaa gcgactgggg ctgtccggac    120

tgaccctcgc cctgtccctg ctcgtgtgcc tgggtgcgct ggccgaggcg tacccctcca    180

agccggacaa cccgggcgag gacgcaccag cggaggacat ggccagatac tactcggcgc    240

tgcgacacta catcaacctc atcaccaggc agagatatgg aaaacgatcc agcccagaga    300

cactgatttc agacctcttg atgagagaaa gcacagaaaa tgttcccaga actcggcttg    360

aagaccctgc aatgtggtga tgggaaatga gacttgctct ctggcctttt cctattttca    420

gcccatattt catcgtgtaa aacgagaatc cacccatcct accaatgcat gcagccactg    480

tgctgaattc tgcaatgttt tcctttgtca tcattgtata tatgtgtgtt taaataaagt    540

atcatgcatt c                                                         551

<210>99

<211>1607

<212>DNA

<213>人

<400>99

aatgactcct ttcggtaagt gcagtggaag ctgtacactg cccaggcaaa gcgtccgggc     60

agcgtaggcg ggcgactcag atcccagcca gtggacttag cccctgtttg ctcctccgat    120

aactggggtg accttggtta atattcacca gcagcctccc ccgttgcccc tctggatcca    180

ctgcttaaat acggacgagg acagggccct gtctcctcag cttcaggcac caccactgac    240

ctgggacagt gaatcgacaa tgccgtcttc tgtctcgtgg ggcatcctcc tgctggcagg    300

cctgtgctgc ctggtccctg tctccctggc tgaggatccc cagggagatg ctgcccagaa    360

gacagataca tcccaccatg atcaggatca cccaaccttc aacaagatca cccccaacct    420

ggctgagttc gccttcagcc tataccgcca gctggcacac cagtccaaca gcaccaatat    480

cttcttctcc ccagtgagca tcgctacagc ctttgcaatg ctctccctgg ggaccaaggc    540

tgacactcac gatgaaatcc tggagggcct gaatttcaac ctcacggaga ttccggaggc    600

tcagatccat gaaggcttcc aggaactcct ccgtaccctc aaccagccag acagccagct    660

ccagctgacc accggcaatg gcctgttcct cagcgagggc ctgaagctag tggataagtt    720

tttggaggat gttaaaaagt tgtaccactc agaagccttc actgtcaact tcggggacac    780

cgaagaggcc aagaaacaga tcaacgatta cgtggagaag ggtactcaag ggaaaattgt    840

ggatttggtc aaggagcttg acagagacac agtttttgct ctggtgaatt acatcttctt    900

taaaggcaaa tgggagagac cctttgaagt caaggacacc gaggaagagg acttccacgt    960

ggaccaggtg accaccgtga aggtgcctat gatgaagcgt ttaggcatgt ttaacatcca   1020

gcactgtaag aagctgtcca gctgggtgct gctgatgaaa tacctgggca atgccaccgc   1080

catcttcttc ctgcctgatg aggggaaact acagcacctg gaaaatgaac tcacccacga   1140

tatcatcacc aagttcctgg aaaatgaaga cagaaggtct gccagcttac atttacccaa   1200

actgtccatt actggaacct atgatctgaa gagcgtcctg ggtcaactgg gcatcactaa   1260

ggtcttcagc aatggggctg acctctccgg ggtcacagag gaggcacccc tgaagctctc   1320

caaggccgtg cataaggctg tgctgaccat cgacgagaaa gggactgaag ctgctggggc  1380

catgttttta gaggccatac ccatgtctat cccccccgag gtcaagttca acaaaccctt  1440

