CN101353345A - 一种多胺与聚酰胺缀合物及其制备方法 - Google Patents
一种多胺与聚酰胺缀合物及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101353345A CN101353345A CNA2008101196983A CN200810119698A CN101353345A CN 101353345 A CN101353345 A CN 101353345A CN A2008101196983 A CNA2008101196983 A CN A2008101196983A CN 200810119698 A CN200810119698 A CN 200810119698A CN 101353345 A CN101353345 A CN 101353345A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- methylpyrrole
- amino
- acyl group
- methyl
- tetraazacyclododecanand
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
一种多胺与聚酰胺缀合物及其制备方法属于分子生物学领域。本发明提供的聚酰胺与双大环多胺缀合物，是N，N－(二甲氨基)丙基－4－(4－(4－(4－(3，5－双(1，4，7，10－四氮杂环十二烷－甲基)－苯氧乙酰)氨基－N－甲基吡咯－2－酰基)氨基－N－甲基吡咯－2－酰基)氨基－N－甲基吡咯－2－酰基)氨基－N－甲基吡咯－2－酰胺，该缀合物的金属配合物具有切割核酸的功能。本发明提供了该缀合物的其制备方法。本发明为进一步合成DNA定点识别及切割试剂提供了良好的基础和有效的途径，具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种化合物及其制备方法，特别设计一种多胺与聚酰胺缀合物及其制备方法与以其金属配合物为活性成分的核酸切割试剂。
背景技术
设计、合成定点核酸切割试剂是当前化学和分子生物学研究的一个十分活跃的领域。含有N-甲基吡咯的寡聚酰胺能够穿透细胞膜与特定的碱基序列高亲和力地结合，并控制基因表达，是一类十分重要的化学物质(Blasko A，Browne KA，Bruice TC.J.Am.Chem.Soc.1994；116：3726；2.Gottesfeld JM，Neely L，Trauger JW，Baird EE，Dervan PB.Nature 1997；387：202)。因此，对寡聚酰胺类化合物的设计、合成及其生物活性的研究以及提高其分子亲和性、序列选择性和切割效率具有重要意义。
合成核酸酶是化学生物学发展迅速的一个具有挑战性的新领域，大环多胺和它的金属配合物也被合成作为仿酶催化剂(R.S.Dickins，J.A.K.Howard，C.W.Lehmann，J.Moloney，D.Parker，R.D.Peacock，Angew.Chem.1997，109，541-543；Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1997，36，521-523；S.Aime，M.Botta，S.G.Crich，B.G.Giovenzana，G.Jommi，R.Pagliarin，M.Sisti，J.Chem.Soc.，Chem.Commun.1995，1885-1886；S.Aoki，M.Shiro，T.Koike，E.Kimura，J.Am.Chem.Commun.1995，1885-1886；S.Aoki，M.Shiro，T.Koike，E.Kimura，J.Am.Chem.Soc.2000，122，576-584；B.Konig，Pelka，M.；Zieg，H.；Ritter，T.；Bouas-Laurent，H.；Bonneau，R.；Desvergne，J.-P.J.Am.Chem.Soc.1999；121，1681-1687；E.Kikuta，T.Koike，E.Kimura，J.Inorg.Biochem.2000，79，253-259)。
桥联多胺金属配合物由于具备双核协同作用，可大大提高其仿酶催化活性(D.E.Wilcox，Chem.Rev.，1996，96，2435；E.E.Kim，H.W.Wyckoff，J.Mol.Biol.，1991，218，449；Q.X.Xiang，J.Zhang，P.E.Liu，C.Q.Xia，Z.Y.Zhou，R.G.Xie，X.Q.Yu，Journal of InorganicBiochemistry.2005，99，1661-1669)
桥联多胺金属配合物的仿酶催化活性明显高于双倍量的单大环多胺金属配合物，但目前尚无将桥联多胺和聚酰胺相缀合的报道
发明内容
本发明的目的是提供一种全新的多胺与聚酰胺缀合物。
本发明提供的聚酰胺与多胺缀合物，是具有下述式(I)结构的N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺。
式(I)
该多胺聚酰胺缀合物的分子式为C55H84O6N18。
本发明的第二个目的是提供一种制备上述多胺与聚酰胺缀合物的方法。
本发明所提供的制备上述大环多胺与聚酰胺缀合物的方法，包括以下步骤：
1)制备3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸；
2)将步骤1)中制备的3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸溶于二氯甲烷中，再加入1.0-1.5倍于步骤1)所述3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸物质的量的1-羟基苯并三氮唑(HOBt)和N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)，HOBt以及N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)物质的量的和3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸均相等；于室温反应20-24小时，然后过滤除去二环己基脲(DCU)，保留滤液；
3)制备N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺；
