KR20080094946A - 빈혈 치료에서의 ｔｐｏ 펩티드 화합물 및 약학 조성물의 용도 - Google Patents

Abstract

빈혈의 치료 방법이 개시된다. 본 방법은 TPO 펩티드 화합물을 대상에 투여하는 단계를 포함한다. TPO 펩티드 화합물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 함유하는 약학 조성물뿐만 아니라 표지된 TPO 펩티드 화합물을 이용한 진단 방법도 또한 개시된다.

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Description

빈혈 치료에서의 ＴＰＯ 펩티드 화합물 및 약학 조성물의 용도{USE OF TPO PEPTIDE COMPOUNDS AND PHARMACEUTICAL COMPOSTIONS IN THE TREATMENT OF ANEMIA}

본 발명은 트롬보포이에틴 수용체(c-mpl 또는 TPO-R)에 결합하여 그를 활성화시키거나, 다르게는 트롬보포이에틴("TPO") 작용제로서 작용하는 펩티드 화합물을 제공한다. 본 발명은 생화학 및 의약 화학 분야에서 응용되며, 특히 인간 질환의 치료에서 사용하기 위한 TPO 작용제를 제공한다. 본 발명의 펩티드 화합물은 빈혈의 치료 및/또는 빈혈 발병의 예방을 위하여 및/또는 적혈구 세포의 정상적인 생성을 유지하기 위하여 사용될 수 있다.

TPO를 코딩하는 유전자가 클로닝 및 특성화되었다. 문헌[Kuter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:11104-11108 (1994)]; 문헌[Barley et al. Cell 77:1117-1124 (1994)]; 문헌[Kaushansky et al. Nature 369:568-571 (1994)]; 문헌[Wendling et al. Nature 369:571-574 (1994)]; 및 문헌[Sauvage et al. Nature 369:533-538 (1994)]을 참조한다. TPO는 겉보기 분자량(apparent molecular mass)이 25 kDa 및 31 kDa이고, 공통 N-말단 아미노산 서열을 갖는 적어도 두 가지 형태의 당단백질이다. 문헌[Bartley et al. Cell 77:1117-1124 (1994)]을 참조한다. TPO는 잠재적인 Arg-Arg 절단 부위에 의해 분리되는 2개의 특유한 영역을 갖는 것 으로 보인다. 아미노-말단 영역은 인간 및 생쥐에서 고도로 보존되어 있으며, 에리트로포이에틴과 인터페론-a 및 인터페론-b와 약간의 상동성을 갖는다. 카르복시-말단 영역은 광범한 종 분화(species divergence)를 나타낸다.

인간 TPO-R(c-mpl로도 공지됨)에 있어서의 DNA 서열 및 코딩된 펩티드 서열이 개시되었다. 문헌[Vigon et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:5640-5644 (1992)]을 참조한다. TPO-R은, 막통과 영역 가까이의 WSXWS 모티프 (서열 번호 1) 및 N-말단부 내의 4개의 보존된 C 잔기를 포함하는 세포외 도메인의 공통적인 구조 디자인을 그 특징으로 하는 패밀리인 헤마토포이에틴 성장 인자 수용체 패밀리의 구성원이다. 문헌[Bazan Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:6934-6938 (1990)]을 참조한다. 이 수용체가 조혈에서 기능적인 역할을 한다는 증거는, 상기 수용체의 발현이 생쥐에서 비장, 골수 또는 태아 간 (문헌[Souyri et al. Cell 63:1137-1147 (1990)] 참조)과, 인간에서 거핵구, 혈소판, 및 CD34⁺ 세포 (문헌[Methia et al. Blood 82:1395-1401 (1993)] 참조)에 제한된다는 관찰 결과를 포함한다. 몇몇 연구자는 G-CSF 및 에리트로포이에틴의 수용체에서의 상황과 유사하게 당해 수용체가 동종이량체(homodimer)로서 기능한다고 가정하고 있다.

TPO-R의 클로닝된 유전자의 이용가능성은 이 중요한 수용체의 작용제에 대한 조사를 돕는다. 당해 재조합 수용체 단백질의 이용가능성은 다양한 랜덤 및 반-랜덤 펩티드 다양성 생성 시스템(diversity generation system)에서 수용체-리간드 상호작용의 연구를 허용한다. 이들 시스템은 미국 특허 제6,251,864호, 미국 특허 제 6,083,913호, 미국 특허 제 6,121,238호, 미국 특허 제 5,932,546호, 미국 특허 제 5,869,451호, 미국 특허 제 6,506,362호 및 미국 특허 제6,465,430호와, 문헌[Cwirla et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:6378-6382 (1990)]에 개시되어 있으며, 전술한 것 각각은 본 명세서에 참고로 포함된다.

혈액에서 순환하는 형태학적으로 인식가능한 그리고 기능적으로 유능한 세포는 적혈구, 호중성, 호산성 및 호염기성 과립구, B-, T-, 비 B-, 비 T-림프구 및 혈소판을 포함한다. 이들 성숙 조혈 세포는 요구에 따라 적혈구 계열의 경우 적혈구모세포, 과립구 계열의 경우 골수모세포, 전골수세포 및 골수세포, 그리고 혈소판의 경우 거핵구와 같이 각각의 계통(lineage)에 있어서 형태학적으로 인식가능한 분열 전구 세포로부터 유래되고 그에 의해 대체된다. 당해 전구 세포는 보다 원시적인 세포로부터 유래되며, 상기 보다 원시적인 세포는 두 주요 아군, 줄기 세포 및 선조 세포(progenitor cell)로 단순히 나뉘어질 수 있다 (개관에 대해서는, 문헌[Broxmeyer, H. E., 1983, "Colony Assays of Hematopoietic Progenitor Cells and Correlations to Clinical Situations," CRC Critical Review in Oncology/Hematology 1:227-257] 참조).

줄기 및 선조 세포의 정의가 사용되고 있으며, 이는 형태학적인 기준이라기보다는 오히려 기능적 기준에 의존적이다. 줄기 세포는 광범한 자가 재생 또는 자가 유지 능력을 갖는데 (문헌[Lajtha, Differentiation, 14:23 (1979)]), 자가 재생 또는 자가 유지 능력은 이들 세포의 부재 또는 고갈이 하나 이상의 세포 계통의 완전한 고갈(단시간 내에 질환 및 사망에 이르게 하는 사건)을 초래할 수 있기 때 문에 필요한 것이다. 줄기 세포 중 일부는 필요시 분화되지만, 몇몇 줄기 세포는 다른 줄기 세포를 생성하여 이들 세포의 풀(pool)을 유지한다. 따라서, 다능성 줄기 세포는, 그들 나름대로의 종의 유지 외에, 보다 제한적인 자가 재생 능력을 갖거나 자가 재생 능력을 전혀 갖지 않는 선조 세포의 여러 서브라인(sub-line)으로의 분화가 가능하다. 이들 선조 세포는 궁극적으로 형태학적으로 인식가능한 전구 세포가 생기게 한다. 선조 세포는 하나 또는 하나 초과의 골수계(myeloid) 분화 경로를 따라 증식 및 분화가능하다 (문헌[Lajtha, Blood Cells, 5:447 (1979)]).

다양한 감염체(infectious agent), 유전자 이상 및 환경 인자는 하나 이상의 조혈 세포 유형의 결핍을 야기할 수 있다. 게다가, 암 및 특정의 면역학적 질병의 치료에 사용되는 화학요법 및 방사선 치료법은 범혈구 감소증, 또는 빈혈, 호중구 감소증 및 혈소판 감소증의 조합을 야기할 수 있다. 따라서, 조혈 세포의 증가 또는 대체는 흔히 그러한 치료의 성공에 결정적이다 (혈액학적 질병 및 그 원인에 대한 일반적인 논의에 대해서는, 예를 들어 문헌["Hematology" in Scientific American Medicine, E. Rubenstein and D. Federman, eds., Volume 2, Chapter 5, Scientific American, New York (1996)] 참조).

화학요법 또는 방사선요법에 의해 야기되는 내인성 조혈 세포의 파괴뿐만 아니라 다수의 혈액학적 질병에도 이용가능한 현재의 치료법으로는 골수 이식이 있다. 그러나, 골수 이식의 이용은 엄하게 제한되며, 그 이유는, 일란성 쌍둥이가 이용가능한 경우 또는 관해에서 환자의 골수 세포가 생육가능한 동결 상태로 보관되는 경우를 제외하고는, 완전하게 매치되는 (유전적으로 동일한) 공여체를 갖는 것이 극히 드물기 때문이다. 그러한 자가 이식의 경우를 제외하고는, 어느 정도의 필연적인 유전자 미스매치가 있으며, 이는 중증의 그리고 때로는 치명적인 합병증을 수반한다. 이들 합병증은 두 가지가 있다. 첫째, 외래 골수 세포의 면역 거부 (숙주 대 이식편 반응)를 피하기 위하여, 환자는 이전에 약물에 의해 일반적으로 면역학적으로 불능화된다. 둘째, 만약 공여된 골수 세포가 확립되게 될 때에는, 상기 골수 세포는 이물질(foreign)로서 인식되는 환자를 공격할 수 있다 (이식편 대 숙주 질환). 심지어, 밀접하게 매치되는 가족 공여체에서도, 부분적 미스매칭의 이들 합병증은 직접적으로 유전적으로 상이한 개체 유래의 골수 이식으로 인하여 상당한 사망률 및 이환율의 원인이 된다.

또한, 말초 혈액이 조혈 재구성(hematopoietic reconstitution)을 위한 줄기 세포의 공급원으로서 조사되었다 (문헌[Nothdurtt, W., et al., 1977, Scand. J. Haematol. 19:470-481]; 문헌[Sarpel, S. C., et al., 1979, Exp. Hematol. 7:113-120]; 문헌[Ragharachar, A., et al., 1983, J. Cell. Biochem. Suppl. 7A:78]; 문헌[Juttner, C. A., et al., 1985, Brit. J. Haematol. 61:739-745]; 문헌[Abrams, R. A., et al., 1983, J. Cell. Biochem. Suppl. 7A:53]; 문헌[Prummer, O., et al., 1985, Exp. Hematol. 13:891-898]). 몇몇 연구에서, 유망한 결과가 다양한 백혈병 (문헌[Reiffers, J., et al., 1986, Exp. Hematol. 14:312-315]; 문헌[Goldman, J. M., et al., 1980, Br. J. Haematol. 45:223-231]; 문헌[Tilly, H., et al., Jul. 19, 1986, The Lancet, pp. 154-155]; 또한, 문헌[To, L. B. and Juttner, C. A., 1987, Brit. J. Haematol. 66: 285-288], 및 상기 문헌에 인용된 참고 문헌 참조); 및 림프종(문헌[Korbling, M., et al., 1986, Blood 67:529-532])에 걸린 환자에 대하여 얻어졌다. 그러나, 말초 혈액을 이용한 다른 연구에서는 재구성을 하지 못하였다 (문헌[Hershko, C., et al., 1979, The Lancet 1:945-947]; 문헌[Ochs, H. D., et al., 1981, Pediatr. Res. 15:601]). 또한, 연구에서는 태아 간 세포 이식체 (문헌[Cain, G. R., et al., 1986, Transplantation 41:32-25]; 문헌[Ochs, H. D., et al., 1981, Pediatr. Res. 15:601]; 문헌[Paige, C. J., et al., 1981, J. Exp. Med. 153:154-165]; 문헌[Touraine, J. L., 1980, Excerpta Med. 514:277]; 문헌[Touraine, J. L., 1983, Birth Defects 19:139]; 또한, 문헌[Good, R. A., et al., 1983, Cellular Immunol. 82:44-45] 및 상기 문헌에 인용된 참고 문헌을 참조) 또는 신생아 비장 세포 이식체 (문헌[Yunis, E. J., et al., 1974, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 72:4100])를 조혈 재구성용 줄기 세포 공급원으로서 사용하는 것을 조사하였다. 신생아 흉선 세포도 면역 재구성 실험에서 이식되었다 (문헌[Vickery, A. C., et al., 1983, J. Parasitol. 69(3):478-485]; 문헌[Hirokawa, K., et al., 1982, Clin. Immunol. Immunopathol. 22:297-304]).

