CN101384709A - 消炎的肽 - Google Patents
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Abstract
本发明特别涉及改善炎性皮肤病症的方法。因此,本发明提供包括氨基酸序列KMIKP的肽,其中所述肽包括不多于70个氨基酸,并且其中所述肽能够抑制变应原诱导的朗格汉斯细胞迁移,并且其中所述肽不是在SEQ ID NO.19中所示的。本发明还涉及包括氨基酸序列KMIKP的肽在制备用于治疗炎性皮肤病症的局部药物中的应用,其中所述肽包括不多于100个氨基酸,并且其中所述肽能够抑制变应原诱导的朗格汉斯细胞迁移。
Description
本发明特别涉及改善炎性皮肤病症的方法。已知炎性皮肤病症与趋化因子和细胞因子的改变的表达相关,并且特别与促炎性细胞因子如白介素(IL)-1α,IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的增加的活性相关。已知这些相同的细胞因子还在起始皮肤免疫反应中起着关键作用,并且实际上为来自皮肤的表皮朗格汉斯细胞(LC)的迁移提供命令信号。LC从表皮的运动,以及它们随后在皮肤-排泄淋巴结的积聚为抗原转运到诱导原发性免疫反应的位点(局部淋巴结)提供作用机能。
本发明基于下述令人吃惊的发现,即,当局部应用到皮肤时,某些硫氧还蛋白-来源的肽能够抑制表皮LC的迁移----这与紊乱的促炎症细胞因子表达一致。
因此,按照本发明,提供包括氨基酸序列KMIKP的肽,其中所述肽包括不多于70个氨基酸,并且其中所述肽能够抑制变应原诱导的朗格汉斯细胞迁移,并且其中所述肽不是WCGPCKMIKPFF(SEQ ID NO.19)。
优选地,本发明的肽包括不多于60个或50个或40个或30个或20个或10个氨基酸。更优选地,所述肽选自由下列各项组成的组:
CGPCKMIKPFFHSLSEKYSN(SEQ ID NO.3);
KMIKPFFHSLSEKYSN(SEQ ID NO.15);
CGPCKMIKPFFHSLSE(SEQ ID NO.16);
AGPAKMIKPFFHSLSEKYSN(SEQ ID NO.17);
SATYCGPCKMIKP(SEQ ID NO.18);
CGPCKMIKP(SEQ ID NO.9);
AGPAKMIKP(SEQ ID NO.11);和
KMIKP(SEQ ID NO.13)
本发明还提供一种包含按照本发明的肽的药物组合物。优选地,所述药物组合物选自由溶液、凝胶、洗液、油膏、乳膏和糊剂组成的组。
本发明还涉及按照本发明的肽作为药物的应用。
本发明还涉及包括氨基酸序列KMIKP的肽在制备用于治疗炎性皮肤病症的局部药物中的应用,其中所述肽包括不多于100个氨基酸,并且其中所述肽能够抑制变应原诱导的朗格汉斯细胞迁移。优选地,所述炎性皮肤病症选自由银屑病、扁平苔藓、特应性湿疹、刺激性或变应性接触性皮炎、接触性荨麻疹、婴儿湿疹和普通粉刺组成的组。
本发明还涉及编码本发明的多肽的核酸序列。
本发明还涉及所述肽的制备方法。在适当的情形中,所述肽通过使用技术人员公知的方法进行化学合成而制备。对于更长的肽,同样使用技术人员公知的方法,可以使用重组DNA技术提供所述肽,这也是可能的。
本发明还涉及本发明的肽的“保守变体”。“保守变体”意指在KMIKP基序中的一个或多个氨基酸用具有相似特性的氨基酸取代----并且,其中在取代之后,基本上保留所述肽的生物活性。
附图列表
在所有的附图中,“OX”=噁唑酮
图1表皮朗格汉斯细胞迁移----关于肽1的剂量反应实验。
图2表皮朗格汉斯细胞迁移----关于肽3的剂量反应实验。
图3表皮朗格汉斯细胞迁移----肽1相对于肽3的比较实验。
图4表皮朗格汉斯细胞迁移----关于肽7的剂量反应实验。
图5表皮朗格汉斯细胞迁移----肽3(3-1和3-2)和肽RV-1的两种独立的制剂
图6表皮朗格汉斯细胞迁移----关于肽RV-1的剂量反应实验。
图7表皮朗格汉斯细胞迁移----显示肽3、肽RV-1和9-mer(CGPCKMIKP)的活性的比较实验。
图8表皮朗格汉斯细胞迁移----关于9-mer(CGPCKMIKP)的剂量反应实验。