4)向步骤2)所得滤液中，加入0.8-0.9倍于步骤1)所述化合物物质的量的N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺的DMF溶液，室温反应30-36小时，过滤，残余物用硅胶H柱层析分离得N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺，为淡黄色固体；
5)步骤4)中得到的N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺溶于二氯甲烷，再加入10.0-12.0倍于步骤1)所述3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸物质的量的三氟乙酸(TFA)，室温解析脱除叔丁氧羰酰，减压除去二氯甲烷和多余的三氟乙酸，然后在10mmol NaOH(40％)中解析，得到产物N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺。
在上述制备N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺的方法中，步骤1)所述的3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸可按下述步骤制备：
1)合成5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯基苄醚
N2保护下，将4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷溶于乙腈中，加入3，5-二溴甲基苯基苄醚4和无水碳酸钠，回流反应20hr，其中4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷、3，5-二溴甲基苯基苄醚4和无水碳酸钠的物质的量之比为2.95∶0.55∶3.57；
过滤除去不溶物，蒸出溶剂，残余物用水溶解，氯仿萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥过夜，过滤，除去溶剂，残余物用硅胶H柱层析分离得淡黄色非晶形固体；
2)合成3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯酚
将步骤1)中制备的5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯基苄醚溶于30ml无水乙醇溶液中，加入质量百分比为5％的钯碳Pd/C，在1atm下氢化3hr，用硅藻土过滤，减压除去溶剂得白色非晶形固体，所述钯碳的物质的量是5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯基苄醚的0.10-0.15倍。
3)合成3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸乙酯
将步骤2)中制备的3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯酚溶于丙酮溶液中，加入无水碳酸钾和溴乙酸乙酯，回流反应10hr，加入冰水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，过滤，减压除去溶剂得淡黄色非晶形固体，；所述无水碳酸钾和溴乙酸乙酯的物质的量分别是3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯酚的1.0倍和3.0倍；
4)合成3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸
将步骤3)中制备的3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸乙酯溶于甲醇溶液，加入NaOH溶液，室温搅拌5hr，用柠檬酸调节pH＝4～5，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，过滤，减压除去溶剂得淡无色非晶形固体，即为3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸。
在上述制备N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺的方法中，步骤2)所述的3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸在二氯甲烷中的浓度可为0.20-0.35M，优选为0.25M；所述1-羟基苯并三氮唑(HOBt)和N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)的物质的量均与3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸的物质的量相等。
在上述制备N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺的方法中，步骤7)中加入的N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-硝基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺1mmol可先溶于25mlDMF，其浓度可为0.04M。
本发明的第三个目的是提供一种核酸切割试剂。
本发明所提供的核酸切割试剂，其活性成分是具有下述式(I)结构的N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺的金属配合物。
其中，在上述核酸切割试剂中，所述金属配合物的中心离子可以为Zn2+、Cu2+、La2+离子。
本发明的N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺的金属配合物具有核酸切割系统和识别系统，切割系统由多胺构成，识别系统由寡聚酰胺组成。本发明为进一步合成DNA定点识别及切割试剂提供了良好的基础和有效的途径，具有重要意义。
附图说明
图1本发明的多胺与聚酰胺缀合物的结构式
图2为本发明的多胺与聚酰胺缀合物的制备过程示意图
图3为本发明的核酸切割试剂电泳图谱
