CN101360747A - 生产高浓度咯嗪溶液的方法和组合物 - Google Patents

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Abstract

提供了与使用常规技术制备的组合物相比，制备含有提高水平的可溶性咯嗪的组合物的方法。还提供了组合物和在溶液中具有较高溶解度的核黄素形式。

Description

生产高浓度咯嗪溶液的方法和组合物
相关申请的交叉参照
依据35U.S.C.§119(e)，本申请要求2007年1月27日申请的U.S.临时申请No.60/762,684和2007年1月24日提交的US专利申请号--，代理案卷号186412/US/2的权益，在此以其整体引入作为参考。
本申请进一步引入2004年11月5日申请的发明名称为“使用光敏剂和光的峰值波长减少血液和血液制品中污染”的US专利申请系列No.10/904,361，在此以其整体引入作为参考。
背景
a.领域
提供了提高溶液中咯嗪溶解度的方法和组合物，以及灭活生物学流体中病原体的方法和组合物。还提供了一种新型的溶解度提高的核黄素。
b.相关技术
例如HIV、肝炎和其他的病毒以及细菌这些感染性微生物造成的全血或血液制品的污染对那些必须接受全血输血或给予不同血液制品或血液成分的患者造成了严重的健康危害。这类血液成分包括红血细胞、血浆、凝血因子VIII、血纤维蛋白溶酶原，纤连蛋白，抗凝血酶III，冷沉淀物，人血浆蛋白级分，白蛋白，免疫血清球蛋白，凝血酶原复合物，血浆生长激素和其他从血液分离的成分。
一种为受血者提供安全的血液或血液制品的解决方法是在患者体内使用该原料之前筛查血液或血液制品的污染(在此所用的术语“血液”和“血液制品”可以互换使用)。当血液制品的测试对于特定的病原体是阳性时，从流通中除去该血液制品并被销毁。然而，血液筛查操作可能会因为不适当的特异性和灵敏度而不能检测到致病性污染物，例如，筛查血液制品中丙肝的存在，当该血液受到西尼罗病毒感染，或筛查该血液制品丙肝，但该病毒的存在量低于特定筛查方法检测的灵敏度时。在这些情况下，血液筛查器将会认为该血液不含有可检测水平的丙肝污染而让该血液处于流通中，但事实上该血液制品其实受到西尼罗病毒的污染或一定水平的丙肝污染，这将会危害受血者的健康。
第二种为受血者提供安全血液制品的解决方法是在受血者体内使用前对原料“灭菌”。一种特别有用的血液制品灭菌方法是直接给血液制品添加至少一种光敏剂。一些类型的光敏剂对核酸具有高亲和力。通常，血液制品中的核酸与病原体的存在是相联系的，这让光敏剂可以优先靶向血液制品中的病原体。随后在对于光敏剂适当的波长下对血液制品进行辐照，使吸收的能量从光敏剂转移至能量接受者，即，能量转移至病原体的核酸。使用这种处理破坏了血液制品中基本上所有的病原体，否则，受血者将会接受受污染的血液并且处于受特定病原体感染的危险中。血液制品中光敏剂的有效量或有效水平是确保破坏样品中病原体的一个重要方面。
光敏剂驱动的对微生物破坏的有效性部分基于与微生物有效接触的光敏剂的含量或浓度，部分基于为了激活化合物并引起微生物杀灭而到达那些光敏剂的“光剂量”。一般而言，将光剂量最大化，以便活化光敏剂，但不会引起对周围血液或流体产品，即红细胞、血小板等的破坏。
然而，已经证明了给血液制品提供足量的光敏剂以提供限定体积原料中的病原体的有效杀灭或灭活是困难的。特别地，不同光敏剂的溶解度(以其Ksp来测量)限制了可以加入血液制品中的光敏剂的含量。在制备用于血液制品中的光敏剂时，首先必须将固体光敏剂与溶剂混合以把原料放入溶液中，然后将该溶液以一定的比例加入产品中，该比例不会不利于血液制品的渗透压。这通常给出了在“灭菌”处理过程中血液制品可以加入多少光敏剂的限制。
