CN101374542A - 用于改善伤口愈合过程的牛骨桥蛋白 - Google Patents
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Abstract
用于改善伤口愈合的局部用制剂，包含牛骨桥蛋白。该伤口可以是受感染的或发炎的或者它可以是糖尿病性伤口。
Description
发明技术领域
本发明关注的是包含牛骨桥蛋白的伤口愈合用软膏、液体、硬膏和其他装置的制剂，用于改善每物种型的伤口的伤口愈合过程，其中伤口包括难以愈合的伤口，例如发炎的或受感染的伤口，特别是糖尿病患者的伤口。
发明背景
已知与开放性创伤伴发的、存在于淋巴液中的巨噬细胞、多形核白细胞、T-细胞和其他细胞分泌骨桥蛋白。
在小鼠中，已经显示早在创伤后6小时就会向上调节骨桥蛋白表达。对缺乏功能性骨桥蛋白基因的小鼠(基因敲除小鼠)中伤口愈合的分析表明了被减弱的伤口愈合能力。这些伤口显示了清创术水平显著降低，基质组织破坏和胶原微纤维形成改变，导致与具有功能性骨桥蛋白基因的小鼠的伤口相比，胶原原纤维的直径较小。
壳聚糖在兽医学中用作伤口愈合加速剂。确切的作用机制是未知的。尽管如此，壳聚糖已经显示出可以增强某些与伤口愈合有关的免疫细胞的炎症作用，并诱导那些细胞对骨桥蛋白的表达。
这些发现促使我们研究向不同的伤口模型施用包含从牛奶中纯化的骨桥蛋白的局部用制剂的效果。
发明简述
出人意料地，已经发现牛骨桥蛋白可以用于改善伤口愈合过程，不论该伤口是未感染的、感染的或发炎的还是糖尿病患者的，对于所有的物种都不会发生任何变态反应。
发明详述
本发明涉及一种伤口愈合的局部用制剂，包含牛骨桥蛋白和辅助剂。
牛骨桥蛋白是来自牛奶的骨桥蛋白，可以购自Arla FoodsIngredients，Denmark，或可以使酸乳清通过强碱性阴离子树脂以进行色谱例如来自Amersham，UK的Q Sepharose来获得。用1M NaCl从柱上洗脱骨桥蛋白。然后将洗脱液超滤，最后干燥，例如使用冻干法。
辅助剂是局部用制剂的常规辅助剂，例如用于软膏的载体药膏。
该制剂可以是例如软膏、液体、粉末或硬膏。辅助剂选自常用于这类局部用制剂的那些。一个例子是用于软膏的羧甲基纤维素。
本发明的软膏优选具有的骨桥蛋白水平是0.01％到10％。小于0.01％在大多数情况下都不能产生期望的效果，而大于10％则会过剩。优选的水平是0.1％-5％，0.1-2％，0.1到1.5或者0.5％到1％。该量可取决于所要治疗的伤口的类型。
本发明也涉及牛骨桥蛋白在制备用于改善伤口愈合，包括发炎的伤口和糖尿病患者的伤口愈合的局部用药物中的应用。
因此，该制剂可以用于一种改善伤口愈合的方法，该方法包括给有此需要的患者施用有效量的牛骨桥蛋白。
患者可以是人或动物。
在不同的小鼠伤口模型中研究了牛骨桥蛋白的效果，即伤口愈合能力被减弱的糖尿病小鼠模型，感染的受损模型和健康的野生型模型。据发现，在所有模型中伤口愈合的时间都显著缩短了1-3天。但是，需要的牛骨桥蛋白剂量因所使用的模型不同而各不相同。野生小鼠模型需要的剂量最低，感染的小鼠模型剂量最高。向软膏制剂中加入不同量的牛骨桥蛋白，根据模型为达到最佳性能，范围为0.1-1.5％。
令人惊奇地，我们因此可以声明，牛骨桥蛋白能够用于伤口愈合的改善，对于所有物种都不会发生变态反应。
药学结果
已经使用不同水平的骨桥蛋白进行了三种实验性测试研究。将牛骨桥蛋白掺入到基本上由羧甲基纤维素组成的标准凝胶中。在下列试验中写作f.ex.的数字如“0，27”(用丹麦文是正确的)应当更正为f.ex.“0.27”(用英文是正确的)。
I.在伤口愈合受损的模型中加速伤口愈合
介绍
目的：