tgtcttctta atgattgaac aaaataccaa gtctcccctc ttcatgggaa aagtggtgaa  1500

tcccacccaa aaataactgc ctctcgctcc tcaacccctc ccctccatcc ctggccccct  1560

ccctggatga cattaaagaa gggttgagct ggtccctgcc tgcaaaa                1607

<210>100

<211>1753

<212>DNA

<213>人

<400>100

cagccccgcc cctacctgtg gaagcccagc cgcccgctcc cgcggataaa aggcgcggag     60

tgtccccgag gtcagcgagt gcgcgctcct cctcgcccgc cgctaggtcc atcccggccc    120

agccaccatg tccatccact tcagctcccc ggtattcacc tcgcgctcag ccgccttctc    180

gggccgcggc gcccaggtgc gcctgagctc cgctcgcccc ggcggccttg gcagcagcag    240

cctctacggc ctcggcgcct cacggccgcg cgtggccgtg cgctctgcct atgggggccc    300

ggtgggcgcc ggcatccgcg aggtcaccat taaccagagc ctgctggccc cgctgcggct    360

ggacgccgac ccctccctcc agcgggtgcg ccaggaggag agcgagcaga tcaagaccct    420

caacaacaag tttgcctcct tcatcgacaa ggtgcggttt ctggagcagc agaacaagct    480

gctggagacc aagtggacgc tgctgcagga gcagaagtcg gccaagagca gccgcctccc    540

agacatcttt gaggcccaga ttgctggcct tcggggtcag cttgaggcac tgcaggtgga    600

tgggggccgc ctggaggcgg agctgcggag catgcaggat gtggtggagg acttcaagaa    660

taagtacgaa gatgaaatta accaccgcac agctgctgag aatgagtttg tggtgctgaa    720

gaaggatgtg gatgctgcct acatgagcaa ggtggagctg gaggccaagg tggatgccct    780

gaatgatgag atcaacttcc tcaggaccct caatgagacg gagttgacag agctgcagtc    840

ccagatctcc gacacatctg tggtgctgtc catggacaac agtcgctccc tggacctgga    900

cggcatcatc gctgaggtca aggcgcagta tgaggagatg gccaaatgca gccgggctga    960

ggctgaagcc tggtaccaga ccaagtttga gaccctccag gcccaggctg ggaagcatgg   1020

ggacgacctc cggaataccc ggaatgagat ttcagagatg aaccgggcca tccagaggct   1080

gcaggctgag atcgacaaca tcaagaacca gcgtgccaag ttggaggccg ccattgccga   1140

ggctgaggag cgtggggagc tggcgctcaa ggatgctcgt gccaagcagg aggagctgga   1200

agccgccctg cagcggggca agcaggatat ggcacggcag ctgcgtgagt accaggaact   1260

catgagcgtg aagctggccc tggacatcga gatcgccacc taccgcaagc tgctggaggg   1320

cgaggagagc cggttggctg gagatggagt gggagccgtg aatatctctg tgatgaattc   1380

cactggtggc agtagcagtg gcggtggcat tgggctgacc ctcgggggaa ccatgggcag   1440

caatgccctg agcttctcca gcagtgcggg tcctgggctc ctgaaggctt attccatccg   1500

gaccgcatcc gccagtcgca ggagtgcccg cgactgagcc gcctcccacc actccactcc    1560

tccagccacc acccacaatc acaagaagat tcccacccct gcctcccatg cctggtccca    1620

agacagtgag acagtctgga aagtgatgtc agaatagctt ccaataaagc agcctcattc    1680

tgaggcctga gtgatccacg tgaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa    1740

