CN101337077A - 皮肤点刺法诊断肺螨病抗原液的制备方法 - Google Patents

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赵玉强
公茂庆
邓绪礼
刘新
程鹏
文桂香
甄天民
王海防
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Abstract

本发明公开了一种皮肤点刺法诊断肺螨病抗原液的制备方法，包括如下步骤：①采集面粉厂地脚粉；②显微镜下检分出螨饲养；③螨密度达到每克饲养基2000时，倒入筛中去除杂质；④将步骤③中筛下的粉尘倒入平底搪瓷盘中将粉尘螨分出；⑤取活粉尘螨置入尼龙袋中，浸入丙酮脱脂；⑥洗净后将粉尘螨均匀铺于皿的表面，置入温箱得到干粉尘螨；⑦取干粉尘螨浸入9％氯化钠中，置入4℃环境中；⑧取出步骤⑦的氯化钠液体，搅拌所得悬液，离心取上清液；⑨将上清液过滤除菌，得到粉尘螨抗原液。本发明所述抗原液可大幅度延长保存时间，用于诊断肺螨病时，对患者无痛苦、对皮肤刺激性小，可广泛适用于各医疗机构，为诊断肺螨病提供了良好基础。

Description

皮肤点刺法诊断肺螨病抗原液的制备方法
技术领域
本发明涉及粉尘螨抗原液，是一种专用于皮肤点刺法诊断肺螨病抗原液的制备方法。
背景技术
肺螨病是螨类经呼吸道吸入人体后寄生在肺部引起的寄生虫病。这种寄生虫病在世界各地均有发生。其临床症状为：咳嗽、咳痰、胸闷气短、哮喘、乏力烦燥、低热及全身不适等。由于肺螨病是一种寄生虫病，某些诊断方法尚无准确性，另有某些诊断方法比较复杂，成本昂贵。故未能在各医疗机构广泛普遍使用，并且其症状与肺部疾病症状存在某些相似，因此常被误诊，从而导致延误最佳治疗期，给患者带来较大的痛苦。
发明内容
本发明的目的是，提供一种皮肤点刺法诊断肺螨病抗原液的制备方法，它专用于采用皮肤点刺法诊断肺螨病，以提高诊断肺螨病的准确率。
本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：皮肤点刺法诊断肺螨病抗原液的制备方法，包括如下步骤：
①采集面粉厂地脚粉；
②显微镜下检分出粉尘螨饲养在25℃-26℃、相对湿度为65-75％的环境中；
③螨密度达到每克饲养基2000时，采用分析筛将培养螨的粉尘倒入80目/寸和120目/寸筛中去除杂质；
④将步骤③中筛下的粉尘倒入平底搪瓷盘中，铺成薄层，用干净的玻璃片将其埋平，将粉尘螨分出；
⑤取活粉尘螨置入200目/寸尼龙袋中，浸入丙酮脱脂25-35分钟，重复3次；
 ⑥洗净后将粉尘螨均匀铺于皿的表面，置入40-48℃温箱7-9小时，得到干粉尘螨；
⑦取干粉尘螨浸入9％氯化钠中，置入4℃环境中22-25小时；
⑧取出步骤⑦的氯化钠液体，用磁力搅拌机搅拌9-12小时，所得悬液以2500-3200转/分钟离心25-35分钟，取上清液；
⑨将上清液过滤除菌，得到重量体积比为1∶8-12的粉尘螨抗原液。
步骤⑦中所述干粉尘螨与9％氯化钠的配比为每10毫升9％氯化钠加入1克干粉尘螨。
步骤⑧中所得悬液以3000转/分钟离心30分钟后取上清液。
步骤⑨中所述的粉尘螨抗原液的重量体积比为1∶10。
本发明所述的抗原液，专用于皮肤点刺方法诊断肺螨病，使肺螨病的诊断率提高至92％以上，达到了国际先进水平。本发明所述抗原液可大幅度延长保存时间，用于诊断肺螨病时，对患者无痛苦、对皮肤刺激性小、特异性高、不出现全身性反应、操作方便简便、快速、反应明显，可广泛适用于各医疗机构，为快速、准确、无痛苦的诊断肺螨病提供了良好基础。
具体实施方式
实施例
本发明的皮肤点刺法诊断肺螨病抗原液的制备方法，包括如下步骤：①采集面粉厂地脚粉；②显微镜下检分出螨饲养在25℃-26℃、相对湿度为65-75％的环境中；③螨密度达到每克饲养基2000时，采用分析筛将培养螨的粉尘倒入80目/寸和120目/寸筛中去除杂质；④将步骤③中筛下的粉尘倒入平底搪瓷盘中，铺成薄层，用干净的玻璃片将其埋平，将粉尘螨分出；⑤取活粉尘螨置入200目/寸尼龙袋中，浸入丙酮脱脂25-35分钟，重复3次；⑥洗净后将粉尘螨均匀铺于皿的表面，置入40-48℃温箱7-9小时，得到干粉尘螨；⑦取干粉尘螨浸入9％氯化钠中，置入4℃环境中22-25小时；⑧取出步骤⑦的氯化钠液体，用磁力搅拌机搅拌9-12小时，所得悬液以2500-3200转/分钟离心25-35分钟，取上清液；⑨将上清液过滤除菌，得到重量体积比为1∶8-12的粉尘螨抗原液。
步骤⑦中所述干粉尘螨与9％氯化钠的配比为每10毫升9％氯化钠加入1克干粉尘螨。
步骤⑧中所得悬液以3000转/分钟离心30分钟后取上清液为优选方案。
步骤⑨中所述的粉尘螨抗原液的重量体积比为1∶10为最佳比。
本发明所述粉尘螨抗原液用于皮肤点刺法诊断肺螨病，皮肤点刺要求破皮而不出血，皮肤点刺诊断肺螨病的操作方法如下：
a、在前臂曲面消毒皮肤，滴加100微升本发明所述粉尘螨抗原液；
b、将点刺针从包内取出一支，注意应取刺针的尾部处，慎放针尖污染；
c、将针尖垂直点刺在粉尘螨抗原液滴的中央，接触皮肤；
d、使针尖刺入皮肤，达到破皮不出血要求；
e、约一秒钟将针提起，即可弃去，2-3分钟后将抗原液滴擦掉，15-20分钟后，观察皮肤反应结果；
f、为了避免假阳性，必须同时作一个阳性对照和一个阴性对照，即在进行上述步骤c点刺的同时，在其上方5厘米处用生理盐水作阴性对照点刺，在其下方5厘米处用组胺作阳性对照点刺，以便与产生的变应原反应的强度进行比对，每刺点用一针，三者结果同时记录；
变应原反应的强度应与组胺反应(+)进行对比其标准如下：
反应与阴性对照相同                    一
反应大于阴性对照，小于组胺对照1/2者   1+
反应为组胺的1/2者                     2+
反应与组胺相同                        3+
反应大于组胺的2倍者                   4+。
g、反应表现为风团和红晕，可用直尺量其大小。取风团或红晕的最长径及与其垂直的横径两者和的平均，称为平均直径[D＝(a+b)/2]。一般红晕大小仅作为阳性参考，风团平均直径可作为诊断肺螨病的依据。判定结果如下：
平均直径小于3微米判为阴性(一)。
平均直径大于3微米判为阳性(1+)。
平均直径大于5微米判为阳性(2+)。
平均直径大于10微米判为阳性(3+)。
平均直径大于15微米判为阳性(4+)。

