CN101291668A

CN101291668A - Atr抑制剂

Info

Publication number: CN101291668A
Application number: CNA2006800391066A
Authority: CN
Inventors: 西田浩志; 滨森康雄; 小西彻也
Original assignee: Niigata TLO Corp
Current assignee: Niigata TLO Corp
Priority date: 2005-10-21
Filing date: 2006-10-18
Publication date: 2008-10-22
Also published as: JPWO2007046426A1; US20100048923A1; CA2626681A1; EP1946757A1; WO2007046426A1

Abstract

本发明的目的在于提供一种ATR抑制剂，其含有作为ATR蛋白质激酶抑制剂有用的各种五味子素类和戈米辛类等的三环性化合物作为有效成分。

Description

ATR抑制剂

技术领域

本发明涉及一种抑制ATR(毛细血管扩张性共济失调突变和rad3相关的；ataxia-telangiectasia mutated and rad3-related)活性的ATR抑制剂，具体涉及一种含有三环性化合物作为有效成分的ATR抑制剂。

背景技术

已知ATM(毛细血管扩张性共济失调突变；ataxia-telangiectasia mutated)和ATR(毛细血管扩张性共济失调突变和rad3相关的；ataxia-telangiectasia mutated and rad3-related)蛋白质激酶(以下只称为ATM和ATR)，在细胞的DNA损伤相关的修复中扮演着重要的角色(非专利文献1)。通过紫外线(UV)和电离放射(IR)照射，细胞受到DNA损伤，引起关卡信号级联(cascade)，为了修复DNA损伤引起细胞凋亡，细胞周期停止于G1/S、中间S期及G2/M期。缺失ATM的AT(毛细血管扩张性共济失调症)患者来源的细胞由于呈现缺少G1/S和G2/M期关卡(checkpoint)的表现型，因此对IR具有感受性，因此，ATM及其下游的途径对维持染色体很重要。而且，由于一度或稳定的ATR的缺失，染色体的稳定性显著受损，或者在初期胚阶段达到致死(非专利文献2)。令人感兴趣的是，现在已知ATR产生的p53蛋白质(以下只称为p53)或NBS1的磷酸化由于ATM的存在而延迟。这提示，ATR在DNA损伤反应这一点上，是一种ATM的协调分子种类。事实上，ATR在防御DNA损伤中起着核心的作用。这些事项表明，ATM或ATR活性的控制不但是维持染色体的稳定性所必需的，而且也可以应用于化学疗法和放射线治疗等抗癌治疗中。

非专利文献3公开了由咖啡因(3，7-二氢-1，3，7-三甲基-1H-嘌呤-2，6二酮)辅助的化学疗法，以最小限度解决与非增殖性的骨肉瘤相关的肿瘤的切除。人们认为咖啡因与由化学疗法中引起的DNA损伤相反应，抑制ATM和ATR的蛋白质激酶活性，但已知咖啡因相对于ATR而言，更能抑制ATM。

近年来，通过siRNA转染细胞，重组体的激酶使激酶活性部位缺失的蛋白质过度表达等，从而清楚了ATR和ATM的主要功能(非专利文献4-6)。但是，由于稳定的敲除了ATR的小鼠是致死的，因此与ATM相比，很少有报道ATR的功能的例子。而且，在不知道ATR的特异性抑制剂的现状中，使用咖啡因和PI3激酶的抑制剂-Wortmannin，广泛进行了化学抑制ATM和ATR的蛋白质激酶活性的研究。因此，通过研究出ATR的特异性抑制剂，对于DNA损伤应答反应中生物化学的信息，进而在抗癌治疗的研究有许多优点，因此期盼抑制ATR活性的药物。

这其中，ATM和ATR在细胞中对应于DNA损伤的反应期间，对p53的第15位的丝氨酸残基进行磷酸化。p53在由DNA损伤诱导的G1/S关卡中，起着核心的作用。根据近年来的认识表明：暴露于UV光时，p53的第15位的丝氨酸残基直接被ATM或ATR磷酸化，发生G1期的细胞周期停止。因此，p53的第15位的丝氨酸残基的磷酸化是评价在由UV诱导的DNA损伤后以ATM或ATR作为起点的G1/S关卡是否起作用的合适指标。而且，这种磷酸化在对应于UV的损伤反应中反映ATR的活性。G2/M关卡与G1/S同样，在DNA损伤细胞中受到ATM和ATR的调控。G2/M关卡十分重要，在p53缺失或突变肿瘤等许多癌细胞中很好地保存。尤其是，缺失p53功能的细胞和G2/M关卡的废止对DNA损伤具有感受性。事实上，与G2/M关卡相关时，ATR对于分裂细胞的染色体维持十分重要。这些结果提示：包括ATR蛋白激酶活性的抑制在内的与G2/M关卡相关的一组的抑制成为抗癌治疗的候补方法。

另一方面，来源于五味子(Schisandrae Fructus)的各种五味子素类和戈米辛(gomisin)类是二苄基环辛烷基因衍生物，是作为生物药剂最常使用的化合物类群。作为该化合物类群中一种的有用性，非专利文献8公开了在SMMC-7721肝癌细胞中，五味子素B诱导Caspase-3依赖性细胞凋亡。人们希望对这种化合物在包括肿瘤在内的多种细胞中产生的其它信号调节物质或其它效果展开进一步的研究。一直以来人们所相信的是，根据中国数千年的经验，在含有各种五味子素类和戈米辛类的传统生药、五味子中残留了许多可能性。抗癌剂的70％以上来源于天然物质，或希望副作用更少的类似物。本申请申请人，在抗癌治疗增感剂的观点来看，想到将各种五味子素类和戈米辛类应用于与DNA损伤相关的反应中的信号传递途径中。

专利文献1：特开平7-206751号公报

专利文献2：特开平6-192133号公报

专利文献3：特开平2-48592号公报

专利文献4：特开平5-123184号公报

专利文献5：美国专利申请公开号第2005/0282910号说明书

非专利文献1：Shiloh Y箸，“ATM and ATR：networking cellularresponses to DNA damage”，Curr Opin.Genet.Dev.，2001年，11卷，71-7页

非专利文献2：Cortez D等箸，“ATR and ATRIP：partners incheckpoint signaling”，Science，2001年，294卷，1713-6页

非专利文献3：Tsuchiya H等箸，“Caffeine-assistedchemotherapy and min imized tumor excision for nonmetastaticosteosarcoma.”，Anticancer Res.，1998年，18卷，657-66页

非专利文献4：Shackelford RE等著，“The Ataxiatelangiectasia gene product is required for oxidativestress-induced G1 and G2 checkpoint function in humanfibroblasts.”，J.Biol.Chem.，2001年，276卷，21951-9页

非专利文献5：Wright JA等箸，“Protein kinase mutants ofhuman ATR increase sensitivity to UV and ionizing radiation andabrogate cell cycle checkpoint control.”，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，1998年，95卷，7445-50页

非专利文献6：Shigeta T等箸，“Defective control of apoptosisand mitotic spindle checkpoint in heterozygous carriers of ATMmutations.”，Cancer Res.，1999年，59卷，2602-7页

非专利文献7：Sarkaria JN等著，“Inhibition of ATM and ATRkinase activities by the radiosensitizing agent，caffeine.”，Cancer Res.，1999年，59卷，4375-82页

非专利文献8：Wu YF等箸，“Down-modulation of heat shockprotein 70 and up-modulation of Caspase-3 during schisandrinB-induced apoptosis in human hepatoma SMMC-7221 cells”，WorldJ.Gastroenterol，2004年，10卷，2944-48页

非专利文献9：Tibbetts等箸，Gene & Development，2000年，14卷，2989-3002页

非专利文献10：Canman等著，Science，1998等281卷，1677-9页

非专利文献11：Rouet等著，Proc.Natl.Acad.Scie.USA，1994年，91卷，6064-8页

非专利文献12：Chem.Pharm.Bull.，2003年，51卷，11号，1233-1236页

非专利文献13：Acta Pharmacologica Sinica，1998年，19卷，4号，313-316页

发明内容

发明要解决的问题

因此，本发明目的在于提供一种ATR抑制剂，其含有作为ATR蛋白质激酶抑制剂有用的各种五味子素类和戈米辛等三环性化合物作为有效成分。

用于解决问题的手段

本发明的ATR抑制剂的特征在于含有下式(1)所示的化合物作为有效成分：

而且，本发明的ATR抑制剂的特征在于含有下式(2)所示的化合物作为有效成分：

而且，本发明的ATR抑制剂的特征在于含有下式(3)所示的化合物作为有效成分：

而且，本发明的ATR抑制剂的特征在于含有下式(4)所示的化合物作为有效成分：

而且，本发明的ATR抑制剂的特征在于含有下式(5)所示的化合物作为有效成分：

而且，本发明的ATR抑制剂的特征在于含有下式(6)所示的化合物作为有效成分：

而且，本发明的ATR抑制剂的特征在于含有下式(7)所示的化合物作为有效成分：

而且，本发明的ATR抑制剂的特征在于含有下式(8)所示的化合物作为有效成分：

而且，本发明的ATR抑制剂的特征在于含有下式(9)所示的化合物作为有效成分：

而且，本发明的ATR抑制剂的特征在于含有下式(10)所示的化合物作为有效成分：

其中，作为本发明的ATR抑制剂，优选含有上式(1)-(5)所示的化合物作为有效成分。

本发明的ATR抑制剂中，前述ATR活性优选为蛋白质磷酸化活性。

本发明的ATR抑制剂中，前述蛋白质磷酸化活性优选为对细胞周期关联蛋白质进行磷酸化的活性。

本发明的ATR抑制剂中，前述细胞周期关联蛋白质优选为p53。

本发明的ATR抑制剂中，前述细胞周期关联蛋白质优选为选自于Brca1和Chk1构成的组中。

发明的效果

如果按照本发明，可以在体内和体外特异性抑制ATR活性。

附图说明

图1：是表示经UV照射的A549细胞中五味子素B对生存率的影响的图。

图2：是表示经UV照射的A549细胞中五味子素B对细胞周期的影响的图，(A)是表示对总细胞数的磷酸化组蛋白H3量的图，(B)是表示以磷酸化组蛋白H3量作为指标，将分裂细胞数在所有细胞中所占比率图像化的图。

图3：是表示经电离放射线照射的A549细胞中五味子素B对分裂细胞数的影响的图。

图4：是表示经UV照射或电离放射线照射的A549细胞中五味子素B对p53磷酸化的影响的图。

图5-1：是表示经UV照射的A549细胞中五味子素B对p53磷酸化的浓度依赖性影响的图。

图5-2：是表示经UV照射的A549细胞中ATR抑制剂对p 53磷酸化的影响的图。

图6：是表示A549细胞中五味子素B对细胞周期的影响的图。

图7：是表示五味子素B对ATR和ATM所具有的磷酸化活性的影响的图，(A)为对应于ATR的图，(B)是对应于ATM的图。

图8：是表示经UV照射的AT2KY细胞中，五味子素B对各种蛋白的磷酸化的影响的图。

图9：是表示经抑制ATR或ATM表达的UV照射的A549细胞中，五味子素B对各种蛋白的磷酸化的影响的图。

图10：是表示A549细胞中，五味子素B对MAPK的磷酸化的影响的图。

具体实施方式

本发明的ATR抑制剂可以利用合成产品、天然产品等各种市售的可以利用的化合物，也可以按照专利文献1等中记载的公知的合成方法制备，而且，也可以是按照专利文献2等公知的方法从五味子(Schisandra Chinensis)来源的Fructus Schisandrae等天然生药中提取/纯化出的物质。

具体是，作为上式(1)所示的五味子素B(Schizandrin B；SchB)，可以是通过以下方式获得：如专利文献2中的记载，用n-已烷等烃类溶剂或甲醇等醇类溶剂加热一定时间提取五味子(FructusSchisandrae)后，置于柱层析，对含有所获得的非水溶性物质和水溶性物质的混合物的溶液浓缩干燥，在其中添加氢氧化钾和甲醇的混合液进行皂化，在这样获得的原料中加入甲醇搅拌溶解后，用氢氧化钾水溶液溶解，然后除去上述甲醇，析出目的物质的非水溶性物质。

而且，作为上式(2)所示的戈米辛C(Gomisin C；GC)，可以通过以下方式获得：如上述专利文献3所示的方法，用石油醚等弱极性溶剂提取后，再使用石油醚，n-庚烷等弱极性水不溶性溶剂和甲醇等高极性水溶性溶剂进行分配提取后，根据需要用柱层析、通过高效液相层析等分离目的物质。

而且，作为上式(3)所示的戈米辛G(Gomisin G；GG)，可以是如上述非专利文献12中所示，从阿里山五味子(Schizandra arisanensis)的干燥干中用乙酸乙酯提取，根据需要用柱层析进行纯化的制品。

而且，作为上式(4)所示的戈米辛H(Gomisin H；HG)，可以如上述专利文献5中记载，从北五味子(Schizandra chinensis)中获得。

而且，作为上式(5)所示的戈米辛J(Gomisin J；GJ)，可以通过专利文献1中所示的内容，在获得通过将从五味子中提取的脱氧五味子素酰基化合成的下式(B)所示的化合物后，脱烷基(式中的R₁基)，脱酰基化(式中，COR基)获得。

(式中，R₁表示低级烷基，R表示氢原子或低级烷基)。

而且，上式(6)所示的五味子素(Schizandrin；Sch)，可以如专利文献3所示，用石油醚等低极性溶剂和甲醇等高极性水溶性溶剂进行分配提取后，根据需要，通过柱层析、高效液相色谱等分离目的物质。

而且，作为上式(7)所示的戈米辛A(Gomisin A；GA)，可以通过以下方式获得：除按照上述专利文献3的方法之外，如专利文献4中的记载，还原下式(A)所示化合物的5元环二羟基化后，再进行氧化反应、甲磺酰化反应，从获得的d1-五味子素(III)中分离旋光异构体。

而且，作为上式(8)所示的戈米辛B(Gomisin B；GB)，可以通过以下方式获得：通过按照上述非专利文献12中记载的内容，用乙酸乙酯从阿里山五味子(Schizandra arisanensis)的干燥干中进行提取，根据需要使用柱层析进行纯化。

而且，上式(9)所示的戈米辛N(Gomisin N；GN)，可以通过专利文献5中记载的内容，来源于北五味子(Schizandra chinensis)。

而且，上式(10)所示的五味子素C(Schizandrin c；SC)，可以通过非专利文献13所示内容，使用五味子的石油醚提取物通过柱层析纯化获得。

实施例

(实施例1)经UV照射的A549细胞中五味子素B对生存率的影响

将A549细胞(American Tissue Type Collection公司制)以500个/60mm皿接种于含有10％胎儿牛血清(FBS)、100μg/mL链霉素和100个单位/mL青霉素的DMEM培养基(以下称为增殖培养基)中培养一昼夜后，在培养基中以1μM和10μM的终浓度添加五味子素B(制备含有终浓度为10g/L的五味子素B的DMSO溶液，再在培养基中稀释成培养基中不到5g/L的DMSO浓度，再使用。以下相同)。

添加1小时后，用Stratalinker(Stratagene公司制)照射20和50J/cm²的UV(波长采用254nm。以下相同)，再次更换成具有与上述同浓度的五味子素B的培养基(以下，称为含有五味子素B的培养基)，再连续培养14天后，用磷酸缓冲生理盐水(PBS)清洗细胞，用2％亚甲蓝，按照克隆法，计算存活的细胞数。结果示于图1。图1，横轴表示照射的UV的剂量，纵轴以百分比表示相对于未处理组，处理组中存活细胞的比率。图中，○表示没有用五味子素B处理的组，▲表示经1μM的五味子素B处理的组，■表示经10μM的五味子素B处理的组。而且，用平均±标准误差(n＝3)表示各组。

