CN101374540A - Tpo肽化合物和药物组合物在治疗贫血中的用途 - Google Patents

Tpo肽化合物和药物组合物在治疗贫血中的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN101374540A
CN101374540A CNA2006800528571A CN200680052857A CN101374540A CN 101374540 A CN101374540 A CN 101374540A CN A2006800528571 A CNA2006800528571 A CN A2006800528571A CN 200680052857 A CN200680052857 A CN 200680052857A CN 101374540 A CN101374540 A CN 101374540A
Authority
CN
China
Prior art keywords
peptide compounds
tpo
tpo peptide
treatment
erythrocyte
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CNA2006800528571A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101374540B (zh
Inventor
E·J·于尔科夫
B·R·麦唐纳
J·K·韦斯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Janssen Pharmaceutica NV
Original Assignee
Janssen Pharmaceutica NV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Janssen Pharmaceutica NV filed Critical Janssen Pharmaceutica NV
Publication of CN101374540A publication Critical patent/CN101374540A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101374540B publication Critical patent/CN101374540B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/196—Thrombopoietin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/524—Thrombopoietin, i.e. C-MPL ligand
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了治疗贫血的方法。所述方法包括施用TPO肽化合物至受试者。本发明还公开了包含TPO肽化合物和可药用载体的药物组合物以及采用经标记的TPO肽化合物的诊断方法。

