CN101393179B

CN101393179B - 反相高效液相色谱检测纺织品中蓝色素的方法

Info

Publication number: CN101393179B
Application number: CN 200810199093
Authority: CN
Inventors: 邓志光; 梁勇; 刘崇华; 叶湖水; 张晓利; 徐敏; 黄伯熹; 李慧; 兰丽丽; 李光毅
Original assignee: Inspection and Quarantine Technology Center of Guangdong Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau
Current assignee: Inspection and Quarantine Technology Center of Guangdong Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau
Priority date: 2008-10-13
Filing date: 2008-10-13
Publication date: 2012-04-18
Anticipated expiration: 2028-10-13
Also published as: CN101393179A

Abstract

本发明公开了一种反相高效液相色谱检测纺织品中蓝色素的方法，其包括以下步骤：(1)制备待测样品溶液；(2)制备标准溶液；(3)取标准溶液注入高效液相色谱仪，进行反相高效液相色谱法测定，并用液质联用仪确定蓝色素的出峰位置，记录出峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线方程；(4)按步骤(3)方法测定待测样品溶液中的蓝色素及其峰面积，使用所得的标准曲线计算得到待测样品中的蓝色素含量。该方法能准确、可靠、灵敏地测定出纺织品中的蓝色素及其含量。

Description

反相高效液相色谱检测纺织品中蓝色素的方法

技术领域

本发明涉及一种检测纺织品中蓝色素的方法，尤其涉及一种反相高效液相色谱检测纺织品中蓝色素的方法。

背景技术

目前世界市场上三分之二左右的合成染料是以偶氮化学为基础制成的，即约三分之二的合成染料是偶氮染料，估计有约2000个品种近60万吨年产量。若照染料的应用类别，它们分属酸性染料、冰染染料、直接染料、活性染料、分散染料、阳离子染料、碱性染料和溶剂性染料等。

1偶氮染料的重要性与危害

偶氮染料制造中两个基本反应是重氮化反应和偶合反应。芳香族伯胺(又称重氮组分)与亚硝酸作用生成重氮盐的反应称为重氮化反应，影响重氮化反应的因素有无机酸、亚硝酸钠用量、反应温度和芳香胺的碱性强弱等；重氮盐和酚类或芳香胺(又称偶合组分)作用生成偶氮化合物的反应叫偶合反应。影响偶合反应的因素有重氮组分和偶合组分的性质、介质的pH值、反应温度和盐效应等。鉴于其制造中需使用芳香胺作重氮组分，而且制造时一般是将芳香胺重氮化后与偶合组分直接偶合，偶合后再进行盐析或直接干燥制成，这里面存在着三种带入致癌芳香胺的可能性：

①使用的原料中带入了致癌芳香胺，如以同分异构体的形式带入，它们会发生下列②和③的可能性；

②由于采用致癌芳香胺作原料，而大多数偶合反应的转化率不定量，使最终成品中夹带了这些致癌芳香胺；

③由致癌芳香胺作为重氮组分组成的偶氮染料，在人体排出的具有还原性的物质作用下会发生裂解，释放出这些致癌芳香胺。

即使在制造中采取了种种措施，使上述的第一种和第二种可能性得以避免和克服，但第三种可能性依旧存在。

偶氮染料在特定条件下会裂解产生23种致癌芳香胺。此23种致癌芳香胺的毒性和名称为：

(1)属MAKIII A1的芳香胺：

4-胺基联苯、联苯胺、4氯-甲苯胺(或对-氯-甲苯胺)、2-萘胺。

(2)属MAKIII A2的芳香胺：

4-氨基-3，2-二甲基偶氮苯、2-氨基-4-硝基甲苯、4-氯苯胺、2，4-二氨基苯甲醚、4，4′-二氨基二苯甲烷、3，3′-二氯联苯胺、3，3′-二甲氧基联苯胺、3，3′2二甲基联苯胺、3，3′-二甲基-4，4′-二氨基二苯甲烷、对-克里西丁(或2-甲氧基-5-甲基苯胺)、4，4′-亚甲基-二(2-氯苯胺)、4，4′-二氨基二苯醚、4，4′-二氨基二苯硫醚、邻甲苯胺、2，4-二氨基甲苯、2，4，5-三甲基苯胺、邻氨基苯甲醚(或2-甲氧基苯胺)、2，4-二甲基苯胺、2，6-二甲基苯胺。