(实施例2-1)经UV照射的A549细胞中五味子素B产生的对细胞周期的影响

在增殖培养基中以3×10⁴个/cm²的终浓度在10mm皿中接种A549细胞，培养一昼夜后，以30μM的终浓度在培养基中添加五味子素B。1小时后，除去培养基，照射20和50J/m²的UV，在含有与上述浓度相同的五味子素B的培养基中培养细胞1小时。然后，按照下述的组蛋白H3磷酸化量的测定，测定细胞中的组蛋白H3磷酸化量。结果示于图2。图2(A)为经五味子素B处理时获得的流式细胞仪测试的结果，图2(A)中，圆圈中的部分表示G2/M期的细胞群，其上方记载的数据表示G2/M期的细胞群数相对于总细胞数的比率。而且，图2(B)为以图形表示该比率的图。

(实施例2-2)

在实施例2-1中，除了照射20J/m²的UV代替20和50J/m²的UV，使用上式(1)-(10)中所示的化合物和下式(C)所示的当归酰戈米辛A(Angeloygomisin A；AGA)(终浓度30μM)代替终浓度为30μM的五味子素B之外，进行与实施例2-1相同的步骤，获得了G2/M期的细胞群数相对于总细胞数的比率。结果示于表1。

[表1]

(实施例3)经电离放射线照射的A549细胞中五味子素B对分裂细胞数的影响

在增殖培养基中以3×10⁴个/cm²的终浓度在10mm皿中接种A549细胞，培养-昼夜后，以30μM的终浓度在培养基中添加五味子素B。1小时后，除去培养基，照射3Gy的电离放射线，在含有与上述浓度相同的五味子素B的培养基中培养细胞1小时。对于该细胞，进行下述的组蛋白H3磷酸化量的测定。结果示于图3。各个数值与图2(B)相同。

(实施例4)经UV照射或电离放射线照射的A549细胞中五味子素B对p53磷酸化的影响

在增殖培养基中以3×10⁴个/cm²的终浓度在10mm皿中接种A549细胞，培养一昼夜后，以30μM的终浓度在培养基中添加五味子素B。1小时后，除去培养基，照射20J/m²的UV，培养3小时(以下将这种细胞群称为UV细胞群)。

而且，同样，培养一昼夜，在培养基中以30μM的终浓度添加五味子素B，培养1小时，除去A549细胞的培养基，照射10Gy的电离放射线(γ射线)，在含有与上述浓度相同的五味子素B的培养基中培养细胞2小时(以下将这种细胞群称为IR细胞群)。

而且，UV细胞群和IR细胞群中的任一者，从照射的15分钟前直至下述的细胞回收，都在50μm的N-乙酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酰-正亮氨酸(N-acetyl-L-Leucyl-L-Leucyl-norleucinal，以下称为LLnL；Sigma公司制，MO，美国)存在下培养细胞。然后，按照下述的蛋白制备提取细胞中的蛋白质后，按照下述的免疫印迹分析，对p53蛋白的第15位的丝氨酸残基的磷酸化体(P-p53(Ser15))、p53蛋白(p53)、ATM蛋白的第1981位丝氨酸残基的磷酸化体(P-ATM(Ser1981))和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)，进行免疫印迹分析。结果示于图4。

(实施例5-1)经UV照射的A549细胞中五味子素B对p53磷酸化的浓度依赖性影响

在增殖培养基中以3×10⁴个/cm²的终浓度在10mm皿中接种A549细胞，培养一昼夜后，以10、30和100μM的终浓度在培养基中添加五味子素B。1小时后，除去培养基，照射20J/m²的UV。并且，与实施例4相同，使用LLnL处理细胞。然后，按照下述免疫印迹用与上述同浓度的五味子素B处理1小时的细胞，研究p53和p53的第15位的丝氨酸残基的磷酸化体(P-p53(Ser15))的表达。结果示于图5-1。

(实施例5-2)

除了分别添加上述式(1)-(10)所示的化合物和上述式(C)所示的化合物(30μM的终浓度)来代替实施例5-1中在培养基中以30μM的终浓度添加五味子素B，照射25J/m²的UV替代20J/m²的UV之外，与实施例5-1相同进行，研究p53的第15位的丝氨酸残基的磷酸化体(P-p53(Ser15))的表达。此时获得的电泳图像示于图5-2，对于相当于P-p53(Ser15)的条带强度(用微管蛋白标准化的条带)，以经UV照射获得的作为100％时的由各化合物获得的强度的相对比率示于表2。

表2

(实施例6)A549细胞中五味子素B对细胞周期的影响

在增殖培养基中以3×10⁴个/cm²的终浓度在10mm皿中接种A549细胞，培养一昼夜后，以30μM的终浓度在培养基中添加五味子素B。4小时后，按照下述FACS分析，研究细胞周期。FACS分析的结果示于图6。

(实施例7-1)五味子素B产生的对ATR和ATM所具有的磷酸化活性的影响

在按照下述的磷酸化反应用ATR混合液和ATM混合液的制备获得的磷酸化反应用ATR混合液和ATM混合液中添加作为底物的1μg的重组PHAS-I蛋白质(Alexis Biochemicals公司制)，与之同时添加五味子素B，添加具有适当浓度的³²P-ATP的300μMATP，使之于30℃反应20分钟。用该反应液的4倍量的SDS加样缓冲液(200mMTris-HCl(pH6.8)，400mMDTT和8％SDS)停止反应，将该混合液置于12％SDS-PAGE，将凝胶干燥后，对于与上述的混合液中的³²P-ATP的条带，用自动放射照相法计算γ线剂量。结果示于图7。(A)和(B)分别表示ATR和ATM的相对活性，横轴表示五味子素B的浓度，纵轴以相对于不添加五味子素B的计算的相对值表示。

(实施例7-2)本发明的ATR抑制剂对ATR所具有的磷酸化活性的影响

除了使用上述式(1)-(5)所示的化合物和上述式(C)所示的化合物代替实施例7-1中的五味子素B之外，与实施例7-1相同进行，根据获得的直线计算IC₅₀值。该值示于表3。

表3

(实施例8)经UV照射的AT2KY细胞中，五味子素B对各种蛋白的磷酸化的影响

以3×10⁴个/cm²将AT2KY细胞(ヘルスサイエンス振兴财团(大阪))接种于含有15％FBS、100μg/mL链霉素和100个单位/mL青霉素的RPMI1640培养基中，培养一昼夜。在培养基中以30μM的终浓度添加五味子素B。添加1小时后，除去培养基，照射20J/cm²的UV。然后，对于用与上述浓度相同的五味子素B处理4小时的细胞，按照下述免疫印迹分析，研究p53的第15位的丝氨酸残基的磷酸化体(P-p53(Ser15))、Brca1的第1423位的丝氨酸残基的磷酸化体(P-Brca1(S1423))和Chk1的第345位的丝氨酸残基的磷酸化体(P-Chk1(S345))的表达。结果示于图8。

(实施例9)经抑制ATR或ATM表达的UV照射的A549细胞中，五味子素B对各种蛋白的磷酸化的影响

在增殖培养基中以3×10⁴个/cm²的终浓度在10mm皿中接种A549细胞，培养一昼夜后，用Oligofectamine(Invitrogen公司制)和Opti-MEM(Invitrogen公司制)，用按照下述siRNA的制备获得的各个双链siRNA(siGFP，siATM和siATR)转染细胞。培养一晚后，更换成新鲜的增殖培养基，72小时后，用30μM的五味子素B处理1小时，除去培养基，照射20J/m²的UV。然后，对于经与上述浓度相同的五味子素B处理3小时的细胞，按照下述免疫印迹，研究p53蛋白的第15位的丝氨酸残基的磷酸化体(P-p53(S15))、Chk1的第345位的丝氨酸残基的磷酸化体(P-Chk1(S345))、ATM蛋白(ATM)、ATM蛋白的第1981位丝氨酸残基的磷酸化体(P-ATM(Ser1981))和ATR蛋白(ATR)的表达。结果示于图9。而且，记载于图9中的P-p53(S15)和P-Chk1(S345)栏下的表达比率表示经对照siGFP和UV照射获得的各个蛋白的条带强度为1.0时各条带的相对强度。

(实施例10)A549细胞中，五味子素B对MAPK的磷酸化的影响

在增殖培养基中以3×10⁴个/cm²的终浓度在10mm皿中接种A549细胞，培养一昼夜后，在无血清的增殖培养基中再培养16小时。然后，用50μMPD098059(Sigma公司制)或30μM五味子素B处理细胞，再用100ng/mLPhorbol-12-肉豆蔻酸13-醋酸(PMA；Sigma公司制)处理5分钟。然后，按照下述的免疫印迹分析，研究细胞的42kDa和44kDa促细胞分裂剂活性化蛋白质激酶(p42MAPK和p44MAPK)和它们的磷酸化体的表达。结果示于图10。

(组蛋白H3磷酸化量的测定)

用PBS清洗细胞后，用70％经冰冷却的乙醇固定。在其中添加含有0.25％Triton X-100的PBS，置于冰上30分钟后，回收细胞，离心分离(500G，5分钟)，在获得的细胞小球中添加含有1％牛血清白蛋白(BSA)和1μg抗兔血清(特异于组蛋白H3的第13位的丝氨酸残基的磷酸化体)的PBS(100μL)，室温下放置4小时。然后，用含有1％BSA的PBS将其清洗，添加用含有1％BSA的PBS稀释至100倍的结合了FITC的山羊抗兔IgG抗体，在黑暗的地方放置30分钟。再按照下述FACS分析进行PI染色后，用流式细胞仪(Beckman-Coulter公司制)测定磷酸化组蛋白H3量。

(免疫印迹分析)

对50μg的蛋白(按照下述的蛋白制备来制备的)进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(12.5％)，按照常规方法将电泳后的各个蛋白转移到硝基纤维素膜上，用含有5％脱脂乳和0.1％Trion X-100的Tris缓冲生理盐水(TBS-T)，室温下进行1小时封闭反应。用以下所示的所希望的抗体在4℃将获得的膜温育16小时，然后，用结合了来源于山萮菜的过氧化酶的二级抗血清(针对上述所希望的抗体的来源动物的)在室温下培养1小时。然后，用ECL反应试剂盒(Amersham公司制)和化学发光膜(Amersham公司制)使靶蛋白可视化，获得蛋白图像。

<抗体>

p53(Calbiochem公司制)

磷酸化p53抗体(Cell signaling technology公司制)

磷酸化ATM抗体(Rockland公司制)

磷酸化Chk1抗体(Cell signaling technology公司制)

ATR抗体(Bethyl公司制)

微管蛋白抗体(Sigma公司制)

GAPDH抗体(Santa Cruz公司制)

磷酸化Brca 1抗体(Upstate公司制)

抗MAPK抗体和抗磷酸化MAPK抗体(Cell Signaling公司制)

(蛋白制备)

用经冰冷却的PBS从培养皿中剥离细胞，用冷PBS清洗两次后，进行离心分离，在获得的细胞小球中用下述UTB缓冲液使之溶解，制备细胞来源的蛋白混合物。用蛋白质测试盒(Bio-Rad公司制，ProteinAssay Kit)测定蛋白量。

<UTB缓冲液>

8mM 尿素

150mM 2-巯基乙醇

50mM Tris(pH7.5)

(FACS分析)

用PBS清洗细胞后，用70％经冰冷却的乙醇固定。在通过离心分离回收的细胞小球中加入PBS清洗后，在进行离心分离。将细胞小球悬浮于含有终浓度为100μM的碘化丙锭(Propidium Iodide，Sigma公司，以下称为PI)和40μg/mL的RNaseA的溶液(PI溶液)，在室温下培养30分钟。然后，用流式细胞仪(Beckman-Coulter公司制)分析细胞周期。

(磷酸化反应用ATR混合液和ATM混合液的制备)

在磷酸化反应用ATR混合液中，使用非专利文献9等公知的方法制备的经Flag标记的ATR。具体是，非专利文献9中公开的方法为将ATR基因(序列号4)的BamH1-SwaI片段(1kb)置换为对应于N末端具有Flag(DYKDDDDK)的ATR的基因，将通过PCR扩增的基因产物导入到pcDNA3.1中的质粒，从中合成经Flag标记的ATR。而且，在磷酸化反应用ATM混合液中，使用非专利文献10和11等公知的方法和快速改变定点诱变试剂盒(Quickchange Site-Directed Mutagenesis Kit，Stratagene公司制)制备的经Flag标记的ATM。

按照下述的磷酸钙法以这些经Flag标记的ATR和ATM质粒(序列号4和5)转染293T细胞(ATCC编号CRL-11268)，培养两天。然后，于4℃4小时用20μg抗Flag-M2单克隆抗体I(Sigma公司制)，使5mg按照将上述UTB缓冲液更换为下述的IP缓冲液进行的上述制备获得的蛋白混合物免疫沉淀。用结合了蛋白质G琼脂糖(Amersham公司制)的小珠与上述产物一起于4℃温育1小时。用下述TGN缓冲液清洗所获得的免疫复合体两次，再用下述激酶缓冲液清洗1次，获得磷酸化反应用ATR混合液和ATM混合液(序列号6和7)。

<IP缓冲液>

10mM Tris(pH7.5)

1mM EDTA

1mM EGTA

150mM NaCl

0.5％ NP-40

1％ Triton X-100

1mM 苯甲基磺酰氟化物(PMSF)

2μg/mL 胃酶抑素

2μg/mL 抑肽酶

1mM p，p’-二氯二苯三氯乙烷(DDT)

<TGN缓冲液>

50mM Tris(pH7.4)

50mM 磷酸甘油

150mM NaCl

1％ Tween20

10％甘油

<激酶缓冲液>

10mM Hepe s(pH7.5)

50mM 磷酸甘油

50mM NaCl

10mM MgCl₂

10mM MnCl₂

<磷酸钙法>

在增殖培养基中以2×10⁴个/cm²的终浓度在10mm皿中接种293T细胞，培养一昼夜。然后，将上述Flag-ATM和Flag-ATR与终浓度为25mM的BES(N，N-二(2-羟基乙基)-2-氨基甲磺酸)和25mM的CaCl₂混合，将其转染细胞。培养一晚后，更换成新鲜的增殖培养基，培养两天。

(siRNA的制备)

按照HP GenomeWide siRNA(QIAGEN公司制)合成针对ATR、ATM和绿色荧光蛋白(GFP)的双链siRNA(分别对应序列表中记载的序列号1、2和3)。将获得的双链siRNA分别命名为siATR、siATM和siGFP。

(考察)

ATM(毛细血管扩张性共济失调突变)和ATR(毛细血管扩张性共济失调和rad3相关的)在针对细胞周期的DNA损伤的反应中涉及的信号传递中扮演着重要的角色。ATM和ATR对Chk1、p53、NBS1、Brca1、SMC1等所有的关卡·蛋白质群和转录因子进行磷酸化。为了避免作为癌症发生成因的下一世代继续持有DNA损伤，上述关卡信号控制整个细胞周期。ATM或ATR的缺失，通过由UV或IR照射或抑制诱导性药剂诱导的DNA损伤，使细胞的存活率降低。这表明受到损伤的DNA的修复，维持和管理中需要ATM和ATR。在本发明中，本申请申请人公开了北五味子(Schisandra Chinensis)的成分的五味子素B使UV照射后的细胞的存活率以浓度依赖性显示下降。这表明体内的DNA损伤反应中，五味子素B对关卡信号途径具有抑制效果。