분명히, 생체 내에서 조혈 세포의 생성을 증가시키는, 시험관 내에서 또는 치료법에서 혈액 세포를 확장하는 방법이 대단히 필요하다.

혈중 헤모글로빈 농도의 감소로서 정의되는 빈혈은 일반적으로 순환 적혈구 총량의 감소와 관련된다. 원인과 관계 없이, 빈혈은 혈액의 산소 운반능을 감소시키며, 충분히 중증일 때는 임상적인 증상 및 징후를 야기한다.

임상적으로, 빈혈은 피부 및 점막의 창백함과, 저산소증 증후, 가장 일반적으로는 쇠약, 피로, 졸음증, 또는 어지럼증을 특징으로 한다. 심근 저산소증은, 심박수 및 일회 박출량(stroke volume)을 증가시키면서 과혈류순환(hyperdynamic circulation)을 생성할 수도 있다. 박출성 혈류 잡음(ejection type flow murmur)이 나타날 수도 있으며, 빈혈이 충분이 중증일 경우, 심부전이 생길 수도 있다.

빈혈은 일반적으로 두 가지 방식 중 하나, 즉, 병인적 분류 (원인에 기초함) 또는 형태적 분류 (형상 및 크기 변화에 기초함) 중 어느 하나에 의해 분류된다. 병인적 분류가 더 일반적으로 이용된다.

동종면역 용혈 빈혈은 한 개체의 항체가 다른 개체의 적혈구 세포(RBC)와 반응할 때 일어난다. 동종면역 용혈 빈혈은 전형적으로 신생아의 레수스 질환(rhesus disease) 및 ABO 부적합 혈액의 수혈(transfusion of ABO incompatible blood) 이후 일어난다. 또한, 이것은 동종 이식 후 일어날 수 있다 (문헌[Hoffbrand, A. V., Essential Hematology, 3rd. ed., Blackwell Scientific Publications, 1993, p. 90]).

특정 약물의 투여는 일시적인 약물 유발성 빈혈을 야기할 수 있다. 이는 하기 세 가지 메카니즘에 의해 일어날 수 있다: 1) 약물-적혈구 세포 막 복합체에 대해 유도된 항체 (예를 들어, 페니실린 또는 세팔로틴); 2) 적혈구 세포 표면 상에의 약물-단백질(항원)-항체 복합체를 통한 보체의 침전 (예를 들어, 퀴니딘 또는 클로로프로프아미드); 또는 3) 약물의 역할이 공지되어 있지 않은 자가면역 용혈 빈혈 (예를 들어, 메틸 도파). 각각의 경우, 빈혈은 약물을 중단한 후에만 사라진 다 (그러나, 메틸 도파에서는, 항체가 수개월 동안 존속될 수도 있음) (문헌[Hoffbrand, A. V., Essential Hematology, 3rd. ed., Blackwell Scientific Publications, 1993, p. 90-1]).

재생 불량성 빈혈은 골수 형성 부전에서 생기는 범혈구 감소증 (빈혈, 백혈구 감소증, 및 혈소판 감소증)으로서 정의된다. 이것은 하기의 일차적 유형으로 분류된다: 선천적인 형태 (판코니(Fanconi) 빈혈) 및 명백한 촉진 원인이 없는 후천적 형태 (특발성). 이차적 원인은 다양한 공업적 원인, 의원성 원인 및 감염 원인에서 생길 수도 있다. 근본적인 원인은 조혈 다능성 줄기 세포 개수의 상당한 감소와, 남아있는 줄기 세포의 결함 또는 그에 대한 면역 반응 - 이는 줄기 세포가 충분히 분열 및 분화하여 골수가 거주하도록 하는 것을 못하게 함 - 인 것으로 보인다. (문헌[Hoffbrand, A. V., Essential Hematology, 3rd. ed., Blackwell Scientific Publications, 1993, p. 121]). 시험관 내에서 조혈 줄기 세포의 분화를 차단하거나 에리트로포이에틴을 저해하는 면역글로불린뿐만 아니라 억제 T-세포도 몇몇 경우 증명되었다 (문헌[Andreoli, T. in Essentials of Medicine, W. B. Saunders, 1986, p. 349]).

문헌[Neelis et al., Blood, 90(1):58-63 (1997)]에는 인간 재조합 TPO가, 5 Gy의 총 신체 조사량 (300-kV x-선)에 노출된 붉은털 원숭이(rhesus monkey)에서 적혈구 세포 계통 복구를 촉진하며, 망상 적혈구 재생은 위약-처리된 동물에서보다 10일 더 일찍 시작됨이 개시되어 있다. 닐리스(Neelis) 등은 대조군에서보다 개선된 헤모글로빈 및 헤마토크릿(hematocrit) 값을 또한 개시하였다.

문헌[Basser et al., Blood, 89(9):3118-3128 (1997)]에는, PEG-rHuMGDF에 더하여 필가스트림을 투여하면 600 ㎎/㎡의 카보플라틴 및 1,200 ㎎/㎡의 사이클로포스파미드에 노출된 환자의 말초 혈액 선조 세포가 상승되었음이 개시되어 있다.

문헌[Papayannopoulou et al., Exp. Hematol., 24(5):660-669 (1996)]에는, 적혈구 생성 및 혈소판 생성을 위한 시험관 내 분화에 대한 EPO 및 TPO의 영향이 개시되어 있다.

문헌[Kaushansky et al., J. Clin. Invest., 96(3):1683-1687 (1995)]에는 TPO가 EPO와 상승 작용식으로 작용하여 적혈구계 선조를 확장시킴이 개시되어 있다. 문헌[Kaushansky et al., Exp. Hematol., 24(2):265-269 (1996)]에는, TPO가 골수억제된 동물에서 BFU-E, CFU-GM 및 CFU-Mk 선조 세포를 확장시킴이 개시되어 있다.

빈혈은 심각한 문제로서, 빈혈의 발병을 예방하고, 빈혈을 치료하고, RBC 전구체의 생존을 촉진하고/하거나 적혈구 세포의 정상적인 생성을 유지할 수 있는 혈액 성장 인자 작용제에 대한 조사가 긴히 요구된다. 본 발명은 그러한 작용제를 제공한다.

발명의 개요

본 발명은 빈혈 치료에서의 정의된 저분자량 펩티드 화합물의 용도에 관한 것이다. 정의된 저분자량 펩티드 화합물은 TPO-R에 대한 강한 결합 특성을 가지며, TPO-R을 활성화하고, 공지된 TPO 작용제에 비하여 감소된 부작용을 잠재적으로 가능케 하며, 생체 내에서 그리고 시험관 내에서 적혈구 세포의 생성을 촉진하는 능력을 가질 수 있다. 저분자량 펩티드 화합물은 다양한 형태, 예를 들어 단량체, 이량체 및 올리고머일 수 있고/있거나 친수성 중합체를 이용하여 유도체화될 수 있다. 따라서, 그러한 펩티드 화합물은 빈혈의 치료 및/또는 예방에서 치료 목적으로 유용할 뿐만 아니라 빈혈 연구에서 진단 목적으로도 유용하다.

치료 및/또는 진단 목적에 적합한 펩티드 화합물은, 예를 들어 Baf/3 결합 분석법 (하기에 논의됨)으로 측정될 때, IC₅₀이 약 2 mM 이하, 그리고 더 바람직하게는 2 nM 이하이며, 여기서, 보다 낮은 IC₅₀은 TPO-R에 대한 보다 강한 결합 친화도와 상관 관계가 있다. 약학적 목적에 있어서, 펩티드 화합물은 바람직하게는 IC₅₀이 약 100 μM 이하, 더 바람직하게는 약 500 nM 이하, 더 바람직하게는 약 100 pm 이하, 그리고 더 바람직하게는 약 5 pm 이하이다.

치료 및/또는 진단 목적에 적합한 펩티드 화합물은, 예를 들어 Baf/3 결합 분석법 (하기에 논의됨)과 같은 잘 알려진 분석법으로 잘 알려진 기술을 이용하여 측정될 때, EC₅₀이 약 2 mM 이하, 그리고 더 바람직하게는 2 nM 이하이며, 여기서, 보다 낮은 EC₅₀은 TPO-R에 대한 보다 강한 결합 친화도와 상관 관계가 있다. 약학적 목적에 있어서, 펩티드 화합물은 바람직하게는 EC₅₀이 약 100 μM 이하, 더 바람직하게는 약 500 nM 이하, 더 바람직하게는 약 100 pm 이하, 그리고 더 바람직하게는 약 5 pm 이하이다.

펩티드 화합물의 분자량은 대략적으로 약 500 달톤 내지 약 8,000 달톤, 더 바람직하게는 약 900 달톤 내지 약 2000 달톤 범위이다. 본 명세서에 개시된 바와 같이 펩티드 화합물이 올리고머화되고, 이량체화되고/되거나 친수성 중합체로 유도체화될 경우, 그러한 펩티드의 분자량은 보다 커질 것이며, 대략적으로 약 1500 달톤 내지 약 120,000 달톤, 더 바람직하게는 약 3,000 달톤 내지 약 80,000 달톤, 그리고 더 바람직하게는 약 30,000 달톤 내지 약 50,000 달톤 범위일 수 있다.

적합한 친수성 중합체는 폴리알킬에테르, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 폴리옥시알켄, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스 및 셀룰로오스 유도체, 덱스트란 및 덱스트란 유도체 등을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니며, 이는 전체 내용이 본 명세서에 참고로 포함된 미국 특허 제5,672,662호 및 미국 특허 제5,869,451호에 기재된 바와 같다.

펩티드 화합물이 친수성 중합체로 유도체화될 때, 그의 용해도 및 순환 반감기는 증가하며, 그의 면역원성은 차폐된다. 전술한 내용은, 그의 결합 활성의 감소가 있다고 하더라도 거의 없이 성취될 수 있다. 일반적으로, 그러한 친수성 중합체는 평균 분자량이 약 500 달톤 내지 약 100,000 달톤, 더 바람직하게는 약 2,000 달톤 내지 약 40,000 달톤, 그리고 더욱 더 바람직하게는 약 5,000 달톤 내지 약 20,000 달톤 범위이다. 바람직한 실시 형태에서, 그러한 친수성 중합체는 평균 분자량이 약 5,000 달톤, 10,000 달톤 및 20,000 달톤이다.

본 발명의 펩티드 화합물은 문헌[Zallipsky, S., Bioconjugate Chem., 6:150-165 (1995)]; 문헌[Monfardini, C, et al., Bioconjugate Chem., 6:62-69 (1995)]; 미국 특허 제4,640,835호; 미국 특허 제4,496,689호; 미국 특허 제4,301,144호; 미국 특허 제4,670,417호; 미국 특허 제4,791,192호; 미국 특허 제4,179,337호 또는 국제특허 공개 WO 95/34326호에 개시된 임의의 방법을 이용하여 그러한 중합체로 유도체화되거나 그러한 중합체에 커플링될 수 있으며, 이들 전부는 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.