Description

TPO肽化合物和药物组合物在治疗贫血中的用途
技术领域
本发明提供了结合并激活血小板生成素受体(c-mpl或TPO-R)或换句话讲，充当血小板生成素(“TPO”)激动剂的肽化合物。本发明可应用于生物化学和药物化学领域，并且尤其是提供了TPO激动剂以用于治疗人的疾病。本发明的肽化合物可以用于治疗贫血和/或预防贫血的发展和/或维持红细胞的正常产生。
背景技术
已经克隆并鉴定了编码TPO的基因。参见Kuter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91:11104-11108(1994)；Barley等人，Cell 77:1117-1124(1994)；Kaushansky等人，Nature 369:568-571(1994)；Wendling等人，Nature 369:571-574(1994)以及Sauvage等人，Nature 369:533-538(1994)。TPO是具有至少两种形式的糖蛋白，这两种形式的表观分子量为25kDa和31kDa，具有共同的N末端氨基酸序列。参见，Bartley等人，Cell 77:1117-1124(1994)。TPO看起来具有由潜在的Arg-Arg裂解位点分开的两个截然不同的区域。氨基末端区在人和小鼠中是高度保守的，并且与促红细胞生成素和a-干扰素和b-干扰素具有一些同源性。羧基末端区显示了广泛的物种分化性。
人的TPO-R(也称为c-mpl)的DNA序列和编码的肽序列已经有所描述。参见Vigon等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:5640-5644(1992)。TPO-R是血细胞生成素生长因子受体家族的一个成员，该家族是具有如下特征的一个家族：胞外结构域具有共同的结构设计，包括N-末端部分中的四个保守的C残基和邻近跨膜区的WSXWS基序(SEQ IDNO:1)。参见Bazan Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:6934-6938(1990)。该受体在血细胞生成中发挥功能性作用的证据包括观测到其表达局限于小鼠中的脾脏、骨髓或胎肝(参见Souyri等人，Cell 63:1137-1147(1990))和人中的巨核细胞、血小板和CD34+细胞(参见Methia等人，Blood82:1395-1401(1993))。一些工作者推测，该受体以同型二聚体行使功能，类似于G-CSF和促红细胞生成素的受体的情形。
克隆的TPO-R基因的可用性推动了对这种重要受体的激动剂的研究。重组受体蛋白的可用性使得能在多种随机和半随机的肽多样性产生系统中研究受体-配体相互作用。美国专利No.6,251,864、6，083,913、6,121,238、5,932,546、5,869,451、6,506,362和6,465,430以及Cwirla等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:6378-6382(1990)中公开了这些系统，将每篇上述这些参考文献以引用方式并入本文。
在血液中循环的形态学上可辨别的和功能能性的细胞包括：红细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞、B-淋巴细胞、T-淋巴细胞、非B-淋巴细胞、非T-淋巴细胞和血小板。这些成熟的造血细胞源于各自谱系的形态学上可辨别的分裂前体细胞并按照需要，由各自谱系的形态学上可辨别的分裂前体细胞所替代，例如成红细胞对红细胞系，原粒细胞、前髓细胞和髓细胞对粒细胞系，以及巨核细胞对血小板。前体细胞源于更原始的细胞，可以相当简单地将这些更原始的细胞分为两个主要的亚组：干细胞和祖细胞(对于综述，参见Broxmeyer，H.E.在Oncology/Hematology 1:227-257(1983)中题为“Colony Assays of Hematopoietic Progenitor Cellsand Correlations to Clinical Situations”(造血祖细胞的集落测定法和与临床情况的相关性)的CRC Critical Review(CRC评论综述))。
干细胞和祖细胞的定义是可操作的，并且取决于功能标准而不是形态学标准。干细胞具有广泛的自我更新或自我维持能力(Lajtha，Differentiation，14:23(1979))，这是必要的，因为缺少或耗尽这些细胞可以导致一种或多种细胞谱系的完全耗尽，这是将在短时间内导致疾病和死亡的事件。一些干细胞在需要时分化，而一些干细胞产生其它干细胞以维持这些细胞的库存。因而，除了维持它们自身的类型，多能干细胞还能分化成几种亚系的祖细胞，这些祖细胞具有更有限的自我更新能力或不具有自我更新能力。这些祖细胞最终产生形态学上可以辨别的前体细胞。祖细胞能够沿一种或多于一种的髓系分化途径增殖和分化(Lajtha，Blood Cells，5:447(1979))。
多种传染原、遗传异常和环境因素可以引起一种或多种造血细胞类型的缺乏。而且，用于治疗癌和某些免疫障碍的化疗疗法和放射疗法可以引起各类血细胞减少症，或贫血、中性粒细胞减少症和血小板减少症的综合病症。因而，造血细胞的增加或置换通常对这些治疗的成功是关键性的。(关于血液障碍及其起因的一般性讨论，请参见如Scientific AmericanMedicine中的“Hematology”，E.Rubenstein和D.Federman(编辑)，第2卷，第5章，Scientific American，New York(1996))。
当前可用于许多造血障碍以及由化学疗法或放射疗法引起的内源性造血细胞破坏的疗法是骨髓移植。然而，骨髓移植的使用受到严格限制，因为找到完全匹配的(遗传上相同的)供体是极其罕见的，除了其中可利用同卵双生同胞或其中缓解期的患者的骨髓细胞以活力冷冻状态保存的情形外。除了这种自体移植的情形外，存在着不可避免的某种程度的遗传错配，这引起严重的并且有时是致命的并发症。这些并发症是双重的。首先，通常预先用药物使患者免疫无能，以便避免对外来骨髓细胞的免疫排异反应(宿主抗移植物反应)。其次，当且如果供体骨髓细胞变得确立时，它们可以攻击患者(移植物抗宿主病)，其将患者识别为外来物。即使使用了密切匹配的亲体供体(family donor)，部分错配的这些并发症是直接因从遗传不同的个体移植骨髓而引起的高死亡率和发病率的原因。
研究还认为外周血是用于造血重建的干细胞的来源(Nothdurtt，W.等人，1977，Scand.J.Haematol.19:470-481；Sarpel，S.C.等人，1979，Exp.Hematol.7:113-120；Ragharachar，A.等人，1983，J.Cell.Biochem.Suppl.7A:78；Juttner，C.A.等人，1985，Brit.J.Haematol.61:739-745；Abrams，R.A.等人，1983，J.Cell.Biochem.Suppl.7A:53；Prummer，O.等人，1985，Exp.Hematol.13:891-898)。在一些研究中，对患有各种白血病的患者(Reiffers，J.等人，1986，Exp.Hematol.14:312-315；Goldman，J.M.等人，1980，Br.J.Haematol.45:223-231；Tilly，H.等人，Jul.19，1986，The Lancet，pp.154-155；也参见To，L.B.和Juttner，C.A.，1987，Brit.J.Haematol.66:285-288及其中引用的参考文献)和患有淋巴瘤的患者(Korbling，M.等人，1986，Blood 67:529-532)已经获得了有希望的结果。然而使用外周血的其它试验未能实现重建(Hershko，C.等人，1979，The Lancet 1:945-947；Ochs，H.D.等人，1981，Pediatr.Res.15:601)。研究还探究了将胎肝细胞移植(Cain，G.R.等人，1986，Transplantation 41:32-25；Ochs，H.D.等人，1981，Pediatr.Res.15:601；Paige，C.J.等人，1981，J.Exp.Med.153:154-165；Touraine，J.L.，1980，Excerpta Med.514:277；Touraine，J.L.，1983，Birth Defects 19:139；还参见Good，R.A.等人，1983，Cellular Immunol.82:44-45及其中引用的参考文献)或新生儿脾细胞移植(Yunis，E.J.等人，1974，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.72:4100)用作造血重建的干细胞源。在免疫重建试验中也进行了新生儿胸腺细胞的移植(Vickery，A.C.等人，1983，J.Parasitol.69(3):478-485；Hirokawa，K.等人，1982，Clin.Immunol.Immunopathol.22:297-304)。
显然，非常需要体外扩展血细胞的方法或体内增加造血细胞产生的疗法。
贫血被定义为血液中血红蛋白浓度的降低，其通常与总的循环红细胞量的减少相关。不管是什么原因，贫血降低了血液的携氧能力，并且在足够严重时，引起临床症状和临床体征。
在临床上，贫血的特征在于皮肤和粘膜的苍白，以及在于缺氧现象，最常见为虚弱、疲劳、无精打采或头晕的现象。心肌缺氧可以引起高动力循环，心率和心搏出量增加。可能会发展喷射型血流杂音，并且如果贫血足够严重，可能跟着发生心力衰竭。
贫血通常以如下两种方式的其中一种来分类：通过病因学分类(基于原因)或通过形态学分类(基于形状和大小的改变)。更普遍采用病因学分类。
当一个个体的抗体与另一个体的红细胞(RBC)反应时发生同种免疫溶血性贫血。同种免疫溶血性贫血通常在ABO血型不相容性输血和新生儿恒河猴血清型疾病后发生。其也可以在同种异体移植后发生。(Hoffbrand，A.V.在Essential Hematology，第3版，Blackwell ScientificPublications，1993，第90页中的文章)。
某些药物的施用可以引起药物诱发的暂时性贫血。这可以通过以下三种机理发生：1)抗体对抗药物-红细胞膜复合物(如青霉素或头孢噻吩)；2)补体经由药物-蛋白质(抗原)-抗体复合物沉积于红细胞表面上(如奎尼丁或氯磺丙脲)；或3)自身免疫溶血性贫血，其中药物的作用未知(如甲基多巴)。在每种情况下，贫血只在药物中断时消失(然而，使用甲基多巴时，抗体可能会持续许多个月)。(Hoffbrand，A.V.在EssentialHematology，第3版，Blackwell Scientific Publications，1993，第90-1页中的文章)。
再生障碍性贫血定义为由骨髓发育不全引起的各类血细胞减少症(贫血、白细胞减少症和血小板减少症)。其分为以下主要类型：先天型(范可尼贫血)和没有明显直接原因的后天型(特发性贫血)。次要原因可能由多种工业因素、医源性因素和传染性因素引起。根本原因看起来是造血多能干细胞数量的大幅减少和剩余干细胞的缺陷或对抗它们的免疫反应，这些缺陷或免疫反应使得它们不能充分分裂和分化来增加骨髓。(Hoffbrand，A.V.在Essential Hematology，第3版，Blackwell Scientific Publications，1993，第121页中的文章)。在某些情况下已经证实了体外抑制促红细胞生成素或阻断造血干细胞分化的抑制性T细胞以及免疫球蛋白。(Andreoli，T.在Essentials of Medicine，W.B.Saunders，1986，第349页中文章)。