组蛋白H3，正常的分裂细胞中其第10位的丝氨酸残基被磷酸化，成为从G2期向M期移行的指标，但由于DNA损伤，G2期/M期关卡一旦行使功能，磷酸化组蛋白H3阳性细胞的比率就减少。如果根据图2，通过20和50J/m²的UV照射，磷酸化组蛋白H3的比率减少。另一方面，经50J/m²的UV照射并不明显，经20J/m²的UV照射，上式(1)所示的五味子素B使G2/M关卡显著崩溃。事实上，低剂量的UV照射中，对应于DNA损伤的反应中，五味子素B使G2/M关卡完全无效。而且，上式(1)-(10)所示的化合物和上式(C)所示的化合物和上式(C)所示的化合物也使G2/M关卡(checkpoint)完全无效。另一方面，对A549细胞进行IR照射时，不会引起G2/M关卡的剧烈抑制。已知，一般来说，IR照射使ATM活性化，UV照射使ATR活性化，使细胞周期关卡行使功能。根据这些结果显示，五味子素B在经低剂量的UV照射诱导的DNA损伤的过程中的G2/M关卡中，比起对ATM来说而是对ATR活性具有抑制效果。同样事项，也可以适用于上式(1)-(10)所示的化合物等本发明的ATR抑制剂的其它化合物。

为了验证本发明的ATR抑制剂对体内的ATR激酶活性的抑制活性，研究了经IR或UV照射诱导的DNA损伤后的p53磷酸化。已知p53在体内，在多个部位受到各种蛋白质激酶磷酸化，对于细胞来说是非常重要的转录因子。考虑癌症治疗中DNA损伤反应时的p53的功能时，细胞受到UV照射，γIR照射和甲基化剂的抑制时，p53的第15位的丝氨酸残基中，被ATR和ATM特异性磷酸化。本发明中，对A549细胞进行20J/m²的UV照射后，p53磷酸化由于五味子素B而减少，经IR照射并未减少。IR照射后ATM的第1981位的丝氨酸残基被显著活性化，而经20J/m²的UV照射仅少量被活性化，而五味子素B在任意一种DNA损伤中，对ATM活性都不产生影响。而且，也没有发现五味子素B所产生的细胞周期的局部的积累和偏向。而且，观察到了上式(1)-(10)所示的化合物对p53磷酸化的抑制。根据这些结果，表明经20J/m²的UV照射所产生的p53的第15位的丝氨酸残基的磷酸化的减少只由ATR引起。

非专利文献7公开了咖啡因对于A549腺癌细胞中ATM和ATR蛋白激酶的抑制效果。本申请申请人通过与该文献相同的方法，研究了在体外五味子素B对ATM和ATR的蛋白质激酶活性的影响。如果将五味子素B与激酶缓冲液一起温育，就会抑制ATM和ATR，五味子素B抑制ATR蛋白质激酶比抑制ATM更为显著。事实上，五味子素B产生的对ATR的IC₅₀是ATM的约240倍。而且，观察到上式(1)-(5)所示化合物显著抑制ATR蛋白质激酶活性。细胞的存活率和激酶活性的结果表示，诱导细胞的DNA损伤的UV照射的反应中，ATR蛋白质激酶活性受到抑制。

为了研究五味子素B对DNA损伤所涉及的关卡的影响，使用AT患者来源的成纤维细胞(AT2KY)和siRNA处理细胞。如果对AT2KY进行UV照射，不仅磷酸化p53以及关卡途径中ATM和ATR的作为下游分子的Brca1(Ser1423)和Chk1(Ser345)的磷酸化体就增加。而且，只是在对照和ATM所涉及的经siRNA处理的细胞中，五味子素B使p53和Chk1的磷酸化减少。而且，经siRNA处理的细胞中，并没有观察到关卡的蛋白质所涉及的磷酸化有所减少。根据这些结果，表明五味子素B在体内介导ATR蛋白质激酶活性的抑制，抑制DNA损伤所涉及的关卡的信号传递途径。

为了确认五味子素B在体内对ATR抑制的特异性，研究了称为促细胞分裂剂活性化蛋白质激酶(MAPK)的ERK的血清刺激和PMA处理对由特异的活性化系统所产生的磷酸化的效果。ERK的磷酸化，通过上述的参照方法，受到强力促进。该ERK磷酸化完全不受五味子素B的影响。因此清楚了，针对DNA损伤的反应中，五味子素B的有效性高度特异于ATR活性。

在本发明中，通过对细胞的UV照射诱导的DNA损伤应答反应(关卡)中出现五味子素B的效果。由于敲除了ATR的胚细胞是致死的，因此预测ATR在哺乳类成长的阶段扮演着重要的角色。这表明染色质的不稳定化，对应于生物体内连续生成的自由基的关卡的缺失，和生长过程中的细胞性DNA的复制压力所产生的关卡中需要ATR。另一方面，由于ATR起ATM的后备的作用，因此关卡在AT患者来源的细胞(遗传上ATM不起作用的细胞)中维持关卡。这表明，包括肿瘤发生的增殖性细胞中，ATR蛋白质激酶十分重要。由于可以通过ATR的激酶活性抑制阻止患者中DNA损伤关卡，因此根据本发明的见解，五味子素B在放射线疗法和化学疗法等的抗癌治疗中可具有优势。咖啡因，与ATR相比，具有1/5的IC₅₀的ATM的活性。因此，可以预见在临床中癌症治疗时，如果五味子素B单独或与咖啡因组合进行放射线疗法和化学疗法，它们的感受性会显著增加。

非专利文献3报告了在临床中试验性地使用咖啡因作为化疗剂或放射线治疗的辅助。该文献公开了，通过由咖啡因辅助的治疗，与分别处理化疗剂或放射线疗法相比，骨肉瘤的尺寸减少且最小化。这些结果表明，咖啡因抑制ATM和ATR蛋白质激酶活性，在增殖肿瘤的细胞周期的任一阶段，也都会带来对DNA损伤所涉及的关卡的抑制。因此，作为由五味子素B辅助的化学疗法和放射线疗法，五味子素B存在临床试验性应用的可能性。进一步研究所涉及的，对于在咖啡因的临床试验的同时使肿瘤消失或使之最小化所涉及的效率化是否可能，需要研究与五味子素B一起使用的效果。尤其是，五味子素B，为希望是在患者中完全没有副作用的天然植物体取物中的成分。即使化疗/放射线疗法的给药量和剂量降低至最低限度，可预计上述这种ATM/ATR抑制剂具有与以往相同或其之上的效果，因此对于化疗/放射线疗法，通过组合五味子素B和咖啡因，可以预计将对患者的副作用抑制到最小限度。

以上，通过本发明的优选的实施方式对本发明进行了说明。其中，公开了特定的具体例子说明本发明，但是清楚的是，不脱离权利要求的范围中定义的本发明的广泛的目的和范围，可以对这些具体例子增加各种修正和改变。即，本发明不受具体例子的详细内容和添加的附图限定和解释。