현재 바람직한 실시 형태에서, 본 발명의 펩티드 화합물은 폴리에틸렌 글리콜(PEG)로 유도체화된다. PEG는, 2개의 말단 하이드록실기를 포함하는 에틸렌 옥사이드 반복 단위의 선형 수용성 중합체이다. PEG는 그의 분자량에 의해 분류되며, 분자량은 전형적으로 약 500 달톤 내지 약 40,000 달톤 범위이다. 현재 바람직한 실시 형태에서, 이용되는 PEG는 분자량이 5,000 달톤 내지 약 20,000 달톤이다. 본 발명의 펩티드 화합물에 커플링되는 PEG는 분지형 또는 비분지형일 수 있다. (예를 들어, 문헌[Monfardini, C., et al., Bioconjugate Chem., 6:62-69 (1995)] 참조). PEG는 넥타르 테라퓨틱스(Nektar Therapeutics) (미국 캘리포니아주 샌 카를로 소재), 시그마 케미칼 컴퍼니(Sigma Chemical Co.) 및 기타 회사로부터 구매가능하다. 그러한 PEG는 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜(MePEG-OH), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-석시네이트(MePEG-S), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-석신이미딜 석시네이트(MePEG-S-NHS), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-아민 (MePEG-NH₂), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-트레실레이트(MePEG-TRES), 및 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-이미다졸릴-카르보닐(MePEG-IM)을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

간략하게는, 일 실시 형태에서, 이용되는 친수성 중합체, 예를 들어, PEG는 미반응성 기, 예를 들어 메톡시 또는 에톡시 기에 의해 한 말단에서 캡핑되는 것이 바람직하다. 그 후, 상기 중합체는 적합한 활성화제, 예를 들어 시아누릭 할라이드 (예를 들어, 시아누릭 클로라이드, 브로마이드 또는 플루오라이드), 다이이마도즐, 무수 시약 (예를 들어, 다이할로석신산 무수물, 예를 들어 다이브로모석신산 무수물), 아실 아자이드, p-다이아조이움벤질 에테르, 3-(p-다이아조늄페녹시)-2-하이드록시프로필에테르) 등과의 반응에 의해 다른 한 말단에서 활성화된다. 이어서, 활성화된 중합체는 본 발명의 펩티드 화합물과 반응하여 중합체로 유도체화된 펩티드 화합물을 생성한다. 대안적으로, 본 발명의 펩티드 화합물 중 작용기는 중합체와의 반응을 위하여 활성화될 수 있거나, 2개의 기는 공지된 커플링 방법을 이용하여 협동 커플링 반응에서 결합될 수 있다. 본 발명의 펩티드 화합물은 당업자에게 공지되어 있으며 당업자가 사용하는 무수한 다른 반응 방법을 이용하여 PEG로 유도체화될 수 있음이 쉽게 이해된다.

진단 목적으로 사용될 때, 펩티드 화합물은 바람직하게는 검출가능한 표지로 표지되며, 따라서 그러한 표지를 포함하지 않는 펩티드 화합물은 표지된 펩티드 화합물의 제조에서 중간체로서 작용한다.

바람직한 펩티드 화합물은

(1) 단량체이든지, 이량체이든지, 올리고머이든지 간에 분자량이 약 5000 달톤 미만이고,

(2) IC₅₀으로 표시될 때 TPO-R에 대한 결합 친화도가 약 100 mM 이하인 것인데,

여기서, 0개 이상의 펩티딜 [--C(O)NR--] 결합체 (결합)는 비-펩티딜 결합체, 예를 들어 --CH₂ -카르바메이트 결합체 [--CH₂ --OC(O)NR--]; 포스포네이트 결합체; --CH₂ -설폰아미드 [--CH₂ --S(O)₂ NR-] 결합체; 우레아 [--NHC(O)NH--] 결합체; --CH₂ -2차 아민 결합체; 또는 알킬화 펩티딜 결합체 [--C(O)NR⁶ -- (여기서, R⁶은 저급 알킬임)];

N-말단이 --NRR¹ 기; --NRC(O)R 기; --NRC(O)OR 기; --NRS(O)₂ R 기; --NHC(O)NHR 기 (여기서, R 및 R¹은 수소 또는 저급 알킬이되, 단, R 및 R¹ 둘 모두가 수소인 것은 아님); 석신이미드기; 벤질옥시카르보닐--NH-- (CBZ--NH--) 기; 또는 벤질옥시카르보닐--NH-- 기 (페닐 고리 상에 저급 알킬, 저급 알콕시, 클로로 및 브로모로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 내지 3개의 치환체를 가짐)로 유도체화된 펩티드; 또는

C 말단이 --C(O)R² (여기서, R²는 저급 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택됨), 및 --NR³ R⁴ (여기서, R³ 및 R⁴는 독립적으로 수소 및 저급 알킬로 이루어진 군으로부터 선택됨)로 유도체화된 펩티드로 대체되었다.

코어 펩티드 화합물은 하기의 아미노산 서열 (서열 번호 2)을 포함할 수 있음이 밝혀졌다:

X₁ X₂ X₃ X₄ X₅ X₆ X₇

여기서, X₁은 C, L, M, P, Q, V이며; X₂는 F, K, L, N, Q, R, S, T 또는 V이고; X₃은 C, F, I, L, M, R, S, V 또는 W이며; X₄는 임의의 20개의 유전적으로 코딩된 L-아미노산이고; X₅는 A, D, E, G, K, M, Q, R, S, T, V 또는 Y이며; X₆은 β-(2-나프틸)알라닌 (2-Nal)이고; X₇은 C, G, I, K, L, M, N, R 또는 V이다.

바람직한 실시 형태에서, 코어 펩티드 화합물은 하기의 아미노산 서열 (서열 번호 3)을 포함한다:

X₈ G X₁ X₂ X₃ X₄ X₅ (2-Nal) X₇

여기서, X₁ 내지 X₇은 상기에 정의된 바와 같으며; 각각의 X₈ 잔기는 독립적으로 임의의 20개의 유전적으로 코딩된 L-아미노산, 그의 입체이성체 D-아미노산; 및 비-천연 아미노산으로부터 선택된다.

다른 바람직한 실시 형태에서, 코어 펩티드 화합물은 하기의 아미노산 서열 (서열 번호 4)을 포함한다:

X₉ X₈ G X₁ X₂ X₃ X₄ X₅ (2-Nal) X₇

여기서, X₉는 A, C, E, G, I, L , M, P, R, Q, S, T, 또는 V이며; X₈은 A, C, D, E, K, L, Q, R, S, T, 또는 V이다. 더 바람직하게는, X₉는 A 또는 I이며; X₈은 D, E, 또는 K이다.

특히 바람직한 펩티드 화합물은 하기의 서열 번호 5의 것이다:

I E G P T L R Q (2-Nal) L A A R (Sar)

여기서, (Sar)은 사르코신이다.

다른 실시 형태에서, 펩티드 화합물은 펩티드 화합물의 친화성 및/또는 활성의 증가를 위하여 이량체화 또는 올리고머화된다. 특히 바람직한 펩티드 화합물은 라이신아미드 잔기에 의해 결합된 2개의 동일한 14머(14-mer)를 갖는 29머(29-mer) 펩티드이다. 그러므로, 특히 바람직한 펩티드 화합물은 하기의 서열 번호 6의 것이며, 이는 본 명세서에서 TPO 화합물 1번으로도 지칭된다:

더 바람직한 펩티드 화합물은 TPO 화합물 1번의 페길화(pegylated) 버전이다. 페길화 형태는 각각의 N-말단 아이소류신에 공유 결합된 20,000개의 MPEG 잔기를 포함할 수도 있다. 그러한 화합물의 일례의 완전한 분자 구조가 하기에 상술되어 있다:

(이 화합물은 본 명세서에서 페길화 TPO 화합물 1번으로 지칭됨). 페길화 TOP 화합물 1번의 완전한 화학명은

메톡시폴리에틸렌글리콜20000-프로피오닐-L-아이소류실-L-글루타밀-글리실-L-프롤릴-L-트레오닐-L-류실-L-아르기닐-L-글루타미닐-L-2-나프틸알라닐-L-류실-L-알라닐-L-알라닐-L-아르기닐-사르코실-Ne-(메톡시폴리에틸렌글리콜20000-프로피오닐-L-아이소류실-L-글루타밀-글리실-L-프롤릴-L-트레오닐-L-류실-L-아르기닐-L-글루타미닐-L-2-나프틸알라닐-L-류실-L-알라닐-L-알라닐-L-아르기닐-사르코실-)-라이신아미드이다.

페길화 TPO 화합물 1번은 라이신아미드 잔기에 의해 결합되고 각각의 N-말단에서 대략 20,000 달톤의 분자량의 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 사슬에 결합되는 2개의 동일한 14개 아미노산 펩티드 사슬로 구성된다. PEG를 포함하지 않는 부모 펩티드의 분자량은 3,295 달톤이며, 2개의 PEG 사슬을 포함하는 부모 펩티드의 분자량은 대략 43,295 달톤이다. 페길화 TPO 화합물 1번은 (MPEG-Ile-Glu-Gly-Pro-Thr-Leu-Arg-Gln-(2-Nal)-Leu-Ala-Ala-Arg-(Sar))₂-Lys-NH₂의 축약형 분자 구조를 가지며, 여기서, (2-Nal)은 β-(2-나프틸)알라닌이고, (Sar)은 사르코신이며, MPEG는 메톡 시폴리(에틸렌 글리콜)이다 (MW는 대략 20,000 달톤).

하나 이상의 펩티드 화합물, 그리고 특히 페길화 펩티드 화합물 - 약학적으로 허용가능한 그의 등가체를 포함함 - (본 명세서에서 "펩티드 화합물", "TPO 펩티드 화합물" 또는 "본 발명의 TPO 펩티드 화합물"로 총칭됨)은 TPO에 의해 매개되는 질환의 예방 및 치료, 그리고 특히 빈혈의 치료 및/또는 예방에 유용하다. 그와 같이, 본 발명은 빈혈의 치료 및/또는 예방 방법을 제공하며, 여기서, 빈혈이 있는 환자, 또는 빈혈이 발병될 것으로 기대되는 환자는 치료적 또는 예방적 유효 용량 또는 유효량의 본 발명의 펩티드 화합물을 받거나, 이것이 투여된다.

또한, 본 발명은 본 발명에서 개시되는 하나 이상의 펩티드 화합물 및 생리학적으로 허용가능한 담체를 함유하는 약학 조성물을 제공한다. 이들 약학 조성물은 경구 투여 형태뿐만 아니라 흡입가능한 분말 및 용액과 주사가능하고 주입가능한 용액을 비롯한 다양한 형태일 수 있다.

도 1은 실시예 1에 개시된 바와 같이 헤모글로빈 수준에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한 그래프.

도 2는 실시예 1에 개시된 바와 같이 적혈구 세포 계수치에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한 그래프.

도 3은 실시예 1에 개시된 바와 같이 헤마토크릿치(hematocrit)에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한 그래프.

도 4는 실시예 1에 개시된 바와 같이 체중에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한 그래프.

도 5는 실시예 2에 개시된 바와 같이 헤모글로빈 수준에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한 그래프.

도 6은 실시예 2에 개시된 바와 같이 적혈구 세포 계수치에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한 그래프.

도 7은 실시예 2에 개시된 바와 같이 헤마토크릿치에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한 그래프.

도 8은 실시예 2에 개시된 바와 같이 체중에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한 그래프.

도 9는 실시예 3에 개시된 바와 같이 헤모글로빈 수준에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한 그래프.

도 10은 실시예 3에 개시된 바와 같이 적혈구 세포 계수치에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한 그래프.

도 11은 실시예 3에 개시된 바와 같이 헤마토크릿치에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한 그래프.

도 12는 실시예 3에 개시된 바와 같이 체중에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한 그래프.

도 13은 실시예 4에 개시된 바와 같이 헤마토크릿치에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한 그래프.

도 14는 실시예 4에 개시된 바와 같이 체중에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한 그래프.

도 15는 실시예 5에 개시된 바와 같이 체중에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한 그래프.

도 16은 페길화 TPO 화합물 1번의 항빈혈 작용 메카니즘일 것으로 여겨지는 것을 도시한 도면.

도 17은 페길화 TPO 화합물 1번의 조혈 세포에 대한 계통의 영향 중 일부일 것으로 여겨지는 것을 도시한 도면.

도 18A 및 도 18B는 실시예 6에 개시된 바와 같이 페길화 TPO 화합물 1번을 이용한 처리의 결과로서 카보플라틴 처리된 생쥐의 혈소판 및 헤마토크릿치에 대한 영향을 도시한 그래프.

도 19는 실시예 6에 개시된 바와 같이 페길화 TPO 화합물 1번을 이용한 처리의 결과로서 카보플라틴 처리된 생쥐 유래의 뇌 절편에서의 피브리노겐 침전 및 응혈에 대한 영향을 나타낸 도면.