Neelis等人，Blood，90(1):58-63(1997)公开了人重组TPO在暴露于5Gy全身照射(300-kV x-射线)的恒河猴中刺激了红细胞谱系的恢复，网织红细胞再生的开始比在安慰剂处理的动物中要早10天。Neelis等人还公开了血红蛋白和血细胞比容的值比对照中有所提高。
Basser等人，Blood，89(9):3118-3128(1997)还公开了PEG-rHuMGDF加非格司亭的施用提高了暴露于600mg/m2的卡铂和1,200mg/m2的环磷酰胺的患者的外周血祖细胞。
Papayannopoulou等人，Exp.Hematol.，24(5):660-669(1996)公开了EPO和TPO对体外向红细胞生成和血小板生成分化的影响。
Kaushansky等人，J.Clin.Invest.，96(3):1683-1687(1995)公开了TPO与EPO协同作用来扩增红系祖细胞。Kaushansky等人，Exp.Hematol.，24(2):265-269(1996)公开了TPO在骨髓抑制动物中扩增了BFU-E、CFU-GM和CFU-Mk祖细胞。
贫血是一个严重的问题，并且促使去找寻能预防贫血发展、治疗贫血、促进RBC前体存活和/或维持红细胞正常产生的血生长因子激动剂。本发明提供了这样一种激动剂。
发明内容
本发明涉及定义的低分子量肽化合物在治疗贫血中的用途。该定义的低分子量肽化合物具有与TPO-R强烈结合的特性，可以激活TPO-R，与已知的TPO激动剂相比潜在地具有减少的副作用，并且具有体外和体内刺激红细胞产生的能力。该低分子量肽化合物可以是多种形式，例如单体、二聚体和低聚体和/或可以用亲水聚合物衍生化。因此，这种肽化合物可用于治疗和/或预防贫血的治疗目的以及可用于研究贫血的诊断目的。
适用于治疗和/或诊断目的的肽化合物具有的IC50为约2mM或更少，并且更优选2nM或更少，所述的IC50是通过例如Baf/3结合测定法(如下所讨论的)测定，其中较低的IC50与较强的对TPO-R的结合亲和力相关。对于药学目的，肽化合物优选具有的IC50不大于约100μM，更优选不大于约500nM，更优选不大于约100pm，并且更优选不大于约5pm。
适用于治疗和/或诊断目的的肽化合物具有的EC50为约2mM或更少，并且更优选2nM或更少，所述的EC50是在熟知的测定法中用所熟知的技术，例如Baf/3结合测定法(如下所讨论的)测定，其中较低的EC50与较强的对TPO-R的结合亲和力相关。对于药学目的，所述肽化合物优选具有的EC50不大于约100μM，更优选不大于约500nM，更优选不大于约100pm，并且更优选不大于约5pm。
所述肽化合物的分子量的范围是约500至约8,000道尔顿，更优选约900至约2000道尔顿。如果如本文所描述，将肽化合物低聚化、二聚化和/或用亲水性聚合物衍生化，则这种肽的分子量将更大并且范围可以是约1500至约120,000道尔顿，更优选约3,000至约80,000道尔顿，并且更优选约30,000至约50,000道尔顿。
合适的亲水性聚合物包括但不限于聚烷基醚(例如聚乙二醇和聚丙二醇)、聚乙酸、聚乙醇酸、聚氧化烯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素和纤维素衍生物、葡聚糖和葡聚糖衍生物等，如美国专利No.5,672,662和5,869,451中所描述的，特此以引用的方式将其整个内容并入本文。
当用亲水性聚合物衍生肽化合物时，它们的溶解度和循环半衰期增加并且它们的免疫原性受到掩蔽。可以完成上述衍生而它们的结合活性具有极小的(如果有的话)减少。一般而言，这种亲水性聚合物的平均分子量范围为约500至约100,000道尔顿，更优选约2,000至约40,000道尔顿，并且甚至更优选约5,000至约20,000道尔顿。在优选的实施方案中，这种亲水性聚合物具有的平均分子量为约5,000道尔顿、10,000道尔顿和20,000道尔顿。
本发明的肽化合物可以利用以下参考文献中列出的任意方法用这种聚合物衍生或连接到这种衍生物上：Zallipsky，S.，Bioconjugate Chem.，6:150-165(1995)；Monfardini，C等人，Bioconjugate Chem.，6:62-69(1995)；美国专利No.4,640,835；美国专利No.4,496,689；美国专利No.4,301,144；美国专利No.4,670,417；美国专利No.4,791,192；美国专利No.4,179,337或WO 95/34326，将所有上述文献以引用的方式全文并入本文。
在目前优选的实施方案中，本发明的肽化合物用聚乙二醇(PEG)衍生。PEG是具有两个末端羟基的氧化乙烯重复单元的直链水溶性聚合物。PEG根据它们的分子量进行分类，其分子量的范围通常为约500道尔顿至约40,000道尔顿。在当前优选的实施方案中，采用的PEG具有的分子量范围是5,000道尔顿至约20,000道尔顿。连接至本发明的肽化合物的PEG可以是支链的或非支链的。(参见，例如Monfardini，C.等人，BioconjugateChem.，6:62-69(1995))。PEG可以从Nektar Therapeutics(San Carlo，CA)(加拿大圣卡洛的耐克塔疗法公司)、Sigma Chemical Co.(西格玛化工公司)和其它公司商购获得。这种PEG包括但不限于单甲氧基聚乙二醇(MePEG-OH)、单甲氧基聚乙二醇-琥珀酸酯(MePEG-S)、单甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺琥珀酸酯(MePEG-S-NHS)、单甲氧基聚乙二醇-胺(MePEG-NH2)、单甲氧基聚乙二醇-三氟乙基磺酸酯(MePEG-TRES)和单甲氧基聚乙二醇-咪唑基-羰基(MePEG-IM)。
简而言之，在一个实施方案中，所采用的亲水性聚合物(例如PEG)优选在一个末端由惰性基团(例如甲氧基或乙氧基)封端。因此，该聚合物在另一端通过与合适的活化剂反应而活化，所述的活化剂是例如氰尿酰卤(如氰尿酰氯、氰尿酰溴或氰尿酰氟)、二咪唑(diimadozle)、酐试剂(如二卤代琥珀酐，例如二溴代琥珀酐)、酰叠氮、对重氮二甲苯醚、3-(对重氮苯氧基)-2-羟丙基醚)等。活化的聚合物然后与本发明的肽化合物反应而产生用聚合物衍生的肽化合物。作为选择，可以活化本发明的肽化合物中的官能团以与聚合物反应，或者用已知的偶联方法在协同的偶联反应中将这两个基团连接。将容易理解，可以利用众多本领域技术人员已知并使用的其它反应方案将本发明的肽化合物用PEG衍生。
在用于诊断目的时，肽化合物优选用可检测标记物进行标记，并因此，没有这种标记的肽化合物在制备经标记的肽化合物中用作中间产物。
优选的肽化合物是这样的肽，其具有：
(1)分子量少于约5000道尔顿，不管是单体、二聚体还是低聚体，以及
(2)由IC50表示的对TPO-R的结合亲和力不大于约100mM，
其中零个或多个肽基[-C(O)NR-]键已经由非肽键(例如--CH2-氨基甲酸酯键[--CH2--OC(O)NR--]；膦酸酯键；--CH2-磺酰胺[--CH2--S(O)2NR-]键；脲[--NHC(O)NH--]键；--CH2-仲胺键；或烷基化肽键[--C(O)NR6--，其中R6是低级烷基])置换；
这样的肽，其中N-末端衍生为--NRR1基团；衍生为-NRC(O)R基团；衍生为-NRC(O)OR基团；衍生为--NRS(O)2R基团；衍生为--NHC(O)NHR基团，其中R和R1是氢或低级烷基，但须R和R1两者不都为氢；衍生为琥珀酰亚胺基团；衍生为苯甲氧基羰基--NH--(CBZ--NH--)基团；或衍生为在苯环上具有1-3个取代基的苯甲氧基羰基-NH-基团，所述的取代基选自由低级烷基、低级烷氧基、氯和溴组成的组；或
这样的肽，其中C末端衍生为--C(O)R2，其中R2选自由低级烷氧基和--NR3R4(其中R3和R4独立地选自由氢和低级烷基组成的组)组成的组。
据发现，核心肽化合物可以包含如下氨基酸序列(SEQ ID NO:2):
X1 X2 X3 X4 X5 X6 X7
其中X1是C、L、M、P、Q、V；X2是F、K、L、N、Q、R、S、T或V；X3是C、F、I、L、M、R、S、V或W；X4是20种遗传编码的L-氨基酸的任意一种；X5是A、D、E、G、K、M、Q、R、S、T、V或Y；X6是β-(2-萘基)丙氨酸(2-Nal)；以及X7是C、G、I、K、L、M、N、R或V。
在一个优选的实施方案中，核心肽化合物包含如下氨基酸序列(SEQ IDNO:3):
X8 G X1 X2 X3 X4 X5(2-Nal)X7
其中X1至X7是如上定义；以及每个X8残基独立地选自20种遗传编码的L-氨基酸的任意一种、它们立体异构的D-氨基酸；以及非天然氨基酸。
在又一个优选的实施方案中，核心肽化合物包含如下氨基酸序列(SEQID NO:4)：
X9 X8 G X1 X2 X3 X4 X5(2-Nal)X7
其中X9是A、C、E、G、I、L、M、P、R、Q、S、T或V；以及X8是A、C、D、E、K、L、Q、R、S、T或V。更优选的是，X9是A或I；以及X8是D、E或K。
特别优选的肽化合物是(SEQ ID NO:5)：
I E G P T L R Q(2-Nal)L A A R(Sar)
其中(Sar)是肌氨酸。
在另一实施方案中，将肽化合物二聚化或低聚化以增加该肽化合物的亲和性和/或活性。特别优选的肽化合物是具有由赖氨酰胺残基连接的两个相同14肽的29肽。因而特别优选的肽化合物是(SEQ ID NO:6，本文中也称为“1号TPO化合物”)：
Figure A200680052857D00171
更优选的肽化合物是聚乙二醇化形式的“1号TPO化合物”。该聚乙二醇化形式可包括共价连接至每个N末端异亮氨酸上的20,000MPEG残基。这种化合物的一个例子的完整分子结构详细描述如下：
Figure A200680052857D00172
(该化合物在本文中称为PEG化“1号TPO化合物”)。PEG化“1号TPO化合物”的完整化学名称为：
甲氧基聚乙二醇20000-丙酰-L-异亮氨酰-L-谷氨酰-甘氨酰-L-脯氨酰-L-苏氨酰-L-亮氨酰-L-精氨酰-L-谷氨酰胺酰-L-2-萘基丙氨酰-L-亮氨酰-L-丙氨酰-L-丙氨酰-L-精氨酰-肌氨酰-Ne-(甲氧基聚乙二醇20000-丙酰-L-异亮氨酰-L-谷氨酰-甘氨酰-L-脯氨酰-L-苏氨酰-L-亮氨酰-L-精氨酰-L-谷氨酰胺酰-L-2-萘基丙氨酰-L-亮氨酰-L-丙氨酰-L-丙氨酰-L-精氨酰-肌氨酰-)-赖氨酰胺。
PEG化“1号TPO化合物”是由赖氨酰胺残基连接的两个相同的14氨基酸肽组成，并且在每个N-端连接至大约20,000道尔顿分子量的聚乙二醇(PEG)链上。没有PEG的母体肽的分子量为3,295道尔顿，而具有两个PEG链时分子量近43,295道尔顿。PEG化“1号TPO化合物”简化的分子结构为(MPEG-Ile-Glu-Gly-Pro-Thr-Leu-Arg-Gln-(2-Nal)-Leu-Ala-Ala-Arg-(Sar))2-Lys-NH2；其中(2-Nal)是β-(2-萘基)丙氨酸，(Sar)是肌氨酸，而MPEG是甲氧基聚(乙二醇)(分子量大约为20,000道尔顿)。
一种或多种肽化合物，并且特别是PEG化的肽化合物，包括其可药用等价物(本文中通称“肽化合物”、“TPO肽化合物”或“本发明的TPO肽化合物”)，可用于预防和治疗由TPO介导的疾病，并且尤其是用于治疗和/或预防贫血。因而，本发明提供了用于治疗和/或预防贫血的方法，其中让患有贫血的患者或预期发展出贫血的患者接受，或给其施用治疗或预防有效剂量或量的本发明的肽化合物。
本发明还提供了药物组合物，该药物组合物包括一种或多种本文所述的肽化合物和生理学上可接受的载体。这种药物组合物可以有多种形式，包括口服剂型，以及可吸入粉末和溶液以及可注射和可输注溶液。
附图说明