图9表皮朗格汉斯细胞迁移----研究9-mer肽(CGPCKMIKP)是否影响由IL-1β或TNF-α诱导的朗格汉斯细胞迁移的实验。
图10表皮朗格汉斯细胞迁移----显示9-mer(CGPCKMIKP)和“合成的”9-mer(IPCMPKCKG)的活性的对照实验。
图11表皮朗格汉斯细胞迁移----显示9-mer(CGPCKMIKP)和KMIMP肽的活性的比较实验。
图12表皮朗格汉斯细胞迁移----显示人硫氧还蛋白(SEQ ID NO.14)、9-mer肽(CGPCKMIKP)、KMIKP肽和CGPC肽的活性的比较实验。
图13表皮朗格汉斯细胞迁移----显示9-mer肽(CGPCKMIKP),半胱氨酸游离的“合成的”9-mer(IPAMPKAKG)和半胱氨酸游离的9-mer肽(AGPAKMIKP)的活性的比较实验。
实施例
下述肽是化学合成的。
肽1 VKQIESKTAFQEALDAAGDK(SEQ ID NO.1)
肽2 AAGDKLVVVDFSATWCGPCK(SEQ ID NO.2)
肽3 CGPCKMIKPFFHSLSEKYSN(SEQ ID NO.3)
肽4 EKYSNVIFLEVDVDDCQDVA(SEQ ID NO.4)
肽5 CQDVASECEVKCMPTFQFFK(SEQ ID NO.5)
肽6 FQFFKKGQKVGEFSGANKEK(SEQ ID NO.6)
肽7 ANKEKLEATINELV(SEQ ID NO.7)
肽RV1 SATYCGPCKMIKP(SEQ ID NO.8)
9-mer肽 CGPCKMIKP(SEQ ID NO.9)
合成的9-mer IPCMPKCKG(SEQ ID NO.10)
半胱氨酸游离的9-mer AGPAKMIKP(SEQ ID NO.11)
合成的半胱氨酸游离的9-mer IPAMPKAKG(SEQ IDNO.12)
“KMIKP” KMIPK(SEQ ID NO.13)
重组的人硫氧还蛋白(rhTRX)(SEQ ID NO.14)也包括在一些实验中。
MVKQIESKTAFQEALDAAGDKLVVVDFSATWCGPCKMIKPFFHSLSEKYSNVIFLEVDVDDCQDVASECEVKCMPTFQFFKKGQKVGEFSGANKEKLEATINELV(SEQ ID NO.14)
实施各种组织研究,以检验前文提及的每种多肽对变应原(噁唑酮)诱导的朗格汉斯细胞(LC)迁移的作用。除非另外指明,应用是以μg进行。
实验1.
本实验的目的是确定局部应用肽1是否能够影响由随后在同一位点暴露于噁唑酮而诱导的LC迁移的完整性,噁唑酮是已知引起LC移动的有效的接触性变应原。代表性实验的结果显示在图1中。结果揭示先暴露于肽1不抑制变应原-诱导的LC迁移。
实验2.
本实验的目的是确定局部应用肽3是否能够影响由随后在同一位点暴露于噁唑酮而诱导的LC迁移的完整性。三次独立的实验的结果显示在图2中。结果揭示,在每种情形中,在检测的最高浓度(0.5μg),先暴露于肽3引起对变应原-诱导的LC迁移的完全的(或接近完全的)抑制。在这三次实验中的两次中,存在关于肽3对变应原-诱导的LC迁移的剂量-相关性抑制的一些暗示。得出的结论是,在接触性变应原是噁唑酮的这种情形中,局部应用的肽3能够抑制LC应答刺激有效的运动和迁移所需要的一种或多种生物作用。
实验3.
本实验的目的是实施肽1和肽3的同时比较分析。本实验的结果显示在图3中----并且证实先前实验的发现。即,先暴露于肽3引起对变应原-诱导的LC迁移的基本抑制,而同样先暴露于肽1不抑制变应原-诱导的LC迁移。
实验4.
本实验的目的是确定局部应用肽7是否能够影响由随后在同一位点暴露于噁唑酮而诱导的LC迁移的完整性。代表性实验的结果显示在图4中。结果揭示,先暴露于肽7不抑制变应原-诱导的LC迁移。
实验5.
本实验的目的是确定在肽合成批次(肽3-1和肽3-2)之间的活性中是否存在任何变化,并且还检测肽RV-1的活性。代表性实验的结果显示在图5中。结果揭示,先暴露于肽RV-1不抑制变应原-诱导的LC迁移----并且在肽合成批次之间只观察到小的活性的变化。
实验6.