도 20은 실시예 7에 개시된 바와 같이 Baf/3 세포에서 인간 TPO-R 활성화에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 영향을 도시한 그래프.

도 21은 실시예 7에 개시된 바와 같이 페길화 TPO 화합물 1번이 인간 TPO-R을 재조합적으로 발현하는 Baf/3 세포를 용량 의존적 방식으로 활성화시킴을 도시한 그래프.

하기 정의는 본 명세서에서 본 발명을 설명하기 위하여 사용되는 다양한 용어의 의미 및 범주를 예시 및 정의하기 위하여 개시된다.

"작용제"는 그의 상보성 생물 활성 수용체에 결합하여 상기 수용체를 활성화시켜 상기 수용체에서 생물 반응을 야기하거나 상기 수용체의 기존의 생물 활성을 향상시키는 생물 활성 리간드를 말한다.

"EC₅₀" 및 "50% 유효 농도"는 작용제의 가능한 최대 유효 반응의 50%를 생성하는 상기 작용제의 농도를 말한다.

"IC₅₀" 및 "50% 저해 농도"는 작용제의 특이적 결합의 50%를 치환하는 경쟁 리간드의 농도를 말한다.

"약학적으로 허용가능한 등가체"는, 한정됨이 없이, 약학적으로 허용가능한 염, 산 부가염, 에스테르, 아미드, 수화물, 대사 산물, 전구약 및 동배체(isosteres)를 포함한다. 다수의 약학적으로 허용가능한 등가체는 본 발명의 펩티드 화합물과 동일하거나 유사한 시험관 내 또는 생체 내 활성을 가질 것으로 기대된다.

"약학적으로 허용가능한 염"은 당업계에 잘 알려진 방법으로 제조되는 나트륨, 칼륨, 리튬, 칼슘, 마그네슘, 바륨, 암모늄 및 프로타민 아연 염을 비롯하여 제약 업계에서 일반적으로 사용되는 비-독성 알칼리 금속, 알칼리 토금속 및 암모늄 염을 말한다. 이 용어는 비-독성 산 부가염도 포함하며, 상기 산 부가염은 일반적으로 본 발명의 펩티드 화합물을 적합한 유기 또는 무기 산과 반응시킴으로써 제조한다. 대표적인 염은 염화수소산염, 브롬화수소산염, 황산염, 중황산염, 아세트산염, 옥살산염, 발레르산염, 올레산염, 라우르산염, 붕산염, 벤조산염, 락트산염, 인산염, 토실레이트, 시트르산염, 말레산염, 푸마르산염, 석신산염, 주석산염, 납실레이트 등을 포함한다.

"약학적으로 허용가능한 산 부가염"은, 자유 염기의 생물학적 유효성 및 특성을 보유하며 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아니고, 무기 산, 예를 들어 염화수소산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등과, 유기 산, 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말산, 말론산, 석신산, 말레산, 푸마르산, 주석산, 시트르산, 벤조산, 신남산, 만델산, 멘탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 살리실산 등을 이용하여 형성되는 염을 말한다. 전구약으로서의 약학적으로 허용가능한 산 부가염에 대한 설명은 분가드, 에이치.(Bundgaard, H.)의 상기 문헌을 참조한다.

"약학적으로 허용가능한 에스테르"는 에스테르 결합의 가수분해시 카르복실산 또는 알코올의 생물학적 유효성 및 특성을 보유하며 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 에스테르를 말한다. 전구약으로서의 약학적으로 허용가능한 에스테르에 대한 설명은 문헌[Bundgaard, H., ed., Design of Prodrugs, Elsevier Science Publishers, Amsterdam (1985)]을 참조한다. 이들 에스테르는 전형적으로 상응하는 카르복실산 및 알코올로부터 형성된다. 일반적으로, 에스테르 형성은 통상적인 합성 기술을 통하여 달성될 수 있다. (예를 들어, 문헌[March Advanced Organic Chemistry, 3rd Ed., John Wiley & Sons, New York (1985) p. 1157] 및 상기 문헌에 인용된 참고 문헌과, 문헌[Mark et al. Encyclopedia of Chemical Technology, John Wiley & Sons, New York (1980)] 참조). 에스테르의 알코올 성분은 일반적으로 (i) 하나 이상의 이중 결합을 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있으며, 분지형 탄소를 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있는 C₂ -C₁₂ 지방족 알코올 또는 (ii) C₇ -C₁₂ 방향족 또는 헤테로방향족 알코올을 포함할 것이다. 또한, 본 발명은 본 명세서에 개시된 바와 같이 에스테르인 동시에 약학적으로 허용가능한 그의 산 부가염이기도 한 조성물의 사용을 고려한다.

"약학적으로 허용가능한 아미드"는 아미드 결합의 가수분해시 카르복실산 또는 아민의 생물학적 유효성 및 특성을 보유하며 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 아미드를 말한다. 전구약으로서의 약학적으로 허용가능한 아미드에 대한 설명은 문헌[Bundgaard, H., ed., Design of Prodrugs, Elsevier Science Publishers, Amsterdam (1985)]을 참조한다. 이들 아미드는 전형적으로 상응하는 카르복실산 및 아민으로부터 형성된다. 일반적으로, 아미드 형성은 통상적인 합성 기술을 통하여 달성될 수 있다. (예를 들어, 문헌[March Advanced Organic Chemistry, 3rd Ed., John Wiley & Sons, New York (1985) p. 1152], 및 문헌[Mark et al. Encyclopedia of Chemical Technology, John Wiley & Sons, New York (1980)] 참조). 또한, 본 발명은 본 명세서에 개시된 바와 같이 아미드인 동시에 약학적으로 허용가능한 그의 산 부가염이기도 한 조성물의 사용을 고려한다.

"약학적으로 또는 치료적으로 허용가능한 담체"는 활성 성분의 생물 활성의 유효성을 방해하지 않으며 숙주 또는 환자에게 유독하지 않은 담체 매체를 말한다.

"입체이성체"는 상이하게 배열되는 원자를 포함한다는 것을 제외하고는 다른 것과 동일한 분자량, 화학 조성 및 구성을 갖는 화학적 화합물을 말한다. 즉, 특정의 동일한 화학적 부분들은 공간에서 상이한 배향들로 있으며, 따라서, 순수한 때는 편광된 광의 평면을 회전시키는 능력을 갖는다. 그러나, 몇몇 순수 입체이성체는 현재의 장비를 이용해서는 검출될 수 없을 정도로 미미한 광 회전을 가질 수도 있다. 본 발명의 펩티드 화합물은 하나 이상의 비대칭 탄소 원자를 가지며 따라서 다양한 입체이성체를 포함할 수 있다. 모든 입체이성체는 본 발명의 범주 내에 포함된다.

본 발명의 조성물에 적용되는 바와 같이, "치료적- 또는 약학적-유효량"은 원하는 생물학적 결과를 유발하기에 충분한 조성물의 양을 말한다. 상기 결과는 질환의 징후, 증상 또는 원인의 완화, 또는 생물 시스템의 임의의 다른 원하는 변경일 수 있다. 본 발명에서, 결과는 전형적으로 적혈구 세포 생성의 증가를 포함할 것이다.

펩티드 중 아미노산 잔기는 다음과 같이 약칭된다: 페닐알라닌은 Phe 또는 F이며; 류신은 Leu 또는 L이며; 아이소류신은 Ile 또는 I이며; 메티오닌은 Met 또는 M이며; 발린은 Val 또는 V이며; 세린은 Ser 또는 S이며; 프롤린은 Pro 또는 P이며; 트레오닌은 Thr 또는 T이며; 알라닌은 Ala 또는 A이며; 타이로신은 Tyr 또는 Y이며; 히스티딘은 His 또는 H이며; 글루타민은 Gln 또는 Q이며; 아스파라긴은 Asn 또는 N이며; 라이신은 Lys 또는 K이며; 아스파르트산은 Asp 또는 D이며; 글루탐산은 Glu 또는 E이며; 시스테인은 Cys 또는 C이며; 트립토판은 Trp 또는 W이며; 아르기닌은 Arg 또는 R이며; 글리신은 Gly 또는 G이다. 게다가, Bu는 부톡시이며, Bzl은 벤질이며, CHA는 사이클로헥실아민이며, Ac는 아세틸이며, Me는 메틸이며, Pen은 페니실아민이며, Aib는 아미노 아이소부티르산이며, Nva는 노르발린이며, Abu는 아미노부티르산이며, Thi는 티에닐알라닌이며, OBn은 O-벤질이며, hyp는 하이드록시프롤린이다.

자연-발생 아미노산만으로 이루어진 펩티드 외에, 펩티도미메틱(peptidomimetic) 또는 펩티드 유사체도 제공된다. 펩티드 유사체는 제약 업계에서 주형 펩티드의 특성과 유사한 특성을 갖는 비-펩티드 약물로서 일반적으로 사용된다. 이러한 유형의 비-펩티드 화합물은 "펩티드 모방체(peptide mimetic)" 또는 "펩티도미메틱"으로 칭해진다 (문헌[Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986)]; 문헌[Veber and Freidinger TINS p.392 (1985)]; 및 문헌[Evans et al. J. Med. Chem. 30:1229 (1987)], 본 명세서에 참고로 포함됨). 치료적으로 유용한 펩티드와 구조적으로 유사한 펩티드 모방체를 사용하여 등가의 또는 향상된 치료 또는 예방 효과를 생성할 수도 있다. 일반적으로, 펩티도미메틱은 모범 폴리펩티드 (즉, 생물 또는 약리 활성을 갖는 폴리펩티드), 예를 들어 자연-발생 수용체-결합 폴리펩티드와 구조적으로 유사하지만, 당업계에 공지되고, 각각이 본 명세서에 참고로 포함되는 하기 참고 문헌에 추가로 기재된 방법에 의해, --CH₂ NH--, --CH₂ S--, --CH₂ --CH₂ --, --CH=CH-- (시스 및 트랜스), --COCH₂ --, --CH(OH)CH₂ --, 및 --CH₂ SO--로 이루어진 군으로부터 선택되는 결합체로 선택적으로 대체되는 하나 이상의 펩티드 결합체를 갖는다: 문헌[Spatola, A. F., Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides, and Proteins, B. Weinstein, eds., Marcel Dekker, New York, p. 267 (1983)]; 문헌[Spatola, A. F., Vega Data (March 1983), Vol. 1, Issue 3, Peptide Backbone Modifications (종합적 개관)]; 문헌[Morley, Trends Pharm Sci (1980) pp. 463-468 (종합적 개관)]; 문헌[Hudson, D. et al., Int J Pept Prot Res 14:177-185 (1979)] (--CH₂ NH--, CH₂ CH₂ --); 문헌[Spatola et al. Life Sci 38:1243-1249 (1986)] (--CH₂ --S); 문헌[Hann J. Chem. Soc Perkin Trans. I 307-314 (1982)] (--CH--CH--, cis and trans); 문헌[Almquist et al. J. Med. Chem. 23:1392-1398 (1980)] (--COCH₂ --); 문헌[Jennings-White et al. Tetrahedron Lett 23:2533 (1982)] (--COCH₂ --); 문헌[Szelke et al. European Appln. EP 45665 CA (1982): 97:39405 (1982)] (--CH(OH)CH₂ --); 문헌[Holladay et al. Tetrahedron Lett 24:4401-4404 (1983)] (--C(OH)CH₂ --); 및 문헌[Hruby Life Sci 31:189-199 (1982)] (--CH₂ --S--). 특히 바람직한 비-펩티드 결합체는 --CH₂ NH--이다. 그러한 펩티드 모방체는, 예를 들어 보다 경제적인 생성, 보다 큰 화학 안정성, 향상된 약리학적 특성 (반감기, 흡수성, 효험, 효능 등), 변경된 특이성 (예를 들어, 광범위한 스펙트럼의 생물 활성), 감소된 항원성 및 기타의 것을 포함하여, 폴리펩티드 실시 형태에 비하여 상당한 이점을 가질 수도 있다.