aaaaaaaaaa aaa                                                       1753

<210>101

<211>2276

<212>DNA

<213>人

<400>101

aagcccagca gccccggggc ggatggctcc ggccgcctgg ctccgcagcg cggccgcgcg     60

cgccctcctg cccccgatgc tgctgctgct gctccagccg ccgccgctgc tggcccgggc    120

tctgccgccg gacgcccacc acctccatgc cgagaggagg gggccacagc cctggcatgc    180

agccctgccc agtagcccgg cacctgcccc tgccacgcag gaagcccccc ggcctgccag    240

cagcctcagg cctccccgct gtggcgtgcc cgacccatct gatgggctga gtgcccgcaa    300

ccgacagaag aggttcgtgc tttctggcgg gcgctgggag aagacggacc tcacctacag    360

gatccttcgg ttcccatggc agttggtgca ggagcaggtg cggcagacga tggcagaggc    420

cctaaaggta tggagcgatg tgacgccact cacctttact gaggtgcacg agggccgtgc    480

tgacatcatg atcgacttcg ccaggtactg gcatggggac gacctgccgt ttgatgggcc    540

tgggggcatc ctggcccatg ccttcttccc caagactcac cgagaagggg atgtccactt    600

cgactatgat gagacctgga ctatcgggga tgaccagggc acagacctgc tgcaggtggc    660

agcccatgaa tttggccacg tgctggggct gcagcacaca acagcagcca aggccctgat    720

gtccgccttc tacacctttc gctacccact gagtctcagc ccagatgact gcaggggcgt    780

tcaacaccta tatggccagc cctggcccac tgtcacctcc aggaccccag ccctgggccc    840

ccaggctggg atagacacca atgagattgc accgctggag ccagacgccc cgccagatgc    900

ctgtgaggcc tcctttgacg cggtctccac catccgaggc gagctctttt tcttcaaagc    960

gggctttgtg tggcgcctcc gtgggggcca gctgcagccc ggctacccag cattggcctc   1020

tcgccactgg cagggactgc ccagccctgt ggacgctgcc ttcgaggatg cccagggcca   1080

catttggttc ttccaaggtg ctcagtactg ggtgtacgac ggtgaaaagc cagtcctggg   1140

ccccgcaccc ctcaccgagc tgggcctggt gaggttcccg gtccatgctg ccttggtctg   1200

gggtcccgag aagaacaaga tctacttctt ccgaggcagg gactactggc gtttccaccc   1260

cagcacccgg cgtgtagaca gtcccgtgcc ccgcagggcc actgactgga gaggggtgcc   1320

ctctgagatc gacgctgcct tccaggatgc tgatggctat gcctacttcc tgcgcggccg   1380

cctctactgg aagtttgacc ctgtgaaggt gaaggctctg gaaggcttcc cccgtctcgt   1440

gggtcctgac ttctttggct gtgccgagcc tgccaacact ttcctctgac catggcttgg   1500

atgccctcag gggtgctgac ccctgccagg ccacgaatat caggctagag acccatggcc    1560

atctttgtgg ctgtgggcac caggcatggg actgagccca tgtctcctca gggggatggg    1620

gtggggtaca accaccatga caactgccgg gagggccacg caggtcgtgg tcacctgcca    1680

gcgactgtct cagactgggc agggaggctt tggcatgact taagaggaag ggcagtcttg    1740

ggcccgctat gcaggtcctg gcaaacctgg ctgccctgtc tccatccctg tccctcaggg    1800

tagcaccatg gcaggactgg gggaactgga gtgtccttgc tgtatccctg ttgtgaggtt    1860

ccttccaggg gctggcactg aagcaagggt gctggggccc catggccttc agccctggct    1920

gagcaactgg gctgtagggc agggccactt cctgaggtca ggtcttggta ggtgcctgca    1980

tctgtctgcc ttctggctga caatcctgga aatctgttct ccagaatcca ggccaaaaag    2040

ttcacagtca aatggggagg ggtattcttc atgcaggaga ccccaggccc tggaggctgc    2100

aacatacctc aatcctgtcc caggccggat cctcctgaag cccttttcgc agcactgcta    2160

tcctccaaag ccattgtaaa tgtgtgtaca gtgtgtataa accttcttct tctttttttt    2220

tttttaaact gaggattgtc attaaacaca gttgttttct aaaaaaaaaa aaaaaa        2276

<210>102

<211>7381

<212>DNA

<213>人

<400>102

tacagcccca aggtcgctcc ctctggggcc ctttcttccc cattcttccc agcagcccaa     60

agctctggtg ggacaggggc agcccctggg gagggaggag aggacccagg aacccggcta    120

ggagggtggc ccacccattt ccagtgtgac ctgttcccat tcccccatgt ctcctcccat    180

ccctcccgcc actcagctca ggctgatgag aagcagagca acgggtgtat cggtgttttc    240

tttcctggtg gggtagtggg gtggggctga ggagagaaaa gggtgattag cgtggggccc    300

cgccctcttt tgtcctcttc ccaggttccc tggccccttc ggagaaacgc acttggttcg    360

ggccagccgc ctgaggggac gggctcacgt ctgctcctca cactgcagct gctgggccgt    420

ggagcttccc cagggagcca gggggacttt tgccgcagcc atgaaggggg cacgctggag    480

