CN101333548A - 利用短乳杆菌制备γ-氨基丁酸的方法 - Google Patents

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Abstract

一种利用短乳杆菌制备γ－氨基丁酸的方法，其工艺方法步骤为：1.利用MRS液体培养基将短乳杆菌活化后，以5％的接种量接种于MRSG发酵培养基，34℃培养40－60h，4℃离心收集菌体；2.利用无菌生理盐水洗涤2次后悬于含10－100mM谷氨酸钠、pH 5.2的醋酸缓冲液中，34℃反应1～8h，离心后即为含γ－氨基丁酸的溶液。本发明的优点是：该制备方法安全、成本低，反应条件温和，不污染环境，无副产物，产物易于分离纯化。

Description

利用短乳杆菌制备γ-氨基丁酸的方法
技术领域
本发明涉及一种制备γ-氨基丁酸的方法，尤其涉及一种利用短乳杆菌制备γ-氨基丁酸的方法。
背景技术
γ-氨基丁酸是一种非蛋白质组成的天然氨基酸，是哺乳动物体内一种重要的抑制性神经递质，具有许多重要的生理功能，如降血压、利尿、安定、促进脑部血流、营养神经细胞、健肝利肾等，并对妇女更年期的自身失调有良好的改善作用，可以作为药物或保健品使用。
乳酸菌是一类普遍认为安全的细菌，广泛用于食品加工。乳酸菌有多种生理活性，如调节肠道菌群，抑菌抗氧化，增强免疫力，降低血压等。日本已经将γ-氨基丁酸广泛用于饮料、果酱、糕点、饼干和调味料等。产γ-氨基丁酸的乳酸菌不仅产生γ-氨基丁酸，而且能保持发挥自身有益的生理活性，应用前景广阔，有明显的经济效益和社会效益。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用短乳杆菌制备γ-氨基丁酸的方法，该制备方法安全、成本低，反应条件温和，产物易于分离纯化。
本发明是这样来实现的，其工艺方法步骤是：
1.利用MRS液体培养基将短乳杆菌活化后，以5％的接种量接种于MRSG发酵培养基，34℃培养40-60h，4℃离心收集菌体；
2.利用无菌生理盐水洗涤2次后悬于含10-100mM谷氨酸钠的PH值是5.2的醋酸缓冲液中，34℃反应1～8h，离心后即为含γ-氨基丁酸的溶液。
本发明所用的短乳杆菌，保藏编号为：Lactobacillus brevis CCTCCM208054。
本发明中的MRS培养基是：蛋白胨10g/L，牛肉提取物10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L，K2HPO4 2g/L，乙酸钠5g/L，柠檬酸二胺2g/L，MnSO4·4H2O 0.25g/L，MgSO4·7H2O 0.58g/L，吐温801mL，蒸馏水1000mL，经调节pH6.2～6.4，在高温高压条件下灭菌。
本发明中的MRSG培养基是：蛋白胨10g/L，牛肉提取物10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L，K2HPO4 2g/L，乙酸钠5g/L，柠檬酸二胺2g/L，MnSO4·4H2O 0.25g/L，MgSO4·7H2O 0.58g/L，L-谷氨酸钠30g/L，吐温801mL，蒸馏水1000mL，经调节pH6.2～6.4，在高温高压条件下灭菌。
本发明的优点是：该方法安全、成本低，反应条件温和，不污染环境，无副产物，产物易于分离纯化。
具体实施方式
实施例1：
保藏于MRS琼脂斜面的短乳杆菌，转接于MRS液体培养基，经两次活化后，以5％的接种量接种于MRSG液体培养基，于34℃培养48h，5000rpm离心10min，收集沉淀，利用无菌的生理盐水洗涤沉淀2次，最后将沉淀悬于含10mM谷氨酸钠的醋酸缓冲液(pH 5.2)，34℃反应1h，离心后即为含γ-氨基丁酸的溶液。经测定，发酵液中的Γ-氨基丁酸达到约10mM。
实施例2：
保藏于MRS琼脂斜面的短乳杆菌，转接于MRS液体培养基，经两次活化后，以5％的接种量接种于MRSG液体培养基，于34℃培养48h，5000rpm离心10min，收集沉淀，利用无菌的生理盐水洗涤沉淀2次，最后将沉淀悬于含40mM谷氨酸钠的醋酸缓冲液(pH 5.2)，34℃反应2h，离心后即为含γ-氨基丁酸的溶液。经测定，发酵液中的Γ-氨基丁酸达到约30mM。
实施例3：
保藏于MRS琼脂斜面的短乳杆菌，转接于MRS液体培养基，经两次活化后，以5％的接种量接种于MRSG液体培养基，于34℃培养48h，5000rpm离心10min，收集沉淀，利用无菌的生理盐水洗涤沉淀2次，最后将沉淀悬于含80mM谷氨酸钠的醋酸缓冲液(pH 5.2)，34℃反应4h，离心后即为含γ-氨基丁酸的溶液。经测定，发酵液中的γ-氨基丁酸达到约60mM。
实施例4：
保藏于MRS琼脂斜面的短乳杆菌，转接于MRS液体培养基，经两次活化后，以5％的接种量接种于MRSG液体培养基，于34℃培养48h，5000rpm离心10min，收集沉淀，利用无菌的生理盐水洗涤沉淀2次，最后将沉淀悬于含100mM谷氨酸钠的醋酸缓冲液(pH 5.2)，34℃反应8h，离心后即为含γ-氨基丁酸的溶液。经测定，发酵液中的γ-氨基丁酸达到约80mM。
上述实施例中的MRS培养基是：蛋白胨10g/L，牛肉提取物10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L，K2HPO4 2g/L，乙酸钠5g/L，柠檬酸二胺2g/L，MnSO4·4H2O 0.25g/L，MgSO4·7H2O 0.58g/L，吐温801mL，蒸馏水1000mL，经调节pH6.2～6.4，在高温高压条件下灭菌。
上述实施例中的MRSG培养基是：蛋白胨10g/L，牛肉提取物10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L，K2HPO4 2g/L，乙酸钠5g/L，柠檬酸二胺2g/L，MnSO4·4H2O 0.25g/L，MgSO4·7H2O 0.58g/L，L-谷氨酸钠30g/L，吐温801mL，蒸馏水1000mL，经调节pH6.2～6.4，在高温高压条件下灭菌。
上述实施例中的短乳杆菌的保藏编号是：Lactobacillus brevis CCTCCM208054。