序列表

<110>Niigata TLO Corporation

<120>ATR inhibitor

<130>D-18646

<160>7

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>21

<212>DNA

<213>Synthetic

<400>1

aagcgcctga ttcgagatcc t 21

<210>2

<211>21

<212>DNA

<213>Synthetic

<400>2

aagacggtgt gctcatgcgg c 21

<210>3

<211>24

<212>DNA

<213>Synthetic

<400>3

cggcaagctg accctgaagt tcat 24

<210>4

<211>8265

<212>DNA

<213>Synthetic

<400>4

gcctccacac ggctccgtcg ggcgccgcgc tcttccggca gcggtacgtt tggagacgcc 60

gggaacccgc gttggcgtgg ttgactagtg cctcgcagcc tcagcatggg ggaacatggc 120

ctggagctgg cttccatgat ccccgccctg cgggagctgg gcagtgccac accagaggaa 180

tataatacag ttgtacagaa gccaagacaa attctgtgtc aattcattga ccggatactt 240

acagatgtaa atgttgttgc tgtagaactt gtaaagaaaa ctgactctca gccaacctcc 300

gtgatgttgc ttgatttcat ccagcatatc atgaaatcct ccccacttat gtttgtaaat 360

gtgagtggaa gccatgagcg caaaggcagt tgtattgaat tcagtaattg gatcataacg 420

agacttctgc ggattgcagc aactccctcc tgtcatttgt tacacaagaa aatctgtgaa 480

gtcatctgtt cattattatt tctttttaaa agcaagagtc ctgctatttt tggggtactc 540

acaaaagaat tattacaact ttttgaagac ttggtttacc tccatagaag aaatgtgatg 600

ggtcatgctg tggaatggcc agtggtcatg agccgatttt taagtcaatt agatgaacac 660

atgggatatt tacaatcagc tcctttgcag ttgatgagta tgcaaaattt agaatttatt 720

gaagtcactt tattaatggt tcttactcgt attattgcaa ttgtgttttt tagaaggcaa 780

gaactcttac tttggcagat aggttgtgtt ctgctagagt atggtagtcc aaaaattaaa 840

tccctagcaa ttagcttttt aacagaactt tttcagcttg gaggactacc agcacaacca 900

gctagcactt ttttcagctc atttttggaa ttattaaaac accttgtaga aatggatact 960

gaccaattga aactctatga agagccatta tcaaagctga taaagacact atttcccttt 1020

gaagcagaag cttatagaaa tattgaacct gtctatttaa atatgctgct ggaaaaactc 1080

tgtgtcatgt ttgaagacgg tgtgctcatg cggcttaagt ctgatttgct aaaagcagct 1140

ttgtgccatt tactgcagta tttccttaaa tttgtgccag ctgggtatga atctgcttta 1200

caagtcagga aggtctatgt gagaaatatt tgtaaagctc ttttggatgt gcttggaatt 1260

gaggtagatg cagagtactt gttgggccca ctttatgcag ctttgaaaat ggaaagtatg 1320

gaaatcattg aggagattca atgccaaact caacaggaaa acctcagcag taatagtgat 1380

ggaatatcac ccaaaaggcg tcgtctcagc tcgtctctaa acccttctaa aagagcacca 1440

aaacagactg aggaaattaa acatgtggac atgaaccaaa agagcatatt atggagtgca 1500

ctgaaacaga aagctgaatc ccttcagatt tcccttgaat acagtggcct aaagaatcct 1560

gttattgaga tgttagaagg aattgctgtt gtcttacaac tgactgctct gtgtactgtt 1620

cattgttctc atcaaaacat gaactgccgt actttcaagg actgtcaaca taaatccaag 1680

aagaaacctt ctgtagtgat aacttggatg tcattggatt tttacacaaa agtgcttaag 1740

agctgtagaa gtttgttaga atctgttcag aaactggacc tggaggcaac cattgataag 1800

gtggtgaaaa tttatgatgc tttgatttat atgcaagtaa acagttcatt tgaagatcat 1860

atcctggaag atttatgtgg tatgctctca cttccatgga tttattccca ttctgatgat 1920

ggctgtttaa agttgaccac atttgccgct aatcttctaa cattaagctg taggatttca 1980

gatagctatt caccacaggc acaatcacga tgtgtgtttc ttctgactct gtttccaaga 2040

agaatattcc ttgagtggag aacagcagtt tacaactggg ccctgcagag ctcccatgaa 2100

gtaatccggg ctagttgtgt tagtggattt tttatcttat tgcagcagca gaattcttgt 2160

aacagagttc ccaagattct tatagataaa gtcaaagatg attctgacat tgtcaagaaa 2220

gaatttgctt ctatacttgg tcaacttgtc tgtactcttc acggcatgtt ttatctgaca 2280

agttctttaa cagaaccttt ctctgaacac ggacatgtgg acctcttctg taggaacttg 2340

aaagccactt ctcaacatga atgttcatct tctcaactaa aagcttctgt ctgcaagcca 2400

ttccttttcc tactgaaaaa aaaaatacct agtccagtaa aacttgcttt catagataat 2460

ctacatcatc tttgtaagca tcttgatttt agagaagatg aaacagatgt aaaagcagtt 2520

cttggaactt tattaaattt aatggaagat ccagacaaag atgttagagt ggcttttagt 2580

ggaaatatca agcacatatt ggaatccttg gactctgaag atggatttat aaaggagctt 2640

tttgtcttaa gaatgaagga agcatataca catgcccaaa tatcaagaaa taatgagctg 2700

aaggatacct tgattcttac aacaggggat attggaaggg ccgcaaaagg agatttggta 2760

ccatttgcac tcttacactt attgcattgt ttgttatcca agtcagcatc tgtctctgga 2820

gcagcataca cagaaattag agctctggtt gcagctaaaa gtgttaaact gcaaagtttt 2880

ttcagccagt ataagaaacc catctgtcag tttttggtag aatcccttca ctctagtcag 2940

atgacagcac ttccgaatac tccatgccag aatgctgacg tgcgaaaaca agatgtggct 3000

caccagagag aaatggcttt aaatacgttg tctgaaattg ccaacgtttt cgactttcct 3060

gatcttaatc gttttcttac taggacatta caagttctac tacctgatct tgctgccaaa 3120

gcaagccctg cagcttctgc tctcattcga actttaggaa aacaattaaa tgtcaatcgt 3180

agagagattt taataaacaa cttcaaatat attttttctc atttggtctg ttcttgttcc 3240

aaagatgaat tagaacgtgc ccttcattat ctgaagaatg aaacagaaat tgaactgggg 3300

agcctgttga gacaagattt ccaaggattg cataatgaat tattgctgcg tattggagaa 3360

cactatcaac aggtttttaa tggtttgtca atacttgcct catttgcatc cagtgatgat 3420

ccatatcagg gcccgagaga tatcatatca cctgaactga tggctgatta tttacaaccc 3480

aaattgttgg gcattttggc tttttttaac atgcagttac tgagctctag tgttggcatt 3540

gaagataaga aaatggcctt gaacagtttg atgtctttga tgaagttaat gggacccaaa 3600

catgtcagtt ctgtgagggt gaagatgatg accacactga gaactggcct tcgattcaag 3660

gatgattttc ctgaattgtg ttgcagagct tgggactgct ttgttcgctg cctggatcat 3720

gcttgtctgg gctcccttct cagtcatgta atagtagctt tgttacctct tatacacatc 3780

cagcctaaag aaactgcagc tatcttccac tacctcataa ttgaaaacag ggatgctgtg 3840

caagattttc ttcatgaaat atatttttta cctgatcatc cagaattaaa aaagataaaa 3900

gccgttctcc aggaatacag aaaggagacc tctgagagca ctgatcttca gacaactctt 3960

cagctctcta tgaaggccat tcaacatgaa aatgtcgatg ttcgtattca tgctcttaca 4020

agcttgaagg aaaccttgta taaaaatcag gaaaaactga taaagtatgc aacagacagt 4080

gaaacagtag aacctattat ctcacagttg gtgacagtgc ttttgaaagg ttgccaagat 4140

gcaaactctc aagctcggtt gctctgtggg gaatgtttag gggaattggg ggcgatagat 4200

ccaggtcgat tagatttctc aacaactgaa actcaaggaa aagattttac atttgtgact 4260

ggagtagaag attcaagctt tgcctatgga ttattgatgg agctaacaag agcttacctt 4320

gcgtatgctg ataatagccg agctcaagat tcagctgcct atgccattca ggagttgctt 4380

tctatttatg actgtagaga gatggagacc aacggcccag gtcaccaatt gtggaggaga 4440

tttcctgagc atgttcggga aatactagaa cctcatctaa ataccagata caagagttct 4500

cagaagtcaa ccgattggtc tggagtaaag aagccaattt acttaagtaa attgggtagt 4560

aactttgcag aatggtcagc atcttgggca ggttatctta ttacaaaggt tcgacatgat 4620

cttgccagta aaattttcac ctgctgtagc attatgatga agcatgattt caaagtgacc 4680

atctatcttc ttccacatat tctggtgtat gtcttactgg gttgtaatca agaagatcag 4740

caggaggttt atgcagaaat tatggcagtt ctaaagcatg acgatcagca taccataaat 4800

acccaagaca ttgcatctga tctgtgtcaa ctcagtacac agactgtgtt ctccatgctt 4860

gaccatctca cacagtgggc aaggcacaaa tttcaggcac tgaaagctga gaaatgtcca 4920

cacagcaaat caaacagaaa taaggtagac tcaatggtat ctactgtgga ttatgaagac 4980

tatcagagtg taacccgttt tctagacctc ataccccagg atactctggc agtagcttcc 5040

tttcgctcca aagcatacac acgagctgta atgcactttg aatcatttat tacagaaaag 5100

aagcaaaata ttcaggaaca tcttggattt ttacagaaat tgtatgctgc tatgcatgaa 5160

cctgatggag tggccggagt cagtgcaatt agaaaggcag aaccatctct aaaagaacag 5220

atccttgaac atgaaagcct tggcttgctg agggatgcca ctgcttgtta tgacagggct 5280

attcagctag aaccagacca gatcattcat tatcatggtg tagtaaagtc catgttaggt 5340

cttggtcagc tgtctactgt tatcactcag gtgaatggag tgcatgctaa caggtccgag 5400

tggacagatg aattaaacac gtacagagtg gaagcagctt ggaaattgtc acagtgggat 5460

ttggtggaaa actatttggc agcagatgga aaatctacaa catggagtgt cagactggga 5520

cagctattat tatcagccaa aaaaagagat atcacagctt tttatgactc actgaaacta 5580

gtgagagcag aacaaattgt acctctttca gctgcaagct ttgaaagagg ctcctaccaa 5640

cgaggatatg aatatattgt gagattgcac atgttatgtg agttggagca tagcatcaaa 5700

ccacttttcc agcattctcc aggtgacagt tctcaagaag attctctaaa ctgggtagct 5760

cgactagaaa tgacccagaa ttcctacaga gccaaggagc ctatcctggc tctccggagg 5820

gctttactaa gcctcaacaa aagaccagat tacaatgaaa tggttggaga atgctggctg 5880

cagagtgcca gggtagctag aaaggctggt caccaccaga cagcctacaa tgctctcctt 5940

aatgcagggg aatcacgact cgctgaactg tacgtggaaa gggcaaagtg gctctggtcc 6000

aagggtgatg ttcaccaggc actaattgtt cttcaaaaag gtgttgaatt atgttttcct 6060

gaaaatgaaa ccccacctga gggtaagaac atgttaatcc atggtcgagc tatgctacta 6120

gtgggccgat ttatggaaga aacagctaac tttgaaagca atgcaattat gaaaaaatat 6180

aaggatgtga ccgcgtgcct gccagaatgg gaggatgggc atttttacct tgccaagtac 6240

tatgacaaat tgatgcccat ggtcacagac aacaaaatgg aaaagcaagg tgatctcatc 6300

cggtatatag ttcttcattt tggcagatct ctacaatatg gaaatcagtt catatatcag 6360

tcaatgccac gaatgttaac tctatggctt gattatggta caaaggcata tgaatgggaa 6420

aaagctggcc gctccgatcg tgtacaaatg aggaatgatt tgggtaaaat aaacaaggtt 6480

atcacagagc atacaaacta tttagctcca tatcaatttt tgactgcttt ttcacaattg 6540

atctctcgaa tttgtcattc tcacgatgaa gtttttgttg tcttgatgga aataatagcc 6600

aaagtatttc tagcctatcc tcaacaagca atgtggatga tgacagctgt gtcaaagtca 6660

tcttatccca tgcgtgtgaa cagatgcaag gaaatcctca ataaagctat tcatatgaaa 6720

aaatccttag agaagtttgt tggagatgca actcgcctaa cagataagct tctagaattg 6780

tgcaataaac cggttgatgg aagtagttcc acattaagca tgagcactca ttttaaaatg 6840

cttaaaaagc tggtagaaga agcaacattt agtgaaatcc tcattcctct acaatcagtc 6900

atgataccta cacttccatc aattctgggt acccatgcta accatgctag ccatgaacca 6960

tttcctggac attgggccta tattgcaggg tttgatgata tggtggaaat tcttgcttct 7020

cttcagaaac caaagaagat ttctttaaaa ggctcagatg gaaagttcta catcatgatg 7080

tgtaagccaa aagatgacct gagaaaggat tgtagactaa tggaattcaa ttccttgatt 7140

aataagtgct taagaaaaga tgcagagtct cgtagaagag aacttcatat tcgaacatat 7200

gcagttattc cactaaatga tgaatgtggg attattgaat gggtgaacaa cactgctggt 7260

ttgagaccta ttctgaccaa actatataaa gaaaagggag tgtatatgac aggaaaagaa 7320

cttcgccagt gtatgctacc aaagtcagca gctttatctg aaaaactcaa agtattccga 7380

gaatttctcc tgcccaggca tcctcctatt tttcatgagt ggtttctgag aacattccct 7440

gatcctacat catggtacag tagtagatca gcttactgcc gttccactgc agtaatgtca 7500

atggttggtt atattctggg gcttggagac cgtcatggtg aaaatattct ctttgattct 7560

ttgactggtg aatgcgtaca tgtagatttc aattgtcttt tcaataaggg agaaaccttt 7620

gaagttccag aaattgtgcc atttcgcctg actcataata tggttaatgg aatgggtcct 7680

atgggaacag agggtctttt tcgaagagca tgtgaagtta caatgaggct gatgcgtgat 7740

cagcgagagc ctttaatgag tgtcttaaag acttttctac atgatcctct tgtggaatgg 7800

agtaaaccag tgaaagggca ttccaaagcg ccactgaatg aaactggaga agttgtcaat 7860

gaaaaggcca agacccatgt tcttgacatt gagcagcgac tacaaggtgt aatcaagact 7920

cgaaatagag tgacaggact gccgttatct attgaaggac atgtgcatta ccttatacaa 7980

gaagctactg atgaaaactt actatgccag atgtatcttg gttggactcc atatatgtga 8040

aatgaaatta tgtaaaagaa tatgttaata atctaaaagt aatgcatttg gtatgaatct 8100

gtggttgtat ctgttcaatt ctaaagtaca acataaattt acgttctcag caactgttat 8160

ttctctctga tcattaatta tatgtaaaat aatatacatt cagttattaa gaaataaact 8220

gctttcttaa taaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 8265

<210>5

<211>13147

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>5

ccggagcccg agccgaaggg cgagccgcaa acgctaagtc gctggccatt ggtggacatg 60

gcgcaggcgc gtttgctccg acgggccgaa tgttttgggg cagtgttttg agcgcggaga 120

ccgcgtgata ctggatgcgc atgggcatac cgtgctctgc ggctgcttgg cgttgcttct 180

tcctccagaa gtgggcgctg ggcagtcacg cagggtttga accggaagcg ggagtaggta 240

gctgcgtggc taacggagaa aagaagccgt ggccgcggga ggaggcgaga ggagtcggga 300

tctgcgctgc agccaccgcc gcggttgata ctactttgac cttccgagtg cagtgacagt 360

gatgtgtgtt ctgaaattgt gaaccatgag tctagtactt aatgatctgc ttatctgctg 420

ccgtcaacta gaacatgata gagctacaga acgaaagaaa gaagttgaga aatttaagcg 480

cctgattcga gatcctgaaa caattaaaca tctagatcgg cattcagatt ccaaacaagg 540

aaaatatttg aattgggatg ctgtttttag atttttacag aaatatattc agaaagaaac 600

agaatgtctg agaatagcaa aaccaaatgt atcagcctca acacaagcct ccaggcagaa 660

aaagatgcag gaaatcagta gtttggtcaa atacttcatc aaatgtgcaa acagaagagc 720

acctaggcta aaatgtcaag aactcttaaa ttatatcatg gatacagtga aagattcatc 780

taatggtgct atttacggag ctgattgtag caacatacta ctcaaagaca ttctttctgt 840

gagaaaatac tggtgtgaaa tatctcagca acagtggtta gaattgttct ctgtgtactt 900

caggctctat ctgaaacctt cacaagatgt tcatagagtt ttagtggcta gaataattca 960

tgctgttacc aaaggatgct gttctcagac tgacggatta aattccaaat ttttggactt 1020

tttttccaag gctattcagt gtgcgagaca agaaaagagc tcttcaggtc taaatcatat 1080

cttagcagct cttactatct tcctcaagac tttggctgtc aactttcgaa ttcgagtgtg 1140

tgaattagga gatgaaattc ttcccacttt gctttatatt tggactcaac ataggcttaa 1200

tgattcttta aaagaagtca ttattgaatt atttcaactg caaatttata tccatcatcc 1260

gaaaggagcc aaaacccaag aaaaaggtgc ttatgaatca acaaaatgga gaagtatttt 1320

atacaactta tatgatctgc tagtgaatga gataagtcat ataggaagta gaggaaagta 1380

