CN101353339B - 槲皮素铂的合成 - Google Patents

Abstract

槲皮素具有多方面的生理活性，有祛痰、平喘、降血脂等作用，对多种肿瘤细胞具有抗增生活性。铂类配合物有明显的抗癌作用。槲皮素与顺铂联合运用有协同效应。本发明把槲皮素和铂化合物在一定条件下反应，经回馏、蒸馏、层析、分离，得到槲皮素铂配合物。经过MTT法实验知道，槲皮素铂对肝癌HepG2、宫颈癌Hela和喉癌Hep2等肿瘤细胞增殖均有显著的抑制作用。

Description

槲皮素铂的合成

技术领域

本发明属于化学合成，具体的说是关于槲皮素铂的合成方法及其应用。

背景技术

槲皮素是植物中分布极广的黄酮类化合物，广泛存在于蔬菜、水果和中草药中，如圆葱、葡萄和银杏等都含有槲皮素。槲皮素具有祛痰、止咳和平喘作用，还有降低血压、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉等作用。近年研究表明，槲皮素在癌症防治上具有重要作用。槲皮素对肿瘤的化学预防和治疗作用越来越受到人们的关注，使槲皮素及其衍生物的研究进入一个崭新阶段。

槲皮素可减少DNA的复制，导致细胞分裂的延迟。槲皮素通过抑制K562人类白血病细胞中c-myc的表达，从而促进其分化凋亡，抑制其增殖。槲皮素的抗癌抗增生作用在大量的人体癌细胞实验和临床一期实验中体现出来。槲皮素对多种肿瘤细胞具有抗增生活性，如NK/ly腹水肿瘤细胞、人胃癌细胞、卵巢癌细胞OVCA433、乳腺癌细胞MDA-MB-435等。

Cipak L等研究发现，用槲皮素预处理HL-60和L1210白血病细胞，可增强顺铂诱导的凋亡作用，同时槲皮素与顺铂联合运用有协同效应。王立忠等研究发现槲皮素和顺铂对肺腺癌移植瘤的生长和肺结节转移具有协同抑制作用。高聪普等研究发现，小剂量槲皮素能够增强顺铂对恶性黑素瘤A375增殖的抑制和凋亡作用，能够抑制顺铂引起黑素瘤Hsp70蛋白的表达，从而增强顺铂对黑素瘤的凋亡诱导作用。

由于槲皮素的水溶性极差(＜7μg/ml)，药代动力学性质导致了生物利用度较低(＜3.6％)，所以槲皮素在临床上的使用受到了极大的限制。故以槲皮素为先导化合物对其进行结构修饰，合成出水溶性增强，药代动力学性质改善的槲皮素金属配合物，对于槲皮素的临床应用具有极其重要的意义。

槲皮素是金属离子的良好螯合配位体，可与许多金属离子形成多种稳定的金属配合物。所以近年来，对槲皮素金属配合物的研究逐渐增多。研究表明，槲皮素与某些金属形成配合物后生物活性和药理作用明显增强。槲皮素金属配合物与槲皮素配体相比，一般具有较强的抗肿瘤活性，并对多种癌细胞的生长具有抑制作用。

周晶等合成了槲皮素稀土金属配合物，通过MTT和SRB法试验，结果显示槲皮素稀土金属配合物对癌细胞的抑制率明显高于槲皮素。(Zhou，Jing；Wang，Liu-Fang；Wang，Jin-Yi；et al.Synthesis，characterization，antioxidative and antitumor activities of solidquercetin rare earth(III)complexes[J].Journal of Inorganic Biochemistry(2001)，83(1)，41-48.)。Frrer，Evelina G等合成了槲皮素钒配合物，研究表明槲皮素钒配合物可刺激I型骨生长，对磷酸酯酶有抑制作用，具有抗骨肿瘤作用。(Ferrer，Evelina G.；Salinas，Maria V.；Correa，Maria J.；et al.Synthesis，characterization，antitumoral and osteogenic activities ofquercetin vanadyl(IV)complexes[J].JBIC，Journal of Biological Inorganic Chemistry(2006)，11(6)，791-801.)。古练权等研究认为，槲皮素铬配合物等对糖尿病具有较好的治疗作用；(古练权，王玉芳，黄志书等.槲皮素类化合物及其糖苷的金属配合物及其应用[P].CN1817896A，申请日期：2006年3月10日.)。仇佩虹等研究认为，芦丁或槲皮素等邻-二羟基黄酮-硒配合物对白血病、鼻咽癌、肝癌、直肠癌、胃癌、乳腺癌、恶性淋巴瘤等细胞具有较强的抑制肿瘤细胞的活性，有可能发展成为新的抗肿瘤药物；(仇佩虹，吴建章，周鹏等.邻-二羟基黄酮-硒配合物制备方法及医学用途[P].CN101148445A，申请日期：2007年1月26日。)。谭君等研究认为，槲皮素与二价的金属离子如VO、CrO、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Mg、Ca、Pb和三价的金属离子如Al、Fe、La、Ce、Pr、Nd、Sm、Eu、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、Yb、Lu等生成的金属配合物能诱导肿瘤细胞凋亡，抑制Survivin蛋白表达，激活Caspase-3的活性。所以这些槲皮素金属配合物有望作为细胞诱导剂用于治疗肿瘤的药物。(谭君，王伯初，祝连彩等.具有细胞凋亡诱导效应的槲皮素类及其糖苷化合物的金属配合物[P].CN101220014A，申请日期：2008年1月18日。)。

