CN101348768A - 用啤酒废水培养酵母菌的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用啤酒废水培养酵母菌的方法,步骤为:(1)制备玉米淀粉糖化液;(2)选取啤酒废水:取啤酒生产厂的废水,静置30~40min,取上清液;(3)配制培养基:将上清液1000ml与7~10g粉状玉米浆混合,搅拌使其溶解,加入所述玉米淀粉糖化液4~6ml,调节pH值为4~5,分装进容器中,灭菌,制成培养基;(4)培养:将酵母菌液接种于步骤(3)制成的培养基中,培养。本发明的方法选取啤酒生产厂排出的混合废水为原料,进行酵母菌发酵,不仅能够降低啤酒废水的排放量,而且由于啤酒废水营养物质被有效地利用,大大降低了菌剂的生产成本,实现以废治废变废为宝。
Description
技术领域
本发明涉及一种酵母菌的培养方法,特别是涉及一种用啤酒废水培养酵母菌的方法。
背景技术
酵母菌是一种功能强大的真菌,除了一些传统功能如发酵食品外,还被广泛地应用于水处理领域。研究表明酵母菌对于受污河道的治理是非常有效的。然而由于河道投菌需要大量的菌剂,采用传统方法培养酵母菌的成本太高,于是向河道里投加酵母菌的处理成本往往高于其它工艺处理成本。所以,虽然投加酵母菌治理受污河道这种方法具有简单、无二次污染等优点,但是很难被用于实际工程。
废水资源化一直以来受到广泛关注,如:中国专利号ZL00113131.1公开的“用糖蜜酒精醪液生产光合细菌菌体的方法”,把光合菌种植入糖蜜酒精废醪液,制造出光合细菌菌体,实现变废为宝。
中国专利申请号98120309.4“以废糖蜜为主要原料生产糖化酶的方法”公开了以废糖蜜为主要碳源生长菌体,不但保持了上述技术的诸多优点,而且进一步减少玉米粉(淀粉)和豆饼粉的用量,使糖化酶的生产成本进一步下降。
杨英杰等(2003)发表的《以啤酒洗槽废水为主料产朊圆酵母液体发酵的研究》(上海师范大学学报,2003年第1期),公开了以啤酒洗槽废水为主料产朊圆酵母液体的方法,该方法仅以啤酒洗槽废水为原料而且培养的目的只是用于发酵生产保健品。
目前还没有检索到采用啤酒废水培养酵母菌用于受污染河道治理的报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足,提供一种用啤酒废水培养酵母菌的方法。本发明的方法用廉价的培养基培养大量的酵母菌,用于受污染河道治理,实现以废治废变废为宝,降低菌剂生产成本,减少废水排放量。
本发明的技术方案概述如下:
一种用啤酒废水培养酵母菌的方法,由如下步骤组成:
(1)制备玉米淀粉糖化液:将70~90g玉米淀粉放入400ml蒸馏水中搅拌均匀,间接加热至70℃~80℃,糊化反应30~35min,冷却至20℃~50℃,加入质量百分浓度为1%~3%的CaCl2水溶液2~2.5ml、0.7~0.8gα-淀粉酶,在45~50℃液化5~10min,升温至100℃,灭酶15~17min,冷却至35~40℃,调pH值为3.8~4.5,加入0.7~0.8g糖化酶,在38~42℃糖化24~26h,制成玉米淀粉糖化液;
(2)选取啤酒废水:取啤酒生产厂的废水,所述废水中CODcr为1000~1500mg/L、BOD5为800~1300mg/L、NH4-N为10~30mg/L,静置30~40min,取上清液;
(3)配制培养基:将所述上清液1000ml与7~10g粉状玉米浆混合,搅拌使其溶解,加入所述玉米淀粉糖化液4~6ml,调节pH值为4~5,分装进容器中,灭菌,制成培养基;
(4)培养:按照体积比为10∶100的比例,将浓度为1×108~1×109cfu/ml的酵母菌液接种于所述步骤(3)制成的培养基中,搅拌或者摇晃使溶解氧在3~5mg/L在28~32℃,培养68~80小时。