光敏剂的稀释量可能导致对病原体的杀灭和处理无效。因此，在血液制品的灭菌处理中使用高浓缩的光敏剂溶液是有益的，该光敏剂溶液以小剂量加入血液制品中，但同时为样品提供了适当水平的光敏剂来保证病原体灭活。此外，寻找新的光敏剂和光敏剂形式来提供血液制品处理中的新手段。新的光敏剂及其形式可以提供从新化合物至带有病原体的血液提高的能量转移以及对于含有血液制品的包含物提供改进的溶解度特征。
面对这样的背景，产生了本发明的公开内容。
发明概述
一方面，提供了将水性介质中的咯嗪浓度提高至高于环境温度和气压下的咯嗪典型饱和点的方法。将温度超过或等于80℃的水性介质加入一定量的咯嗪中以形成超过室温(22℃)和大气压(1个大气压)下咯嗪饱和点的咯嗪溶液。然后将该溶液冷却以产生咯嗪浓度高于环境温度和气压下咯嗪典型饱和点的水性介质。
在不同的实施方案中，水性介质可以具有酸性pH(例如，约4至约5的pH)和/或约80℃至约90℃的温度。水性介质可以包括盐，如单价盐。在特定的实施方案中，咯嗪是核黄素。可以将咯嗪溶液进一步灭菌，如在大于1个大气压和至少120℃的温度下。
在另一个方面中，提供了核黄素衍生物形式。该核黄素衍生物形式在525nm波长具有等于或小于0.95的相关系数，和/或在波长500nm以上作为浓度函数的不同于可溶性核黄素的吸光度曲线。在更进一步的实施方案中，通过将核黄素混入具有酸性pH和大于约80℃温度的水性介质中，然后冷却该核黄素溶液的方法制得核黄素衍生物形式。
在另一个方面中，提供了用于处理生物流体如血液制品的组合物。在一种变化中，组合物包括可溶性咯嗪，如核黄素，和单价盐，可溶性咯嗪至少为120μM，超过1个大气压和22℃下可溶性咯嗪的饱和点。在进一步的变化中，可溶性咯嗪的浓度至少为500μM。在进一步的变化中，可溶性咯嗪为约580μM。单价盐可以提供至少0.9％的盐浓度。在进一步的变化中，组合物包括碳酸氢钠，和/或具有约4至约5的pH。
在其他方面中，提供了灭活生物流体中病原体的方法。将含有一定浓度的咯嗪溶液的组合物加入生物流体中以灭活病原体。在不同的实施方案中，可溶性咯嗪的浓度至少为100μM、250μM、至少为500μM，或约580μM。在其他实施方案中，生物流体是血液制品。
附图简述
图1A，1B和1C说明了根据在此所述的实施方案制备的核黄素衍生物α型的吸光度(附图A和B)和相关系数(C)特征。
发明详述
不同的实施方案提供了改良的光敏剂组合物，特别是改良的咯嗪组合物，其具有提高的溶解度，并因此具有提高的浓度。所得到的咯嗪溶液的溶解度和浓度超出了溶液外咯嗪的溶解度和浓度。所得到的咯嗪溶液提供了可以将更大量的咯嗪加入含有病原体的生物流体中，导致提高的病原体灭活。还提供了比未处理的核黄素具有更高饱和点的核黄素衍生物形式。
定义
提供以下定义来促进理解在此常用的特定术语，但是这不意味着限定本发明公开的范围。
如在此所用的，“生物流体”指的是动物，优选哺乳动物体内发现的任何液体。通常，生物流体不含有大量含有核酸的物质。例如，在此公开的生物流体包括血液制品。“血液制品”指的是血液和全部的血液成分、血液组分和含有来自血液的蛋白质的治疗性蛋白组合物。
如在此所用的，“咯嗪”指的是所有的咯嗪和异咯嗪，及其天然和合成的衍生物，包括，但不限于：7，8-二甲基-10-核糖醇基异咯嗪(核黄素或维生素B-2)、7，8，10-三甲基异咯嗪(光黄素)、7，8-二甲基咯嗪(光色素)、异咯嗪-腺嘌呤二核苷酸(黄素腺嘌呤二核苷酸[FAD])和咯嗪单核苷酸(例如，黄素单核苷酸[FMN])。
如在此所用的，“病原体”指的是可以感染并具有在宿主体内引起疾病潜能的生物体。特别地，病原体本质上通常是细菌或病毒。如在此所述的，术语病原体和微生物可以互换。