Claims (4)

1、皮肤点刺法诊断肺螨病抗原液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
①采集面粉厂地脚粉；
②显微镜下检分出粉尘螨饲养在25℃-26℃、相对湿度为65-75％的环境中；
③螨密度达到每克饲养基2000时，采用分析筛将培养螨的粉尘倒入80目/寸和120目/寸筛中去除杂质；
④将步骤③中筛下的粉尘倒入平底搪瓷盘中，铺成薄层，用干净的玻璃片将其埋平，将粉尘螨分出；
⑤取活粉尘螨置入200目/寸尼龙袋中，浸入丙酮脱脂25-35分钟，重复3次；
⑥洗净后将粉尘螨均匀铺于皿的表面，置入40-48℃温箱7-9小时，得到干粉尘螨；
⑦取干粉尘螨浸入9％氯化钠中，置入4℃环境中22-25小时；
⑧取出步骤⑦的氯化钠液体，用磁力搅拌机搅拌9-12小时，所得悬液以2500-3200转/分钟离心25-35分钟，取上清液；
⑨将上清液过滤除菌，得到重量体积比为1∶8-12的粉尘螨抗原液。
2、根据权利要求1所述的皮肤点刺法诊断肺螨病抗原液的制备方法，其特征在于：步骤⑦中所述干粉尘螨与9％氯化钠的配比为每10毫升9％氯化钠加入1克干粉尘螨。
3、根据权利要求1或2所述的皮肤点刺法诊断肺螨病抗原液的制备方法，其特征在于：步骤⑧中所得悬液以3000转/分钟离心30分钟后取上清液。
4、根据权利要求1所述的皮肤点刺法诊断肺螨病抗原液的制备方法，其特征在于：步骤⑨中所述的粉尘螨抗原液的重量体积比为1∶10。
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