该研究的目的是测试在II型糖尿病小鼠的伤口愈合减弱的模型中，骨桥蛋白对于伤口愈合的药理学功效。
概要：
将32只db/db小鼠(BKS.Cg-m+/+Leprdb)分成4组，每组8只。这些小鼠发生了2型糖尿病，结果伤口愈合减弱。血糖在15-20mM之间。
另外将8只C57BLKS/j品系的野生型小鼠用作正常伤口愈合的对照。
在第0日将所有小鼠麻醉，剃毛并用8mm的打孔活组织检查工具在它们的背部制作一个8mm的伤口。
从第0-15日，用局部应用于伤口区域的载体药膏或0.1％，1％或10％骨桥蛋白药膏治疗所有动物。
从第1-15日，对所有动物的伤口外观评分，并记录伤口直径。
在第1，4，10和15日，记录小鼠的重量。
在整个实验期间，如果需要，用Rimaldyl治疗动物疼痛。
结果表明，骨桥蛋白治疗无疑比完全不治疗要好。在加速糖尿病小鼠伤口愈合中，1.0％的骨桥蛋白剂量优于其他的骨桥蛋白剂量。
0.1％的骨桥蛋白剂量也相当成功地加速了伤口愈合。
论证：
已知II型糖尿病db/db小鼠的伤口愈合受损，因而显然是伤口愈合模型的品系。
性质
除非另有说明，该研究是根据Pipeline Biotech A/S，StandardOperating Procedure s(SOP’s)进行的。
研究时间表：
动物抵达 21.10.2004
开始治疗 07.12.2004
活着的动物操作完成 22.12.2004
试验系统
试验品：
试验品： 骨桥蛋白，局部施用，0.1％，1％和10％
载体： 载体药膏
物种，品系和供应者
该研究是在来自M&B-Taconic的32只DB小鼠(BKS.Cg-m+/+Leprdb)和8只C57BLKS/j(认为是野生型)中进行的。小鼠的年龄在抵达后为10-12周，但是由于长时间等待试验品发货而在开始试验前达到了17-19周。
环境
将小鼠单个关在标准的2型Macrolon笼中。衬垫是滤纸。
在层流单元中每周更换一次衬垫。
温度为20℃-24℃，并通过实验室中的环境通风系统控制温度。光周期是12-小时黑暗和12-小时光亮(在06.00时开灯)。
饮食和水
饮食是Harlan Teklad 2016饮食。
水是经UV-灭菌的，在适应环境和实验期间必要时再装满水瓶。
随意给予饮食和水。
动物健康和福利
动物具有FELASA SPF-状态，设计居住和变化系统以保证在研究期间保持SPF-状态。由兽医监督下的受过培训的人员操作动物。至于动物福利，则进行每日记录和决定。
实验前程序
适应环境和健康程序
由于等待试验品发货的时间，使动物适应环境长达47天。
实验程序
分组
麻醉
在伤口操作前1小时通过施用5mg/kgs.c.Rimaldyl麻醉所有小鼠，在实验期间如果需要每天进行1次。
引入伤口
在Rimadryl给药后1小时后和在芬太尼/多美康麻醉后约15分钟，在每只小鼠上引入伤口。
通过下列操作在每只小鼠的背部皮肤上引入伤口：
1.在小鼠的背部剃出2x3cm的区域。
2.使用8mm的打孔活组织检查工具在所剃出区域的中心区域上制作出圆形切口。
3.将皮肤块抬起一点，小心地从小鼠上切离。
4.将小鼠放回笼中。
治疗
从第0日(刚产生伤口后)到第14日(结束前的日子)，向所有动物的伤口上施用载体(载体药膏)或骨桥蛋白药膏(0,05mL)。
在刚评分和测量后进行施用。
观察和测量
由于伤口需要愈合，在第1日不进行测量。
但是从第1-15日对伤口进行评分和测量。
纵向(根据从头到尾这条线)测量伤口的直径，并每日记录。
对伤口的外观进行评分，并每日记录。
在第1，4，10和15日记录体重。
伤口的评分
根据下列系统对伤口进行评分：
0：完全愈合
1：仍然检测到小伤口.
