CN101381765B - 副溶血性弧菌的实时fq-pcr检测试剂盒及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒及检测方法，副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒包括：PCR反应液管、样本处理液管、阳性对照管、阴性对照管、标准品管、去离子水管，其2×PCR反应液浓度为两倍稀释，上游引物浓度为10μM，下游引物浓度为10μM，TaqMan探针浓度为3μM，双蒸水各试剂的体积比为：2×PCR反应液∶上游引物∶下游引物∶TaqMan探针＝100∶4∶4∶4∶68；检测方法：为快速检测所有副溶性弧菌，先采集和处理待测标本再进行加样，PCR反应液配制、溶血性弧菌模板制备、标准品与阴性对照、阳性对照模板制备、待测样品标准品、预变性、聚合酶链反应和结果判断，本发明具有定量定性，实时快速简便，特异度好，重复性好，适宜质量控制，防止FQ-PCR产物污染的效果。
Description
(一)发明领域
本发明涉及微生物测量的组合物，具体地说是涉及一种副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒及检测方法，FQ-PCR即为实时荧光定量聚合酶链反应。
(二)背景技术
副溶血性弧菌(vibrio parahaemolyticus，vp)是一种嗜盐性细菌，属弧菌科(vibrio)弧菌属，存在于近海的海水、海底沉积物和鱼类、虾类、贝壳类等海产品中，是我国大陆沿海地区食物中毒和急性腹泻的主要病原菌。神奈川现象(Kanagawa phenomenon，kp)阳性菌株为致病菌株，该菌株含两种致病因子基因(tdh与trh)，从tdh与trh基因序列中设计的PCR引物可使神奈川现象阴性菌株漏检。不能完整地反映食品中副溶血性弧菌污染的详细情况。
目前，我国食品副溶血性弧菌国家标准检测方法是细菌培养法(GB4789-2003)，国标要求检测食品中所有副溶血性弧菌，但国标方法需经增菌、分离培养、生化鉴定、血清凝集等，存在操作繁琐、所需时间长(约4天)等不足。
随着微生物基因组学的发展，近年来又出现了一种实时荧光定量PCR技术，该技术把荧光标记、探针、计算机与PCR四种技术融为一体，是目前国际上公认的最灵敏、特异、重复性最好的核酸定性定量检测方法(本领域内普遍技术人员都知道)。根据副溶血弧菌的不耐热溶血索基因Thermolabile hemolysin或简称TLH的序列设计引物，可以进行所有已知的副溶血性弧菌的常规PCR检测。但是直接使用常规的PCR检测试剂盒来检测副溶血性弧菌，尚存在下列难以解决的技术问题：1、常规的PCR检测试剂盒的反应管内不含有TaqMan探针，必须“开盖操作”将PCR产物转移，进行琼脂糖电泳或Southem转移杂交等实验对PCR产物进行鉴定，容易污染，造成假阳性，而且耗费时间(4-5小时)，国家卫生部已限制其在临床上使用；2、常规PCR检测试剂盒不含标准品，不能对副溶血性弧菌进行定量检测；3、常规PCR检测试剂盒不能对副溶血性弧菌进行实时监测；4、常规PCR检测试剂盒灵敏度低。
(三)发明内容
本发明的目的是提供一种可定量定性、操作简便、实时快速、特异度好、灵敏度高、重复性好的副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒及检测方法，解决目前在副溶血性弧菌检测中需经增菌、分离培养、生化鉴定、血清凝集等步骤，从而使操作繁琐、所需时间长等不足，并能实现快速检测所有副溶性弧菌的效果。
所述的副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒由以下试管和各部分组成：副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒包括：PCR反应液管、样本处理液管、阳性对照管、阴性对照管、标准品管、去离子水管。
(1)、2×PCR反应液：内含2×PCR缓冲液、Taq酶、Mg++、KCl，序列为5′-CAC GCA TTG CGCTCT GAG T-3′的上游引物、序列为5′-CGA GAC ATC CCA GAA CAC AAA-3′的下游引物、序列为5′-FAM-TCG GGC GTC TGG TGC TGA-TAMRA-3′的TaqMan探针、去离子水；
(2)、DNA提取剂：内含0.9％NaCl和0.1％二硫基乙醇；
(3)、阳性对照管：内含副溶血性弧菌TLH基因；
(4)、阴性对照管：不含副溶血性弧菌TLH基因；
(5)、标准品管：病毒拷贝数浓度，2×107cfu/ml、2×106cfu/ml、2×105cfu/ml、2×104cfu/ml、10μM上游引物、10μM下游引物、3μM TaqMan探针；
(6)、去离子水管：管内试剂为去离子水，即为无菌双蒸水。
副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒中，其2×PCR反应液浓度为两倍稀释，上游引物浓度为10μM，下游引物浓度为10μM，TaqMan探针浓度为3μM，双蒸水各试剂的体积比为：2×PCR反应液∶上游引物∶下游引物∶TaqMan探针＝100∶4∶4∶4∶68。