图1示出了PEG化“1号TPO化合物”处理对血红蛋白水平的影响，如实施例1中说明的。
图2示出了PEG化“1号TPO化合物”处理对红细胞计数的影响，如实施例1中说明的。
图3示出了PEG化“1号TPO化合物”处理对血细胞比容的影响，如实施例1中说明的。
图4示出了PEG化“1号TPO化合物”处理对体重的影响，如实施例1中说明的。
图5示出了PEG化“1号TPO化合物”处理对血红蛋白水平的影响，如实施例2中说明的。
图6示出了PEG化“1号TPO化合物”处理对红细胞计数的影响，如实施例2中说明的。
图7示出了PEG化“1号TPO化合物”处理对血细胞比容的影响，如实施例2中说明的。
图8示出了PEG化“1号TPO化合物”处理对体重的影响，如实施例2中说明的。
图9示出了PEG化“1号TPO化合物”处理对血红蛋白水平的影响，如实施例3中说明的。
图10示出了PEG化“1号TPO化合物”处理对红细胞计数的影响，如实施例3中说明的。
图11示出了PEG化“1号TPO化合物”处理对血细胞比容的影响，如实施例3中说明的。
图12示出了PEG化“1号TPO化合物”处理对体重的影响，如实施例3中说明的。
图13示出了PEG化“1号TPO化合物”处理对血细胞比容的影响，如实施例4中说明的。
图14示出了PEG化“1号TPO化合物”处理对体重的影响，如实施例4中说明的。
图15示出了PEG化“1号TPO化合物”处理对体重的影响，如实施例5中说明的。
图16示出了据信为PEG化“1号TPO化合物”抗贫血的作用机理。
图17示出了据信为PEG化“1号TPO化合物”对造血细胞的一些谱系效果。
图18A和图18B示出了用PEG化“1号TPO化合物”处理所导致的对经卡铂处理的小鼠的血小板和血细胞比容的影响，如实施例6中说明的。
图19示出了用PEG化“1号TPO化合物”处理所导致的对经卡铂处理的小鼠的脑切片中纤维蛋白原沉积和血凝块的影响，如实施例6中说明的。
图20示出了PEG化“1号TPO化合物”对Baf/3细胞中人TPO-R的激活的影响，如实施例7中说明的。
图21表明PEG化“1号TPO化合物”激活了Baf/3细胞，其以剂量依赖的方式重组表达人TPO-R，如实施例7中说明的。
具体实施方式
阐明了以下定义以说明和定义用于描述本发明的多个术语的含义和范围。
“激动剂”指生物活性配体，其结合至其互补的生物活性受体并激活后者，以在该受体中引起生物学响应或增强该受体预先存在的生物活性。
“EC50”和“半数有效浓度”指产生50％的对该激动剂的最大可能有效响应时激动剂的浓度。
“IC50”和“半数抑制浓度”指置换了50％的激动剂特异性结合时的竞争性配体的浓度。
“可药用等价物”包括但不限于可药用盐、酸加成盐、酯、酰胺、水合物、代谢产物、前药和电子等排体。许多可药用等价物预期具有与本发明的肽化合物相同或类似的体外或体内活性。
“可药用盐”指通常用于制药工业的非毒性碱金属盐、碱土金属盐和铵盐，包括钠盐、钾盐、锂盐、钙盐、镁盐、钡盐、铵盐和精蛋白锌盐，其通过本领域所熟知的方法制备。该术语还包括非毒性酸加成盐，其通常通过让本发明的肽化合物与合适的有机或无机酸反应而制备。代表性的盐包括盐酸盐、溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、醋酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘磺酸盐等。
“可药用酸加成盐”指这样的盐，该盐保持了该游离碱的生物学效应和性质，并且不会在生物学上或其它方面不可取，该盐是与无机酸(例如盐酸、溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等)和有机酸(例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、延胡索酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等)形成。对于可药用酸加成盐作为前药的描述，参见Bundgaard，H.(同上)。
“可药用酯”指这样的酯，该酯在酯键水解时保持了羧酸或醇的生物学效应和性质，并且不会在生物学上或其它方面不可取。对于可药用酯作为前药的描述，参见Bundgaard，H.编辑的Design of Prodrugs，ElsevierScience Publishers，Amsterdam(1985)。这些酯通常由对应的羧酸和醇形成。一般而言，酯的形成可以通过常规的合成技术来完成。(参见，例如March Advanced Organic Chemistry，第3版，John Wiley & Sons，NewYork(1985)，第1157页及其中引用的参考文献和Mark等人，Encyclopedia of Chemical Technology，John Wiley & Sons，NewYork(1980))。该酯的醇组分通常将包括(i)C2-C12脂族醇，其可以含有或不含一个或多个双键并可以含有或不含支化碳，或(ii)C7-C12芳族醇或杂芳醇。本发明还考虑那些组合物的用途，所述的组合物既可以是本文描述的酯，又可以是其可药用酸加成盐。
“可药用酰胺”指这样的酰胺，该酰胺在酰胺键水解时保持了羧酸或胺的生物学效应和性质，并且不会在生物学上或其它方面是不可取的。对于可药用酰胺作为前药的描述，参见Bundgaard，H.编辑的Design ofProdrugs，Elsevier Science Publishers，Amsterdam(1985)。这些酰胺通常由对应的羧酸和胺形成。一般而言，酰胺的形成可以通过常规的合成技术来完成。(参见，例如March Advanced Organic Chemistry，第3版，JohnWiley & Sons，New York(1985)，第1152页，和Mark等人，Encyclopediaof Chemical Technology，John Wiley & Sons，New York(1980))。本发明还考虑那些组合物的用途，所述的组合物既可以是本文描述的酰胺，又可以是其可药用酸加成盐。
“可药用或可治疗用载体”指这样的载体介质，其不会干扰活性成分的生物学活性的有效性并且其对宿主或患者没有毒性。
“立体异构体”指具有与另一者相同的分子量、化学组成和构造，但是原子分组不同。即，某些相同的化学部分在空间中有不同的取向，并因而，当是纯的时，具有旋转偏振光平面的能力。然而，一些纯立体异构体具有的光学旋转可能如此微小以致用目前的仪器无法检测。本发明的肽化合物可以具有一个或多个不对称碳原子，并因而包括多种立体异构体。所有立体异构体都包括在本发明的范围内。
如应用于本发明组合物的，“治疗或药学有效量”指足以诱导所需生物学效果的组合物的量。该效果可以是病征、症状或病因的缓和，或生物系统中任何其它期望的改变。在本发明中，所述效果通常涉及红细胞产生的增加。
肽中的氨基酸残基缩写如下：苯丙氨酸是Phe或F；亮氨酸是Leu或L；异亮氨酸是Ile或I；甲硫氨酸是Met或M；缬氨酸是Val或V；丝氨酸是Ser或S；脯氨酸是Pro或P；苏氨酸是Thr或T；丙氨酸是Ala或A；酪氨酸是Tyr或Y；组氨酸是His或H；谷氨酰胺是Gln或Q；天冬酰胺是Asn或N；赖氨酸是Lys或K；天冬氨酸是Asp或D；谷氨酸是Glu或E；半胱氨酸是Cys或C；色氨酸是Trp或W；精氨酸是Arg或R；以及甘氨酸是Gly或G。另外Bu是丁氧基，Bzl是苄基，CHA是环己胺，Ac是乙酰基，Me是甲基，Pen是青霉胺，Aib是氨基异丁酸，Nva是正缬氨酸，Abu是氨基丁酸，Thi是噻吩丙氨酸，OBn是O-苄基，以及hyp是羟脯氨酸。
除了仅由天然存在的氨基酸组成的肽，还提供了拟肽(peptidomimetic)或肽类似物。肽类似物通常用于制药工业作为非肽药物，其具有的性质类似于模板肽的性质。这些类型的非肽化合物称为“肽模拟物”或“拟肽”(Fauchere，J.Adv.Drug Res.15:29(1986)；Veber和Freidinger TINS，第392页(1985)；和Evans等人，J.Med.Chem.30:1229(1987)，将这些文献以引用的方式并入本文)。结构上类似于治疗上有用的肽的肽模拟物可以用于产生等价的或增强的治疗或预防效果。一般而言，拟肽在结构上类似于范例多肽(即具有生物学或药理学活性的多肽)，例如天然存在的受体结合多肽，但是具有的一个或多个肽键任选由选自以下组成的组的键置换：--CH2NH--、--CH2S--、--CH2--CH2--、--CH＝CH--(顺式和反式)、--COCH2--、--CH(OH)CH2--和--CH2SO--，该置换是通过本领域已知的方法并另外在如下参考文献中描述：Spatola，A.F.，Chemistry and Biochemistry of Amino Acids，Peptides，and Proteins，B.Weinstein，编辑，Marcel Dekker，New York，第267页(1983)；Spatola，A.F.，Vega Data(March1983)，第1卷，第3期，PeptideBackbone Modifications(综述)；Morley，Trends Pharm Sci(1980)，第463-468页(综述)；Hudson，D.等人，Int J Pept Prot Res 14:177-185(1979)(--CH2NH--，CH2CH2--)；Spatola等人，Life Sci 38:1243-1249(1986)(--CH2--S)；Hann J.Chem.Soc Perkin Trans.I 307-314(1982)(--CH--CH--，顺式和反式)；Almquist等人，J.Med.Chem.23:1392-1398(1980)(--COCH2--)；Jennings-White等人，TetrahedronLett 23:2533(1982)(--COCH2--)；Szelke等人，European Appln.EP45665 CA(1982):97:39405(1982)(--CH(OH)CH2--)；Holladay等人，Tetrahedron Lett 24:4401-4404(1983)(--C(OH)CH2--)；和Hruby LifeSci 31:189-199(1982--CH2--S--)；将以上每篇文献以引用的方式并入本文。尤其优选的非肽键是--CH2NH--。这种肽模拟物可以具有优于多肽实施方案的显著优点，包括，例如:更经济的生产、更大的化学稳定性、增强的药理学性质(半衰期、吸收率、效价、效能等)、改变的特异性(如广谱的生物活性)、减少的抗原性等。
拟肽的标记通常涉及一种或多种标记直接或通过间隔物(如酰胺基团)共价连接；连接至该拟肽上的非干扰性位置上，该非干扰性位置通过定量构效数据和/或分子模拟来预测。这种非干扰性位置通常是不与所述拟肽与之结合而产生治疗效果的大分子(如免疫球蛋白超家族分子)形成直接接触的位置。拟肽的衍生(例如标记)不应该实质上干扰该拟肽的期望生物学或药理学活性。通常，受体结合肽的拟肽以高的亲和性结合至受体并具有可检测的生物活性(即刺激或拮抗一种或多种受体介导的表型改变)。
同种氨基酸的D型氨基酸系统性取代共有序列的一种或多种氨基酸(如D型赖氨酸代替L型赖氨酸)可用于产生更稳定的肽。此外，包含共有序列或基本相同的共有序列变体的约束型肽(constrained peptide)可以通过本领域已知的方法产生(Rizo和Gierasch Ann.Rev.Biochem.61:387(1992)，将其以引用的方式并入本文)；例如，通过加入能形成分子内二硫键(使该肽环化)的内部半胱氨酸残基来产生。