2：没有结疤，但仍然有伤口
3：没有原来的疤，但有新疤(旧疤衰退，但新疤产生)
4：原来的疤仍然在伤口上。
结束
在实验结束时使小鼠安乐死。
在无菌条件下切开伤口。
如果需要，将伤口和伤口周围约0，5cm的区域置于福尔马林缓冲液(Lilly’s液)中以进一步研究。
将样品寄给发起人
保留伤口样品，直至发起人的进一步通知。
研究概述
这些结果在下面所示的图中说明：
评分：
0：完全愈合
1：仍然检测到小伤口.
2：没有结疤，但仍然有伤口
3：没有原来的疤，但有新疤(旧疤衰退，但新疤产生)
4：原来的疤仍然在伤口上。
下面显示的是对于伤口评分的Mann-Whitney配对的秩和检验(Wilcoxon双样品检验)的结果。将对照和试验组的结果与第2组进行比较。
这些结果通过下面所示的图说明：
下面显示的是根据伤口直径的配对F-和Student t-检验的结果。
将对照和试验组的结果与第2组进行比较。
结论：
第1组： WT；载体 直径一般显著大于第2组
第3组： DB；骨桥蛋白0.1％ 直径一般显著小于第2组
第4组： DB；骨桥蛋白1％ 直径一般显著小于第2组
第5组： DB；骨桥蛋白10％ 直径一般显著大于第2组
伤口面积：
下面显示的是根据伤口面积的配对F-和Student t-检验的结果。
将对照和试验组的结果与第2组进行比较。
结论：
第1组： WT；载体 面积一般显著大于第2组。
第3组： DB；骨桥蛋白0.1％ 在第8，11，12和13日的面积显著
小于第2组
第4组：DB；骨桥蛋白1％ 在第9，10，11，12和13日的面积
显著小于第2组
第5组：DB；骨桥蛋白10％ 在第3，4，5，6和7日的面积显著
大于第2组
相对于第1日的伤口面积：
下面显示的是相对于第1日的根据伤口面积的配对F-和Student t-检验的结果。
将对照和试验组的结果与第2组进行比较。
结论：
第1组： WT；载体 第8，9，11和12日的伤口面积显著大
于第2组(DB，载体)。
第3组： DB；骨桥蛋白0.1％ 与第2组没有显著偏差。
第4组： DB；骨桥蛋白1％ 第2，9，10，11和12日的伤口面积显
著大于第2组(DB，载体)
第5组： DB；骨桥蛋白10％ 第7日的伤口面积显著大于第2组。
结论
在糖尿病小鼠中，骨桥蛋白1.0％药膏在加速伤口愈合中是最成功的。在伤口评分和伤口大小方面都观察到了明确的积极效果。在用0.1％骨桥蛋白治疗的动物中也观察到了对伤口大小的积极效果。
档案
在研究结束后五(5)年的时间里将最终报告以及所有的原始数据和结果都保存在Pipeline Biotech A/S的档案室中。
表5；动物重量
II.在伤口感染模型中的加速的伤口愈合
介绍
目的：
该研究的目的是测试在小鼠的伤口感染模型中，骨桥蛋白对于伤口愈合的药理学功效。
该部分的报告呈现的仅是受感染的小鼠的数据和结果。
概要：
在第1日将4组的8只C57BL/6J小鼠麻醉，剃毛，并用8mm的打孔活组织检查工具在它们的背部制作一个8mm的伤口。然后用50μl包含1x105CFU金黄色葡萄球菌的PBS感染动物的伤口。
然后用“Compeel”泡罩模覆盖所有受感染的伤口。该模可以打开以进行治疗。
在第1日开始治疗。如下治疗各组：
第4组： +感染；载体药膏。
第5组： +感染；0.5％OPN药膏。
第6组： +感染；1.0％OPN药膏。
第7组： +感染；1.5％OPN药膏。
每日重复治疗，共15日。同时，在第1日到第15日对伤口进行评分和测量。
如伤口评分降低和伤口愈合加速所反映的，用1.5％骨桥蛋白的药膏治疗受感染伤口对于伤口愈合具有明确的积极效果。用0.1和1.0％骨桥蛋白的药膏没有观测到效果。