偶氮染料是染料生产中所占比例最大的一类染料，它基本上包括了用于各种用途的几乎全部色谱，经还原可裂解出一种或多种致癌芳香胺。此外偶氮染料在生产过程中还会带入一部分重金属，重金属对人体的累积毒性相当严重。随着化工实践的不断丰富，人们逐渐感受到某些防止染料和所用的一些原料对人体的直接危害性，为此，一些国家制定了限制使用偶氮染料的政策以保护环境和人体健康，而对于偶氮染料的限制已经成为我国纺织品和皮革制品出口的重要技术性贸易壁垒。

2偶氮染料检测方法的发展

从纺织品商检出微量甚至是痕量的芳香胺不是一件容易的事，就一般而言，按环保标准对纺织品进行检测属微量分析范畴，被分析物的浓度通常已经十分接近甚至低于分析方法本身的极限，因此在保证分析系统的灵敏度和准确度的前提下确定样品的制备方法、定性定量分析方法和分析仪器的选用等就显得至关重要，尤其是在对样品进行预处理后的得到的是一个混合体系，在如何选择分析手段是保证分析成功的关键。

偶氮染料的检测自七十年代以来围绕着下列两方面进行了大量的研究：

样品的制备：包括直接在纺织品上进行还原然后用有机溶剂萃取或是先将染料从纺织品上剥离下来再还原，以及采用的还原条件、萃取溶剂的选择等。以往，比较通用的制备方法是染料从纺织品上提取后用保险粉(连二亚硫酸钠Na₂S₂O₄)还原已产生可能存在的致癌芳香胺再经提取后进行定性分析。

定性分析的方法，曾采用以下五种：

(1)氧化显色法，即使用氧化剂使芳香胺产生有色的溶液或沉淀，再用紫外光谱仪进行检测，根据特征吸收峰进行定性。

(2)重氮偶合法，即将芳香胺进行重氮化与偶合，形成可溶性的偶氮染料，再用分光光度法测定。同时运用多种偶合剂进行测定比较。包括稳定性和克分子消光系数等，可以得出定性的结论。

(3)其他显色反应，即使用特定的显色剂和分光光度法对未知芳香胺进行定性分析。

(4)纸色谱法和点滴试验，即运用经典的纸色谱技术对还原所得的混合物进行分离，然后用上述各种显色方法进行点滴试验或用适当溶剂洗涤提取后再按上述方法进行定性。在纸色谱分离分析方面已能分离分析出大部分致癌芳香胺，在某些标准的条件下也可以通过R^f进行定性分析。

(5)薄层色谱法，其基本原理与纸色谱法相同，不过由于在薄层色谱中作为固定相的薄层可采用多种配方或经多种特殊处理，因此就其分离能力及选择性与纸色谱法相比，其回旋余地大大地扩展了，从而使薄层色谱法成为芳香胺分离和定性分析的一种比较成熟的方法，已经研究确定的各种芳香胺在不同分离条件下的R^f值可以作为一种标准参数。

上述的分离方法都已取得一定的进展，最低检测限量可达0.01-0.04毫克/升，但是他们实验操作复杂，对分析人员的技术要求比较高，各种芳香胺分离和检出的特异性强，分离分析条件差异较大，而且前三种方法还常受到样品量太小的限制而难以奏效，因此随着禁用染料问题的进一步突出和法制化，德国一些组织进行联合或单独研究，开发禁用偶氮染料检测的新技术和新方法。