所述的检测方法，是副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒用于快速检测所有副溶性弧菌的方法，该检测方法由下列步骤组成：先采集和处理待测标本再进行加样。
(1)、每份PCR反应液的配制；
(2)、溶血性弧菌模板制备；
(3)、标准品与阴性对照，阳性对照模板制备的各步骤与溶血性弧菌模板制备相同；；
(4)、待测样品、标准品；
(5)、预变性；
(6)、聚合酶链反应，也称为基因扩增；
(7)、结果判断。
每份PCR反应液的配制：2×PCR反应液10μl、上游引物0.4μl、下游引物0.4μl、TaqMan探针0.4μl、去离子水6.8μl，共18μl，混合即成；
溶血性弧菌模板制备：吸取样本或菌液1ml到1.5ml尖底塑料管，用14000转/分钟，离心10分钟，轻轻倒掉上层液体，各加蒸馏水50μl，加DNA提取剂50μl混合，在100℃，15分钟，然后在冰水中冷却2分钟，用13000转/分钟，离心10分钟，上清液即为定时荧光定量PCR模板；
预变性：94℃，60秒，1个循环，扩增：94℃，5秒，60℃，30秒共40个循环；
结果判断：标准曲线的相关系数(r)≥0.985或≤-0.985；Ct值＜38时为阴性结果，38≤Ct＜40时需重新测定，Ct值＝0或Ct值＝40为阴性结果。
采用本发明方法有益效果在于：
1、可定量定性，测定数据范围：2.0×101～2.0×108cfu/ml；
2、操作简便、实时快速：全程共4步(菌液离心、DNA提取、加样、上机)，约60分钟完成并可随时观察扩增效果；
3、控制PCR产物污染，由于加盖，而且扩增产物不需电泳观察，防止扩增产物污染环境；
4、特异度好：与霍乱弧菌、溶藻性弧菌等9种肠道细菌无交叉反应，灵敏度高：最低检测限20cfu/ml副溶血性弧菌；
5、重复性好，适宜质量和精密度控制。
2.0×108cfu/ml s＝0.125 cv＝1.105％
2.0×107cfu/ml s＝0.100 cv＝0.703％
2.0×106cfu/ml s＝0.260 cv＝1.535％
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2.0×104cfu/ml s＝0.557 cv＝2.244％
2.0×103cfu/ml s＝0.157 cv＝0.541％
(四)附图说明
图1为本发明中试剂盒的实施例的纵向剖视图。
图2为本发明中试剂盒的实施例的横向剖视图。
图1、图2中：1、纸盒 2、衬板 3、有盖大塑料管 4、有盖小塑料管
(五)具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但发明的保护范围并不限于此。2×PCR反应液，内含2×PCR反应液、MgCl、dNTP、Taq酶等，如图1所示，所述的副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒，由纸盒1和衬板2形成空槽，空槽中设有有盖大塑料管3和有盖小塑料管4，有盖大塑料管3和有盖小塑料管4由以下组成，即所述的副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒由以下试管和各部分组成：
(1)、2×PCR反应液：序列为5′-CAC GCA TTG CGC TCT GAG T-3′的10μM上游引物、序列为5′-CGA GAC ATC CCA GAA CAC AAA-3的10μM下游引物、序列为5′-FAM-TCG GGC GTC TGG TGC TGA-TAMRA-3′的3μM TaqMan探针、去离子水；
(2)、样本处理液管；
(3)、DNA提取剂：内含0.9％NaCl和0.1％二硫基乙醇；
(4)、阳性对照管：内含副溶血性弧菌TLH基因；
(5)、阴性对照管：不含副溶血性弧菌TLH基因；
(6)、标准品管：病毒拷贝数浓度：2×107cfu/ml、2×106cfu/ml、2×105cfu/ml、2×104cfu/ml，10μM上游引物、10μM下游引物、3μM TaqMan探针；
(7)、去离子水管：管内试剂为去离子水，即为无菌双蒸水：副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒中，2×PCR反应液浓度为两倍稀释，上游引物浓度为10μM，下游引物浓度为10μM，TaqMan探针浓度为3μM，双蒸水各试剂的体积比为：2×PCR反应液∶上游引物∶下游引物∶TaqMan探针＝100∶4∶4∶4∶68。
所述的检测方法，是副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒用于快速检测所有副溶性弧菌的方法，该检测方法由下列步骤组成：
(1)液体样品处理：吸取样本1ml放入到1.5ml空eppendorf管，15000转/分离心10分钟，弃尽上层液加蒸馏水与DNA提取剂各50ml混匀，在100℃，15分钟，13000转/分，离心10分钟，上层液即为实时荧光PCR反应模板，固体样本加等量生理盐水(w/v)，研磨混匀后2000转/分低速离心取上层液1ml，进入液体样品处理步骤；
(2)、每份PCR反应液的配制：2×PCR反应液10μl、上游引物0.4μl、下游引物0.4μl、TaqMan探针0.4μl、去离子水6.8μl，共18μl，混合即成，按所需测定量配制，分装每管18μl；
