CN101294138B - 一种南瓜白粉病菌的保存方法 - Google Patents
一种南瓜白粉病菌的保存方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种南瓜白粉病菌的保存方法。首先将含有白粉病菌有性世代闭囊壳的南瓜叶，用毛笔将分生孢子刷于盛有清水的容器中，用血球计数板计数配制接种所需浓度的孢子悬浮液，在南瓜苗龄为两片真叶时，喷雾接种方法接种，待发病后，用水冲去叶片上的杂物和原有的分生孢子和闭囊壳，保湿诱发产生新的闭囊壳，最后用灭菌的毛刷将闭囊壳刷入到保存液中，以灭菌水作对照，放入-26℃环境中保存。本发明能够使南瓜白粉病菌的保存时间更长，方法更简便实用，南瓜白粉病病原菌用上述保存方法在-26℃冰箱中保存二年仍具有很强的活性。而对照用无菌水保存的南瓜白粉病病原菌没有活性。
Description
(一)技术领域
本发明涉及一种生物病菌的保存方法，具体涉及一种南瓜白粉病菌的保存方法。
(二)背景技术
南瓜白粉病菌是一种专性寄生菌，其无性世代只能在活体上繁殖保存。传统的方法是将病菌接种到感病的寄主植物上保存，一般可保存菌种1个月，但是容易污染。特别对于研究白粉病菌的生理小种分化的研究利用这种方法保存菌种会造成病菌的相互污染。因而选择一种合适的南瓜病菌的保存方法迫在眉睫。
(三)发明内容
本发明的目的在于提供一种能够使南瓜白粉病菌的保存时间更长，方法更简便实用的南瓜白粉病菌的保存方法。
本发明的目的是这样实现的：首先将含有白粉病菌有性世代闭囊壳的南瓜叶，用毛笔将分生孢子刷于盛有清水的容器中，用血球计数板计数配制接种所需浓度的孢子悬浮液，在南瓜苗龄为两片真叶时，喷雾接种方法接种，待发病后，用水冲去叶片上的杂物和原有的分生孢子和闭囊壳，保湿诱发产生新的闭囊壳，最后用灭菌的毛刷将闭囊壳刷入到保存液中，以灭菌水作对照，放入-26℃环境中保存。
本发明还有这样一些技术特征：
1、所述的保存液配方为：体积比为10份蔗糖、12份甘油、7份二甲基亚砜、8份脱脂乳加水定容500ml。
为了使南瓜白粉病菌的保存时间更长，方法更简便实用，以满足实际研究工作的需要，发明人针对南瓜白粉病菌的保存方法进行研究。同时该方法对于其他植物白粉病菌的保存也具有一定的借鉴和指导意义。本发明的实验效果为：
南瓜白粉病病原菌用上述保存液在-26℃冰箱中保存二年仍具有很强的活性。而对照用无菌水保存的南瓜白粉病病原菌没有活性。
用保存液保存24个月后，用解剖针挑取5-10个子囊孢子制成水质玻片，用指尖轻压盖玻片，将子囊从子囊壳中挤出，在显微镜下可以看到闭囊壳组织保存较好，能清晰的看到闭囊壳壁细胞，显微镜视野较清晰，有少量的闭囊壳组织破损的残渣；42小时后，子囊孢子的释放量达到最高值。当子囊孢子释放量达到最大时，将子囊孢子悬浮液用胶头滴管滴在南瓜叶片上接种，接种12株南瓜，每株1片叶，接种后的南瓜每株分别放在塑料薄膜内保湿，并用一层遮阳网遮荫，结果12株植株100％发病。而对照用灭菌水保存的南瓜白粉病菌在显微镜下可以看到闭囊壳组织破损严重，闭囊壳壁的组织大块堆积，不容易观察到闭囊壳壁上的细胞，显微镜视野混浊，充满大量的闭囊壳组织残渣。子囊不能释放子囊孢子，用同样的方法接种12株南瓜，结果均未发病。
(四)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明：
本实施例首先将在南瓜田采集的含有白粉病菌有性世代闭囊壳的南瓜叶，用毛笔将分生孢子刷于盛有清水的烧杯中，用血球计数板计数配制接种所需浓度的孢子悬浮液。在南瓜苗龄为两片真叶时，喷雾接种方法接种，待发病后，用水冲去叶片上的杂物和原有的分生孢子和闭囊壳，保湿诱发产生新的闭囊壳。用灭菌的毛刷将闭囊壳刷入到保存液中，以灭菌水做对照，放入-26℃冰箱中保存。本实施例中保存液配方如下：体积比为10％蔗糖、12％甘油、7％二甲基亚砜、8％脱脂乳加水定容500ml。
Claims (1)
1.一种南瓜白粉病菌的保存方法，其特征在于：首先将含有白粉病菌有性世代闭囊壳的南瓜叶，用毛笔将分生孢子刷于盛有清水的容器中，用血球计数板计数配制接种所需浓度的孢子悬浮液，在南瓜苗龄为两片真叶时，喷雾接种方法接种，待发病后，用水冲去叶片上的杂物和原有的分生孢子和闭囊壳，保湿诱发产生新的闭囊壳，最后用灭菌的毛刷将闭囊壳刷入到保存液中，以灭菌水作对照，放入-26℃环境中保存；所述的保存液配方为：50ml蔗糖、60ml甘油、35ml二甲基亚砜、40ml脱脂乳加水定容至500ml。
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