1997年3月中旬德国政府把采用日用品法第35款开发的纺织品中禁用偶氮染料检测方法规定为法定禁用染料测试标准，此标准的主要步骤如下：

(1)把1.0克纺织品样品分成几小份；

(2)用保险粉在含柠檬酸盐缓冲液(pH＝6)的密闭容器中于70℃对纺织品进行还原；

(3)完全还原后用甲基叔丁基醚在萃取器中萃取；

(4)在旋转蒸发器中缓慢浓缩；

(5)把蒸掉溶剂的残渣溶解在2毫升甲醇中；

(6)用薄层色谱、气相色谱、高效液相色谱或毛细管电泳法进行定性分析；

(7)用带二极管阵列式监测器的高效液相色谱进行定量分析；

(8)用至少两种各自独立的色谱分离技术得出定性结果。

其他国家配合颁布的禁用染料法律所采用的检测方法基本上是基于德国法定的纺织品中禁用染料监测标准，不过德国的方法标准仍存在一些不足之处，表现在：

(1)适用范围窄；

(2)还原条件对被检测偶氮染料的还原程度随其性质而异；

(3)抽提和浓缩的条件对致癌芳香胺特别是易氧化的芳香胺的适用性有差异；

(4)需考虑纺织品对芳香胺的吸附因素；

(5)方法的精密度和重复性较差。

因此，德国纺织品中禁用偶氮染料监测标准尚需在实践中进一步完善和发展。

3蓝色素的化学成分及危害

蓝色素，或者称为蓝色染料、蓝色着色剂，属于偶氮染料的范畴。蓝色素是一种混合物，没有单独的CAS编号，主要成分有两种：分子式分别为C₃₉H₂₃ClCrN₇O₁₂S·2Na(CASNo.：118685-33-9)和C₄₆H₃₀CrN₁₀O₂₀S₂·3Na(无CAS No.)蓝色素的索引号为“611-070-00-2”，EC编号为“405-665-4”。据欧洲委员会有关官员介绍，该“蓝色素”的商品名称为“海军蓝018112(Navy Blue 018112)”或“藏青018112(Navy 018112)”。

欧盟1993年7月20日通过的93/67/EEC号指令中已对蓝色素的人体和环境的危害作了评估，经检测认定蓝色素具有很高的水生毒性，且不易降解，随废水进入环境后，可持久存在，因此需要迫切降低蓝色素对环境的危害。而欧共体官方公报于2003年1月9日发布欧盟委员会指令规定：禁止在纺织品和皮革制品上使用“蓝色素”，并禁止在市场上销售含“蓝色素”的纺织品和皮革制品。

随着国际社会和经济的不断发展，可持续发展已经成为世界各国越来越重视的重大问题，而环境保护则是各国实施可持续发展战略的重要组成部分。而国际上的绿色消费潮流已经开始影响我国的纺织品服装出口。随着绿色、生态等观念逐渐被消费者所广泛认同，对纺织品服装的生态要求正在迅速成为阻碍我国纺织品服装出口扩大国际市场份额的主要障碍。

而由于德国纺织品中禁用偶氮染料监测方法是通过还原偶氮染料，测定还原产物来确定偶氮染料的含量，使用该方法测定蓝色素，提取后溶液中物质十分复杂(参见图1)，在未知蓝色素结构式的前提下，难于判断色谱图中那些峰与蓝色素有关，不能准确可靠地检测纺织品中的蓝色素及其含量。而且目前我国尚未公开发布一种可行的检测蓝色素的方法，使该项目的检验工作无法进行，因此亟需研究一种准确、可靠，灵敏的检验方法和相关技术，满足绿色纺织品发展的需要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用反相高效液相色谱快速测定纺织品蓝色素的方法，该方法能准确、可靠、灵敏地测定出纺织品中的蓝色素及其含量。