如在此所用的，术语“病原体的灭活”指的是通过杀死病原体或其他干扰病原体繁殖的能力来部分或完全防止病原体的复制。如在此所用的，术语“消灭病原体”指的是完全阻止所有的病原体的复制。
如在此所用的，“水性介质”指的是其中溶剂为水的任何介质。
如在此所用的，“核酸”(“NA”)指的是脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)和肽核酸(PNA)，及其修饰的和/或功能化的变型。相似地，在此所用的术语核苷酸包括核糖核酸和脱氧核糖核酸的单个单体以及核苷和核苷酸类似物，以及修饰的核苷酸如标记的核苷酸。核苷酸还包括非天然产生的类似物结构，例如其中糖、磷酸盐和/或碱基单位不存在或由其他化学结构代替的那些。术语核苷酸也包括单个肽核酸(PNA)单体(Nielsen等，Bioconjug.Chem.(1994)5(1)：3-7)和锁核酸(LNA)单体(Braasch和Corey，Chem.Biol.(2001)8(1)：1-7)。
如在此所用的，“峰值波长”指的是由具有特定峰强度的波长周围集中的窄范围中发射的光。
如在此所用的，“溶解度”指的是与过量物质平衡的溶液中所含的物质量。在这些条件下，将溶液称为饱和的。物质的Ksp指的是在该物质的饱和溶液中，该物质的离子浓度的乘积。
光敏剂和灭活病原体的方法
咯嗪结合核酸的光敏剂。光敏剂通常非特异性地结合核酸分子，同时通过干扰并因此防止生物体核酸复制来灭活含有核酸的微生物。通过光敏剂特异性的特定波长的光照射来活化光敏剂，这可以引起能量从光敏剂转移至能量受体，例如，核酸碱基对。一般而言，光敏剂特异性是基于光敏剂与微生物核酸密切地接近，这导致了光敏剂与病原体核苷酸的结合。
当待处理的生物流体缺乏或只有有限量的非病原核酸分子时，即，当生物流体中存在的核酸主要是由于病原体的存在，而不是由于同一样品中其他细胞引起时，光敏剂是最为有用的。因此，例如，生物流体的典型处理过程包括将光敏剂加入潜在受到致病微生物污染的血液制品中。
如果血液和/或血液成分的病原体的减少是所需的，将暴露于光时充当光敏剂的添加剂可以结合在此所述的方法、化合物以及组合物来使用。这样的添加剂包括内源光敏剂。术语“内源”意思是在人或哺乳动物体内天然找到的，由躯体合成的或由于作为必需食物(例如，维生素)摄入的或体内代谢产物和/或副产物的形成。
这样的内源光敏剂的实例是咯嗪，例如7，8-二甲基-10-核糖醇基异咯嗪(核黄素)、7，8，10-三甲基异咯嗪(光黄素)、7，8-二甲基咯嗪(光色素)、异咯嗪腺嘌呤二核苷酸(黄素腺嘌呤二核苷酸[FAD])、咯嗪单核苷酸(也称为黄素单核苷酸[FMN]和核黄素-5-磷酸盐)，其代谢产物和前体。术语“咯嗪”包括异咯嗪。内源基的衍生光敏剂包括合成产生的内源光敏剂的类似物和同系物，其可以含有或缺乏衍生它们的光敏剂的低级(1-5)烷基或卤素取代基，并且其保持了功能和基本上的无毒性。当使用内源光敏剂时，特别是这样的光敏剂是本质上无毒的或在光照射后不会产生有毒光产物时，在净化后不需要除去或纯化步骤，同时处理过的产物可以直接返回患者体内或给予需要其治疗效果的患者。
将光敏剂暴露于特定波长的光时，它们吸收能量，使得光敏剂并且所有结合光敏剂的核酸光解。光敏剂的效力取决于病原体结合的光敏剂的浓度和光照量(因为激发的光敏剂是破坏病原体中的活化剂)。一般来讲，因此光化学剂量等于加入流体的光敏剂的浓度和光剂量。
光剂量基于给致病微生物提供最大破坏而对目标生物流体无不利作用。在此定义的峰值波长指的是由具有特定峰强度的波长周围集中的窄波段发射的光。在一个实施方案中，可见光集中在大约470nm波长的周围，并具有大约200nm至约550nm的最大强度。在一个可替换的实施方案中，光集中在308nm周围，并具有大约280nm至约370nm的最大强度。注意到术语“光源”或“照射”指的是辐射能的发射体，并可以包括在可见和/或紫外区的能量。如上所述，通过改变光剂量难以提高目标流体内的光敏剂剂量，因为更强或更有效的光剂量可能对流体内其他成分的稳定性有不利作用，即，裂解血液制品样品中的红细胞。