具体实施方式
实施例1、N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺的制备
N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺的合成过程如图2所示，具体包括以下步骤：
1、合成5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯基苄醚
N2保护下，将1.39g(2.95mmol)4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷溶于70ml乙腈中，加入0.55g(1.48mmol)3，5-二溴甲基苯基苄醚和0.38g(3.57mmol)无水碳酸钠，回流反应20hr，过滤除去不溶物，蒸出溶剂，残余物用水溶解，氯仿(30ml×5)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥过夜，过滤，除去溶剂，残余物用硅胶H柱层析分离(洗脱液：乙酸乙酯∶石油醚(60～90℃)＝1∶1)得淡黄色非晶形固体，产率78％。
2、合成3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯酚
将步骤1)中制备的5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯基苄醚(1mmol)溶于30ml无水乙醇溶液中，加入5％Pd/C，在1atm下氢化3hr，用硅藻土过滤，减压除去溶剂得白色非晶形固体，产率76％。所述钯碳的物质的量是5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯基苄醚的0.10-0.15倍。
3、合成3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸乙酯
将步骤2)中制备的3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯酚(1mmol)溶于20ml丙酮溶液中，加入无水碳酸钾和溴乙酸乙酯，回流反应10hr，加入100ml冰水，乙酸乙酯(40ml×4)萃取，无水硫酸镁干燥，过滤，减压除去溶剂得淡黄色非晶形固体，产率92％。所述无水碳酸钾和溴乙酸乙酯的物质的量分别是3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯酚的1.0倍和3.0倍
4、合成3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸
将步骤3)中制备的3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸乙酯(1mmol)溶于20ml甲醇溶液，加入20ml 10％NaOH溶液，室温搅拌5hr，用35％的柠檬酸调节pH＝4～5，乙酸乙酯(50ml×4)萃取，无水硫酸镁干燥，过滤，减压除去溶剂得淡无色非晶形固体，产率95％。
5、合成N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-硝基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺
在上述制备N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺的方法中，步骤3)所述的N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺可按下述步骤制备：
1)N-甲基吡咯与其1-1.2倍物质的量的CCl3COCl于室温进行酰化反应，得到N-甲基-2-三氯乙酰基吡咯；
2)N-甲基-2-三氯乙酰基吡咯与分别是其1.1和0.09倍物质的量的HNO3和H2SO4在-10℃进行硝化反应，得到4-硝基-2-三氯乙酰基-N-甲基吡咯；
3)4-硝基-2-三氯乙酰基-N-甲基吡咯与1倍的NH2CH2CH2CH2N(CH3)2室温反应，得到N，N-(二甲氨基)丙基-4-硝基-N-甲基吡咯-2-酰胺；
4)N，N-(二甲氨基)丙基-4-硝基-N-甲基吡咯-2-酰胺在10％的钯碳催化下与H2在室温条件下进行氢化反应，得到N，N-(二甲氨基)丙基-4-氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺，所述钯碳的物质的量是N，N-(二甲氨基)丙基-4-硝基-N-甲基吡咯-2-酰胺的0.05-0.15倍；
5)N，N-(二甲氨基)丙基-4-氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺与1倍的4-硝基-2-三氯乙酰基-N-甲基吡咯室温反应，得到N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-硝基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺；
6)N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-硝基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺在10％的钯碳催化下与H2在室温条件下进行氢化反应，得到N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺，所述钯碳的物质的量是N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-硝基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺的0.05-0.15倍；然后再与1倍的PyPyCOOH、1倍的1-羟基苯并三氮唑和1.2倍的N，N’-二环己基碳二亚胺所形成的活化酯于室温反应24小时，得到N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-硝基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺；
