CN101386825A - 一种产果胶酶的工程菌株 - Google Patents

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一种产果胶酶的工程菌株，它涉及一种产酶工程菌株。本发明提供了一种用于微生物发酵的产果胶酶的工程菌株。产果胶酶的工程菌株大肠埃希氏菌HDDMG05属于埃希氏菌属，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC No：M 208082；大肠埃希氏菌HDDMG05为革兰氏阴性菌，无芽孢，菌株个体呈短杆状，长为0.2～0.7μm，宽为0.2～0.5μm；大肠埃希氏菌HDDMG05菌落呈圆形，白色，隆起，边缘呈波浪状，表面光滑有光泽，透明，菌落挑起软。可采用LB液体培养基发酵本发明大肠埃希氏菌HDDMG05，其发酵条件与LB液体培养基培养大肠杆菌的相同；发酵液中大肠埃希氏菌HDDMG05菌数浓度为1×107～1×108cfu/mL时发酵液中果胶酶的酶活力达8200U/mL以上。

Description

一种产果胶酶的工程菌株
技术领域
本发明涉及一种产酶工程菌株。
背景技术
果胶酶外观呈浅黄色粉末状，能降解果胶质，可以用于果蔬汁饮料及果酒的榨汁及澄清，因此在果汁制造、果酒酿造等方面有着广泛应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于微生物发酵的产果胶酶的工程菌株。
产果胶酶的工程菌株大肠埃希氏菌HDDMG05(Escherichia coliHDDMG05)属于埃希氏菌属(Escherichia)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2008年6月2日，保藏号为CCTCC No：M208082；大肠埃希氏菌HDDMG05为革兰氏阴性菌，无芽孢，菌株个体呈短杆状，长为0.2～0.7μm，宽为0.2～0.5μm，常以成对或单个出现；大肠埃希氏菌HDDMG05菌落呈圆形，白色，隆起，边缘呈波浪状，表面光滑有光泽，透明，菌落挑起软。
大肠埃希氏菌HDDMG05D-木糖发酵为阴性、山梨醇发酵为阳性、乳糖发酵为阳性、棉子糖发酵为阴性、海藻糖发酵为阳性、葡萄糖发酵为阳性、甘露醇发酵为阳性、L-阿拉伯糖发酵为阳性、柠檬酸盐利用试验为阴性、甲基红试验为阳性、V-P试验为阴性、硝酸盐还原试验为阳性、亚硝酸盐还原试验为阴性、淀粉水解试验为阴性、明胶液化试验为阴性、苯丙氨酸脱氨酶试验试验、吲哚试验阳性、鸟氨酸脱羧酶试验阳性、赖氨酸脱羧酶试验试验、质量浓度2％的NaCl耐盐性试验为阳性、质量浓度3％的NaCl耐盐性试验为阳性、质量浓度7％的NaCl耐盐性试验为阳性、质量浓度10％的NaCl耐盐性试验为阳性。
可采用LB液体培养基发酵本发明大肠埃希氏菌HDDMG05，其发酵条件与LB液体培养基培养大肠杆菌的相同；发酵液中大肠埃希氏菌HDDMG05菌数浓度为1×107～1×108cfu/mL时发酵液中果胶酶的酶活力达8200U/mL以上。
本发明产果胶酶的工程菌株HDDMG05(Escherichiacoli HDDMG05)为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)属于埃希氏菌属(Escherichia)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2008年6月2日，保藏号为CCTCC No：M208082。
附图说明
图1是具体实施方式一大肠埃希氏菌HDDMG05菌株形态图(100倍放大图)，图2是具体实施方式一大肠埃希氏菌HDDMG05及其相近菌株的16SrDNA基因序列所构建的系统发育树。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式产果胶酶的工程菌株大肠埃希氏菌HDDMG05(Escherichia coli HDDMG05)属于埃希氏菌属(Escherichia)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2008年6月2日，保藏号为CCTCCNo：M 208082；大肠埃希氏菌HDDMG05为革兰氏阴性菌，无芽孢，菌株个体呈短杆状，长为0.2～0.7μm，宽为0.2～0.5μm，常以成对或单个出现；大肠埃希氏菌HDDMG05菌落呈圆形，白色，隆起，边缘呈波浪状，表面光滑有光泽，透明，菌落挑起软。
本实施方式大肠埃希氏菌HDDMG05菌株形态如图1所示。
大肠埃希氏菌HDDMG05 D-木糖发酵为阴性、山梨醇发酵为阳性、乳糖发酵为阳性、棉子糖发酵为阴性、海藻糖发酵为阳性、葡萄糖发酵为阳性、甘露醇发酵为阳性、L-阿拉伯糖发酵为阳性、柠檬酸盐利用试验为阴性、甲基红试验为阳性、V-P试验为阴性、硝酸盐还原试验为阳性、亚硝酸盐还原试验为阴性、淀粉水解试验为阴性、明胶液化试验为阴性、苯丙氨酸脱氨酶试验试验、吲哚试验阳性、鸟氨酸脱羧酶试验阳性、赖氨酸脱羧酶试验试验、质量浓度2％的NaCl耐盐性试验为阳性、质量浓度3％的NaCl耐盐性试验为阳性、质量浓度7％的NaCl耐盐性试验为阳性、质量浓度10％的NaCl耐盐性试验为阳性。
本实施方式大肠埃希氏菌HDDMG05是采用3，5-二硝基水杨酸比色法(DNS法)从大麻沤麻液中分离筛选得到的。
用引物A1(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和A2(5′-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′)对本实施方式大肠埃希氏菌HDDMG05进行16S rDNA序列扩增。扩增反应体系如下：大肠埃希氏菌HDDMG05DNA模板10μL、浓度为2.5mmol/L的碱基名称(dNTP)4μL、10×缓冲液(Mg2+Free)5μL、浓度为25mmol/L的MgCl24μL、浓度为10pmol/L的引物5μL、酶活为5U/μL的Taq酶(DNA聚合酶)0.2μL、并以去离子水补足至50μL。扩增反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性30s、57℃退火30s、72℃延伸1min，35个循环，最后72℃延伸7min。
本实施方式大肠埃希氏菌HDDMG05的16S rDNA序列Genbank比对结果如表1所示(表1中列举了相似性最高的菌种)。
表1
 