如之前在US专利公开20050112021(Hlavinka等，2005年5月26)中所述的，在此引入作为参考，将光敏剂加入目标流体中，并将所得到的流体混合物暴露于合适峰值波长和含量的光辐射来活化光敏剂，但是低于引起生物学成分显著非特异性破坏或干扰流体中存在的其他蛋白质的生物学活性。
可以通过将含有至少120μM可溶性咯嗪的溶液或组合物加入生物流体中来灭活或消灭病原体。可以通过在此所述的方法将溶液或组合物调节至所需的咯嗪浓度，高于1个大气压和22℃时未处理的浓度。咯嗪溶液提高的溶解度和浓度使得可以将更大量的咯嗪加入含有病原体的生物流体中。这导致了提高的病原体灭活。
使用如在此所述的光敏剂可以消灭或灭活的微生物包括，但不限于，病毒(胞外和胞内的)、细菌、噬菌体、真菌、血液传输的寄生虫和原生动物。说明性的病毒包括人获得性免疫缺陷病毒(HIV)、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、sinbis病毒、巨细胞病毒、水泡性口炎病毒、单纯疱疹病毒(I型和II型)、西尼罗病毒、人亲T-淋巴性逆转录病毒、HTLV-III、淋巴结病病毒LAV/IDAV、细小病毒、输血-传输(TT)病毒、EB病毒等。可以使用光敏剂消灭或灭活的噬菌体包括，但不限于，.PHI.X174、.PHI.6、λ噬菌体、R17、T4、T2等。可以使用光敏剂消灭的细菌包括，但不限于，绿脓杆菌(P.aeruginosa)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermis)、单核细胞增生李斯特氏菌(L.monocytogenes)、大肠杆菌(Escherichia coli)、肺炎克雷伯氏菌(K.pneumonia)、粘质沙雷菌(S.marcescens)等。
制备咯嗪组合物的方法
还提供了将水性介质中的咯嗪浓度提高至超过咯嗪的常规饱和点的方法。在一个实施方案中，将超过咯嗪饱和点含量的咯嗪加入温度高于或等于80℃的水性介质中。将溶液冷却时，所得到咯嗪溶液中的咯嗪超过了咯嗪的饱和点。可以在介质加热前或加热时将咯嗪加入水性介质中。随着时间的推移，咯嗪在溶液中是稳定的，并且不会在水性溶液中过饱和。
咯嗪可以商业购买。晶状咯嗪，例如，核黄素(7，8-二甲基-10-核糖醇基异咯嗪)、FMN、FAD、光色素等，与特定形式无关，可以从Merck获得，参见例如，Merck Index，第十版，1983。
测量咯嗪的含量，用于与溶剂如水性介质或水性介质和非极性溶剂组合物混合。例如，测量在22℃和1大气压下的咯嗪核黄素饱和点浓度为114μM。通过在此所述的方法制备的咯嗪的浓度显著高于最初溶解的浓度。可以将最终的咯嗪浓度定为等于和/或高于120μM、150μM、200μM、250μM、300μM、350μM、400μM、450μM、500μM、550μM、580μM、600μM或650μM。在特定的实施方案中，可以将咯嗪的浓度定为大约500μM±12.5μM。
可以调节溶剂的pH。例如，调节pH至酸性pH(即小于或等于6.5)。可以改变溶剂pH至小于或等于6.5、6.0、5.5、5.0、4.5、4.0、3.5、3.0或2.5的最大pH，和任选大于或等于2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5或6.0的最小pH。例如，将pH改变至4.0至5.0。可以使用任何酸来改变pH，包括例如，盐酸(HCl)、硫酸(H2SO4)、柠檬酸(C6H8O7)和醋酸(CH3COOH)。通常的碱可以用来改变pH，包括氢氧化钠(NaOH)和碳酸氢钠(NaHCO3)。