7)在0.1mol/L(0.621g 1mmol溶于10ml)N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-硝基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺的DMF溶液中，加入10％的钯碳室温下催化氢化还原硝基为氨基，反应时间为24小时，过滤除去催化剂，浓缩滤液得到N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺无色液体，所述10％钯碳的物质的量是N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-硝基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺的0.08-0.10倍。
6、合成N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺
1)将步骤5中制备的N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-硝基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺溶于25mlDMF溶液中，加入10％的钯碳室温下催化氢化还原硝基为氨基，反应时间为24小时，过滤除去催化剂，浓缩滤液得到N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺无色液体，所述10％钯碳的物质的量是N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-硝基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺的0.10倍；
2)将步骤4中制备的3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸溶于二氯甲烷中，再加入1.0-1.5倍于步骤1)所述3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸物质的量的1-羟基苯并三氮唑(HOBt)和N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)，于室温反应24小时，然后过滤除去二环己基脲(DCU)，保留滤液；
3)将步骤2)所得滤液直接倾入步骤1)的化合物中，室温搅拌反应24-26小时，过滤溶液，然后减压蒸馏蒸出二氯甲烷和DMF，残余物用硅胶H柱层析分离(洗脱液：CH3OH∶CHCl3＝10∶1)得N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺，为淡黄色非晶形固体；
4)步骤3)中得到的N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺溶于二氯甲烷，再加入4.5ml三氟乙酸(在此溶液中浓度为40％)室温解析5小时，脱除叔丁氧羰酰，减压除去二氯甲烷和多余的三氟乙酸，然后在10mmol NaOH(40％)中解析，得到产物N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺(C55H84O6N18)。
7、化合物的表征
1)按常规方法对3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯基苄醚进行了质谱、核磁共振氢谱和核磁共振碳谱分析。结果如下：
质谱：ESI-MS(m/z)：1176(M++Na)
氢谱：1H NMR(CDCl3，600MHz)δ1.400，1.437(br，54H，OC(CH3)3)，2.603(m，8H，CH2NCH2)，3.209～3.293(m，16H，NCH2CH2)，3.561(m，8H，NCH2CH2)，3.685(s，4H，NCH2Ar)，4.970(s，2H，OCH2Ar)，6.612(s，1H，OArH4)，6.754(s，2H，OArH2，OArH6)，7.247～7.284(br，1H，ArH4)，7.331～7.355(br，4H，ArH2，ArH3，ArH5，ArH6)ppm.
碳谱：13C NMR(CDCl3，600MHz)δ155.73，137.45，128.53，127.93，127.43，115.94，79.41，69.92，56.04，55.47，54.15，49.86，47.95，28.47ppm.
2)按常规方法对3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯酚进行了质谱和核磁共振氢谱分析。结果如下：
质谱：ESI-MS(m/z)：1064(M++1)
氢谱：1H NMR(CDCl3，600MHz)δ1.235～1.711(br，54H，OC(CH3)3)，2.112～2.609(m，8H，CH2NCH2)，3.352～3.703(m，24H，NCH2CH2)，4.106～4.173(s，4H，NCH2Ar)，6.848(s，1H，ArH4)，7.376，7.728(s，2H，ArH2，ArH6)ppm.
3)按常规方法对3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯酚进行了质谱和核磁共振氢谱分析。结果如下：
质谱：ESI-MS(m/z)：463(M++1)
氢谱：1H NMR(CD3OD，600MHz)δ2.894(m，8H，CH2NCH2)，3.001(m，8H，CH2N)，3.174(m，8H，NCH2)，3.241(m，8H，CH2NCH2)，4.172(s，4H，NCH2Ar)，6.759(s，1H，ArH4)，6.818(s，2H，ArH2，ArH6)ppm.
3)按常规方法对3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸进行了质谱和核磁共振氢谱分析。结果如下：
质谱：ESI-MS(m/z)：1122(M++1)
氢谱：1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.226～1.466(br，54H，OC(CH3)3)，2.857(br，8H，CH2NCH2)，3.401～3.887(m，28H，NCH2CH2，NCH2Ar)，4.624(br，2H，ArOCH2)，6.955(br，3H，ArH2，ArH4，ArH6)ppm.