本发明的目的是通过以下技术措施来实现的：一种反相高效液相色谱检测纺织品中蓝色素的方法，其包括以下步骤：

(1)制备待测样品溶液；

(2)制备标准溶液；

(3)取标准溶液注入高效液相色谱仪，进行反相高效液相色谱法测定，并用液质联用仪确定蓝色素的出峰位置，记录出峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线方程；

(4)按步骤(3)方法测定待测样品溶液中的蓝色素及其峰面积，使用所得的标准曲线计算得到待测样品中的蓝色素含量。

所述步骤(3)方法中的色谱条件为：C18色谱柱；柱温：室温；检测波长：254nm；流动相A：乙腈；流动相B：磷酸盐缓冲盐溶液；梯度洗脱：开始时A相∶B相为20％∶80％～35％∶65％，35～45min后，A相∶B相变化为80％∶20％～65％∶35％；流速0.8～1.2mL/min；自动进样，进样体积10～20μL。

所述的C₁₈色谱柱的规格是：5μm，250mm×4.6mm或5μm，150mm×4.6mm。

待测样品溶液可用现有技术中的方法进行制备，但是为减少在测定时出现的杂质峰，且蓝色素得到较好的分离提取效果，所述的步骤(1)可作以下改进：

①将待测染色纺织样品剪成小块；

②将染色纺织样品与甲醇和水的混合溶液按1∶20～1∶30的重量体积比放入比色管中，比色管置于功率为350～450W的超声波中在50～70℃温度下振荡萃取；

③所得的萃取液室温冷却过滤后，置于样品瓶中，密封保存。

所述的甲醇和水混合溶液中，甲醇∶水为70～90∶30～10。所述的甲醇和水混合溶液中甲醇所占比例越高，蓝色素的提取效果越好，在测定中杂质峰不多，有利于准确判断蓝色素的吸收峰。

所述的超声振荡萃取时间为25～35min，以确保良好的提取效果。蓝色素具有较强的吸附能力尤其在塑料上的吸附现象更为明显，在过滤时应注意避免与其他塑料聚合物过多接触。

所述的磷酸盐缓冲溶液的浓度为4.9～6.2g/l，其pH值为7.3～7.5。而所述的磷酸盐缓冲盐溶液为磷酸二氢钾盐溶液、磷酸与磷酸钾混合溶液、磷酸与磷酸氢钾混合溶液、磷酸二氢钾与磷酸钾混合溶液和磷酸二氢钾与磷酸氢钾混合溶液中的一种。

所述步骤(2)的具体方法为：称量“蓝色素”标准样品5.4mg，用超纯水定容到10ml，由于蓝色素的纯度为93％，所以计算得到浓度为：5.4×93％/10＝0.502mg/ml的标准溶液；分别取标准溶液4ml、3ml、2ml到10ml容量瓶中定容，分别得到浓度为0.201mg/ml，0.151mg/ml，0.100mg/ml的溶液；分别取以上浓度的溶液4ml到10ml容量瓶中定容，得到浓度分别为0.080mg/ml，0.060mg/ml，0.040mg/ml的溶液；分别取浓度为0.201mg/ml和0.100mg/ml溶液1ml到10ml容量瓶中定容，得到浓度为0.020mg/ml和0.010mg/ml的溶液；各取浓度为0.080mg/ml，0.060mg/ml和0.040mg/ml溶液1ml置于10ml容量瓶中定容，得到浓度分别为0.008mg/ml，0.006mg/ml和0.004mg/ml的溶液。

本发明还包括回收率测定步骤：取5份等量纺织样品溶液，分别加入标准溶液0ml、0.5ml、1ml、1.5ml和2ml，在10ml容量瓶中定容，充分混合后，使用高效液相色谱仪测定各溶液的峰面积，以标准曲线作标准把峰面积转换为浓度，计算以上0.5ml、1ml、1.5ml和2ml的4个溶液的回收率，得出平均回收率。