NCBI数据库中最相似菌种(登录号)The strains which have the highest identity from NCBI(Accession) 相似性Similarity
Shigella boydii(AY696667) 99％
Shigella boydii(AY696681) 99％
Escherichia coli(AY804014) 99％
Shigella sonnei(EF032687) 99％
Escherichia coli(EF620922) 99％
Shigella dysenteriae(EU009182) 99％
Shigella dysenteriae(EU009184) 99％
Shigella flexneri(EU009187) 99％
Escherichia coli(EU118103) 99％
Escherichia coli(EU586550) 99％
Escherichia coli(EU723821) 99％
Klebsiella pneumoniae subsp.(EU723828) 99％
由本实施方式大肠埃希氏菌HDDMG05及其相近菌株的16S rDNA基因序列所构建的系统发育树如图2所示。
本实施方式利用BLASTN程序(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)一一对测序结果进行同源性分析，从数据库中得到相关种属16S rDNA序列信息；再通过DNAMAN(Version 5.1)软件对目的序列和Genbank中近缘菌种的序列进行缺省参数的对位排列(alignment)；然后用该软件中的邻位加入法(neighbor-joining)进行系统发育分析。以上方法都进行了1000次的自展(bootstraping)，证实了本实施方式所建进化树的真实性。
具体实施方式二：本实施方式采用LB液体培养基发酵具体实施方式一大肠埃希氏菌HDDMG05，其发酵条件与LB液体培养基培养大肠杆菌的相同。
本实施方式发酵液中大肠埃希氏菌HDDMG05菌数浓度为1×107～1×108cfu/mL时经检测发酵液中果胶酶的酶活力为8226U/mL。
本实施方式还可以采用其它大肠杆菌的发酵方法发酵具体实施方式一大肠埃希氏菌HDDMG05。

Claims (2)

1、一种产果胶酶的工程菌株，其特征在于产果胶酶的工程菌株大肠埃希氏菌HDDMG05(Escherichia coli HDDMG05)属于埃希氏菌属(Escherichia)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2008年6月2日，保藏号为CCTCC No：M 208082；大肠埃希氏菌HDDMG05为革兰氏阴性菌，无芽孢，菌株个体呈短杆状，长为0.2～0.7μm，宽为0.2～0.5μm，常以成对或单个出现；大肠埃希氏菌HDDMG05菌落呈圆形，白色，隆起，边缘呈波浪状，表面光滑有光泽，透明，菌落挑起软。
2、根据权利要求1所述的一种产果胶酶的工程菌株，其特征在于大肠埃希氏菌HDDMG05 D-木糖发酵为阴性、山梨醇发酵为阳性、乳糖发酵为阳性、棉子糖发酵为阴性、海藻糖发酵为阳性、葡萄糖发酵为阳性、甘露醇发酵为阳性、L-阿拉伯糖发酵为阳性、柠檬酸盐利用试验为阴性、甲基红试验为阳性、V-P试验为阴性、硝酸盐还原试验为阳性、亚硝酸盐还原试验为阴性、淀粉水解试验为阴性、明胶液化试验为阴性、苯丙氨酸脱氨酶试验试验、吲哚试验阳性、鸟氨酸脱羧酶试验阳性、赖氨酸脱羧酶试验试验、质量浓度2％的NaCl耐盐性试验为阳性、质量浓度3％的NaCl耐盐性试验为阳性、质量浓度7％的NaCl耐盐性试验为阳性、质量浓度10％的NaCl耐盐性试验为阳性。
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