4)按常规方法对N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺进行了质谱和核磁共振氢谱分析。结果如下：
质谱：ESI-MS(m/z)：1716(M++Na)
氢谱：1H NMR(DMSO-d6，600MHz)δ1.236(m，2H，CH2)，1.359～1.401(br，54H，OC(CH3)3)，1.612(m，2H，CH2)，2.139(s，6H，N(CH3)2)，2.243(m，2H，CH2)，2.546(m，8H，CH2NCH2)，3.170((br，12H，NCH3)，3.490～3.857(m，24H，NCH2CH2)，4.083(s，4H，NCH2Ar)，4.600(s，2H，OCH2)，6.730(s，1H，ArH4)，6.801(s，2H，ArH2，ArH6)，6.826，7.051，7.068，7.181(s，4H，PyH3)，7.214～7.234(br，4H，PyH5)，8.043(s，1H，CONHDp，加入重水后此峰消失)，9.865～9.914(br，4H，CONHPy，加入重水后此峰消失)ppm.
5)按常规方法对N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺进行了质谱、核磁共振氢谱和核磁共振碳谱分析。结果如下：
质谱：ESI-MS(m/z)：1094(M++1)，1116(M++Na)
氢谱：1H NMR(DMSO-d6，600MHz)δ1.85(m，2H，CH2)，2.73(m，8H，CH2NCH2)，2.788，2.795(s，6H，N(CH3)2)，2.838(m，8H，NCH2CH2)，3.047～3.115(br，18H，NCH2CH2，CH2)，3.248(q，2H，J＝6.0Hz，CH2)，3.735(s，4H，NCH2Ar)，3.819～3.861((br，12H，NCH3)，6.79(s，1H，ArH4)，6.93(s，2H，ArH2，ArH6)，6.96～7.10(br，4H，PyH3)，7.15～7.20(br，4H，PyH5)，8.14(s，1H，CONHDp，加入重水后此峰消失)，9.46～9.93(br，4H，CONHPy，加入重水后此峰消失)，10.16(s，1H，Me2NH，加入重水后此峰消失)ppm.
碳谱：13C NMR(DMSO-d6，600MHz)δ165.56，162.24，159.34，159.11，158.45，136.84，125.16，123.18，122.92，122.25，121.29，119.16，118.04，115.98，105.30，105.08，67.49，55.62，55.23，47.41，44.81，42.69，42.35，42.22，39.99，39.86，39.72，39.59，39.45，39.31，39.18，36.44，35.82，25.01ppm.
实施例2、N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺与Zn2+配合物切割pUC18
1)N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺与Zn2+配合物的制备
将1mmol N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺溶于4ml无水甲醇中，将2mmol高氯酸锌(溶于3ml的无水甲醇中)滴加到上述溶液中，生成淡黄色沉淀，过滤干燥得到所述N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺与Zn2+配合物。
2)切割pUC18
将2.938mgN，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺与Zn2+配合物加入200μL高纯水中得到8mmol/L的切割试剂200μL，用时稀释至所需浓度10μl的酶切体系：pUC180.04μg/μl，10mM Tris-HCl，pH7.3，t＝37℃，保温6h；反应完成后，进行1％琼脂糖凝胶电泳鉴定，上样5μl酶切体系+0.5μl loading buffer+2％SDS 0.5μl，85V电压，电泳时间1h，泳道1为对照，配合物浓度变化为2-9：10，50，100，150，200，300，400，500μM，泳道10为500bp Marker，电泳结束后经0.5μg/ml溴化乙锭染色，紫外成像。从图3可以观察到随着配合物浓度的逐渐增大，formI逐渐向formII转变，并有两条新条带出现，说明这种配合物不但具有明显的切割效果，而且具有独特的酶切位点。
Claims (2)
1.一种多胺与聚酰胺缀合物，是具有下述式I的结构，其名称为N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺。
式I
2.制备权利要求1所述缀合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)制备3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸；
2)将步骤1)中制备的3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸溶于二氯甲烷中，再加入1.0-1.5倍于步骤1)所述3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸物质的量的1-羟基苯并三氮唑和N，N’-二环己基碳二亚胺，所述1-羟基苯并三氮唑和N，N’-二环己基碳二亚胺的物质的量均与3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸的物质的量相等；于室温反应20-24小时，然后过滤除去二环己基脲，保留滤液；
制备N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺；
3)向步骤2)所得滤液中，加入0.8-0.9倍于步骤1)所述化合物物质的量的N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺的N，N-二甲基甲酰胺溶液，室温反应30-36小时，过滤，残余物用硅胶H柱层析分离得N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺，为淡黄色固体；