ttcttcagga tttcgtaata ttgccgtcaa agaaaatttg attgaattga tggcagatat 1440

ctgtcaccag gtttttaatg aagataccag atccttggag atttctcaat cttacactac 1500

tacacaaaga gaatctagtg attacagtgt cccttgcaaa aggaagaaaa tagaactagg 1560

ctgggaagta ataaaagatc accttcagaa gtcacagaat gattttgatc ttgtgccttg 1620

gctacagatt gcaacccaat taatatcaaa gtatcctgca agtttaccta actgtgagct 1680

gtctccatta ctgatgatac tatctcagct tctaccccaa cagcgacatg gggaacgtac 1740

accatatgtg ttacgatgcc ttacggaagt tgcattgtgt caagacaaga ggtcaaacct 1800

agaaagctca caaaagtcag atttattaaa actctggaat aaaatttggt gtattacctt 1860

tcgtggtata agttctgagc aaatacaagc tgaaaacttt ggcttacttg gagccataat 1920

tcagggtagt ttagttgagg ttgacagaga attctggaag ttatttactg ggtcagcctg 1980

cagaccttca tgtcctgcag tatgctgttt gactttggca ctgaccacca gtatagttcc 2040

aggaacggta aaaatgggaa tagagcaaaa tatgtgtgaa gtaaatagaa gcttttcttt 2100

aaaggaatca ataatgaaat ggctcttatt ctatcagtta gagggtgact tagaaaatag 2160

cacagaagtg cctccaattc ttcacagtaa ttttcctcat cttgtactgg agaaaattct 2220

tgtgagtctc actatgaaaa actgtaaagc tgcaatgaat tttttccaaa gcgtgccaga 2280

atgtgaacac caccaaaaag ataaagaaga actttcattc tcagaagtag aagaactatt 2340

tcttcagaca acttttgaca agatggactt tttaaccatt gtgagagaat gtggtataga 2400

aaagcaccag tccagtattg gcttctctgt ccaccagaat ctcaaggaat cactggatcg 2460

ctgtcttctg ggattatcag aacagcttct gaataattac tcatctgaga ttacaaattc 2520

agaaactctt gtccggtgtt cacgtctttt ggtgggtgtc cttggctgct actgttacat 2580

gggtgtaata gctgaagagg aagcatataa gtcagaatta ttccagaaag ccaagtctct 2640

aatgcaatgt gcaggagaaa gtatcactct gtttaaaaat aagacaaatg aggaattcag 2700

aattggttcc ttgagaaata tgatgcagct atgtacacgt tgcttgagca actgtaccaa 2760

gaagagtcca aataagattg catctggctt tttcctgcga ttgttaacat caaagctaat 2820

gaatgacatt gcagatattt gtaaaagttt agcatccttc atcaaaaagc catttgaccg 2880

tggagaagta gaatcaatgg aagatgatac taatggaaat ctaatggagg tggaggatca 2940

gtcatccatg aatctattta acgattaccc tgatagtagt gttagtgatg caaacgaacc 3000

tggagagagc caaagtacca taggtgccat taatccttta gctgaagaat atctgtcaaa 3060

gcaagatcta cttttcttag acatgctcaa gttcttgtgt ttgtgtgtaa ctactgctca 3120

gaccaatact gtgtccttta gggcagctga tattcggagg aaattgttaa tgttaattga 3180

ttctagcacg ctagaaccta ccaaatccct ccacctgcat atgtatctaa tgcttttaaa 3240

ggagcttcct ggagaagagt accccttgcc aatggaagat gttcttgaac ttctgaaacc 3300

actatccaat gtgtgttctt tgtatcgtcg tgaccaagat gtttgtaaaa ctattttaaa 3360

ccatgtcctt catgtagtga aaaacctagg tcaaagcaat atggactctg agaacacaag 3420

ggatgctcaa ggacagtttc ttacagtaat tggagcattt tggcatctaa caaaggagag 3480

gaaatatata ttctctgtaa gaatggccct agtaaattgc cttaaaactt tgcttgaggc 3540

tgatccttat tcaaaatggg ccattcttaa tgtaatggga aaagactttc ctgtaaatga 3600

agtatttaca caatttcttg ctgacaatca tcaccaagtt cgcatgttgg ctgcagagtc 3660

aatcaataga ttgttccagg acacgaaggg agattcttcc aggttactga aagcacttcc 3720

tttgaagctt cagcaaacag cttttgaaaa tgcatacttg aaagctcagg aaggaatgag 3780

agaaatgtcc catagtgctg agaaccctga aactttggat gaaatttata atagaaaatc 3840

tgttttactg acgttgatag ctgtggtttt atcctgtagc cctatctgcg aaaaacaggc 3900

tttgtttgcc ctgtgtaaat ctgtgaaaga gaatggatta gaacctcacc ttgtgaaaaa 3960

ggttttagag aaagtttctg aaacttttgg atatagacgt ttagaagact ttatggcatc 4020

tcatttagat tatctggttt tggaatggct aaatcttcaa gatactgaat acaacttatc 4080

ttcttttcct tttattttat taaactacac aaatattgag gatttctata gatcttgtta 4140

taaggttttg attccacatc tggtgattag aagtcatttt gatgaggtga agtccattgc 4200

taatcagatt caagaggact ggaaaagtct tctaacagac tgctttccaa agattcttgt 4260

aaatattctt ccttattttg cctatgaggg taccagagac agtgggatgg cacagcaaag 4320

agagactgct accaaggtct atgatatgct taaaagtgaa aacttattgg gaaaacagat 4380

tgatcactta ttcattagta atttaccaga gattgtggtg gagttattga tgacgttaca 4440

tgagccagca aattctagtg ccagtcagag cactgacctc tgtgactttt caggggattt 4500

ggatcctgct cctaatccac ctcattttcc atcgcatgtg attaaagcaa catttgccta 4560

tatcagcaat tgtcataaaa ccaagttaaa aagcatttta gaaattcttt ccaaaagccc 4620

tgattcctat cagaaaattc ttcttgccat atgtgagcaa gcagctgaaa caaataatgt 4680

ttataagaag cacagaattc ttaaaatata tcacctgttt gttagtttat tactgaaaga 4740

tataaaaagt ggcttaggag gagcttgggc ctttgttctt cgagacgtta tttatacttt 4800

gattcactat atcaaccaaa ggccttcttg tatcatggat gtgtcattac gtagcttctc 4860

cctttgttgt gacttattaa gtcaggtttg ccagacagcc gtgacttact gtaaggatgc 4920

tctagaaaac catcttcatg ttattgttgg tacacttata ccccttgtgt atgagcaggt 4980

ggaggttcag aaacaggtat tggacttgtt gaaatactta gtgatagata acaaggataa 5040

tgaaaacctc tatatcacga ttaagctttt agatcctttt cctgaccatg ttgtttttaa 5100

ggatttgcgt attactcagc aaaaaatcaa atacagtaga ggaccctttt cactcttgga 5160

ggaaattaac cattttctct cagtaagtgt ttatgatgca cttccattga caagacttga 5220

aggactaaag gatcttcgaa gacaactgga actacataaa gatcagatgg tggacattat 5280

gagagcttct caggataatc cgcaagatgg gattatggtg aaactagttg tcaatttgtt 5340

gcagttatcc aagatggcaa taaaccacac tggtgaaaaa gaagttctag aggctgttgg 5400

aagctgcttg ggagaagtgg gtcctataga tttctctacc atagctatac aacatagtaa 5460

agatgcatct tataccaagg cccttaagtt atttgaagat aaagaacttc agtggacctt 5520

cataatgctg acctacctga ataacacact ggtagaagat tgtgtcaaag ttcgatcagc 5580

agctgttacc tgtttgaaaa acattttagc cacaaagact ggacatagtt tctgggagat 5640

ttataagatg acaacagatc caatgctggc ctatctacag ccttttagaa catcaagaaa 5700

aaagttttta gaagtaccca gatttgacaa agaaaaccct tttgaaggcc tggatgatat 5760

aaatctgtgg attcctctaa gtgaaaatca tgacatttgg ataaagacac tgacttgtgc 5820

ttttttggac agtggaggca caaaatgtga aattcttcaa ttattaaagc caatgtgtga 5880

agtgaaaact gacttttgtc agactgtact tccatacttg attcatgata ttttactcca 5940

agatacaaat gaatcatgga gaaatctgct ttctacacat gttcagggat ttttcaccag 6000

ctgtcttcga cacttctcgc aaacgagccg atccacaacc cctgcaaact tggattcaga 6060

gtcagagcac tttttccgat gctgtttgga taaaaaatca caaagaacaa tgcttgctgt 6120

tgtggactac atgagaagac aaaagagacc ttcttcagga acaattttta atgatgcttt 6180

ctggctggat ttaaattatc tagaagttgc caaggtagct cagtcttgtg ctgctcactt 6240

tacagcttta ctctatgcag aaatctatgc agataagaaa agtatggatg atcaagagaa 6300

aagaagtctt gcatttgaag aaggaagcca gagtacaact atttctagct tgagtgaaaa 6360

aagtaaagaa gaaactggaa taagtttaca ggatcttctc ttagaaatct acagaagtat 6420

aggggagcca gatagtttgt atggctgtgg tggagggaag atgttacaac ccattactag 6480

actacgaaca tatgaacacg aagcaatgtg gggcaaagcc ctagtaacat atgacctcga 6540

aacagcaatc ccctcatcaa cacgccaggc aggaatcatt caggccttgc agaatttggg 6600

actctgccat attctttccg tctatttaaa aggattggat tatgaaaata aagactggtg 6660

tcctgaacta gaagaacttc attaccaagc agcatggagg aatatgcagt gggaccattg 6720

cacttccgtc agcaaagaag tagaaggaac cagttaccat gaatcattgt acaatgctct 6780

acaatctcta agagacagag aattctctac attttatgaa agtctcaaat atgccagagt 6840

aaaagaagtg gaagagatgt gtaagcgcag ccttgagtct gtgtattcgc tctatcccac 6900

acttagcagg ttgcaggcca ttggagagct ggaaagcatt ggggagcttt tctcaagatc 6960

agtcacacat agacaactct ctgaagtata tattaagtgg cagaaacact cccagcttct 7020

caaggacagt gattttagtt ttcaggagcc tatcatggct ctacgcacag tcattttgga 7080

gatcctgatg gaaaaggaaa tggacaactc acaaagagaa tgtattaagg acattctcac 7140

caaacacctt gtagaactct ctatactggc cagaactttc aagaacactc agctccctga 7200

aagggcaata tttcaaatta aacagtacaa ttcagttagc tgtggagtct ctgagtggca 7260

gctggaagaa gcacaagtat tctgggcaaa aaaggagcag agtcttgccc tgagtattct 7320

caagcaaatg atcaagaagt tggatgccag ctgtgcagcg aacaatccca gcctaaaact 7380

tacatacaca gaatgtctga gggtttgtgg caactggtta gcagaaacgt gcttagaaaa 7440

tcctgcggtc atcatgcaga cctatctaga aaaggcagta gaagttgctg gaaattatga 7500

tggagaaagt agtgatgagc taagaaatgg aaaaatgaag gcatttctct cattagcccg 7560

gttttcagat actcaatacc aaagaattga aaactacatg aaatcatcgg aatttgaaaa 7620

caagcaagct ctcctgaaaa gagccaaaga ggaagtaggt ctccttaggg aacataaaat 7680

tcagacaaac agatacacag taaaggttca gcgagagctg gagttggatg aattagccct 7740

gcgtgcactg aaagaggatc gtaaacgctt cttatgtaaa gcagttgaaa attatatcaa 7800

ctgcttatta agtggagaag aacatgatat gtgggtattc cgactttgtt ccctctggct 7860

tgaaaattct ggagtttctg aagtcaatgg catgatgaag agagacggaa tgaagattcc 7920

aacatataaa tttttgcctc ttatgtacca attggctgct agaatgggga ccaagatgat 7980

gggaggccta ggatttcatg aagtcctcaa taatctaatc tctagaattt caatggatca 8040

cccccatcac actttgttta ttatactggc cttagcaaat gcaaacagag atgaatttct 8100

gactaaacca gaggtagcca gaagaagcag aataactaaa aatgtgccta aacaaagctc 8160

tcagcttgat gaggatcgaa cagaggctgc aaatagaata atatgtacta tcagaagtag 8220

gagacctcag atggtcagaa gtgttgaggc actttgtgat gcttatatta tattagcaaa 8280

cttagatgcc actcagtgga agactcagag aaaaggcata aatattccag cagaccagcc 8340

aattactaaa cttaagaatt tagaagatgt tgttgtccct actatggaaa ttaaggtgga 8400

ccacacagga gaatatggaa atctggtgac tatacagtca tttaaagcag aatttcgctt 8460

agcaggaggt gtaaatttac caaaaataat agattgtgta ggttccgatg gcaaggagag 8520

gagacagctt gttaagggcc gtgatgacct gagacaagat gctgtcatgc aacaggtctt 8580

ccagatgtgt aatacattac tgcagagaaa cacggaaact aggaagagga aattaactat 8640

ctgtacttat aaggtggttc ccctctctca gcgaagtggt gttcttgaat ggtgcacagg 8700

aactgtcccc attggtgaat ttcttgttaa caatgaagat ggtgctcata aaagatacag 8760

gccaaatgat ttcagtgcct ttcagtgcca aaagaaaatg atggaggtgc aaaaaaagtc 8820

ttttgaagag aaatatgaag tcttcatgga tgtttgccaa aattttcaac cagttttccg 8880

ttacttctgc atggaaaaat tcttggatcc agctatttgg tttgagaagc gattggctta 8940

tacgcgcagt gtagctactt cttctattgt tggttacata cttggacttg gtgatagaca 9000

tgtacagaat atcttgataa atgagcagtc agcagaactt gtacatatag atctaggtgt 9060

tgcttttgaa cagggcaaaa tccttcctac tcctgagaca gttcctttta gactcaccag 9120

agatattgtg gatggcatgg gcattacggg tgttgaaggt gtcttcagaa gatgctgtga 9180

gaaaaccatg gaagtgatga gaaactctca ggaaactctg ttaaccattg tagaggtcct 9240

tctatatgat ccactctttg actggaccat gaatcctttg aaagctttgt atttacagca 9300

gaggccggaa gatgaaactg agcttcaccc tactctgaat gcagatgacc aagaatgcaa 9360

acgaaatctc agtgatattg accagagttt caacaaagta gctgaacgtg tcttaatgag 9420

actacaagag aaactgaaag gagtggaaga aggcactgtg ctcagtgttg gtggacaagt 9480

gaatttgctc atacagcagg ccatagaccc caaaaatctc agccgacttt tcccaggatg 9540

gaaagcttgg gtgtgatctt cagtatatga attacccttt cattcagcct ttagaaatta 9600

tattttagcc tttattttta acctgccaac atactttaag tagggattaa tatttaagtg 9660

aactattgtg ggtttttttg aatgttggtt ttaatacttg atttaatcac cactcaaaaa 9720

tgttttgatg gtcttaagga acatctctgc tttcactctt tagaaataat ggtcattcgg 9780

gctgggcgca gcggctcacg cctgtaatcc cagcactttg ggaggccgag gtgagcggat 9840

cacaaggtca ggagttcgag accagcctgg ccaagagacc agcctggcca gtatggtgaa 9900

accctgtctc tactaaaaat acaaaaatta gccgagcatg gtggcgggca cctgtaatcc 9960

cagctactcg agaggctgag gcaggagaat ctcttgaacc tgggaggtga aggttgctgt 10020

gggccaaaat catgccattg cactccagcc tgggtgacaa gagcgaaact ccatctcaaa 10080

aaaaaaaaaa aaaaaacaga aacgtatttg gatttttcct agtaagatca ctcagtgtta 10140

ctaaataatg aagttgttat ggagaacaaa tttcaaagac acagttagtg tagttactat 10200

ttttttaagt gtgtattaaa acttctcatt ctattctctt tatcttttaa gcccttctgt 10260

actgtccatg tatgttatct ttctgtgata acttcataga ttgccttcta gttcatgaat 10320

tctcttgtca gatgtatata atctctttta ccctatccat tgggcttctt ctttcagaaa 10380

ttgtttttca tttctaatta tgcatcattt ttcagatctc tgtttcttga tgtcattttt 10440

aatgtttttt taatgttttt tatgtcacta attattttaa atgtctgtac ttgatagaca 10500

ctgtaatagt tctattaaat ttagttcctg ctgtttatat ctgttgattt ttgtatttga 10560

taggctgttc atccagtttt gtctttttga aaagtgagtt tattttcagc aaggctttat 10620

ctatgggaat cttgagtgtc tgtttatgtc atattcccag ggctgttgct gcacacaagc 10680

ccattcttat tttaatttct tggctttagg gtttccatac ctgaagtgta gcataaatac 10740

tgataggaga tttcccaggc caaggcaaac acacttcctc ctcatctcct tgtgctagtg 10800

ggcagaatat ttgattgatg cctttttcac tgagagtata agcttccatg tgtcccacct 10860

ttatggcagg ggtggaagga ggtacattta attcccactg cctgcctttg gcaagccctg 10920

ggttctttgc tccccatata gatgtctaag ctaaaagccg tgggttaatg agactggcaa 10980

attgttccag gacagctaca gcatcagctc acatattcac ctctctggtt tttcattccc 11040

ctcatttttt tctgagacag agtcttgctc tgtcacccag gctggagtgc agtggcatga 11100

tctcagctca ctgaaacctc tgcctcctgg gttcaagcaa ttctcctgcc tcagcctccc 11160

gagtagctgg gactacaggc gtgtgccaac acgcccggct aattttttgt atttttatta 11220

gagacggagt ttcaccgtgt tagccaggat ggtctcgatc gcttgacctc gtgatccacc 11280

ctcctcggcc tcccaaagtg ctgggattac aggtgtgagc caccgcgccc ggcctcattc 11340

ccctcatttt tgaccgtaag gatttcccct ttcttgtaag ttctgctatg tatttaaaag 11400