(3)、溶血性弧菌模板制备：吸取样本或菌液1ml到1.5ml尖底塑料管，用14000转/分钟，离心10分钟，轻轻倒掉上层液体，各加蒸馏水50μl，加DNA提取剂50μl混合，在100℃，15分钟，然后在冰水中冷却2分钟，用13000转/分钟，离心10分钟，上清液即为定时荧光定量PCR模板；
(4)、标准品与阴性对照，阳性对照模板制备的各步骤与溶血性弧菌模板制备相同；
(5)、待测样品、标准品：阴、阳性对照模板各取2μl分别加入测定定时荧光测量PCR反应液中，加盖后4000转/分钟，离心1分钟；
(6)、预变性：94℃，60秒，1个循环，扩增：94℃，5秒，60℃，30秒共40个循环；
(7)、基线与阈值设定(以Light Cycler荧光PCR仪为例)：基线与阈值设定，以刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，且阴性对照品的Ct值＝0为原则，调整起始阈值；
(8)结果判断：定量测定时，标准Ct值＜38时为阴性结果，38≤Ct＜40时需重新测定，Ct值＝0或Ct值＝40为阴性结果。
Claims (1)
1.一种副溶血性弧菌的实时FQ-PCR检测试剂盒，其特征在于：由以下试管和各部分组成：
(1)、2×PCR反应液：内含2×PCR缓冲液、Taq酶、Mg2+、KCl，序列为5′-CAC GCA TTG CGC TCTGAG T-3′的上游引物、序列为5′-CGA GAC ATC CCA GAA CAC AAA-3′的下游引物、序列为5′-FAM-TCG GGC GTC TGG TGC TGA-TAMRA-3′的TaqMan探针、去离子水；
(2)、DNA提取剂：内含0.9％NaCl和0.1％二硫基乙醇；
(3)、阳性对照管：内含副溶血性弧菌不耐热溶血素基因；
(4)、阴性对照管：不含副溶血性弧菌不耐热溶血素基因；
(5)、标准品管：病毒拷贝数浓度：2×107cfu/ml、2×106cfu/ml、2×105cfu/ml、2×104cfu/ml；
(6)、去离子水管：管内试剂为去离子水。
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| CN102146469B (zh) * | 2011-02-22 | 2013-03-27 | 许龙岩 | 副溶血性弧菌双重实时荧光pcr检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法 |
| CN111154901B (zh) * | 2020-01-19 | 2022-05-20 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 副溶血性弧菌特异性新分子靶标及其快速检测方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1676613A (zh) * | 2004-12-17 | 2005-10-05 | 南方医科大学 | 一种定量pcr检测试剂盒及用于检测副溶血性弧菌的方法 |
| CN1683565A (zh) * | 2005-03-15 | 2005-10-19 | 中国人民解放军军事医学科学院放射医学研究所 | 一套检测常见肠道致病菌的寡核苷酸探针及其用途 |
| CN1814789A (zh) * | 2005-02-06 | 2006-08-09 | 广东省微生物研究所 | 畜禽肉和水产品中常见致病菌多重pcr快速检测试剂盒及检测方法 |
-
2007
- 2007-09-06 CN CN2007100706880A patent/CN101381765B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1676613A (zh) * | 2004-12-17 | 2005-10-05 | 南方医科大学 | 一种定量pcr检测试剂盒及用于检测副溶血性弧菌的方法 |
| CN1814789A (zh) * | 2005-02-06 | 2006-08-09 | 广东省微生物研究所 | 畜禽肉和水产品中常见致病菌多重pcr快速检测试剂盒及检测方法 |
| CN1683565A (zh) * | 2005-03-15 | 2005-10-19 | 中国人民解放军军事医学科学院放射医学研究所 | 一套检测常见肠道致病菌的寡核苷酸探针及其用途 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 王小玉 等.实时荧光PCR方法检测副溶血性弧菌的研究.《食品研究与开发》.2007,第28卷(第6期),135-138. |
| 王小玉等.实时荧光PCR方法检测副溶血性弧菌的研究.《食品研究与开发》.2007,第28卷(第6期),135-138. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101381765A (zh) | 2009-03-11 |
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