“可检测标记”指这样的材料，其在共价连接至本发明的肽化合物上时，使得能在已经施用了该肽化合物的患者中体内检测到该肽化合物。适用的可检测标记是本领域所熟知的，并包括(例如)放射性同位素、荧光标记(如荧光素)等。所采用的具体可检测标记不是关键的，并且是相对于待使用的标记的量以及所使用的标记的量时该标记的毒性而进行选择。相对于这些因素而选择标记是本领域技术范畴内所熟知的。
可检测标记共价连接至肽化合物是通过本领域熟知的常规方法来完成。例如，当采用125I放射性同位素作为可检测标记时，125I共价连接至肽化合物可以通过将酪氨酸并入该肽化合物并然后碘化该肽化合物来实现。同样，可以用常规化学，通过例如肽化合物上的羟基基团，将32P作为磷酸酯部分并入至该肽化合物上。
本发明提供肽化合物，其结合并激活TPO-R或换句话讲起TPO激动剂的作用。这些肽化合物包括“先导”肽化合物和“等价的”或“衍生的”肽化合物，所述“等价的”或“衍生的”肽化合物被构建以便具有与该先导肽化合物相同或类似的分子结构或形状，但关于对水解或蛋白质水解的敏感性和/或关于其它生物学性质(例如增加的对受体的亲和性)不同于该先导肽化合物。本发明还提供包含有效量的可用于治疗贫血的TPO激动剂、更特别是肽化合物的组合物。
还可以将本发明的肽化合物施用给温血动物，包括人，以在体内激活TPO-R。因而，本发明涵盖了用于治疗性处理贫血的方法，该方法包括施用足以模拟体内TPO对TPO-R的作用的量的本发明肽化合物。
本发明的肽化合物的活性可以例如在McDonald Am.J.of PediatricHematology/Oncology 14:8-21(1992)(将其以引用的方式并入本文)中描述的多个模型之一或本文公开的测定法中进行体外或体内评价。
根据一个实施方案，本发明的组合物可用于治疗与骨髓输注、放射疗法或化学疗法相关的贫血。肽化合物通常会在化学疗法、放射疗法或骨髓移植前或在这种暴露后进行预防性施用。
因此，本发明还提供药物组合物，该药物组合物包含至少一种本发明肽化合物作为活性成分，以及药用载体或稀释剂。本发明的肽化合物可以通过口服、肺、肠胃外(肌内、腹膜内、静脉内(IV)或皮下注射)、吸入(经由细粉制剂)、透皮、鼻、阴道、直肠或舌下施用途径施用，并且可以配制成适于每种施用途径的剂型。参见，如Bernstein等人，PCT专利公布No.WO 93/25221；Pitt等人，PCT专利公布No.WO 94/17784；和Pitt等人，欧洲专利申请613,683，将每篇文献以引用的方式并入本文。
用于口服的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，将活性肽化合物与至少一种惰性的可药用载体(例如蔗糖、乳糖或淀粉)掺合。正如在通常的实践中那样，这种剂型还可以包含不同于惰性稀释剂的附加物质，如润滑剂(例如硬脂酸镁)。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。另外，可以制备具有肠溶衣的片剂和丸剂。
用于口服的液体剂型包括可药用乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂，其酏剂含有通常用于本领域的惰性稀释剂，例如水或盐水。除了这些惰性稀释剂外，组合物还可以包含佐剂，例如湿润剂、乳化剂和助悬剂，以及甜味剂、调味剂，以及芳香剂。
用于肠胃外施用的根据本发明的制剂包括无菌含水或无水溶液剂、混悬剂或乳剂。无水溶剂或载体的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油和玉米油)、明胶和可注射有机酯(例如油酸乙酯)。这些剂型还可以包含佐剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。它们可以通过(例如)滤过阻菌过滤器、通过将灭菌剂掺入组合物中、通过辐射组合物或通过加热组合物来灭菌。它们也可以在使用前即刻用无菌水或其它无菌注射用介质制备。
用于直肠或阴道施用的组合物优选是栓剂，其除了活性物质外，还可以可以包含赋形剂，例如可可脂或栓剂蜡。用于鼻内或舌下施用的组合物也用本领域熟知的标准赋形剂制备。
本发明的组合物也可以通过(例如)Tice和Bibi(Treatise onControlled Drug Delivery，(编辑)A.Kydonieus，Marcel Dekker，N.Y.(1992)，第315-339页)的方法进行微胶囊化。
可以施用含有肽化合物的组合物用于预防性和/或治疗性治疗。在治疗性应用中，将组合物如上描述施用给已经患有疾病的患者，施用的量足以治愈或至少部分地停止疾病及其并发症的症状。将足以实现这个目的的量定义为“治疗有效剂量”。对该用途有效的量将取决于疾病的严重性和患者的体重和一般状态。
在预防性应用中，将含有本发明肽化合物的组合物施用给易感具体疾病或有患该疾病的风险的患者。将这样一种量定义为“预防有效剂量”。在该用途中，确切的量同样取决于患者的健康状态和体重。
有效治疗所需的TPO激动剂的量将取决于许多不同因素，包括施用手段、靶位点、患者的生理状态和施用的其它药物。因而，应该滴定治疗剂量以优化安全性和功效。通常，体外使用的剂量可以在可用于原位施用这些试剂的量上提供有用的指导。用于治疗具体疾病的有效剂量的动物试验将给人的剂量提供进一步的预测性指示。在例如Gilman等人(编辑)，Goodman andGilman的:The Pharmacological Basis of Therapeutics，第8版，Pergamon Press(1990)；和Remington’s Pharmaceutical Sciences，第7版，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.(1985)中描述了多种考虑，将这两篇文献以引用的方式并入本文。
在以每天约1μg/kg-约300μg/kg体重的剂量范围施用时，本发明的肽化合物对治疗贫血是有效的。根据诸如疾病的严重性、患者的年龄和一般状况等因素，通过施用途径以及通过临床主治医生的判断来调整所采用的具体剂量。
实施例
动物模型
观察了PEG化“1号TPO化合物”对用卡铂处理的小鼠的影响。对于本文的所有实施例，在无菌盐水中制备PEG化“1号TPO化合物”的10mg/ml的储液。为了混合，将制备物置于200转/分钟的转动摇床上15分钟。将该方法用于溶解PEG化“1号TPO化合物”而不产生泡沫。用GVMillex(0.22μm)过滤器过滤该储液。然后用无菌盐水从该储液制备给药溶液。储液和给药溶液在使用当天新鲜制备。
实施例1
观察了PEG化“1号TPO化合物”对用卡铂处理小鼠后贫血的持续时间和严重性的影响，所述的影响是通过血红蛋白水平、红细胞计数和血细胞比容的改变来测定。对于该试验，在卡铂给药一天后将递增量的PEG化“1号TPO化合物”施用给小鼠，以鉴定可能的对多个红细胞参数的剂量依赖性影响。
如下面描述的，在第-2天和第-1天通过腹膜内施用，用卡铂或载体(磷酸盐缓冲盐水，PBS)处理小鼠组。先前测定了用于在BALB/c小鼠品系中诱导血小板减少症的卡铂的最佳剂量为120mg/kg的分次总剂量(以两天连续每天注射给药，即2 x 60mg/kg)。如表1中描述的，在第二次施用卡铂后一天，通过静脉内(推注)注射，用PEG化“1号TPO化合物”或载体(无菌盐水(SS)，无防腐剂的0.9％的氯化钠)处理小鼠组。基于单位体重施用剂量(100μl/10g体重)。
表1
Figure A200680052857D00271
在第5、7、9和11天，对每个试验组中的5只小鼠称重并然后利用CO2窒息对小鼠实施安乐死，并通过心脏穿刺放血。将血液样品转移至独立的EDTA(紫头(lavender-top))微容器中用于血液学评价。在第5天和第11天处理对照小鼠(5只)组。结果示于图1-4中。数据通过图表示出，表示为组的平均值+SEM。
到第11天，单独用卡铂处理小鼠引起小鼠中的血红蛋白水平下降约20％。用所有剂量的PEG化“1号TPO化合物”处理抑制了这种降低。RBC计数和血细胞比容小的降低也与卡铂处理相关，该效果受到了用PEG化“1号TPO化合物”处理的抑制；然而，没有对这种效果进行统计分析。相对于第0天采集的体重测量值，单独用卡铂处理或用卡铂+多种剂量的PEG化“1号TPO化合物”处理的所有组中的小鼠在第5、7和9天经历了体重减轻。在11天的试验期间对一亚组小鼠的体重测量值进行的分析暗示，仅用卡铂处理引起了观测到的体重降低，而全部试验剂量的PEG化“1号TPO化合物”促进了体重降低的恢复。
到第5天，仅用卡铂处理小鼠的小鼠开始表现出改变的外观和行为。一些小鼠采取了拱起的姿势并表现出萎蔫。许多小鼠也具有污染的肛门生殖器区域。PEG化“1号TPO化合物”处理以看似剂量依赖性的方式降低了这些体征的发生、频率和严重性。
实施例2
检验了PEG化“1号TPO化合物”可能使小鼠骨髓造血干细胞对卡铂处理的毒性效应变敏感的可能性。对于该试验，在施用卡铂前七天或在卡铂处理后立刻将PEG化“1号TPO化合物”的剂量施用给小鼠。在施用卡铂前和施用卡铂后均用PEG化“1号TPO化合物”处理另外的小鼠组。也观察了这种给药方案对血液学参数的影响。
如下面描述的，在第7天和8天通过腹膜内施用，用卡铂或载体(磷酸盐缓冲盐水，PBS)处理小鼠组。先前测定了用于在BALB/c小鼠品系中诱导血小板减少症的卡铂的最佳剂量为120mg/kg的分次总剂量(以两天连续每天注射给药，即2 x 60mg/kg)。如表2中描述的，在第一次施用卡铂前第七天或在第二次施用卡铂后一小时(1小时)，通过静脉内(推注)注射，用PEG化“1号TPO化合物”(300μg/kg)或载体(无菌盐水(SS)，无防腐剂的0.9％的氯化钠)处理小鼠组。在施用卡铂前(第0天)和施用卡铂后(第8天，t＝1小时)均用PEG化“1号TPO化合物”处理另外的小鼠组。所有的剂量施用都是基于单位体重进行(100μl/10g体重)。
表2
在第14、18、22和26天，对每个试验组中的5只小鼠称重并然后利用CO2窒息对小鼠实施安乐死，并通过心脏穿刺放血。将血液样品转移至独立的EDTA(紫头)微容器中用于血液学评价。在第14天和第26天处理对照小鼠(5只)组。结果示于图5-8中。数据通过图表示出，表示为组的平均值+SEM。
与对照组相比较，到第18天和第22天，单独用卡铂处理小鼠引起了存活小鼠中血红蛋白水平、RBC计数和血细胞比容的降低(降低大约18％)。通过在第8天(第二次卡铂处理后1小时)施用PEG化“1号TPO化合物”和第0天额外施用PEG化“1号TPO化合物”或不额外施用PEG化“1号TPO化合物”，这些降低被阻止；然而，(仅)在第0天施用PEG化“1号TPO化合物”未能影响卡铂诱导的这些红细胞参数的改变。
对照组中所有小鼠在第7天和第26天之间经历了正常的体重增加，而单独用卡铂处理的所有小鼠在相同的时间段内有小量体重减轻(平均为大约4％)。用卡铂和PEG化“1号TPO化合物”的多种共同处理进行处理的所有组中的小鼠在第7天和第26天之间或者保持了体重或者经历了体重增加。在试验期间分析体重测量值暗示，卡铂处理是所观察到的体重降低的主要原因，而用PEG化“1号TPO化合物”共同处理防止了这种体重减轻，然而没有进行统计分析。第7天(施用卡铂前)和第26天(试验终止)之间所观察到的体重差别在图8中示出。
对照组中所有小鼠在整个试验期间均表现正常。单独用卡铂处理小鼠开始表现出改变的外观并且早在第12天行为表现为频繁的拱起并显示出蓬乱的体征。在试验期的后半段，接受了卡铂(没有进行PEG化“1号TPO化合物”处理或进行了该处理)的许多小鼠采取了拱起的姿势并表现出蓬乱。在第8天用PEG化“1号TPO化合物”处理和第0天不用或用PEG化“1号TPO化合物”额外处理看起来延缓了这些体征的发生，且在第0天和第8天的处理也降低了严重性和持续时间；然而没有对所述处理对系统性观察现象的影响进行详细分析。
实施例3