aatgttttct acattttatc cagcatttct ctgtgttctg ttggaaggga agggcttagg 11460

tatctagttt gatacatagg tagaagtgga acatttctct gtcccccagc tgtcatcata 11520

taagataaac atcagataaa aagccacctg aaagtaaaac tactgactcg tgtattagtg 11580

agtataatct cttctccatc cttaggaaaa tgttcatccc agctgcggag attaacaaat 11640

gggtgattga gctttctcct cgtatttgga ccttgaaggt tatataaatt tttttcttat 11700

gaagagttgg catttctttt tattgccaat ggcaggcact cattcatatt tgatctcctc 11760

accttcccct cccctaaaac caatctccag aactttttgg actataaatt tcttggtttg 11820

acttctggag aactgttcag aatattactt tgcatttcaa attacaaact taccttggtg 11880

tatctttttc ttacaagctg cctaaatgaa tatttggtat atattggtag ttttattact 11940

atagtaaatc aaggaaatgc agtaaactta aaatgtcttt aagaaagccc tgaaatcttc 12000

atgggtgaaa ttagaaatta tcaactagat aatagtatag ataaatgaat ttgtagctaa 12060

ttcttgctag ttgttgcatc cagagagctt tgaataacat cattaatcta ctctttagcc 12120

ttgcatggta tgctatgagg ctcctgttct gttcaagtat tctaatcaat ggctttgaaa 12180

agtttatcaa atttacatac agatcacaag cctaggagaa ataactaatt cacagatgac 12240

agaattaaga ttataaaaga tttttttttt gtaattttag tagagacagg gttgccattg 12300

tattccagcc ttggcgacag agcaagactc tgcctcaaaa aaaaaaaaaa aaaggttttg 12360

gcaagctgga actctttctg caaatgacta agatagaaaa ctgccaagga caaatgagga 12420

gtagttagat tttgaaaata ttaatcatag aatagttgtt gtatgctaag tcactgaccc 12480

atattatgta cagcatttct gatctttact ttgcaagatt agtgatacta tcccaataca 12540

ctgctggaga aatcagaatt tggagaaata agttgtccaa ggcaagaaga tagtaaatta 12600

taagtacaag tgtaatatgg acagtatcta acttgaaaag atttcaggcg aaaagaatct 12660

ggggtttgcc agtcagttgc tcaaaaggtc aatgaaaacc aaatagtgaa gctatcagag 12720

aagctaataa attatagact gcttgaacag ttgtgtccag attaagggag ataatagctt 12780

tcccacccta ctttgtgcag gtcatacctc cccaaagtgt ttacctaatc agtaggttca 12840

caaactcttg gtcattatag tatatgccta aaatgtatgc acttaggaat gctaaaaatt 12900

taaatatggt ctaaagcaaa taaaagcaaa gaggaaaaac tttggacagc gtaaagacta 12960

gaatagtctt ttaaaaagaa agccagtata ttggtttgaa atatagagat gtgtcccaat 13020

ttcaagtatt ttaattgcac cttaatgaaa ttatctattt tctatagatt ttagtactat 13080

tgaatgtatt actttactgt tacctgaatt tattataaag tgtttttgaa taaataattc 13140

taaaagc 13147

<210>6

<211>2644

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>6

Met Gly Glu His Gly Leu Glu Leu Ala Ser Met Ile Pro Ala Leu Arg

1 5 10 15

Glu Leu Gly Ser Ala Thr Pro Glu Glu Tyr Asn Thr Val Val Gln Lys

20 25 30

Pro Arg Gln Ile Leu Cys Gln Phe Ile Asp Arg Ile Leu Thr Asp Val

35 40 45

Asn Val Val Ala Val Glu Leu Val Lys Lys Thr Asp Ser Gln Pro Thr

50 55 60

Ser Val Met Leu Leu Asp Phe Ile Gln His Ile Met Lys Ser Ser Pro

65 70 75 80

Leu Met Phe Val Asn Val Ser Gly Ser His Glu Arg Lys Gly Ser Cys

85 90 95

Ile Glu Phe Ser Asn Trp Ile Ile Thr Arg Leu Leu Arg Ile Ala Ala

100 105 110

Thr Pro Ser Cys His Leu Leu His Lys Lys Ile Cys Glu Val Ile Cys

115 120 125

Ser Leu Leu Phe Leu Phe Lys Ser Lys Ser Pro Ala Ile Phe Gly Val

130 135 140

Leu Thr Lys Glu Leu Leu Gln Leu Phe Glu Asp Leu Val Tyr Leu His

145 150 155 160

Arg Arg Asn Val Met Gly His Ala Val Glu Trp Pro Val Val Met Ser

165 170 175

Arg Phe Leu Ser Gln Leu Asp Glu His Met Gly Tyr Leu Gln Ser Ala

180 185 190

Pro Leu Gln Leu Met Ser Met Gln Asn Leu Glu Phe Ile Glu Val Thr

195 200 205

Leu Leu Met Val Leu Thr Arg Ile Ile Ala Ile Val Phe Phe Arg Arg

210 215 220

Gln Glu Leu Leu Leu Trp Gln Ile Gly Cys Val Leu Leu Glu Tyr Gly

225 230 235 240

Ser Pro Lys Ile Lys Ser Leu Ala Ile Ser Phe Leu Thr Glu Leu Phe

245 250 255

Gln Leu Gly Gly Leu Pro Ala Gln Pro Ala Ser Thr Phe Phe Ser Ser

260 265 270

Phe Leu Glu Leu Leu Lys His Leu Val Glu Met Asp Thr Asp Gln Leu

275 280 285

Lys Leu Tyr Glu Glu Pro Leu Ser Lys Leu Ile Lys Thr Leu Phe Pro

290 295 300

Phe Glu Ala Glu Ala Tyr Arg Asn Ile Glu Pro Val Tyr Leu Asn Met

305 310 315 320

Leu Leu Glu Lys Leu Cys Val Met Phe Glu Asp Gly Val Leu Met Arg

325 330 335

Leu Lys Ser Asp Leu Leu Lys Ala Ala Leu Cys His Leu Leu Gln Tyr

340 345 350

Phe Leu Lys Phe Val Pro Ala Gly Tyr Glu Ser Ala Leu Gln Val Arg

355 360 365

Lys Val Tyr Val Arg Asn Ile Cys Lys Ala Leu Leu Asp Val Leu Gly

370 375 380

Ile Glu Val Asp Ala Glu Tyr Leu Leu Gly Pro Leu Tyr Ala Ala Leu

385 390 395 400

Lys Met Glu Ser Met Glu Ile Ile Glu Glu Ile Gln Cys Gln Thr Gln

405 410 415

Gln Glu Asn Leu Ser Ser Asn Ser Asp Gly Ile Ser Pro Lys Arg Arg

420 425 430

Arg Leu Ser Ser Ser Leu Asn Pro Ser Lys Arg Ala Pro Lys Gln Thr

435 440 445

Glu Glu Ile Lys His Val Asp Met Asn Gln Lys Ser Ile Leu Trp Ser

450 455 460

Ala Leu Lys Gln Lys Ala Glu Ser Leu Gln Ile Ser Leu Glu Tyr Ser

465 470 475 480

Gly Leu Lys Asn Pro Val Ile Glu Met Leu Glu Gly Ile Ala Val Val

485 490 495

Leu Gln Leu Thr Ala Leu Cys Thr Val His Cys Ser His Gln Asn Met

500 505 510

Asn Cys Arg Thr Phe Lys Asp Cys Gln His Lys Ser Lys Lys Lys Pro

515 520 525

Ser Val Val Ile Thr Trp Met Ser Leu Asp Phe Tyr Thr Lys Val Leu

530 535 540

Lys Ser Cys Arg Ser Leu Leu Glu Ser Val Gln Lys Leu Asp Leu Glu

545 550 555 560

Ala Thr Ile Asp Lys Val Val Lys Ile Tyr Asp Ala Leu Ile Tyr Met

565 570 575

Gln Val Asn Ser Ser Phe Glu Asp His Ile Leu Glu Asp Leu Cys Gly

580 585 590

Met Leu Ser Leu Pro Trp Ile Tyr Ser His Ser Asp Asp Gly Cys Leu

595 600 605

Lys Leu Thr Thr Phe Ala Ala Asn Leu Leu Thr Leu Ser Cys Arg Ile

610 615 620

Ser Asp Ser Tyr Ser Pro Gln Ala Gln Ser Arg Cys Val Phe Leu Leu

625 630 635 640

Thr Leu Phe Pro Arg Arg Ile Phe Leu Glu Trp Arg Thr Ala Val Tyr

645 650 655

Asn Trp Ala Leu Gln Ser Ser His Glu Val Ile Arg Ala Ser Cys Val

660 665 670

Ser Gly Phe Phe Ile Leu Leu Gln Gln Gln Asn Ser Cys Asn Arg Val

675 680 685

Pro Lys Ile Leu Ile Asp Lys Val Lys Asp Asp Ser Asp Ile Val Lys

690 695 700

Lys Glu Phe Ala Ser Ile Leu Gly Gln Leu Val Cys Thr Leu His Gly

705 710 715 720

Met Phe Tyr Leu Thr Ser Ser Leu Thr Glu Pro Phe Ser Glu His Gly

725 730 735

His Val Asp Leu Phe Cys Arg Asn Leu Lys Ala Thr Ser Gln His Glu

740 745 750

Cys Ser Ser Ser Gln Leu Lys Ala Ser Val Cys Lys Pro Phe Leu Phe

755 760 765

Leu Leu Lys Lys Lys Ile Pro Ser Pro Val Lys Leu Ala Phe Ile Asp

770 775 780

Asn Leu His His Leu Cys Lys His Leu Asp Phe Arg Glu Asp Glu Thr

785 790 795 800

Asp Val Lys Ala Val Leu Gly Thr Leu Leu Asn Leu Met Glu Asp Pro

805 810 815

Asp Lys Asp Val Arg Val Ala Phe Ser Gly Asn Ile Lys His Ile Leu

820 825 830

Glu Ser Leu Asp Ser Glu Asp Gly Phe Ile Lys Glu Leu Phe Val Leu

835 840 845

Arg Met Lys Glu Ala Tyr Thr His Ala Gln Ile Ser Arg Asn Asn Glu

850 855 860

Leu Lys Asp Thr Leu Ile Leu Thr Thr Gly Asp Ile Gly Arg Ala Ala

865 870 875 880

Lys Gly Asp Leu Val Pro Phe Ala Leu Leu His Leu Leu His Cys Leu

885 890 895

Leu Ser Lys Ser Ala Ser Val Ser Gly Ala Ala Tyr Thr Glu Ile Arg

900 905 910

Ala Leu Val Ala Ala Lys Ser Val Lys Leu Gln Ser Phe Phe Ser Gln

915 920 925

Tyr Lys Lys Pro Ile Cys Gln Phe Leu Val Glu Ser Leu His Ser Ser

930 935 940

Gln Met Thr Ala Leu Pro Asn Thr Pro Cys Gln Asn Ala Asp Val Arg

945 950 955 960

Lys Gln Asp Val Ala His Gln Arg Glu Met Ala Leu Asn Thr Leu Ser

965 970 975

Glu Ile Ala Asn Val Phe Asp Phe Pro Asp Leu Asn Arg Phe Leu Thr

980 985 990

Arg Thr Leu Gln Val Leu Leu Pro Asp Leu Ala Ala Lys Ala Ser Pro

995 1000 1005

Ala Ala Ser Ala Leu Ile Arg Thr Leu Gly Lys Gln Leu Asn Val

1010 1015 1020

Asn Arg Arg Glu Ile Leu Ile Asn Asn Phe Lys Tyr Ile Phe Ser

1025 1030 1035

His Leu Val Cys Ser Cys Ser Lys Asp Glu Leu Glu Arg Ala Leu

1040 1045 1050

His Tyr Leu Lys Asn Glu Thr Glu Ile Glu Leu Gly Ser Leu Leu

1055 1060 1065

Arg Gln Asp Phe Gln Gly Leu His Asn Glu Leu Leu Leu Arg Ile

1070 1075 1080

Gly Glu His Tyr Gln Gln Val Phe Asn Gly Leu Ser Ile Leu Ala

1085 1090 1095

Ser Phe Ala Ser Ser Asp Asp Pro Tyr Gln Gly Pro Arg Asp Ile

1100 1105 1110

Ile Ser Pro Glu Leu Met Ala Asp Tyr Leu Gln Pro Lys Leu Leu

1115 1120 1125

Gly Ile Leu Ala Phe Phe Asn Met Gln Leu Leu Ser Ser Ser Val

1130 1135 1140

Gly Ile Glu Asp Lys Lys Met Ala Leu Asn Ser Leu Met Ser Leu

1145 1150 1155

Met Lys Leu Met Gly Pro Lys His Val Ser Ser Val Arg Val Lys

1160 1165 1170

Met Met Thr Thr Leu Arg Thr Gly Leu Arg Phe Lys Asp Asp Phe

1175 1180 1185

Pro Glu Leu Cys Cys Arg Ala Trp Asp Cys Phe Val Arg Cys Leu

1190 1195 1200

Asp His Ala Cys Leu Gly Ser Leu Leu Ser His Val Ile Val Ala

1205 1210 1215

Leu Leu Pro Leu Ile His Ile Gln Pro Lys Glu Thr Ala Ala Ile

1220 1225 1230

Phe His Tyr Leu Ile Ile Glu Asn Arg Asp Ala Val Gln Asp Phe

1235 1240 1245

Leu His Glu Ile Tyr Phe Leu Pro Asp His Pro Glu Leu Lys Lys

1250 1255 1260

Ile Lys Ala Val Leu Gln Glu Tyr Arg Lys Glu Thr Ser Glu Ser

1265 1270 1275

Thr Asp Leu Gln Thr Thr Leu Gln Leu Ser Met Lys Ala Ile Gln

1280 1285 1290

His Glu Asn Val Asp Val Arg Ile His Ala Leu Thr Ser Leu Lys

1295 1300 1305

Glu Thr Leu Tyr Lys Asn Gln Glu Lys Leu Ile Lys Tyr Ala Thr

1310 1315 1320

Asp Ser Glu Thr Val Glu Pro Ile Ile Ser Gln Leu Val Thr Val

1325 1330 1335

Leu Leu Lys Gly Cys Gln Asp Ala Asn Ser Gln Ala Arg Leu Leu

1340 1345 1350

Cys Gly Glu Cys Leu Gly Glu Leu Gly Ala Ile Asp Pro Gly Arg

1355 1360 1365

Leu Asp Phe Ser Thr Thr Glu Thr Gln Gly Lys Asp Phe Thr Phe

1370 1375 1380

Val Thr Gly Val Glu Asp Ser Ser Phe Ala Tyr Gly Leu Leu Met

1385 1390 1395

Glu Leu Thr Arg Ala Tyr Leu Ala Tyr Ala Asp Asn Ser Arg Ala

1400 1405 1410

Gln Asp Ser Ala Ala Tyr Ala Ile Gln Glu Leu Leu Ser Ile Tyr

1415 1420 1425

Asp Cys Arg Glu Met Glu Thr Asn Gly Pro Gly His Gln Leu Trp

1430 1435 1440

Arg Arg Phe Pro Glu His Val Arg Glu Ile Leu Glu Pro His Leu

1445 1450 1455

Asn Thr Arg Tyr Lys Ser Ser Gln Lys Ser Thr Asp Trp Ser Gly

1460 1465 1470

Val Lys Lys Pro Ile Tyr Leu Ser Lys Leu Gly Ser Asn Phe Ala

1475 1480 1485

Glu Trp Ser Ala Ser Trp Ala Gly Tyr Leu Ile Thr Lys Val Arg

1490 1495 1500

His Asp Leu Ala Ser Lys Ile Phe Thr Cys Cys Ser Ile Met Met

1505 1510 1515

Lys His Asp Phe Lys Val Thr Ile Tyr Leu Leu Pro His Ile Leu

1520 1525 1530

Val Tyr Val Leu Leu Gly Cys Asn Gln Glu Asp Gln Gln Glu Val

1535 1540 1545

Tyr Ala Glu Ile Met Ala Val Leu Lys His Asp Asp Gln His Thr

1550 1555 1560

Ile Asn Thr Gln Asp Ile Ala Ser Asp Leu Cys Gln Leu Ser Thr

1565 1570 1575

Gln Thr Val Phe Ser Met Leu Asp His Leu Thr Gln Trp Ala Arg

1580 1585 1590

His Lys Phe Gln Ala Leu Lys Ala Glu Lys Cys Pro His Ser Lys

1595 1600 1605

Ser Asn Arg Asn Lys Val Asp Ser Met Val Ser Thr Val Asp Tyr

1610 1615 1620

Glu Asp Tyr Gln Ser Val Thr Arg Phe Leu Asp Leu Ile Pro Gln

1625 1630 1635

Asp Thr Leu Ala Val Ala Ser Phe Arg Ser Lys Ala Tyr Thr Arg

1640 1645 1650

Ala Val Met His Phe Glu Ser Phe Ile Thr Glu Lys Lys Gln Asn

1655 1660 1665

Ile Gln Glu His Leu Gly Phe Leu Gln Lys Leu Tyr Ala Ala Met

1670 1675 1680

His Glu Pro Asp Gly Val Ala Gly Val Ser Ala Ile Arg Lys Ala

1685 1690 1695

Glu Pro Ser Leu Lys Glu Gln Ile Leu Glu His Glu Ser Leu Gly

1700 1705 1710

Leu Leu Arg Asp Ala Thr Ala Cys Tyr Asp Arg Ala Ile Gln Leu

1715 1720 1725

Glu Pro Asp Gln Ile Ile His Tyr His Gly Val Val Lys Ser Met

1730 1735 1740

Leu Gly Leu Gly Gln Leu Ser Thr Val Ile Thr Gln Val Asn Gly

1745 1750 1755

Val His Ala Asn Arg Ser Glu Trp Thr Asp Glu Leu Asn Thr Tyr

1760 1765 1770

Arg Val Glu Ala Ala Trp Lys Leu Ser Gln Trp Asp Leu Val Glu

1775 1780 1785

Asn Tyr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Ser Thr Thr Trp Ser Val Arg

1790 1795 1800

Leu Gly Gln Leu Leu Leu Ser Ala Lys Lys Arg Asp Ile Thr Ala

1805 1810 1815

Phe Tyr Asp Ser Leu Lys Leu Val Arg Ala Glu Gln Ile Val Pro

1820 1825 1830

Leu Ser Ala Ala Ser Phe Glu Arg Gly Ser Tyr Gln Arg Gly Tyr

1835 1840 1845

Glu Tyr Ile Val Arg Leu His Met Leu Cys Glu Leu Glu His Ser

1850 1855 1860

Ile Lys Pro Leu Phe Gln His Ser Pro Gly Asp Ser Ser Gln Glu

1865 1870 1875

Asp Ser Leu Asn Trp Val Ala Arg Leu Glu Met Thr Gln Asn Ser

1880 1885 1890

Tyr Arg Ala Lys Glu Pro Ile Leu Ala Leu Arg Arg Ala Leu Leu

1895 1900 1905

Ser Leu Asn Lys Arg Pro Asp Tyr Asn Glu Met Val Gly Glu Cys

1910 1915 1920

Trp Leu Gln Ser Ala Arg Val Ala Arg Lys Ala Gly His His Gln

1925 1930 1935

Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Leu Asn Ala Gly Glu Ser Arg Leu Ala