gagggtcccc tgggtgtccc tgagctgcct gtgtctctgc ctccttccgc atgtggtccc    540

aggaaccaca gaggacacat taataactgg aagtaaaact cctgccccag tcacctcaac    600

aggctcaaca acagcgacac tagagggaca atcaactgca gcttcttcaa ggacctctaa    660

tcaggacata tcagcttcat ctcagaacca ccagactaag agcacggaga ccaccagcaa    720

agctcaaacc gacaccctca cgcagatgat gacatcaact cttttttctt ccccaagtgt    780

acacaatgtg atggagactg ttacgcagga gacagctcct ccagatgaaa tgaccacatc    840

atttccctcc agtgtcacca acacactcat gatgacatca aagactataa caatgacaac    900

ctccacagac tccactcttg gaaacacaga agagacatca acagcaggaa ctgaaagttc    960

taccccagtg acctcagcag tctcaataac agctggacag gaaggacaat cacgaacaac   1020

ttcctggagg acctctatcc aagacacatc agcttcttct cagaaccact ggactcggag    1080

cacgcagacc accagggaat ctcaaaccag caccctaaca cacagaacca cttcaactcc    1140

ttctttctct ccaagtgtac acaatgtgac agggactgtt tctcagaaga catctccttc    1200

aggtgaaaca gctacctcat ccctctgtag tgtcacaaac acatccatga tgacatcaga    1260

gaagataaca gtgacaacct ccacaggctc cactcttgga aacccagggg agacatcatc    1320

agtacctgtt actggaagtc ttatgccagt cacctcagca gccttagtaa cagttgatcc    1380

agaaggacaa tcaccagcaa ctttctcaag gacttctact caggacacaa cagctttttc    1440

taagaaccac cagactcaga gcgtggagac caccagagta tctcaaatca acaccctcaa    1500

caccctcaca ccggttacaa catcaactgt tttatcctca ccaagtggat tcaacccaag    1560

tggaacagtt tctcaggaga cattcccttc tggtgaaaca accatctcat ccccttccag    1620

tgtcagcaat acattcctgg taacatcaaa ggtgttcaga atgccaatct ccagagactc    1680

tactcttgga aacacagagg agacatcact atctgtaagt ggaaccattt ctgcaatcac    1740

ttccaaagtt tcaaccatat ggtggtcaga cactctgtca acagcactct cccccagttc    1800

tctacctcca aaaatatcca cagctttcca cacccagcag agtgaaggtg cagagaccac    1860

aggacggcct catgagagga gctcattctc tccaggtgtg tctcaagaaa tatttactct    1920

acatgaaaca acaacatggc cttcctcatt ctccagcaaa ggccacacaa cttggtcaca    1980

aacagaactg ccctcaacat caacaggtgc tgccactagg cttgtcacag gaaatccatc    2040

tacaagggca gctggcacta ttccaagggt cccctctaag gtctcagcaa taggggaacc    2100

aggagagccc accacatact cctcccacag cacaactctc ccaaaaacaa caggggcagg    2160

cgcccagaca caatggacac aagaaacggg gaccactgga gaggctcttc tcagcagccc    2220

aagctatagt gtgattcaga tgataaaaac ggccacatcc ccatcttctt cacctatgct    2280

ggatagacac acatcacaac aaattacaac ggcaccatca acaaatcatt caacaataca    2340

ttccacaagc acctctcctc aggaatcacc agctgtttcc caaaggggtc acactcgagc    2400

cccgcagacc acacaagaat cacaaaccac gaggtccgtc tcccccatga ctgacaccaa    2460

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cctgcctgag agaggagttt ccctcttccc ctatggggca ggcgccgggg acctggagtt    3720

cgtcaggagg accgtggact tcacctcccc actcttcaag ccggcgactg gcttccccct    3780

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gtcagactac cagattttct cctaccccaa cccactccca acaggcttca caggccggga    3900

ccctgtggcc ctggtggctc cgttctggga cgatgctgac ttctccactg gtcgggggac    3960

cacattttat caggaatacg agacgttcta tggtgaacac agcctgctag tccagcaggc    4020

cgagtcttgg attagaaaga tgacaaacaa cgggggctac aaggccaggt gggccctaaa    4080

ggtcacgtgg gtcaatgccc acgcctatcc tgcccagtgg accctcggga gcaacaccta    4140

ccaagccatc ctctccacgg acgggagcag gtcctatgcc ctgtttctct accagagcgg    4200

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gtgctgccgc tggaatgaca agccctacct ctgtgccctg taccagcaga ggcggcccca    4740

cgtgggctgt gctacataca ggcccccaca gcccgcctgg atgttcgggg acccccacat    4800

caccaccttg gatggtgtca gttacacctt caatgggctg ggggacttcc tgctggtcgg    4860

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cacggtccaa tggctccttg agcctcacga cgcaatccgt gtcctgctgg ataaccagac    5040