4)步骤3)中得到的N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺溶于二氯甲烷，再加入10.0-12.0倍于步骤1)所述3，5-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酸物质的量的三氟乙酸，室温解析脱除叔丁氧羰酰，减压除去二氯甲烷和多余的三氟乙酸，然后在NaOH中解析，得到产物N，N-(二甲氨基)丙基-4-(4-(4-(4-(3，5-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氧乙酰)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰基)氨基-N-甲基吡咯-2-酰胺。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA2008101196983A CN101353345A (zh) | 2008-09-05 | 2008-09-05 | 一种多胺与聚酰胺缀合物及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA2008101196983A CN101353345A (zh) | 2008-09-05 | 2008-09-05 | 一种多胺与聚酰胺缀合物及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101353345A true CN101353345A (zh) | 2009-01-28 |
Family
ID=40306388
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNA2008101196983A Pending CN101353345A (zh) | 2008-09-05 | 2008-09-05 | 一种多胺与聚酰胺缀合物及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101353345A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102120992A (zh) * | 2010-12-23 | 2011-07-13 | 乔元彪 | 一种人工核酸水解酶及其制备方法 |
-
2008
- 2008-09-05 CN CNA2008101196983A patent/CN101353345A/zh active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102120992A (zh) * | 2010-12-23 | 2011-07-13 | 乔元彪 | 一种人工核酸水解酶及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU695530B2 (en) | Synthesis of taxol, analogs and intermediates with variable a-ring side chains | |
| US8063203B2 (en) | Compositions and methods of making a photoactive agent | |
| Yang et al. | 1, 1′-Binaphthyl-based imidazolium chemosensors for highly selective recognition of tryptophan in aqueous solutions | |
| CN101679213A (zh) | 新方法 | |
| CN101597286B (zh) | 一种含有伯胺、叔胺和脲或硫脲的有机催化剂及其制备 | |
| EP3045459B1 (en) | Method for preparing intermediate compound of sitagliptin | |
| Jiang et al. | Chiral imidazole metalloenzyme models: Synthesis and enantioselective hydrolysis for α-amino acid esters | |
| CN101353345A (zh) | 一种多胺与聚酰胺缀合物及其制备方法 | |
| JP2009013139A (ja) | アゾペプチド複合体 | |
| Brettreich et al. | Convergent Synthesis of 1→ 3 C-Branched Polyamide Dendrons | |
| Herm et al. | Towards synthetic adrenaline receptors | |
| CN102503860A (zh) | 一种1，3-二取代脲和氨基甲酸酯的合成方法 | |
| CN113845527A (zh) | 手性大环分子及其制备方法、水溶性手性大环分子及其制备方法与应用 | |
| WO2020191329A1 (en) | Aramid amphiphile self-assembled nanostructures | |
| Su et al. | Enantioselective recognitions of chiral molecular tweezers containing imidazoliums for amino acids | |
| KR100314108B1 (ko) | 아실기 함유 헥사아자이소우르치탄 유도체의 제조 방법 | |
| Kalesse et al. | Remarkable hydrolysis of phosphodiester by neutral lanthanide (III) DO3A complexes | |
| CN1262574C (zh) | 一种大环多胺与聚酰胺缀合物及其制备方法与应用 | |
| CN101723872A (zh) | 一种对称的多胺与吡咯聚酰胺缀合物及其制备方法 | |
| US8741250B2 (en) | Hydroxylation of icosahedral boron compounds | |
| CN106674032B (zh) | 非天然手性丝氨酸合成新方法 | |
| CN112979695B (zh) | 1,2-二脂肪酰-sn-甘油-3-磷脂酰丝氨酸的制备方法 | |
| CN1258532C (zh) | 一种聚酰胺大环多胺化合物及其制备方法与应用 | |
| CN102382070A (zh) | N',n'',n''',n''''-四苄基环烯化合物的制备方法 | |
| CN109503430B (zh) | 一种邻氟邻亚胺基苯甲酸中间体化合物及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20090128 |