槲皮素具有抗肿瘤活性，铂类配合物具有抗癌性，槲皮素和顺铂联合使用有协同效应。把槲皮素和铂化合物反应合成槲皮素铂，国内外未见报道。为寻找新型、高效、低毒的抗肿瘤药物，本发明进行了槲皮素铂的合成，并进行了抗肿瘤活性实验。

发明内容

槲皮素具有较高的超离域度，完整的大π键共轭体系，强配位氧原子与合适的空间构型，可作为金属离子的良好螯合配体。可与金属离子螯合成稳定的五元或六元环状化合物。

铂位于周期表第6周期，第VIII族，与铁、钴、镍为同一族。容易接受配位体的未共用电子对形成稳定的配合物。在一定条件下，当铂离子与槲皮素相遇时，能形成稳定的槲皮素铂配合物。

取槲皮素用醇溶解，另取铂盐用醇溶解。把两者混合，用碱调pH＝7.0-14.0，加热，回馏2-8h，过滤。沉淀用醇溶解，上聚酰胺层析柱，用不同浓度醇溶液梯度洗脱，收取设定区间的洗脱液，旋转蒸发仪蒸去溶剂。所得固体用乙酸乙酯多次重提，得深棕黄色固体。

合成槲皮素铂使用的醇为甲醇、或者乙醇、或者丙醇、或者异丙醇等醇。

在合成槲皮素铂时，使用的铂盐是四氯化铂、或者二氯化铂、或者氯铂酸、或者顺铂、或者其它可溶性铂盐等。

在合成槲皮素铂时，使用的碱为氢氧化钠、或者氢氧化钾、或者氨水、或者吡啶、或者碳酸钠、或者碳酸氢钠、或者碳酸钾、或者碳酸氢钾、或者甲醇钠、或者乙醇钠等碱性化合物，或者其任意两个或两个以上以任意比例混合后的混合物。

具体实施方式

槲皮素铂配合物的合成

取0.302g(1mmol)槲皮素，加入20ml甲醇，搅拌溶解。另取0.337g(1mmol)四氯化铂，加入20ml甲醇，搅拌使完全溶解。把两者混合，用氨水调pH＝8.4，加热，回馏4h，过滤。沉淀用甲醇溶解，上聚酰胺层析柱，用不同浓度甲醇溶液梯度洗脱，收取设定区间的洗脱液，旋转蒸发仪蒸去溶剂。所得固体用乙酸乙酯多次重提，得深棕黄色固体。

槲皮素铂配合物对肿瘤细胞增殖的抑制作用：

取对数生长期人肝癌HepG2、宫颈癌Hela和喉癌Hep2细胞用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基稀释为2×10⁶/ml，接种于96孔板中，每个样品接种10孔，每孔100μl，之后依次加入待测药物、阴性对照组、阳性对照组，并保留仅加培养基的空白组。随后在37℃，5％CO₂培养箱中连续培养24小时，然后每孔加入10μl 5mg·ml^-1的MTT溶液，连续培养4小时。吸去上清，每孔加入100μlDMSO，在570nm波长处用酶标仪测OD值。用下面的公式计算细胞增殖抑制率，并利用公式T/C％＝100×OD_阴性/OD_样品做回归计算药物的半数抑制浓度IC₅₀。

表1.MTT法观察槲皮素铂配合物和槲皮素对肿瘤细胞增殖的抑制作用

*与阴性组比较，p＜0.05，**与阴性组比较，p＜0.01

从上表可见，槲皮素铂配合物各浓度对人肝癌HepG2、宫颈癌Hela和喉癌Hep2细胞的增殖均有抑制作用，且呈良好的量效关系，用公式T/C％＝100×OD_阴性/OD_样品做回归计算可知槲皮素铂配合物对人肝癌HepG2、宫颈癌Hela和喉癌Hep2细胞的半数抑制浓度IC₅₀分别为25.65±0.82μmol·L^-1、68.26±0.89μmol·L^-1、53.76±1.06μmol·L^-1。槲皮素铂同阴性对照组的肿瘤抑制率比较有极显著差异(P＜0.01)。而槲皮素铂配合物与槲皮素的肿瘤抑制作用相比较无统计学差异。

考虑到槲皮素铂的溶解度远大于槲皮素，这很有可能带来生物利用度的大幅度提升，具有进一步开发的意义。

Claims (4)

1.一种槲皮素铂的合成方法，其特征在于：

取槲皮素用醇溶解，另取铂盐用醇溶解；把两者混合，用碱调pH＝7.0-14.0，加热，回馏2-8h，过滤；沉淀用醇溶解，上聚酰胺层析柱，用不同浓度醇溶液梯度洗脱，收取设定区间的洗脱液，旋转蒸发仪蒸去溶剂；用乙酸乙酯多次重提，得深棕黄色固体。

2.根据权利要求1所述，合成槲皮素铂使用的醇为甲醇、或者乙醇、或者丙醇、或者异丙醇。

3.根据权利要求1所述，合成槲皮素铂使用的铂盐是四氯化铂、或者二氯化铂、或者氯铂酸、或者顺铂。

4.根据权利要求1所述，合成槲皮素铂使用的碱为氢氧化钠、或者氢氧化钾、或者碳酸钠、或者碳酸氢钠、或者碳酸钾、或者碳酸氢钾、或者甲醇钠、或者乙醇钠，或者其任意两个或两个以上以任意比例混合后的混合物。