tgtgacattt cagcctgacc atgaagacgg cggaggccag gagacgttca acgccaccgg    5100

agtcctcctg agccgcaacg gctctgaggt ctcggccagc ttcgacggct gggccaccgt    5160

ctcggtgatc gcgctctcca acatcctcca cgcctccgcc agcctcccgc ccgagtacca    5220

gaaccgcacg gaggggctcc tgggggtctg gaataacaat ccagaggacg acttcaggat    5280

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tcagtacccg ccctccatca atggtggtcg tgtgattgaa gcctacaagg ggcagaccac    5640

gctgattcag tacaccagca atgctgagga tgccaacttc acgctcagag acagctgcac    5700

cgacttggag ctctttgaga atgggacgtt gctgtggaca cccaagtcgc tggagccatt    5760

cactctggag attctagcaa gaagtgccaa gattggcttg gcatctgcac tccagcccag    5820

gactgtggtc tgccattgca atgcagagag ccagtgtttg tacaatcaga ccagcagggt    5880

gggcaactcc tccctggagg tggctggctg caagtgtgac gggggcacct tcggccgcta    5940

ctgcgagggc tccgaggatg cctgtgagga gccgtgcttc ccgagtgtcc actgcgttcc    6000

tgggaagggc tgcgaggcct gccctccaaa cctgactggg gatgggcggc actgtgcggc    6060

tctggggagc tctttcctgt gtcagaacca gtcctgccct gtgaattact gctacaatca    6120

aggccactgc tacatctccc agactctggg ctgtcagccc atgtgcacct gccccccagc    6180

cttcactgac agccgctgct tcctggctgg gaacaacttc agtccaactg tcaacctaga    6240

acttccctta agagtcatcc agctcttgct cagtgaagag gaaaatgcct ccatggcaga    6300

ggtcaacgcc tcggtggcat acagactggg gaccctggac atgcgggcct ttctccgcaa    6360

cagccaagtg gaacgaatcg attctgcagc accggcctcg ggaagcccca tccaacactg    6420

gatggtcatc tcggagttcc agtaccgccc tcggggcccg gtcattgact tcctgaacaa    6480

ccagctgctg gccgcggtgg tggaggcgtt cttataccac gttccacgga ggagtgagga    6540

gcccaggaac gacgtggtct tccagcccat ctccggggaa gacgtgcgcg atgtgacagc    6600

cctgaacgtg agcacgctga aggcttactt cagatgcgat ggctacaagg gctacgacct    6660

ggtctacagc ccccagagcg gcttcacctg cgtgtccccg tgcagtaggg gctactgtga    6720

ccatggaggc cagtgccagc acctgcccag tgggccccgc tgcagctgtg tgtccttctc    6780

catctacacg gcctggggcg agcactgtga gcacctgagc atgaaactcg acgcgttctt    6840

cggcatcttc tttggggccc tgggcggcct cttgctgctg ggggtcggga cgttcgtggt    6900

cctgcgcttc tggggttgct ccggggccag gttctcctat ttcctgaact cagctgaggc    6960

cttgccttga aggggcagct gtggcctagg ctacctcaag actcacctca tccttaccgc    7020

acatttaagg cgccattgct tttgggagac tggaaaaggg aaggtgactg aaggctgtca    7080

ggattcttca aggagaatga atactgggaa tcaagacaag actatacctt atccataggc    7140

gcaggtgcac agggggaggc cataaagatc aaacatgcat ggatgggtcc tcacgcagac    7200

acacccacag aaggacacta gcctgtgcac gcgcgcgtgc acacacacac acacacacac    7260

gagttcataa tgtggtgatg gccctaagtt aagcaaaatg cttctgcaca caaaactctc    7320

tggtttactt caaattaact ctatttaaat aaagtctctc tgactttttg tgtctccaaa    7380

a                                                                    7381

<210>103

<211>2323

<212>DNA

<213>人

<400>103

agctatgatc gcaacacctt ggtggccatc gtggtgggtg tggggcgcct catcactggc     60

atggaccgag gcctcatggg catgtgtgtc aacgagcggc gacgcctcat tgtgcctccc    120

cacctgggct atgggagcat cggcctggcg gggctcattc caccggatgc caccctctac    180

ttcgatgtgg ttctgctgga tgtgtggaac aaggaagaca ccgtgcaggt gagcacattg    240

ctgcgcccgc cccactgccc ccgcatggtc caggacggcg actttgtccg ctaccactac    300

aatggcaccc tgctggacgg cacctccttc gacaccagct acagtaaggg cggcacttat    360

gacacctacg tcggctctgg ttggctgatc aagggcatgg accaggggct gctgggcatg    420

tgtcctggag agagaaggaa gattatcatc cctccattcc tggcctatgg cgagaaaggc    480