优选的是:步骤(3)配制培养基为将所述上清液1000ml与9g粉状玉米浆混合,搅拌使其溶解,加入所述玉米淀粉糖化液5ml,调节pH值为4.5,分装进容器中,灭菌,制成培养基。
本发明的优点是:
本发明的方法选取啤酒生产厂排出的混合废水为原料,进行酵母菌发酵,不仅能够降低啤酒废水的排放量,而且由于啤酒废水中的营养物质被有效地利用,促进了酵母菌细胞生长,大大降低了菌剂的生产成本,进而使处理成本降低,实现以废治废变废为宝。为水处理技术向节约型方向发展迈进一步。
利用本发明生产的酵母菌采用投菌法,来改善大水域水体水质。
利用本发明的方法获得的酵母菌的菌体浓度约为15克/升,菌体生长达到稳定时的菌液对原水的CODCr去除率为34.5%(原水的CODCr从120mg/L降低到78.6mg/L);培养基成本约为0.026元/升培养基,按此计算处理1立方米原水的培养基成本约为0.078元。同样,按照最佳培养条件,采用传统培养基培养酵母菌,得到的菌体浓度为6.5克/升,菌液对原水的CODCr去除率为16.5%(原水的CODcr从120mg/L降低到100.2mg/L);培养基成本为1.08元/升培养基,处理1立方米原水的培养基成本为3.24元。
附图说明
图1优化前啤酒废水培养基与原始培养基培养酵母菌的生长曲线;
图2优化前啤酒废水培养基与原始培养基培养酵母菌对原水的去除率;
图3为优化前后酵母菌的生长曲线;
图4为优化前后酵母菌液对原水的CODCr去除率。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一点的说明。
实施例1
一种用啤酒废水培养酵母菌的方法,由如下步骤组成:
(1)制备玉米淀粉糖化液:将80g玉米淀粉放入400ml蒸馏水中搅拌均匀,间接加热至75℃,糊化反应32min,冷却至45℃,加入质量百分浓度为2%的CaCl2水溶液2ml、0.7gα-淀粉酶,在50℃液化8min,升温至100℃,灭酶16min,冷却至40℃,调pH值为4.0,加入0.7g糖化酶,在40℃糖化25h,制成玉米淀粉糖化液;
(2)选取啤酒废水:取啤酒生产厂的废水,所述废水中化学需氧量(CODcr)为1033mg/L、五日生化需氧量(BOD5)为914mg/L、NH4-N为11mg/L,静置35min,取上清液;
(3)配制培养基:将上清液1000ml与8g市面出售的工业用粉状玉米浆混合,搅拌使其溶解,加入玉米淀粉糖化液5ml,调节pH值为4.5,分装进容器中,灭菌,制成培养基;
(4)培养:按照体积比为10∶100的比例,将浓度为1×108cfu/ml的酵母菌液接种于所述步骤(3)制成的培养基中,搅拌使溶解氧在4mg/L在30℃,培养72小时。
实施例2
一种用啤酒废水培养酵母菌的方法,由如下步骤组成:
(1)制备玉米淀粉糖化液:将70g玉米淀粉放入400ml蒸馏水中搅拌均匀,间接加热至70℃,糊化反应35min,冷却至50℃,加入质量百分浓度为1%的CaCl2水溶液2.5ml、0.8gα-淀粉酶,在45℃液化5min,升温至100℃,灭酶15min,冷却至35℃,调pH值为3.8,加入0.8g糖化酶,在38℃糖化26h,制成玉米淀粉糖化液;
(2)选取啤酒废水:取啤酒生产厂的废水,所述废水中CODcr为1421mg/L、BOD5为1099mg/L、NH4-N为21mg/L,静置40min,取上清液;
(3)配制培养基:将所述上清液1000ml与10g粉状玉米浆混合,搅拌使其溶解,加入所述玉米淀粉糖化液6ml,调节pH值为4,灭菌,制成培养基;
(4)培养:按照体积比为10∶100的比例,将浓度为1×109cfu/ml的酵母菌液接种于所述步骤(3)制成的培养基中,搅拌使溶解氧在3mg/L在28℃,培养80小时。
实施例3
一种用啤酒废水培养酵母菌的方法,由如下步骤组成:
(1)制备玉米淀粉糖化液:将90g玉米淀粉放入400ml蒸馏水中搅拌均匀,间接加热至80℃,糊化反应30min,冷却至20℃,加入质量百分浓度为3%的CaCl2水溶液2ml、0.8gα-淀粉酶,在46℃液化10min,升温至100℃,灭酶17min,冷却至40℃,调pH值为4.5,加入0.7g糖化酶,在42℃糖化24h,制成玉米淀粉糖化液;
(2)选取啤酒废水:取啤酒生产厂的废水,实验调节废水CODcr为1000mg/L、BOD5为1300mg/L、NH4-N为10mg/L,静置30min,取上清液;(本实施例CODcr、BOD5、NH4-N的浓度为实验室调节的)
(3)配制培养基:将所述上清液1000ml与7g粉状玉米浆混合,搅拌使其溶解,加入所述玉米淀粉糖化液4ml,调节pH值为5,分装进容器中,灭菌,制成培养基;
(4)培养:按照体积比为10∶100的比例,将浓度为1×108cfu/ml的酵母菌液接种于所述步骤(3)制成的培养基中,摇晃使溶解氧在5mg/L在32℃,培养68小时。
实施例4
一种用啤酒废水培养酵母菌的方法,由如下步骤组成:
(1)制备玉米淀粉糖化液:将85g玉米淀粉放入400ml蒸馏水中搅拌均匀,间接加热至78℃,糊化反应33min,冷却至40℃,加入质量百分浓度为2%的CaCl2水溶液2.5ml、0.7gα-淀粉酶,在48℃液化7min,升温至100℃,灭酶16min,冷却至38℃,调pH值为4.3,加入0.8g糖化酶,在39℃糖化25h,制成玉米淀粉糖化液;
(2)选取啤酒废水:取啤酒生产厂的废水,所述废水中CODcr为1500mg/L、BOD5为800mg/L、NH4-N为30mg/L,静置35min,取上清液;(本实施例CODcr、BOD5、NH4-N的浓度为实验室调节的)
(3)配制培养基:将所述上清液1000ml与9g粉状玉米浆混合,搅拌使其溶解,加入所述玉米淀粉糖化液5ml,调节pH值为4.5,分装进容器中,灭菌,制成培养基;
(4)培养:按照体积比为10∶100的比例,将浓度为1×109cfu/ml的酵母菌液接种于所述步骤(3)制成的培养基中,摇晃使溶解氧在4mg/L在31℃,培养70小时。
实施例5
一种用啤酒废水培养酵母菌的方法,由如下步骤组成:
(1)制备玉米淀粉糖化液:将70kg玉米淀粉放入400L蒸馏水中搅拌均匀,间接加热至70℃,糊化反应35min,冷却至50℃,加入质量百分浓度为1%的CaCl2水溶液2.5L、0.8kgα-淀粉酶,在45℃液化5min,升温至100℃,灭酶15min,冷却至35℃,调pH值为3.8,加入0.8kg糖化酶,在38℃糖化26h,制成玉米淀粉糖化液;
(2)选取啤酒废水:取啤酒生产厂的废水,所述废水中CODcr为1421mg/L、BOD5为1099mg/L、NH4-N为21mg/L,静置40min,取上清液;
(3)配制培养基:将所述上清液1000L与10kg粉状玉米浆混合,搅拌使其溶解,加入所述玉米淀粉糖化液6L,调节pH值为4,灭菌,制成培养基;
(4)培养:按照体积比为10∶100的比例,将浓度为1×109cfu/ml的酵母菌液接种于所述步骤(3)制成的培养基中,搅拌使溶解氧在3mg/L在28℃,培养80小时。
实施例1-实施例5中的提到的啤酒生产厂的废水是指:啤酒生产厂废水池中收集的洗麦废水、发酵废水、糖化废水和洗瓶废水。
图1中的原始培养基的配方为:蔗糖50.0g、磷酸氢二钾5g、硫酸镁2g、硫酸铵3g、蒸馏水1L;优化前啤酒废水培养基配方为:1L啤酒废水(啤酒生产厂废水池中收集的洗麦废水、发酵废水、糖化废水和洗瓶废水)取上清液,添加5mg葡萄糖。按照体积比为10∶100的比例,将浓度为1×109cfu/ml的酵母菌液分别接种于原始培养基和优化前啤酒废水培养基中,搅拌使溶解氧在4mg/L,在30℃,培养。