观察了实施给药方案后PEG化“1号TPO化合物”对贫血的持续时间和严重性的影响，在所述给药方案中，实施卡铂处理后在多个时间点施用了PEG化“1号TPO化合物”。对于该试验，在施用卡铂后一小时(1小时)、一天(1天)或四天(4天)，将一定量的PEG化“1号TPO化合物”施用给小鼠。
如下面描述的，在第-1天和0天通过腹膜内施用，用卡铂或载体(磷酸盐缓冲盐水，PBS)处理小鼠组。先前测定了用于在BALB/c小鼠品系中诱导血小板减少症的卡铂的最佳剂量为120mg/kg的分次总剂量(以两天连续每天注射给药，即2 x 60mg/kg)。如表3中描述的，在第二次施用卡铂后一小时(第0天)、一天(第1天)或四天(第4天)，通过静脉内(推注)注射，用PEG化“1号TPO化合物”(300μg/kg)或载体(无菌盐水(SS)，无防腐剂的0.9％的氯化钠)处理小鼠组。基于单位体重施用剂量(100μl/10g体重)。
表3
Figure A200680052857D00311
在第6、8、10和12天，对每个试验组中的5只小鼠称重并然后利用CO2-窒息对小鼠实施安乐死，并通过心脏穿刺放血。将血液样品转移至独立的EDTA(紫头)微容器中用于血液学评价。在第6天和第12天处理对照小鼠(5只)组结果示于图9-12中。数据通过图表示出，表示为组的平均值+SEM。
与对照组相比较，到第12天，单独用卡铂处理小鼠引起了存活小鼠(2只小鼠)中的血红蛋白水平、RBC计数和血细胞比容显著降低(大约47％)。通过在第0天(用卡铂处理后1小时)和第1天施用PEG化“1号TPO化合物”，防止了这些降低；然而在第4天施用PEG化“1号TPO化合物”未能影响卡铂诱导的这些红细胞参数的改变。
相对于第-1天采集的体重测量值，单独用卡铂处理或用卡铂+多种剂量的PEG化“1号TPO化合物”处理的所有组中的小鼠在第6、8、10和12天经历了体重减轻。在试验期间对体重测量值的分析暗示，卡铂是所观察到的体重降低的主要原因。在第0天、第1天或第4天施用PEG化“1号TPO化合物”没有显示影响与卡铂处理相关的体重减轻，然而没有进行统计学分析。在第-1天和第10天之间观察到的体重降低在图11中示出。
对照组中所有小鼠在整个试验期间均表现正常。单独用卡铂处理的小鼠开始表现出改变的外观并且早在第2天行为表现为频繁的拱起并显示出萎蔫的体征。在试验期的后半段，接受了卡铂(没有进行PEG化“1号TPO化合物”处理或进行了该处理)的许多小鼠采取了拱起的姿势并表现出萎蔫。这些小鼠中的一些也具有污染的肛门生殖器区域。其它不频繁的体征包括显现出消瘦，眼睑下垂，并且表现出异常的步态(abnormal gate)。用PEG化“1号TPO化合物”处理没有显示具有对这些体征的发生、频率或严重性的显著影响，然而没有进行详细的分析。
在24小时的化学疗法内用PEG化“1号TPO化合物”施用给动物时，观测了对卡铂诱导的贫血的预防。这些数据暗示，PEG化“1号TPO化合物”具有不限于巨核细胞谱系的骨髓保护效果。
实施例4
对PEG化“1号TPO化合物”在经卡铂处理的小鼠中作为巨核细胞和红细胞谱系的存活因子起作用的能力进行了观测，所述的作用是通过血液学参数的改变测定。在先前的试验中，发现低至300μg/kg的PEG化“1号TPO化合物”剂量预防了由卡铂诱导的贫血。在该试验中，对较低剂量的PEG化“1号TPO化合物”(即30、100和300μg/kg)对红细胞谱系存活的效果进行了检验，以鉴定该效果的剂量响应。
如下面描述的，在第-1天和0天通过腹膜内施用，用卡铂或载体(磷酸盐缓冲盐水，PBS)处理小鼠组。先前测定了用于在BALB/c小鼠品系中诱导血小板减少症的卡铂的最佳剂量为120mg/kg的分次总剂量(以两天连续每天注射给药，即2 x 60mg/kg)。如表4中描述的，在第二次施用卡铂后大约一小时，通过静脉内(推注)注射，用PEG化“1号TPO化合物”或载体(无菌盐水(SS)，无防腐剂的0.9％的氯化钠)处理小鼠组。基于单位体重施用剂量(100μl/10g体重)。
表4
在第6、8和12天，对每个试验组中的5只小鼠称重并然后利用CO2窒息对小鼠实施安乐死，并通过心脏穿刺放血。将血液样品转移至独立的EDTA(紫头)微容器中用于血液学评估。在第6天和第12天处理对照小鼠(5只)组。结果在图13-14中示出。
到第12天，单独用卡铂处理小鼠引起小鼠中的血红蛋白水平下降大于25％。用所有剂量的PEG化“1号TPO化合物”处理完全抑制了这种降低。PEG化“1号TPO化合物”也有效抑制了由卡铂处理诱导的RBC计数和血细胞比容的降低。
相对于第-1天采集的体重测量值，单独用卡铂处理或用卡铂+多种剂量的PEG化“1号TPO化合物”处理的所有组中的基本上全部小鼠在第6、8和12天经历了体重减轻。对13天的试验期间测量的体重进行分析表明，单独用卡铂处理引起了观测到的体重降低。在该试验中，PEG化“1号TPO化合物”没有显示出影响了体重减轻或体重恢复。
到第4天，仅用卡铂处理小鼠的小鼠开始表现出改变的外观和行为。一些小鼠采取了拱起的姿势并表现出蓬乱。许多小鼠还排软的粪便。少数动物表现出萎蔫，并且少数有血便。用PEG化“1号TPO化合物”的处理以看似剂量依赖性的方式降低了这些体征的发生、频率和严重性。
PEG化“1号TPO化合物”发挥功能，在经卡铂处理的小鼠中维持了红细胞谱系的存活，这通过外周血小板计数和其它血液学参数测出。在第12天，发现所有剂量的PEG化“1号TPO化合物”均完全阻止了卡铂诱导的贫血。这些结果暗示了巨核细胞和红细胞谱系对PEG化“1号TPO化合物”的“存活维持”效应的差异敏感性/反应性。
实施例5
如下面描述的，用相隔10天的两轮化学治疗剂(卡铂)处理小鼠组，每轮包括连续两天的卡铂处理(即在第-1天和第0天以及在第10天和第11天以70mg/kg/天施用卡铂)。用于这些存活研究的卡铂的剂量超过了小鼠的最大耐受剂量(即120mg/kg；在连续2天以60mg/kg/天施用)。如下面描述的，在每轮中的第二次施用卡铂后1小时(即第0天和第11天)，通过静脉内(推注)注射，用PEG化“1号TPO化合物”(100μg/kg)或载体(无菌盐水(SS)，无防腐剂的0.9％的氯化钠)处理小鼠。基于单位体重施用剂量(100μl/10g体重)。
Figure A200680052857D00341
在第7、10、18、21和28天，对每个试验组(25只小鼠/组)中的5只小鼠称重并然后利用CO2窒息对小鼠实施安乐死，并通过心脏穿刺放血。将血液样品转移至独立的EDTA(紫头)微容器中用于血液学评价。仅用载体处理的对照小鼠组以相同的方式进行处理。结果在图15中示出。用两轮卡铂处理小鼠导致发展中度贫血(在第10天和21天之间可观察到)，而用2轮卡铂和PEG化“1号TPO化合物”处理的小鼠在整个该期间维持了类似于对照组的血细胞比容值。有趣的是，在没有用于血液学评价的小鼠中，仅用卡铂处理的组中有7只小鼠在第4天和第18天间死亡，而在相同期间接受联合治疗的组中仅1只小鼠死亡，大多数死亡发生在贫血期间。这些结果暗示，卡铂诱导的贫血可能促成了接受高水平化学治疗的小鼠的死亡，而PEG化“1号TPO化合物”可能发挥作用通过防止贫血发展而增加小鼠的存活率。
实施例6
对于机理研究，用载体或递增量的卡铂(即60、70或80mg/kg)处理小鼠组连续2天(第-1天和第0天)。如表5中描述的，在第二次施用卡铂后大约一小时，通过静脉内(推注)注射，用PEG化“1号TPO化合物”(100μg/kg)或载体(无菌盐水(SS)，无防腐剂的0.9％的氯化钠)处理小鼠组。
表5
在第15天，将所有处理组中的小鼠用CO2窒息实施安乐死，并通过心脏穿刺放血。将血液样品转移至独立的EDTA(紫头)微容器中用于血液学评估。另外，将对照小鼠和用2 x 70mg/kg卡铂处理的小鼠(用或不用PEG化“1号TPO化合物”共处理)的几种器官(包括脑)分离并处理以用于组织学检查。针对纤维蛋白原/纤维蛋白，对这些组织的切片进行免疫组织化学处理。
在第15天，用递增量的卡铂单独处理小鼠引起接受2 x 70mg/kg剂量的小鼠中血小板数目显著降低，并在用60和70mg/kg卡铂(单独)处理的小鼠中引起血细胞比容(HCT)剂量依赖性的降低。通过用PEG化“1号TPO化合物”处理完全抑制了这种由卡铂诱导的血小板和RBC计数的降低。应该注意，在试验终止前，用2 x 80mg/kg卡铂(单独)处理的所有小鼠或者死亡，或者实施了安乐死(濒死)。有趣的是，用2 x 80mg/kg卡铂和PEG化“1号TPO化合物”处理的所有小鼠均存活直到预定的研究终止，并且在第15天没有表现出血小板减少症或贫血。
对照小鼠脑的组织学评价展示了表现正常的小血管。许多血管含有红细胞并表现了纤维蛋白原的暗淡的染色。关于纤维蛋白原/纤维蛋白的暗淡的血管内染色是预期在这些对照小鼠中出现的，因为纤维蛋白原是血浆的正常组分。来自单独用卡铂(2 x 70mg/kg)处理的小鼠的脑切片含有由对纤维蛋白原/纤维蛋白强烈阳性染色的材料完全闭塞的小血管。在来自该剂量组的所有小鼠的组织切片中频繁地观察到了这些小血栓。来自用卡铂和PEG化“1号TPO化合物”处理的小鼠的脑切片中的小血管表现正常或者显示出的纤维蛋白原/纤维蛋白染色仅比对照组稍暗。对于整个剂量组，注意到了单个微血栓事件。
该试验的结果表明，微血栓事件是由化学疗法引起的，并且由于微血栓据认为是有助于RBC的机械裂解，则有可能这些血管事件有助于化学疗法诱导的贫血。另外，PEG化“1号TPO化合物”防止这些血栓事件发展的能力可能是机理的组成部分，通过该机理，PEG化“1号TPO化合物”防止了由化学疗法诱导的贫血的发展。最后，微血栓事件也可能促进了接受高剂量化学疗法的动物的死亡。因而，PEG化“1号TPO化合物”防止这些血栓事件发展的能力可能是接受高剂量化学疗法和该试剂的动物存活率增加的原因。
图18A和图18B示出了用PEG化“1号TPO化合物”处理对经卡铂处理的小鼠的血小板和血细胞比容的影响[如实施例6中所说明的]。
图19显示，施用PEG化“1号TPO化合物”减少了经卡铂处理的小鼠的脑切片中纤维蛋白原的沉积和血凝块，如实施例6中所说明的。
提出的作用机理
图16示出了据信为PEG化“1号TPO化合物”的抗贫血效果的作用机理。正如从图16可以看出，化学疗法诱导了对小血管内皮的损伤并抑制了血细胞生成。缺少PEG化“1号TPO化合物”时，因为循环血小板由改变的内皮激活并沉积于小血管壁上，血小板减少症快速发展。改变的血小板(由受损的骨髓产生)有助于该过程。活化的血小板诱导纤维蛋白在受损伤的血管内沉积并发展微血管病性血栓。这些微血管病性血栓介导了红细胞的机械破坏，促进了化学疗法诱导的贫血的发展。用PEG化“1号TPO化合物”共处理抑制了化学疗法诱导的对血管内皮的损伤和/或促进了循环血小板的抗血栓和促纤维蛋白溶解的特性。微血管病性血栓没有发展并且红细胞的结构完整性得以维持。PEG化“1号TPO化合物”对骨髓中的巨核细胞前体的作用促进了正常血小板的产生。维持了止血并且防止贫血。
图17示出了据信为PEG化“1号TPO化合物”对造血细胞的一些谱系效果。
实施例7
结合测定
肽化合物的活性可以用标准相对发光单位测定技术来测定。该测定法采用例如经遗传工程改造而稳定表达受fos启动子驱动的人TPO受体和荧光酶报告基因构建体的啮齿动物细胞。该测定法如下进行：将去血清的Baf/3hTPOr fos/lux细胞暴露于递增浓度的rhTPO或肽化合物大约18小时，该细胞表达人TPO受体c-mpl(hTPOr)和荧光酶报告基因构建体。然后将细胞在含有荧光酶底物的培养基中孵育并用光度计测量细胞的发光。
如图20所示，PEG化“1号TPO化合物”以剂量依赖的方式激活重组表达人TPO-R的Baf/3细胞。如图21所示，在用PEG化“1号TPO化合物”刺激细胞时观察到了比用相同浓度的TPO刺激细胞时更强的TPO-R活化。PEG化“1号TPO化合物”的EC50大约为5pM。
尽管上面仅具体描述了优选的实施方案，但应该理解，本发明的修改形式和变化形式是可能的，只要不脱离本发明的精神和预期范围。