论证：
在医院中手术、烧伤等等后受感染的伤口是很常见的。当处理免疫缺失的患者时，这与具有有效的治疗选择尤为相关。
试验品
说明，鉴定和贮藏：
试验品： 骨桥蛋白，局部施用，0.5％，1.0％和1.5％
载体： 载体药膏
制剂：
Pipeline制备的药膏中的骨桥蛋白的原液和给药溶液。
在研究开始时制备原液。将给药溶液贮藏在冰箱中。
组成分析：
未进行
浓缩和贮藏，稳定性和均匀性：
将骨桥蛋白粉末在室温下贮藏。
将骨桥蛋白的原液贮藏在冰箱中。
试验系统
物种，品系和供应者
在来自M&B-Taconic的7-8周大的32只雌性C57BL/6J小鼠中进行了研究。
环境
将小鼠关在标准的2型Macrolon笼中。
在层流单元中每周更换一次衬垫。
温度为20℃-24℃，通过实验室中的环境通风系统控制温度。光周期是12-小时黑暗和12-小时光亮(在06.00开灯)。
饮食和水
饮食是Altromin 1314饮食。
水是经UV-灭菌的，在适应环境和实验期间必要时再装满水瓶。
随意给予饮食和水。
动物健康和福利
动物具有FELASA SPF-状态，设计居住和变化系统以保证在研究期间保持SPF-状态。由兽医监督下的受过培训的人员操作动物。至于动物福利，则进行每日记录和决定。
试验前程序
适应环境和健康程序
使动物适应环境约7日。
细菌培养
金黄色葡萄球菌(Pipeline野生型菌株)。
细菌浓度：2x106cfu/mL
实验程序
分组
在第1日，将小鼠分组，并根据下列安排给药：
细菌浓度：2x106cfu/mL
麻醉
在伤口操作前1小时通过施用5mg/kg s.c.Rimaldyl麻醉所有小鼠，
引入伤口
在Rimadryl给药后1小时后和在手术麻醉后约15分钟，在每个小鼠上引入一个伤口。
通过下列操作在每只小鼠的背部皮肤上引入一个伤口：
1.在小鼠的背部刮出2x3cm的区域。
2.使用8mm的打孔活组织检查工具在所刮出区域的中心区域上制作出圆形切口。
3.将皮肤块抬起一点，小心地从小鼠上切离。
然后根据下列程序向伤口中接种金黄色葡萄球菌：
1.通过吸量管将50μl具有细菌培养物的PBS置于伤口区域中。
2.用“Compeel”泡罩模覆盖所有伤口。
3.然后准备好小鼠以进行治疗。
治疗
在第1日开始治疗。
在小鼠的“Compeel”模中切出一个窗口。
然后如5.1部分所述将药膏应用于所有治疗组。
用载体药膏治疗第4组，用0.5％OPN的药膏治疗第5组，用0.1％OPN的药膏治疗第6组，用1.5％OPN的药膏治疗第7组。将药膏小心地局部施用于伤口上。
每日重复治疗，共15日。
观察和测量
从第1-15日对伤口进行评分和测量。
纵向(根据从头到尾这条线)测量伤口的直径，并每日记录。
根据下列系统对伤口的外观进行评分，并每日记录：
0：完全愈合
1：仍然检测到小伤口
2：没有结疤，但仍然有伤口
3：没有原来的疤，但有新疤(旧疤衰退，但新疤产生)
4：原来的疤仍然在伤口上。
在第1，5，8，12和15日记录体重。
结束
在实验结束时使小鼠安乐死。
研究概述
结果
伤口评分
结果如表1(附录)所示。
通过Mann-Whitney配对的秩和检验(Wilcoxon双样品检验)对数据进行统计分析。将试验组的结果与第4组进行比较。统计分析的结果如下：
| 组 | 第6日 | 第7日 | 第8日 | 第9日 | 第10日 | 第11日 | 第12日 | 第13日 | 第14日 | 第15日 |
| 4 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| 5 | ns | ns | ns | ns | ns | ns | ns | ns | ns | ns |