1940 1945 1950

Glu Leu Tyr Val Glu Arg Ala Lys Trp Leu Trp Ser Lys Gly Asp

1955 1960 1965

Val His Gln Ala Leu Ile Val Leu Gln Lys Gly Val Glu Leu Cys

1970 1975 1980

Phe Pro Glu Asn Glu Thr Pro Pro Glu Gly Lys Asn Met Leu Ile

1985 1990 1995

His Gly Arg Ala Met Leu Leu Val Gly Arg Phe Met Glu Glu Thr

2000 2005 2010

Ala Asn Phe Glu Ser Asn Ala Ile Met Lys Lys Tyr Lys Asp Val

2015 2020 2025

Thr Ala Cys Leu Pro Glu Trp Glu Asp Gly His Phe Tyr Leu Ala

2030 2035 2040

Lys Tyr Tyr Asp Lys Leu Met Pro Met Val Thr Asp Asn Lys Met

2045 2050 2055

Glu Lys Gln Gly Asp Leu Ile Arg Tyr Ile Val Leu His Phe Gly

2060 2065 2070

Arg Ser Leu Gln Tyr Gly Asn Gln Phe Ile Tyr Gln Ser Met Pro

2075 2080 2085

Arg Met Leu Thr Leu Trp Leu Asp Tyr Gly Thr Lys Ala Tyr Glu

2090 2095 2100

Trp Glu Lys Ala Gly Arg Ser Asp Arg Val Gln Met Arg Asn Asp

2105 2110 2115

Leu Gly Lys Ile Asn Lys Val Ile Thr Glu His Thr Asn Tyr Leu

2120 2125 2130

Ala Pro Tyr Gln Phe Leu Thr Ala Phe Ser Gln Leu Ile Ser Arg

2135 2140 2145

Ile Cys His Ser His Asp Glu Val Phe Val Val Leu Met Glu Ile

2150 2155 2160

Ile Ala Lys Val Phe Leu Ala Tyr Pro Gln Gln Ala Met Trp Met

2165 2170 2175

Met Thr Ala Val Ser Lys Ser Ser Tyr Pro Met Arg Val Asn Arg

2180 2185 2190

Cys Lys Glu Ile Leu Asn Lys Ala Ile His Met Lys Lys Ser Leu

2195 2200 2205

Glu Lys Phe Val Gly Asp Ala Thr Arg Leu Thr Asp Lys Leu Leu

2210 2215 2220

Glu Leu Cys Asn Lys Pro Val Asp Gly Ser Ser Ser Thr Leu Ser

2225 2230 2235

Met Ser Thr His Phe Lys Met Leu Lys Lys Leu Val Glu Glu Ala

2240 2245 2250

Thr Phe Ser Glu Ile Leu Ile Pro Leu Gln Ser Val Met Ile Pro

2255 2260 2265

Thr Leu Pro Ser Ile Leu Gly Thr His Ala Asn His Ala Ser His

2270 2275 2280

Glu Pro Phe Pro Gly His Trp Ala Tyr Ile Ala Gly Phe Asp Asp

2285 2290 2295

Met Val Glu Ile Leu Ala Ser Leu Gln Lys Pro Lys Lys Ile Ser

2300 2305 2310

Leu Lys Gly Ser Asp Gly Lys Phe Tyr Ile Met Met Cys Lys Pro

2315 2320 2325

Lys Asp Asp Leu Arg Lys Asp Cys Arg Leu Met Glu Phe Asn Ser

2330 2335 2340

Leu Ile Asn Lys Cys Leu Arg Lys Asp Ala Glu Ser Arg Arg Arg

2345 2350 2355

Glu Leu His Ile Arg Thr Tyr Ala Val Ile Pro Leu Asn Asp Glu

2360 2365 2370

Cys Gly Ile Ile Glu Trp Val Asn Asn Thr Ala Gly Leu Arg Pro

2375 2380 2385

Ile Leu Thr Lys Leu Tyr Lys Glu Lys Gly Val Tyr Met Thr Gly

2390 2395 2400

Lys Glu Leu Arg Gln Cys Met Leu Pro Lys Ser Ala Ala Leu Ser

2405 2410 2415

Glu Lys Leu Lys Val Phe Arg Glu Phe Leu Leu Pro Arg His Pro

2420 2425 2430

Pro Ile Phe His Glu Trp Phe Leu Arg Thr Phe Pro Asp Pro Thr

2435 2440 2445

Ser Trp Tyr Ser Ser Arg Ser Ala Tyr Cys Arg Ser Thr Ala Val

2450 2455 2460

Met Ser Met Val Gly Tyr Ile Leu Gly Leu Gly Asp Arg His Gly

2465 2470 2475

Glu Asn Ile Leu Phe Asp Ser Leu Thr Gly Glu Cys Val His Val

2480 2485 2490

Asp Phe Asn Cys Leu Phe Asn Lys Gly Glu Thr Phe Glu Val Pro

2495 2500 2505

Glu Ile Val Pro Phe Arg Leu Thr His Asn Met Val Asn Gly Met

2510 2515 2520

Gly Pro Met Gly Thr Glu Gly Leu Phe Arg Arg Ala Cys Glu Val

2525 2530 2535

Thr Met Arg Leu Met Arg Asp Gln Arg Glu Pro Leu Met Ser Val

2540 2545 2550

Leu Lys Thr Phe Leu His Asp Pro Leu Val Glu Trp Ser Lys Pro

2555 2560 2565

Val Lys Gly His Ser Lys Ala Pro Leu Asn Glu Thr Gly Glu Val

2570 2575 2580

Val Asn Glu Lys Ala Lys Thr His Val Leu Asp Ile Glu Gln Arg

2585 2590 2595

Leu Gln Gly Val Ile Lys Thr Arg Asn Arg Val Thr Gly Leu Pro

2600 2605 2610

Leu Ser Ile Glu Gly His Val His Tyr Leu Ile Gln Glu Ala Thr

2615 2620 2625

Asp Glu Asn Leu Leu Cys Gln Met Tyr Leu Gly Trp Thr Pro Tyr

2630 2635 2640

Met

<210>7

<211>3056

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>7

Met Ser Leu Val Leu Asn Asp Leu Leu Ile Cys Cys Arg Gln Leu Glu

1 5 10 15

His Asp Arg Ala Thr Glu Arg Lys Lys Glu Val Glu Lys Phe Lys Arg

20 25 30

Leu Ile Arg Asp Pro Glu Thr Ile Lys His Leu Asp Arg His Ser Asp

35 40 45

Ser Lys Gln Gly Lys Tyr Leu Asn Trp Asp Ala Val Phe Arg Phe Leu

50 55 60

Gln Lys Tyr Ile Gln Lys Glu Thr Glu Cys Leu Arg Ile Ala Lys Pro

65 70 75 80

Asn Val Ser Ala Ser Thr Gln Ala Ser Arg Gln Lys Lys Met Gln Glu

85 90 95

Ile Ser Ser Leu Val Lys Tyr Phe Ile Lys Cys Ala Asn Arg Arg Ala

100 105 110

Pro Arg Leu Lys Cys Gln Glu Leu Leu Asn Tyr Ile Met Asp Thr Val

115 120 125

Lys Asp Ser Ser Asn Gly Ala Ile Tyr Gly Ala Asp Cys Ser Asn Ile

130 135 140

Leu Leu Lys Asp Ile Leu Ser Val Arg Lys Tyr Trp Cys Glu Ile Ser

145 150 155 160

Gln Gln Gln Trp Leu Glu Leu Phe Ser Val Tyr Phe Arg Leu Tyr Leu

165 170 175

Lys Pro Ser Gln Asp Val His Arg Val Leu Val Ala Arg Ile Ile His

180 185 190

Ala Val Thr Lys Gly Cys Cys Ser Gln Thr Asp Gly Leu Asn Ser Lys

195 200 205

Phe Leu Asp Phe Phe Ser Lys Ala Ile Gln Cys Ala Arg Gln Glu Lys

210 215 220

Ser Ser Ser Gly Leu Asn His Ile Leu Ala Ala Leu Thr Ile Phe Leu

225 230 235 240

Lys Thr Leu Ala Val Asn Phe Arg Ile Arg Val Cys Glu Leu Gly Asp

245 250 255

Glu Ile Leu Pro Thr Leu Leu Tyr Ile Trp Thr Gln His Arg Leu Asn

260 265 270

Asp Ser Leu Lys Glu Val Ile Ile Glu Leu Phe Gln Leu Gln Ile Tyr

275 280 285

Ile His His Pro Lys Gly Ala Lys Thr Gln Glu Lys Gly Ala Tyr Glu

290 295 300

Ser Thr Lys Trp Arg Ser Ile Leu Tyr Asn Leu Tyr Asp Leu Leu Val

305 310 315 320

Asn Glu Ile Ser His Ile Gly Ser Arg Gly Lys Tyr Ser Ser Gly Phe

325 330 335

Arg Asn Ile Ala Val Lys Glu Asn Leu Ile Glu Leu Met Ala Asp Ile

340 345 350

Cys His Gln Val Phe Asn Glu Asp Thr Arg Ser Leu Glu Ile Ser Gln

355 360 365

Ser Tyr Thr Thr Thr Gln Arg Glu Ser Ser Asp Tyr Ser Val Pro Cys

370 375 380

Lys Arg Lys Lys Ile Glu Leu Gly Trp Glu Val Ile Lys Asp His Leu

385 390 395 400

Gln Lys Ser Gln Asn Asp Phe Asp Leu Val Pro Trp Leu Gln Ile Ala

405 410 415

Thr Gln Leu Ile Ser Lys Tyr Pro Ala Ser Leu Pro Asn Cys Glu Leu

420 425 430

Ser Pro Leu Leu Met Ile Leu Ser Gln Leu Leu Pro Gln Gln Arg His

435 440 445

Gly Glu Arg Thr Pro Tyr Val Leu Arg Cys Leu Thr Glu Val Ala Leu

450 455 460

Cys Gln Asp Lys Arg Ser Asn Leu Glu Ser Ser Gln Lys Ser Asp Leu

465 470 475 480

Leu Lys Leu Trp Asn Lys Ile Trp Cys Ile Thr Phe Arg Gly Ile Ser

485 490 495

Ser Glu Gln Ile Gln Ala Glu Asn Phe Gly Leu Leu Gly Ala Ile Ile

500 505 510

Gln Gly Ser Leu Val Glu Val Asp Arg Glu Phe Trp Lys Leu Phe Thr

515 520 525

Gly Ser Ala Cys Arg Pro Ser Cys Pro Ala Val Cys Cys Leu Thr Leu

530 535 540

Ala Leu Thr Thr Ser Ile Val Pro Gly Thr Val Lys Met Gly Ile Glu

545 550 555 560

Gln Asn Met Cys Glu Val Asn Arg Ser Phe Ser Leu Lys Glu Ser Ile

565 570 575

Met Lys Trp Leu Leu Phe Tyr Gln Leu Glu Gly Asp Leu Glu Asn Ser

580 585 590

Thr Glu Val Pro Pro Ile Leu His Ser Asn Phe Pro His Leu Val Leu

595 600 605

Glu Lys Ile Leu Val Ser Leu Thr Met Lys Asn Cys Lys Ala Ala Met

610 615 620

Asn Phe Phe Gln Ser Val Pro Glu Cys Glu His His Gln Lys Asp Lys

625 630 635 640

Glu Glu Leu Ser Phe Ser Glu Val Glu Glu Leu Phe Leu Gln Thr Thr

645 650 655

Phe Asp Lys Met Asp Phe Leu Thr Ile Val Arg Glu Cys Gly Ile Glu

660 665 670

Lys His Gln Ser Ser Ile Gly Phe Ser Val His Gln Asn Leu Lys Glu

675 680 685

Ser Leu Asp Arg Cys Leu Leu Gly Leu Ser Glu Gln Leu Leu Asn Asn

690 695 700

Tyr Ser Ser Glu Ile Thr Asn Ser Glu Thr Leu Val Arg Cys Ser Arg

705 710 715 720

Leu Leu Val Gly Val Leu Gly Cys Tyr Cys Tyr Met Gly Val Ile Ala

725 730 735

Glu Glu Glu Ala Tyr Lys Ser Glu Leu Phe Gln Lys Ala Lys Ser Leu

740 745 750

Met Gln Cys Ala Gly Glu Ser Ile Thr Leu Phe Lys Asn Lys Thr Asn

755 760 765

Glu Glu Phe Arg Ile Gly Ser Leu Arg Asn Met Met Gln Leu Cys Thr

770 775 780

Arg Cys Leu Ser Asn Cys Thr Lys Lys Ser Pro Asn Lys Ile Ala Ser

785 790 795 800

Gly Phe Phe Leu Arg Leu Leu Thr Ser Lys Leu Met Asn Asp Ile Ala

805 810 815

Asp Ile Cys Lys Ser Leu Ala Ser Phe Ile Lys Lys Pro Phe Asp Arg

820 825 830

Gly Glu Val Glu Ser Met Glu Asp Asp Thr Asn Gly Asn Leu Met Glu

835 840 845

Val Glu Asp Gln Ser Ser Met Asn Leu Phe Asn Asp Tyr Pro Asp Ser

850 855 860

Ser Val Ser Asp Ala Asn Glu Pro Gly Glu Ser Gln Ser Thr Ile Gly

865 870 875 880

Ala Ile Asn Pro Leu Ala Glu Glu Tyr Leu Ser Lys Gln Asp Leu Leu

885 890 895

Phe Leu Asp Met Leu Lys Phe Leu Cys Leu Cys Val Thr Thr Ala Gln

900 905 910

Thr Asn Thr Val Ser Phe Arg Ala Ala Asp Ile Arg Arg Lys Leu Leu

915 920 925

Met Leu Ile Asp Ser Ser Thr Leu Glu Pro Thr Lys Ser Leu His Leu

930 935 940

His Met Tyr Leu Met Leu Leu Lys Glu Leu Pro Gly Glu Glu Tyr Pro

945 950 955 960

Leu Pro Met Glu Asp Val Leu Glu Leu Leu Lys Pro Leu Ser Asn Val

965 970 975

Cys Ser Leu Tyr Arg Arg Asp Gln Asp Val Cys Lys Thr Ile Leu Asn

980 985 990

His Val Leu His Val Val Lys Asn Leu Gly Gln Ser Asn Met Asp Ser

995 1000 1005

Glu Asn Thr Arg Asp Ala Gln Gly Gln Phe Leu Thr Val Ile Gly

1010 1015 1020

Ala Phe Trp His Leu Thr Lys Glu Arg Lys Tyr Ile Phe Ser Val

1025 1030 1035

Arg Met Ala Leu Val Asn Cys Leu Lys Thr Leu Leu Glu Ala Asp

1040 1045 1050

Pro Tyr Ser Lys Trp Ala Ile Leu Asn Val Met Gly Lys Asp Phe

1055 1060 1065

Pro Val Asn Glu Val Phe Thr Gln Phe Leu Ala Asp Asn His His

1070 1075 1080

Gln Val Arg Met Leu Ala Ala Glu Ser Ile Asn Arg Leu Phe Gln

1085 1090 1095

Asp Thr Lys Gly Asp Ser Ser Arg Leu Leu Lys Ala Leu Pro Leu

1100 1105 1110

Lys Leu Gln Gln Thr Ala Phe Glu Asn Ala Tyr Leu Lys Ala Gln

1115 1120 1125

Glu Gly Met Arg Glu Met Ser His Ser Ala Glu Asn Pro Glu Thr

1130 1135 1140

Leu Asp Glu Ile Tyr Asn Arg Lys Ser Val Leu Leu Thr Leu Ile

1145 1150 1155

Ala Val Val Leu Ser Cys Ser Pro Ile Cys Glu Lys Gln Ala Leu

1160 1165 1170

Phe Ala Leu Cys Lys Ser Val Lys Glu Asn Gly Leu Glu Pro His

1175 1180 1185

Leu Val Lys Lys Val Leu Glu Lys Val Ser Glu Thr Phe Gly Tyr

1190 1195 1200

Arg Arg Leu Glu Asp Phe Met Ala Ser His Leu Asp Tyr Leu Val

1205 1210 1215

Leu Glu Trp Leu Asn Leu Gln Asp Thr Glu Tyr Asn Leu Ser Ser

1220 1225 1230

Phe Pro Phe Ile Leu Leu Asn Tyr Thr Asn Ile Glu Asp Phe Tyr

1235 1240 1245

Arg Ser Cys Tyr Lys Val Leu Ile Pro His Leu Val Ile Arg Ser