Claims (35)

1.一种用于预防在治疗后发展出贫血的方法，包括将有效量的TPO肽化合物施用至需要其的受试者。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述治疗选自由用细胞毒性剂治疗、用抗肿瘤剂治疗和用放射治疗组成的组。
3.一种增加红细胞产生的方法，包括施用有效量的TPO肽化合物至受试者。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者是人。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述TPO肽化合物相对于rhTPO和rhIL-11中的一种或多种具有减少的免疫原性。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述TPO肽化合物相对于rhTPO和rhIL-11中的一种或多种具有提高的PK谱。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述有效量为约1μg/kg体重/每天至约300μg/kg体重/每天。
8.一种用于增加红细胞产生的药物组合物，包含与可药用载体混合的TPO肽化合物。
9.一种治疗贫血的方法，包括将有效量的TPO肽化合物施用至需要其的受试者的步骤。
10.一种用于治疗贫血的药物组合物，包含与可药用载体混合的TPO肽化合物。
11.根据权利要求3所述的方法，其中所述红细胞选自由谱系特异性红细胞前体细胞、网织红细胞和红细胞组成的组。
12.一种预防在治疗后发展出贫血的方法，包括将有效量的TPO肽化合物施用至需要其的受试者，所述TPO肽化合物包含以下结构：
IEGPTLRQ(2-Nal)LAAR(Sar)(SEQ ID NO:5)。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述治疗选自由用细胞毒性剂治疗、用抗肿瘤剂治疗和用放射治疗组成的组。
14.根据权利要求12所述的方法，其中所述有效量为约1μg/kg体重/每天至约300μg/kg体重/每天。
15.一种增加红细胞产生的方法，包括施用有效量的TPO肽化合物至受试者，所述TPO肽化合物包含以下结构：
IEGPTLRQ(2-Nal)LAAR(Sar)(SEQ ID NO：5)。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述红细胞选自由谱系特异性红细胞前体细胞、网织红细胞和红细胞组成的组。
17.一种用于增加红细胞产生的药物组合物，包含与可药用载体混合的TPO肽化合物，所述TPO肽化合物包含以下结构：
IEGPTLRQ(2-Nal)LAAR(Sar)(SEQ ID NO：5)。
18.一种治疗贫血的方法，包括将有效量的TPO肽化合物施用至需要其的受试者的步骤，所述TPO肽化合物包含以下结构：
IEGPTLRQ(2-Nal)LAAR(Sar)(SEQ ID NO：5)。
19.一种用于治疗贫血的药物组合物，包含与可药用载体混合的TPO肽化合物，所述TPO肽化合物包含以下结构：
IEGPTLRQ(2-Nal)LAAR(Sar)(SEQ ID NO：5)。
20.一种预防在治疗后发展出贫血的方法，包括将有效量的TPO肽化合物施用至需要其的受试者，所述TPO肽化合物包含以下结构：
Figure A200680052857C00031
其中MPEG是分子量大约为20,000道尔顿的甲氧基聚(乙二醇)。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述治疗选自由用细胞毒性剂治疗、用抗肿瘤剂治疗和用放射治疗组成的组。
22.根据权利要求20所述的方法，其中所述有效量为约1μg/kg体重/每天至约300μg/kg体重/每天。
23.一种增加红细胞产生的方法，包括施用有效量的TPO肽化合物至受试者，所述TPO肽化合物包含以下结构：
Figure A200680052857C00041
其中MPEG是分子量大约为20,000道尔顿的甲氧基聚(乙二醇)。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述红细胞选自由谱系特异性红细胞前体细胞、网织红细胞和红细胞组成的组。
25.一种用于增加红细胞产生的药物组合物，包含与可药用载体混合的TPO肽化合物，所述TPO肽化合物包含以下结构：
Figure A200680052857C00042
其中MPEG是分子量大约为20,000道尔顿的甲氧基聚(乙二醇)。
26.一种治疗贫血的方法，包括将有效量的TPO肽化合物施用至需要其的受试者的步骤，所述TPO肽化合物包含以下结构：
Figure A200680052857C00051
其中MPEG是分子量大约为20,000道尔顿的甲氧基聚(乙二醇)。
27.一种用于治疗贫血的药物组合物，包含与可药用载体混合的TPO肽化合物，所述TPO肽化合物包含以下结构：
Figure A200680052857C00052
其中MPEG是分子量大约为20,000道尔顿的甲氧基聚(乙二醇)。
28.一种预防在治疗后发展出贫血的方法，包括将有效量的TPO肽化合物施用至需要其的受试者，所述TPO肽化合物包含以下结构：
Figure A200680052857C00061
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述治疗选自由用细胞毒性剂治疗、用抗肿瘤剂治疗和用放射治疗组成的组。
30.根据权利要求28所述的方法，其中所述有效量为约1μg/kg体重/每天至约300μg/kg体重/每天。
31.一种增加红细胞产生的方法，包括施用有效量的TPO肽化合物至受试者，所述TPO肽化合物包含以下结构：
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述红细胞选自由谱系特异性红细胞前体细胞、网织红细胞和红细胞组成的组。
33.一种用于增加红细胞产生的药物组合物，包含与可药用载体混合的TPO肽化合物，所述TPO肽化合物包含以下结构：
34.一种治疗贫血的方法，包括将有效量的TPO肽化合物施用至需要其的受试者的步骤，所述TPO肽化合物包含以下结构：
Figure A200680052857C00071
35.一种用于治疗贫血的药物组合物，包含与可药用载体混合的TPO肽化合物，所述TPO肽化合物包含以下结构：
Figure A200680052857C00072
CN2006800528571A 2006-02-14 2006-02-14 Tpo肽化合物和药物组合物在治疗贫血中的用途 Expired - Fee Related CN101374540B (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/US2006/005322 WO2007094781A1 (en) 2006-02-14 2006-02-14 Use of tpo peptide compounds and pharmaceutical compositions in the treatment of anemia