可以将单价盐，例如，氯化钠，与溶剂混合以提供约0.9％的盐度。另外，制备溶液来包括约200mM醋酸钠(NaAc)。通常包括醋酸钠用于血液制品的最终用途，其中血液制品使用了10-20mM NaAc，用于血小板稳定性和活性，Bertulini等，Transfusion(1992)32：152；Murphy，Blood(1995)85：1929。如上所述，可以将NaAc和咯嗪以及咯嗪无关的盐和盐一起加入。对于含有溶剂的咯嗪的生产，加入的次序不是关键的。
在常规咯嗪溶液生产中，由于物质的边缘溶解性，即，Ksp，只制备了大约相当于114μM的溶液。可以将咯嗪的浓度定于高于典型饱和浓度的特定水平，如上文中所述的。
将水性介质被加热至给定的温度。例如，可以将水性介质加热至大于或等于60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃或95℃的最小温度，和任选小于或等于95℃、90℃、85℃、80℃、75℃、70℃或65℃的最大温度。在特定的变化中，温度为约80℃至约90℃。可以将溶液混合一段时间，如至少十至六十分钟，使咯嗪溶解。
然后在弹性塑料袋或其他类似的容器中，在增强的蒸汽、气压和温度下将加热并混合过的溶液高压灭菌。溶液没有体积的限制。特别地，在高蒸汽条件下，将溶液加热至约60℃到约100℃，优选约75℃至约85℃，和约1atm至约4个atm(50psi)的气压。
可以将组合物贮存以备后用。例如，可以将醋酸钠加入组合物中。将组合物分配至灭菌容器中，例如，聚丙烯袋，随后可以将其加热(至例如120℃-130℃)一段合适的时间，同时以避光的方式对组合物蒸汽灭菌。
这种方式制备的咯嗪溶液可以用于处理生物流体如血液制品。含有咯嗪的溶液与不是使用在此所述的方法制备的咯嗪溶液相比较具有提高的溶解度和稳定性。
然后将通过在此所述方法制备的组合物直接加入生物流体，如血液制品中。在特定的实施方案中，每170ml至365ml血液制品中加入大约35ml的500μM咯嗪溶液。将咯嗪组合物加入血液制品中与先前工艺是不同的对照，它需要将更多的稀释咯嗪组合物加入血液制品中。
核黄素衍生物形式
通过在溶液中加热和冷却的核黄素制备方法产生了一种与未处理核黄素相比较在室温下具有提高的溶解性的核黄素衍生物形式。将该化合物称为核黄素衍生物α。核黄素衍生物α可以用于生物流体的灭菌处理中。
核黄素衍生物α是在酸性条件下通过加热产生的核黄素的高溶解形式。核黄素衍生物形式的化学结构和活性与未处理的核黄素相同。不希望受到特定理论的限制，核黄素衍生物形式表现出一种改变过的核黄素构象，将水排除在水合作用范围之外。该构象变化使得核黄素可以作为一种有机溶剂，因此提高了溶液中核黄素的溶解度。分光镜数据与更疏水环境中溶解核黄素相一致。核黄素衍生物α随着时间的推移是稳定的，同时不是一种过饱和溶液。
得自在此所述方法的至少一部分核黄素原料含有核黄素衍生物α。核黄素衍生物α可以是唯一存在或作为核黄素组合物的一部分或与其他咯嗪化合物一起。化合物在室温下是高度稳定的并且可以贮存很长时间，同时保持用于处理生物流体的高活性。如以下实施例所示的，核黄素衍生物α提供了在500nm以上波长时作为浓度函数的变化或改变的吸光度曲线。
与未处理的核黄素相比，核黄素衍生物α改变的吸光度曲线表明这种新核黄素衍生物的存在(参见Beer定律，A＝εbc，其中A是吸光度，ε是克分子吸光率，b是样品即比色皿的径长，以及c是溶液中组合物的浓度)。
在此公开的方法、组合物以及装置也可以用来制备疫苗、减少流体中的朊病毒，也可以通过在此所述的方法、组合物以及装置处理含有源自血液那些以外的生物活性蛋白的IV流体。