Claims (4)

1.一种利用短乳杆菌制备γ-氨基丁酸的方法，其特征是工艺方法步骤为：
(1)利用MRS液体培养基将短乳杆菌活化后，以5％的接种量接种于MRSG发酵培养基，34℃培养40-60h，4℃离心收集菌体；
(2)利用无菌生理盐水洗涤2次后悬于含10-100mM谷氨酸钠、pH 5.2的醋酸缓冲液中，34℃反应1～8h，离心后即为含γ-氨基丁酸的溶液。
2.根据权利要求1所述的一种利用短乳杆菌制备γ-氨基丁酸的方法，本发明中的短乳杆菌的保藏编号是：Lactobacillus brevis CCTCCM 208054。
3.根据权利要求1所述的一种利用短乳杆菌制备γ-氨基丁酸的方法，其特征是MRS培养基为：蛋白胨10g/L，牛肉提取物10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L，K2HPO4 2g/L，乙酸钠5g/L，柠檬酸二胺2g/L，MnSO4·4H2O 0.25g/L，MgSO4·7H2O 0.58g/L，吐温80 1mL，蒸馏水1000mL，经调节pH6.2～6.4，在高温高压条件下灭菌。
4.根据权利要求1所述的一种利用短乳杆菌制备γ-氨基丁酸的方法，其特征是MRSG培养基为：蛋白胨10g/L，牛肉提取物10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L，K2HPO4 2g/L，乙酸钠5g/L，柠檬酸二胺2g/L，MnSO4·4H2O 0.25g/L，MgSO4·7H2O 0.58g/L，L-谷氨酸钠30g/L，吐温80 1mL，蒸馏水1000mL，经调节pH6.2～6.4，在高温高压条件下灭菌。
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