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101374540A true CN101374540A (zh) 2009-02-25
CN101374540B CN101374540B (zh) 2013-03-06

Family

ID=37904365

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2006800528571A Expired - Fee Related CN101374540B (zh) 2006-02-14 2006-02-14 Tpo肽化合物和药物组合物在治疗贫血中的用途

Country Status (19)

Country Link
EP (1) EP1984014B1 (zh)
JP (1) JP2009526841A (zh)
CN (1) CN101374540B (zh)
AU (1) AU2006338308B2 (zh)
BR (1) BRPI0621347B8 (zh)
CA (1) CA2642389C (zh)
CY (1) CY1115629T1 (zh)
DK (1) DK1984014T3 (zh)
EA (1) EA015562B1 (zh)
ES (1) ES2516649T3 (zh)
HK (2) HK1125055A1 (zh)
IL (1) IL193268A (zh)
NI (1) NI200800216A (zh)
NO (1) NO341872B1 (zh)
NZ (1) NZ570124A (zh)
PL (1) PL1984014T3 (zh)
PT (1) PT1984014E (zh)
SI (1) SI1984014T1 (zh)
WO (1) WO2007094781A1 (zh)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2010013281A (es) * 2008-06-03 2010-12-21 Janssen Pharmaceutica Nv Peptido mimetico de trombopoyetina para prevenir trastornos hematologicos asociados con el tratamiento del cancer.
JP6150374B2 (ja) * 2012-11-15 2017-06-21 国立大学法人弘前大学 放射線被ばく治療剤及び放射線被ばく治療方法
EP3658191A1 (en) 2017-07-26 2020-06-03 Janssen Pharmaceutica NV Methods of protecting vascular integrity induced by targeted radiation therapy
CA3127378A1 (en) 2019-01-25 2020-10-15 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of mitigating toxic effects of vesicants and caustic gas
MA54820A (fr) 2019-01-25 2021-12-01 Janssen Pharmaceutica Nv Méthodes d'atténuation d'une lésion hépatique et de promotion d'une hypertrophie hépatique, de régénération du foie et de prise de greffe de cellules hépatiques conjointement avec des traitements par radiothérapie et/ou radiomimétiques
MA54821A (fr) 2019-01-25 2021-12-01 Janssen Pharmaceutica Nv Méthodes pour augmenter la protection contre les lésions des organes et des vaisseaux, la récupération hématopoïétique et la survie en réponse à une exposition à une irradiation corporelle totale ou à des agents chimiques
WO2023056444A1 (en) 2021-10-01 2023-04-06 Janssen Pharmaceutica N.V. Methods of increasing progenitor cell production
WO2024095178A1 (en) 2022-11-01 2024-05-10 Janssen Pharmaceutica Nv Thrombopoietin mimetic for use in the treatment of acute liver failure

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995021626A1 (en) * 1994-02-14 1995-08-17 University Of Washington Methods for stimulating erythropoiesis using thrombopoietin
ES2462916T3 (es) * 2002-09-18 2014-05-26 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Métodos para aumentar la producción de células madre hematopoyéticas y plaquetas
SI1675606T1 (sl) * 2003-08-28 2017-07-31 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Peptidi in spojine, ki se vežejo na trombopoietinske receptorje

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI0621347B8 (pt) 2021-05-25
IL193268A (en) 2015-02-26
CA2642389A1 (en) 2007-08-23
EP1984014A1 (en) 2008-10-29
PL1984014T3 (pl) 2015-02-27
HK1129571A1 (en) 2009-12-04
AU2006338308B2 (en) 2012-11-01
WO2007094781A1 (en) 2007-08-23
BRPI0621347A2 (pt) 2011-12-06
PT1984014E (pt) 2014-11-13
EA015562B1 (ru) 2011-08-30
NO341872B1 (no) 2018-02-12
JP2009526841A (ja) 2009-07-23
IL193268A0 (en) 2009-02-11
EP1984014B1 (en) 2014-08-06
DK1984014T3 (da) 2014-09-15
EA200870261A1 (ru) 2009-02-27
CN101374540B (zh) 2013-03-06
SI1984014T1 (sl) 2014-12-31
ES2516649T3 (es) 2014-10-31
NI200800216A (es) 2012-01-24
NO20083928L (no) 2008-09-15
HK1125055A1 (zh) 2009-07-31
CA2642389C (en) 2014-05-06
NZ570124A (en) 2011-05-27
BRPI0621347B1 (pt) 2018-05-08
AU2006338308A1 (en) 2007-08-23
CY1115629T1 (el) 2017-01-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101374540B (zh) Tpo肽化合物和药物组合物在治疗贫血中的用途
US7615533B2 (en) TPO peptide compounds for treatment of anemia
TWI400081B (zh) 肽類及與受體結合之化合物
ZA200602495B (en) Peptides and compounds that bind to thrombopoietin receptors
HRP970683A2 (en) Peptides and compounds that bind to a receptor
CN102481332A (zh) 用于提高血小板水平的肽疗法
US20060210542A1 (en) Use of TPO mimetic compounds and pharmaceutical compositions in the treatment of anemia
TWI458488B (zh) Ｔｐｏ胜肽化合物及醫藥組成物於治療貧血之用途
KR20080094946A (ko) 빈혈 치료에서의 ｔｐｏ 펩티드 화합물 및 약학 조성물의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1129571

Country of ref document: HK

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1129571

Country of ref document: HK

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20130306

Termination date: 20220214

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee