CN101342202A

CN101342202A - 番荔枝内酯化合物v在制备治疗抗癌药物中的应用

Info

Publication number: CN101342202A
Application number: CNA2008101245871A
Authority: CN
Inventors: 章永红
Original assignee: Nanjing University of Chinese Medicine
Current assignee: Nanjing University of Chinese Medicine
Priority date: 2008-08-26
Filing date: 2008-08-26
Publication date: 2009-01-14

Abstract

本发明涉及一种番荔枝内酯化合物V的新用途，具体地说是涉及化合物V在制备治疗抗癌药物中的应用。先用乙醇、石油醚、乙酸乙酯、氯仿等有机溶剂从番荔枝种子粗粉中提取番荔枝内酯；再将番荔枝内酯经硅胶柱层析，氯仿－甲醇，石油醚－乙酸乙酯，乙酸乙酯－甲醇洗脱，得到一种番荔枝内酯化合物V，其含量为质量分数的50％～90％。经动物体内抗癌药理实验，其内酯化合物V对肺癌、乳腺癌、肝癌细胞的生长有明显的抑制作用，其抗癌活性百倍高于化疗药5－氟脲嘧啶，可用于抗癌药物的制备。

Description

番荔枝内酯化合物V在制备治疗抗癌药物中的应用

一、技术领域

本发明涉及一种抗癌药物的新用途，具体地说是以番荔枝种子为原料提取的一种番荔枝内酯化合物V的新用途，该化合物V在制备治疗肺癌、乳腺癌及肝癌药物中的应用。

二、背景技术

癌症是危害人类健康的大敌。我国每年新发癌症病例约有160万人，每年死于癌症的约有130万人，全国因癌症而死亡的人数逐年上升，我国为肺癌、乳腺癌、肝癌等癌症的高发区域，癌症死亡率居高不下。

目前尚无有效的药物治愈大多数癌症患者。化疗药物对癌症虽有一定疗效，但毒副作用大，中成药对癌症的疗效普遍较低，疗效均不理想。

本发明人经过十几年艰苦研究了番荔枝(Annona squamosa Linn)种子的抗癌有效物质，从中提取出多种抗癌活性化合物，经抗癌实验研究表明，对人肝癌细胞、人胃癌细胞、人食管癌细胞和动物移植性肿瘤(如S₁₈₀、H₂₂和Heps)均有显著的体内外抗癌治疗效果，并已申请获得3项抗癌产品发明专利证书(专利号分别为：ZL02148474.0、ZL02148475.9、ZL03112707.X)。在上述研究的基础上，本发明人继续提取分离、筛选番荔枝种子的抗癌有效化学成分，即番荔枝内酯化合物V，具有特别显著抗癌活性。

三、发明内容

1、发明目的：本发明的目的是涉及一种番荔枝内酯化合物V的新用途，具体是涉及其番荔枝内酯化合物V在制备治疗抗癌药物中的应用。

2、技术方案：本发明从番荔枝(Annona squamosa Linn)种子提取分离到一种抗癌物质番荔枝内酯化合物V。先用乙醇、石油醚、氯仿等有机溶剂从番荔枝种子中提取番荔枝内酯；再将番荔枝内酯经硅胶柱层析，氯仿-甲醇，石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，得到一种番荔枝内酯化合物V，其含量为质量分数的50％～90％。

番荔枝种子粗粉用浓度为95％～97％的乙醇回流提取；乙醇提取液常压浓缩后，依次用石油醚(20～60℃)、水饱和乙酸乙酯、氯仿萃取；萃取液浓缩干燥后经多次硅胶柱层析，硅胶粒度为100～300目，与萃取物的质量比为10∶1～20∶1；以体积比为100∶0～90∶10的氯仿-甲醇梯度洗脱，将收集到的番荔枝内酯物质浓缩干燥。再经多次硅胶柱层析，硅胶粒度为100～300目，与番荔枝内酯物质的质量比为10∶1～50∶1；以体积比为100∶0～90∶10的石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，用薄层层析检查，以碘化铋钾试剂显色；将收集到的番荔枝内酯化合物V浓缩干燥，其含量为质量分数的50％～90％。

番荔枝内酯化合物V对肺癌、乳腺癌、肝癌细胞的生长有明显的抑制作用，其抗癌活性百倍高于化疗药5-氟脲嘧啶(5-FU)。

番荔枝内酯化合物V对小鼠移植性肺癌的生长抑制作用：不同剂量15μg/kg、30μg/kg和60μg/kg的番荔枝内酯化合物V均能显著抑制小鼠移植性肺癌的生长(P＜0.01)，其抑瘤率分别为63.01％、70.04％、77.81％。番荔枝内酯化合物V抗肺癌活性是化疗药5-氟脲嘧啶的百倍以上。

番荔枝内酯化合物V对小鼠移植性乳腺癌的生长抑制作用：不同剂量15μg/kg、30μg/kg和60μg/kg的番荔枝内酯化合物V均能显著抑制小鼠移植性乳腺癌的生长(P＜0.01)，其抑瘤率分别为41.18％、65.44％、78.68％。番荔枝内酯化合物V抗乳腺癌活性是化疗药5-氟脲嘧啶的百倍以上。

番荔枝内酯化合物V对小鼠移植性肝癌的生长抑制作用：不同剂量15μg/kg、30μg/kg和60μg/kg的番荔枝内酯化合物V均能显著抑制小鼠移植性肝癌的生长(P＜0.01)，其抑瘤率分别为49.70％、64.24％、78.18％。番荔枝内酯化合物V抗肝癌活性是化疗药5-氟脲嘧啶的百倍以上。

3、有益效果：本发明一种番荔枝内酯化合物V是从番荔枝种子中提取得到的抗癌活性物质。动物体内抗癌实验结果显示，番荔枝内酯化合物V对肺癌、乳腺癌、肝癌细胞的生长均有非常高的抗癌活性，其体内抗癌活性百倍高于化疗药5-氟脲嘧啶(5-Fu)。这为提高抗癌临床疗效提供了非常有前景的高效预选药物。

四、具体实施方式

实施例1：番荔枝内酯化合物V的提取制备方法

番荔枝种子20kg，粉碎成粗粉，用浓度为95％的乙醇回流提取3次，乙醇提取液常压浓缩后得1.2kg。依次用10倍量石油醚(20～60℃)、水饱和乙酸乙酯、氯仿萃取3次，合并萃取液浓缩干燥后得610g。

经多次硅胶柱层析，硅胶粒度为100～300目，与萃取物的质量比为10∶1～20∶1；以体积比为100∶0～90∶10的氯仿-甲醇梯度洗脱，收集到的番荔枝内酯物质浓缩干燥得230g。再经多次硅胶柱层析，硅胶粒度为100～300目，与番荔枝内酯物质的质量比为10∶1～50∶1；以体积比为100∶0～90∶10的石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，收集到的流分浓缩干燥得到蜡状固体38g，即为番荔枝内酯V。

实施例2：番荔枝内酯化合物V对移植性肺癌的抑制作用

1、实验动物和瘤株

雄性健康C57BL/6小鼠，体重18-22g，鼠龄6-8周，购自本校动物实验中心；小鼠Lewis肺癌瘤株购自江苏省肿瘤研究所动物实验中心。

2、造模与实验方法

C57BL/6小鼠60只，按比例随机留10只为阴性对照组，其余50只进行造模。制备Lewis肺癌荷瘤小鼠，剥离生长旺盛期的瘤组织，选取生长良好的肿块1.5mm³左右，按肿瘤(g)∶生理盐水(ml)为1∶3比例匀浆，调细胞数为2×10⁶/ml。选取健康小鼠，在无菌条件下每只小鼠右侧腋窝皮下接种0.2ml。整个接种过程须在无菌罩内以无菌操作进行，1h内完成接种。

接种后随机分为5组，每组10只，分别为肿瘤模型对照组、15μg/kg、30μg/kg和60μg/kg试验组、5-fu阳性对照组，另加阴性对照组，共6组。接种瘤细胞24h后，试验组腹腔注射番荔枝内酯V，剂量分别为15μg/kg、30μg/kg和60μg/kg，阴性对照组和肿瘤模型对照组等体积注射药物溶媒，5-FU对照组以生理盐水为溶剂，剂量为20mg/kg，各组动物均按0.2ml在腹腔注射，连续给药10d。末次给药后次日，进行如下观察：

完整剥离瘤块，并称重计算肿瘤抑制率，肿瘤抑制率＝(对照组肿瘤重量-治疗组肿瘤重量)/对照组肿瘤重量×100％。

3、实验结果：

番荔枝内酯化合物V对小鼠移植性肺癌的生长抑制作用：不同剂量的番荔枝内酯化合物V均能显著抑制小鼠移植性肺癌的生长(P＜0.01)。番荔枝内酯化合物V的剂量极小，其抗肺癌活性是化疗药5-氟脲嘧啶(5-FU)的百倍以上，见表1。

表1番荔枝内酯V对小鼠移植性肺癌Lewis作用结果

实施例3：番荔枝内酯化合物V对移植性乳腺癌的抑制作用

2、实验动物和瘤株

雌性健康TA2小鼠，体重18-22g，鼠龄6-8周，购自本校动物实验中心；小鼠乳腺癌细胞株MA-891购自江苏省肿瘤研究所动物实验中心。

2、造模与实验方法

TA2小鼠60只，按比例随机留10只为阴性对照组，其余50只进行造模。取体外培养的对数生长期MA-891小鼠乳腺癌细胞，细胞浓度调整为1×10⁷/ml。无菌条件下，将MA-891小鼠乳腺癌细胞接种于TA2小鼠右腋部皮下，接种量为0.2ml/只(细胞数为2×10⁶/只)。整个接种过程须在无菌罩内以无菌操作进行，1h内完成接种。

3、实验结果：

番荔枝内酯化合物V对小鼠移植性乳腺癌的生长抑制作用：不同剂量的番荔枝内酯化合物V均能显著抑制小鼠移植性乳腺癌的生长(P＜0.01)。番荔枝内酯化合物V的剂量极小，其抗乳腺癌活性是化疗药5-氟脲嘧啶(5-FU)的百倍以上，见表2。

表2番荔枝内酯V对小鼠移植性乳腺癌作用结果

实施例4：番荔枝内酯化合物V对移植性肝癌的抑制作用

3、实验动物和瘤株

雄性健康昆明种小鼠，体重18-22g，鼠龄6-8周，来自本校动物实验中心；昆明鼠传代腹水型鼠肝癌HepS瘤株均购自江苏省肿瘤研究所动物实验中心。小鼠在南京中医药大学动物实验中心的动物实验房饲养，温度21～25℃，湿度为45％～55％。

2、造模与实验方法

昆明种雄性小鼠60只，按比例随机留10只为阴性对照组，其余50只进行造模。无菌抽取接种HepS瘤种8天的小鼠的腹水，以生理盐水稀释10倍，0.02％伊红染色，滴加到细胞计数板上计数后，调细胞浓度至1×10⁷/ml，迅速地分别将50只小鼠右腋皮肤消毒，每鼠接种0.2mlHepS肿瘤细胞悬液于皮下。整个接种过程须在无菌罩内以无菌操作进行，1h内完成接种。

接种后随机分为5组，每组10只，分别为肿瘤模型对照组、15μg/kg、30μg/kg和60μg/kg试验组、5-fu阳性对照组，另加阴性对照组，共6组。接种瘤细胞24h后，试验组腹腔注射番荔枝内酯化合物V，剂量分别为15μg/kg、30μg/kg和60μg/kg，阴性对照组和肿瘤模型对照组等体积注射药物溶媒，5-FU对照组以生理盐水为溶剂，剂量为20mg/kg，各组动物均按0.2ml在腹腔注射，连续给药8d。末次给药后次日，进行如下观察：

3、实验结果：

番荔枝内酯化合物V对小鼠移植性肝癌HepS的生长抑制作用：不同剂量的番荔枝内酯V均能显著抑制小鼠移植性肝癌HepS的生长(P＜0.01)。番荔枝内酯V的剂量极小，其抗肝癌活性是化疗药5-氟脲嘧啶(5-FU)的百倍以上，见表3。

表3番荔枝内酯V对小鼠移植性肝癌HepS作用结果

Claims

1、一种番荔枝内酯化合物V在制备治疗抗癌药物中的应用。

2、根据权利要求1所述的应用，其特征在于番荔枝内酯化合物V在制备治疗肺癌药物中的应用。

3、根据权利要求1所述的应用，其特征在于番荔枝内酯化合物V在制备治疗乳腺癌药物中的应用。

4、根据权利要求1所述的应用，其特征在于番荔枝内酯化合物V在制备治疗肝癌药物中的应用。

5、根据权利要求2、3或4所述的应用，其特征在于番荔枝内酯化合物V在体内对肺癌，乳腺癌或肝癌细胞有明显的抑制作用，其抗癌活性高于化疗药物5-氟脲嘧啶。