具体实施方案
通过参照以下的实施例将更容易理解本发明，只是通过说明来提供这些实施例并不是用来限制。
实施例1：高可溶性核黄素的批量生产
混合大量溶液的方法：
以下操作是在净化室进行的。对于给定所需大体积制造的核黄素溶液，称量足够的固体核黄素和氯化钠并分配至装有80℃水的罐中来产生具有500μM±12.5μM的核黄素和大约153.6mM±3.6mM的溶液。特别地，1000L的批量中由0.1882kg核黄素9.0kg氯化钠构成。注意到核黄素和氯化钠可以同时或以任一次序单独加入。
更特别地，将氯化钠加入WFI(注射质量的水或“注射用水”)。WFI的温度为80℃，同时用0.1M HCl将pH调节至5.0±0.1。然后加入核黄素，并混合约15分钟。再次注意到氯化钠和核黄素的加入次序是无关的。将溶液的温度维持在约80℃。进行质量控制分析来测定组合物的纯度。
填充袋子和蒸汽灭菌的方法：
然后将上述溶液通过Durapore 10”0.45μm一列式滤器过滤。然后将过滤的大量溶液转移至灌装机，在那里将溶液分配至35ml标记的PVC袋中。然后在使用超量杀灭法蒸汽灭菌之前，将该袋子包裹于聚丙烯真空外包装中。
超量杀灭法按照ISO 11134：1994进行，名称为保健产品的灭菌方法-批准和常规控制的要求-工业湿热灭菌。ISO为使用蒸汽灭菌技术制备医药制品提供了指导。
灭菌周期包括在聚丙烯袋中在4个atm气压下将溶液加热至121℃大约15分钟。然后将袋子放入标记的铂袋中以防止光暴露于溶液(避免核黄素的光降解作用)来进行蒸汽灭菌。然后通过精加工品测试来测试样品-该样品具有以下参数：核黄素，500±25μM；光色素，＜75μM；氯化钠，154±7mM；显微镜下可见颗粒，＞10μm(6000/容器)，＞25μm(600/容器)；pH，4.0-5.1；内毒素，＜0.5EU/ml；以及无菌度，≤10-6(流体路径的无菌保证水平(SAL))。
实施例2：核黄素衍生物α
使用实施例1中上述的方法制备称为核黄素衍生物α的核黄素衍生物。为了证实所述物质含有核黄素，在波长490nm和530nm之间以2nm到5nm的间隔测试组合物的吸光度。然后将吸光度值代入Beer定律(A＝εbc)中，其中A是吸光度，ε是核黄素克分子吸光率，b是样品即比色皿的径长，以及c是溶液中组合物的浓度。对应每个吸光度准备浓度，并且如图1A，1B和1C中所示的绘制。吸光度对浓度的直线斜率等于克分子吸光率(ε)。
有趣的是，当测量图1C数据的相关系数时，即，对每个波长作图的浓度和制得的相关系数，鉴定500nm以上波长的实质性偏差，特别是在510nm。图1C中的数据表明测试的组合物中存在不同的核黄素衍生物形式，因此可以使用在此所述的方法制备。将该衍生物称为核黄素衍生物α。
实施例3
将核黄素(大约70mg)加入盐水(大约200ml)中，并在加热板上连续混合。将容器封盖，并且将溶液混合40分钟。将溶液通过0.2微米的过滤器过滤。将过滤的溶液以1∶10的比例稀释，并测量其吸光度。测定核黄素的浓度为540μM。光谱显示没有核黄素分解的迹象。
将3mL核黄素和147ml盐水混合。测量其吸光度，同时测定浓度为9.9μM。将30ml核黄素/盐水溶液分别转移至四个75cm2烧瓶中，其中同时照射两个。
测定核黄素溶液的浓度为515μM和528μM，超过了环境温度和气压下溶解于溶液中的未处理核黄素的114μM浓度。
实施例4
随着时间测量核黄素浓度的稳定性来确定其稳定性。
制备了不同的核黄素制剂。
在22℃时将核黄素溶解于水性介质中，同时测量其浓度为114μM。
通过将10mg核黄素加入100mL盐水中，在37℃加热30分钟，在搅动板上混合20分钟，并通过20微米的过滤器过滤而制得样品1-3。