tatgggacag tgatcccccc acaggcctcg ctggtctttc acgtcctcct gattgacgtg    540

cacaacccga aggacgctgt ccagctagag acgctggagc tcccccccgg ctgtgtccgc    600

agagccgggg ccggggactt catgcgctac cactacaatg gctccttgat ggacggcacc    660

ctcttcgatt ccagctactc ccgcaaccac acctacaata cctatatcgg gcagggttac    720

atcatccccg ggatggacca ggggctgcag ggtgcctgca tgggggaacg ccggagaatt    780

accatccccc cgcacctcgc ctatggggag aatggaactg gagacaagat ccctggctct    840

gccgtgctaa tcttcaacgt ccatgtcatt gacttccaca accctgcgga tgtggtggaa    900

atcaggacac tgtcccggcc atccgagacc tgcaatgaga ccaccaagct tggggacttt    960

gttcgatacc attacaactg ttctttgctg gacggcaccc agctgttcac ctcgcatgac   1020

tacggggccc cccaggaggc gactctcggg gccaacaagg tgatcgaagg cctggacacg   1080

ggcctgcagg gcatgtgtgt gggagagagg cggcagctca tcgtgccccc gcacctggcc   1140

cacggggaga gtggagcccg gggagtccca ggcagtgctg tgctgctgtt tgaggtggag   1200

ctggtgtccc gggaggatgg gctgcccaca ggctacctgt ttgtgtggca caaggaccct   1260

cctgccaacc tgtttgaaga catggacctc aacaaggatg gcgaggtccc tccggaggag   1320

ttctccacct tcatcaaggc tcaagtgagt gagggcaaag gacgcctcat gcctgggcag   1380

gaccctgaga aaaccatagg agacatgttc cagaaccagg accgcaacca ggacggcaag   1440

atcacagtcg acgagctcaa gctgaagtca gatgaggacg aggagcgggt ccacgaggag    1500

ctctgagggg cagggagcct ggccaggcct gagacacaga ggcccactgc gagggggaca    1560

gtggcggtgg gactgacctg ctgacagtca ccctccctct gctgggatga ggtccaggag    1620

ccaactaaaa caatggcaga ggagacatct ctggtgttcc caccacccta gatgaaaatc    1680

cacagcacag acctctaccg tgtttctctt ccatccctaa accacttcct taaaatgttt    1740

ggatttgcaa agccaatttg gggcctgtgg agcctggggt tggatagggc catggctggt    1800

cccccaccat acctcccctc cacatcactg acacagctga gcttgttatc catctcccca    1860

aactttctct ttctttgtac ttcttgtcat ccccactccc agcccctatt cctctatgtg    1920

acagctggct aggacccctc tgccttcctt cccaatcctg actggctcct agggaagggg    1980

aaggctcctg gagggcagcc ctacctctcc catgcccttt gccctcctcc ctcgcctcca    2040

gtggaggctg agctgaccct gggctgctgg aggccagact gggctgtagt tagcttttca    2100

tccctaaaga aggctttccc taaggaacca tagaagagag gaagaaaaca aagggcatgt    2160

gtgagggaag ctgcttgggt gggtgttagg gctatgaaat cttggatttg gggctgaggg    2220

gtgggaggga gggcagagct ctgcacactc aaaggctaaa ctggtgtcag tccttttttc    2280

ctttgttcca aataaaagat taaaccaaaa aaaaaaaaaa aaa                      2323

<210>104

<211>741

<212>DNA

<213>人

<400>104

tcacgtgacc cgggcgcgct gcggccgccc gcgcggaccc ggcgagaggc ggcggcggga     60

gcggcggtga tggacgggtc cggggagcag cccagaggcg gggggcccac cagctctgag    120

cagatcatga agacaggggc ccttttgctt caggggatga ttgccgccgt ggacacagac    180

tccccccgag aggtcttttt ccgagtggca gctgacatgt tttctgacgg caacttcaac    240

tggggccggg ttgtcgccct tttctacttt gccagcaaac tggtgctcaa ggccctgtgc    300

accaaggtgc cggaactgat cagaaccatc atgggctgga cattggactt cctccgggag    360

cggctgttgg gctggatcca agaccagggt ggttgggacg gcctcctctc ctactttggg    420

acgcccacgt ggcagaccgt gaccatcttt gtggcgggag tgctcaccgc ctcgctcacc    480

atctggaaga agatgggctg aggcccccag ctgccttgga ctgtgttttt cctccataaa    540

ttatggcatt tttctgggag gggtggggat tgggggacat gggcattttt cttacttttg    600

taattattgg ggggtgtggg gaagagtggt cttgaggggg taataaacct ccttcgggac    660

acaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa    720

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa a                                              741