1250 1255 1260

His Phe Asp Glu Val Lys Ser Ile Ala Asn Gln Ile Gln Glu Asp

1265 1270 1275

Trp Lys Ser Leu Leu Thr Asp Cys Phe Pro Lys Ile Leu Val Asn

1280 1285 1290

Ile Leu Pro Tyr Phe Ala Tyr Glu Gly Thr Arg Asp Ser Gly Met

1295 1300 1305

Ala Gln Gln Arg Glu Thr Ala Thr Lys Val Tyr Asp Met Leu Lys

1310 1315 1320

Ser Glu Asn Leu Leu Gly Lys Gln Ile Asp His Leu Phe Ile Ser

1325 1330 1335

Asn Leu Pro Glu Ile Val Val Glu Leu Leu Met Thr Leu His Glu

1340 1345 1350

Pro Ala Asn Ser Ser Ala Ser Gln Ser Thr Asp Leu Cys Asp Phe

1355 1360 1365

Ser Gly Asp Leu Asp Pro Ala Pro Asn Pro Pro His Phe Pro Ser

1370 1375 1380

His Val Ile Lys Ala Thr Phe Ala Tyr Ile Ser Asn Cys His Lys

1385 1390 1395

Thr Lys Leu Lys Ser Ile Leu Glu Ile Leu Ser Lys Ser Pro Asp

1400 1405 1410

Ser Tyr Gln Lys Ile Leu Leu Ala Ile Cys Glu Gln Ala Ala Glu

1415 1420 1425

Thr Asn Asn Val Tyr Lys Lys His ArgIle Leu Lys Ile Tyr His

1430 1435 1440

Leu Phe Val Ser Leu Leu Leu Lys Asp Ile Lys Ser Gly Leu Gly

1445 1450 1455

Gly Ala Trp Ala Phe Val Leu Arg Asp Val Ile Tyr Thr Leu Ile

1460 1465 1470

His Tyr Ile Asn Gln Arg Pro Ser Cys Ile Met Asp Val Ser Leu

1475 1480 1485

Arg Ser Phe Ser Leu Cys Cys Asp Leu Leu Ser Gln Val Cys Gln

1490 1495 1500

Thr Ala Val Thr Tyr Cys Lys Asp Ala Leu Glu Asn His Leu His

1505 1510 1515

Val Ile Val Gly Thr Leu Ile Pro Leu Val Tyr Glu Gln Val Glu

1520 1525 1530

Val Gln Lys Gln Val Leu Asp Leu Leu Lys Tyr Leu Val Ile Asp

1535 1540 1545

Asn Lys Asp Asn Glu Asn Leu Tyr Ile Thr Ile Lys Leu Leu Asp

1550 1555 1560

Pro Phe Pro Asp His Val Val Phe Lys Asp Leu Arg Ile Thr Gln

1565 1570 1575

Gln Lys Ile Lys Tyr Ser Arg Gly Pro Phe Ser Leu Leu Glu Glu

1580 1585 1590

Ile Asn His Phe Leu Ser Val Ser Val Tyr Asp Ala Leu Pro Leu

1595 1600 1605

Thr Arg Leu Glu Gly Leu Lys Asp Leu Arg Arg Gln Leu Glu Leu

1610 1615 1620

His Lys Asp Gln Met Val Asp Ile Met Arg Ala Ser Gln Asp Asn

1625 1630 1635

Pro Gln Asp Gly Ile Met Val Lys Leu Val Val Asn Leu Leu Gln

1640 1645 1650

Leu Ser Lys Met Ala Ile Asn His Thr Gly Glu Lys Glu Val Leu

1655 1660 1665

Glu Ala Val Gly Ser Cys Leu Gly Glu Val Gly Pro Ile Asp Phe

1670 1675 1680

Ser Thr Ile Ala Ile Gln His Ser Lys Asp Ala Ser Tyr Thr Lys

1685 1690 1695

Ala Leu Lys Leu Phe Glu Asp Lys Glu Leu Gln Trp Thr Phe Ile

1700 1705 1710

Met Leu Thr Tyr Leu Asn Asn Thr Leu Val Glu Asp Cys Val Lys

1715 1720 1725

Val Arg Ser Ala Ala Val Thr Cys Leu Lys Asn Ile Leu Ala Thr

1730 1735 1740

Lys Thr Gly His Ser Phe Trp Glu Ile Tyr Lys Met Thr Thr Asp

1745 1750 1755

Pro Met Leu Ala Tyr Leu Gln Pro Phe Arg Thr Ser Arg Lys Lys

1760 1765 1770

Phe Leu Glu Val Pro Arg Phe Asp Lys Glu Asn Pro Phe Glu Gly

1775 1780 1785

Leu Asp Asp Ile Asn Leu Trp Ile Pro Leu Ser Glu Asn His Asp

1790 1795 1800

Ile Trp Ile Lys Thr Leu Thr Cys Ala Phe Leu Asp Ser Gly Gly

1805 1810 1815

Thr Lys Cys Glu Ile Leu Gln Leu Leu Lys Pro Met Cys Glu Val

1820 1825 1830

Lys Thr Asp Phe Cys Gln Thr Val Leu Pro Tyr Leu Ile His Asp

1835 1840 1845

Ile Leu Leu Gln Asp Thr Asn Glu Ser Trp Arg Asn Leu Leu Ser

1850 1855 1860

Thr His Val Gln Gly Phe Phe Thr Ser Cys Leu Arg His Phe Ser

1865 1870 1875

Gln Thr Ser Arg Ser Thr Thr Pro Ala Asn Leu Asp Ser Glu Ser

1880 1885 1890

Glu His Phe Phe Arg Cys Cys Leu Asp Lys Lys Ser Gln Arg Thr

1895 1900 1905

Met Leu Ala Val Val Asp Tyr Met Arg Arg Gln Lys Arg Pro Ser

1910 1915 1920

Ser Gly Thr Ile Phe Asn Asp Ala Phe Trp Leu Asp Leu Asn Tyr

1925 1930 1935

Leu Glu Val Ala Lys Val Ala Gln Ser Cys Ala Ala His Phe Thr

1940 1945 1950

Ala Leu Leu Tyr Ala Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Lys Ser Met Asp

1955 1960 1965

Asp Gln Glu Lys Arg Ser Leu Ala Phe Glu Glu Gly Ser Gln Ser

1970 1975 1980

Thr Thr Ile Ser Ser Leu Ser Glu Lys Ser Lys Glu Glu Thr Gly

1985 1990 1995

Ile Ser Leu Gln Asp Leu Leu Leu Glu Ile Tyr Arg Ser Ile Gly

2000 2005 2010

Glu Pro Asp Ser Leu Tyr Gly Cys Gly Gly Gly Lys Met Leu Gln

2015 2020 2025

Pro Ile Thr Arg Leu Arg Thr Tyr Glu His Glu Ala Met Trp Gly

2030 2035 2040

Lys Ala Leu Val Thr Tyr Asp Leu Glu Thr Ala Ile Pro Ser Ser

2045 2050 2055

Thr Arg Gln Ala Gly Ile Ile Gln Ala Leu Gln Asn Leu Gly Leu

2060 2065 2070

Cys His Ile Leu Ser Val Tyr Leu Lys Gly Leu Asp Tyr Glu Asn

2075 2080 2085

Lys Asp Trp Cys Pro Glu Leu Glu Glu Leu His Tyr Gln Ala Ala

2090 2095 2100

Trp Arg Asn Met Gln Trp Asp His Cys Thr Ser Val Ser Lys Glu

2105 2110 2115

Val Glu Gly Thr Ser Tyr His Glu Ser Leu Tyr Asn Ala Leu Gln

2120 2125 2130

Ser Leu Arg Asp Arg Glu Phe Ser Thr Phe Tyr Glu Ser Leu Lys

2135 2140 2145

Tyr Ala Arg Val Lys Glu Val Glu Glu Met Cys Lys Arg Ser Leu

2150 2155 2160

Glu Ser Val Tyr Ser Leu Tyr Pro Thr Leu Ser Arg Leu Gln Ala

2165 2170 2175

Ile Gly Glu Leu Glu Ser Ile Gly Glu Leu Phe Ser Arg Ser Val

2180 2185 2190

Thr His Arg Gln Leu Ser Glu Val Tyr Ile Lys Trp Gln Lys His

2195 2200 2205

Ser Gln Leu Leu Lys Asp Ser Asp Phe Ser Phe Gln Glu Pro Ile

2210 2215 2220

Met Ala Leu Arg Thr Val Ile Leu Glu Ile Leu Met Glu Lys Glu

2225 2230 2235

Met Asp Asn Ser Gln Arg Glu Cys Ile Lys Asp Ile Leu Thr Lys

2240 2245 2250

His Leu Val Glu Leu Ser Ile Leu Ala Arg Thr Phe Lys Asn Thr

2255 2260 2265

Gln Leu Pro Glu Arg Ala Ile Phe Gln Ile Lys Gln Tyr Asn Ser

2270 2275 2280

Val Ser Cys Gly Val Ser Glu Trp Gln Leu Glu Glu Ala Gln Val

2285 2290 2295

Phe Trp Ala Lys Lys Glu Gln Ser Leu Ala Leu Ser Ile Leu Lys

2300 2305 2310

Gln Met Ile Lys Lys Leu Asp Ala Ser Cys Ala Ala Asn Asn Pro

2315 2320 2325

Ser Leu Lys Leu Thr Tyr Thr Glu Cys Leu Arg Val Cys Gly Asn

2330 2335 2340

Trp Leu Ala Glu Thr Cys Leu Glu Asn Pro Ala Val Ile Met Gln

2345 2350 2355

Thr Tyr Leu Glu Lys Ala Val Glu Val Ala Gly Asn Tyr Asp Gly

2360 2365 2370

Glu Ser Ser Asp Glu Leu Arg Asn Gly Lys Met Lys Ala Phe Leu

2375 2380 2385

Ser Leu Ala Arg Phe Ser Asp Thr Gln Tyr Gln Arg Ile Glu Asn

2390 2395 2400

Tyr Met Lys Ser Ser Glu Phe Glu Asn Lys Gln Ala Leu Leu Lys

2405 2410 2415

Arg Ala Lys Glu Glu Val Gly Leu Leu Arg Glu His Lys Ile Gln

2420 2425 2430

Thr Asn Arg Tyr Thr Val Lys Val Gln Arg Glu Leu Glu Leu Asp

2435 2440 2445

Glu Leu Ala Leu Arg Ala Leu Lys Glu Asp Arg Lys Arg Phe Leu

2450 2455 2460

Cys Lys Ala Val Glu Asn Tyr Ile Asn Cys Leu Leu Ser Gly Glu

2465 2470 2475

Glu His Asp Met Trp Val Phe Arg Leu Cys Ser Leu Trp Leu Glu

2480 2485 2490

Asn Ser Gly Val Ser Glu Val Asn Gly Met Met Lys Arg Asp Gly

2495 2500 2505

Met Lys Ile Pro Thr Tyr Lys Phe Leu Pro Leu Met Tyr Gln Leu

2510 2515 2520

Ala Ala Arg Met Gly Thr Lys Met Met Gly Gly Leu Gly Phe His

2525 2530 2535

Glu Val Leu Asn Asn Leu Ile Ser Arg Ile Ser Met Asp His Pro

2540 2545 2550

His His Thr Leu Phe Ile Ile Leu Ala Leu Ala Asn Ala Asn Arg

2555 2560 2565

Asp Glu Phe Leu Thr Lys Pro Glu Val Ala Arg Arg Ser Arg Ile

2570 2575 2580

Thr Lys Asn Val Pro Lys Gln Ser Ser Gln Leu Asp Glu Asp Arg

2585 2590 2595

Thr Glu Ala Ala Asn Arg Ile Ile Cys Thr Ile Arg Ser Arg Arg

2600 2605 2610

Pro Gln Met Val Arg Ser Val Glu Ala Leu Cys Asp Ala Tyr Ile

2615 2620 2625

Ile Leu Ala Asn Leu Asp Ala Thr Gln Trp Lys Thr Gln Arg Lys

2630 2635 2640

Gly Ile Asn Ile Pro Ala Asp Gln Pro Ile Thr Lys Leu Lys Asn

2645 2650 2655

Leu Glu Asp Val Val Val Pro Thr Met Glu Ile Lys Val Asp His

2660 2665 2670

Thr Gly Glu Tyr Gly Asn Leu Val Thr Ile Gln Ser Phe Lys Ala

2675 2680 2685

Glu Phe Arg Leu Ala Gly Gly Val Asn Leu Pro Lys Ile Ile Asp

2690 2695 2700

Cys Val Gly Ser Asp Gly Lys Glu Arg Arg Gln Leu Val Lys Gly

2705 2710 2715

Arg Asp Asp Leu Arg Gln Asp Ala Val Met Gln Gln Val Phe Gln

2720 2725 2730

Met Cys Asn Thr Leu Leu Gln Arg Asn Thr Glu Thr Arg Lys Arg

2735 2740 2745

Lys Leu Thr Ile Cys Thr Tyr Lys Val Val Pro Leu Ser Gln Arg

2750 2755 2760

Ser Gly Val Leu Glu Trp Cys Thr Gly Thr Val Pro Ile Gly Glu

2765 2770 2775

Phe Leu Val Asn Asn Glu Asp Gly Ala His Lys Arg Tyr Arg Pro

2780 2785 2790

Asn Asp Phe Ser Ala Phe Gln Cys Gln Lys Lys Met Met Glu Val

2795 2800 2805

Gln Lys Lys Ser Phe Glu Glu Lys Tyr Glu Val Phe Met Asp Val

2810 2815 2820

Cys Gln Asn Phe Gln Pro Val Phe Arg Tyr Phe Cys Met Glu Lys

2825 2830 2835

Phe Leu Asp Pro Ala Ile Trp Phe Glu Lys Arg Leu Ala Tyr Thr

2840 2845 2850

Arg Ser Val Ala Thr Ser Ser Ile Val Gly Tyr Ile Leu Gly Leu

2855 2860 2865

Gly Asp Arg His Val Gln Asn Ile Leu Ile Asn Glu Gln Ser Ala

2870 2875 2880

Glu Leu Val His Ile Asp Leu Gly Val Ala Phe Glu Gln Gly Lys

2885 2890 2895

Ile Leu Pro Thr Pro Glu Thr Val Pro Phe Arg Leu Thr Arg Asp

2900 2905 2910

Ile Val Asp Gly Met Gly Ile Thr Gly Val Glu Gly Val Phe Arg

2915 2920 2925

Arg Cys Cys Glu Lys Thr Met Glu Val Met Arg Asn Ser Gln Glu

2930 2935 2940

Thr Leu Leu Thr Ile Val Glu Val Leu Leu Tyr Asp Pro Leu Phe

2945 2950 2955

Asp Trp Thr Met Asn Pro Leu Lys Ala Leu Tyr Leu Gln Gln Arg

2960 2965 2970

Pro Glu Asp Glu Thr Glu Leu His Pro Thr Leu Asn Ala Asp Asp

2975 2980 2985

Gln Glu Cys Lys Arg Asn Leu Ser Asp Ile Asp Gln Ser Phe Asn

2990 2995 3000

Lys Val Ala Glu Arg Val Leu Met Arg Leu Gln Glu Lys Leu Lys

3005 3010 3015

Gly Val Glu Glu Gly Thr Val Leu Ser Val Gly Gly Gln Val Asn

3020 3025 3030

Leu Leu Ile Gln Gln Ala Ile Asp Pro Lys Asn Leu Ser Arg Leu

3035 3040 3045

Phe Pro Gly Trp Lys Ala Trp Val

3050 3055

Claims

1、一种ATR抑制剂，其特征在于含有下式(1)所示的化合物作为有效成分：

2、一种ATR抑制剂，其特征在于含有下式(2)所示的化合物作为有效成分：

3、一种ATR抑制剂，其特征在于含有下式(3)所示的化合物作为有效成分：

4、一种ATR抑制剂，其特征在于含有下式(4)所示的化合物作为有效成分：

5、一种ATR抑制剂，其特征在于含有下式(5)所示的化合物作为有效成分：

6、一种ATR抑制剂，其特征在于含有下式(6)所示的化合物作为有效成分：

7、一种ATR抑制剂，其特征在于含有下式(7)所示的化合物作为有效成分：

8、一种ATR抑制剂，其特征在于含有下式(8)所示的化合物作为有效成分：

9、一种ATR抑制剂，其特征在于含有下式(9)所示的化合物作为有效成分：

10一种ATR抑制剂，其特征在于含有下式(10)所示的化合物作为有效成分：

11、根据权利要求1-10任一项中记载的ATR抑制剂，其特征在于前述ATR活性为蛋白质磷酸化活性。

12、根据权利要求11中记载的ATR抑制剂，其特征在于前述蛋白质磷酸化活性为对细胞周期关联蛋白质进行磷酸化的活性。

13、根据权利要求12中记载的ATR抑制剂，其特征在于前述细胞周期关联蛋白质为p53。

14、根据权利要求12或13中记载的ATR抑制剂，其特征在于前述细胞周期关联蛋白质选自于Brca1和Chk1构成的组中。