本发明与现有技术相比具有以下显著效果：

(1)本发明通过直接提取蓝色素进行反相高效液相色谱法测定，并用液质联用仪确定蓝色素的出峰位置，并得到蓝色素的标准曲线。由于直接提取蓝色素进行测定，无需还原，避免因蓝色素还原后的溶液中复杂的物质成分使得难于判断与蓝色素有关的色谱峰造成测定结果不准确的情况，因此该方法不仅能准确、可靠、灵敏地定性测定纺织品中的蓝色素而且测定出纺织品中的蓝色素及其浓度。

(2)本发明公开的测定方法在0.006mg/ml～0.04mg/ml和0.02mg/ml～0.201mg/ml这两个范围内的线性关系良好。其最低检出限为：0.006mg/ml，能够准确、可靠、灵敏地测定出纺织品中的蓝色素及其含量。

(3)采用甲醇和水的混合溶液作为提取蓝色素的溶剂，其中甲醇所占的比例较高，使蓝色素得到较好的提取分离效果，减少了在高效液相色谱测定中出现的杂质峰，利于判断蓝色素的吸收峰的出峰位置。

(4)采用超声波振荡提取，并选择功率350～450W、50～70℃，25～35min的提取条件，在不改变蓝色素的性质、不引入新物质和不造成损失的情况下，得到较高的提取分离效果，确保了测定的准确性。

(5)使用梯度洗脱，开始时使用乙腈∶磷酸盐缓冲盐溶液20％∶80％～35％∶65％为流动相进行梯度洗脱，40分钟后用乙腈∶磷酸盐缓冲盐溶液80％∶20％～65％∶35％作流动相梯度洗脱，最终得到的色谱图的基线平直，目标峰分离效果好，纯度高。

附图说明

图1是使用德国日用品法禁用偶氮染料检测方法提取布样中蓝色素的色谱图；

图2是本发明实例一中用甲醇∶水＝70∶30作为提取溶剂的色谱图；

图3是本发明实例一中进行梯度洗脱所得色谱图，梯度洗脱的具体程序为：开始时用乙腈∶磷酸二氢钾缓冲盐溶液比例为：30％∶70％，40分钟后乙腈∶磷酸二氢钾缓冲盐溶液比例为：70％∶30％；

图4是本发明实例一中蓝色素0.006mg/ml-0.04mg/ml浓度标准曲线；

图5是本发明实例一中纺织品样品检测得到的色谱图；

图6是本发明实例二中蓝色素0.02mg/ml-0.201mg/ml浓度的标准曲线。

具体实施方式

以下结合实施例和对比例对本发明进行阐述，然而本发明的保护范围并非仅仅局限于以下实施例。所属技术领域的普通技术人员依据本发明公开的内容，均可实现本发明的目的。

实施例一：

1实验仪器与试剂

1.1实验仪器：

日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，Kromsil ODS-1C18，5μm，250mm×4.6mm色谱柱；SPD-10A紫外检测仪，SCL-10A记录仪，KQ-500DE型数控超声波清洗器，电热鼓风干燥箱。FINNIGAN LCQ DECA XP MAX液质联用仪。

1.2药品与试剂：

C₃₉H₂₃ClCrN₇O₁₂S·2Na标准样品(纯度为93％)。

2样品制备

2.1提取样品制备：

将单一的染色纺织样品剪成3.5cm×3.5cm的小块状。称量重为0.5421g。将试样置于50mL比色管内，加入15mL甲醇∶水＝70∶30的混合溶液，置于频率为400W超声波浴中，在(60±2)℃下萃取30min。萃取液于室温冷却，用孔径为0.45μm的聚四氟乙烯膜过滤器过滤。过滤时应避免与其他塑料聚合物过多接触。萃取物倒入1mL样品瓶中，旋紧特氟纶盖，保存备用。

2.2标准样品制备：

使用电子天平称量“蓝色素”标准样品5.4mg，用超纯水定容到10ml，由于蓝色素的纯度为93％，所以计算得到浓度为：5.4×93％/10＝0.502mg/ml的标准溶液；分别取标准溶液4ml、3ml、2ml到10ml容量瓶中定容，分别得到浓度为0.201mg/ml，0.151mg/ml，0.100mg/ml的溶液；分别取以上浓度的溶液4ml到10ml容量瓶中定容，得到浓度分别为0.080mg/ml，0.060mg/ml，0.040mg/ml的溶液；分别取浓度为0.201mg/ml和0.100mg/ml溶液1ml到10ml容量瓶中定容，得到浓度为0.020mg/ml和0.010mg/ml的溶液；各取浓度为0.080mg/ml，0.060mg/ml和0.040mg/ml溶液1ml置于10ml容量瓶中定容，得到浓度分别为0.008mg/ml，0.006mg/ml和0.004mg/ml的溶液。

2.3流动相配备：

磷酸盐缓冲盐溶液：称取磷酸二氢钾5克，用800毫升纯水溶解，用2mol/L的氢氧化钠溶液调pH值到7.5，最后定容到1000毫升。

3测定方法

3.1色谱条件：

Kromsil ODS-1C18，5μm，250mm×4.6mm色谱柱；柱温：室温；检测波长：254nm；流动相A：乙腈；流动相B：磷酸二氢钾缓冲盐溶液(pH＝7.5)；梯度洗脱：开始使用A相∶B相＝30％∶70％，40min后使用A相∶B相＝70％∶30％；流速1.0mL/分钟；自动进样，进样体积20μL。得到图2、图3所示的色谱图。

3.2标准曲线：

分别量取2.2中制备的0.040mg/ml，0.020mg/ml，0.010mg/ml，0.008mg/ml，0.006mg/ml和0.004mg/ml标准溶液各20μl注入液相色谱仪，按上述方法配置标准品溶液用反相高效液相色谱法测定，在254nm波长处测定出峰面积。记录峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线图(图4)。

得到回归方程为：

(1)Y＝aX+b，(a＝3.802214e-008，b＝2.975898e-003)，R＝0.9994731

3.4精密度：

按上述方法制备标准品溶液，取0.008mg/ml浓度的溶液连续测5次，按峰面积对应标准曲线得出的浓度计(表1)，蓝色素的吸收度的RSD为％(n＝5)，表明仪器精密度良好。

表1蓝色素精密度考察

3.5待测样品中的蓝色素的回收率：

取5份等量的含“蓝色素”纺织品的提取样品溶液(3ml)，分别加入浓度为0.080mg/ml的标准溶液0ml、0.5ml、1ml、1.5ml和2ml，在10ml容量瓶中定容，充分混合后，使用高效液相色谱仪测定各溶液的峰面积，以标准曲线(1)作标准把峰面积转换为浓度，计算以上后面4个溶液(不含加入0ml)的回收率，得出平均回收率为，结果见表2：

表2蓝色素回收率实验数据考察

3.6待测样品中蓝色素含量的测定：

取2.1制备的待测样品溶液，以3.1的色谱条件进行高效液相色谱测定，色谱图见图5：峰面积为483532，选择标准曲线(1)，所得样品溶液中蓝色素的浓度为0.02149mg/ml。

实施例二：

与实施例一不同的是：

标准曲线：分别量取实施例一2.2中制备的0.201mg/ml，0.100mg/ml，0.080mg/ml，0.060mg/ml，0.040mg/ml和0.020mg/ml标准溶液各20μl注入液相色谱仪，按上述方法配置标准品溶液用反相高效液相色谱法测定，在254nm波长处测定出峰面积。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线图(图6)。