本实验的目的是检验肽RV-1的剂量反应。代表性实验的结果显示在图7中。
实验7.
本实验的目的是比较肽3、肽RV-1和9-mer(CGPCKMIKP)的活性。代表性实验的结果显示在图7中。这些结果表明检测的所有的肽都是活性的。
实验8.
本实验的目的是检验9-mer肽(CGPCKMIKP)的剂量反应。代表性实验的结果显示在图8中。本实验的结果证实所述9-mer肽在检测的所有剂量的活性。
实验9.
本实验的目的是研究所述9-mer肽(CGPCKMIKP)是否能够影响由IL-1β或TNF-α诱导的朗格汉斯细胞迁移。代表性实验的结果显示在图9中。这些结果揭示,先局部暴露于所述9-mer肽能够引起对通过皮内(id)注射同源性TNF-α而诱导的朗格汉斯细胞迁移的几乎完全的抑制。相反,以相同的方式应用所述9-mer肽对通过id施用同源性IL-1β引发的朗格汉斯细胞迁移的完整性没有影响。解释是局部施用9-mer肽与IL-1β功能的紊乱相关。
实验10.
这一对照实验的目的是检验所述9-mer(CGPCKMIKP)和对照“合成的”9-mer(IPCMPKCKG)的活性。代表性实验的结果显示在图10中。结果表明,为了保留生物活性,在所述9-mer肽中的氨基酸的顺序是重要的----由于合成的9-mer,其包括与所述9-mer相同的氨基酸,不是生物学活性的。
实验11.
本实验的目的是证实9-mer(CGPCKMIKP)的活性,并且检验肽KMIMP的活性----其显示是活性的。代表性实验的结果显示在图11中。
实验12.
这一比较实验的目的是显示本发明的肽所源自的重组的人硫氧还蛋白(hTRX)(SEQ ID NO.14)、9-mer肽(CGPCKMIKP)、KMIKP肽和CGPC肽的活性。所有的肽以等摩尔剂量(1.38μM)应用----其等同于0.5μg hTRX,0.04μg9-mer肽,0.025μg KMIKP肽和0.016μg CGPC肽。代表性实验的结果显示在图12中----其中可以看出,除了CGPC肽之外,所有的肽似乎都表现出生物活性。
实验13.
本实验的目的是比较9-mer肽(CGPCKMIKP),对照的半胱氨酸游离的“合成的”9-mer(IPAMPKAKG)和半胱氨酸游离的9-mer肽(AGPAKMIKP)的活性。代表性实验的结果显示在图13中----其中可以看出,所述9-mer肽(CGPCKMIKP)和所述半胱氨酸游离的9-mer肽(AGPAKMIKP)是活性的,而所述对照半胱氨酸游离的“合成的”9-mer没有活性。
序列表
<210>1
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<212>PRT
<213>人工的
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<223>合成的肽
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<212>PRT
<213>人
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<223>合成的肽
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Claims (8)
1.一种包括氨基酸序列KMIKP的肽,其中所述肽包括不多于70个氨基酸,并且其中所述肽能够抑制变应原诱导的朗格汉斯细胞迁移,并且其中所述肽不是SEQ ID NO.19。
2.按照权利要求1所述的肽,其中所述肽包括不多于20个氨基酸。
3.按照权利要求2所述的肽,其中所述肽包括选自由下列各项组成的组的氨基酸序列:SEQ ID NO.3;SEQ ID NO.9;SEQ ID NO.11;SEQ IDNO.13;SEQ ID NO.15;SEQ ID NO.16;SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18。
4.一种包括按照权利要求1到3中任一项的肽的药物组合物。
5.按照权利要求4所述的药物组合物,其中所述组合物选自由溶液、凝胶、洗液、油膏、乳膏和糊剂组成的组。
6.按照权利要求1到3中任一项所述的肽,其用作药物。
7.包括氨基酸序列KMIKP的肽在制备用于治疗炎性皮肤病症的局部药物中的应用,其中所述肽包括不多于100个氨基酸,并且其中所述肽能够抑制变应原诱导的朗格汉斯细胞迁移。
8.按照权利要求7所述的应用,其中所述炎性皮肤病症选自由下列各项组成的组:银屑病、扁平苔藓、特应性湿疹、刺激性或变应性接触性皮炎、接触性荨麻疹、婴儿湿疹和普通粉刺。
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