<210>105

<211>2373

<212>DNA

<213>人

<400>105

cccaggccca ccccacccag cacccctggc gcagggactg ctggaacctg gctgtgcgcg     60

ctgtcgcttt aagacagact ctgccggcgc cgtccggagc cttagaaacc ggccccggat    120

cgcgagccgg agccggagcc ggagccgggg ccggccgggc tgctgaggcc cgagcggcag    180

gagcgcagcg cggagcgctg agccaggcgc ccagtcgcga gaagctgccg ccgcctctgc    240

ccgcccggcg ccgcagcccc gggcggtcca tggggcgggc acggcgtcgc tgcaggcgcc    300

ggcagccctg gagggcagcc gcttaggcgc tgcgctcttg tccccgcagg tcgcagccag    360

ggcggcgggg cgcgcccagc cccggcccct ggagcgcccg ccgcggtccc cacctccatg    420

gacgccttca aggggggcat gagcctggag cggctgccgg aggggctccg gccgccgccg    480

ccgccacccc atgacatggg gcccgccttc cacctggccc ggcccgccga cccccgcgag    540

ccgctcgaga actccgccag cgagtcgtct gacacggagc tgccagagaa ggagcgcggc    600

ggggaaccca aggggcccga ggacagtggt gcgggaggca cgggctgcgg cggcgcagac    660

gacccagcca agaagaagaa gcagcggcgg caacgtacgc acttcacaag ccagcagttg    720

caagagctag aggccacgtt ccagaggaac cgctaccccg acatgagcat gagggaggag    780

atcgccgtgt ggaccaacct caccgagccg cgcgtgcggg tctggttcaa gaaccggcga    840

gccaagtggc gtaagcgcga gcgtaaccag cagctggacc tgtgcaaggg tggctacgtg    900

ccgcagttca gcggcctagt gcagccctac gaggacgtgt acgccgccgg ctactcctac    960

aacaactggg ccgccaagag cctggcgcca gcgccgctct ccaccaagag cttcaccttc   1020

ttcaactcca tgagcccgct gtcgtcgcag tccatgttct cagcacccag ctccatctcc   1080

tccatgacca tgccgtccag catgggccca ggcgccgtgc ctggcatgcc caactcgggc   1140

ctcaacaaca tcaacaacct caccggctcc tcgctcaact cggccatgtc gccgggcgct   1200

tgcccgtacg gcactcccgc ctcgccctac agcgtctacc gggacacgtg caactcgagc   1260

ctagccagcc tgcggctcaa gtccaaacag cactcgtcgt ttggctacgg cgccctgcag   1320

ggcccggcct cgggcctcaa cgcgtgccag tacaacagct gaccgccccg ccgcaccacg   1380

cgggccggcg gccggagcgg ggaagggcgc gggcgcggag gacgcacgcg gggccccggc   1440

tcgcaagccc cagctcaccg cgccgcggac ctcacacctg cgcagccccc tcctcccact   1500

tcccactccg ggttggtttt gtgtttgctt ttccggaccc cactctgccc tccaaaaaga   1560

caaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaagcaaaaa gacgtcggag aaaagtgccg cgaaaaaatg   1620