得到的回归方程为：

(2)Y＝aX+b，(a＝3.703613e-008，b＝2.870155e-003)，R＝0.9996135

待测样品中蓝色素含量的测定：取2.1制备的实际样品，以3.1的色谱条件进行高效液相色谱测定：峰面积为1405145，选择标准曲线(2)，所得样品测量浓度为0.06245mg/ml。

实施例三：

1实验仪器与试剂同实施例一

2样品制备

2.1提取样品制备：

将单一的染色纺织样品剪成3.5cm×3.5cm的小块状。称量重为0.5562g。将试样置于50mL比色管内，加入15mL甲醇∶水＝80∶20的混合溶液，置于频率为450W超声波浴中，在(70±2)℃下萃取30min。萃取液于室温冷却，用孔径为0.45μm的聚四氟乙烯膜过滤器过滤。过滤时应避免与其他塑料聚合物过多接触。萃取物倒入1mL样品瓶中，旋紧特氟纶盖，保存备用。

2.2标准样品制备同实施例一

2.3流动相配备：

磷酸二氢钾与磷酸钾混合溶液：称取磷酸二氢钾2.60克和磷酸钾3.53克，用800毫升纯水溶解，用10％的磷酸溶液调pH值到7.4，最后定容到1000毫升。

3测定方法

3.1色谱条件：

Kromsil ODS-1C18，5μm，250mm×4.6mm色谱柱；柱温：室温；检测波长：254nm；流动相A：乙腈；流动相B：磷酸二氢钾与磷酸钾混合溶液(pH＝7.4)；梯度洗脱：开始使用A相∶B相＝20％∶80％，35min后使用A相∶B相＝80％∶20％；流速1.2mL/分钟；自动进样，进样体积20μL。

3.2标准曲线：

分别量取2.2中制备的0.040mg/ml，0.020mg/ml，0.010mg/ml，0.008mg/ml，0.006mg/ml和0.004mg/ml标准溶液各20μl注入液相色谱仪，按上述方法配置标准品溶液用反相高效液相色谱法测定，在254nm波长处测定出峰面积。记录峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线图。

得到回归方程为：

(3)Y＝aX+b，(a＝3.792316e-008，b＝2.967865e-003)，R＝0.9995674

3.3待测样品中蓝色素含量的测定：

取2.1制备的待测样品溶液，以3.1的色谱条件进行高效液相色谱测定，峰面积为410406，选择标准曲线(3)，所得样品溶液中蓝色素的浓度为0.01824mg/ml。

实施例四：

1实验仪器与试剂同实施例一

2样品制备

2.1提取样品制备：

将单一的染色纺织样品剪成3.5cm×3.5cm的小块状。称量重为0.5878g。将试样置于50mL比色管内，加入15mL的甲醇∶水＝90∶10的混合溶液，置于频率为350W超声波浴中，在(50±2)℃下萃取35min。萃取液于室温冷却，用孔径为0.45μm的聚四氟乙烯膜过滤器过滤。过滤时应避免与其他塑料聚合物过多接触。萃取物倒入1mL样品瓶中，旋紧特氟纶盖，保存备用。

2.2标准样品制备同实施例一

2.3流动相配备：

磷酸二氢钾与磷酸氢钾混合溶液：称取磷酸二氢钾0.41克和磷酸氢钾5.59克，用800毫升纯水溶解，用10％的磷酸溶液调pH值到7.3，最后定容到1000毫升。

3测定方法

3.1色谱条件：

Kromsil ODS-1C18，5μm，250mm×4.6mm色谱柱；柱温：室温；检测波长：254nm；流动相A：乙腈；流动相B：磷酸二氢钾与磷酸氢钾混合溶液(pH＝7.3)；梯度洗脱：开始使用A相∶B相＝35％∶65％，45min使用A相∶B相＝65％∶35％；流速0.8mL/分钟；自动进样，进样体积20μL。