펩티도미메틱의 표지는 일반적으로 하나 이상의 표지를 직접적으로 또는 스페이서 (예를 들어, 아미드기)를 통하여 펩티도미메틱 상의 비-방해 위치(들)에 공유 결합에 의해 부착시키는 것을 포함하며, 상기 비-방해 위치(들)는 정량적 구조-활성 데이터 및/또는 분자 모델링에 의해 예측된다. 그러한 비-방해 위치는 일반적으로 펩티도미메틱이 결합하여 치료 효과를 생성하는 거대 분자(들) (예를 들어, 면역글로불린 수퍼패밀리 분자)와 직접적 접촉을 형성하지 않는 위치이다. 펩티도미메틱의 유도체화 (예를 들어, 표지)는 펩티도미메틱의 원하는 생물 또는 약리 활성을 사실상 방해하지 않아야 한다. 일반적으로, 수용체-결합 펩티드의 펩티도미메틱은 높은 친화도로 수용체에 결합하며, 검출가능한 생물 활성을 갖는다 (즉, 하나 이상의 수용체-매개 표현형 변화에 대하여 작용 활성 또는 길항 활성을 가짐).

콘센서스(consensus) 서열의 하나 이상의 아미노산을 동일한 유형의 D-아미노산으로 체계적으로 치환하는 것 (예를 들어, L-라이신 대신 D-라이신)을 이용하여, 보다 안정한 펩티드를 생성할 수도 있다. 게다가, 콘센서스 서열 또는 사실상 동일한 콘센서스 서열 변이체를 포함하는 구속형 펩티드(constrained peptide)는 당업계에 공지된 방법에 의해 (문헌[Rizo and Gierasch Ann. Rev. Biochem. 61:387 (1992), 본 명세서에 참고로 포함됨); 예를 들어, 펩티드를 환화시키는 분자내 다이설파이드 가교체를 형성할 수 있는 내부 시스테인 잔기의 부가에 의해 생성될 수도 있다.

"검출가능한 표지"는, 본 발명의 펩티드 화합물에 공유 결합에 의해 부착될 때, 이 펩티드 화합물을 투여한 환자에서 생체 내에서 펩티드 화합물의 검출을 가능케 하는 물질을 말한다. 적합한 검출가능 표지는 당업계에 잘 알려져 있으며, 예로서, 방사성 동위 원소, 형광 표지 (예를 들어, 플로오레세인) 등을 포함한다. 이용되는 특정한 검출가능 표지는 결정적이지 않으며, 이용될 표지의 양뿐만 아니라 표지의 이용량에서의 표지의 독성과 관련하여 선택된다. 그러한 인자와 관련한 표지의 선택은 충분히 당업계의 기술 이내이다.

검출가능한 표지의 펩티드 화합물에의 공유 결합적 부착은 당업계에 잘 알려진 통상적인 방법으로 달성된다. 예를 들어, ¹²⁵I 방사성 동위원소가 검출가능한 표지로서 이용될 때, ¹²⁵I의 펩티드 화합물에의 공유 결합적 부착은 펩티드 화합물 내로 타이로신 아미노산을 혼입하고, 이어서 펩티드 화합물을 요오드화함으로써 달성될 수 있다. 이와 마찬가지로, ³²P는, 예를 들어 통상적인 화학적 방법을 이용하여 펩티드 화합물 상의 하이드록실기를 통하여 포스페이트 부분으로서 펩티드 화합물에 혼입될 수 있다.

본 발명은 TPO-R에 결합하여 그를 활성화시키거나, 다르게는 TPO 작용제로서 작용하는 펩티드 화합물을 제공한다. 이들 펩티드 화합물은 "리드(lead)" 펩티드 화합물과, 가수분해 또는 단백질 분해에 대한 민감성과 관련하여 및/또는 다른 생물학적 특성, 예를 들어 수용체에 대한 증가된 친화성과 관련하여 리드 펩티드 화합물과 상이하다는 것을 제외하고는 리드 펩티드 화합물과 동일하거나 유사한 분자 구조 또는 형상을 갖도록 제작된 "등가체" 또는 "유도체"형 펩티드 화합물을 포함한다. 또한, 본 발명은 유효량의 TPO 작용제, 그리고 더욱 특히는 펩티드 화합물 - 이는, 빈혈 치료에 유용함- 을 함유하는 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명의 펩티드 화합물은 생체 내에서 TPO-R을 활성화하기 위하여 인간을 비롯한 온혈 동물에 투여될 수 있다. 그와 같이, 본 발명은 생체 내에서 TPO-R에 대한 TPO의 영향을 모방하기에 충분한 양으로 본 발명의 펩티드 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 빈혈의 치료적 치료 방법을 포함한다.

본 발명의 펩티드 화합물의 활성은, 예를 들어 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[McDonald Am. J. of Pediatric Hematology/Oncology 14:8-21 (1992)]에 설명된 다수의 모델들 중 하나에서 시험관 내에서 또는 생체 내에서 평가되거나, 본 명세서에 개시된 분석법으로 평가될 수 있다.

일 실시 형태에 따르면, 본 발명의 조성물은 골수 수혈, 방사선 치료법 또는 화학요법과 관련된 빈혈의 치료에 유용하다. 본 펩티드 화합물은 전형적으로 화학요법, 방사선 치료법, 또는 골수 이식 이전에 또는 그러한 노출 이후에 예방적으로 투여될 것이다.

따라서, 본 발명은 활성 성분으로서 본 발명의 적어도 하나의 펩티드 화합물을 약학적 담체 또는 희석제와 공동으로 함유하는 약학 조성물을 또한 제공한다. 본 발명의 펩티드 화합물은 경구, 폐, 비경구 (근육내, 복강내, 정맥내(intravenous, IV) 또는 피하 주사), 흡입 (미세 분말 제형을 통하여), 경피, 비강, 질, 직장, 또는 설하 투여 경로에 의해 투여될 수 있으며, 각각의 투여 경로에 적절한 투여 형태로 제형화될 수 있다. 예를 들어, 번스타인(Bernstein) 등의 국제특허 공개 WO 93/25221호; 피트(Pitt) 등의 국제특허 공개 WO 94/17784호; 및 피트 등의 유럽 특허 출원 제613,683호를 참조하는데, 이들 각각은 본 명세서에 참고로 포함된다.

경구 투여용 고형 투여 형태는 캡슐, 정제, 환제, 분말제 및 과립을 포함한다. 그러한 고형 투여 형태에서, 활성 펩티드 화합물은 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 불활성 담체, 예를 들어 수크로스, 락토스 또는 전분과 혼합된다. 그러한 투여 형태는 보통의 실시에서와 같이, 불활성 희석제 이외의 추가의 물질, 예를 들어 윤활제, 예를 들어 스테아르산마그네슘을 또한 포함할 수 있다. 캡슐, 정제 및 환제의 경우, 투여 형태는 완충제를 또한 포함할 수도 있다. 정제 및 환제는 추가로 장용 코팅을 이용하여 제조될 수 있다.

경구 투여용 액상 투여 형태는 약학적으로 허용가능한 에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽을 포함하며, 엘릭서(elixir)는 당업계에서 일반적으로 사용되는 불활성 희석제, 예를 들어 물 또는 염수를 포함한다. 그러한 불활성 희석제 외에, 조성물은 아쥬반트(adjuvant), 예를 들어 습윤제, 유화 및 현탁제, 및 감미제, 착향제 및 방향제를 또한 함유할 수 있다.

비경구 투여용의 본 발명에 따른 제제는 살균 수성 또는 비-수성 용액, 현탁액 또는 에멀젼을 포함한다. 비-수성 용매 또는 비히클의 예로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물유, 예를 들어 올리브유 및 옥수수유, 젤라틴, 및 주사가능한 유기 에스테르, 예를 들어 에틸 올레에이트가 있다. 그러한 투여 형태는 아쥬반트, 예를 들어 방부제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 또한 포함할 수도 있다. 상기 투여 형태는 예를 들어 박테리아 보유 필터(bacteria retaining filter)를 통한 여과에 의해, 살균제의 조성물 내로의 혼입에 의해, 조성물의 조사에 의해, 또는 조성물의 가열에 의해 살균될 수도 있다. 또한, 이들은 살균수, 또는 다른 주사가능한 몇몇 살균 매체를 이용하여 사용 직전에 제조될 수 있다.

직장 또는 질 투여용 조성물은 바람직하게는 좌약제이며, 상기 좌약제는 활성 성분 외에 코코아 버터 또는 좌약제용 왁스와 같은 부형제를 포함할 수도 있다. 비강 또는 설하 투여용 조성물은 또한 당업계에 잘 알려진 표준 부형제를 이용하여 제조된다.

또한, 본 발명의 조성물은, 예를 들어 문헌[Tice and Bibi, Treatise on Controlled Drug Delivery, ed. A. Kydonieus, Marcel Dekker, N.Y. (1992), pp. 315-339]의 방법에 의해 미세캡슐화될 수 있다.

당해 펩티드 화합물을 함유하는 조성물은 예방적 및/또는 치료적 치료를 위하여 투여될 수 있다. 치료적 응용에서, 조성물은 상기에 기재된 바와 같이 질환을 이미 앓고 있는 환자에게 이 질환의 증상 및 그 합병증을 치유하거나 적어도 부분적으로 저지하기에 충분한 양으로 투여된다. 이를 성취하기에 적당한 양은 "치료적 유효 용량"으로 정의된다. 이 용도에 유효한 양은 질환의 중증도와, 환자의 체중 및 종합적인 상태에 따라 달라질 것이다.

예방적 응용에서, 본 발명의 펩티드 화합물을 함유하는 조성물은 특정 질환에 민감성인 환자 또는 다르게는 특정 질환 위험성이 있는 환자에게 투여된다. 그러한 양은 "예방적 유효 용량"으로 정의된다. 이 용도에서, 정확한 양은 또 환자의 건강 상태 및 체중에 따라 달라진다.

효과적인 치료법에 필요한 TPO 작용제의 양은 투여 수단, 표적 부위, 환자의 생리학적 상태, 및 투여되는 다른 의약을 비롯한 많은 상이한 인자들에 따라 달라질 것이다. 그와 같이, 치료 투여량은 안전성 및 효능이 최적화되도록 적정되어야 한다. 전형적으로, 시험관 내에서 사용되는 투여량은 이들 시약의 원위치(in situ) 투여에 유용한 양에서 유용한 지침을 제공할 수도 있다. 특정 질병의 치료를 위한 유효 용량의 동물 시험은 인간 투여량의 추가적인 예측 지시를 제공할 것이다. 다양한 고려 사항이 예를 들어 문헌[Gilman et al. (eds), Goodman and Gilman's: The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8th ed., Pergamon Press (1990)]; 및 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 7th ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa. (1985)]에 기재되어 있으며, 상기 문헌 각각은 본 명세서에 참고로 포함된다.

본 발명의 펩티드 화합물은 체중 1 ㎏ 당 일일 약 1 ㎍ 내지 약 300 ㎍의 투여량 범위로 투여될 때 빈혈 치료에 효과적이다. 이용되는 특정 용량은 병의 중증도, 환자의 연령 및 종합적인 상태 등과 같은 인자에 따른 주치 임상의의 판단에 의해서뿐만 아니라 투여 경로에 의해서도 조절된다.

동물 모델

카보플라틴으로 처리된 생쥐에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 영향을 관찰하였다. 본 발명의 모든 실시예에 있어서, 페길화 TPO 화합물 1번의 10 ㎎/㎖ 원액을 살균 염수 중에 제조하였다. 혼합에 있어서, 제제를 200 rpm에서 15분 동안 회전 진탕기 상에 두었다. 이 방법을 이용하여 거품 발생 없이 페길화 TPO 화합물 1 번을 용해시켰다. 원액을 GV 밀렉스(Millex) (0.22 ㎛) 필터를 이용하여 여과하였다. 이어서 투약 용액을 살균 염수를 이용하여 상기 원액으로부터 제조하였다. 원액 및 투약 용액을 사용일에 신선하게 제조하였다.