通过将10mg核黄素加入100mL盐水中，加热，并通过0.2微米的过滤器过滤而制得样品4。
通过将20mg核黄素加入100mL盐水中，加热，同时混合30分钟，并通过0.2微米的过滤器过滤而制得样品5。
通过将5mg核黄素加入10mL盐水中，在60℃水浴加热30分钟，剧烈震荡30秒，并通过0.2微米的过滤器过滤而制得样品6。
显示了每种制备的核黄素组合物的浓度稳定性。每个实验热处理过的核黄素样品的核黄素浓度都超过未处理的对照样品。此外，储存于环境温度和大气压下时，该浓度在一段时间内保持稳定。
                           表1
  样品   第0天的核黄素浓度(μM) 第5天的核黄素浓度(μM)
  对照   114   114
  1   154   153
  2   149   146
  3   144   144
  4   217   218
  5   389   352
  6   473   未测量
应理解对于本发明公开的目的可以对本发明形成各种改变和变化，这些改变和变化落入本发明的范围之内。本领域技术人员可以形成显而易见的各种其他改变，并且包括在在此公开的方法，化合物和组合物的精神中。
说明书含有对专利，专利申请和出版物的各种引用，在此将其引入作为参考，用于所有的目的。

Claims (22)

1.一种将水性介质中的咯嗪浓度提高至超过咯嗪饱和点的方法，该方法包括：
将一定量的所述咯嗪加入所述水性介质中，其中咯嗪量超过所述咯嗪在1个大气压和22℃下的饱和点；
将所述水性介质加热至等于或大于80℃的温度；和
将所述水性介质冷却来产生具有超过咯嗪饱和点的咯嗪浓度的水性介质。
2.权利要求1的方法，其中在所述加热步骤前加入咯嗪。
3.权利要求1的方法，其中在所述加热步骤后加入咯嗪。
4.权利要求1的方法，其中水性介质具有约4至约5的pH。
5.权利要求1的方法，其中水性介质具有约80℃至约90℃的温度。
6.权利要求1的方法，其中水性介质进一步包括单价盐。
7.权利要求1的方法，其中咯嗪是核黄素。
8.权利要求1的方法，进一步包括在至少120℃温度及气压下将水性介质灭菌。
9.一种灭活生物流体中病原体的方法，包括：
将包括至少120μM可溶性咯嗪的组合物加入生物流体中来灭活生物流体中的生物病原体。
10.权利要求9的方法，其中组合物含有至少250μM可溶性咯嗪。
11.权利要求9的方法，其中组合物含有至少500μM可溶性咯嗪。
12.权利要求9的方法，其中组合物具有约580μM可溶性咯嗪的浓度。
13.权利要求9的方法，其中所述制备步骤包括：
将一定量的所述咯嗪加入所述水性介质中，其中咯嗪量超过所述咯嗪在1个大气压和22℃下的饱和点；
将所述水性介质加热至等于或大于80℃的温度；和
将所述水性介质冷却。
14.权利要求9的方法，其中生物流体是血液制品。
15.一种核黄素衍生物形式，其在525nm波长时具有等于或小于0.95的相关系数和在超过500nm波长时不同于可溶性咯嗪的作为浓度函数的吸光度曲线。
16.权利要求15的核黄素衍生物形式，通过以下方法制得，将核黄素混入具有酸性pH和具有至少80℃温度的水性介质中，然后冷却核黄素溶液。
17.用于处理血液制品的组合物，包括：约150μM至约580μM可溶性咯嗪和单价盐。
18.权利要求16的组合物，其中可溶性咯嗪的浓度为约580μM。
19.权利要求16的组合物，其中咯嗪是核黄素。
20.权利要求16的组合物，进一步包括碳酸氢钠。
21.权利要求16的组合物，其中组合物具有约4至约5的pH。
22.权利要求16的组合物，其中单价盐提供了至少0.9％的盐度。
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