| 6 | ns | ns | ns | ns | ns | ns | ns | 0.05 | ns | ns |
| 7 | ns | 0.05 | ns | ns | ns | 0.02 | 0.05 | 0.01 | ns | 0.05 |
n.s.：非显著的
结论：
第4组： +感染；载体药膏。
第5组： +感染；0.5％OPN药膏。与第4组没有差异。
第6组： +感染；1.0％OPN药膏。在第13日的评分显著低于第4
组。
第7组： +感染；1.5％OPN药膏。在第7，11，12，13和15日的评
分显著低于第4组
伤口直径
结果如表2(附录)所示。
通过配对F-和Student t-检验对数据进行统计分析。将试验组的结果与第4组进行比较。统计分析的结果如下：
结论：
第4组： +感染；载体药膏。
第5组： +感染；0.5％OPN药膏。 在第13日的直径显著小于第
4组。但是直径一般不显著小
于第4组。
第6组： +感染；1.0％OPN药膏。 直径一般不显著小于第4组。
第7组： +感染；1.5％OPN药膏。 在第8，11，12，13和15日
的直径显著小于第4组。但是
直径一般不显著小于第4组。
伤口面积
结果如表3(附录)所示。
通过配对F-和Student t-检验对数据进行统计分析。将试验组的结果与第4组进行比较。统计分析的结果如下：
结论：
第4组： +感染；载体药膏。
第5组： +感染；0.5％OPN药膏。直径一般不显著小于第4组。
第6组： +感染；1.0％OPN药膏。直径一般不显著小于第4组。
第7组： +感染；1.5％OPN药膏。在第8，11，12和13日的直
径显著小于第4组。但是面积
一般不显著小于第4组。
相对于第1日的伤口面积
结果如表4(附录)所示。
通过配对F-和Student t-检验对数据进行统计分析。将试验组的结果与第4组进行比较。统计分析的结果如下：
结论：
第4组： +感染；载体药膏。
第5组： +感染；0.5％OPN药膏。 面积一般不显著小于第4组。
第6组： +感染；1.0％OPN药膏。 面积一般不显著小于第4组。
第7组： +感染；1.5％OPN药膏。 面积一般不显著小于第4组。
结论
在治疗的最后一周期间，用1.5％骨桥蛋白药膏治疗明显降低了受感染伤口的伤口评分。因此1.5％骨桥蛋白药膏对于这些伤口的愈合具有积极效果。这些相同的积极效果仅仅在用1.0％骨桥蛋白药膏治疗的动物中在第13日才能观察到。用0.1％骨桥蛋白药膏没有观察到效果。
如伤口直径、伤口面积和相对伤口面积所反映出来的，1.5％骨桥蛋白药膏对于伤口大小也具有显著的积极效果。用具有低浓度的骨桥蛋白的药膏没有观察到相同的积极效果。
档案
在实验结束后五(5)年的时间里将最终报告以及所有的原始数据和结果都保存在Pipeline Biotech A/S的档案室中。
III.在野生型小鼠中加速的伤口愈合
介绍
目的：
该研究的目的是测试在正常野生型小鼠中，骨桥蛋白对于伤口愈合的药理学功效。
概要：
在第2日将3组的8只C57BL/6J小鼠麻醉，剃毛，并用8mm的打孔活组织检查工具在它们的背部制作一个8mm的伤口。
如下，用骨桥蛋白(OPN)的药膏治疗各组：
第1组： 载体药膏。
第2组： 0.1％OPN药膏。
第3组： 1.0％OPN药膏。
每日重复治疗，共15日。同时，在第1日到第15日对伤口进行评分和测量。
用0.1％ OPN药膏治疗伤口小鼠看来对于愈合过程的最后一部分的伤口愈合具有显著的积极效果。
试验品
说明，鉴定和贮藏：
试验品： 骨桥蛋白，局部施用，0.1％和1.0％.