실시예 1

헤모글로빈 수준, 적혈구 세포 계수치 및 헤마토크릿치의 변화에 의해 결정되는 바와 같이, 카보플라틴을 이용한 생쥐의 처리 이후 빈혈의 지속 기간 및 중증도에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 영향을 관찰하였다. 이 연구에 있어서, 증가하는 양의 페길화 TPO 화합물 1번을 카보플라틴 투약 1일 후 생쥐에 투여하여 다양한 적혈구 세포 파라미터에 대한 가능한 용량-의존적 영향을 특성화하였다.

하기에 상술한 바와 같이, -2일 및 -1일에 복강내 투여에 의해 생쥐군을 카보플라틴 또는 비히클 (인산염 완충 염수, Phosphate Buffered Saline(PBS)) 중 어느 하나로 처리하였다. BALB/c 생쥐 주에서 혈소판 감소증을 유발하기 위하여 사용되는 카보플라틴의 최적 용량은, 2회의 연속적인 매일 주사로서 주어질 경우 120 ㎎/㎏의 나뉘어진 총 용량 (즉, 2x60 ㎎/㎏)인 것으로 이전에 결정되었다. 표 1에 상술한 바와 같이, 제2 카보플라틴 투약 1일 후, 생쥐군을 IV (볼루스) 주사에 의해 페길화 TPO 화합물 1번 또는 비히클 (살균 염수(sterile saline, SS), 무방부제 0.9% 염화나트륨)로 처리하였다. 이 용량을 체중당 양을 기준으로 투여하였다 (100 ㎕/체중 10 g).

5일, 7일, 9일 및 11일에, 각각의 시험군의 5마리의 생쥐를 칭량하고, 이어서 CO₂-질식 및 심장 천자를 통한 방혈을 이용하여 안락사시켰다. 혈액 샘플을 혈액학적 평가를 위하여 별도의 EDTA (라벤더-탑(lavender-top)) 마이크로컨테이너(microcontainer)에 옮겼다. 대조 생쥐군 (5마리)을 5일 및 11일에 처리하였다. 그 결과가 도 1-4에 도시되어 있다. 이 데이터는 군의 평균 +SEM으로서 그래프로 제시된다.

단독의 카보플라틴을 이용한 생쥐의 처리는 11일까지 생쥐에서의 헤모글로빈 수준의 약 20% 감소를 야기하였다. 이러한 감소는 모든 용량의 페길화 TPO 화합물 1번을 이용한 처리에 의해 저해되었다. 또한, RBC 계수치 및 헤마토크릿치의 사소한 감소는 카보플라틴 처리와 관련되고, 이 효과는 페길화 TPO 화합물 1번을 이용한 처리에 의해 저해되었지만, 이러한 효과의 통계학적 평가는 행하지 않았다. 단독의 카보플라틴으로 처리하거나 카보플라틴에 더하여 다양한 용량의 페길화 TPO 화합물 1번으로 처리한 모든 군의 생쥐는 0일에 수집된 체중 측정치에 비하여 5일, 7일 및 9일에 체중 손실을 경험하였다. 11일의 연구 기간에 걸친 생쥐 서브세트에서의 체중 측정치의 분석은, 단독의 카보플라틴 처리가 관찰된 체중 감소를 야기하였으며, 페길화 TPO 화합물 1번은 시험한 모든 용량에서 손실된 체중의 복구를 향상시켰음을 시사하고 있다.

단독의 카보플라틴으로 처리한 생쥐는 5일까지 변경된 외관 및 거동을 나타내기 시작하였다. 생쥐 중 일부는 등을 구부리고 있는 자세(hunched position)를 취하고, 무기력하게 보였다. 또한, 많은 생쥐는 항문성기 부위가 더러워졌다. 페길화 TPO 화합물 1번을 이용한 처리는 용량-의존적인 것으로 보이는 방식으로 이들 징후의 발병, 빈도 및 중증도를 감소시켰다.

실시예 2

페길화 TPO 화합물 1번이 카보플라틴 처리의 유독한 효과에 대하여 생쥐의 골수 조혈 줄기 세포가 민감해지게 할 수도 있다는 가능성을 조사하였다. 이 연구에 있어서, 소정 용량의 페길화 TPO 화합물 1번을 카보플라틴 투약 7일 전에 또는 카보플라틴 처리 직후에 생쥐에 투여하였다. 추가의 군을 카보플라틴 투여 이전 및 카보플라틴 투여 이후에 페길화 TPO 화합물 1번으로 처리하였다. 혈액학적 파라미터에 대한 이들 투약 섭생법의 영향도 관찰하였다.

하기에 상술한 바와 같이, 7일 및 8일에 복강내 투여에 의해 생쥐군을 카보플라틴 또는 비히클 (인산염 완충 염수, PBS) 중 어느 하나로 처리하였다. BALB/c 생쥐 주에서 혈소판 감소증을 유발하기 위하여 사용되는 카보플라틴의 최적 용량은, 2회의 연속적인 매일 주사로서 주어질 경우 120 ㎎/㎏의 나뉘어진 총 용량 (즉, 2x60 ㎎/㎏)인 것으로 이전에 결정되었다. 표 2에 상술한 바와 같이, 제1 카보플라틴 투약 7일전 또는 제2 카보플라틴 투약 한(1)시간 후에, 생쥐군을 IV (볼루스) 주사에 의해 페길화 TPO 화합물 1번 (300 ㎍/㎏) 또는 비히클 (살균 염수, SS, 무방부제 0.9% 염화나트륨)로 처리하였다. 추가의 군을 카보플라틴 투약 전 (0일) 및 후(8일, t=1시간)에 페길화 TPO 화합물 1번으로 처리하였다. 모든 투약은 체중당 양을 기준으로 수행하였다 (100 ㎕/체중 10 g).

14일, 18일, 22일 및 26일에, 각각의 시험군의 5마리의 생쥐를 칭량하고, 이어서 CO₂-질식 및 심장 천자를 통한 방혈을 이용하여 안락사시켰다. 혈액 샘플을 혈액학적 평가를 위하여 별도의 EDTA (라벤더-탑) 마이크로컨테이너에 옮겼다. 대조 생쥐군 (5마리)을 14일 및 26일에 처리하였다. 그 결과가 도 5-8에 도시되어 있다. 이 데이터는 군의 평균 +SEM으로서 그래프로 제시된다.

단독의 카보플라틴을 이용한 생쥐의 처리는 대조군에 비하여 18일 및 22일까지 생존하고 있는 생쥐에서 헤모글로빈 수준, RBC 계수치 및 헤마토크릿치의 감소 (대략 18%)를 야기하였다. 이러한 감소는, 0일에 페길화 TPO 화합물 1번을 추가로 투약하거나 투약하지 않고서 8일에(제2 카보플라틴 처리 1시간 후) 페길화 TPO 화합물 1번의 투여에 의해 방지되었지만, (단지) 0일에 페길화 TPO 화합물 1번을 투여하면 이들 적혈구 파라미터에서의 카보플라틴-유발된 변화에 영향을 주지 못하였다.

대조군의 모든 생쥐는 7일과 26일 사이에 정상 체중 증가를 경험한 반면, 단독의 카보플라틴으로 처리한 모든 생쥐는 동일한 기간 동안 소량의 체중 (평균적으로 대략 4%)을 손실하였다. 카보플라틴으로 처리하고, 페길화 TPO 화합물 1번을 이용하여 다양하게 동시 처리한(co-treatment) 모든 군의 생쥐는 7일과 26일 사이에 체중을 유지하거나 정상적인 체중 증가를 경험하였다. 이 연구 기간에 걸친 체중 측정치의 분석은, 카보플라틴 처리가 관찰된 체중 감소의 주된 원인이며, 페길화 TPO 화합물 1번을 이용한 동시 처리에 의해 이 체중 손실이 방지되었음을 시사하고 있지만, 통계학적 분석은 행하지 않았다. 7일 (카보플라틴의 투약 이전)과 26일 (연구 종료일) 사이에 관찰된 체중 차이는 도 8에 주어져 있다.

대조군의 모든 생쥐는 연구 기간 전체에 걸쳐 정상인 것으로 보였다. 단독의 카보플라틴으로 처리한 생쥐는 12일만큼 이른 일수에 변경된 외관 및 거동을 나타내기 시작하였고, 등이 구부러지는 징후가 빈번하며 털이 텁수룩하게 보였다. 카보플라틴을 받은 많은 생쥐 (페길화 TPO 화합물 1번 처리를 하지 않거나 함)는 당해 연구 기간의 나중 절반 동안 등이 구부러진 자세를 취하였고 털이 텁수룩하게 보였다. 0일에 추가로 처리하지 않거나 처리하여 8일에 페길화 TPO 화합물 1번으로 처리하면 이들 징후의 발병이 지연되는 것으로 보이며, 0일 및 8일에서의 처리는 중증도 및 지속 기간도 감소시켰지만, 체계적인 관찰에 대한 처리의 영향에 대한 상세한 분석은 행하지 않았다.

실시예 3

카보플라틴 처리 이후 다양한 시점에서 페길화 TPO 화합물 1번을 투여하는 투약 섭생법 이후 빈혈의 지속 기간 및 중증도에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 영향을 관찰하였다. 이 연구에 있어서, 소정량의 페길화 TPO 화합물 1번을 카보플라틴 투약 이후 한(1)시간, 일(1)일 또는 사(4)일에 생쥐에게 투여하였다.

하기에 상술한 바와 같이, -1일 및 0일에 복강내 투여에 의해 생쥐군을 카보플라틴 또는 비히클 (인산염 완충 염수, PBS) 중 어느 하나로 처리하였다. BALB/c 생쥐 주에서 혈소판 감소증을 유발하기 위하여 사용되는 카보플라틴의 최적 용량은, 2회의 연속적인 매일 주사로서 주어질 경우 120 ㎎/㎏의 나뉘어진 총 용량 (즉, 2x60 ㎎/㎏)인 것으로 이전에 결정되었다. 표 3에 상술한 바와 같이, 제2 카보플라틴 투약 이후 1시간 (0일), 하루 (1일) 또는 사일(4일)에, 생쥐군을 IV (볼루스) 주사에 의해 페길화 TPO 화합물 1번 (300 ㎍/㎏) 또는 비히클 (살균 염수, SS, 무방부제 0.9% 염화나트륨)로 처리하였다. 이 용량을 체중당 양을 기준으로 투여하였다 (100 ㎕/체중 10 g).

6일, 8일, 10일 및 12일에, 각각의 시험군의 5마리의 생쥐를 칭량하고, 이어서 CO₂-질식 및 심장 천자를 통한 방혈을 이용하여 안락사시켰다. 혈액 샘플을 혈액학적 평가를 위하여 별도의 EDTA (라벤더-탑) 마이크로컨테이너에 옮겼다. 대조 생쥐군 (5마리)을 6일 및 12일에 처리하였다. 그 결과가 도 9-12에 도시되어 있다. 이 데이터는 군의 평균 +SEM으로서 그래프로 제시된다.

단독의 카보플라틴을 이용한 생쥐의 처리는 대조군에 비하여 12일까지 생존하고 있는 생쥐(2마리의 생쥐)에서 헤모글로빈 수준, RBC 계수치 및 헤마토크릿치의 극적인 감소 (대략 47%)를 야기하였다. 이러한 감소는, 0일 (카보플라틴 처리 1시간 후) 및 1일에 페길화 TPO 화합물 1번의 투여에 의해 방지되었지만, 4일에 페길화 TPO 화합물 1번을 투여하면 이들 적혈구 파라미터에서의 카보플라틴-유발된 변화에 영향을 주지 못하였다.