gatgagttgc aatttctctc gggatggcgc gggtggtgtg tgtgtgttcc cacgggcccc   1680

ggaggcccac tccgcggagg gcacgcggcg cggtaggcga gcgccgaggc ccagcggccg   1740

ggggaggacg acctcgtatc ccgcgtcccc gccgcgctgg atccggactg agtggccggg   1800

cctgcggact ggatgtgcgg ggcctggact tgcctaggat ttcccgaccc cgtacaaacc   1860

aagttgccct ctccgagcta ggcccggccg agagcgcctt agctcgagtc ggatccgtgt   1920

tggggcgggc gttgggtttg gggggacggt gcccccagcc caggatcggg cactcagtgg  1980

agccgcacac ggccccggcg cgcctggtag agcctcgctg gccccgcgcc ccggagccct  2040

atattaaggc cacggagcga cagcgggcag tgcgggcctg gcgggaggtg ggggaggtcc  2100

atctcagaac accccagcct tgagcttagc tgcaggccca ggccctctgc tctgctcccg  2160

ggctaggagg tggccctctg tctgggcgaa cagccccctc ctcaccgccc gccgtgcaag  2220

agtcgagccg gcagagcaag gggcgcggcc ccagggccct gcgcccactt tgcacacccg  2280

ctctccggcc cgcgcccctg tttacagcgt ccctgtgtat gttggactga ctgtaataaa  2340

tctgtctata tcgactaaaa aaaaaaaaaa aaa                               2373

<210>106

<211>1314

<212>DNA

<213>人

<400>106

aattcccggc tcggggacct ccacgcaccg cggctagcgc cgacaaccag ctagcgtgca     60

aggcgccgcg gctcagcgcg taccggcggg cttcgaaacc gcagtcctcc ggcgaccccg    120

aactccgctc cggagcctca gccccctgga aagtgatccc ggcatccgag agccaagatg    180

ccggcccact tgctgcagga cgatatctct agctcctata ccaccaccac caccattaca    240

gcgcctccct ccagggtcct gcagaatgga ggagataagt tggagacgat gcccctctac    300

ttggaagacg acattcgccc tgatataaaa gatgatatat atgaccccac ctacaaggat    360

aaggaaggcc caagccccaa ggttgaatat gtctggagaa acatcatcct tatgtctctg    420

ctacacttgg gagccctgta tgggatcact ttgattccta cctgcaagtt ctacacctgg    480

ctttgggggg tattctacta ttttgtcagt gccctgggca taacagcagg agctcatcgt    540

ctgtggagcc accgctctta caaagctcgg ctgcccctac ggctctttct gatcattgcc    600

aacacaatgg cattccagaa tgatgtctatgaatgggctc gtgaccaccg tgcccaccac     660

aagttttcag aaacacatgc tgatcctcat aattcccgac gtggcttttt cttctctcac    720

gtgggttggc tgcttgtgcg caaacaccca gctgtcaaag agaaggggag tacgctagac    780

ttgtctgacc tagaagctga gaaactggtg atgttccaga ggaggtacta caaacctggc    840

ttgctgatga tgtgcttcat cctgcccacg cttgtgccct ggtatttctg gggtgaaact    900

tttcaaaaca gtgtgttcgt tgccactttc ttgcgatatg ctgtggtgct taatgccacc    960

tggctggtga acagtgctgc ccacctcttc ggatatcgtc cttatgacaa gaacattagc   1020

ccccgggaga atatcctggt ttcacttgga gctgtgggtg agggcttcca caactaccac   1080

cactcctttc cctatgacta ctctgccagt gagtaccgct ggcacatcaa cttcaccaca   1140

ttcttcattg attgcatggc cgccctcggt ctggcctatg accggaagaa agtctccaag   1200

gccgccatct tggccaggat taaaagaacc ggagatggaa actaaaaaaa aaaaaaaaaa   1260

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaataaaa aaaaaaaaaa aaaa         1314

Claims (9)

1.鉴别胰癌的方法，其包含下述步骤

a.获得含有转移细胞的样品；

b.测量与F5、PSCA、ITGB6、KLK10、CLDN18、TR10或FKBP10标记基因的表达有关的生物标记；

其中在预定截止水平以上或以下的标记基因表达水平是样品中存在胰癌的指示。

2.权利要求1的方法，其中所述标记基因是F5和PSCA。

3.权利要求2的方法，其中所述标记基因还包含，或被替换为，ITGB6、KLK10、CLDN18、TR10和/或FKBP10。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中使用SEQ ID NO：39-41和43-45中的至少一个，测量基因表达。

5.组合物，其含有选自SEQ ID NO：39-41和43-45的至少一个分离的序列。

6.用于进行根据权利要求1-3之一的测定的试剂盒，其含有生物标记检测试剂。

7.用于进行权利要求1-3之一的方法的微阵列或基因芯片。

8.诊断/预后组合，其包含权利要求1-3或1-3之一所述基因组合的分离的核酸序列、它们的互补体、或其部分，其中所述组合足以测量或表征生物样品中的基因表达，与来自不同癌或正常组织的细胞相比，所述生物样品具有转移细胞。

9.根据权利要求1-3或1-3之一的方法，还包括测量在样品中组成型表达的至少一个基因的表达。

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