载体： 载体药膏
制剂：
Pipeline制备的药膏中的骨桥蛋白的原液和给药溶液。
在研究开始时制备原液。将给药溶液贮藏在冰箱中。
组成分析：
未进行
浓缩和贮藏，稳定性和均匀性：
将骨桥蛋白粉末在室温下贮藏。
将骨桥蛋白的原液贮藏在冰箱中。
试验系统
物种，品系和供应者
在来自M&B-Taconic的7-8周大的24只雌性C57BL/6J小鼠中进行了研究。
环境
将小鼠关在标准的2型Macrolon笼中。
在层流单元中每周更换一次衬垫。
温度为20℃-24℃，通过实验室中的环境通风系统控制温度。光周期是12-小时黑暗和12-小时光亮(在06.00开灯)。
饮食和水
饮食是Altromin 1314饮食。
水是经UV-灭菌的，在适应环境和实验期间必要时再装满水瓶。
随意给予饮食和水。
动物健康和福利
动物具有FELASA SPF-状态，设计居住和变化系统以保证在研究期间保持SPF-状态。由兽医监督下的受过培训的人员操作动物。至于动物福利，则进行每日记录和决定。
试验前程序
适应环境和健康程序
使动物适应环境约7日。
实验程序
分组
在第2日，将小鼠分组，并根据下列安排给药：
麻醉
在伤口操作前1小时通过施用5mg/kg s.c.Rimaldyl麻醉所有小鼠。
引入伤口
在第1日在小鼠上引入伤口。
在Rimadryl给药后1小时后和在手术麻醉后约15分钟，在每只小鼠上引入一个伤口。
通过下列操作在每只小鼠的背部皮肤上引入一个伤口：
1.在小鼠的背部刮出2x3cm的区域。
2.使用8mm的打孔活组织检查工具在所刮出区域的中心区域上制作出圆形切口。
3.将皮肤块抬起一点，小心地从小鼠上切离。
治疗
在第1日开始治疗。然后如5.1部分所述将药膏应用于所有治疗组。
用载体药膏治疗第1组，用0.1％OPN的药膏治疗第2组，用1.0％OPN的药膏治疗第3组。将药膏小心地局部施用于伤口上。
每日重复治疗，共15日。
观察和测量
从第1-15日对伤口进行评分和测量。
纵向(根据从头到尾这条线)测量伤口的直径，并每日记录。
根据下列系统对伤口的外观进行评分，并每日记录：
0：完全愈合
1：仍然检测到小伤口
2：没有结疤，但仍然有伤口
3：没有原来的疤，但有新疤(旧疤衰退，但新疤产生)
4：原来的疤仍然在伤口上。
在第1，5，8，12和15日记录体重。
结束
在实验结束时使小鼠安乐死。
研究概述
结果
伤口评分
结果如表1(附录)所示。
通过Mann-Whitney配对的秩和检验(Wilcoxon双样品检验)对数据进行统计分析。将对照组和试验组的结果与第1组进行比较。统计分析的结果如下：
| 组 | 第6日 | 第7日 | 第8日 | 第9日 | 第10日 | 第11日 | 第12日 | 第13日 | 第14日 | 第15日 |
| 1 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| 2 | ns | ns | ns | ns | ns | ns | ns | ns | ns | ns |
| 3 | ns | ns | ns | ns | ns | ns | ns | ns | ns | ns |
n.s.：非显著的
结论：
第1组： 载体药膏。
第2组： 0.1％OPN药膏。与第1组没有差异。
第3组： 1.0％OPN药膏。与第1组没有差异。
结论：
第1组： 载体药膏。