단독의 카보플라틴으로 처리하거나 카보플라틴에 더하여 다양한 용량의 페길화 TPO 화합물 1번으로 처리한 모든 군의 생쥐는 -1일에 수집된 체중 측정치에 비하여 6일, 8일, 10일 및 12일에 체중 손실을 경험하였다. 상기 연구 기간에 걸친 체중 측정치의 분석은, 카보플라틴이 관찰된 체중 감소의 주된 원인이었음을 시사하고 있다. 0일, 1일 또는 4일에서의 페길화 TPO 화합물 1번의 투여는 카보플라틴 처리와 관련된 체중 손실에 영향을 주지 못하는 것으로 보였지만, 통계학적 분석은 행하지 않았다. -1일과 10일 사이에 관찰된 체중 감소가 도 11에 주어져 있다.

대조군의 모든 생쥐는 연구 기간 전체에 걸쳐 정상인 것으로 보였다. 단독의 카보플라틴으로 처리한 생쥐는 2일만큼 이른 일수에 변경된 외관 및 거동을 나타내기 시작하였고, 등이 구부러지는 징후가 빈번하며 무기력하게 보였다. 카보플라틴을 받은 많은 생쥐 (페길화 TPO 화합물 1번 처리를 하지 않거나 함)는 당해 연구 기간의 나중 절반 동안 등이 구부러진 자세를 취하였고 무기력하게 보였다. 또한, 이들 생쥐 중 일부는 항문성기 부위가 더러워졌다. 다른 드문 징후는 쇠약하게 보이는 것, 처진 눈꺼풀을 갖는 것 및 비정상적인 게이트(gate)를 나타내는 것을 포함한다. 페길화 TPO 화합물 1번을 이용한 처리는 이들 징후의 발병, 빈도 또는 중증도에 대하여 극적인 영향을 미치지 않는 것으로 보였지만, 상세한 분석은 행하지 않았다.

카보플라틴-유발된 빈혈의 예방은 동물들을 화학요법 24시간 이내에 페길화 TPO 화합물 1번을 투약할 때 관찰된다. 이 데이터는, 페길화 TPO 화합물 1번이 골수보호(myeloprotective) 효과를 가지며, 상기 효과는 거핵구 계통에 한정되지 않음을 시사하고 있다.

실시예 4

혈액학적 파라미터의 변화에 의해 결정되는 바와 같이, 카보플라틴-처리된 생쥐에서 거핵구 및 적혈구 계통에 있어서 생존 인자로서 기능하는 페길화 TPO 화합물 1번의 능력을 관찰하였다. 이전 연구에서, 300 ㎍/㎏만큼 적은 용량의 페길화 TPO 화합물 1번은 카보플라틴에 의해 유발된 빈혈을 예방하는 것으로 밝혀졌다. 이 연구에서, 적혈구 계통의 생존에 대한 보다 적은 용량의 페길화 TPO 화합물 1번 (즉, 30, 100 및 300 ㎍/㎏)의 영향을 조사하여 이 영향에 있어서의 용량-반응을 특성화하였다.

하기에 상술한 바와 같이, -1일 및 0일에 복강내 투여에 의해 생쥐군을 카보플라틴 또는 비히클 (인산염 완충 염수, PBS) 중 어느 하나로 처리하였다. BALB/c 생쥐 주에서 혈소판 감소증을 유발하기 위하여 사용되는 카보플라틴의 최적 용량은, 2회의 연속적인 매일 주사로서 주어질 경우 120 ㎎/㎏의 나뉘어진 총 용량 (즉, 2x60 ㎎/㎏)인 것으로 이전에 결정되었다. 표 4에 상술한 바와 같이, 제2 카보플라틴 투약 이후 대략적으로 1시간에, 생쥐군을 IV (볼루스) 주사에 의해 페길화 TPO 화합물 1번 또는 비히클 (살균 염수, SS, 무방부제 0.9% 염화나트륨)로 처리하였다. 이 용량을 체중당 양을 기준으로 투여하였다 (100 ㎕/체중 10 g).

6일, 8일 및 12일에, 각각의 시험군의 5마리의 생쥐를 칭량하고, 이어서 CO₂-질식 및 심장 천자를 통한 방혈을 이용하여 안락사시켰다. 혈액 샘플을 혈액학적 평가를 위하여 별도의 EDTA (라벤더-탑) 마이크로컨테이너에 옮겼다. 대조 생쥐군 (5마리)을 6일 및 12일에 처리하였다. 그 결과가 도13-14에 도시되어 있다.

단독의 카보플라틴을 이용한 생쥐의 처리는 12일까지 생쥐에서의 헤모글로빈 수준의 25% 초과의 감소를 야기하였다. 이러한 감소는 모든 용량의 페길화 TPO 화합물 1번을 이용한 처리에 의해 전적으로 저해되었다. 또한, 페길화 TPO 화합물 1번은 카보플라틴 처리에 의해 유발되는 RBC 계수치 및 헤마토크릿치의 감소를 효과적으로 저해하였다.

단독의 카보플라틴으로 처리하거나 카보플라틴에 더하여 다양한 용량의 페길화 TPO 화합물 1번으로 처리한 모든 군의 생쥐 중 본질적으로 모든 생쥐는 -1일에 수집된 체중 측정치에 비하여 6일, 8일 및 12일에 체중 손실을 경험하였다. 13일의 연구 기간에 걸친 체중 측정치의 분석은, 단독의 카보플라틴 처리가 관찰된 체중 감소를 야기하였음을 나타낸다. 페길화 TPO 화합물 1번은 이 연구에서 체중 손실 또는 복구에 영향을 미치지 않는 것으로 보였다.

단독의 카보플라틴으로 처리한 생쥐는 4일까지 변경된 외관 및 거동을 나타내기 시작하였다. 생쥐 중 일부는 등을 구부리고 있는 자세를 취하고, 털이 텁수룩하게 보였다. 또한, 많은 생쥐는 묽은 변을 보았다. 동물은 무기력하게 보인 것이 거의 없었으며, 혈변을 나타낸 것이 거의 없었다. 페길화 TPO 화합물 1번을 이용한 처리는 용량-의존적인 것으로 보이는 방식으로 이들 징후의 발병, 빈도 및 중증도를 감소시켰다.

페길화 TPO 화합물 1번은 말초 혈액중 혈소판 계수치 및 기타 혈액학적 파라미터에 의해 결정되는 바와 같이, 카보플라틴-처리된 생쥐에서 적혈구 계통의 생존을 유지하는 기능을 하였다. 모든 용량의 페길화 TPO 화합물 1번은 12일에 카보플라틴에 의해 유발된 빈혈을 완전히 예방하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 결과는 페길화 TPO 화합물 1번의 "생존 유지" 효과에 대한 거핵구 및 적혈구 계통의 차별적인 민감성/반응성을 시사하고 있다.

실시예 5

하기에 상술한 바와 같이, 생쥐군을 10일 간격으로 2라운드의 화학요법제(카보플라틴)를 이용하여 처리하였으며, 각각의 라운드는 연속적인 2일의 카보플라틴으로 이루어져 있다 (즉, -1일 및 0일과, 10일 및 11일에 ㎏ 당 일일 70 ㎎을 투여함). 이들 생존 연구에 이용한 카보플라틴의 용량은 생쥐에 있어서의 최대 내약 용량(tolerated dose) (즉, 120 ㎎/㎏; 연속적인 2일에 ㎏ 당 일일 60 ㎎으로서 투여함)을 초과하였다. 하기에 상술한 바와 같이, 각각의 라운드에서의 제2 카보플라틴 투약 이후 1시간에 (즉, 0일 및 11일), 생쥐를 IV (볼루스) 주사에 의해 페길화 TPO 화합물 1번 (100 ㎍/㎏) 또는 비히클 (살균 염수, SS, 무방부제 0.9% 염화나트륨)로 처리하였다. 이 용량을 체중당 양을 기준으로 투여하였다 (100 ㎕/체중 10 g).

이어서, 7일, 10일, 18일, 21일 및 28일에, 각각의 시험군의 5마리의 생쥐(25마리의 생쥐/군)를 CO₂-질식 및 심장 천자를 통한 방혈을 이용하여 안락사시켰다. 혈액 샘플을 혈액학적 평가를 위하여 별도의 EDTA (라벤더-탑) 마이크로컨테이너에 옮겼다. 단독의 비히클로 처리한 대조 생쥐군을 동일한 방식으로 처리하였다. 그 결과가 도 15에 도시되어 있다. 2라운드의 카보플라틴을 이용한 생쥐의 처리는 10일과 21일 사이에 관찰된 중등도 빈혈의 발병으로 이어진 반면, 2라운드의 카보플라틴 및 페길화 TPO 화합물 1번으로 처리한 생쥐는 이 기간 전체에 걸쳐 대조군과 유사한 헤마토크릿 값을 유지하였다. 흥미롭게도, 혈액학적 평가에 이용하지 않은 생쥐 중, 단독의 카보플라틴으로 처리된 군의 7마리 생쥐는 4일과 18일 사이에 죽은 반면, 병용 치료를 받은 군의 단지 1마리의 생쥐가 동일 기간 내에 숨을 거두었고, 대부분의 죽음은 빈혈 기간 내에 일어났다. 이러한 결과는, 카보플라틴-유발된 빈혈이 높은 수준의 화학요법을 받고 있는 생쥐의 죽음에 기여할 수도 있으며, 페길화 TPO 화합물 1번은 빈혈의 발병을 예방함으로써 생쥐의 생존을 증가시키는 기능을 할 수도 있음을 시사하고 있다.

실시예 6

역학적 연구에 있어서, 생쥐군을 비히클 또는 증가하는 양의 카보플라틴 (즉, 60, 70 또는 80 ㎎/㎏)으로 연속적인 2일 (-1일 및 0일) 동안 처리하였다. 표 5에 상술한 바와 같이, 제2 카보플라틴 투약 이후 대략 1시간에, 생쥐군을 IV (볼루스) 주사에 의해 페길화 TPO 화합물 1번 (100 ㎍/㎏) 또는 비히클 (살균 염수, SS, 무방부제 0.9% 염화나트륨)로 처리하였다.

15일에, 모든 처리군의 생쥐를 CO₂-질식 및 심장 천자를 통한 방혈을 이용하여 안락사시켰다. 혈액 샘플을 혈액학적 평가를 위하여 별도의 EDTA (라벤더-탑) 마이크로컨테이너에 옮겼다. 게다가, 대조 생쥐와, 페길화 TPO 화합물 1번을 이용하여 동시 처리하지 않거나 동시 처리한, 2x70 ㎎/㎏의 카보플라틴으로 처리한 생쥐의 여러 기관 (뇌 포함)을 단리하고, 조직학적 조사용으로 처리하였다. 이들 조직의 절편을 피브리노겐/피브린에 대하여 면역 조직 화학적으로 처리하였다.

증가하는 양의 단독의 카보플라틴을 이용한 생쥐의 처리는 15일에 2x70 ㎎/㎏을 받은 생쥐에서 혈소판의 개수의 극적인 강하와, 60 및 70 ㎎/㎏의 카보플라틴 (단독)으로 처리한 생쥐에서 헤마토크릿치(HCT)의 용량-의존적 감소를 야기하였다. 카보플라틴에 의해 유발되는 혈소판 및 RBC 계수치의 이러한 감소는 페길화 TPO 화합물 1번을 이용한 처리에 의해 전적으로 저해되었다. 2x80 ㎎/㎏의 카보플라틴 (단독)으로 처리된 생쥐 모두는 죽은 것으로 발견되었거나 연구 종료 이전에 안락사시켰음 (빈사 상태)을 알아야 한다. 흥미롭게도, 2x80 ㎎/㎏의 카보플라틴 및 페길화 TPO 화합물 1번으로 처리한 생쥐 모두는, 예정된 연구 종료때까지 생존하였으며, 15일에 혈소판 감소증 또는 빈혈을 나타내지 않았다.