图2中的原始培养基:蔗糖50.0g、磷酸氢二钾5g、硫酸镁2g、硫酸铵3g、蒸馏水1L。优化前啤酒废水培养基配方为:1L啤酒废水取上清液添加5mg葡萄糖。按照体积比为10∶100的比例,将浓度为1×109cfu/ml的酵母菌液分别接种于原始培养基和优化前啤酒废水培养基中,搅拌使溶解氧在4mg/L在30℃,培养72小时。培养得出的菌液按照2‰的体积比投入原水中,9天后测原水的CODcr指标,得出去除率。本次实验的原水的CODCr为150.63mg/L,而且当原水的CODcr越大去除率会越高。
图1、图2考查了酵母菌在啤酒废水以及原始培养基中培养的生长曲线。验证了啤酒废水培养酵母菌是可行的,并且采用啤酒废水培养的酵母菌浓度是原始培养基的3倍以上,具有较好的应用前景。
图3中的优化前、优化后是指采用啤酒废水进行培养基优化前及优化后培养效果的比较。优化前啤酒废水培养基配方为:1L啤酒废水上清液添加5mg葡萄糖。优化后啤酒废水培养基:将啤酒废水上清液1000ml与9g粉状玉米浆混合,搅拌使其溶解,加入玉米淀粉糖化液(实施例1中步骤(1)制备的)5ml,调节pH值为4.5制成。按照体积比为10∶100的比例,将浓度为1×108cfu/ml的酵母菌液接种于培养基中,搅拌使溶解氧在4mg/L在30℃,培养。
图4中优化前啤酒废水配方为:1L啤酒废水上清液添加5mg葡萄糖。优化后啤酒废水培养基:将啤酒废水上清液1000ml与9g粉状玉米浆混合,搅拌使其溶解,加入玉米淀粉糖化液(实施例1中步骤(1)制备的)5ml,调节pH值为4.5。按照体积比为10∶100的比例,将浓度为1×108cfu/ml的酵母菌液接种于培养基中,搅拌使溶解氧在4mg/L在30℃,培养72小时。培养得出的菌液按照2‰的体积比投入原水中,9天后测原水的CODcr指标,得出去除率。本次实验的原水的CODCr为145.53mg/L,而且当原水的CODcr越大去除率会越高。
图3、图4考察了优化前后酵母菌的生长曲线及菌液对原水的CODCr去除率。可见通过条件优化,菌体浓度能够达到15g/L以上,在原水CODcr较小仅为145.53mg/L时,菌液对原水的去除率达到34%以上。可见优化后菌体活性及菌体浓度均有大幅度增加。
Claims (2)
1.一种用啤酒废水培养酵母菌的方法,其特征是由如下步骤组成:
(1)制备玉米淀粉糖化液:将70~90g玉米淀粉放入400ml蒸馏水中搅拌均匀,间接加热至70℃~80℃,糊化反应30~35min,冷却至20℃~50℃,加入质量百分浓度为1%~3%的CaCl2水溶液2~2.5ml、0.7~0.8gα-淀粉酶,在45~50℃液化5~10min,升温至100℃,灭酶15~17min,冷却至35~40℃,调pH值为3.8~4.5,加入0.7~0.8g糖化酶,在38~42℃糖化24~26h,制成玉米淀粉糖化液;
(2)选取啤酒废水:取啤酒生产厂的废水,所述废水中CODcr为1000~1500mg/L、BOD5为800~1300mg/L、NH4-N为10~30mg/L,静置30~40min,取上清液;
(3)配制培养基:将所述上清液1000ml与7~10g粉状玉米浆混合,搅拌使其溶解,加入所述玉米淀粉糖化液4~6ml,调节pH值为4~5,分装进容器中,灭菌,制成培养基;
(4)培养:按照体积比为10∶100的比例,将浓度为1×108~1×109cfu/ml的酵母菌液接种于所述步骤(3)制成的培养基中,搅拌或者摇晃使溶解氧在3~5mg/L在28~32℃,培养68~80小时。
2.根据权利要求1所述的一种用啤酒废水培养酵母菌的方法,其特征是所述步骤(3)配制培养基为:将所述上清液1000ml与9g粉状玉米浆混合,搅拌使其溶解,加入所述玉米淀粉糖化液5ml,调节pH值为4.5,分装进容器中,灭菌,制成培养基。
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