第2组： 0.1％OPN药膏。一般直径显著小于第1组。
第3组： 1.0％OPN药膏。一般直径显著小于第1组。
伤口面积
结果如表3(附录)所示。
通过配对F-和Student t-检验对数据进行统计分析。将对照组和试验组的结果与第4组进行比较。统计分析的结果如下：
结论：
第1组： 载体药膏。
第2组： 0.1％OPN药膏。面积一般显著小于第1组。
第3组： 1.0％OPN药膏。伤口面积在第7和12日显著更小。
相对于第1日的伤口面积
结果如表4(附录)所示。
通过配对F-和Student t-检验对数据进行统计分析。将对照组和试验组的结果与第4组进行比较。统计分析的结果如下：
结论：
第1组： 载体药膏。
第2组： 0.1％OPN药膏。在第10，11和12日相对伤口面积显著小
于第1组。
第3组： 1.0％OPN药膏。与第1组没有差异。
体重
动物的体重如表5和6(附录)所示。
观察到各组之间的体重没有差异。
结论
观察到各组之间的伤口评分没有差异。
第2组(0.1％OPN)和第3组(1.0％OPN)的伤口直径显著小于第1组(载体)。
当比较伤口面积时，看来仅第2组的伤口面积一般显著减小。第3组的伤口面积仅在第7和12日显著小于第1组。
当伤口面积与第1日相比时，第2组的相对伤口面积在第10，11和12日显著小于第1组。发现第1组和第3组之间没有显著的差异。
因此，用0.1％OPN药膏治疗野生型小鼠的伤口看来对于愈合过程的最后一部分的伤口愈合具有积极效果。
档案
在实验结束后五(5)年的时间里将最终报告以及所有的原始数据和结果都保存在Pipeline Biotech A/S的档案室中。
表5；动物重量
表6；动物重量，相对于第1日
主要结论
在健康和糖尿病小鼠以及受感染的、健康的动物上进行了该实验。
为了影响正常灌注组织中急性伤口的愈合，所检验的试验品的效果必须相当强。骨桥蛋白试验证明了同样对这些模型的效果，特别是在伤口愈合过程结束时。至于所使用的骨桥蛋白浓度，看来会有一些小的差异，但是这也可能是由于各种伤口模型的结构。观察到牛骨桥蛋白对于糖尿病动物以及对于不同诱发的细菌而停止愈合的受感染的伤口具有效果。这证明了牛骨桥蛋白的伤口愈合作用。在完全健康的动物上也能够观察到该效果，可以支持该假设。因此，主要结论是，牛骨桥蛋白对于急性伤口的愈合具有效果。因此，也有理由相信：该作用也适用于慢性未愈合的伤口。
Claims (11)
1.一种伤口愈合的局部用制剂，包含牛骨桥蛋白和辅助剂。
2.权利要求1的制剂，其中该制剂是软膏、液体、粉末或硬膏。
3.权利要求2的软膏，其中骨桥蛋白的水平是0.01％到10％。
4.权利要求3的软膏，其中骨桥蛋白的水平是0.1％到5％。
5.权利要求4的软膏，其中骨桥蛋白的水平是0.1％到2％。
6.权利要求5的软膏，其中骨桥蛋白的水平是0.1％到1.5％。
7.权利要求6的软膏，其中骨桥蛋白的水平是0.5％到1％。
8.牛骨桥蛋白在制备用于改善伤口愈合的局部用药物制剂中的应用。
9.牛骨桥蛋白在制备改善受感染或发炎的伤口愈合的局部用药物制剂中的应用。
10.牛骨桥蛋白在制备用于改善糖尿病性伤口愈合的局部用药物制剂中的应用。
11.一种改善伤口愈合的方法，包括给有此需要的患者施用有效量的牛骨桥蛋白。
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