대조 생쥐의 뇌의 조직학적 평가에 의하면 정상인 것으로 보이는 소혈관이 나타났다. 많은 혈관은 적혈구 세포를 포함하며, 피브리노겐에 대하여 흐릿한 염색을 나타내었다. 피브리노겐/피브린에 있어서의 흐릿한 혈관내 염색이 이 대조 생쥐에서 기대되며, 그 이유는 피브리노겐이 혈장의 정상 성분이기 때문이다. 단독의 카보플라틴 (2x70 ㎎/㎏)으로 처리한 생쥐 유래의 뇌 절편은 소혈관을 포함하는데, 상기 소혈관은 피브리노겐/피브린에 대하여 강렬하게 양성으로 염색되는 물질에 의해 전적으로 폐쇄되었다. 이들 미세혈전은 이러한 투약군의 모든 생쥐 유래의 조직 절편에서 빈번하게 관찰되었다. 카보플라틴 및 페길화 TPO 화합물 1번으로 처리한 생쥐 유래의 뇌 절편 내의 소혈관은 정상으로 보이거나, 대조군보다 단지 약간 더 짙은 피브리노겐/피브린 염색을 나타내었다. 단일한 미세혈전성 이벤트가 전체 투약군에 대하여 나타났다.

이 연구의 결과는, 미세혈전성 이벤트가 화학요법에 의해 유발되며, 미세혈전이 RBC의 기계적 용해에 기여하는 것으로 생각되기 때문에 이들 혈관 이벤트가 화학요법-유발된 빈혈에 기여할 가능성이 있음을 나타낸다. 게다가, 이들 혈전성 이벤트의 발병을 방지하는 페길화 TPO 화합물 1번의 능력은 이 약제가 화학요법에 의해 유발되는 빈혈의 발병을 예방하는 메카니즘의 구성 요소일 수도 있다. 마지막으로, 미세혈전성 이벤트는 고용량의 화학요법을 받은 동물의 사망률에 또한 기여할 수도 있다. 그러므로, 이들 혈전성 이벤트의 발병을 예방하는 페길화 TPO 화합물 1번의 능력은 고용량의 화학요법 및 당해 약제를 받은 동물의 증가된 생존에 책임이 있을 수도 있다.

도 18A 및 도 18B는 [실시예 6에 개시된 바와 같이] 카보플라틴 처리된 생쥐의 혈소판 및 헤마토크릿치에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 처리의 영향을 도시한다.

도 19는 실시예 6에 개시된 바와 같이 페길화 TPO 화합물 1번이 카보플라틴 처리된 생쥐 유래의 뇌 절편에서의 피브리노겐 침전 및 응혈을 감소시킴을 예시한다.

제안된 작용 메카니즘

도 16은 페길화 TPO 화합물 1번의 항-빈혈 효과의 작용 메카즘인 것으로 여겨지는 것을 예시한다. 도 16에서 알 수 있는 바와 같이, 화학요법은 소혈관의 내피에 대한 손상을 유발하며, 조혈을 억제한다. 페길화 TPO 화합물 1번의 부재 하에서는, 순환 혈소판이 변경된 내피에 의해 활성화되게 되어 소혈관의 벽에 침착함에 따라 혈소판 감소증이 빠르게 발병한다. 손상된 골수에 의해 생성되는 변경된 혈소판이 이 과정에 기여한다. 활성화된 혈소판은 손상된 혈관 내에서 피브린의 침착을 유발하며, 미세혈관병성 혈전(microangiopathic thrombi)이 생긴다. 이들 미세혈관병성 혈전은 적혈구 세포의 기계적 파괴를 매개하여 화학요법-유발된 빈혈의 발병에 기여한다. 페길화 TPO 화합물 1번을 이용한 동시 처리는 혈관의 내피에 대한 화학요법-유발된 손상을 저해하고/하거나 순환 혈소판의 항혈전 및 프로피브린용해 특질을 촉진한다. 미세혈관병성 혈전은 생기지 않으며, 적혈구 세포의 구조적 완전성은 유지된다. 골수에서의 거핵구 전구체에 대한 페길화 TPO 화합물 1번의 영향은 정상 혈소판의 생성을 촉진하는 것이다. 지혈이 유지되며, 빈혈이 예방된다.

도 17은 페길화 TPO 화합물 1번의 조혈 세포에 대한 계통의 영향 중 일부일 것으로 여겨지는 것을 도시한다.

실시예 7

결합 분석

본 펩티드 화합물의 활성을 표준적인 상대적 발광 단위 분석 기술을 이용하여 측정할 수 있다. 이 분석에서는, 예를 들어 인간 TPO 수용체를 안정하게 발현하도록 조작된 쥣과 세포 및 fos 프로모터에 의해 구동되는 루시퍼라아제 리포터 제작물을 이용한다. 이 분석을 다음과 같이 실시할 수도 있다: 인간 TPO 수용체, c-mpl (hTPOr), 및 루시퍼라아제 리포터 제작물을 발현하는, 혈청을 제거한 Baf/3 hTPOr fos/lux 세포를 증가하는 농도의 rhTPO 또는 펩티드 화합물에 대략 18시간 동안 노출시킨다. 이어서, 세포를 루시퍼라아제 기질을 함유하는 배지에서 인큐베이션하고, 세포의 발광을 발광측정기(luminometer)를 이용하여 측정한다.

도 20에 도시된 바와 같이, 페길화 TPO 화합물 1번은 인간 TPO-R을 재조합적으로 발현하는 Baf/3 세포를 용량 의존적 방식으로 활성화시켰다. 도 21에 도시된 바와 같이, 페길화 TPO 화합물 1번으로 세포를 자극할 때 동일 농도의 TPO보다 TPO-R을 더 강하게 활성화시킴이 관찰되었다. 페길화 TPO 화합물 1번의 EC₅₀은 약 5 pM이었다.

본 발명의 바람직한 실시 형태만을 상기에 구체적으로 설명하였지만, 본 발명의 사상 및 의도된 범주로부터 벗어나지 않고도 본 발명의 변경 및 변화가 가능함이 인정될 것이다.

Claims (35)

1. 치료 이후 빈혈의 발병을 예방하는 방법으로서, 유효량의 TPO 펩티드 화합물을 그를 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
2. 제1항에 있어서, 치료는 세포독성제(cytotoxic agent), 항종양제 및 방사선을 이용한 치료로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
3. 적혈구 세포의 생성을 증가시키는 방법으로서, 유효량의 TPO 펩티드 화합물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
4. 제1항에 있어서, 대상이 인간인 것을 특징으로 하는 방법.
5. 제1항에 있어서, TPO 펩티드 화합물은 하나 이상의 rhTPO 및 rhIL-11에 비하여 면역원성이 감소된 것을 특징으로 하는 방법.
6. 제1항에 있어서, TPO 펩티드 화합물은 하나 이상의 rhTPO 및 rhIL-11에 비하여 PK 프로파일이 개선된 것을 특징으로 하는 방법.
7. 제1항에 있어서, 유효량은 체중 1 ㎏ 당 일일 약 1 ㎍ 내지 약 300 ㎍인 것 을 특징으로 하는 방법.
8. 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된 TPO 펩티드 화합물을 함유하는 적혈구 세포 생성 증가용 약학 조성물.
9. 빈혈을 치료하는 방법으로서, 유효량의 TPO 펩티드 화합물을 그를 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
10. 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된 TPO 펩티드 화합물을 함유하는 빈혈 치료용 약학 조성물.
11. 제3항에 있어서, 적혈구 세포는 계통 특이적 적혈구 전구 세포, 망상 적혈구 및 적혈구로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
12. 치료 이후 빈혈의 발병을 예방하는 방법으로서, 하기 구조를 포함하는 유효량의 TPO 펩티드 화합물을 그를 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함하는 방법:

    I E G P T L R Q (2-Nal) L A A R (Sar) (서열 번호 5).
13. 제12항에 있어서, 치료는 세포독성제, 항종양제 및 방사선을 이용한 치료로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
14. 제12항에 있어서, 유효량은 체중 1 ㎏ 당 일일 약 1 ㎍ 내지 약 300 ㎍인 것을 특징으로 하는 방법.
15. 적혈구 세포 생성을 증가시키는 방법으로서, 하기 구조를 포함하는 유효량의 TPO 펩티드 화합물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는 방법:

    I E G P T L R Q (2-Nal) L A A R (Sar) (서열 번호 5).
16. 제15항에 있어서, 적혈구 세포는 계통 특이적 적혈구 전구 세포, 망상 적혈구 및 적혈구로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
17. 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된, 하기 구조를 포함하는 TPO 펩티드 화합물을 함유하는 적혈구 세포 생성 증가용 약학 조성물:

    I E G P T L R Q (2-Nal) L A A R (Sar) (서열 번호 5).
18. 빈혈을 치료하는 방법으로서, 하기 구조를 포함하는 유효량의 TPO 펩티드 화합물을 그를 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함하는 방법:

    I E G P T L R Q (2-Nal) L A A R (Sar) (서열 번호 5).
19. 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된, 하기 구조를 포함하는 TPO 펩티드 화합물을 함유하는 빈혈 치료용 약학 조성물:

    I E G P T L R Q (2-Nal) L A A R (Sar) (서열 번호 5).
20. 치료 이후 빈혈의 발병을 예방하는 방법으로서, 하기 구조를 포함하는 유효량의 TPO 펩티드 화합물을 그를 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함하는 방법:

    

    (여기서, MPEG는 분자량이 대략 20,000 달톤인 메톡시폴리(에틸렌 글리콜)임).
21. 제20항에 있어서, 치료는 세포독성제, 항종양제 및 방사선을 이용한 치료로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
22. 제20항에 있어서, 유효량은 체중 1 ㎏ 당 일일 약 1 ㎍ 내지 약 300 ㎍인 것을 특징으로 하는 방법.
23. 적혈구 세포 생성을 증가시키는 방법으로서, 하기 구조를 포함하는 유효량의 TPO 펩티드 화합물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는 방법:

    

    (여기서, MPEG는 분자량이 대략 20,000 달톤인 메톡시폴리(에틸렌 글리콜)임).
24. 제23항에 있어서, 적혈구 세포는 계통 특이적 적혈구 전구 세포, 망상 적혈구 및 적혈구로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
25. 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된, 하기 구조를 포함하는 TPO 펩티드 화합물을 함유하는 적혈구 세포 생성 증가용 약학 조성물:

    

    (여기서, MPEG는 분자량이 대략 20,000 달톤인 메톡시폴리(에틸렌 글리콜)임).
26. 빈혈을 치료하는 방법으로서, 하기 구조를 포함하는 유효량의 TPO 펩티드 화합물을 그를 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함하는 방법:

    

    (여기서, MPEG는 분자량이 대략 20,000 달톤인 메톡시폴리(에틸렌 글리콜)임).
27. 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된, 하기 구조를 포함하는 TPO 펩티드 화합물을 함유하는 빈혈 치료용 약학 조성물:

    

    (여기서, MPEG는 분자량이 대략 20,000 달톤인 메톡시폴리(에틸렌 글리콜)임).
28. 치료 이후 빈혈의 발병을 예방하는 방법으로서, 하기 구조를 포함하는 유효량의 TPO 펩티드 화합물을 그를 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함하는 방법:

    

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29. 제28항에 있어서, 치료는 세포독성제, 항종양제 및 방사선을 이용한 치료로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
30. 제28항에 있어서, 유효량은 체중 1 ㎏ 당 일일 약 1 ㎍ 내지 약 300 ㎍인 것을 특징으로 하는 방법.
31. 적혈구 세포 생성을 증가시키는 방법으로서, 하기 구조를 포함하는 유효량의 TPO 펩티드 화합물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는 방법:

    

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32. 제31항에 있어서, 적혈구 세포는 계통 특이적 적혈구 전구 세포, 망상 적혈구 및 적혈구로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
33. 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된, 하기 구조를 포함하는 TPO 펩티드 화합물을 함유하는 적혈구 세포 생성 증가용 약학 조성물:

    

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34. 빈혈을 치료하는 방법으로서, 하기 구조를 포함하는 유효량의 TPO 펩티드 화합물을 그를 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함하는 방법:

    

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35. 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된, 하기 구조를 포함하는 TPO 펩티드 화합물을 함유하는 빈혈 치료용 약학 조성물:

    

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