3.2标准曲线：

得到回归方程为：

(4)Y＝aX+b，(a＝3.714675e-008，b＝2.876254e-003)，R＝0.9998446

3.3待测样品中蓝色素含量的测定：

取2.1制备的待测样品溶液，以3.1的色谱条件进行高效液相色谱测定，峰面积为2108731，选择标准曲线(4)，所得样品溶液中蓝色素的浓度为0.09372mg/ml。

Claims

1.一种反相高效液相色谱检测纺织品中蓝色素的方法，其特征是，具有以下步骤：

1实验仪器与试剂

1.1实验仪器：

日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，Kromsil ODS-1C18，5μm，250mm×4.6mm色谱柱；SPD-10A紫外检测仪，SCL-10A记录仪，KQ-500DE型数控超声波清洗器，电热鼓风干燥箱，FINNIGAN LCQ DECA XP MAX液质联用仪；

1.2药品与试剂：

蓝色素标准样品：纯度为93％的C₃₉H₂₃ClCrN₇O₁₂S·2Na标准样品；

2样品制备

2.1提取样品制备：

将单一的染色纺织样品剪成3.5cm×3.5cm的小块状，称量重为0.5562g，将试样置于50mL比色管内，加入15mL甲醇∶水＝80∶20的混合溶液，置于频率为450W超声波浴中，在70±2℃下萃取30min，萃取液于室温冷却，用孔径为0.45μm的聚四氟乙烯膜过滤器过滤，萃取物倒入1mL样品瓶中，旋紧特氟纶盖，保存备用；

2.2标准样品制备：

使用电子天平称量蓝色素标准样品5.4mg，用超纯水定容到10ml，得到浓度为0.502mg/ml的标准溶液；分别取标准溶液4ml、3ml、2ml到10ml容量瓶中定容，分别得到浓度为0.201mg/ml，0.151mg/ml，0.100mg/ml的溶液；分别取以上浓度的溶液4ml到10ml容量瓶中定容，得到浓度分别为0.080mg/ml，0.060mg/ml，0.040mg/ml的溶液；分别取浓度为0.201mg/ml和0.100mg/ml溶液1ml到10ml容量瓶中定容，得到浓度为0.020mg/ml和0.010mg/ml的溶液；各取浓度为0.080mg/ml，0.060mg/ml和0.040mg/ml溶液1ml置于10ml容量瓶中定容，得到浓度分别为0.008mg/ml，0.006mg/ml和0.004mg/ml的溶液；

2.3流动相配备：

磷酸二氢钾与磷酸钾混合溶液：称取磷酸二氢钾2.60克和磷酸钾3.53克，用800毫升纯水溶解，用10％的磷酸溶液调pH值到7.4，最后定容到1000毫升；

3测定方法

3.1色谱条件：

Kromsil ODS-1C18，5μm，250mm×4.6mm色谱柱；柱温：室温；检测波长：254nm；流动相A：乙腈；流动相B：pH＝7.4的磷酸二氢钾与磷酸钾混合溶液；梯度洗脱：开始使用A相∶B相＝20％∶80％，35min后使用A相∶B相＝80％∶20％；流速1.2mL/分钟；自动进样，进样体积20μL；

3.2标准曲线：

分别量取2.2中制备的0.040mg/ml，0.020mg/ml，0.010mg/ml，0.008mg/ml，0.006mg/ml和0.004mg/ml标准溶液各20μl注入液相色谱仪，按上述方法配置标准品溶液用反相高效液相色谱法测定，在254nm波长处测定出峰面积，记录峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线图；

得到回归方程为：

Y＝aX+b，其中a＝3.792316e-008，b＝2.967865e-003，R＝0.9995674；

3.3待测样品中蓝色素含量的测定：

取2.1制备的待测样品溶液，以3.1的色谱条件进行高效液相色谱测定，峰面积为410406，采用上述标准曲线，计算出所得样品溶液中蓝色素的浓度为0.01824mg/ml。